生物标签真蛋白测试仪

[font=宋体][font=宋体]蛋白质的检测在生物科学研究中占据着至关重要的地位。其中，免疫分析方法被广泛应用，包括[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]、酶联免疫吸附试验（[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]）和免疫沉淀法（[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]）等。这些方法依赖于抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体间的特异性反应，通过注射目标蛋白作为抗原至动物体内，产生免疫反应后分离抗体，进而进行检测。尽管应用广泛，但这种方法的缺点在于每次更换目标蛋白时都需要制备对应的抗体，操作繁琐且成本高昂。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]融合标签技术的出现为蛋白质免疫分析带来了通用化和便利化。通过将特定的标签与目标蛋白融合，两者实现共同表达。通过对融合标签的检测，我们可以了解目标蛋白的表达情况。这种蛋白标签技术利用基因克隆手段，将具有特定功能的多肽、蛋白质结构域甚至完整蛋白质与目标蛋白结合，广泛应用于目标蛋白的表达、纯化、检测和跟踪等方面。经过长期研究，已经发展出一些成熟的检测标签技术。这些标签不仅简化了实验操作，降低了成本，而且为蛋白质研究提供了强有力的工具。下面就挑几个来介绍一下：[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]①[/font][font=宋体][font=Calibri]His[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]-tag[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]His[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]标签[/b][/url]是当前最为热门的标签蛋白之一。[/font][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]是指六个组氨酸残基组成的融合标签（[/font][font=Calibri]HHHHHH[/font][font=宋体]），可插入在目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析（[/font][font=Calibri]IMAC[/font][font=宋体]），对重组蛋白进行分离纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]②[/font][font=宋体][font=Calibri]Flag-tag[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]Flag[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]标签蛋白[/b][/url]为编码[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]个氨基酸的亲水性多肽（[/font][font=Calibri]DYKDDDDK[/font][font=宋体]），同时载体中构建的[/font][font=Calibri]Kozak[/font][font=宋体]序列使得带有[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 [/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]③[/font][font=宋体][font=Calibri]AviTag[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]是一个[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸的短肽，具有一个单生物素化赖氨酸位点，与已知天然可生物素化序列完全不同，可以加在目标蛋白的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端和[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。融合表达后，可被生物素连接酶生物素化，为了纯化重组蛋白选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物，除了用于蛋白质分离纯化，还用于蛋白质相互作用研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]④[/font][font=宋体][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][font=宋体]是从人的[/font][font=Calibri]O6[/font][font=宋体]－甲基鸟嘌呤[/font][font=Calibri]-DNA[/font][font=宋体]甲基转移（[/font][font=Calibri]O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase[/font][font=宋体]）获得。[/font][font=Calibri]SNAP[/font][font=宋体]所带的活性巯基位点接受了苯甲基鸟嘌呤所携带的侧链苯甲基基团，释放出了鸟嘌呤。这种新的硫醚键共价结合使[/font][font=Calibri]SNAP[/font][font=宋体]所带的目的蛋白携带上了苯甲基基团所带的标记物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]检测：生物素或各种颜色荧光的底物（如荧光素、若丹明）可渗透进入细胞，方便快捷地进行活细胞内[/font][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][font=宋体]融合蛋白的标记与检测。它们也可特异性地标记大肠杆菌，酵母和哺乳动物等细胞抽提液或已经纯化的蛋白液中的[/font][font=Calibri]SNAP-tag[/font][font=宋体]融合蛋白。 [/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]⑤[/font][font=宋体][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]（谷胱甘肽巯基转移酶）[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]GST[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]标签蛋白[/b][/url]本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶，它的天然大小为[/font][font=Calibri]26KD[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达，可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达。结合的融合蛋白在非变性条件下用[/font][font=Calibri]10mM[/font][font=宋体]还原型谷胱甘肽洗脱。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测。标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其稳定性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]纯化：该表达系统表达的[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和树脂进行纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果要去除[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]⑥[/font][font=宋体][font=Calibri]GFP[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]（绿色萤光蛋白）是由下村修等人在水母中发现的。它在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光。[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]标签可位于蛋白质的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端，该系统已广泛应用于各种细胞类型，包括细菌、酵母和哺乳动物细胞等，相应的[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]标签抗体也被广泛应用。[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]在检测蛋白表达、蛋白和细胞荧光示踪、研究蛋白质之间相互作用和构象变化中，起到了重要的作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]该如何选择表达克隆的标签[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、首先，需要确定融合标签的目的[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白纯化[/font] [font=宋体]：标签的普遍用途是蛋白纯化。小分子[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]常被用于细胞内源蛋白的纯化。[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]也广泛应用于大肠杆菌的蛋白纯化。可是哺乳动物细胞中因非分泌蛋白自身存在高组氨酸背景，因此极少使用[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]检测：若需要做[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]实验来检测细胞裂解物中蛋白的表达，你可以选择有匹配的抗体的小分子标签。[/font][font=Calibri]FLAG Tag[/font][font=宋体]以其分子量小以及拥有许多与之匹配的商业化的抗体等优势，成为[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]实验中常用的[/font][font=Calibri]Tag[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫沉淀反应：[/font][font=Calibri]FLAG Tag[/font][font=宋体]其分子量小以及拥有大量相匹配的商业用抗体等优势成为免疫沉淀反应中最常用的[/font][font=Calibri]Tag. [/font][font=宋体]其他常用的标签有：[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]cMyc.[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫共沉淀。首先，裂解您的样本，以释放蛋白。向试管中添加裂解液的同时，加入靶向融合标签的抗体，抗体会识别融合标签。然后抗体与蛋白[/font] [font=Calibri]A [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]G [/font][font=宋体]偶联微珠结合，后者拉出您的目标蛋白，以及与之复合的其他蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]活细胞成像：荧光蛋白（[/font][font=Calibri]Fluorescent Proteins, FPs[/font][font=宋体]）是活细胞成像常用的标记蛋白。其中最常用的是绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）和它的衍生物（[/font][font=Calibri]CFP, YFP, etc.[/font][font=宋体]），以及一些红色变体，如[/font][font=Calibri]dTomato[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]mCherry.[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、考虑融合标签的影响[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]任何一类标签处于氨基酸序列的任一位置，都具有影响目的蛋白表达或功能的可能性。最主要原因是标签可能会干扰蛋白的正确折叠，致使目的蛋白失活或形成包涵体。其次，标签可能会中断亚细胞定位信号，这种情况下，蛋白能够正确翻译和折叠，但在细胞内所处的位置是错误的。因此，您需要知道添加的标签对目的蛋白的表达是否有影响。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、考虑是在[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记的选择还需要根据蛋白结构、定位等特性。然而，倘若你没有确切的蛋白结构，或蛋白功能域图谱，建议分别构建[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端标记和[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记的表达克隆，以检测哪个更有效。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][b]重组蛋白表达[/b][/url]技术现已在生物学各个具体领域应用广泛，尤其是蛋白质的大规模生产和体内功能研究都需要应用重组蛋白表达载体。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

[font=宋体]蛋白标签是指与靶蛋白相连的融合蛋白的亚结构域或肽序列。有许多在重组蛋白生产中广泛应用的蛋白标签。蛋白标签是一种方便有效的工具，可以提高重组蛋白的溶解性、简化蛋白纯化，并提供了一种在蛋白表达和纯化过程中跟踪蛋白的简便方法。如果有针对这些标签的特异抗体，这些标签也可应用于目的蛋白的亲和纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1.[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression]Flag[/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression]标签蛋白[/url][/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]标签为编码[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]个氨基酸的亲水性多肽（[/font][font=Calibri]DYKDDDDK[/font][font=宋体]），其融合表达目的蛋白后具有以下优点：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）作为融合表达标签，[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）融合在[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端的[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]，可以被肠激酶切除（[/font][font=Calibri]DDDK[/font][font=宋体]），从而得到特异的目的蛋白。因此[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]标签现已广泛应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）易于用[/font][font=Calibri]Anti-Flag[/font][font=宋体]的抗体进行检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2.HA[/font][font=宋体]标签[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]标签蛋白，序列为[/font][font=Calibri]YPYDVPDYA[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]9[/font][font=宋体]个氨基酸残基多肽，源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇，对外源靶蛋白的空间结构影响小[/font][font=Calibri], [/font][font=宋体]容易构建成标签蛋白融合到[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或者[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。易于用[/font][font=Calibri]Anti-HA[/font][font=宋体]的抗体进行检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3.c-Myc[/font][font=宋体]标签[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]C-Myc [/font][font=宋体]标签蛋白，是一个含[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]个氨基酸残基的小标签，标签序列[/font][font=Calibri]Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu[/font][font=宋体]，这[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]个氨基酸残基作为抗原表位表达在不同的蛋白质中仍可识别其相应抗体。[/font][font=Calibri]C-Myc tag[/font][font=宋体]已成功应用在 [/font][font=Calibri]Western-blot[/font][font=宋体]杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中，可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][b]4.Avi Tag[/b][/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]Avi Tag[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]标签蛋白[/b][/url]是一个[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸残基组成的短肽，具有一个单生物素化赖氨酸位点，与已知天然可生物素化序列完全不同，可以加在目标蛋白的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端和[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。融合表达后，可被生物素连接酶生物素化。为了纯化重组蛋白，选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物，除了用于蛋白质分离纯化，还用于蛋白质相互作用研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]Avi Tag[/font][font=宋体]标签系统具有以下几大优点：[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）无论在体外或者体内，几乎所有的蛋白都可以在一个独特的[/font][font=Calibri]Avi Tag[/font][font=宋体]位点轻易且有效地被生物素化；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）生物素化是通过酶和底物的反应来实现，反应条件相当温和而且标记的专一性极高；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）生物素[/font][font=Calibri]Avi Tag[/font][font=宋体]只有[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸，对蛋白空间结构的影响非常小；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）生物素与链亲和素具有很高的很专一的结合活性，非常便于后期检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]更多蛋白标签可以查看：[/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

[font=宋体]蛋白标签是指与靶蛋白相连的融合蛋白的亚结构域或肽序列。有许多在重组蛋白生产中广泛应用的蛋白标签。蛋白标签是一种方便有效的工具，可以提高重组蛋白的溶解性、简化蛋白纯化，并提供了一种在蛋白表达和纯化过程中跟踪蛋白的简便方法。如果有针对这些标签的特异抗体，这些标签也可应用于目的蛋白的亲和纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1.Flag[/font][font=宋体]标签蛋白[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]标签为编码[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]个氨基酸的亲水性多肽（[/font][font=Calibri]DYKDDDDK[/font][font=宋体]），其融合表达目的蛋白后具有以下优点：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）作为融合表达标签，[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）融合在[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端的[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]，可以被肠激酶切除（[/font][font=Calibri]DDDK[/font][font=宋体]），从而得到特异的目的蛋白。因此[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]标签现已广泛应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）易于用[/font][font=Calibri]Anti-Flag[/font][font=宋体]的抗体进行检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2.HA[/font][font=宋体]标签[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]标签蛋白，序列为[/font][font=Calibri]YPYDVPDYA[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]9[/font][font=宋体]个氨基酸残基多肽，源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇，对外源靶蛋白的空间结构影响小[/font][font=Calibri], [/font][font=宋体]容易构建成标签蛋白融合到[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或者[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。易于用[/font][font=Calibri]Anti-HA[/font][font=宋体]的抗体进行检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3.c-Myc[/font][font=宋体]标签[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]C-Myc [/font][font=宋体]标签蛋白，是一个含[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]个氨基酸残基的小标签，标签序列[/font][font=Calibri]Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu[/font][font=宋体]，这[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]个氨基酸残基作为抗原表位表达在不同的蛋白质中仍可识别其相应抗体。[/font][font=Calibri]C-Myc tag[/font][font=宋体]已成功应用在 [/font][font=Calibri]Western-blot[/font][font=宋体]杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中，可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][b]4.Avi Tag[/b][/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]Avi Tag[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]标签蛋白[/b][/url]是一个[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸残基组成的短肽，具有一个单生物素化赖氨酸位点，与已知天然可生物素化序列完全不同，可以加在目标蛋白的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端和[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。融合表达后，可被生物素连接酶生物素化。为了纯化重组蛋白，选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物，除了用于蛋白质分离纯化，还用于蛋白质相互作用研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Avi Tag[/font][font=宋体]标签系统具有以下几大优点：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）无论在体外或者体内，几乎所有的蛋白都可以在一个独特的[/font][font=Calibri]Avi Tag[/font][font=宋体]位点轻易且有效地被生物素化；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）生物素化是通过酶和底物的反应来实现，反应条件相当温和而且标记的专一性极高；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）生物素[/font][font=Calibri]Avi Tag[/font][font=宋体]只有[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸，对蛋白空间结构的影响非常小；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）生物素与链亲和素具有很高的很专一的结合活性，非常便于后期检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]可以查看：[/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]蛋白标签（[/font][font=Calibri]Protein Tag[/font][font=宋体]）又称为标签蛋白，是利用[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]体外重组技术，将目的蛋白与其融合表达形成的一种多肽或蛋白。这种标签有助于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等操作。随着技术的不断进步，研究人员已经成功开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。然而，由于不同的蛋白标签具有各自的特性，因此在质粒构建过程中常常会遇到多种问题。今天，我们将深入探讨蛋白标签的各个方面。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白标签类型[/b][/font][font=宋体]蛋白标签主要分为三类，适用于不同的应用场景：表位标签、亲和标签和荧光标签。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①表位标签往往是短肽序列，可用于免疫学应用，如 [/font][font=Calibri]Western Blot [/font][font=宋体]和免疫共沉淀。最常用的表位标签有[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②亲和标签一般较长，可增加蛋白溶解度，广泛应用于重组蛋白的纯化，如[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Trx[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③荧光标签可用于活细胞和死细胞检测，最常用的荧光蛋白包括绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）、橙色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]OFP[/font][font=宋体]）、红色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]RFP[/font][font=宋体]）和黄色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]YFP[/font][font=宋体]）。它们被广泛用于影像学研究，如细胞定位和共表达实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]蛋白标签在重组蛋白生产中有什么作用[/font][font=Calibri]?[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、识别：给蛋白加标签使其易于识别，进而快速鉴定感兴趣的蛋白质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、纯化：利用标签蛋白对目的蛋白进行纯化。例如，[/font][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]是一种由六个组氨酸残基组成的融合标签，可以插入目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，这使得[/font][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]标签可用于固定化金属螯合层析[/font][font=Calibri](IMAC)[/font][font=宋体]，从而对重组蛋白进行分离纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、定量：通过量化标签来确定目的蛋白的存在量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、定位：通过定位标签蛋白定位到目标蛋白在细胞中的特定位置，进而研究其生理功能、信号通路等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、跟踪：在细胞、组织和生物体中，通过追踪标签蛋白质追踪目的蛋白，以研究它们的表达、分布、代谢等生物学过程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总之，蛋白标签在重组蛋白生产中扮演着重要的角色，它们不仅提高了生产效率，还为蛋白的检测、纯化和示踪提供了便利。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]常用的[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]有：[/font][font=Calibri]His-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]FLAG-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HA-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/myc-tag-protein-production][b]Myc-Tag[/b][/url][/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SUMO-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Trx-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST-Tag[/font][font=宋体]……义翘神州不仅可提供重组蛋白表达定制服务，也可提供对应标签抗体产品及融合蛋白标签切除常用工具酶，如[/font][font=Calibri]EK[/font][font=宋体]蛋白酶、[/font][font=Calibri]3C[/font][font=宋体]蛋白酶等。下图是具体蛋白标签的序列和大小介绍，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

[font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]标签蛋白[/b][/url]主要分为两类：一类为自发荧光标签，它们主要应用于目标蛋白表达代谢的动态监测，另一类就是主要辅助蛋白质分离纯化的亲和吸附标签。本期盘点的内容主要针对亲和吸附标签。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]亲和吸附标签不仅便于对融合蛋白的检测与纯化，而且可能对目标蛋白的理化性质产生有利的影响：可以提高重组蛋白的产量，增强重组蛋白的可溶性，促进重组蛋白的正确折叠。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]常用亲和吸附标签蛋白[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]His[/b][/url][/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签被认为是蛋白纯化的首选标签，它由六个组氨酸残基（[/font][font=Calibri]HHHHHH[/font][font=宋体]）组成，分子量极小只有[/font][font=Calibri]~0.84KD[/font][font=宋体]，可插入在目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签融合蛋白的纯化是借助于层析介质上的过渡金属离子（如[/font][font=Calibri]Cu[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Zn2+[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Ni2+[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Co[/font][font=宋体]等）与[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]融合蛋白上的[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签的配位作用实现目标蛋白的分离。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端的[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签与细菌的转录翻译机制兼容，有利于蛋白表达；[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签很小，几乎不影响目标蛋白的理化性质及其可溶性，在目标蛋白结晶后对其蛋白结构几乎没有影响；并且其免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行抗体制备。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]然而，并不是所有的蛋白质都可以与[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签融合后，采用固定化金属离子亲和层析分离纯化。宿主蛋白中含有半胱氨酸及天然发生的组氨酸丰富区域，在固定化金属离子亲和层析时可能会导致其他蛋白的非特异性结合[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]目标蛋白含有金属离子，一般也不采用[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签与固定化金属离子亲和层析。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]FLAG[/b][/url][/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]FLAG [/font][font=宋体]标签是由[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]个氨基酸[/font][font=Calibri]( DYKDDDDK) [/font][font=宋体]组成的一个短肽，分子量很小，因而不会遮盖融合蛋白中其他的蛋白表位与结构域，也不会改变融合蛋白的功能、分泌或运输。目的蛋白[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端融合了[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]多肽后，[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端还可以融合其他模块或者不同的亲和配体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]标签的基础上，将[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]FLAG [/font][font=宋体]标签串联在一起，便形成了一个由 [/font][font=Calibri]22 [/font][font=宋体]个氨基酸组成的[/font][font=Calibri]3 [/font][font=宋体]× [/font][font=Calibri]FLAG [/font][font=宋体]标签。与原始[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]标签相似，[/font][font=Calibri]3 [/font][font=宋体]× [/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]标签的分子量很小，只有[/font][font=Calibri]2.7 kDa[/font][font=宋体]，天然亲水，因而不会改变融合蛋白的功能，且同时含有一个肠激酶切割位点，便于除去标签。更为重要的是，该标签具有更高的检测敏感性，特别适合于哺乳动物细胞表达系统中低表达水平蛋白质的检测。而对于某些需要维持生物活性的小分子目标蛋白，在其免疫沉淀纯化中，结合一个高效接头结构的[/font][font=Calibri]3 [/font][font=宋体]× [/font][font=Calibri]FLAG [/font][font=宋体]标签表现出更显著的纯化效果。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]GST [/font][font=宋体]标签由 [/font][font=Calibri]211 [/font][font=宋体]个氨基酸组成，大小约为[/font][font=Calibri]26kDa[/font][font=宋体]，广泛用于重组蛋白融合表达与亲和纯[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]化。[/font][font=Calibri]GST [/font][font=宋体]标签可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达，起到提高表达量的作用；[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]可在一定程度上增大融合蛋白的可溶性，不仅促进了目标蛋白的正确折叠，提高了蛋白产量，而且有助于后续的蛋白纯化；[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签可很好的保留融合蛋白的抗原性和生物活性，并可使用不同的蛋白酶方便去除。但[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]易于同源二聚化，从而增加纯化难度，且相对短肽标签，分子量较大，在融合表达时可能会影响蛋白功能，并增加细胞代谢负担。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④[/font][font=Calibri]c-Myc[/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/myc-tag-protein-production[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]c-Myc[/font][font=宋体]标签蛋白（[/font][font=Calibri]EQKLISEEDL[/font][font=宋体]），其大小为[/font][font=Calibri]1.2kDa[/font][font=宋体]，它作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中可识别其相应的抗体。[/font][font=Calibri]c-Myc[/font][font=宋体]标签常应用于[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]、免疫沉淀和细胞流式术中，可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。但需要注意的是[/font][font=Calibri]Myc[/font][font=宋体]标签蛋白本身即为人的[/font][font=Calibri]Myc[/font][font=宋体]基因的一部分，所以应尽量避免将该蛋白应用于人的细胞或组织相关实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]⑤[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/ha-tag-protein-production[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]标签（氨基酸序列：[/font][font=Calibri]YPYDVPDYA[/font][font=宋体]）是?段来源于?流感病毒?凝素（[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]）蛋?第 [/font][font=Calibri]98[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]106 [/font][font=宋体]位氨基酸的短序列，分?量为[/font][font=Calibri]1.1 KDa[/font][font=宋体]，是?前?泛应?的表位标签之?，能形成强烈的抗体识别位点。通过分??物学?段将[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]标签融合到?的蛋?的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端后，抗 [/font][font=Calibri]HA [/font][font=宋体]标签抗体可?于[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]标记的靶蛋?的检测、分离和纯化，??需蛋?特异性抗体或探针。[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]对外源蛋白的空间结构影响小，容易构建成标签蛋白融合到[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端或者[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如何选择合适的亲和吸附标签？通常需要注意以下[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]点：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]① 根据实验目的选择合适的标签，例如蛋白纯化选择[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签，[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]通常选择[/font][font=Calibri]FLAG[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]② 确定标签蛋白对目的蛋白的表达是否产生干扰、[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③ 确定标签蛋白标记的位置是在目的蛋白的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/sumo-tag-purification][b][font=Calibri]SUMO [/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]small ubiquitin-like modifier[/font][/b][/url][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/sumo-tag-purification][b]）标签蛋白[/b][/url]是一种小分子泛素样修饰蛋白，研究发现[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]可以作为重组蛋白表达的融合标签和分子伴侣，不但可以进一步提高融合蛋白的表达量，且具有抗蛋白酶水解以及促进靶蛋白正确折叠，提高重组蛋白可溶性等功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]蛋白最早于[/font][font=Calibri]1996[/font][font=宋体]年在酵母中发现其修饰的蛋白，后来发现从酵母到真核细胞都有泛素化修饰的蛋白。泛素化修饰作为一种很常见的蛋白翻译后修饰，也是目前一个研究热点。目前研究发现真核细胞中有多种[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]蛋白， [/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]化主要修饰蛋白质的赖氨酸残基，[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]化修饰是一个动态可逆的过程，通过修饰解离动态调节蛋白结构以维持不同的生理功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]作为融合标签蛋白的优势[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]与[/font][font=Calibri]MBP,GST,GFP,TrX[/font][font=宋体]等标签比较具有更大优势：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]促进靶蛋白可溶性表达；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]作为伴侣蛋白，促进蛋白质正确折叠；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]对热和蛋白酶有很强的耐受性；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]有配套的特异性蛋白酶可以切除标签，精准结构性识别，相比较于以来蛋白氨基酸序列的酶切位点具有更好的特异性；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5. [/font][font=宋体]标签的分子量较小，相对于目标蛋白占比性较高。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]在蛋白质表达中的应用[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Sumo[/font][font=宋体]融合标签被广泛的应用于原核表达系统，除了用于常规蛋白的表达外还用于毒性蛋白，抗菌肽，蛋白二聚体的表达；但是其不能用于真核表达系统，原因是真核细胞内有[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]蛋白酶。但是道高一尺，魔高一丈，目前已经有公司开发出既可用于真核又可用于原核系统的[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]标签，以及配套的蛋白酶。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/sumo-tag-purification[/font][/font]

[font=宋体]蛋白质是生物体的基本组成部分，参与各种生物过程。为了更好地理解和操控这些过程，科学家们开发了多种技术来分离和纯化蛋白质。其中，标签蛋白沉淀技术是一种非常有效的方法，它通过将特定的标签连接到目标蛋白上，利用标签的特性将其与其他蛋白分离开来。这项技术的优点在于其高特异性和高纯度，使得研究人员能够获得高质量的蛋白质样品，以进行进一步的分析和研究。在生物科学领域，[b]标签蛋白沉淀技术[/b]已成为一项关键技术，它有助于我们更好地理解生命的基本过程以及开发新的治疗方法。标签蛋白沉淀技术步骤：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①这一技术的核心在于对目标蛋白进行巧妙的改造。我们通过在蛋白编码序列中嵌入特定的标签或标记（例如[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]谷胱甘肽[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]S-[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]转移酶[/b][/url]，[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]His[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]标签[/b][/url]，[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]FLAG[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]标签[/b][/url]等），使目标蛋白在表达时能与标签紧密结合。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②我们将携带标签蛋白编码序列的表达载体导入适合的宿主细胞。在适当的培养条件下，宿主细胞高效地表达出目标蛋白。随后，通过细胞破碎技术释放出蛋白质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③核心环节——沉淀。利用标签与亲和配体间的特异性结合力，我们使用具有亲和性的树脂、磁珠或柱子将目标蛋白从混合物中分离出来。不同标签有其独特的亲和性，确保了蛋白的高纯度分离。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④在成功沉淀目标蛋白后，我们通过洗涤步骤去除其他杂质和未结合的蛋白。最后，只需特定的洗脱条件，目标蛋白便能从亲和树脂上完全洗脱下来。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]⑤经过这一系列步骤，我们获得的蛋白纯净度极高，可进行各种后续分析，如[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]、质谱等。而这些高纯度蛋白在科学实验、药物研发、生物工程等领域具有广泛的应用前景。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]值得注意的是，选择合适的标签和亲和树脂是这项技术的关键。同时，标签的引入可能会对蛋白的结构和功能产生影响，因此在实验设计时必须慎重考虑。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总的来说，[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]标签蛋白[/b][/url]沉淀技术以其精准、高效的特性，为蛋白质研究领域带来了革命性的突破。随着科学技术的不断进步，我们有理由相信这一技术将继续为生命科学领域带来更多突破性的发现。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]详情：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]体外重组蛋白表达技术已经渗透到生物学的各个领域。目前，体外重组蛋白表达系统主要有四类：原核表达系统、哺乳动物细胞表达、酵母表达系统及昆虫细胞表达。表达的一般实验包括载体构建[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]表达鉴定[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]蛋白纯化三大步骤。在构建载体阶段，除了一些必要的表达元件，还需要考虑的密码子优化和标签的选择。选择合适的标签不但有利于蛋白的纯化，促进蛋白的可溶性，同时也不能影响蛋白的结构功能和下游应用。本文详细介绍了几种蛋白纯化标签，帮助我们更好的设计实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白纯化标签比较[/b][/font][table][tr][td][b][font=微软雅黑]融合标签[/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]大小（[/font][font=微软雅黑]KD）[/font][/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑]功能[/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑]是否切除[/font][/b][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]HIS[/font][/td][td][font=微软雅黑]0.84[/font][/td][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]有利纯化，能纯化可溶性[/font][font=微软雅黑]/包涵体蛋白[/font][/font][/td][td][font=微软雅黑]标签小，对蛋白无影响[/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]GST[/font][/td][td][font=微软雅黑]26[/font][/td][td][font=微软雅黑]增强蛋白可溶性，仅能纯化可溶性蛋白，屏蔽毒性蛋白[/font][/td][td][font=微软雅黑]标签较大，影响较大[/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]MBP[/font][/td][td][font=微软雅黑]44.4[/font][/td][td][font=微软雅黑]增强蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白[/font][/td][td][font=微软雅黑] [/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]NusA[/font][/td][td][font=微软雅黑]55[/font][/td][td][font=微软雅黑]增强蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白[/font][/td][td][font=微软雅黑] [/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]SOMO[/font][/td][td][font=微软雅黑]11.2[/font][/td][td][font=微软雅黑]增强可溶性，屏蔽毒性蛋白[/font][/td][td][font=微软雅黑] [/font][/td][/tr][/table][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]HIS-Tag[/font][font=宋体]（组氨酸标签）[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]HIS-Tag[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]蛋白纯化[/b][/url]的首选标签[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HIS-Tag[/font][font=宋体]本身的特性对目的蛋白没有影响，不会形成二聚体；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]分子量较小，只有[/font][font=Calibri]0.84KD[/font][font=宋体]，对蛋白的下游应用不会产生影响；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫原性低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HIS-Tag[/font][font=宋体]与细菌的转录翻译机制兼容，有利于蛋白表达；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]可与其他标签构建双标签表达，可用于多种蛋白表达系统，纯化条件温和对蛋白影响较小。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HIS-Tag[/font][font=宋体]由[/font][font=Calibri]6-10[/font][font=宋体]个组氨酸残基组成，分子量不到[/font][font=Calibri]0.84KD[/font][font=宋体]，，通常插入在目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。[/font][font=Calibri]HIS-Tag[/font][font=宋体]是目前原核表达最常用的标签，蛋白纯化完之后可以不需切除此标签，也不会对蛋白产生功能影响。同时，蛋白纯化步骤简便，纯化条件温和，对蛋白也不会产生太大影响。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]GST-Tag[/font][font=宋体]（谷胱甘肽巯基转移酶标签）[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]GST-Tag[/font][font=宋体]相对分子质量较大，约为[/font][font=Calibri]26KD[/font][font=宋体]，插入在目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端，大肠杆菌中常用在[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端。[/font][font=Calibri]GST([/font][font=宋体]谷胱甘肽巯基转移酶[/font][font=Calibri]) [/font][font=宋体]蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶。一般选择[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签的目的有两个，一是提高蛋白表达的可溶性，二是提高蛋白的表达量。蛋白表达纯化结束后需根据不同的蛋白应用而确定是否切除标签，标签较大，切除与否需根据下游应用考虑。如果要去除[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。检测方法可用[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]GST-Tag[/font][font=宋体]的优缺点[/font][/font][/b][font=宋体]增加外源蛋白的可溶性；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]可在不同的宿主中表达，适用范围广；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]可用不同的蛋白酶可以方便去除；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]很好保留了蛋白的抗原性和生物活性，提高外原蛋白的稳定性；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]高特异性，纯化方便且温和；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]分子量较大，可能会影响蛋白质的功能和下游实验；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]如果蛋白不可溶，很难用变性的方法纯化。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]亲和纯化原理[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]GST [/font][font=宋体]亲和层析是利用[/font][font=Calibri]GST [/font][font=宋体]融合蛋白与固定的谷胱甘肽[/font][font=Calibri](GSH)[/font][font=宋体]通过硫键共价亲和，通过[/font][font=Calibri]GSH[/font][font=宋体]交换洗脱的原理来进行纯化 。该纯化柱中，凝胶手臂上通过硫键结合一个谷胱甘肽。然后利用谷胱甘肽与谷胱甘肽巯基转移酶（即[/font][font=Calibri]GST-tag[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]26 KDa[/font][font=宋体]））之间酶和底物的特异性作用力，使得带[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签的融合蛋白能够与凝胶上的手臂谷胱甘肽结合，从而将带标签的蛋白与其他蛋白分离开。谷胱甘肽通常有氧化型[/font][font=Calibri]GSSG[/font][font=宋体]和还原型[/font][font=Calibri]GSH[/font][font=宋体]，当我们使用[/font][font=Calibri]GSH[/font][font=宋体]洗脱时，[/font][font=Calibri]GSH[/font][font=宋体]会与凝胶上的谷胱甘肽竞争结合融合蛋白，从而将目标蛋白洗脱。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]GST[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]标签蛋白[/b][/url]可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶[/font][font=Calibri](Glutathione sepharose)[/font][font=宋体]亲和树脂进行纯化。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白可在温和、非变性条件下洗脱，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力，因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂如：盐酸胍或尿素等。如果蛋白表达在包涵体中，可复性后再纯化。此外要去除[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签，可用位点特异性蛋白酶切除。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]MBP-Tag[/font][font=宋体]（麦芽糖结合蛋白标签）[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]（麦芽糖结合蛋白[/font][font=Calibri]maltose binding protein[/font][font=宋体]）， 残基数[/font][font=Calibri]346[/font][font=宋体]，分子量[/font][font=Calibri]42.5KDa[/font][font=宋体]，由大肠杆菌[/font][font=Calibri]K12[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]malE[/font][font=宋体]基因编码，构建时刻放在[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端，用来提高可溶性（尤其是真核蛋白）。[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]的折叠需要[/font][font=Calibri]DnaK-DnaJ-GrpE[/font][font=宋体]和[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]GroEL-GeoES[/font][font=宋体]两个分子伴侣系统的帮助，这可以使这些分子伴侣聚集到目的蛋白的附近帮助其正确折叠。另外，以标签蛋白形式存在的麦芽糖结合蛋白可以减少目的蛋白的降解，提高表达产物的水溶性，也为以后对目的蛋白的纯化提供了基础。麦芽糖结合蛋白能够被多糖树脂吸附，因此在过柱时，能够使融合蛋白与其它蛋白成份分离。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]氨基酸序列：[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]标签的优缺点[/font][/font][/b][font=宋体]简单亲和纯化即可实现；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]增加蛋白表达量和蛋白稳定性；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]促进蛋白的可溶性和正确折叠；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]标签较大，对蛋白的结构[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]功能会有一定影响。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]NusA-Tag[/font][font=宋体]（转录终止[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]抗终止蛋白标签）[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]是大肠杆菌自身的一种蛋白，即转录抗终止因子，残基数[/font][font=Calibri],495[/font][font=宋体]，分子量[/font][font=Calibri]:54.87KDa[/font][font=宋体]，由[/font][font=Calibri]1999[/font][font=宋体]年[/font][font=Calibri]Davia[/font][font=宋体]将[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]从[/font][font=Calibri]4000[/font][font=宋体]种大肠杆菌蛋白库中筛得。[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]不具有独立的纯化标签功能，所以要与其它标签[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]联用。利用原核表达时，[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]标签可以明显的提高蛋白的可溶性，例如含有[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]标签的人白介素[/font][font=Calibri]-3 [/font][font=宋体]融合蛋白[/font][font=Calibri](NusA/hIL-3 )[/font][font=宋体]在[/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]℃条件下诱导表达几乎全部可溶[/font][font=Calibri](97%)[/font][font=宋体]，而当其单独表达或融合[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签表达时都是包涵体形式。另外[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]标签还可以提高不溶性靶蛋白如牛生长激素（[/font][font=Calibri]bGH)[/font][font=宋体]、人干扰素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]γ [/font][font=Calibri](hIFN-[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]的可溶性。来自草木犀根瘤菌[/font][font=Calibri](Rizobiummeliloti)[/font][font=宋体]的酪氨酸激酶因为分子量大[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]超过[/font][font=Calibri]54kDa)[/font][font=宋体]并且基因含有大量稀有密码子，自身在大肠杆菌中无法过量表达，但是与[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]融合后却可以高效表达。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]氨基酸序列：[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]的优缺点[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]可以提高蛋白质的溶解性，可选的标签有[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]这些标签不能用专门的亲和基质纯化，融合蛋白构建时必须与可用于纯化的小亲和标签连用。尤其是当[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]蛋白增加融合蛋白溶解性时，一些在大肠杆菌中表达为不溶性的蛋白在与[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]在[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端融合时则变成可溶。但是由于它的分子量较大，导致靶蛋白的得率相对降低；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]本身不具有独立的纯化标签功能，所以要与其它标签如[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签联用；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]对蛋白下游应用会有影响，如蛋白需进行结构分析（晶体衍射或核磁共振）。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]（小泛素相关修饰物）[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/sumo-tag-purification][b]SUMO[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/sumo-tag-purification][b]标签蛋白[/b][/url]是一种小分子泛素相关修饰蛋白，是存在于真核生物中高度保守的参与蛋白质小泛素化相关修饰的一类大蛋白。与[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]相比，[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]不仅可以作为重组蛋白表达的融合标签还具备分子伴侣的功能，能促进蛋白的正确折叠，对热和蛋白酶具有耐受性，更有助于保持目的蛋白的稳定性。此外，[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]标签有着与其配套的蛋白酶（专一性强），此蛋白酶识别的是[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]的三级结构，切割的特异性极高，不存在任何氨基酸的残留，因此适用于重组蛋白表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]纯化：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font][font=Calibri] [/font]

[b][font=宋体]蛋白标签是什么？[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]一些肽类和蛋白质被广泛的用于大量生产重组蛋白，它们与目的蛋白融合表达，以便于目的蛋白表达、检测、示踪和纯化。这类多肽或蛋白，被称为标签蛋白（[/font][font=Calibri]Protein Tag[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]蛋白标签的具体作用包括以下几个方面：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、识别：给蛋白加标签使其易于识别，进而快速鉴定感兴趣的蛋白质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、纯化：利用标签蛋白对目的蛋白进行纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、定量：通过量化标签来确定目的蛋白的存在量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、定位：通过定位标签蛋白定位到目标蛋白在细胞中的特定位置，进而研究其生理功能、信号通路等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、跟踪：在细胞、组织和生物体中，通过追踪标签蛋白质追踪目的蛋白，以研究它们的表达、分布、代谢等生物学过程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]常见的蛋白标签有：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]一、[/font] [font=Calibri]His6[/font][/font][font=宋体][font=宋体]序列：[/font][font=Calibri]CATCACCATCACCATCAC[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析[/font][font=Calibri](IMAC)[/font][font=宋体]，对重组蛋白进行分离纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]His-tag[/font][font=宋体]有以下特点优点：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]标签的分子量小，只有[/font][font=Calibri]~0.84KD[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]可用于蛋白质[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]蛋白质、蛋白质[/font][font=Calibri]-DNA[/font][font=宋体]相互作用研究；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.His[/font][font=宋体]标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫制备抗体；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]二、[/font][font=Calibri]Flag[/font][/font][font=宋体][font=宋体]序列：[/font][font=Calibri]GACTACAAAGACGATGACGACAAG[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]标签蛋白为编码[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]个氨基酸的亲水性多肽（[/font][font=Calibri]DYKDDDDK[/font][font=宋体]），同时载体中构建的[/font][font=Calibri]Kozak[/font][font=宋体]序列使得带有[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]融合表达目的蛋白后具有以下优点：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.FLAG[/font][font=宋体]作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]融合[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]的目的蛋白，可以直接通过[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.FLAG[/font][font=宋体]作为标签蛋白，其可以被抗[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]的抗体识别，这样就方便通过[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]等方法对含有[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]的融合蛋白进行检测、鉴定。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]融合在[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端的[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]，其可以被肠激酶切除（[/font][font=Calibri]DDDK[/font][font=宋体]），从而得到特异的目的蛋白。因此现[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]三、[/font][font=Calibri]HA[/font][/font][font=宋体][font=宋体]序列：[/font][font=Calibri]TACCCATACGATGTTCCAGATTACGCT[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]标签蛋白，标签序列[/font][font=Calibri]YPYDVPDYA[/font][font=宋体]，源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇，[/font][font=Calibri]9[/font][font=宋体]个氨基酸，对外源靶蛋白的空间结构影响小，容易构建成标签蛋白融合到[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或者[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。易于用[/font][font=Calibri]Anti[/font][font=宋体]－[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]抗体检测和[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]四、[/font][font=Calibri]Myc[/font][/font][font=宋体][font=宋体]序列：[/font][font=Calibri]GAACAAAAACTCATCTCAGAAGAGGATCTG[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Myc[/font][font=宋体]标签蛋白，是一个含[/font][font=Calibri]11[/font][font=宋体]个氨基酸的小标签，标签序列[/font][font=Calibri]Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu[/font][font=宋体]，这[/font][font=Calibri]11[/font][font=宋体]个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。[/font][font=Calibri]Myc tag[/font][font=宋体]已成功应用在[/font][font=Calibri]Western-blot[/font][font=宋体]杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中，可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]在重组蛋白生产中具有非常重要的作用，使得各种蛋白的表达和纯化得以实现，在实验过程中标签的选择，可根据实验目的来选择。义翘神州的可提供重组蛋白表达定制服务，通过适合的标签快速表达出目的蛋白。更多蛋白标签详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

[font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]是指与靶蛋白相连的融合蛋白（参阅什么是融合蛋白）的亚结构域或肽序列。有许多在重组蛋白生产中广泛应用的蛋白标签。蛋白标签是一种方便有效的工具，可以提高重组蛋白的溶解性、简化蛋白纯化，并提供了一种在蛋白表达和纯化过程中跟踪蛋白的简便方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]根据不同的应用，融合标签主要分为三类：表位标签、亲和标签和荧光标签。[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①表位标签往往是短肽序列，可用于免疫学应用，如[/font][font=Calibri]Western Blot [/font][font=宋体]和免疫共沉淀。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②亲和标签一般较长，可用于蛋白纯化或增加蛋白溶解度。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③荧光标签可用于活细胞和死细胞，并广泛用于影像学研究，如细胞定位和共表达实验。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]标签揭秘选择[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]选择将标签融合到目标蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端，很大程度上取决于蛋白本身：蛋白的折叠方式，以及您选择的末端是否有功能要求。例如，如果[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端在蛋白内部折叠，那么您收到融合蛋白信号的可能性非常小；或者，如果蛋白在标签融合末端进行翻译后剪切，那么标签将从目标蛋白中移除。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果有资源或准备开展新型实验，最好同时克隆[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端和[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端标签的构造，从而确定最佳选择。一研究小组发现，与[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端的标签融合蛋白相比，更多的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端融合蛋白定位于目标亚细胞腔隙。但是，需要强调的是，虽然[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端标签蛋白的定位和表现往往符合预期，但并不是始终可以预测。融合蛋白定位是否正确，可通过免疫荧光进行检测；免疫印迹有助于确认融合蛋白的大小是否正确并以预期的水平表达，免疫共沉淀有助于评估融合蛋白与已知底物的相互作用方式。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合标签优缺点：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优点：无需特异性蛋白即可分离目标蛋白；有时可在纯化后裂解标签；可将多个标签连接到同一蛋白上，增加其功能；避免免疫沉淀中出现抗体干扰；荧光标签可用于显示活细胞中的蛋白；多种标签供选择，适合不同的应用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点：某些标签可能会影响蛋白功能；可能需要多次尝试才能找到最佳标签位置，导致实验成本增加。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注义翘神州蛋白标签页：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

[b][font=宋体][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]（麦芽糖结合蛋白）标签蛋白大小为[/font][font=Calibri]40kDa[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]，由大肠杆菌[/font][font=Calibri]K12[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]malE[/font][font=宋体]基因编码。[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]标签可通过免疫分析很方便地检测。有必要用位点专一的蛋白酶切割标签。如果蛋白在细菌中表达，[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]可以融合在蛋白的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]标签序列：[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]396 AA[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]纯化：融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化。结合的融合蛋白可用[/font][font=Calibri]10mM[/font][font=宋体]麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。结合亲和力在微摩尔范围。一些融合蛋白在[/font][font=Calibri]0.2% Triton X-100[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]0.25% Tween 20[/font][font=宋体]存在下不能有效结合，而其他融合蛋白则不受影响。缓冲条件为[/font][font=Calibri]pH7.0[/font][font=宋体]到[/font][font=Calibri]8.5[/font][font=宋体]，盐浓度可高达[/font][font=Calibri]1M[/font][font=宋体]，但不能使用变性剂。如果要去除[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]mbp[/font][font=宋体]标签优缺点：[/font][/font][/b][font=宋体]简单亲和纯化即可实现；[/font][font=宋体]增加蛋白表达量和蛋白稳定性；[/font][font=宋体]促进蛋白的可溶性和正确折叠；[/font][font=宋体][font=宋体]标签较大，对蛋白的结构[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]功能会有一定影响。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]常见的蛋白标签：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]常见的融合标签包括谷胱甘肽[/font][font=Calibri]S-[/font][font=宋体]转移酶 （[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]）、麦芽糖结合蛋白（[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]）、几丁质结合蛋白（[/font][font=Calibri]CBD[/font][font=宋体]）、硫氧还蛋白（[/font][font=Calibri]Trx[/font][font=宋体]）、链霉亲和素、多聚组氨酸（[/font][font=Calibri]Poly-His[/font][font=宋体]）、小分子泛素样修饰蛋白（[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]）和血凝素标签（[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]GST:[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b][font=Calibri]GST([/font][font=宋体]谷胱甘肽巯基转移酶[/font][font=Calibri]) [/font][/b][/url][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]标签蛋白[/b][/url]本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶，它的天然大小为[/font][font=Calibri]26KD[/font][font=宋体]。将它应用在原核表达的原因大致有两个，一个是因为它是一个高度可溶的蛋白，希望可以利用它增加外源蛋白的可溶性；另一个是它可以在大肠杆菌中大量表达，起到提高表达量的作用。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达，可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达。结合的融合蛋白在非变性条件下用[/font][font=Calibri]10mM [/font][font=宋体]还原型谷胱甘肽洗脱。在大多数情况下，融合蛋白在水溶液中是可溶的，并形成二体。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测。标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其稳定性。在大多数情况下[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合蛋白是完全或部分可溶的。纯化：该表达系统表达的[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶[/font][font=Calibri](Glutathionesepharose)[/font][font=宋体]亲和树脂进行纯化。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白可在温和、非变性条件下洗脱，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力，因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂如：盐酸胍或尿素等。如果要去除[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。检测：可用[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]：[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/ha-tag-protein-production][b]HA[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/ha-tag-protein-production][b]标签蛋白[/b][/url]，标签序列[/font][font=Calibri]YPYDVPDYA[/font][font=宋体]，源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇，[/font][font=Calibri]9[/font][font=宋体]个氨基酸，对外源靶蛋白的空间结构影响小[/font][font=Calibri], [/font][font=宋体]容易构建成标签蛋白融合到[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或者[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。易于用[/font][font=Calibri]Anti[/font][font=宋体]－[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]抗体检测和[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测。用[/font][font=Calibri]HA peptide[/font][font=宋体]可实现带[/font][font=Calibri]HA tag[/font][font=宋体]的蛋白洗脱，[/font][font=Calibri]0.15M Arginine-HCl[/font][font=宋体]缓冲液[/font][font=Calibri], pH3.0[/font][font=宋体]可实现蛋白纯化[/font][font=Calibri]beads [/font][font=宋体]的重生。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]……[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

[b][font=宋体][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签由[/font][font=Calibri]211[/font][font=宋体]个氨基酸组成，大小约为[/font][font=Calibri]26KDa[/font][font=宋体]。[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]一般利用重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]技术插入到目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端（大肠杆菌中常用在[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端），再利用相应的抗[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签抗体进行鉴定和检测，广泛应用于重组蛋白表达以及亲和纯化实验中。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]氨基酸序列[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKKFELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRYGVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVLYMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPKSD[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]序列（基于[/font][font=Calibri]pGEX-4T1[/font][font=宋体]载体）[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]ATG TCCCCTATAC TAGGTTATTG GAAAATTAAGGGCCTTGTGC AACCCACTCG ACTTCTTTTGGAATATCTTG AAGAAAAATA TGAAGAGCATTTGTATGAGC GCGATGAAGG TGATAAATGGCGAAACAAAA AGTTTGAATT GGGTTTGGAGTTTCCCAATC TTCCTTATTA TATTGATGGTGATGTTAAAT TAACACAGTC TATGGCCATCATACGTTATA TAGCTGACAA GCACAACATGTTGGGTGGTT GTCCAAAAGA GCGTGCAGAGATTTCAATGC TTGAAGGAGC GGTTTTGGATATTAGATACG GTGTTTCGAG AATTGCATATAGTAAAGACT TTGAAACTCT CAAAGTTGATTTTCTTAGCA AGCTACCTGA AATGCTGAAAATGTTCGAAG ATCGTTTATG TCATAAAACATATTTAAATG GTGATCATGT AACCCATCCTGACTTCATGT TGTATGACGC TCTTGATGTTGTTTTATACA TGGACCCAAT GTGCCTGGATGCGTTCCCAA AATTAGTTTG TTTTAAAAAACGTATTGAAG CTATCCCACA AATTGATAAGTACTTGAAAT CCAGCAAGTA TATAGCATGGCCTTTGCAGG GCTGGCAAGC CACGTTTGGTGGTGGCGACC ATCCTCCAAA ATCGGATCTGGTTCCGCGTG GATCCCCGGA ATTCCCGGGTCGACTCGAGC GGCCGCATCG TGACTGA[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签作用机理[/font][/font][/b][font=宋体]① 应用于原核表达；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]● 作为一种高度可溶的蛋白，能增加外源蛋白的可溶性[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]● 在大肠杆菌中大量表达，起到提高表达量的作用[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]② [/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白可在温和、非变性条件下洗脱，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③ [/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力，因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂（如：盐酸胍或尿素等）；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④ [/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合蛋白已经成为分子生物学领域的基本工具，其广泛用于研究蛋白质[/font][font=Calibri]-DNA[/font][font=宋体]及蛋白质[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]蛋白质间的相互作用，也可作为抗原用于免疫学或疫苗的研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白注意事项[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]① 当融合[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]序列的表达载体表达时，部分截短的蛋白产物很容易聚集，可能的原因为：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签二聚化[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签与目标蛋白之间存在内在易断的连接区域[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白的[/font][font=Calibri]mRNA[/font][font=宋体]与核糖体结合不稳定共同造成[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]② [/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]二聚体的每一个亚基含有[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]个暴露的半胱氨酸残基，会导致很明显的氧化性聚合；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③ 相对于小分子的短肽标签，[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签融合表达时，需要更多的代谢能量，增加了细胞代谢的负担；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④ [/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签与谷胱甘肽琼脂糖树脂的结合很慢，大规模纯化时需要更多的时间上样；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]⑤ [/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]GST[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]标签融合蛋白[/b][/url]的分子量可能会影响亲和树脂的载量，导致[/font][font=Calibri]80kDa[/font][font=宋体]以上的大分子蛋白质纯化回收率较低。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以查看义翘神州[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白纯化[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression[/font][/font]

[font=宋体][b][font=宋体]抗绿色荧光蛋白[/font][font=Calibri](GFP)[/font][font=宋体]抗体，小鼠单克隆[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]Green fluorescent protein[/font][font=宋体]，绿色荧光蛋白）标签含有 [/font][font=Calibri]238 [/font][font=宋体]个氨基酸，分子量约为 [/font][font=Calibri]26.9 KDa[/font][font=宋体]，最先是 [/font][font=Calibri]1962 [/font][font=宋体]年下村修等在维多利亚多管发光水母（[/font][font=Calibri]Aequorea victoria[/font][font=宋体]）中发现的。[/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]标签在紫外线的照射下会发出绿色的荧光，而且与靶蛋白融合后不会显著地影响天然蛋白质的组装和功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]凭借[/font] [font=Calibri]10 [/font][font=宋体]多年在蛋白表达和抗体制备领域的技术积淀，义翘神州自主研发了多款抗 [/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]标签抗体。高品质的抗 [/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]标签抗体可用于检测 [/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]（绿色荧光蛋白），满足多种应用的需求，包括蛋白印迹（[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]）、[/font][font=Calibri]ELISA [/font][font=宋体]或免疫沉淀（[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]特异性：单克隆抗绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）识别[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端和[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]27 kDa[/font][font=宋体]）标记的融合蛋白。抗体与原核表达载体表达的融合蛋白反应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫原：[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]标记的融合蛋白[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]生化[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]生理作用：[/font][font=Calibri]GFP ([/font][font=宋体]绿色荧光蛋白[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]是一种用于检查基因表达和蛋白定位的报告分子。[/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]用紫外线[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]蓝光激发时会发出绿光。[/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]荧光保持稳定，可在活细胞中进行无创检测。[/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]被认为是监测几种活细胞或生物体动态过程的工具。当在真核细胞或原核细胞中表达并被蓝光或紫外光照射时，[/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]产生明亮的绿色荧光。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]外形：[/font][font=Calibri]0.01 M [/font][font=宋体]磷酸盐缓冲液 [/font][font=Calibri](pH 7.4)[/font][font=宋体]，含 [/font][font=Calibri]15 mM [/font][font=宋体]叠氮化钠[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]储存及稳定性：如需连续使用，请在[/font][font=Calibri]2-8[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]下储存，最长一个月。若需延长储存时间，可将溶液分装并冷冻。不建议反复冻融。如果长期储存时出现轻微浑浊，请在使用前通过离心澄清溶液。若工作稀释样品在[/font][font=Calibri]12[/font][font=宋体]小时内未使用完，则应丢弃。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]该如何选择表达克隆的标签[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、首先，需要确定融合标签的目的[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白纯化[/font] [font=宋体]：标签的普遍用途是蛋白纯化。小分子[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]常被用于细胞内源蛋白的纯化。[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]也广泛应用于大肠杆菌的蛋白纯化。可是哺乳动物细胞中因非分泌蛋白自身存在高组氨酸背景，因此极少使用[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]检测：若需要做[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]实验来检测细胞裂解物中蛋白的表达，你可以选择有匹配的抗体的小分子标签。[/font][font=Calibri]FLAG Tag[/font][font=宋体]以其分子量小以及拥有许多与之匹配的商业化的抗体等优势，成为[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]实验中常用的[/font][font=Calibri]Tag[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫沉淀反应：[/font][font=Calibri]FLAG Tag[/font][font=宋体]其分子量小以及拥有大量相匹配的商业用抗体等优势成为免疫沉淀反应中最常用的[/font][font=Calibri]Tag. [/font][font=宋体]其他常用的标签有：[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]cMyc.[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫共沉淀。首先，裂解您的样本，以释放蛋白。向试管中添加裂解液的同时，加入靶向融合标签的抗体，抗体会识别融合标签。然后抗体与蛋白[/font] [font=Calibri]A [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]G [/font][font=宋体]偶联微珠结合，后者拉出您的目标蛋白，以及与之复合的其他蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]活细胞成像：荧光蛋白（[/font][font=Calibri]Fluorescent Proteins, FPs[/font][font=宋体]）是活细胞成像常用的标记蛋白。其中最常用的是绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）和它的衍生物（[/font][font=Calibri]CFP, YFP, etc.[/font][font=宋体]），以及一些红色变体，如[/font][font=Calibri]dTomato[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]mCherry.[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、考虑融合标签的影响[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]任何一类标签处于氨基酸序列的任一位置，都具有影响目的蛋白表达或功能的可能性。最主要原因是标签可能会干扰蛋白的正确折叠，致使目的蛋白失活或形成包涵体。其次，标签可能会中断亚细胞定位信号，这种情况下，蛋白能够正确翻译和折叠，但在细胞内所处的位置是错误的。因此，您需要知道添加的标签对目的蛋白的表达是否有影响。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、考虑是在[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记的选择还需要根据蛋白结构、定位等特性。然而，倘若你没有确切的蛋白结构，或蛋白功能域图谱，建议分别构建[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端标记和[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记的表达克隆，以检测哪个更有效。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service][b]重组蛋白表达技术[/b][/url]现已在生物学各个具体领域应用广泛，尤其是蛋白质的大规模生产和体内功能研究都需要应用重组蛋白表达载体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]详情可以关注义翘神州：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

[font=宋体][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白纯化原理：[/font][/font][font=宋体][font=宋体]谷胱甘肽[/font][font=Calibri]-S-[/font][font=宋体]转移酶[/font][font=Calibri](GST)[/font][font=宋体]是一个由[/font][font=Calibri]211[/font][font=宋体]个氨基酸组成的大小为[/font][font=Calibri]26kDa[/font][font=宋体]序列，它是另一种广泛使用的可提高靶蛋白的溶解度亲和标签。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签与固定化的谷胱甘肽具有亲和力，常用于原核表达。它可以与一个蛋白的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端融合。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]谷胱甘肽亲和是一种有效的一步纯化[/font][font=Calibri]GST([/font][font=宋体]谷胱甘肽[/font][font=Calibri]S-[/font][font=宋体]转移酶[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]标签蛋白的方法。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]可作为一种可溶性蛋白在大肠杆菌细胞质中大量表达，并具有完全的酶活性。此外，许多在大肠杆菌中表达时不溶的真核蛋白，在表达为[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白时被证明至少部分可溶。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]谷胱甘肽[/font][font=Calibri]S-[/font][font=宋体]转移酶（[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]）的应用：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]谷胱甘肽[/font][font=Calibri]S-[/font][font=宋体]转移酶（[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]）是具有多基因、多功能的[/font][font=Calibri]II[/font][font=宋体]相代谢酶家族成员，广泛存在于动物、植物、昆虫、真菌、酵母和各种细菌中。能够催化还原型谷胱甘肽与各种亲电化合物进行亲核加成反应，从而使其极性提高，易于从尿液中排出。因此，[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]家族蛋白是一类在外源化合物生物转化、保护机体免受过氧化作用损害和药物代谢过程中的一类极为重要的多功能蛋白质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在生物研究领域，来源于日本血吸虫的谷胱甘肽巯基转移酶（[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]）标签，是目前应用最为广泛的融合标签之一。融合标签技术是利用[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]重组技术将某种标签编码基因融合于目的基因的[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]′端或[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]′端，再通过适宜的宿主来表达融合蛋白。表达的融合蛋白可以通过其融合标签与包被在固相基质上的特异性配基结合，从而纯化出融合蛋白。[/font][font=Calibri]1988[/font][font=宋体]年，[/font][font=Calibri]Smith[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Johnson[/font][font=宋体]首次提出[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合蛋白的亲和纯化法，此后广泛使用。目前，国内外纯化[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合蛋白的主要方法是亲和纯化法。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白亲和纯化，其配基通常是[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]的底物谷胱甘肽（[/font][font=Calibri]GSH[/font][font=宋体]），通过酶与底物的特异性结合来实现[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]蛋白的分离纯化。其原理是：在固相基质上通过巯基结合一个谷胱甘肽，然后利用谷胱甘肽与谷胱甘肽巯基转移酶之间的特异性作用力，使得带[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签的融合蛋白与基质上的谷胱甘肽结合，达到分离纯化的目的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]自[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合蛋白亲和纯化法问世以来，[/font][font=Calibri]GST-pull down[/font][font=宋体]技术也随即成为一种研究蛋白质与蛋白质之间相互作用的热门手段。该技术的原理是：利用重组技术将诱饵蛋白与[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签融合表达，融合表达的蛋白经纯化后与待测蛋白共同孵育，并用[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]琼脂糖凝胶或[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]琼脂糖磁珠将其分离下来，再通过[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]鉴定待测蛋白与诱饵蛋白的相互作用。这种方法简单易行，操作简单。此外，[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签还有助于对目标蛋白的检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression]GST[/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression]标签蛋白纯化[/url]常见问题解答：[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]为什么使用[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签来表达和生产蛋白？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在蛋白[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端添加[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签有利于通过[/font][font=Calibri]GSH[/font][font=宋体]亲和树脂对其进行检测、分离和纯化。更重要的是，由于[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]是具有很好的溶解性的高表达的蛋白，将难以表达的蛋白与[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签相融合，有时可以显著提高重组蛋白的表达量和溶解性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]纯化后如何裂解[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在某些应用（如蛋白的结晶）中需要去除[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签。为了裂解[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签，需要在标签和蛋白之间设计一个蛋白酶裂解位点。在 [/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签后面的[/font][font=Calibri]EK[/font][font=宋体]裂解位点[/font][font=Calibri](GST-EK[/font][font=宋体]位点[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]蛋白结构[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]可以使[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签和裂解位点完全去除，在[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签的特异裂解后不留下任何额外的氨基酸。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签纯化蛋白的优劣势？[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优势：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]适用范围广，可在不同宿主中表达；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]增强外源蛋白可溶性；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]可用不同的蛋白酶进行去除；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]有助于保持蛋白的抗原性与生物活性，提高外源蛋白的稳定性；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5. [/font][font=宋体]特异性好，纯化方便且温和。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]劣势：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]分子量较大，可能会影响蛋白质的功能和下游实验；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]仅能纯化可溶性蛋白，若蛋白不可溶，则很难用变性的方法纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：义翘神州[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]硫氧还蛋白（[/font][font=Calibri]Thioredoxins[/font][font=宋体]）是一系列广泛存在于生物体内的氧化还原酶，它能通过置换硫代二硫化物来减少二硫键的结合。常用作融合表达标签的硫氧还蛋白[/font][font=Calibri]A(TrxA), [/font][font=宋体]分量为[/font][font=Calibri]11.6kDa[/font][font=宋体]，来源于大肠杆菌。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]TrxA[/font][font=宋体]标签最独特的优点是它的热稳定性。[/font][font=Calibri]TrxA[/font][font=宋体]本身不作为亲和标签来进行重组蛋白优化，而是通过在高温条件下将杂蛋白变性去除而重组蛋白得以保存。[/font][font=Calibri]TrxA[/font][font=宋体]也具有极好的促溶效率，用作促溶标签时可将重组蛋白的可溶性表达从[/font][font=Calibri]12%[/font][font=宋体]提高至[/font][font=Calibri]95%[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]下面是针对[/font][font=Calibri]trx[/font][font=宋体]标签常见问答解析：[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri]trx[/font][font=宋体]标签蛋白序列[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]MSDKIIHLTD DSFDTDVLKA DGAILVDFWA EWCGPCKMIA PILDEIADEY QGKLTVAKLN IDQNPGTAPK YGIRGIPTLL LFKNGEVAAT KVGALSKGQL KEFLDANLAG SGSGHMHHHH HHSSGLVPRG[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②带有[/font][font=Calibri]trx[/font][font=宋体]标签会不会影响蛋白的抗原性[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]有可能的，[/font][font=Calibri]trx[/font][font=宋体]标签是比较大的融合标签，有[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]多[/font][font=Calibri]KDa[/font][font=宋体]，非常有可能改变蛋白的抗原决定簇。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]一般为了不影响蛋白的功能，会在[/font][font=Calibri]trx[/font][font=宋体]标签和目标蛋白之间加一个酶切位点，比如肠激酶的位点[/font][font=Calibri]DDDDK[/font][font=宋体]，把[/font][font=Calibri]trx[/font][font=宋体]标签去除掉。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③[/font][font=Calibri]TRX[/font][font=宋体]标签蛋白怎么纯化[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]一般这个载体中都会有[/font][font=Calibri]His [/font][font=宋体]标签，直接用镍柱纯化即可[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④常见的[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]有哪些？有什么特点？[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]常见的蛋白标签有[/font][font=Calibri]His-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]FLAG-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HA-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/myc-tag-protein-production][b]Myc-Tag[/b][/url][/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/sumo-tag-purification][b]SUMO-Tag[/b][/url][/font][font=宋体]……[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]His-Tag[/b][/url][/font][/font][font=宋体]主要应用：蛋白纯化优选，也可用于检测。[/font][font=宋体]特点：[/font][font=宋体]? 分子量小，不影响目的蛋白的可溶性、结构和功能。[/font][font=宋体][font=宋体]? 可在非离子型表面活性剂存在[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时表现突出。[/font][/font][font=宋体]? 可应用于多种表达系统，纯化的条件温和。[/font][font=宋体]? 可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。[/font][font=宋体]? 免疫原性相对较低。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]FLAG-Tag[/b][/url][/font][/font][font=宋体][font=宋体]主要应用：[/font] [font=宋体]广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域，在真核表达系统中表达效率更高。[/font][/font][font=宋体]特点：[/font][font=宋体]? 分子量小，不影响融合蛋白功能，比同类标签更具亲水性。[/font][font=宋体][font=宋体]? 目的蛋白可直接通过[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]标签进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白且纯化效率高。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 可以被抗[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]抗体所识别，便于通过[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]等方法对含有[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]标签的融合蛋白进行检测、鉴定。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 融合在目的蛋白[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端的[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]标签，其可以被肠激酶切除（[/font][font=Calibri]DDDK[/font][font=宋体]），从而得到特异的目的蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]更多关于蛋白标签详情可以参看：[/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][u][font=宋体][color=#0000ff][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/color][/font][/u][/url][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=宋体] [/font]

[font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]（1）蛋白标签是什么？[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]一些特定的肽类和蛋白质被广泛用于生产重组蛋白，与目的蛋白融合表达，以便于目的蛋白的表达、检测和纯化。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]（2）常见的蛋白标签有哪些？[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]①His。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]His是由组氨酸残基组成的融合标签，可以插在目的蛋白的C端或N端。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]His-tag主要用于重组蛋白的分离纯化。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]His-tag主要特点：分子量小，对蛋白结构影响较小；可以在变性条件下进行纯化；可用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用；免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物制备抗体；可以与其它亲和标签一起构建双亲和标签。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]②Flag。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]Flag-tag为编码8个氨基酸的亲水性多肽。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]Flag-tag主要用于提高蛋白表达量。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]Flag-tag主要特点：不会与目的蛋白相互作用；不会影响目的蛋白的功能和性质；融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除，从而得到特异的目的蛋白。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]③MBP。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]MBP标签大小为40kD。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]主要用于增加原核表达中融合蛋白的溶解性。然而，由于MBP-tag过大，因此，需要用位点专一的蛋白酶切割标签。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]④HA。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]HA标签蛋白主要由9个氨基酸组成。主要用于Anti-HA抗体检测和ELISA检测。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]⑤Myc。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]Myc标签蛋白是一个含11个氨基酸的小标签。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]Myc-tag主要应用于WB检测、免疫沉淀和流式细胞计中，可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]⑥GST。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]GST标签蛋白大小为26KD。主要应用在原核表达中。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]GST-tag主要特点：增加外源蛋白的可溶性；可以在大肠杆菌中大量表达，提高蛋白的表达量。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]⑦eGFP/eCFP/eYFP/mCherry。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]这几类主要是荧光标签，即绿色荧光蛋白/黄绿色荧光蛋白/黄绿色荧光蛋白/红色荧光蛋白。主要用于蛋白的定位和跟踪。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]⑧Strep-II。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]Strep-II主要由8个氨基酸组成，其分子量很小，不会影响融合蛋白的表位和结构域。主要用于蛋白的分离纯化。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]⑨Avi。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]Avi-tag标签蛋白是一个由15个氨基酸组成的短肽。可用于蛋白的分离纯化和蛋白质相互作用研究。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]⑩SUMO。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]SUMO标签蛋白是一种小分子泛素样修饰蛋白。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]SUMO可作为重组蛋白表达的融合标签和分子伴侣，不但可以提高融合蛋白的表达量。由于其具有抗蛋白酶水解，促进靶蛋白正确折叠，提高重组蛋白的可溶性。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]此外，SUMO还可以用于完整地切除标签蛋白，因此，SUMO标签也常用于和其他标签一起应用，作为特异酶切水解位点。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]?荧光素酶。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]常用的荧光素酶也属于标签蛋白，包括萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。[/color][/size][/font]

[font=宋体][font=宋体]融合标签是已知的蛋白或多肽[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]可融合到目标蛋白上。在重组蛋白中，常常将目的蛋白末端与一些标签进行融合表达，这是为什么呢？常见的融合标签有哪些呢？它们都有什么区别呢？下面是[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]融合标签蛋白纯化[/b][/url]常见问题解析分享：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]：什么是融合标签？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]：融合标签是指利用 [/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]体外重组技术，在目的蛋白 [/font][font=Calibri]N [/font][font=宋体]端或 [/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]端进行融合表达的特定蛋白、多肽或寡肽标签。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]：融合标签有什么作用？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]：重组蛋白通过融合标签与包被在固相基质上的特异配基结合，使重组蛋白定向固定并得以纯化，大大简化了重组蛋白的检测，同时既能保留天然蛋白的大部分结构，又能实现增加溶解度，防降解，促进分泌，便于纯化等功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]：融合标签的分子量和功能有关吗？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]：蛋白融合标签的分子量越大，对蛋白质本身的功能影响越大，所以大分子融合标签一般只用于检测或蛋白纯化等。常见的小分子量的融合标签，因其具有很多商品化的标签抗体，可以节省使用者制备目的蛋白的单克隆抗体的时间与成本。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]：是否所有的融合标签都需要切除？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]：融合标签较小，免疫原性也很弱，一般不需要切除，对蛋白质的后续应用和研究不会产生影响。但是有些大标签是需要切除的，例如：[/font][font=Calibri]Dsb [/font][font=宋体]蛋白、[/font][font=Calibri]FkpA [/font][font=宋体]蛋白、[/font][font=Calibri]GST [/font][font=宋体]蛋白、[/font][font=Calibri]SUMO [/font][font=宋体]标签等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]为了便于将重组蛋白的融合标签去除，在设计构建载体时需要在标签蛋白和目的蛋白之间加上蛋白酶识别位点，常用的蛋白酶位点有：[/font][font=Calibri]HRV 3C [/font][font=宋体]蛋白酶切位点、[/font][font=Calibri]TEV [/font][font=宋体]蛋白酶切位点、肠激酶切位点、[/font][font=Calibri]SUMO [/font][font=宋体]蛋白酶切位点等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]：融合标签加在 [/font][font=Calibri]N [/font][font=宋体]端或 [/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]端，有什么区别？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]：蛋白融合标签对于 [/font][font=Calibri]N [/font][font=宋体]端或 [/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]端的选择性对重组蛋白的结构与特性会造成一定的影响。例如，对于较难表达或较容易降解的蛋白，可将融合标签选择在 [/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]’ 端，可以提高重组蛋白的稳定性，也可减小对重组蛋白的免疫原性。但是重组蛋白为分泌蛋白，在其分泌到高尔基体的过程中，处于 [/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]’ 端的融合标签会随着 [/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]’ 端信号肽的切除而切除，从而失去作用。在目的蛋白结构未知的情况下，可以分别于两端构建标记的表达克隆，以确定哪个更有效。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以参看义翘神州蛋白标签：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

[b][font=宋体]前言[/font][/b][font=宋体][color=#060607][font=宋体]随着基因组学、蛋白质组学和生物信息学的发展，重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]技术的使用已经可以不需要预先了解蛋白质的细胞位置或功能，就能评估任何感兴趣的蛋白质。同时使用亲和标签和重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]技术可以简便地修改蛋白质，从而高效地识别、生产和从宿主系统中分离出来。[/font][/color][/font][font=Calibri][color=#060607][font=Helvetica]为提高表达效率和纯化产量，研究者们开发了多种[/font][/color][/font][font=宋体][color=#060607]亲和[/color][/font][font=Calibri][color=#060607][font=Helvetica]标签，这些标签可以增加[/font][/color][/font][font=宋体][color=#060607]蛋白[/color][/font][font=Calibri][color=#060607][font=Helvetica]表达产量、影响溶解度和天然折叠，并通过结合亲和技术提高纯化产量。[/font][/color][/font][b][font=Calibri] [/font][font=Calibri][font=宋体]亲和标签的选择与应用[/font][/font][/b][font=宋体][color=#060607][font=宋体]亲和标签是指在重组蛋白的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端添加的一段短肽，可以促进[/font][/color][/font][font=Calibri][color=#060607][font=Helvetica]蛋白质检测、表征和纯化。例如，[/font]c-myc[font=Helvetica]、[/font][/color][/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/ha-tag-protein-production][u][font=Calibri][color=#0000ff]HA[/color][/font][/u][/url][font=Calibri][color=#060607][font=Helvetica]和[/font][/color][/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][u][font=Calibri][color=#0000ff]FLAG[/color][/font][/u][/url][font=Calibri][color=#060607][font=Helvetica]等标签主要用于蛋白质检测，而[/font]polyArg[font=Helvetica]和[/font][font=Calibri]polyHis[/font][font=Helvetica]等亲和标签则主要用于蛋白质的纯化。亲和层析技术（如[/font][font=Calibri]IMAC[/font][font=Helvetica]）和[/font][font=Calibri]Strep-tag[/font][font=Helvetica]系统等，都是基于亲和标签的纯化技术，它们能够从宿主系统中[/font][/color][/font][font=宋体][color=#060607]高效地[/color][/font][font=Calibri][color=#060607][font=Helvetica]纯化目标蛋白。[/font][/color][/font][b][font=Calibri] [/font][font=宋体]亲和[/font][font=Calibri][font=宋体]标签的创新与优化[/font][/font][/b][font=Calibri][color=#060607][font=Helvetica]为了克服单一亲和标签的局限性，研究者们开发了串联亲和纯化（[/font]TAP[font=Helvetica]）和双标签方法。这些方法通过结合不同的亲和标签，提供了多种纯化策略，从而增加了标签的多功能性和下游应用的灵活性。[/font][/color][/font][font=宋体][color=#060607]如[/color][/font][font=宋体][color=#060607]双标签构建体[/color][/font][font=Helvetica][color=#060607][font=Calibri]GFP-His[/font][/color][/font][sub][font=Helvetica][color=#060607][font=Calibri]6[/font][/color][/font][/sub][font=宋体][color=#060607]，提供了使用体内荧光显微镜或体外技术的额外检测方法。除了使用[/color][/font][font=Helvetica][color=#060607] [font=Calibri]GFP [/font][/color][/font][font=宋体][color=#060607]荧光标准品和既定方案允许估计重组体外，[/color][/font][font=Helvetica][color=#060607][font=Calibri]GFP[/font][/color][/font][font=宋体][color=#060607]及其变体的内在荧光已被用于通过凝胶内荧光技术快速评估阳性克隆。[/color][/font][b][font=Calibri] [/font][font=宋体]亲和标签的去除[/font][/b][font=宋体][color=#060607]亲和标签的存在可能影响蛋白质的结构或生物功能，因此[/color][/font][font=Calibri][color=#060607][font=Helvetica]为了保持蛋白质的天然结构，需要去除[/font][/color][/font][font=宋体][color=#060607]亲和[/color][/font][font=Calibri][color=#060607][font=Helvetica]标签。特定的蛋白酶如肠激酶、[/font]SUMO[font=Helvetica]蛋白酶、烟草蚀纹病毒（[/font][font=Calibri]TEV[/font][font=Helvetica]）蛋白酶和凝血酶等，可以用于在特定序列处切割并去除[/font][/color][/font][font=宋体][color=#060607]亲和[/color][/font][font=Calibri][color=#060607][font=Helvetica]标签。[/font][/color][/font][b][font=Calibri] [/font][font=Calibri][font=宋体]结论[/font][/font][/b][font=Calibri][font=宋体]除了[/font][/font][font=宋体]对[/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/affinity-tag][u][font=Calibri][color=#0000ff][font=宋体]亲和标签[/font][/color][/font][/u][/url][font=宋体]自身进行优化[/font][font=Calibri][font=宋体]以外，标签组合使用、简化纯化步骤、降低纯化成本、扩大纯化规模等，都[/font][/font][font=宋体]需要再[/font][font=Calibri][font=宋体]使用亲和标签融合技术时不断[/font][/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri][font=宋体]改进与优化[/font][/font][font=宋体][font=宋体]。亲和标签和亲和纯化技术的发展不仅加速了高产量优质蛋白的获取，而且促进了新药物靶点和治疗方法的发现，方便我们更深入地了解蛋白质结构[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]功能关系。[/font][/font][font=宋体][color=#060607] [/color][/font][font=Calibri][color=#060607] [/color][/font][font=Calibri][color=#060607][font=宋体]参考文献：[/font][/color][/font][font=Calibri][color=#212121]Young CL, Britton ZT, Robinson AS. Recombinant protein expression and purification: a comprehensive review of affinity tags and microbial applications. [/color][/font][i][font=Calibri][color=#212121]Biotechnol J[/color][/font][/i][font=Calibri][color=#212121]. 2012 7(5):620-634. doi:10.1002/biot.201100155[/color][/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][b][font=宋体]什么是[/font][font=Calibri]fc[/font][font=宋体]融合蛋白？[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]Fc[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]融合蛋白[/b][/url]是一种由免疫球蛋白（如[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]等）的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段与目标蛋白序列融合而成的新型重组蛋白。通过将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域与其他蛋白质或肽段融合，可以赋予这些蛋白质或肽段新的特性和功能，同时利用[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域的稳定性和免疫系统的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体相互作用，增强融合蛋白的稳定性和半衰期。例如，普通重组[/font][font=Calibri]IL-2[/font][font=宋体]的体内半衰期较短，只有[/font][font=Calibri]6.9[/font][font=宋体]分钟，这限制了其在体内的持续作用时间。然而，通过与免疫球蛋白的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段融合，重组[/font][font=Calibri]IL-2/Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在体内半衰期延长了近[/font][font=Calibri]700[/font][font=宋体]倍，从而使其能够在体内更长时间地发挥作用。此外，延长半衰期还可以降低药物的剂量和频率，减少潜在的副作用和毒性。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白有哪些？[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]是一种由至少两个结构域组成的蛋白，这些结构域由被连接起来的独立基因编码，因此能够作为一个单元被转录和翻译，产生单克隆多肽。现在几乎所有的重组蛋白都是利用融合结构域制备，也被称为[/font][font=宋体]“标签”（参阅重组蛋白标签的完整列表）。因此，融合蛋白又称融合标签蛋白或嵌合蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]大体上有两种类型的融合蛋白：第一种是由两个蛋白或蛋白亚单位端对端融合，通常由一个[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]连接，第二种是来自两个供体的氨基酸穿插在融合蛋白产物中。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白应用：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]融合蛋白最重要的三个用途是：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]作为克隆基因纯化的辅助手段[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]作为报告的表达水平[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]作为组织化学标签，使蛋白质在细胞、组织或生物体中的位置可视化[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白在纯化中可以通过亲和层析简单方便地纯化，如葡萄球菌蛋白[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]、谷胱甘肽[/font][font=Calibri]-S-[/font][font=宋体]转移酶[/font][font=Calibri](gst)[/font][font=宋体]、麦芽糖结合蛋白[/font][font=Calibri](mbp)[/font][font=宋体]和纤维素结合蛋白。 重组融合蛋白最常用作报告构建体的融合伙伴，包括 β[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]半乳糖苷酶、荧光素酶和绿色荧光蛋白 [/font][font=Calibri](GFP)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]荧光融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在融合蛋白中，最多的一类称为荧光蛋白，如绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）、橙色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]OFP[/font][font=宋体]）和黄色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]YFP[/font][font=宋体]）。 绿色荧光蛋白 [/font][font=Calibri](GFP) [/font][font=宋体]等荧光蛋白能够直接观察动态细胞内过程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）是一种荧光蛋白，最初是从水母维多利亚发光管中分离出来的。 与荧光素酶不同，[/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]具有不需要任何底物、荧光素以及 [/font][font=Calibri]ATP[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]O2 [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]Mg2+ [/font][font=宋体]的优势。 [/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]在被蓝光或紫外线激发时会发出绿光，在许多情况下可用于活的、完整的细胞和生物体，从而确保 [/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]作为自发荧光蛋白的功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]融合蛋白标签[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在融合标签中，既有短序列（如[/font] [font=Calibri]PolyHis[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]PolyArg[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]c-Myc[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Streptag [/font][font=宋体]等），也有大蛋白（[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MBP [/font][font=宋体]等）。 在许多情况下，短序列不会影响分子的三级结构及其生物学特性，而大融合分子更常用于增强所需蛋白质的溶解度。 与短序列标签不同，需要从重组构建体中去除大的融合标签。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]有许多融合标签，既包含经过充分验证的标签，也包含最近开发的具有各种特性和不同优缺点的标签。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font]

北京易斯威特生物医学科技有限公司产品介绍 铁蛋白（FER）检测试剂盒 （胶体金法）1.国内第一家免疫层析法检测FER的产品。2.本产品应用世界上最先进的单克隆抗体技术结合胶体金（纳米金）免疫层析技术，以双抗体夹心法快速定性检测人血清，血浆中的铁蛋白，适用于急性贫血，肝脏损伤等相关疾病的辅助诊断3.最快速准确的辅助诊断方法。4.血清铁蛋白是血液去铁蛋白和铁核心Fe3+形成的复合物。是检查体内铁缺乏的最灵敏的指标。血清铁蛋白测定在临床上常用于缺铁性贫血的诊断。简单 便捷 快速 灵敏 环保 肌红蛋白/肌酸激酶/心肌肌钙蛋白I，心梗三项检测试剂盒（胶体金法）1.本产品应用世界上最先进的单克隆抗体技术结合胶体金（纳米金）免疫层析技术，以双抗体夹心法快速定性检测人血清，血浆中的肌红蛋白，肌酸激酶，心肌肌钙蛋白I检测，用于临床快速诊断急性心肌梗塞（AMI）.2.最快速准确的辅助诊断方法。3.肌红蛋白：是心肌梗死的标志物，增高表示冠状动脉堵塞引起心肌严重缺血造成心肌梗死；4.肌钙蛋白：是一种心肌蛋白，升高见于心肌损伤，多见于心肌梗死，也见于心肌炎和心肺复苏后患者，特异性较高，阳性的话一般可确诊心肌损伤，阴性的话不能排除，因为肌钙蛋白的升高出现在心肌梗塞3-6小时之后，之前可能出现阴性。肌酸激酶敏感性较高，特异性较低，升高也出现在心梗3-8小时之后。5.肌酸激酶：主要存在于骨骼肌和心肌，在脑组织中也存在，是参与体内的能量代谢的一种酶。在临床上主要用于诊断心肌梗塞。心肌梗塞患者发病后2－4小时，血液中此酶活动即开始升高。比血清中谷草转酸酶和乳酸脱氢酶的活力变化都出现得早。 简单 便捷 快速 灵敏 环保 C反应蛋白（CRP）检测试剂盒（胶体金法）1.国内第一家免疫层析法检测CRP的产品。2.本产品应用世界上最先进的单克隆抗体技术结合胶体金（纳米金）免疫层析技术，以双抗体夹心法快速定性检测人血清，血浆中的C反应蛋白，适用于感染，炎性疾病，组织损伤，手术创伤及组织坏死等病变情况的辅助诊断3.最快速准确的辅助诊断方法。4.是一种能与肺炎球菌C多糖体反应形成复合物的急性时相反应蛋白。可用于细菌和病毒感染的鉴别诊断简单 便捷 快速 灵敏 环保

[font=宋体]重组蛋白在生物医药领域的应用越来越广泛，然而，许多研究者在使用过程中可能会遇到各种问题。本文将对重组蛋白常见问题进行解析，包括其制备、纯化、保存以及应用等方面的问题，为您提供权威的解答和全面的指导。通过阅读本文，您将能够更好地理解和应用重组蛋白技术，提高研究工作的效率和准确性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]如何生产重组蛋白？真核表达（酵母、昆虫和哺乳动物细胞）与大肠杆菌表达相比有什么优势？[/font][/b][/font][font=宋体]我们的大多数重组蛋白都是在真核系统中生产的，分析证书中会为您提供有关单个产品如何生产的具体信息。真核生物作为表达系统有几个优势。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]真核生物本身很少分泌原生蛋白，但却能分泌重组蛋白。因此，真核生物系统通常是分泌表达重组蛋白然后进行纯化。在大肠杆菌中制造的重组蛋白通常被定位在包涵体中。从包涵体中纯化重组蛋白需要在苛刻的条件下进行，然后再进行重折叠处理。这些苛刻的处理会对蛋白质的功能产生负面影响。[/font][font=宋体]真核生物分泌的重组蛋白由高尔基体处理，因此可以进行翻译后修饰。这些修饰包括糖基化、磷酸化和硫酸化。有许多蛋白质需要经过修饰才能发挥功能、正常折叠或溶解。[/font][font=宋体]真核生物没有像大肠杆菌那样的细菌细胞壁，因此不存在可影响目标系统炎症反应的内毒素（脂多糖）。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]当我打开小瓶时，什么也没看到。我怎么知道小瓶里有蛋白质？[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]打开小瓶之前要先离心！我们的大多数产品都是用低浓度缓冲液冻干的，因此几微克的产品可能不太明显。我们建议在打开前将小瓶放入微型离心机中离心[/font] [font=Calibri]20-30[/font][font=宋体]秒，以将可能滞留在瓶盖或试管侧面的蛋白质离心到小瓶底部。我们的质量控制程序可确保每小瓶中的产品量正确无误。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]如何复溶冻干粉？重组蛋白[/font][font=Calibri]f[/font][font=宋体]复溶可接受的体积是多少？重组蛋白复溶后的浓度是多少？[/font][/b][/font][font=宋体]请查阅您的货物中包含的分析证书，以了解复溶方法，因为并非所有产品都在相同的条件下进行复溶。一般来说，我们建议使用无菌水进行复溶。将推荐体积的无菌水加入小瓶中，轻轻摇动以完全溶解蛋白质。不要涡旋。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白的浓度取决于复溶体积。例如，如果在[/font][font=Calibri]100μL[/font][font=宋体]载体蛋白溶液中复溶[/font][font=Calibri]10μg[/font][font=宋体]重组蛋白，则浓度为[/font][font=Calibri]10μg/100μL[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]100μg/mL[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]如何储存重组蛋白？重组蛋白的保质期多长？[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]若要长期保存，蛋白溶液应与载体蛋白（如[/font][font=Calibri]0.1% BSA[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]0.1% HSA[/font][font=宋体]）一起以等分的形式保存，并在[/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]下冷冻保存。请注意，每次冷冻[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]解冻循环都可能导致蛋白质发生变性。除非分析证书上另有说明，大多数重组蛋白的保质期为一年。请按照分析证书上的规定在最佳储存条件下保存。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]5. [/font][font=宋体]什么是载体蛋白？[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]载体蛋白（如[/font][font=Calibri]HSA[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]BSA[/font][font=宋体]）用于提高重组蛋白的稳定性，避免产品粘附在瓶壁上。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]6. [/font][font=宋体]如何确定重组蛋白的量？为什么我的检测结果与你们的结果不同？[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]我们通过[/font][font=Calibri]BCA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]和其他方法确定重组蛋白的量。不同的检测方法会产生不同的定量结果。如果您采用不同的检测方法，有时差异会很大。蛋白质在储存过程中也有可能形成聚集体，从而在复溶和离心后造成损失。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]义翘神州使用哪些标签进行蛋白质表达[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]纯化？ 如果我需要去除标签怎么办？[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]常用标签有[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Trx [/font][font=宋体]等。我们的科研人员会根据蛋白质的特性和客户的具体要求，为不同蛋白推荐不同表达[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]纯化标签。一般，[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]是蛋白纯化的首选标签，它也可以与其他标签构建双标签表达。义翘神州提供广泛的蛋白生产和纯化服务，包括标签去除和内毒素去除等服务。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供从基因合成、载体构建到蛋白质表达、纯化的一站式服务，可以根据客户需求，选用不同表达[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]纯化标签、表达宿主等，真正为客户实现深度私人定制。多种纯化体系，为蛋白表达、纯化提供多种选择，帮助客户最大限度提高研究项目的成功率。如果对上述问题还有疑问，可以参看：[url=https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service][b]重组蛋白表达纯化服务[/b][/url]详情[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

铁蛋白，C反应蛋白，心肌三项检测试剂北京易斯威特生物医学科技有限公司产品介绍 铁蛋白（FER）检测试剂盒 （胶体金法）1.国内第一家免疫层析法检测FER的产品。2.本产品应用世界上最先进的单克隆抗体技术结合胶体金（纳米金）免疫层析技术，以双抗体夹心法快速定性检测人血清，血浆中的铁蛋白，适用于急性贫血，肝脏损伤等相关疾病的辅助诊断3.最快速准确的辅助诊断方法。4.血清铁蛋白是血液去铁蛋白和铁核心Fe3+形成的复合物。是检查体内铁缺乏的最灵敏的指标。血清铁蛋白测定在临床上常用于缺铁性贫血的诊断。简单 便捷 快速 灵敏 环保 肌红蛋白/肌酸激酶/心肌肌钙蛋白I，心梗三项检测试剂盒（胶体金法）1.本产品应用世界上最先进的单克隆抗体技术结合胶体金（纳米金）免疫层析技术，以双抗体夹心法快速定性检测人血清，血浆中的肌红蛋白，肌酸激酶，心肌肌钙蛋白I检测，用于临床快速诊断急性心肌梗塞（AMI）.2.最快速准确的辅助诊断方法。3.肌红蛋白：是心肌梗死的标志物，增高表示冠状动脉堵塞引起心肌严重缺血造成心肌梗死；4.肌钙蛋白：是一种心肌蛋白，升高见于心肌损伤，多见于心肌梗死，也见于心肌炎和心肺复苏后患者，特异性较高，阳性的话一般可确诊心肌损伤，阴性的话不能排除，因为肌钙蛋白的升高出现在心肌梗塞3-6小时之后，之前可能出现阴性。肌酸激酶敏感性较高，特异性较低，升高也出现在心梗3-8小时之后。5.肌酸激酶：主要存在于骨骼肌和心肌，在脑组织中也存在，是参与体内的能量代谢的一种酶。在临床上主要用于诊断心肌梗塞。心肌梗塞患者发病后2－4小时，血液中此酶活动即开始升高。比血清中谷草转酸酶和乳酸脱氢酶的活力变化都出现得早。 简单 便捷 快速 灵敏 环保 C反应蛋白（CRP）检测试剂盒（胶体金法）1.国内第一家免疫层析法检测CRP的产品。2.本产品应用世界上最先进的单克隆抗体技术结合胶体金（纳米金）免疫层析技术，以双抗体夹心法快速定性检测人血清，血浆中的C反应蛋白，适用于感染，炎性疾病，组织损伤，手术创伤及组织坏死等病变情况的辅助诊断3.最快速准确的辅助诊断方法。4.是一种能与肺炎球菌C多糖体反应形成复合物的急性时相反应蛋白。可用于细菌和病毒感染的鉴别诊断简单 便捷 快速 灵敏 环保

[b]职位名称：[/b]产品与应用专员（蛋白组学）[b]职位描述/要求：[/b]岗位职责：1、有机质谱与生物质谱产品管理2、售前支持、新产品培训、演示应用和方案开发3、技术研发及项目管理4、成果发布与文献整理任职要求：1、生物、生物化学、组学及蛋白组学类相关专业，硕士及以上学历2、有1年以上经验者优先，硕士应届生亦可3、优秀的执行力、亲和力、表达和抗压能力4、英语六级以上，听说读写优良薪资待遇： 带薪休假+五险一金+定期培训+补贴工作时间：9:00-18:00 周末双休[b]公司介绍：[/b] 华质泰科生物技术（北京）有限公司（简称“华质泰科”或“ASPEC”）是一家为用户提供生物分析和测试仪器及总体解决方案的专业供应商，在制药、食品与药品安全检测、生命科学、临床检验、物证分析、生物预警、环境保护、化工与材料、三方检验等领域提供端到端的领先产品与服务。面对日益增长的、复杂的生物及化学样品分析需求及法规全球化挑战，我们提供全方位的一站式项目咨询、方法开发、人员培训、技术指导、设备提...[url=https://www.instrument.com.cn/job/user/job/position/67932]查看全部[/url]

[font=宋体][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素系统 [/font][font=Calibri](biotin-avidin system[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]BAS)[/font][font=宋体]，是[/font][font=Calibri]70[/font][font=宋体]年代后期应用于免疫学，并得到迅速发展的一种常用的生物反应放大系统。它具有高度特异性、敏感性、稳定性的特点，两者的亲和常数（[/font][font=Calibri]K=1015 mol/L[/font][font=宋体]）比抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体（[/font][font=Calibri]K=105[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]1011 mol/L[/font][font=宋体]）至少高[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]万倍，是目前已知强度最高的非共价作用，这使得生物素标记的蛋白成为研究蛋白质相互作用和筛选抗体或小分子潜力药物的强大工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州开发了丰富的生物素标记蛋白产品，拥有[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]定点标记和化学标记两种类型的生物素标记蛋白，覆盖细胞治疗、抗体药、疫苗等热门靶点。产品具有高批间一致性、高活性等优势，适用于[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Biopanning[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR / BLI[/font][font=宋体]等实验。下面为大家提供生物素蛋白标记常见问题及注意事项：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]生物素蛋白标记常见问题：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、什么是生物素标记蛋白[/font][font=Calibri]?[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在生物化学中，生物素化蛋白质就是生物素与蛋白质等大分子物质共价结合的产物。生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素亲和常数至少比抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体高一万倍[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]是目前发现的自然界中具有最强亲和力的物质。因此，生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素系统已被广泛地应用于免疫诊断技术。生物素化蛋白的出现，也为类似于[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]实验简化了流程，提高了效率。此外，由于生物素的小尺寸（[/font][font=Calibri]MW = 244.31g / mol[/font][font=宋体]），不太影响蛋白质本身的天然功能。所以它同时具备了高亲和力、高特异性、高灵敏度的优点。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、生物素标记蛋白有哪些应用？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]生物素标记蛋白广泛的应用在生物技术的众多领域。如透析，将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附，直接流出，从而与被分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液，[/font] [font=宋体]改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来。怎么释放所需蛋白呢？这需要非常严苛的条件（例如，[/font][font=Calibri]pH=1.5[/font][font=宋体]的 [/font][font=Calibri]GuHCl[/font][font=宋体]），这种极端条件下的蛋白是会变性的。如果需要分离标记的蛋白质，最好用亚氨基生物素标记的蛋白质。该种生物素在碱性条件下与抗生物素蛋白结合紧密，但是在降低[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]以后，亲和力降低。因此亚氨基生物素标记蛋白可以通过降低[/font][font=Calibri]pH([/font][font=宋体]约[/font][font=Calibri]pH=4)[/font][font=宋体]从柱子上释放。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫检测中的应用：在常规[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]原理的基础上，结合生物素[/font][font=Calibri](B)[/font][font=宋体]与亲和素[/font][font=Calibri](A)[/font][font=宋体]间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如抗体等[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗体[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]分子的目的。 这可以用于通过荧光或电子显微镜定位的[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]测定，[/font][font=Calibri]ELISPOT[/font][font=宋体]测定，[/font][font=Calibri]western[/font][font=宋体]印迹和其他免疫分析方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]生物素标记注意事项：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、依抗原或抗体分子所带可标记基团的种类（氨基、醛基或巯基）以及分子的酸碱性，选择相应的活化生物素和反应条件；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、标记反应时，活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当的比例；生物素：[/font][font=Calibri]IgG [/font][font=宋体]用量比[/font][font=Calibri](mg/mg)[/font][font=宋体]宜为[/font][font=Calibri]2:1, IgG[/font][font=宋体]应用浓度[/font][font=Calibri]0.5~5[/font][font=宋体]μ[/font][font=Calibri]g/ml [/font][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]1~3[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]/Ag[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]3~5[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]/Ab[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、为减少空间位阻影响，可在生物素与被标记物之间加入交联臂样结构；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后，不影响后者的免疫活性；标记酶时则结果有不同。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于[url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记蛋白[/b][/url]详情可以参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite[/font][/font][font=宋体] [/font]

[摘要] 质谱对于现代蛋白质化学研究是一项重要的技术。也可用于蛋白组分析,在同一时间监控上千种蛋白的表达情况。首先蛋白质混合物可以用双向凝胶电泳分开，再用质谱及随后的蛋白质数据库检索对单个蛋白进行鉴定和分析。最近几年，质谱领域取得了令人鼓舞的进展，使得全自动、高通量的蛋白检测成为可能。质谱也可以用来分析蛋白的转录后调节以及研究蛋白质复合体。本文将介绍目前蛋白组研究中质谱方法的应用并对其优缺点进行讨论。关键词: 质谱；二维电泳（2-DE）；蛋白组分析MALDI-TOF1 前 言蛋白组学是研究生物特定组织或细胞内表达的所有蛋白质成分，蛋白质组的一门学科。蛋白组分析一般是用双向凝胶电泳（2-DE），质谱（MS）以及数据检索来完成。2-DE要回顾到20世纪70年代初[1],但是用质谱技术对蛋白质进行鉴定和分析是在近十年内才成为可能。其中最重要的一个原因是新的软离子技术即基质辅助激光解析电离（MALDI）[2]和电喷雾电离（ESI）[3，4]技术的发展和应用，以及样本制备技术和质谱仪的发展等。从数据库中获得成指数上升的序列信息也促进了质谱技术的发展。跟转录组学中的全自动DNA微阵列技术相比，蛋白组分析需要更多的手工操作，尤其在2-DE上会出现很多问题[5，6]。尽管存在很多困难，蛋白组学的重要性还是公认的。DNA微阵列技术是建立在对mRNA稳定水平的检测上，然而蛋白组学研究的对象是细胞中最活跃的因子——蛋白质。最近有研究证明，mRNA的表达和蛋白的水平并非具有相关性[7，8]。蛋白质有转录后修饰过程，并会以不同的形式出现。而这些修饰过程是相应的DNA测序技术所不能预测的。质谱技术在蛋白质修饰分析过程中具有重要的作用。2 质谱对蛋白质的检测质谱仪是由离子源，质量分析，离子检测器，以及数据检索等单元组成。首先，被分析的分子在离子源中被离子化，然后在质量分析器里根据不同的质荷比分开，再对分开的离子进行检测。随着MALDI和EIS的出现，质谱技术已经广泛用来分析蛋白质。质量分析器有很多种，最常用的方法是将飞行时间检测器（TOF）与MALDI或三级四级串联质谱仪联用，或者将四级杆-TOF，离子阱等连接到ESI上。蛋白组分析中，可以用两种不同的方法检测电泳分离后的单个蛋白质。最简单的方法叫做肽指纹谱测定（PMF）[9～13]。这个方法是用特殊的酶对2-DE分离后的蛋白质点进行降解，产生的肽从凝胶中分离出来后再用质谱分析和检测肽的分子量。数据库检测能够产生所有蛋白质理论上的PMF，把它们和质谱分析所获得的肽片进行比较就可以得出结果。第二种方法是在质谱仪中把凝胶分离后的肽分解成片段，产生局部的氨基酸序列（序列标签）。那么就可以用分子量或者序列信息进行数据库检索[14，15]。PMF一般用MALDI-TOF来实现，序列标签可以用串联质谱技术MS-MS进行检测[16～18]。用质谱检测蛋白的灵敏性可以精确到飞摩的水平，甚至已有报道其精确度可以达到阿摩水平[19]。3 用MALDI-TOF进行肽指纹谱分析凝胶分离后的蛋白质鉴定以及肽指纹谱分析是目前质谱实验室常规使用的方法。在进行MALDI分析之前需要最优化的凝胶上消化[20～22]和脱盐过程。胰岛素是最常用的凝胶消化酶，因为它在赖氨酸和精氨酸位点能够特异性切割蛋白质，产生分子量在600～2500Da之间的小分子肽，并能够从凝胶上有效的分离出来。MALDI-TOF是质谱技术中相对简单并很容易使用的一种方式，对样本中的盐和其他污染物有很高的耐受性，这点优于ESI。提取的肽片混合物中较小的片段可以直接沉积在靶板上做PMF分析，剩下的样本可以储存起来作为以后的ESI-MS分析。如果经凝胶分离后所有的肽全用来做MALDI分析，那么样本经脱盐以后将会取得更好的结果。脱盐的过程可以用商品化的试剂盒ZipTip(Millipore)，或者在凝胶电泳仪的末端放置一个小的逆向塑料柱来实现[23,24]。PMF中非常重要的一个因素就是质谱测量分子量的准确度[25]。现代的MALDI-TOF仪都具有延迟取样反射器装置，用它们检测的肽段分子量可以精确到10～30ppm。这样的精确度使得4～5个肽段足以清楚的鉴定蛋白质的分子量。MALDI产生的大多数都是单电荷离子，所以它的图谱很容易解释。4 肽质指纹谱分析的自动化为了实现高通量蛋白检测，样本准备，质谱检测，资料分析和数据检索必须实现自动化操作。目前有些实验室用机器人对蛋白质进行自动化取点，凝胶上消化，样本脱盐以及对MALDI平板进行定点测定等。而且，现代化的MALDI-TOF仪完全能够让MALDI检测自动化。资料分析和数据检索过程同样可以自动化。在进行蛋白组分析时，如果在凝胶上不用单个分离就可以对所有蛋白质进行鉴定将是非常具有诱惑力的。为此，研究人员做了很多努力，由Hochestrasser及其同事建立了一套称作分子探测术的方法（molecular scanner）[26，27]。它是将整个2-ＤＥ胶上蛋白质样本同时酶解,并将酶解片段一起原位转移至另一张膜上,再直接用ＭＡＬＤＩ－ ＴＯＦ 质谱对膜上样本进行整体扫描,为实现蛋白质组学研究的自动化、规模化以及临床应用提供了一个崭新的思路和方法。这种思路的优点是显而易见的,不过按照目前的方法,要普及此种技术主要的难点是,质谱扫描一张图谱所需的时间过长,如用0.4ｍｍ的精度扫描一张4ｃｍ×4ｃｍ的膜需55个小时,这就意味着一张16ｃｍ×16ｃｍ的常用膜的扫描,至少需要36天不间断的工作和大约40Ｇ的磁盘空间存储如此庞大的原始数据。5 用ESI-MS/MS的方法创建序列标签只有当被消化的蛋白存在于已有的蛋白或基因组数据库中，并且能从MALDI分析器中得到四五个肽片的数据才能成功进行。如果在EST数据库中只有目的蛋白的部分序列，那么就需要知道肽片的序列信息。创建序列标签的优势在于，用肽的分子量和序列作为数据库检索对象比只用分子量作为检索对象具有更高的特异性。有了序列标签信息后，也可以用EST数据库进行检索[28]。通常来自于一个肽上的序列标签就足以鉴定蛋白质。同MALDI相比，纳升-ESI-MS/MS费时费力，而且在做ESI分析之前必须对样本进行脱盐处理。这些问题可以通过ESI-MS与HPLC联用得到解决。做ESI分析对样本浓度很敏感，用现代化的纳升-HPLC方法可以提供很高的局部肽片凝聚物，分离后的样本可以直接用于质谱分析，而不需要再分解。当分析混合物的时候，在质谱之前做LC分离尤其重要，因为它使得数据依赖的实验（DDE）成为可能,在DDE中，所有的离子都进入检测器进行测量，如果从HPLC到质谱之间出现一个峰的话，软件将自动从质谱转换到MS/MS模式并对产生的离子进行扫描。跟纳升-ESI相比，用这个方法可以从一份标本产生更多的MS/MS数据。Yates等已经详细叙述了如何进行[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS全自动蛋白检测的策略[29]。

[font=宋体]重组蛋白的表达（尤其是使用细菌载体和宿主）是一项成熟的技术。难点在于如何将其以活化形式分离。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]重组蛋白的纯化是生物学研究中的重要技术。为了研究蛋白的特定功能和结构，研究人员必须将重组蛋白从生物体中分离并纯化。蛋白纯化方法主要利用不同重组蛋白之间的相似性和差异性。可以根据蛋白之间的相似性去除非蛋白物质，然后根据蛋白之间的差异分离纯化目标重组蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]是一种可以提高重组蛋白的溶解度、简化蛋白纯化的简单有效的工具，并通过简单的方法跟踪蛋白表达和纯化过程。此外，蛋白标签是追踪活细胞中蛋白和进程的一种有效工具，可以通过显微镜直接跟踪或者通过[/font][font=Calibri]Western blot[/font][font=宋体]、免疫沉淀或免疫染色间接进行跟踪。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白纯化的原理：[/b][/font][font=宋体]不同的重组蛋白具有不同的氨基酸序列和空间结构，导致其物理、化学和生物学特性存在差异。我们也可以根据目标蛋白与其他蛋白和裂解液的性质差异设计合理的蛋白纯化方案。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]大多数的纯化方案需要不止一步才能达到理想的纯度水平。该过程中的每一步都会造成一定的产品损失，假设每一步的获得率为[/font][font=Calibri]80%[/font][font=宋体]。因此，建议尽可能减少纯化步骤。起始原料的选择是纯化过程设计的关键。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在背景信息、检测方法和样品规格都已到位的情况下，可以考虑采用三阶段纯化策略。纯化分为捕获、中度纯化和精细纯化三个阶段，每个阶段都有特定的目标。捕获阶段的目标是分离、浓缩和稳定目标产物。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification]蛋白纯化[/url]操作步骤：[/b][/font][font=宋体]理想情况下，最终的纯化过程包括样品制备，其中包括在需要时进行萃取和澄清，然后进行上述捕获、中度纯化和精细纯化三个阶段的纯化。步骤的数量始终取决于所需的纯度和蛋白的预期用途。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供不同表达系统的蛋白纯化服务，有细菌系统蛋白纯化、哺乳动物瞬时系统蛋白纯化、杆状病毒系统蛋白纯化。详情可以参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification[/font][/font]

蛋白质标签是为了提纯吗？提纯的时候要去掉标签吧？原核表达必须加标签吗？常用的几个标签按照使用率排名有哪些？hplc主要作用是什么，也可以提纯吧。hplc和原核表达什么关系。标签提纯和色谱法有关系吗？色谱也是提纯的吗？如果用了标签，还用hplc吗？不太明白之间的关系，求明确和详细的解释，谢谢帮忙！！ [b]问题补充：[/b]亲和色谱和蛋白质标签什么关系？