菌体形态

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菌体形态相关的耗材

  • 大肠杆菌噬菌体MS2液体培养基说明书!
    大肠杆菌噬菌体MS2液体培养基说明书!大肠杆菌噬菌体MS2液体培养基专业培养基,帮助细胞培养提供活性高。培养基系列产品都经过国家质量体系安全验证,从生产到销售都经过严格把关确保质量合格后方可出售,包装完好,内附检验报告。平台编号:bio-56196规格:250g产品名称:大肠杆菌噬菌体MS2液体培养基英文名称:Coliphage MS2 Liquid Medium产品用途:用于大肠杆菌噬菌体MS2培养用途:用于大肠杆菌噬菌体MS2培养。用法:称取本品 24.0g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌 15分钟,备用。大肠杆菌噬菌体MS2液体培养基的步骤:(一)准确称量试剂:根据不同的菌类和用途,选择适宜的培养基,培养基所需试剂必须纯净。(二)校正pH值:将称量好的培养基各种成分放入容器内,标记划线,加热溶解,补充水分,测定酸碱度,常用pH6.8~8.0的精密试纸或酸度计测定。用1N NaOH和1N HCl调节pH值到适宜范围内。(三)过滤:将玻璃漏斗置铁架上,再用纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中,将上述培养基倒入其中过滤至透明。(四)分装:将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内(试管内每支装5mL;三角瓶中装100~150ml),塞好棉塞用牛皮纸包扎好,准备灭菌。(五)灭菌:培养基的灭菌,常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死,但细菌的芽胞有较强的抗热性,须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的。根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理,即压力越大,蒸汽温度就越高。因此,在同一温度条件下,采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下,菌体吸收水分后,其蛋白质易于凝固变性,因为蒸汽的穿透力强,杀菌效果好。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!我们拥有经验丰富的化学师严格为大肠杆菌噬菌体MS2液体培养基质量把关。我们的技术服务人员随时为您解答有关产品的任何问题。
  • 抗体(IgG、IgM) 质粒DNA 病毒 噬菌体分析柱
    Agilent Bio-Monolith 离子交换液相柱 以聚合物为基体的monolith HPLC 柱是为分离生物大分子而设计的 流速与分离无关:无扩散、无微孔、无死体积,使流动相和固定相之间的传质非常迅速 Monolith 盘为5.2 mm x 4.95 mm(100 μL 柱容量),带连续通道,消除了传质扩散 极快速的分离加速了方法开发,降低了成本。锁定方法参数显著缩短了时间,节省了缓冲液安捷伦Bio-Monolith HPLC 柱可为抗体(IgG、IgM)、质粒DNA、病毒、噬菌体和其它生物大分子提供高分离度快速分离。该系列产品提供强阳离子交换、强和弱阴离子交换及蛋白A 固定相。Bio-Monolith HPLC 柱与HPLC 和制备液相色谱系统兼容,包括安捷伦1100 和1200 HPLC 系统。订货信息:
  • 梯形多用有机玻璃移液管架/多用梯形移液管架/多功能移液管架/梯形移液管架
    梯形多用有机玻璃移液管架/多用梯形移液管架/梯形移液管架/多功能移液管架由上海书培实验设备有限公司为您提供,欢迎联系我们,上海书培实验设备有限公司专业生产有机玻璃移液管架,可加工定制各种有机玻璃管架,可按客户规格尺寸订做,欢迎来客户电咨询订购。梯形多用有机玻璃移液管架介绍:一:多功能:横放移液管,多功能使用。二:有机玻璃材质,性能优越。三:多用,梯形状,外形美观。四:使用寿命长,不易破损。梯形有机玻璃移液管架用途:梯形移液管架适用于实验室放置移液管时使用,给实验人员带来了极大的便利

菌体形态相关的仪器

  • 人源抗体噬菌体文库制备服务卡梅德生物科技拥有先进的噬菌体抗体展示文库构建平台,利用该平台可以为客户提供不同级别,不同物种的抗体噬菌体展示文库。抗体文库制备服务 – 人源抗体噬菌体展示文库制备 噬菌体展示技术(phage displayed technology)是通过将外源肽段和噬菌体衣壳蛋白融合展示于噬菌体表面,进行高通量筛选及富集,并对所需功能的克隆进行定性分析,该技术展示对象涵盖抗体、抗体片段、肽段、cDNA等。该技术是由Smith,G.P在1985年提出,通过吸附-洗脱-扩增的重复过程,将含有靶蛋白噬菌体从表达各种外源蛋白的噬菌体库中筛选出来,然后进行富集、扩增及基因序列测定,推断外源蛋白的氨基酸组成,具有缩短实验周期、筛选容量大、可发酵大量生产、方法简单等优点。 卡梅德生物拥有M13,T4和T7噬菌体展示体系,根据客户的项目需求(展示的蛋白或抗体片段的大小等参数),会采用不同的噬菌体进行蛋白或者抗体的展示。同时,客户也可以提供抗原,进行体外外周血淋巴单核细胞敏化,以获得更高亲和力和特异性的单克隆抗体,通常基于该方法制备的抗体亲和力能达到10-13 M级别。 平台优势:*可溶抗原的快速制备能力:结合公司现有的重组蛋白表达体系,我们能够在短时间内制备出高纯度、高生物学活性的可溶抗原蛋白,用以支持噬菌体抗体的免疫及筛选工作。*成熟稳定的免疫文库构建技术:目前我们获得的噬菌体一级免疫文库的库容可高达108 ~ 109,序列丰度超过99%,获得的抗体亲和力达到nM甚至pM级别。*快速可靠的候选抗体筛选及初步鉴定技术:根据不同的抗体药物功能需求,开发了多种筛选体系,包括直接筛选法、竞争法、负筛选发、细胞筛选法等。卡梅德生物科技(天津)有限公司真诚期待与您的合作!
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  • 1.恒奥德仪器人体形体测量尺/人体形态测量尺/马丁测量仪 型号:HAD-LI 人体形态测量尺适用于人体各肢体长度、宽度、围度等形态指标的测量。包括:长马丁尺、中马丁尺、短马丁尺、直脚规、指间距尺、游标卡尺、围度尺和足长测量仪。 长马丁尺 规格:130厘米。精度:±0.1厘米。用于测量下肢长等。 中马丁尺 规格:100厘米。精度:±0.1厘米。用于测量上肢长、上臂长、前臂长和手长等 短马丁尺 规格:70厘米。精度:±0.1厘米。用于测量大腿长、小腿长和跟腱长等。 直脚规 规格:70厘米。精度:±0.1厘米。用于测量肩宽、骨盆宽、胸宽和胸厚等。 游标卡尺 规格:20厘米。精度:±0.1豪米。用于测量手宽、足宽、肱骨和股骨的远端宽等。 围度尺 规格:150厘米。精度:±0.1厘米。用于测量胸围、腰围、臀围、上下肢体围度等。 足长测量仪 规格:40×16×6厘米。 精度:±0.1厘米。用于测量足长等 指间距尺 规格:最大测量长度110厘米,加上加长杆后最大测量长度220厘米。精度:±0.1厘米。测量臂伸,身长、指间距(臂展)等 包装箱:137×28×15cm 10公斤 2.汽车尾气分析仪/微电脑汽车尾气分析仪 型号:HAD-LMY-II为汽车维护、修理部门HAD-LMY-II型汽车尾气分析仪是对汽车尾气中的含氧量进行分析,从而判断出气车尾气中一氧化碳(CO)和碳氢化合物(HC)的排放量是否符合国家标准的要求;还可以从排放尾气的含氧量(%)大小,反映出发动机的空燃比是否在最佳动力性和经济性状态。该仪器是为汽车维护、修理部门而设计的,能满足对排放气体分析的需要,具有结构紧凑、操作简单,使用方便、价格低廉等特点,是汽车维护、维修行业理想的检测设备。 汽车尾气分析仪/微电脑汽车尾气分析仪 技术参数:1、测量范围:0—25%2、测量精度:±1%3、工作环境温度:0oC~45oC4、相对湿度:≤85%5、响应时间:≤15S6、工作电源AC220V HAD-LMY-II型汽车尾气分析仪是对汽车尾气中的含氧量进行分析,从而判断出气车尾气中一氧化碳(CO)和碳氢化合物(HC)的排放量是否符合国家标准的要求;还可以从排放尾气的含氧量(%)大小,反映出发动机的空燃比是否在最佳动力性和经济性状态。 该仪器是专门为汽车维护、修理部门而设计的,能满足对排放气体分析的需要,具有结构紧凑、操作简单,使用方便、价格低廉等特点,是汽车维护、维修行业理想的检测设备。 HAD-LMY-II技术参数: 1、测量范围:0—25% 2、测量精度:±1% 3、工作环境温度:0oC~45oC 4、相对湿度:≤85% 5、响应时间:≤15S 6、工作电源AC220V 3.双路温湿度记录仪 型号:HADL95-4二路温度+二路湿度测量参数:二路温度+二路湿度(可以同时记录两个不同环境的温湿度值)传 感 器:温度:优质NTC(外置) 湿度:霍尼韦尔(优质进口探头)测量范围:温度:-40~100℃ 湿度:0~100%RH测量精度:温度:±0.2~0.5℃ 湿度:±2~3%RH存储容量:可自动记录8000组数据记录间隔:2秒到24小时任意可调分 辨 率:温度:0.1℃ 湿度:0.1%RH电 池:内置充电式高能锂电池,可使用外接电源充电启动方式:立即启动/定时启动/手动启动停止方式:存满停止/先进先出/定时停止/手动停止供电方式:一节3.6V高能锂电池供电或12V外接电源供电通讯方式:USB通讯或RS232通讯或RS485通讯 4.氨氮测定仪/纳氏比色法水质氨氮检测仪 型号:5298 一、简介该产品采用纳氏比色法测量水中的氨氮,该方法具有操作简便、灵敏度高等特点。其原理是:以游离态的氨或铵离子等形式存在的氨氮与钠氏试剂反应生成黄棕色络合物,该络合物的色度与氨氮的含量成正比;仪器广泛应用于地表水、工业废水、生活污水等水质的测量。二、特点Ø 采用进口光源,配以高稳定性光学系统,使仪器重复性、精度更高。Ø 用高性能、低功耗单片机及大屏幕LCD,汉字菜单,操作方便,显示直观。Ø 记录可保存及查询,断电不丢失。Ø 可贮存100条工作曲线及999个历史记录,断电不丢失。Ø 测量速度快,10分钟可出结果。Ø 具有USB接口,数据可传输到电脑。Ø 具有打印功能,可对测试的记录立即打印或查询记录打印。三、主要技术指标Ø 测量范围:0.02-25mg/L(分为二个量程: 0~5mg/L、5~25mg/L。超量程可稀释后测定);Ø 基本误差: ±3%(F.S);Ø 重复性 :≤2%;Ø 外形尺寸:282mm×237mm×102mm;Ø 供电电源: 220V。 5显气孔率、体积密度测定仪标准GB/T2997吸收率、真气孔率仪 型号:HAD-K04 1.1 产品介绍仪器用途:HAD-K04型显气孔体密测定仪主要用于测定耐火材料的显气孔率、体积密度、吸收率、真气孔率等物理性能。执行标准:该设备标准GB/T2997的要求设计制造。仪器结构:本仪器由抽真空部分、称量系统和控制部分组成。抽真空部分是将真空泵和真空容器组装在一起,柜式结构,结构合理,体积小,重量轻,美观大方,操作方便。液体静力天平是采用2000g电子天平。该天平数字显示,称量准确,速度快。配防风型悬挂式悬浮称量箱。控制方式:采用工业IPC机进行全自动控制,界面友好,控温、加荷精度高,自动计算测量数据,有EXCEL数据库存储功能,可随时调阅查询,并且可随时打印试验报告。1.2主要技术指标型号参数 HAD-K04天平 最大称量2000g,精度10mg腔内绝对压力 ≤2500Pa最大测试试样 6个50×50×50mm抽真空部分体积 250×300×250(mm)抽真空部分重量 100kg外形尺寸 450×590×1230(mm) 6. 微电脑光电子阴离子洗涤剂检测仪 型号:HAD-J1A 一、产品概述HAD-J1A阴离子洗涤剂检测仪适用于大、中、小型水厂及工矿企业、生活或工业用水,以便控制水达到规定的水质标准。 二、原理: 本仪表应用微电脑光电子比色检测原理取代传统的目视比色法。消除了人为误差,因此测量分辨率大大提高。 技术参数 测量范围 0-1.0mg/L最小示值 0.001mg/L重复性 ≤2%精度 ±5%FS±1个字电源电压 DC 9V 50Hz 7.α β γ表面污染测量仪/射线检测仪 型号:HAD-J1210一个或三个GM端窗计数管 HAD-J1210α β γ表面污染测量仪用于放射性表面污染测量,可以同时对α、β、γ射线进行测量,该仪器便于携带,操作方便, 技术参数探测器:一个或三个GM端窗计数管灵敏面积:15 cm2(15 cm2 × 3)辐射类型:α、β、γ测量类型:总计数、cps、Bq、Bq/cm2测量范围:0.1-105 cps、0.1-104 Bq、0.1-103 Bq/cm2能量下限:α 辐射2.5 MeV,β 辐射30 keV,γ辐射5 keV 效率(带保护格栅,2π):90Sr-90Y≥35%,14C≥ 8%,204Tl≥15%,239Pu≥15%仪器工作时间 100 h 环境特性:工作温度0-45℃,湿度 90%重量:1.5 kg 产品特点: cps、Bq、Bq/cm2可选声光报警、报警阈值连续可调仪器超量程报警 8.氰化物测定仪/透明无悬浮物手持便携式式氰化物检测仪 型号:HAD-P121生活用水、饮用水 产品简述:仪器适用于生活用水、饮用水、地表水和处理后排放废水(透明无悬浮物的水)中氰化物浓度的测定技术参数:1. 测量范围:0.01~0.50mg/L,0.01-50MG/L 超过稀释测定2、基本误差: ±5%(F.S)3、最低检出限:0.01mg/L6、外形尺寸:80mm×230mm×55mm7、重量:500g8、 正常使用条件:⑴ 环境温度:5~40℃ ⑵ 相对湿度: ≤85%⑶ 供电电源: 4节5#电池⑷ 无显著的振动及电磁干扰,避免阳光直射。 9.数显倾角仪/双轴电子水平仪/数字水平仪 型号:HAD-I420 产品介绍 HAD-I420开发出工业现场角度控制和测量的一款数显倾角仪,此款产品核心是采用微机械控制原理,双核测量单元,测量过程中可以用Y轴对X轴进行补偿,再运用交插和温度补偿模型算法,发挥出微机械电子原理的绝对运算优势,保证了仪器测量的长期稳定性和重复性。HAD-I420是双轴360度测量,分辨率0.01°、精度0.05度全量程、响应速度快、数据稳定,产品特别设计侧面和下面都采用强磁吸附式安装,两边基准均可正常测量使用,给客户带来非常大的使用便利,另外,HAD-I420的配套选型(I420)可以与采用分离式测量,与我司LCA系列倾角传感器配合使用,传输模式无线或有线可选配,无线采用单对单波段传输,传输直线距离10m,有线传输标准1米(可定制长距离),HAD-I420系列产品拥有强大扩展性、便利实际应用性、工业的可靠性、并且拥有绝对的性价比优势,在国际市场上都有绝对的竞争优势! 主要特性 ●精度:0.05° ●重复性:0.03° ●角度分辨率:0.01° ●测量范围:±90° ●响应速度快 ●绝对/相对测量可切换 ●侧面底部均可测量 ●双基准强磁安装 ●工作温度-10°~ +70℃ ●自动角度交插补偿功能 ●自动温漂补偿 ●客户可自行校准功能 ●内置可充电工业电池 ●夜视四色彩屏 ●IP54防水级别 ●带数据保持功能 ●角度/长度双单位切换 ●100g高抗冲击 产品应用 ●建筑施工 ●汽车四轮检测 ●道路坡度 ●机械安装 ●管道安装 ●工业平台 ●云台角度检测 ●转台检测 ●生产夹具 ●医疗仪器 角度测量范围 ±90 ° °长度测量范围 ±999.9 Mm/m测量轴 双轴角度测量精度 0.05 °(全量程) °角度测量分辨率 0.01 °长度测量精度 0.17 mm毫米测量分辨率 0.1 mmLCD可视区域大小 L40*W32 mm工作温度 -10°~ +70℃ °/℃工作湿度 85 %RH电源 3.7V可充电锂电池 V理想充电时间 3 h电池连续工作时间 10 h数据输出信号 标准5Pin USB连接器抗振 10g@11ms、三轴和同(半正弦波) g抗冲击 10grms、10~100Hz g重量 125 g防水级别 IP54材质 金属铝尺寸 L83*W53*H19.2mm mm 10.台式涂膜机/小型涂布机/锂离子电池专用涂布机 型号:HAD-300A电池正、负极片连续涂敷工序 本机锂离子电池正、负极片连续涂敷工序,适用于适合高等院校及企业小规模实验使用;也可用于陶瓷类薄膜、晶体类薄膜、特殊纳米薄膜等;机身全部采用不锈钢材质,美观、耐用,表面喷塑处理,操作简便。一、 主要特点:1、 涂膜电机是永磁低速同步同步电机;2、 滚珠丝杆和直线导轨才用台湾进口高精密上银品牌:3、 涂膜器刮刀采用芬兰进口SUS316L不锈钢材料:4、 涂膜速度在0~100mm/秒范围内可调,并且带数字显示;5、 温控器采用上海亚泰PID智能LID数显表6、 真空铝盘,可快速放置或取下极片;7、 带调整涂膜厚度(精度0.02mm)宽度0-270mm的刮刀;二、 技术参数:1、涂抹速度:0~100mm/秒;2、最大行程:300mm;3、真空板 :带真空铝平板 ;4、真空板尺寸:420mm(L)×300mm(W)×30mm(H);5、刮刀可调范围:0.02~2mm6、重量:45KG7、电源:220V ±10% 8、含VP-1真空泵一台,真空管3米 以上参数资料与图片相对应
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  • 马丁人体测量尺,由各种不同的测量工具组成,用于精确客观的测量人体的尺寸和体型,包括高度、长度、厚度、深度以及各部分的直径等。应用于人体测量、人体工学等各个领域。 身长尺: 用于测量站高、坐高等身体各部分的垂直高度,从地面开始测量。测量范围0-1950mm横规: 用于测量身体两点间的距离,比如肩宽,胸宽和胸厚,腰宽和腰厚、上肢长、下肢长等。测量范围:直线横规 30-270 mm/mm 触角横规150-270 mm/mm触角计: 测量头骨、颊骨、腰宽等部位的直径和长度。测量范围: 0-450 mm/mm滑动计: 用于测量小尺寸的长度,比如鼻宽、耳朵宽、嘴宽、手长、足长和足宽等。测量范围: 0-200 mm/mm直尺: 用于测量直线距离,通常辅助其他工具测量小距离直线长度。测量范围: 0-150 mm/mm钢卷尺: 用于测量围度和曲线的长度。 测量范围:0-2000 mm/mm手指消毒器: 测量时用于对手指进行酒精消毒。
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  • 【分享】噬菌体检查及效价测定

    原理噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物的病毒,其个体形态极其微小,用常规微生物计数法无法测得其数量。当烈性噬菌体侵染细菌后会迅速引起敏感细菌裂解,释放出大量子代噬菌体,然后它们再扩散和侵染周围细胞,最终使含有敏感菌的悬液由混浊逐渐变清,或在含有敏感细菌的平板上出现肉眼可见的空斑——噬菌斑。了解噬菌体的特性,快速检查、分离并进行效价测定,对在生产和科研工作中防止噬菌体的污染具有重要作用。检样可以是发酵液、空气、污水、土壤等(至于无法采样而需检查的对象,可以用无菌水浸湿的棉花涂拭表面作为检查样品)。为了易于分离可先经增殖培养,使样品中的噬菌体数量增加。采用生物测定法进行噬菌体检查,约需12h,因而不能及时判断是否有噬菌体污染。通过快速检查可大致确定是否有噬菌体污染,以便采取必要的防范措施。根据正常发酵(培养)液离心后菌体沉淀,上清液蛋白含量很少,加热后仍然清亮;而侵染有噬菌体的发酵(培养)液经离心后其上清液中因含有自裂解菌中逸出的活性蛋白,加热后发生蛋白质变性,因而在光线照射下出现丁达尔效应而不清亮,可以进行噬菌体检查。此法简单、快速,对发酵液污染噬菌体的判断亦较准确。但不适于溶源性细菌及温合噬菌体的诊断,对侵染噬菌体较少的一级种子培养液也往往不适用。噬菌体的效价即1mL样品中所含侵染性噬菌体的粒子数。效价的测定一般采用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上,一般一个噬菌体产生一个噬菌斑,故可根据一定体积的噬菌体培养液所出现的噬菌斑数,计算出噬菌体的效价。此法所形成的噬菌斑的形态、大小较一致,且清晰度高,故计数比较准确,因而被广泛应用。

  • 噬菌体的主要作用

    噬菌体的主要作用是()。 A、噬菌体的分型鉴定 B、杀灭细菌 C、繁殖 D、A+C

  • 关于噬菌体

    病毒(噬菌体)买回来以后,应该怎么操作啊,是跟细菌菌种一样进行复苏,传代吗?我们要买的是MS2病毒,具体操作步骤能否提供一下啊(用什么培养基,怎么操作)以前没有接触过这类测试,谢谢!

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  • 人体对“细菌”和“病毒”感染分不清楚,原因竟然是噬菌体作怪!
    蒙大拿大学的研究人员在《Science》发表了关于细菌如何引起感染的新见解,可能有助于未来的抗感染治疗。 研究对象不是细菌,而是感染病毒的噬菌体,作为国家卫生研究院资助项目的一部分,帮助开发细菌感染疫苗。“噬菌体通常被视为细菌寄生虫,”该论文的合着者助理教授Patrick Secor说。由于耐抗生素的细菌流行率越来越高,利用噬菌体(噬菌体疗法)替代抗生素杀死致病细菌的研究逐渐升温。噬菌体多种多样,被认为是地球上最普遍的生物实体。“当我们寻找感染致病菌铜绿假单胞菌的噬菌体时,我们发现大多数菌株都感染了一种名为Pf的噬菌体,但这种噬菌体不会杀死它们的细菌宿主,”Secor说。当Secor和斯坦福大学的研究人员在人体伤口中寻找Pf噬菌体时,他们惊讶地发现了大量丝状噬菌体——平均每个拭子上有100万个Pf噬菌体。Secor课题组以前研究过噬菌体是如何影响细菌毒性的。“因此,我们问,这些Pf噬菌体是否可能直接与人体免疫系统相互作用?”他们与斯坦福大学的合作者一起发现,Pf噬菌体被免疫细胞识别为了病毒,识别冷病毒的细胞表面受体同样也可以识别噬菌体。“这是一个关键的发现,”Secor说。“这些噬菌体诱导了抗病毒反应,但是面对细菌感染,这是一种不适当的免疫反应。”研究人员认为,这种不适当的免疫反应使细菌在伤口或肺内获得“掩护”,从而建立感染。研究人员希望,他们的发现可以刺激新研究,通过靶向感染细菌的噬菌体发展控制感染的有效策略。
  • 底物噬菌体展示应用相关载体设计的两个关键
    噬菌体展示应用相关载体设计的关键:1 相互结合位点的选择在蛋白酶底物噬菌体展示中,一个关键的组分是亲和性结构域,它使我们可以将底物序列和非底物序列区分开。这其中包括蛋白—蛋白相互作用、蛋白—肽段相互作用以及多组氨酸与镍螯合基质的结合。整合这几种不同的系统的要素在于,展示系统是基于高亲和性相互作用而设计的。通常,相互结合的两个物质之间的解离常数(Kd)应该至少在一个较低的nmol/L的数量级上,这样在实验中复合物的解离速度就可以比蛋白酶解的速度慢得多。例如,我们以往在这个领域中的工作中,利用的是一个hGH的高亲和性变异体,此变异体与其受体的Kd值约13pmol/L。然而,对于蛋白酶底物噬菌体展示库,挑选在适当的缓冲液条件下(例如低pH或高pH)能够被破坏的这种相互作用,将有助于选择性地富集非底物序列(被捕获而结合于固体支持物上)和最佳的底物序列(被蛋白酶解而释放)。另外一个必须考虑的是靶蛋白酶(或者其他的一些噬菌粒形成中可能碰到的蛋白酶)必须不会酶切亲和性结构域。由于这个原因,亲和性结构域一般都是一个稳定的球蛋白或者一个短的肽段。2 底物卡匣(cassette)的设计和构建底物噬菌体展示要成功,一个关键在于切割仅仅发生在亲和性(捕获)结构域和噬菌粒之间。幸运的是,丝状噬菌体对蛋白酶解有极强的抗性:在所有已知的蛋白酶中,只有枯草杆菌蛋白酶能够引起噬菌体外膜蛋白的显著降解。为使底物序列更易与蛋白酶作用,在附近的连接序列中引入一定部分柔韧性(segmental flexibility)的设计要谨慎。例如,底物序列GPGG(X)。GGPG位于亲和性结构域和pⅢ基因之间,柔韧的甘氨酸—脯氨酸接头分布于随机序列的两端。在我们的实验中,已经证实截短形式的pⅢ蛋白是有效的,但另外也有报道使用全长pⅢ蛋白也能取得成功。在多价底物噬菌体展示中,一个全长pⅢ蛋白对于感染是必需的。一些其他的重要因素也主导着文库卡匣的设计,包括随机化的密码子、密码子的选择以及文库的大小,这些在第2章中有详细的描述。在许多情况下,我们不可能穷尽含有8个或8个以上的残基的整个底物序列所有可能的排列。然而,在文库仅展示了一部分可得到的序列的情况下,我们也有可能得到关于底物特异性的相关信息。例如,要构建一个包含5个密码子的随机文库,可以先列举其中2个密码子的序列,以此作为参照序列;从中得到的信息可用于第二次的文库构建,即将此两个密码子固定,再列举另外3个密码子和(或)其他的扩展的底物序列。作为替代,可以通过整合已知的特异性决定因素并查明那些现在还较不清楚的因素,从头设计一个更集中的文库。
  • 如何优雅的完成噬菌体的扩增和定量实验?实验汪必备! | 小奥课堂
    开学季又到了实验汪又要去“搬砖”了如何优雅的搬砖还不用求助师兄师姐当然是关注“小奥课堂”栏目啦今天小奥为各位介绍的 是一篇干货满满的 噬菌体展示方法实践手册 “噬菌体的扩增与定量” 这是一份难得的学霸笔记 请收好(收藏)! Part 1杂交瘤、单细胞克隆和噬菌体展示技术是抗体发现的三种主流技术,其中噬菌体展示技术作为诺奖级别的技术,在生物创新医药研发过程中有着十分重要的作用,极大的加快了抗体类药物研发的进程。噬菌体展示技术不仅在新的抗体和多肽的发现及优化过程中有着核心的作用,还能和传统的动物免疫技术相结合,与纳米抗体、全人源转基因小鼠发现平台进行有效对接,能够广泛用于抗体、抗体偶联药物和CAR-T/TCR-T等领域。本文将针对噬菌体展示技术的噬菌体增殖和扩增实验细节进行探讨、分享具体实验过程的经验,以其原理为根本来指导实验过程,以精益求精的实验过程,增加噬菌体展示技术在抗体发现过程中的成功率。Part 2 ——噬菌体文库 扩增及展示的基本原理 | 现在普遍应用的噬菌体展示抗体片段的体系称之为“3+3体系”(3为噬菌体的p3衣壳蛋白);3+3代表着p3衣壳蛋白有两个来源:噬菌粒(phagemid)M13KO7辅助噬菌体(Helper Phage)菌粒(phagemid)上的p3蛋白融合了抗体片段的基因,是文库多样性的关键;辅助噬菌体(Helper Phage)上的p3蛋白为噬菌体天然的p3蛋白。*噬菌粒是一种比较小的质粒载体,在大肠杆菌感受态中有较高的转化效率,并且能够在大肠杆菌中扩增。 含有噬菌粒的大肠杆菌被辅助噬菌体(Helper Phage)感染后,会利用大肠杆菌的酶系统、原料和能量进行扩增,最终包含噬菌粒的噬菌体从大肠杆菌释放出来,该子代噬菌体的p3衣壳蛋白会展示抗体片段。Part 3 ——在噬菌体扩增过程中 遇到的难题和对应的解决方案 | 噬菌体的建库过程实际上是抗体片段基因多样性的传递过程: 从血样中抗体基因的多样性传递到噬菌粒的过程,是噬菌粒文库构建的内容; 从噬菌粒的多样性传递到含有噬菌粒的大肠杆菌的多样性,是噬菌粒质粒电转大肠杆菌的内容; 从含有噬菌粒的大肠杆菌的多样性传递到噬菌体的多样性则是噬菌体扩增的内容,也是本文实验经验关注的问题。噬菌体的扩增最终目的是将噬菌粒中单一拷贝的抗体片段基因通过噬菌体的扩增过程变成10-100个拷贝,且这些拷贝基因能够在噬菌体表面的p3蛋白上展示出抗体蛋白片段。在噬菌体的扩增过程要使得文库的多样性得以保持和传递,需根据文库的初始大小确定在扩增过程中含有噬菌粒的大肠杆菌的数目和体积,对应加入的辅助噬菌体的多少进行有效感染,以及扩增后加入多少含有噬菌粒的噬菌体进行淘选等需要一一计算评估的问题,不同文库大小的噬菌体库在扩增过程中需要的扩增体积是不一样的。一份固化的实验方案很有可能会导致文库多样性的丢失。 要弄清楚这些问题,首先要具备以下几点基础的前置知识:(??以下内容全部划重点!!!)1. TG1大肠杆菌在OD600的读数:1OD代表的菌浓度为1e9个/ml。2. 噬菌体/辅助噬菌体在TG1处于对数生长期时有比较好的感染效率,TG1处于对数生长期的OD600值在0.4-0.8。3. TG1在对数生长期的生长速度是20分钟一代,需要密切关注TG1的生长,及时取菌进行实验。4. 辅助噬菌体和TG1的比值MOI在20:1时能够保证所有TG1被感染上。5. 含有噬菌粒的噬菌体能够感染正常的TG1大肠杆菌,并将噬菌粒留在TG1中并随着TG1的扩增进行扩增,在无辅助噬菌体的情况下无噬菌体的扩增。6. 噬菌粒质粒含有青霉素抗性,辅助噬菌体含有卡那霉素抗性。7. 含有噬菌粒的噬菌体可以通过感染正常的TG1,梯度稀释涂青霉素抗性的琼脂板进行滴度测定。8. 3+3模式下含有噬菌粒的噬菌体展示出p3融合抗体片段蛋白的效率比较低,只有5%-10%,在进行淘选时,加入的噬菌体的滴度应是文库多样性的100倍以上。 还有一个比较关键的问题是噬菌体作为一种病毒,很容易以气溶胶的形式扩散到空气中污染实验室的环境,从而感染F因子阳性的大肠杆菌。 (心疼一下生物汪,冒着生命危险搬砖啊!) 在噬菌体展示的相关实验需要在相对封闭的实验室进行以避免噬菌体对于大肠杆菌的污染,特别是在培养正常的TG1大肠杆菌时。噬菌体的灭活方式通常是紫外照射半小时以上。(合格的生物汪,是个莫得感情的病毒杀手!) Part 4 ——噬菌体扩增和定量 具体实验过程的分享 | 以下是以一个文库大小为1E9的噬菌体文库进行扩增的实验方案。*如果文库过大或者过小,可依比例增减扩增体积。 Day 1(搬砖秃头的第一天)1. 取含有噬菌粒的TG1菌种1ml (菌数目为1E10)加入含有100ml 2xYT-GA培养基250ml摇瓶中,使用奥豪斯摇床37度220rpm摇菌摇床至OD600为约0.5。2. 取OD600为约0.5的菌液20ml (菌数目为1E10),按照MOI为20:1加入pfu为2E11的辅助噬菌体M13 K07,37度220rpm振荡半小时进行感染。3. 取感染后菌液到50ml离心管使用奥豪斯离心机5816R 3200g离心10分钟,去除培养基,以除去培养基中的葡萄糖对噬菌粒中p3蛋白融合了抗体片段蛋白表达的抑制。4. 用2xYT-AK培养基重悬菌团,将培养基加至400ml,用1L摇瓶在30度220rpm过夜摇菌。 Day 2(搬砖秃头的第二天)5. 将400ml菌液均分至大的离心瓶中,使用奥豪斯离心机5816R 10000g离心10分钟,取上清,10000g再次离心10分钟,去除残留的菌体碎片。6. 取90ml PEG溶液加入400ml上清液中,在4℃孵育1小时并伴随着柔和的振荡,然后使用带低温控制功能的奥豪斯离心机5816R 4℃10000g离心1小时。7. 去上清,用10mlPBS重悬噬菌体后,加入2.5ml PEG溶液再次沉淀.8. 冰上孵育20分钟,然后使用带低温控制功能的奥豪斯离心机5816R 4℃ 10000g离心半小时。9. 去上清液,用吸水纸吸干残留的PEG溶液,加入1-2ml的PBS重悬噬菌体,进行滴度测定。滴度测定:1. 在分隔的实验室,取正常的TG1大肠杆菌加入2xYT的培养基中,使用奥豪斯摇床摇菌至OD600值为0.5,如未能及时使用,可放入4℃ 2小时以备用。2. 将步骤9中扩增噬菌体原液用PBS稀释1E5-1E7倍。3. 取10ul噬菌体稀释液加入490ul OD600为0.5的TG1大肠杆菌中,使用奥豪斯摇床 37℃ 220rpm振荡半小时进行感染。4. 取感染液50ul均匀涂抹在含有2xYT-GA的琼脂板中,晾干后放入37℃培养箱过夜。并将未感染TG1大肠杆菌涂抹琼脂板作为阴性对照。 Day 3(搬砖秃头的第三天)5. 数2xYT-GA的琼脂板中的克隆数,根据稀释倍数计算扩增噬菌体的滴度 噬菌体滴度(pfu/ml)=(克隆数*10*50/10ul)*稀释倍数6. 取1E11-1E12的噬菌体用于淘选。试剂配方:2xYT培养基:Yeast Extract 10.0 g/L+Tryptone 16.0 g/L+NaCl 5.0 g/L2xYT-GA培养基: 2xYT培养基+100 μg/ml 青霉素+ 1% (W/V)葡萄糖2xYT-AK培养基:2xYT培养基+100 μg/ml 青霉素+50 μg/ml卡那霉素PEG溶液:20% (w/v) PEG 6000, 2.5 M NaCl Part 5仪器推荐:(做科研民工的每一天都不孤单,因为有小奥陪伴)噬菌体作为一种病毒,很容易以气溶胶的形式扩散到空气中污染实验室的环境,需要封闭的实验室,实验室所有的仪器需单独使用。奥豪斯恒温轻负载培养摇床转速范围为100-12—rpm,体积集约,功能强大,可为您的样品提供优异的摇荡效果:此外,噬菌体展示实验的过程中会有不同体积、不同转速和需要4℃条件的离心步骤,如果以多 台离心机满足实验的需求会造成实验设备资产的空置,造成极大的浪费!!!奥豪斯5816R多功能离心机和可选转子为噬菌体相关实验提供便利,一台离心机满足所有实验需求!接下来,小奥带你乘坐“帮你省科研经费”这辆车教你正确薅奥豪斯的羊毛 德国原装进口功能强大、离心效果优异的奥豪斯Frontier™ 离心机家族 推出“买一赠一”促销活动促销型号如下微量高速离心机FC5515R(冷冻型号)微量高速离心机FC5515(非冷冻型号)全新紧凑型微量离心机FC5513现在上车,还来得及哦!详情请联系奥豪斯哦! 想了解更多关于奥豪斯Starter™ 系列产品信息?请进入「阅读全文」留下信息,我们的专业工程师将火速赶来,为您服务! ▼
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