生物标签真蛋白测试仪

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生物标签真蛋白测试仪相关的厂商

  • 上海贝博生物科技公司
    公司拥有一支技术力量雄厚的研发团队，包括蛋白质研究、细胞生物学、免疫学等方向的产品研究开发。贝博生物建立了高标准的质检系统，产品从原料、半成品、成品入库到销售之前，每一个环节都有严格的质检标准，并以标准的生产工艺，保证产品质量的稳定性。 现已上市的产品线有：1.蛋白提取系列（动物、植物、昆虫、细菌、真菌、酵母；亚细胞器--线粒体、叶绿体等）；2.蛋白定量（BCA、Bradford、Lowry法等）、检测（ECL）等；3.细胞凋亡系列（AnnexinV、JC-1、细胞周期、Caspase系列等）；4.细胞增殖毒性（CCK-8、MTT、XTT、WST-1、Alamar Blue等）；5.细胞染色6.实验室环境相关（支原体预防、清除、检测；EB清除；有机污染清除等）；7.氧化应激系列（活性氧、总巯基等）8.常用的标签、内参、二抗等产品以后有上述产品咨询 ，随时欢迎哦 QQ 836337003
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  • 爱必信(上海)生物科技有限公司 银牌1年
    400-860-5168转4673
    爱必信（上海）生物科技有限公司 Absin Bioscience Inc. 成立于2010年, 公司位于浦东新区张江医谷园区，公司以研发、生产和销售自主品牌（absin®）产品。我们的目标是为生命科学等相关领域的客户提供全面的的生物化学试剂, 努力打造高品质生命科学产品的知名品牌（absin® ）。Absin特色产品线WB相关：ECL发光液、预染marker、预制胶；IHC相关：二抗试剂盒、组化笔；IP/CoIP试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、CEE；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；ELISA试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...
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  • 百蓁生物技术(武汉)有限公司
    百蓁生物技术（武汉）有限公司是一家由加拿大滑铁卢大学计算机系教授、加拿大皇家科学院院士李明先生创立的高科技生物企业，技术源头来自李明教授2000年创办的加拿大BSI公司。百蓁生物致力于为蛋白质组学和免疫肽的分析、研究和开发提供创新的解决方案，服务范围涵盖蛋白样本分析、药物开发合同研究以及健康数据解决方案。公司利用独特的专利技术通过高分辨率质谱为蛋白质组表征和量化提供高品质的分析服务，检测精度、深度和通量均处于行业领先地位。另外，百蓁将先进的数据分析与实验设计进行整合，实现肿瘤新抗原的开发，助力肿瘤免疫治疗的发展。
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生物标签真蛋白测试仪相关的仪器

  • 蛋白组学样本前处理工作站 400-831-3689
    蛋白组学样本前处理工作站是一款具备高通量、高回收率、安全性能强、抗干扰能力强，适用范围广等优势，适用大队列样本的高通量处理设备，可实现质谱蛋白样本前处理的全自动化和标准化操作。蛋白组学样本前处理解决方案适用于血浆、血清、尿液、细胞、组织等类型样本从蛋白到多肽混合物的质谱检测前处理工作，试剂盒利用新型固相烷基化试剂SPA材料与蛋白的特异性共价反应，实现蛋白质的高效捕获，通过清洗磁珠表面，快速去除干扰物质，并进行原位固相酶解，获得蛋白酶解产物，仪器整合制冷模块、磁吸附模块、加热振荡模块、抓扳手，进而实现蛋白质组提取、还原、烷基化、酶解等流程自动化操作，提高蛋白质样品的处理效率和回收率。 优势特点高通量■96通道移液头，一次可处理最多96个样本，高效完成实验流程中吸废等步骤；■兼具8通道移液功能，可以实现试剂的精准分装；■ 全流程4-5小时可完成96个蛋白样本的前处理（具体时间根据具体实验流程）；自动化程度高■ 整合抓板手，用于对标准SBS板子的转移；■ 整合蛋白前处理所需的试剂制冷模块、磁吸附模块、加热振荡模块等功能模块；■均一化操作，减少实验过程中的误差，提高准确性和稳定性；灵活性强■ 盘面包含18个SBS标准盘位，除功能模块外，有15个盘位放置试剂和耗材；■开放式平台，配有多样化适配器，可适配多种不同品牌试剂耗材；■软件界面人性化设计，拖拽式布局，操作简单，每个步骤可独立进行参数设置，实验流程可进行存储，按键式启动运行；安全性■可配置避光外罩，搭配紫外消毒灯；■可根据实验需求选配正、负压HEPA过滤系统，有效避免交叉污染； 数据测试样本批内测试数据材料：293T 细胞实验方法：手工操作3 组，仪器操作3 组Q Exactive质谱结果如下：表1：手工操作和仪器操作后蛋白数及零漏切率对比图1 Venn diagram（蓝色：手工；绿色：仪器）试验总结手工操作和仪器操作蛋白样本预处理后可检测到的蛋白数及零漏切率基本一致，达到预期要求；手工操作与仪器操作蛋白种类皮尔斯相关系数大于0.97，与预期一致；样本批间测试数据图2 96孔板检测示意图如图2所示共处理96个样品，分三组进行实验，随机选取36个样品进行Q Exactive质谱检测，结果如下：图3 36个样本检测蛋白数（个）图4 36个样本零漏切率（%）图5 随机样品日间比较实验总结36个随机样本检测蛋白数3074±89个，零漏切率78.32±2.66%，样本预处理的结果正常且稳定；36个样品的皮尔斯相关系数及日间随机样品皮尔斯相关系数均介于0.955-0.989之间，达到指标要求，具有较好的均一性。 应用领域临床诊断/用药指导/病理机制研究/疾病标志物的发现/药物机理研究特别说明，此页面中所有展示的图片和信息仅供参考。
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    厂商： 睿科集团股份有限公司
    品牌： 睿科生化/Raykol
    型号： Vitae 180-96
    价格： 面议
  • 超微量核酸蛋白测定仪 400-876-8980
    蛋白质和核酸是生命个体的基本组成单位，也是当前基因组学、蛋白质组学主要的研究对象。而紫外可见定量测定方法则是蛋白质和核酸浓度定量研究中最常用、最基本的分析方法。我公司新研发出的超微量核酸蛋白测定仪，是专用于测定核酸和蛋白质的仪器。它可以进行核酸的定性和定量测量，蛋白质的直接测量和比色法测定，细菌细胞的密度测定，在此基础上，本仪器还具有全波长扫描功能，可进行单波长、多波长、动力学测定和标准曲线法四种测量模式。所有的这些测试方法和测试参数都以测定程序的方式汇编在仪器的软件中，用户只需选择相应的程序并设置相关的参数后就可以直接得到测试的结果。同时，本仪器兼容超微量比色皿Traycell，使测量的样品用量降至0.7-5ul，克服核酸样品量少而测量不准确的特性，大大提高了生物分光光度计在生物领域的应用。
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    厂商： 天美仪拓实验室设备（上海）有限公司
    品牌： 未知
    型号： DNA800
    价格： 面议
  • CEM Sprint 生物标签真蛋白测试仪 400-875-3707
    仪器简介：CEM公司的SprintTM真蛋白质快速测定仪结合生物科学与食品科学技术，进行快速精确的蛋白质测定。该系统使用蛋白质氨基酸分子标签技术区分及测量蛋白质含量（而非氮元素），因此你不必为待检样品中添加过量含氮物质或被含氮物质污染所造成的数据失真而担心。技术参数：1.测试方法：CEM iTAG蛋白质标签技术。2.蛋白测定范围：0.01-99.99%，样品范围不受性状局限。3.测试时间：2分钟4.数据输入：键盘菜单驱动软件5.显示：彩色VGA显示屏（分辨率800*640）6.数据接口：2个串行口RS232，9针打印机，计算机与条码读取器，4个USB接口。标准打印输出：内置打印输出。7.仪器尺寸：分析仪尺寸：39.4cm*34cm*42cm8.反应支架尺寸：35cm*14cm*7cm.9.仪器重量：分析仪重量：10kg10.反应支架重量：1.1kg11.条码读取器：串行口，RS232 主要特点：1． 直接测量“真蛋白质”，而非总氮含量；2． 加入三聚氰胺时不会产生错误的蛋白质测量结果；3． 测量时间只需两分钟；4． 可用于所有类型样品检测（液体、固体、粉末状、奶油、肉类、坚果类、谷物、种子等）； 5． 简单的全自动操作，无需有经验的化学家；6． 精确性和准确度高于常规凯氏定氮方法 7． 无需危险的化学试剂；8． 相比目前的检测系统，更低的操作成本；9． AOAC，AACC认可的检测方法.
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    厂商： 培安有限公司
    品牌： CEM
    型号： SPRINT
    价格： 60万 - 80万元
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生物标签真蛋白测试仪相关的资讯

  • 纯化标签蛋白时填料的选择
    基因工程提供了人们改变蛋白质性质的机会，因而可以借此改善蛋白质的纯化特性。通过在目的DNA的3’端或5’端插入DNA序列，可以改变蛋白质两端的氨基酸序列，进而作为可纯化的融合蛋白。这些融合子可帮助蛋白质形成包含体，用于稳定蛋白质，免受蛋白酶的攻击，还可以赋予蛋白质特定的纯化性质，使其适用于免疫亲和、金属螯合、离子交换、疏水色谱以及其他分离操作。此外，对于已知特性的蛋白质，改变其中特氨基酸可引入具有特定基质吸附亲和力的片段。市面上有两种很常见的标签，分别为组氨酸标签和GST标签，这两种标签可插入蛋白形成重组蛋白，月旭科技现有针对这两种标签蛋白纯化的填料可供选择。His-Tag（组氨酸标签）是重组蛋白表达最常用的标签，无论表达的蛋白是可溶的或者包涵体都可以用固定金属离子亲和层析纯化。6×His-tag是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。纯化组氨酸标签蛋白最常用的配体是亚氨基二乙酸（IDA）和次氨基三乙酸（NTA），可使用月旭科技Ni Tanrose 6FF（NTA）或Ni Tanrose 6FF（IDA）来纯化。技术参数✦✦谷胱甘肽-S-转移酶（GST）是一种亲和标签，用GST标记真核蛋白可增强融合蛋白的溶解性。此外，带有 GST 标签的蛋白可以在细菌中高水平表达，但可能会由于蛋白聚集而形成包涵体。一般将GST标签添加到目标蛋白质的N或C末端。 GST对谷胱甘肽具有很相对强的亲和力，这意味着可以在固定的基质（如键合谷胱甘肽的填料）上捕获GST蛋白融合物。这种结合特性可用于蛋白质纯化以及通过蛋白质的结合，来捕获对应的蛋白质。因此可使用月旭科技GST Tanrose 4FF来纯化GST标签蛋白。
    时间： 2022-06-13
    作者： 月旭
  • Flag标签蛋白检测抗体实验应用说明
    Flag标签蛋白检测抗体　　远慕生物提供可用于WB，IF，IP应用的Flag抗体，特异性检测Flag标签融合蛋白，Flag标签抗体可识别在细胞内表达的Flag标记重组蛋白，包括Flag位于氨基末端、中段以及羧基末端的重组蛋白。　　Flag标签系统利用一个短的亲水性八氨基酸肽（ DYKDDDDK）融合到目标蛋白。Flag标签可位于蛋白质的C端或N端，该系统已广泛应用于细菌、酵母和哺乳动物细胞等多种细胞类型，相应的Flag标签抗体也被广泛应用。由于Flag标签系统的纯化条件是非变性的，因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。Flag标签可以通过加入肠激酶处理去除，肠激酶专一识别该肽序列C末端的5个氨基酸残基。Flag抗体可以用于检测和Flag标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测Flag融合表达蛋白等。　　由于Flag标签蛋白检测抗体亲水特性，Flag标签往往位于融合蛋白的表面上，因此比较容易被抗体接近并识别。不同的Flag标签抗体与Flag标签 有不同的识别和结合特性。　　Fig. 1. Flag标签蛋白IP实验，IP (1:200) - WB (1:5,000)：未转染的293细胞裂解液(lane A), 转染了Flag标签蛋白的293细胞转染裂解液 (lane B), 使用小鼠IgG作为阴性对照免疫沉淀293细胞裂解液(lane C),使用Flag单克隆抗体（1B10）IP转染后的293细胞裂解液(lane D), 293细胞裂解液 中仅加入Protein G Beads (lane E).　　Fig. 2. 使用Flag标签单克 隆抗体，通过免疫荧光实验（1:2000），分析转染的Flag 重组蛋白在293细胞中的定 位，二抗为IFKine? Red 驴抗 小鼠，蓝色为DAPI染色的细 胞核。
    时间： 2022-12-14
    作者： 上海远慕生物科技有限公司
  • 李灵军与叶慧团队合作成果：生物素硫醇标签辅助质谱法对蛋白质瓜氨酸化进行全局分析
    瓜氨酸化是影响蛋白质结构和功能的关键的翻译后修饰。尽管它与各种生物过程和疾病发病紧密相关，但由于缺乏有效的方法来富集、检测和定位该翻译后修饰，其潜在机制仍然知之甚少。近期，威斯康星大学麦迪逊分校李灵军教授课题组报道了生物素硫醇标签的设计和开发，该标签能够通过质谱法对瓜氨酸化进行衍生化、富集来实现可靠的鉴定。作者对小鼠组织的瓜氨酸化蛋白质组进行了全局分析并且从432种瓜氨酸化蛋白质中识别出691个修饰位点，这是迄今为止最大的瓜氨酸化数据集。作者发现并阐述了这个翻译后修饰的新的分布和功能并且表示该方法有希望为进一步破译瓜氨酸化的生理和病理作用奠定基础。这项工作以“Enabling Global Analysis Of Protein Citrullination Via Biotin Thiol Tag-Assisted Mass Spectrometry”为题发表在国际化学权威杂志Analytical Chemistry上 (https://doi.org/10.1021/acs.analchem.2c03844)，文章作者为Yatao Shi#, Zihui Li#, Bin Wang#，Xudong Shi , Hui Ye, Daniel G. Delafield, Langlang Lv, Zhengqing Ye, Zhengwei Chen, Fengfei Ma，Lingjun Li*。此外，李灵军教授课题组进一步拓展了此方法的实用性。作者通过应用二甲基化亮氨酸(DiLeu)等重标记策略第一次实现了瓜氨酸化的高通量定量研究，并利用这一方法揭示了瓜氨酸化在人体细胞DNA损伤及修复过程中的重要作用。相关成果以“12-Plex DiLeu Isobaric Labeling Enabled High-Throughput Investigation of Citrullination Alterations in the DNA Damage Response”为题同样发表在Analytical Chemistry上(https://doi.org/10.1021/acs.analchem.1c04073)，文章作者为Zihui Li, Bin Wang, Qinying Yu, Yatao Shi, Lingjun Li*。　　研究的主要内容　　作者设计了一种生物素硫醇标签，它可以很容易的以低成本合成并且可以与瓜氨酸残基和2,3-丁二酮发生特异性反应(图 1a)。这种衍生化不仅增加了质量转移以允许更可靠的鉴定，而且还引入了生物素部分，使修饰分子的后续富集成为可能。该生物素硫醇标签设计具有紧凑的结构，在高能碰撞解离 (HCD) 期间仅产生两个碎片/诊断离子(图 1b)。 因此，肽主链可以保持良好的裂解效率，并在 HCD 或电子转移解离 (ETD) 期间分别产生丰富的b/y或c/z离子系列。在 HCD(图 1c)、ETD或电子转移/高能碰撞解离(EThcD)碎裂下，衍生化肽标准品的序列收集质谱图几乎完全覆盖相应的肽序列。实验结果表明生物素硫醇标签衍生的瓜氨酸化肽可以产生用于解析及标注的高质量的串联质谱图，并且与各种裂解技术相结合时可以提高瓜氨酸化位点的识别可信度。　　图1|用于瓜氨酸化分析的生物素硫醇标签设计。a，使用生物素硫醇标签和 2,3-丁二酮对瓜氨酸肽进行衍生化。 b，HCD、ETD 或 EThcD 片段化后生物素硫醇标签衍生的瓜氨酸化肽的片段化位点。c，HCD 裂解后生物素硫醇标签衍生的瓜氨酸肽标准品 SAVRACitSSVPGVR 的串联质谱图。　　在接下来的实验中作者使用该生物素硫醇标签和基于质谱的自下而上的蛋白质组学方法对瓜氨酸化进行分析(图2a)。作者在体外利用 PAD(一种可以催化瓜氨酸化的酶)催化的人组蛋白 H3 蛋白来验证这个过程。作为未被PAD催化的阴性对照，未发现组蛋白的肽段被鉴定为瓜氨酸化，证明了生物素标签反应的高特异性(图 2b)。在体外 PAD 处理后，作者 发现许多精氨酸残基被催化为瓜氨酸，并且大量的位点被高可信度的鉴定为瓜氨酸化位点(图 2c)，进一步表明该方法的高效性。在 HCD 碎裂后，其产生了一系列丰富的 b/y 离子，可以帮助准确的表征在同一肽段上单个(图 2d)以及多个(图 2e)瓜氨酸化位点。　　图2|使用生物素硫醇标签进行体外瓜氨酸化分析。a，使用生物素硫醇标签进行蛋白质瓜氨酸化分析的实验工作流程。b、c，在体外 PAD 处理之前 (b) 和之后 (c) 组蛋白 H3 蛋白的瓜氨酸化分析。 已识别的瓜氨酸化位点在序列中以蓝色字母突出显示。 序列下方的红色矩形表示鉴定的瓜氨酸化肽，而瓜氨酸化位点以蓝色显示。 d，PAD处理的组蛋白 H3 (R64Cit) 的已鉴定瓜氨酸化肽的串联质谱图示例。 e，PAD 处理的组蛋白 H3 的同一肽上鉴定的两个瓜氨酸化位点(R70Cit 和 R73Cit)的串联质谱图示例。　　接下来，作者们尝试利用所开发的方法对复杂的生物样本中的瓜氨酸化进行全局分析，并希望能够以此提供阐明生物体中瓜氨酸化调节机制的依据。首先，作者对小鼠的六个身体器官和五个大脑区域进行了深入的瓜氨酸组分析，生成了第一个小鼠瓜氨酸组组织特异性数据库。作者从432种瓜氨酸化蛋白质中以高置信度的方式鉴定了691个瓜氨酸化位点(图 3a)。更重要的是，这些蛋白质中约有 60% 未曾在UniProt 数据库检索并被报道，这一结果极大地扩展了对瓜氨酸化以及这些底物蛋白质如何受到瓜氨酸化影响的理解。作者发现结果中与 UniProt 数据库的已知的瓜氨酸位点重叠部分较少(图 3b)，这可能是因为 UniProt 中描述的近 40% 的瓜氨酸化位点是基于相似性外推理论而没有实际的实验证据。此外，许多报道的位点位于组蛋白上，尤其是蛋白质末端，可能会逃过自下而上质谱策略的检测(图 3b)。图 3c 展示了单位点瓜氨酸化和多位点瓜氨酸化蛋白质分布情况，其中 70% 的已鉴定蛋白质仅有一个瓜氨酸化位点被检测到。　　这个新发现的瓜氨酸化蛋白质组为推测瓜氨酸化的调控机制提供了宝贵的资源。例如，作者在髓鞘碱性蛋白(MBP)上鉴定到了九个瓜氨酸化位点，而在 UniProt 数据库中只有四个(图3d)。作者的结果提供了高质量的串联质谱图，不仅证实了已知修饰位点的存在(图3e)，而且还高可信度的识别了未知的位点(图 3f)。然后作者进行了瓜氨酸化肽段的序列分析，发现在鉴定的瓜氨酸化位点两侧并没有高度保守的氨基酸序列模式(图3g)，但是谷氨酸残基更频繁地出现在瓜氨酸的N末端侧附近。这与Fert-Bober 等人报道的小鼠瓜氨酸组分析结论一致。另一方面，Tanikawa 等人发现在人体组织和血浆中大约五分之一的 PAD4 底物含有 RG/RGG 基序。同样，Lee 等人及相关研究人员观察到天冬氨酸和甘氨酸残基在瓜氨酸化位点出现频率偏高。值得注意的是，这些研究使用了不同的人源细胞系或组织，因此作者的结果可能表明在不同物种之间瓜氨酸化位点周围的序列模式是不同的。为了更好地辨别瓜氨酸化蛋白质所涉及的功能，作者展示了基因本体论(GO)富集分析的热图，其显示了二十个最显著富集的细胞成分(图3h)以及KEGG途径(图3i)。作者发现小鼠大脑组织和身体器官之间存在明显差异，而瓜氨酸蛋白更多地参与大脑功能。具体来说瓜氨酸化蛋白质集中在轴突、髓鞘、核周体和突触中，因此在中枢神经系统中可能发挥着重要的作用。　　图3|不同小鼠组织的大规模瓜氨酸组分析。a，不同小鼠组织中已鉴定的瓜氨酸化蛋白和瓜氨酸化位点的数量。 b，本研究中鉴定的瓜氨酸化位点与 UniProt 数据库中报告的位点比较。 c，每个鉴定的瓜氨酸化蛋白质的瓜氨酸化位点数量分布。d，本研究中确定的瓜氨酸化位点与 UniProt 数据库中关于髓鞘碱性蛋白的瓜氨酸化位点的比较。e、f，在髓磷脂碱性蛋白 R157Cit (e) 和 R228Cit (f) 上鉴定的两个瓜氨酸化位点的示例串联质谱图。g，鉴定的瓜氨酸化肽的序列。瓜氨酸化位点位于中间的“0”位置。字母的高度表示每个氨基酸在特定位置的相对频率。 h,i，使用 Metascape 生成的热图显示不同小鼠组织中显着丰富的(p 值 0.01)细胞成分 (h) (KEGG) 通路 (i)。　　为了进一步拓展该方法的实用性，作者应用了二甲基化亮氨酸(DiLeu)等重标记策略，第一次实现了对瓜氨酸化进行高通量的定量研究。作者首先使用瓜氨酸化标准肽段进行测试，证明在优化反应条件下DiLeu标记和生物素硫醇标记反应可以分步进行而不互相干扰(图 4B，4C)。同时，将标准肽段按照已知比例进行4-plex DiLeu标记并混合，再进行生物素硫醇标记和瓜氨酸化分析，结果显示了非常好的定量准确性(图5)。作者进一步优化了运用该方法在复杂生物样品中进行定量分析的实验方法，并且证明此方法依然可以实现极佳的定量准确度和精确度(图6)。　　图4|瓜氨酸化标准肽段测试DiLeu标记和生物素硫醇标记分步反应的特异性和效率　　图5|瓜氨酸化标准肽段测试DiLeu标记和生物素硫醇标记定量分析的准确性　　图6|复杂生物样品测试DiLeu标记和生物素硫醇标记定量分析的准确度和精确度　　作者接下来应用该方法对DNA损伤中瓜氨酸化的作用进行了研究。作者在MCF7细胞中用三种方法造成了DNA损伤，并定量分析了蛋白质瓜氨酸化的变化。作者一共鉴定到63种瓜氨酸化蛋白以及其包含的78个瓜氨酸化位点，并发现三个实验组中的瓜氨酸化表达相比于对照组呈现出非常不同的趋势(图7A)，这一结果表明瓜氨酸化在不同类型的DNA损伤模型中具有差异性的作用。通过对实验组中显著变化的瓜氨酸化蛋白进行生物过程网络分析，作者发现瓜氨酸化主要对DNA代谢，蛋白结构变化，翻译以及DNA修复等过程进行调控(图 7B，7C)。该实验结果表明蛋白瓜氨酸化对DNA损伤以及相关发病机理具有非常重要的作用。　　图7|高通量定量分析研究瓜氨酸化在DNA损伤中的变化及作用(来源：Anal. Chem.)　　小结　　本文章介绍了一种生物素硫醇标签的设计和开发，该标签可与瓜氨酸化肽段发生特异性反应并极大地提高了瓜氨酸化的富集和检测效率。在使用标准肽和重组蛋白证明该方法的有效性后，作者进一步优化了从复杂生物样品中检测瓜氨酸化的实验过程。通过此方法对小鼠五个大脑区域和六个身体器官的蛋白质瓜氨酸化进行分析，作者鉴定出432个瓜氨酸化蛋白以及691个瓜氨酸化位点，这是迄今为止最大的数据集。该研究揭示了这种翻译后修饰可能在神经系统中发挥的关键作用，并表明它们在包括呼吸和糖酵解在内的许多代谢过程中也可能发挥着重要作用。总的来说，实验结果表明蛋白质瓜氨酸化在不同组织中具有广泛分布并参与各种生物过程，这扩展了目前对蛋白质瓜氨酸化生理作用的认知和理解。此外，作者进一步拓展了此方法的实用性，通过应用DiLeu等重标记策略第一次实现了瓜氨酸化的高通量定量研究，并利用这一方法揭示了瓜氨酸化在人体细胞DNA损伤及修复过程中的重要作用。更重要的是，该方法可以提供一种普适、简单而强大的检测方法来明确鉴定蛋白质瓜氨酸化，这也将启发和有益于未来对这种翻译后修饰在生理和病理条件下的功能作用的研究。　　相关研究成果近期发表在Analytical Chemistry上的两篇文章中, 通过生物素硫醇标签辅助质谱法对蛋白质瓜氨酸化进行全局分析文章的共同第一作者是威斯康星大学麦迪逊分校博士生石亚涛，李子辉，王斌，并与中国药科大学叶慧教授课题组合作 应用二甲基化亮氨酸等重标记策略进行蛋白质瓜氨酸化高通量定量研究文章的第一作者是威斯康星大学麦迪逊分校博士生李子辉，两篇文章通讯作者为李灵军教授。更多关于李灵军教授研究团队的最新研究进展欢迎登陆课题组网站：https://www.lilabs.org/
    时间： 2022-12-30
    作者： ONE
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  • 标签蛋白有哪些？如何选择标签蛋白？

    [font=宋体][font=宋体]蛋白质的检测在生物科学研究中占据着至关重要的地位。其中，免疫分析方法被广泛应用，包括[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]、酶联免疫吸附试验（[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]）和免疫沉淀法（[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]）等。这些方法依赖于抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体间的特异性反应，通过注射目标蛋白作为抗原至动物体内，产生免疫反应后分离抗体，进而进行检测。尽管应用广泛，但这种方法的缺点在于每次更换目标蛋白时都需要制备对应的抗体，操作繁琐且成本高昂。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]融合标签技术的出现为蛋白质免疫分析带来了通用化和便利化。通过将特定的标签与目标蛋白融合，两者实现共同表达。通过对融合标签的检测，我们可以了解目标蛋白的表达情况。这种蛋白标签技术利用基因克隆手段，将具有特定功能的多肽、蛋白质结构域甚至完整蛋白质与目标蛋白结合，广泛应用于目标蛋白的表达、纯化、检测和跟踪等方面。经过长期研究，已经发展出一些成熟的检测标签技术。这些标签不仅简化了实验操作，降低了成本，而且为蛋白质研究提供了强有力的工具。下面就挑几个来介绍一下：[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]①[/font][font=宋体][font=Calibri]His[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]-tag[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]His[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]标签[/b][/url]是当前最为热门的标签蛋白之一。[/font][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]是指六个组氨酸残基组成的融合标签（[/font][font=Calibri]HHHHHH[/font][font=宋体]），可插入在目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析（[/font][font=Calibri]IMAC[/font][font=宋体]），对重组蛋白进行分离纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]②[/font][font=宋体][font=Calibri]Flag-tag[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]Flag[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]标签蛋白[/b][/url]为编码[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]个氨基酸的亲水性多肽（[/font][font=Calibri]DYKDDDDK[/font][font=宋体]），同时载体中构建的[/font][font=Calibri]Kozak[/font][font=宋体]序列使得带有[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 [/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]③[/font][font=宋体][font=Calibri]AviTag[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]是一个[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸的短肽，具有一个单生物素化赖氨酸位点，与已知天然可生物素化序列完全不同，可以加在目标蛋白的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端和[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。融合表达后，可被生物素连接酶生物素化，为了纯化重组蛋白选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物，除了用于蛋白质分离纯化，还用于蛋白质相互作用研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]④[/font][font=宋体][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][font=宋体]是从人的[/font][font=Calibri]O6[/font][font=宋体]－甲基鸟嘌呤[/font][font=Calibri]-DNA[/font][font=宋体]甲基转移（[/font][font=Calibri]O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase[/font][font=宋体]）获得。[/font][font=Calibri]SNAP[/font][font=宋体]所带的活性巯基位点接受了苯甲基鸟嘌呤所携带的侧链苯甲基基团，释放出了鸟嘌呤。这种新的硫醚键共价结合使[/font][font=Calibri]SNAP[/font][font=宋体]所带的目的蛋白携带上了苯甲基基团所带的标记物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]检测：生物素或各种颜色荧光的底物（如荧光素、若丹明）可渗透进入细胞，方便快捷地进行活细胞内[/font][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][font=宋体]融合蛋白的标记与检测。它们也可特异性地标记大肠杆菌，酵母和哺乳动物等细胞抽提液或已经纯化的蛋白液中的[/font][font=Calibri]SNAP-tag[/font][font=宋体]融合蛋白。 [/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]⑤[/font][font=宋体][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]（谷胱甘肽巯基转移酶）[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]GST[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]标签蛋白[/b][/url]本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶，它的天然大小为[/font][font=Calibri]26KD[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达，可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达。结合的融合蛋白在非变性条件下用[/font][font=Calibri]10mM[/font][font=宋体]还原型谷胱甘肽洗脱。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测。标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其稳定性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]纯化：该表达系统表达的[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和树脂进行纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果要去除[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]⑥[/font][font=宋体][font=Calibri]GFP[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]（绿色萤光蛋白）是由下村修等人在水母中发现的。它在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光。[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]标签可位于蛋白质的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端，该系统已广泛应用于各种细胞类型，包括细菌、酵母和哺乳动物细胞等，相应的[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]标签抗体也被广泛应用。[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]在检测蛋白表达、蛋白和细胞荧光示踪、研究蛋白质之间相互作用和构象变化中，起到了重要的作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]该如何选择表达克隆的标签[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、首先，需要确定融合标签的目的[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白纯化[/font] [font=宋体]：标签的普遍用途是蛋白纯化。小分子[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]常被用于细胞内源蛋白的纯化。[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]也广泛应用于大肠杆菌的蛋白纯化。可是哺乳动物细胞中因非分泌蛋白自身存在高组氨酸背景，因此极少使用[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]检测：若需要做[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]实验来检测细胞裂解物中蛋白的表达，你可以选择有匹配的抗体的小分子标签。[/font][font=Calibri]FLAG Tag[/font][font=宋体]以其分子量小以及拥有许多与之匹配的商业化的抗体等优势，成为[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]实验中常用的[/font][font=Calibri]Tag[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫沉淀反应：[/font][font=Calibri]FLAG Tag[/font][font=宋体]其分子量小以及拥有大量相匹配的商业用抗体等优势成为免疫沉淀反应中最常用的[/font][font=Calibri]Tag. [/font][font=宋体]其他常用的标签有：[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]cMyc.[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫共沉淀。首先，裂解您的样本，以释放蛋白。向试管中添加裂解液的同时，加入靶向融合标签的抗体，抗体会识别融合标签。然后抗体与蛋白[/font] [font=Calibri]A [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]G [/font][font=宋体]偶联微珠结合，后者拉出您的目标蛋白，以及与之复合的其他蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]活细胞成像：荧光蛋白（[/font][font=Calibri]Fluorescent Proteins, FPs[/font][font=宋体]）是活细胞成像常用的标记蛋白。其中最常用的是绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）和它的衍生物（[/font][font=Calibri]CFP, YFP, etc.[/font][font=宋体]），以及一些红色变体，如[/font][font=Calibri]dTomato[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]mCherry.[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、考虑融合标签的影响[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]任何一类标签处于氨基酸序列的任一位置，都具有影响目的蛋白表达或功能的可能性。最主要原因是标签可能会干扰蛋白的正确折叠，致使目的蛋白失活或形成包涵体。其次，标签可能会中断亚细胞定位信号，这种情况下，蛋白能够正确翻译和折叠，但在细胞内所处的位置是错误的。因此，您需要知道添加的标签对目的蛋白的表达是否有影响。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、考虑是在[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记的选择还需要根据蛋白结构、定位等特性。然而，倘若你没有确切的蛋白结构，或蛋白功能域图谱，建议分别构建[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端标记和[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记的表达克隆，以检测哪个更有效。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][b]重组蛋白表达[/b][/url]技术现已在生物学各个具体领域应用广泛，尤其是蛋白质的大规模生产和体内功能研究都需要应用重组蛋白表达载体。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

  • 常用的蛋白标签的功能和优点有哪些？

    [font=宋体]蛋白标签是指与靶蛋白相连的融合蛋白的亚结构域或肽序列。有许多在重组蛋白生产中广泛应用的蛋白标签。蛋白标签是一种方便有效的工具，可以提高重组蛋白的溶解性、简化蛋白纯化，并提供了一种在蛋白表达和纯化过程中跟踪蛋白的简便方法。如果有针对这些标签的特异抗体，这些标签也可应用于目的蛋白的亲和纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1.[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression]Flag[/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression]标签蛋白[/url][/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]标签为编码[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]个氨基酸的亲水性多肽（[/font][font=Calibri]DYKDDDDK[/font][font=宋体]），其融合表达目的蛋白后具有以下优点：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）作为融合表达标签，[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）融合在[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端的[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]，可以被肠激酶切除（[/font][font=Calibri]DDDK[/font][font=宋体]），从而得到特异的目的蛋白。因此[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]标签现已广泛应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）易于用[/font][font=Calibri]Anti-Flag[/font][font=宋体]的抗体进行检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2.HA[/font][font=宋体]标签[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]标签蛋白，序列为[/font][font=Calibri]YPYDVPDYA[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]9[/font][font=宋体]个氨基酸残基多肽，源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇，对外源靶蛋白的空间结构影响小[/font][font=Calibri], [/font][font=宋体]容易构建成标签蛋白融合到[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或者[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。易于用[/font][font=Calibri]Anti-HA[/font][font=宋体]的抗体进行检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3.c-Myc[/font][font=宋体]标签[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]C-Myc [/font][font=宋体]标签蛋白，是一个含[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]个氨基酸残基的小标签，标签序列[/font][font=Calibri]Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu[/font][font=宋体]，这[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]个氨基酸残基作为抗原表位表达在不同的蛋白质中仍可识别其相应抗体。[/font][font=Calibri]C-Myc tag[/font][font=宋体]已成功应用在 [/font][font=Calibri]Western-blot[/font][font=宋体]杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中，可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][b]4.Avi Tag[/b][/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]Avi Tag[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]标签蛋白[/b][/url]是一个[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸残基组成的短肽，具有一个单生物素化赖氨酸位点，与已知天然可生物素化序列完全不同，可以加在目标蛋白的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端和[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。融合表达后，可被生物素连接酶生物素化。为了纯化重组蛋白，选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物，除了用于蛋白质分离纯化，还用于蛋白质相互作用研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]Avi Tag[/font][font=宋体]标签系统具有以下几大优点：[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）无论在体外或者体内，几乎所有的蛋白都可以在一个独特的[/font][font=Calibri]Avi Tag[/font][font=宋体]位点轻易且有效地被生物素化；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）生物素化是通过酶和底物的反应来实现，反应条件相当温和而且标记的专一性极高；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）生物素[/font][font=Calibri]Avi Tag[/font][font=宋体]只有[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸，对蛋白空间结构的影响非常小；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）生物素与链亲和素具有很高的很专一的结合活性，非常便于后期检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]更多蛋白标签可以查看：[/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

  • 常用的蛋白标签的功能和优点有哪些？

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    价格： 面议
  • His标签蛋白纯化介质
    His标签蛋白纯化介质His标签蛋白纯化介质专为His-tag融合蛋白的纯化而设计，采用该产品可快速从细胞破碎液/培养液中捕获His标签融合蛋白。依据表达系统的不同，可选择具有不同螯合配基种类的产品：IDA、NTA以及 TED，其中，IDA和NTA适用于纯化大肠杆菌胞内表达的His蛋白，TED适用于纯化昆虫细胞、哺乳动物细胞等真核细胞胞外表达的His融合蛋白。His标签蛋白纯化介质（GP-IDA）以超大孔聚丙烯酸酯微球作为基质，以亚氨基二乙酸（IDA）作为螯合配基，常规螯合Ni2+。该产品传质阻力低，适用于从大肠杆菌破碎液上清等粘度较大的原液中捕获His蛋白。His标签蛋白纯化介质（CP-NTA）以大孔聚丙烯酸酯微球作为基质，以次氨基三乙酸（NTA）作为螯合配基，可以耐受蛋白溶液中添加的低浓度β-巯基乙醇或者二硫苏糖醇（DTT）等还原剂组分。His标签蛋白纯化介质（HP-TED）以聚丙烯酸酯微球作为基质，采用金属螯合配基乙二胺三乙酸（TED），即使在含有EDTA的溶液中Ni2+亦能稳定吸附而不脱落；同时该产品进行CIP清洗时不用重新挂Ni2+，可直接用NaOH溶液进行清洗。该产品能大幅节省样品前处理和填料后处理时间，尤其适用于昆虫细胞、哺乳动物细胞等真核细胞分泌表达的His标签蛋白的纯化。 产品特性产品His标签蛋白纯化介质（HP/CP/GP-IDA）His标签蛋白纯化介质（HP/CP/GP-NTA）His标签蛋白纯化介质（HP/CP/GP-TED）基质聚丙烯酸酯硬胶聚丙烯酸酯硬胶聚丙烯酸酯硬胶配基IDA NTATED平均粒径70μm70μm70μm动态载量mg/mLHP-IDACP-IDAGP-IDAHP-NTACP-NTAGP-NTAHP-TEDCP-TEDGP-TED≥35≥25≥20≥20≥15≥10≥20≥15≥10流速上限1500cm/h1500cm/h1500cm/h耐压上限1MPa1MPa1MPa储存4-30°C(20%乙醇)4-30°C(20%乙醇) 4-30°C(20%乙醇)还原剂耐受性不耐受β-Me≤100mM DTT≤5mMβ-Me≤100mM DTT≤5mM；5mM TCEP≤5mM特点蛋白载量高金属离子脱落率低对于10 mM乙二胺四乙酸（EDTA）、0.5MNaOH和6M胍-HCl耐受24小时；对于500mM咪唑、100mM 乙二胺四乙酸（EDTA）耐受2小时博进生物可以根据客户需求提供不同孔径的不同配基的金属螯合介质。His标签蛋白纯化介质针对 His蛋白结合力和过渡金属离子选择性的不同，还可提供未螯合金属离子的IMAC产品，用户可以自行选择螯合Cu2+、Ni2+、Fe2+、Zn2+, Co2+等过渡金属离子。 产品特性产品His标签蛋白纯化介质 （HP/CP/GP-IMAC）His标签蛋白纯化介质 （IMAC）基质聚丙烯酸酯硬胶琼脂糖软胶配基NTA NTA平均粒径70μm90μm 流速上限 1500cm/h 500cm/h耐压上限1MPa 0.3MPa储存4-8℃（20%乙醇） 4-8℃ (20%乙醇)特点金属离子脱落率低可自由选择金属离子种类 应用实例纯化His标签蛋白谱图从大肠杆菌破碎液上清中纯化His标签蛋白柱尺寸： 5.0cm ID x20 cm流速：100 mL/min检测波长：280nm样品：细胞粗提液3L纯度：90%收率：85%
    供应商： 上海多宁生物科技股份有限公司
    品牌： 博进生物
    价格： 面议
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