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苯并吡喃酮作为一个非常重要的结构内核单元,广泛地存在于很多天然产物中,并且是一些具有生物活性的化合物的特定前导化合物。此外该类化合物也因其具有一些光致变色效应和热致变色性质而受到广泛关注。 生物催化作为一种绿色高效的现代有机合成技术,在医药、能源、材料等领域显示出巨大的潜力。酶作为一种高效,环境友好的催化剂,已经成为传统有机金属和小分子催化剂的有效补充,尤其是酶的非专一性在有机合成方面的应用备受研究者的青睐。近些年,已有一系列关于水解酶催化非专一性的C-C键以及C-杂原子键的形成反应的报道,但是对于单酶催化的多步串联反应的报道较少。基于此,我们设计和发展基于水解酶催化非专一性的domino反应,发现枯草杆菌α-淀粉酶可以有效地催化水杨醛和丁烯酮发生oxa-Michael/aldol缩合反应合成2H-苯并吡喃酮类化合物。2H-苯并吡喃酮的生物合成在25 mL烧瓶中加入水杨醛(2 mmol),不饱和醛或酮(10 mmol),50 mg 枯草杆菌α-淀粉酶(BSA),再加入500μL去离子水和4.5 mL DMSO,将其置于50℃恒温摇床中震荡反应(200 rpm)。TLC跟踪检测反应(紫外灯下观测),反应完全后,加入20 mL蒸馏水停止反应,然后用乙酸乙酯萃取(3×10 mL),有机相用无水硫酸钠干燥后,经减压蒸馏除去溶剂,经柱层析分离得目标产物(硅胶:300-400目,流动相:石油醚[font='Times
[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/12/200812230812_125660_1643419_3.jpg[/img]a:链霉蛋白酶是从链球菌(streptomyces griseus)中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。b:自消化可消除dna酶和rna酶的污染,经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下:把该酶的粉末溶解于10mmol./l trishcl(ph7.5)、10mmol/l nacl中,配成20mg/ml浓度,于37℃温育1h。经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中,保存-20℃。c:蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,从林伯氏白色念球菌(tritirachium album limber)中纯化得到。该酶有两个ca[sup]2[/sup] 结合位点,它们离酶的活性中心有一定距离,与催化机理并无直接关系。然而,如果从该酶中除去ca[sup]2[/sup] ,由于出现远程的结构变化,催化活性将丧失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以,蛋白酶k消化过程中通常加入edta(以抑制依赖于mg[sup]2[/sup] 的核酸酶的作用)。但是,如果要消化对蛋白酶k具有较强耐性的蛋白,如角蛋白一类,则可能需要使用含有1mmol/l ca[sup]2[/sup] 而不含edta的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入egt(ph8.0)至终浓度为2mmol/l,以鳌合ca[sup]2[/sup] 。
科技名词定义中文名称:蛋白酶英文名称:protease;proteinase其他名称:蛋白水解酶(proteolytic enzyme)定义:催化蛋白质中肽键水解的酶。根据酶的活性中心起催化作用的基团属性,可分为:丝氨酸/苏氨酸蛋白酶(编号:EC 3.4.21.-/EC 3.4.25.-)、巯基蛋白酶(编号:EC 3.4.22.-).、金属蛋白酶(编号:EC 3.4.24.-)和天冬氨酸蛋白酶(编号:EC 3.4.23.-)等。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科);酶(二级学科)