菌体形态

原理噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物的病毒，其个体形态极其微小，用常规微生物计数法无法测得其数量。当烈性噬菌体侵染细菌后会迅速引起敏感细菌裂解，释放出大量子代噬菌体，然后它们再扩散和侵染周围细胞，最终使含有敏感菌的悬液由混浊逐渐变清，或在含有敏感细菌的平板上出现肉眼可见的空斑——噬菌斑。了解噬菌体的特性，快速检查、分离并进行效价测定，对在生产和科研工作中防止噬菌体的污染具有重要作用。检样可以是发酵液、空气、污水、土壤等（至于无法采样而需检查的对象，可以用无菌水浸湿的棉花涂拭表面作为检查样品）。为了易于分离可先经增殖培养，使样品中的噬菌体数量增加。采用生物测定法进行噬菌体检查，约需12h，因而不能及时判断是否有噬菌体污染。通过快速检查可大致确定是否有噬菌体污染，以便采取必要的防范措施。根据正常发酵（培养）液离心后菌体沉淀，上清液蛋白含量很少，加热后仍然清亮；而侵染有噬菌体的发酵（培养）液经离心后其上清液中因含有自裂解菌中逸出的活性蛋白，加热后发生蛋白质变性，因而在光线照射下出现丁达尔效应而不清亮，可以进行噬菌体检查。此法简单、快速，对发酵液污染噬菌体的判断亦较准确。但不适于溶源性细菌及温合噬菌体的诊断，对侵染噬菌体较少的一级种子培养液也往往不适用。噬菌体的效价即1mL样品中所含侵染性噬菌体的粒子数。效价的测定一般采用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一般一个噬菌体产生一个噬菌斑，故可根据一定体积的噬菌体培养液所出现的噬菌斑数，计算出噬菌体的效价。此法所形成的噬菌斑的形态、大小较一致，且清晰度高，故计数比较准确，因而被广泛应用。

噬菌体的主要作用是()。 A、噬菌体的分型鉴定 B、杀灭细菌 C、繁殖 D、A+C

病毒（噬菌体）买回来以后，应该怎么操作啊，是跟细菌菌种一样进行复苏，传代吗？我们要买的是MS2病毒，具体操作步骤能否提供一下啊（用什么培养基，怎么操作）以前没有接触过这类测试，谢谢！

各位好，我想请教一个问题，我们做噬菌体的实验，请问噬菌体买回来怎么处理啊，就是怎么扩增、保存啊？和细菌的保存一样吗？谢谢！

噬菌体的主要作用是()。 A、噬菌体的分型鉴定 B、杀灭细菌 C、繁殖 D、A+C

[font=宋体]噬菌体展示技术是一种筛选技术，通过基因工程技术将外源蛋白或多肽的基因序列插入到噬菌体，进行多轮筛选，最终在体外获得具有高特异性和高亲和力的重组抗体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]噬菌体展示技术原理[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody][b]噬菌体展示技术[/b][/url]（[/font][font=Calibri]phage display[/font][font=宋体]）是将外源编码多肽或蛋白质的基因通过基因工程技术插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，在阅读框能正确表达，使外源多肽或蛋白在噬菌体的衣壳蛋白上形成融合蛋白，随子代噬菌体的重新组装呈现在噬菌体表面，可以保持相对的空间结构和生物活性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]然后利用靶分子，采用合适的淘洗方法，洗去未特异性结合的噬菌体。再用酸碱或者竞争的分子洗脱下结合的噬菌体，中和后的噬菌体感染大肠杆菌扩增，经过[/font][font=Calibri]3-5[/font][font=宋体]轮的富集，逐步提高可以特异性识别靶分子的噬菌体比例，最终获得识别靶分子的多肽或者蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]噬菌体抗体库的构建和筛选技术流程：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]噬菌体展示技术中，[/font][font=Calibri]M13[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]f1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]fd[/font][font=宋体]噬菌体是最常用的噬菌体，属于[/font][font=Calibri]Ff[/font][font=宋体]家族。与展示密切相关的有两种结构蛋白质：主要衣壳蛋白[/font][font=Calibri]pVIII[/font][font=宋体]（或[/font][font=Calibri]gp8[/font][font=宋体]）和次要衣壳蛋白[/font][font=Calibri]pIII[/font][font=宋体]（或[/font][font=Calibri]gp3[/font][font=宋体]）。[/font][font=Calibri]pIII[/font][font=宋体]含有[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]个拷贝，以较低的价态存在； [/font][font=Calibri]pVIII[/font][font=宋体]含有[/font][font=Calibri]2700[/font][font=宋体]个拷贝，以较高的价态存在。因此，[/font][font=Calibri]pIII[/font][font=宋体]有利于筛选具有较高亲和力的配体，[/font][font=Calibri]pVIII[/font][font=宋体]可用于筛选具有较低亲和力的配体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]该技术实现了基因型与表型的统一，目的基因（粉红色）被克隆至噬菌体[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]pIII[/font][font=宋体]基因，其产物（抗体、肽）以融合蛋白的形式展示到噬菌体的表面。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]噬菌体展示技术的筛选过程包括：[/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）一个包含[/font][font=Calibri]106~1011[/font][font=宋体]个克隆的噬菌体文库与包被抗原孵育。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）清洗并除去未结合的噬菌体。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）洗脱与抗原结合的噬菌体。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）洗脱下来的噬菌体在辅助噬菌体的帮助下感染大肠杆菌从而扩增洗脱下来的候选噬菌体。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]）将细胞接种到可筛选的平板上并进行扩增。以上步骤重复[/font][font=Calibri]2-3[/font][font=宋体]次，使得与目标抗原结合噬菌体被富集。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供噬菌体抗体库技术平台，包括噬菌体展示抗体库构建、淘洗、单克隆鉴定和阳性克隆重组表达等步骤，义翘神州利用灵活的筛选策略、多种筛选方法以及上清介入检测，筛选的成功率达到[/font][font=Calibri]90%[/font][font=宋体]，可根据客户的特殊需求构建不同物种的噬菌体抗体库，并提供全面高效的抗体发现服务。详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display[/font][/font][font=宋体] [/font]

[font='calibri'][size=13px]噬菌体展示技术流程、原理及九大问题解析[/size][/font]原理：噬菌体展示技术，是利用基因工程技术将抗体的基因连接到噬菌体中，并以融合蛋白的形式展示在噬菌体的表面，通过与靶蛋白的结合，完成噬菌体展示抗体的筛选。基于噬菌体展示抗体库构建和筛选的专业知识，义翘神州能为客户提供个性化的抗体定制服务，包括鼠源单克隆抗体、兔源单克隆抗体、鸡源单克隆抗体和全人源抗体等多个种属的抗体发现服务。噬菌体展示技术流程：噬菌体抗体库开发技术包括噬菌体展示抗体库构建、淘洗、单克隆鉴定和阳性克隆重组表达等步骤，义翘神州利用灵活的筛选策略、多种筛选方法以及上清介入检测，筛选的成功率达到90%，可根据客户的特殊需求构建不同物种的噬菌体抗体库，并提供全面高效的抗体发现服务。①义翘神州的噬菌体展示平台可以针对哪些种属的抗体进行开发？目前可以对小鼠 、兔子、鸡、人等多个种属的抗体开发进行建库。②义翘神州的噬菌体展示库建库库容有多大？免疫库的库容在5×108~2×109，天然库的库容可以达到1011。③义翘神州的噬菌体展示库筛选抗体的多样性如何？根据不同要求，可以提供十几个到上百个unique hits。④义翘神州噬菌体展示库抗体开发周期需要多长时间？免疫库从建库到获得质粒需要8周时间，天然库需要6周时间。⑤义翘神州噬菌体展示库及其筛选出的克隆可以保存多久？均可保存一年以上。⑥怎样衡量一个库的好坏，有哪些标准？除了库容大小，还可以通过电泳判断插入率，以及通过一代测序验证抗体构建的正确率，评估抗体库的真实库容。或通过二代测序，获得库的序列多样性和覆盖率等具体信息。⑦淘洗时筛选到非特异抗体怎么解决？被动的方法是利用负筛，尽快能去掉非特异克隆。主动的方法是更换免疫原，选择不仅免疫原性好且活性好、特异性强的免疫原。⑧淘洗过程中，如何判断淘洗是否可以终止？有多种途径可以判断，比如通过计算噬菌体淘洗前后的产出和投入比、将每轮淘洗的克隆测序观察序列是否出现富集、以及将噬菌体库检测ELISA等。⑨如何筛选到亲和力高的抗体？可以尝试降低抗原包被量，同时增加洗涤力度。更多详情可以关注：噬菌体抗体库技术平台https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display

我想请问一下，就是做噬菌体的实验时，为什么要用双层平板啊？这个双层平板有什么作用吗？跟单层的话有什么区别

甲烷是气体形态，怎么测定气体样品中甲烷的含量？

[font=宋体]噬菌体展示技术是一种筛选技术，通过基因工程技术将外源蛋白或多肽的基因序列插入到噬菌体，进行多轮筛选，最终在体外获得具有高特异性和高亲和力的重组抗体。下面为大家介绍噬菌体展示技术基本流程：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]一般来说，[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody][b]噬菌体展示技术[/b][/url]有以下[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]个步骤[/font][font=Calibri]:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]1:[/font][font=宋体]构建噬菌体展示库[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]技术用于将外来[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]整合到病毒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]中。不同的基因组被插入到多个噬菌体的基因组中。剪接到一个外壳蛋白的基因中，使该蛋白显示在噬菌体颗粒的外面，而这些分离的噬菌体只展示一种蛋白、肽或抗体。这些噬菌体的集合即为库，如抗体噬菌体库、蛋白质噬菌体库或随机噬菌体库。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]：结合[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]这些库暴露于选定的目标，只有一些噬菌体会与目标相互作用。这些目标是计划识别特定的配体，如固定的蛋白、细胞表面蛋白或组织细胞表面蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]：洗涤[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]未结合的噬菌体可以被洗涤缓冲液冲走，只留下那些对受体有亲和力的噬菌体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]：洗脱[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]洗脱缓冲液洗脱回收对目标有亲和力的噬菌体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]：放大[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]展示特异性的洗脱噬菌体被用来感染新的宿主细胞进行扩增，或直接进行细菌感染和扩增回收的噬菌体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]噬菌体展示的应用[/b][/font][font=宋体]噬菌体展示技术在基础研究、诊断和治疗应用领域发挥了关键作用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组抗体具有高特异性和高亲和力，可用于在侧流分析（[/font][font=Calibri]LFA[/font][font=宋体]）、[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]和细胞成像等多种诊断平台中快速准确地识别样本中的目标抗原。大多这些平台都利用抗原捕获测定或抗体捕获测定来诊断某些疾病的存在。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]阿达木单抗（市场名为[/font][font=Calibri]Humira[/font][font=宋体]）是首款通过噬菌体展示技术获得上市批准的治疗性抗体，其可中和肿瘤坏死因子，主要用于治疗类风湿性关节炎。噬菌体展示技术的出现，使得抗体药物的研发有了突破性进展，已成为最重要的药物筛选平台之一。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display]噬菌体展示技术平台[/url]，详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display[/font][/font][font=Calibri] [/font]

谷氨酸发酵液除菌体提取谷氨酸研究进展作者：佚名 文章来源：本站原创点击数： 222 更新时间：2010-4-14 13:19:04 file:///C:/Users/%E9%83%AD%E9%9B%B7/AppData/Local/Temp/msohtml1/01/clip_image001.gif我国味精生产，从发酵液中提取谷氨酸大多采用带菌体冷冻等电加离交法，由于发酵液中存在大量的菌体蛋白、悬浮物及其它杂质，给谷氨酸提取操作、提取收率、谷氨酸质量带来显著影响，且废水含高C0D、高B0D等严重污染环境的物质，又给废水治理带来重重困难。 近几年来，国内一些味精生产企业、研究所，对谷氨酸发酵液除菌体及提取谷氨酸进行了大量研究，除菌体工艺有高速离心机分离，絮凝剂分离、膜分离等，都取得了明显成果。按除菌体不同工艺、除菌体率分别达到70％～96％，以膜分离法除菌率最高达95％以上，得到的发酵液澄清，0D低，谷氨酸提取操作方便，由于除去了影响谷氨酸结晶的大量杂质，因而谷氨酸结晶颗粒大，纯度高、质量好，易于沉降分离，提取收率明显提高。高纯度谷氨酸有利于味精精制，味精中和脱色过滤可降低活性碳或树脂用量，提高味精结晶质量，大大降低味精生产成本。除菌体后的发酵液及等电提取后的废液中C0D、BOD大大减少，减轻了环境污染，降低了废水治理负荷与难度。得到的菌体经干燥后可以综合利用，作高蛋白质饲料或作核苷酸的生产原料。 谷氨酸发酵液除菌体及多种新工艺提取谷氨酸的研究，是对我国味精工业清洁生产的有益探索。随着研究的不断深化，许多先进工艺技术将会被应用，味精生产终将进入一个新水平。 1 高速离心分离除菌体，浓缩等电提取 沈阳味精厂从瑞典引进4台ALFA—LAVA公司的FESX5l2S一3lC型蝶片式高速喷咀离心机，转速4650I1) 分，功率45kw，对玉米淀糖为碳源，尿素作氨源、玉米浆为生物素的T一6l3菌发酵液进行了工业性除菌体，进料量20m ，喷咀直径1．0mm，菌体分离率达70％以上，轻流占75％ ，重流占25％左右，除菌体后发酵液中谷氨酸略增，还原糖下降，0D值明显降低，工业规模运转证明，该设备对分离谷氨酸发酵液性能可靠，比较适宜。 发酵液除菌体后采用浓缩等电点提取法。 除菌体后的发酵液，经减压蒸发到含谷氨酸12％～15％ ，后与重液经水解浓缩制成的二次蒸发液进行等电中和(60℃、40l1)m搅拌)，然后冷却、沉淀、离心分离，提取达83．14％～85．03％，比带菌体浓缩等电点提取收率77．24％显著增加。且谷氨酸含量高达96％(干)，用于制造味精时脱色液过滤快，透光率高，味精质量好。 2 凝聚剂除菌体一次等电或浓缩等电提取 使用安全性高的壳聚糖作絮凝剂，其阳离子性能与发酵液中菌体(带负电荷)与蛋白凝聚使其沉淀而进行分离。壳聚糖对金属离子、蛋白质、氨基酸、核酸均有很强的吸附能力，特别对胶体微粒有甚大的絮凝作用，其官能基团主要是氨基。在最佳pH、搅拌速度、用量、温度条件下，菌体去除率可达9O％左右。 壳聚糖不易溶于水，而溶解于酸性溶液中。配成一定浓度后，于发酵液中慢慢加人，搅拌速度也以慢为好。过快易将凝絮物打碎，难过滤。菌体凝聚沉降后，抽取上清液，沉降物可加硅藻土或珍珠岩作助滤剂，尤以硅藻土作助滤剂好，不吸附谷氨酸。中试规模过滤可用板框压滤，小试规模实验室中，采用高速离心机分离。应用国产高速离心机分离除菌体凝絮物(包括菌体)至今未见报导，这也是用凝絮法除菌体不能很快推广的一个较大问题。凝聚法去除菌体后的谷氨酸发酵液的提取方法有： 2．1一次等电点法 谷氨酸发酵液经絮凝处理后，采用一次等电点法，(即用酸逐步调到pH3-2法)提取收率可达76．18％ ，比对照收率71．3％提高6．2％ ，谷氨酸结晶的透光率52．25％ ，比对照l1．25％提高了4倍；谷氨酸提取后的母液，可减少谷氨酸0．06％～0．11％。这是提高谷氨酸收率的一个重要原因，即去除了干扰谷氨酸结晶因素。 2．2 浓缩等电点法 将除菌体经过滤的发酵液，真空浓缩一倍，用加热快速调pH的方法，一次性直接调到pH3．2。搅拌到常温，再搅拌2h～3h时，沉淀3h，离心分离谷氨酸，谷氨酸一次收率平均可达85％左右，纯度可达95％左右，且调节pH的酸用量比普通谷氨酸等电点法用量要少。 2．3 先等电提取后浓缩再提取法 谷氨酸发酵液除菌体后，先用一次等电点法(常温或冷冻)提取出谷氨酸的60％～75％，残母液中含1．2％～1．5％左右的残谷氨酸，再加以浓缩(通过多效蒸发器)3倍，再提出剩余谷氨酸，总收率可达85％以上。母液浓缩成浆状可作肥料，再根据当地的土质情况，适当添加磷、钾等肥效成分。这条工艺路线是既提高了谷氨酸的提取收率，又产生综合效益。从发酵液分离出

大肠杆菌发酵过程经常会发生各种各样的菌体自溶，可以发生在分批阶段，补料阶段，诱导后阶段。每个阶段有不同的原因和对策，下面我会分批次说说各种自溶的原因以及对策，希望有抛砖引玉之效。首先，我说说分批阶段。在分批阶段，通常自溶可以发生在几乎任何阶段，比较早的可能是接种后菌体生长过慢延滞期大大增加从数小时至十数小时，晚的大致出现在补料前。早期自溶可能出现的现象：延滞期增加，溶氧pH变化可能不大（也有上升至某一点不动）泡沫少或者几乎无泡沫；中晚期的表现大致可以有泡沫形成（停止搅拌后泡沫经久不散），加入消泡剂无效，pH上升，溶氧上升，镜检可见碎片，发酵液味道异常等现象。分批阶段自溶的原因：菌种，培养基，噬菌体，工艺异常，人为失误等。以下贴子将一一分析。

噬菌体可以用质谱定量分析吗，不管是根据蛋白或者根据核苷酸。噬菌体的蛋白可以被酶切吗。酶切后定量特征肽段，可行吗？

[font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody][b]噬菌体展示技术[/b][/url]是一种筛选技术，通过基因工程技术将外源蛋白或多肽的基因序列插入到噬菌体，进行多轮筛选，最终在体外获得具有高特异性和高亲和力的重组抗体。[/font][font=宋体][font=Calibri]1985[/font][font=宋体]年，[/font][font=Calibri]Smith[/font][font=宋体]首先发现外源[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]片段可以融合到非裂解丝状噬菌体[/font][font=Calibri]pIII[/font][font=宋体]外壳蛋白的编码基因上，并以融合蛋白的形式表达在病毒表面，而不影响噬菌体的传染性。随后，[/font][font=Calibri]Winter[/font][font=宋体]颠覆了噬菌体展示的过程，他使用噬菌体展示抗体（而不是蛋白质），然后找出与分子甚至细胞结合的目标抗体。噬菌体展示技术这一发明，为单克隆抗体药物的发现带来了巨大的改变。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]杂交瘤和噬菌体展示技术都属于重要的单克隆抗体制备技术。然而，每种方法都有其局限性，以下表格是两者的优势和缺点对比。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]噬菌体展示技术优缺点介绍：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优点：[/font][font=宋体]? 大规模生产[/font][font=宋体]? 周期快[/font][font=宋体]? 筛选过程易于控制[/font][font=宋体]? 易于筛选大量的不同克隆[/font][font=宋体]? 可直接筛选人类文库[/font][font=宋体]? 可用于筛选有毒抗原[/font][font=宋体][font=宋体]? 无免疫原性问题（对于[/font][font=Calibri]na?ve[/font][font=宋体]文库）[/font][/font][font=宋体]? 无克隆生存能力问题[/font][font=宋体]? 直接获得序列[/font][font=宋体][font=宋体]? 无动物使用（对于[/font][font=Calibri]na?ve[/font][font=宋体]文库）[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点：[/font][font=宋体]?价格昂贵[/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]binders[/font][font=宋体]可能有较低的亲和力[/font][/font][font=宋体]? 技术更难[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]杂交瘤技术优缺点介绍：[/b][/font][font=宋体]优点：[/font][font=宋体]? 大规模生产[/font][font=宋体]? 高产量[/font][font=宋体]? 高特异性[/font][font=宋体]? 高灵敏度[/font][font=宋体]? 低成本[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点：[/font][font=宋体]? 周期长[/font][font=宋体]? 需要人源化[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]基于噬菌体展示平台，义翘神州可为客户提供多种噬菌体展示文库构建和筛选服务，包括鼠源单克隆抗体、兔源单克隆抗体、鸡源单克隆抗体和全人源抗体等多个种属。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州噬菌体抗体库开发技术包括噬菌体展示抗体库构建、淘洗、单克隆鉴定和阳性克隆重组表达等步骤，利用灵活的筛选策略、多种筛选方法以及上清介入检测，筛选的成功率达到[/font][font=Calibri]90%[/font][font=宋体]，可根据客户的特殊需求构建不同物种的噬菌体抗体库，并提供全面高效的抗体发现服务。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多噬菌体展示技术和[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display][b]噬菌体抗体库技术平台[/b][/url]详情可以参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display[/font][/font]

请教各位：我现在想用透射电镜拍摄噬菌体（一种病毒），负染后电镜，请问支持膜选哪种好呢，碳支持膜、微栅、超薄碳膜、多孔膜？非常感谢！！！

近日，美国巴尔的摩Intralytix公司研制出一种基于噬菌体的EcoShield产品，该产品能显着减少甚至清除碎牛肉中的大肠杆菌O157:H7,此产品目前已获得FDA批准，其纯天然的除菌方式受到FDA的高度评价。 Intralytix公司首席执行官表示，虽然EcoShield产品并非对抗大肠杆菌的"高招",然而它确实提供了一个"杀灭步骤",由此可将大肠杆菌显著得减少或清除99%至100%。 EcoShield产品由三种噬菌体混合而成，对人体、动物、植物无害，能有效的防护大肠杆菌O157:H7。

[font=&]【题名】： 菌体浊度在线光电测量研究[/font][font=&]【全文链接】: https://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10422-2005131809.htm[/font]

含农药和菌体的培养基（牛肉膏蛋白胨）怎么进行前处理？是研究有机磷农药降解性的，大家有作过这个的嘛？[em61]

通常测定菌体密度时用的是600nm时的吸收值，那么通常1个OD600nm对应多少个菌体数/ml？也就是说1OD=？cfu/ml？

真菌是一大类不含叶绿素，无根、茎、叶，由单细胞或多细胞组成的真核细胞型微生物。大部分真菌对人类有益，能引起人类疾病的病原性真菌主要包括浅部真菌和深部真菌。 实验目的： 观察真菌的基本形态及菌落特点，了解浅部及深部真菌的检查方法。 实验内容： 一、常见单细胞真菌的形态观察 1、新型隐球菌墨汁负染色片：可见菌体呈球形，大小不一，有很厚的荚膜，包围在菌体周围，透明发亮，并可见发芽的菌体。 2、白色念珠菌菌体形态：用患者的棉拭子标本常法涂片，革兰氏染色，镜检。显微镜下可见菌体呈卵圆形，较葡萄球菌大2-5倍，细胞出芽伸长而成假菌丝，在假菌丝生长点上有芽生孢子及沿假菌丝顶端生长的大而圆的厚膜孢子。 二、皮肤丝状菌的检查 材料： 病人的甲屑、皮屑或毛发、10%KOH溶液、载玻片、盖玻片、小镊子、普通光学显微镜等。 方法： 1、采标本：用钝刀在手、足、体癣损害部位边缘轻轻刮取皮屑，甲癣可用小刀刮取病损指（趾）甲深层碎屑。 2、制片：用小镊子取少许皮（甲）屑标本置于载玻片中央，滴1-2滴10%KOH溶液，覆加一盖玻片，在火焰上缓慢加热，以加速角质溶解，使标本透明，然后轻轻加压使成薄片，驱走气泡并吸去周围溢液。 3、镜检：先用低倍镜观察有无真菌菌丝或孢子，再用高倍镜观察菌丝、孢子的特征。镜检时光线应稍弱，使视野稍暗。阳性标本常可查见分支菌丝或孢子。 三、真菌的培养 材料： 菌种、沙保氏培养基、平皿、载玻片、盖玻片。 方法： 1、一般培养：分别将新型隐球菌、白色念珠菌、絮状表皮癣菌接种于沙保氏培养基，于22℃-28℃下培养（深部真菌可培养于37℃环境），一周后观察菌落特征。真菌菌落在形态上可分为三大类： 酵母型菌落：与细菌菌落相似，圆形、白色、边缘整齐、表面光滑湿润。 类酵母型菌落：同酵母型菌落，圆形、较大、白色，但菌落根部有假菌丝长入培养基内。 丝状菌落：是多细胞真菌的菌落形式。有许多疏松的菌丝体构成，菌落呈棉絮状、绒毛状或粉末状，菌落中央有皱折，外围有放射状沟。其正面和背景又可显示各种不同颜色。 2、小培养（玻片法）：在无菌平皿中先倾注10-15ml沙保葡萄糖琼脂，待凝固后，无菌操作将琼脂切成约0.5cm的方块，再将琼脂块移放在灭菌的载玻片上，然后在小块培养基四边接种已分纯的真菌菌种，盖上无菌盖玻片，移入有一定湿度的无菌平皿内，置22℃-28℃孵育。动态观察生长过程，根据菌丝和孢子的特点鉴定真菌类别。

美国典型物保藏中心，又称美国模式典型物收集中心(ATCC)，ATCC是位于马里兰洲洛克菲勒的一家私营的，非赢利性组织。目前它可以提供以下物品：细胞系（3000种）；细菌和噬菌体（15000种）；动植物病毒（2500种）；原生动物 1200种以及重组物品等。北京时代新光TEl: 010-87875910 010-87875015 13371681771 E-mail: zfyu@ bio-life.cnweb: www.bio-life.cn

检测活性污泥中活细菌的存活情况，加入了草酸铵结晶紫染色剂，在显微镜下能看见一团团深蓝色的东西，但这些细菌不会运动，那它们是活性菌体吗？

所有的微生物育种工作都离不开菌种筛选。尤其是在诱变育种工作中，筛选是最为艰难的也是最为重要的步骤。经诱变处理后，突变细胞只占存活细胞的百分之几，而能使生产状况提高的细胞又只是突变细胞中的少数。要在大量的细胞中寻找真正需要的细胞，就象是大海捞针，工作量很大。简洁而有效的筛选方法无疑是育种工作成功的关键。为了花费最少的工作量，在最短的时间内取得最大的筛选成效，就要求采用效率较高的科学筛选方案和手段。因为诱变育种中的筛选工作最复杂，所以，本节主要讨论诱变育种的筛选方法，这些方法也为其它育种方法的筛选提供了借鉴。 1. 菌种筛选方案在实际工作中，为了提高筛选效率，往往将筛选工作分为初筛和复筛两步进行。初筛的目的是删去明确不符合要求的大部分菌株，把生产性状类似的菌株尽量保留下来，使优良菌种不致于漏网。因此，初筛工作以量为主，测定的精确性还在其次。初筛的手段应尽可能快速、简单。复筛的目的是确认符合生产要求的菌株，所以，复筛步骤以质为主，应精确测定每个菌株的生产指标。 2. 菌种筛选的手段筛选的手段必需配合不同筛选阶段的要求，对于初筛，要力求快速、简便，对于复筛，应该做到精确，测得的数据要能够反映将来的生产水平。2.1 从菌体形态变异分析有时，有些菌体的形态变异与产量的变异存在着一定的相关性，这就能很容易地将变异菌株筛选出来。尽管相当多的突变菌株并不存在这种相关性，但是在筛选工作中应尽可能捕捉、利用这些直接的形态特征性变化。当然，这种鉴别方法只能用于初筛。有人曾统计过3,484个产维生素B2的阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)的变异菌落，发现高产菌株的菌落形态有以下特点：菌落直径呈中等大小（8-10毫米），凡过大或过小者均为低产菌株；色泽深黄色，凡浅黄或白色者皆属低产菌株。又如，在灰黄霉素产生菌荨麻青霉(Penicillium urticae)的育种中，曾发现菌落的棕红色变深者往往产量有所提高，而在赤霉素生产菌藤仓赤霉（Gibberella fujikuroi）中，却发现菌落的紫色加深者产量反而下降。 2.2 平皿快速检测法平皿快速检测法是利用菌体在特定固体培养基平板上的生理生化反应，将肉眼观察不到的产量性状转化成可见的"形态"变化。具体的有纸片培养显色法、变色圈法、透明圈法、生长圈法和抑制圈法等，见图5.6.1。这些方法较粗放，一般只能定性或半定量用，常只用于初筛，但它们可以大大提高筛选的效率。它的缺点是由于培养平皿上种种条件与摇瓶培养，尤其是发酵罐深层液体培养时的条件有很大的差别，有时会造成两者的结果不一致。图 5.6.1 平皿快速检测法示意图平皿快速检测法操作时应将培养的菌体充分分散，形成单菌落，以避免多菌落混杂一起，引起"形态"大小测定的偏差。1) 纸片培养显色法将饱浸含某种指示剂的固体培养基的滤纸片搁于培养皿中，用牛津杯架空，下放小团浸有3%甘油的脱脂棉以保湿，将待筛选的菌悬液稀释后接种到滤纸上，保温培养形成分散的单菌落，菌落周围将会产生对应的颜色变化。从指示剂变色圈与菌落直径之比可以了解菌株的相对产量性状。指示剂可以是酸碱指示剂也可以是能与特定产物反应产生颜色的化合物。2) 变色圈法将指示剂直接掺入固体培养基中，进行待筛选菌悬液的单菌落培养，或喷洒在已培养成分散单菌落的固体培养基表面，在菌落周围形成变色圈。如在含淀粉的平皿中涂布一定浓度的产淀粉酶菌株的菌悬液，使其呈单菌落，然后喷上稀碘液，发生显色反应。变色圈越大，说明菌落产酶的能力越强。而从变色圈的颜色又可粗略判断水解产物的情况。 . S:3) 透明圈法在固体培养基中渗入溶解性差、可被特定菌利用的营养成分，造成浑浊、不透明的培养基背景。将待筛选在菌落周围就会形成透明圈，透明圈的大小反映了菌落利用此物质的能力。在培养基中掺入可溶性淀粉、酪素或CaCO3可以分别用于检测菌株产淀粉酶、产蛋白酶或产酸能力的大小。4) 生长圈法 利用一些有特别营养要求的微生物作为工具菌，若待分离的菌在缺乏上述营养物的条件下，能合成该营养物，或能分泌酶将该营养物的前体转化成营养物，那么，在这些菌的周围就会有工具菌生长，形成环绕菌落生长的生长圈。该法常用来选育氨基酸、核苷酸和维生素的生产菌。工具菌往往都是对应的营养缺陷型菌株。5) 抑制圈法待筛选的菌株能分泌产生某些能抑制工具菌生长的物质，或能分泌某种酶并将无毒的物质水解成对工具菌有毒的物质，从而在该菌落周围形成工具菌不能生长的抑菌圈。例如：将培养后的单菌落连同周围的小块琼脂用穿孔器取出，以避免其它因素干扰，移入无培养基平皿，继续培养4-5天，使抑制物积累，此时的抑制物难以渗透到其它地方，再将其移入涂布有工具菌的平板，每个琼脂块中心间隔距离为2厘米，培养过夜后，即会出现抑菌圈。抑菌圈的大小反映了琼脂块中积累的抑制物的浓度高低。该法常用于抗生素产生菌的筛选，工具菌常是抗生素敏感菌。

摘要：通过试验和观察，研究了活性污泥中丝状菌与絮体结构的关系。常见的活性污泥絮体可分为六大类型，在不同的处理工艺和运行条件下，各类型污泥比例不同，丝状菌在污泥絮体的形成过程中所起的作用也不相同。而在活性污泥膨胀时，生物相结构中的丝状菌可分为结构性的和非结构性的两大类，它们起着不同的作用，运行中必须通过不同的方法和措施加以防治。丝状微生物是一大类菌体相连而形成丝状的微生物的统称，其中包括丝状细菌、丝状真菌、丝状藻类等［1］。荷兰学者Eikelboom将丝状微生物分为29个类型、7个群，并制成了活性污泥丝状微生物检索表。　　丝状微生物的功能与结构形态密切相关，长丝状形态有利于其在固相上附着生长，保持一定的细胞密度，防止单个细胞状态时被微型动物吞食；细丝状形态的比表面积大，有利于摄取低浓度底物，在底物浓度相对较低的条件下比胶团菌增殖速度快，在底物浓度较高时则比胶团菌增殖速度慢。许多丝状微生物表面具有胶质的鞘，能分泌粘液，粘液层能够保证一定的胞外酶浓度，并减少水流对细胞的冲刷，其中还含有特定的抗体，以防止其他生物附着。　　丝状微生物种类繁多，对生长环境要求低。其本身生理生长特性很特别：增殖速率快、吸附能力强、耐供氧不足能力以及在低基质浓度条件下的生活能力都很强，因此在废水生物处理生态系统中存活的种类多，数量大。如何使丝状微生物相互聚集，使之在废水处理中达到较好的泥水分离效果，如何确定丝状微生物同其他微生物的相互作用，以及不同丝状微生物的最适需氧量等，都是需要进一步研究的问题。1　试验设计及过程试验分别在本院给水排水实验室、重庆市唐家桥污水处理厂、重庆市渝北区城南污水处理厂进行。活性污泥采样自本实验室活性污泥法小试反应器、唐家桥污水处理厂和城南污水处理厂的曝气池、初沉池和二沉池。通过镜检观察记录活性污泥絮体大小、形态和结构，对不同反应器的丝状微生物进行鉴定，从而寻找丝状微生物与絮体形态结构之间的关系。试验历时5个月。　　丝状微生物鉴定采用Eikelboom法，镜检观察以下八项特征：①是否存在衣鞘；②滑行运动；③真、假分枝；④丝状体长度、形状、性质；⑤细胞直径、长度、性质；⑥革兰氏染色反应；⑦纳氏染色反应；⑧有无胞含体(聚-β-羟基丁酸PHB、硫粒、多聚磷酸盐等)。染色采用石炭酸复红染色法、革兰氏染色法、纳氏染色法和积硫试验法。通过目微尺测定污泥絮体直径，记录各种大小、形状和结构的絮体数量，归纳污泥絮体的主要类型及特征。通过大量观察，寻找丝状微生物种类、浓度与污泥絮体大小、形状、结构的关系。2　试验结果2.1　絮体结构形态类型　　通过大量的观察发现，活性污泥在正常运行和膨胀时呈现不同的结构形态和种类。正常运行时活性污泥结构形态可分为四类，Ⅰ型：致密、细小，看不到丝状菌为骨架的污泥；Ⅱ型：有明显丝状骨架、呈长条形的污泥；Ⅲ型：厚实、具有网状结构的巨型污泥；Ⅳ型：有孔洞结构的巨型污泥。污泥膨胀时其结构形态可分为两类，Ⅴ型：结构丝状菌大量生长、伸长，絮体结构松散；Ⅵ型：非结构丝状菌大量生长，不形成絮体。　　试验过程中发现，Ⅰ型污泥在两污水厂正常运行的曝气池中所占比例较低，城南污水厂为10%左右，唐家桥污水厂更低，而在二沉池上清液中比例较高，因此它是从良好结构的污泥上脱落下来的，在二沉池随出水流失。正常运行时长条形污泥、网状污泥和孔洞污泥(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型)占很高比例，两污水厂中均占90%以上。根据絮体伸出的部分丝状菌，可以判断这些具有良好结构的污泥是以丝状菌为骨架，胶团菌附着于其上而形成的。它们是去除有机物的主要部分。　　在混合液中可见到其他丝状微生物游离于菌胶团之外，见不到附着生长物，三种样本见到的菌种有：球衣菌、发硫菌、0803型、0581型、硬发菌、链球菌等，但数量都十分少。　　试验过程中，城南污水厂由于发生停电事故时仍保持进水流量，发生了结构丝状菌大量增殖的现象，污泥结构呈松散状(Ⅴ型)，SVI达到142mL/g干污泥；待供电正常，按正常方式运行一段时间后，污泥结构恢复正常，SVI回落至90mL/g　干污泥。而活性污泥小试过程中多次出现污泥膨胀，泥水分离困难(Ⅵ型)，SVI高达500mL/g　干污泥以上，调节运行方式仍不能控制，镜检发现球衣菌、发硫菌大量增殖，最终通过投加漂白粉杀生剂再经逐步培养才恢复正常。2.2　微生物鉴定结果　　根据Eikelboom法对作为污泥良好结构骨架的丝状菌进行鉴定，发现各处取样污泥的结构丝状菌特征一致：丝状体直径1.5～2μm，丝体长200μm左右，不运动，略弯，在絮体内扭曲，细胞呈柱状，长0.5～4μm，直径0.7～1.0μm，有鞘，横隔明显，常见分枝，有大量附着生长物，无硫粒，革兰氏染色阴性，纳氏染色可见兰灰色颗粒，呈阳性。　　查丝状微生物鉴定表，找不到特征完全相符的种，比较接近的是Eikelboom1701型。Eikelboom1701的特征是：链状圆柱形细胞，被鞘紧裹，丝体长100～200μm，偶尔超过200μm，虽然丝体正常时稍弯，但可有很强的盘绕性，细胞长2.5～3.5μm，直径0.5～0.9μm，有鞘，有时可见PHB黑色小颗粒，横隔和缩缢明显，偶有假分枝，常有大量附着生长物，无硫粒，革兰氏染色阴性，纳氏染色阳性。3　分析与讨论3.1　絮体形成过程　　许多絮体可以同时具有Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型污泥的多种特征，在絮体中心部分为孔洞结构，向四周伸展的长条形污泥相互搭接形成网状结构，最外侧则可见新伸出的骨架丝状菌。从这种污泥的形态可以推断其形成过程为：结构丝状菌交织生长，胶团菌附着其上形成新生污泥，新生污泥逐渐成熟形成条状、网状污泥，在氧和营养物充足等条件下，网状污泥的胶团菌增粗，网孔逐渐变小形成孔洞状，最后孔洞被填实，而结构丝状菌的伸出为胶团菌提供了新的附着面，包裹形成新的条状污泥，条状污泥相互交织又形成新的网状污泥，重复上述过程，形成更大的污泥絮体。　　一些污泥能见到成节的形态，大的孔洞结构污泥之间由细的条状污泥连接，有的由丝状微生物连接，这种污泥的形成可能是絮体成长到一定成熟度后，由于内部供氧不足，促进了包埋于其中的结构丝状菌的生长，将絮体撑开导致结构松散形成节状。　　还有极少量的污泥，可以见到极粗大的丝状骨架，上面附着胶团菌，经多次对比鉴定，这些丝状骨架为死亡累枝虫的杆，由于结构松散，这类污泥易于在二沉池发生漂浮，因此保持原生动物稳定的生长条件可以有效地减少二沉池的污泥上浮。3.2　丝状微生物与微生态群落的关系　　试验表明，胶团菌与结构丝状菌之间相互依存，丝状微生物形成了絮体骨架，为絮体形成较大颗粒同时保持一定的松散度提供了必要条件。而胶团菌的附着使絮体具有一定的沉降性而不易被出水带走，并且由于胶团菌的包附使得结构丝状菌获得更加稳定、良好的生态条件，所以这两大类微生物在活性污泥中形成了特殊的共生体。　　根据生态学的观点，环境因子对微生物个体的影响首先是影响某些敏感生物，然后通过微生物之间的相互作用逐步传递，最终当影响超过一定限度时引起结构上的波动。正是因为生态系统中生物种类多，并按一定结构组成了微生态群落，环境压力在逐级传递过程中受到消减，所以生态系统具备了一定抗冲击负荷的能力。与纯培养相比，生态系统能通过优势种群的变化维持良好的结构，而纯培养只需轻微刺激就会引起强烈反应，直接破坏其脆弱的结构。这也是保证活性污泥微生态群落稳定性的根本原因。　　根据本试验结果，可以将活性污泥微生态群落描述如下：活性污泥微生态群

请教下大家，黑曲霉的菌种确认是否只是进行菌体生长的形态和显微镜观察？ 大家显微镜的观察中，认为哪种方法比较简单适宜呢？ 显微镜观察后，根据孢子形态辨别？另外，大家做革兰氏染色时候，时间是怎么把握的呢，我按书本里的操作怎么每次做的都不太理想呢？

我正在改一篇论文。需要TEM观察细菌形态的步骤。因为我不是这个专业的，所以当时做电镜的时候是请人做的。现在需要步骤，所以想请教一下大家。细菌就是一株纯菌，观察它的形态。具体步骤应该是怎样的？

实验步骤：菌种鉴定工作是各类微生物学实验室都经常遇到的基础性工作。不论鉴定对象属哪一类，其工作步骤都离不开以下三步：①分离纯化菌种；②测定一系例必要的鉴定指标；③查找权威性的鉴定手册。一、经典分类鉴定方法群体：菌落形态，在半固体或液体培养基中的生长状态等* 形态 个体：细胞形态，染色反应，各种特殊构造等* 营养要求：能源，碳源，氮源，生长因子等* 生理、生化反应 酶；产酶种类和反应物性等* 代谢产物：种类，产量，显色反应等* 经典指标 生态特性：生长温度，对氧的需要，宿主种类等* 生活史特点* 血清学反应* 噬菌体的敏感性* 其它

http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/2012/01/1325747079.jpg据英国每日邮报报道，目前，美国加利福尼亚州大学圣地亚哥分校的研究人员能够“同步化”数百万细菌的生物时钟来形成一种新型生物广告牌，像霓虹灯广告牌一样闪烁发光。细菌体形式的“生物像素”像霓虹灯一样脉冲闪动，迄今为止，研究人员已创建由13000生物像素(大约6000万细菌)构成的发光芯片。这些闪光信息是通过在具有生物时钟的细菌体上附加荧光蛋白质形成的，在一个细菌群体中同步数千细菌的生物时钟，然后一致性地同步数千个闪光细菌群体同时发光或者停止。这个芯片通过诱导细菌群体内部彼此间进行化学通信来实现“同步效应”，之后诱导细菌群体释放气体与其他细菌群体进行通信。最终结果将形成一个缓慢的闪光效应，研究人员能够非常有效地进行控制，他们已使用这种方法来制作大学标语广告。研究人员称，很可能未来使用这种发光生物芯片可用于制作探测毒素物质的传感器，其有效性远超过竞选活动的高调广告牌，同时，“同步生物”性传感器远比当前使用的电子传感器更加灵敏有效。美国加利福尼亚州大学圣地亚哥分校生物工程师和生物学教授杰夫-哈斯蒂(JeffHasty)说：“这种类型的活体传感器颇具吸引力，人们可利用它作为不间断性监控器，长期呈现一种既定图案。”据悉，他是加利福尼亚州大学圣地亚哥分校生物科学系、生物电路学会研究小组负责人。由于这些细菌体将以不同方式响应不同浓度环境，因此可以改变它们的闪光模式频率，它们可以提供一种毒素的危害性的连续性变化，或者监控病原体产生的任何变化。