提取外泌体

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  • 外泌体纯化柱 EVSecond L 70
    产品描述最近研究表明细胞外的囊泡-外泌体（exosomes）跟各种疾病的进程和发展有很大的相关性，包括癌症的转移等；因此外泌体做为生物标记物在药物开发应用中被广泛关注。然而它很难在生物体液（例如血清）中被分离纯化。EVSecond 是一种与门为外泌体开发的尺寸排阻类型的固相萃取小柱. 高度纯化的外泌exosomes 可以被简单的从血清、血浆以及细胞上清液中分离出来。EVSecond：Extracellular Vesicle Isolation by Size Exclusion Chromatography on Drip Column特点不使用超速离心机，以自然滴落的方式操作，操作简单更高效的去除样品中的自由RNA和自由蛋白质，收集到的miRNA具有高解析和高感度外泌体被PBS轻轻洗脱下来，不会破坏结构，使得可以在更广泛的应用中得到使用。EVSecond L70在室温条件下进行纯化操作，与EVSecond相比混合时间大幅缩短参数对比 new EVSecond L70EVSecond长度110 mm75 mm填料长度70 mm50 mm保存方式冷藏保存冷藏保存操作条件室温低温室混合方式室温条件10～30分钟低温条件一段时间上样量50～1,500 ul50～700 ul结块处理PBS 1,500 ul×3 次PBS 700ul×6 次【 操作方法 】不需要超速离心和配置抽吸装置，全部通过自然滴落的方式进行提纯。但是配备GL-SPE EXO馏分收集架操作更方便。注：请用anti-CD9-anti-CD63 sandwich ELISA, anti-CD9 Western blotting 等方法来确定首次外泌体洗脱的初次片段【 与传统提取方法比较 】 比较了密度梯度离心法、抗体亲和法以及EVSecond三种提取方法，提取的外泌体、以及细胞内的蛋白质经LC/MS方法分析。EVSecond提取方法得到的游离蛋白质比例最低人血清外泌体的纯化 EVSecond L70和EVSecond同时对外泌体和自由蛋白质的分离比较。订购信息品名包装Cat.No.EVSecond L70［冷藏］new10只5010-21395EVSecond［冷藏］10只5010-2139025只5010-21392【 GL-SPE EXO分取装置 】EVSecond L70和EVSecond专用馏分收集架。 ①柱架　EVSecond L70或EVSecond安装使用②收集架　8个1.5mL或2mL管/架　收集架的拉杆可以不同位置切换③收集架槽　收集架槽有6个大小（EVSecond L70用）：约300（W）×300（D）×190（H）mm 大小（EVSecond用）：约300（W）×300（D）×150（H）mm EVSecond L70和EVSecond两种纯化小柱使用时的柱架安装。品名包装Cat.No.GL-SPE EXO分取装置1台5010-50450EVSecond，东京大学前沿科学研究院幸嗣植田老师的协助下开发的产品。
    供应商： 北京谱朋科技有限公司
    品牌： GL Sciences 技尔（上海）
    价格： 面议
  • ExoView外泌体全面表征试剂盒—外泌体检测服务
    ExoView外泌体全面表征试剂盒外泌体计数、粒径、蛋白表达、蛋白共定位一次完成 检测样本类型对细胞培养上清、血浆、血清、尿液、脑脊液、唾液等生物样本中的外泌体直接进行分析捕获抗体种类anti-CD81, anti-CD9, anti-CD63, 同型IgG对照；可自定义单次上样体积35 μl稀释样本重复检测数目3复孔荧光抗体种类CD9（Blue）/ CD81（Green）/ CD63（Red） 实验原理① 35 μL外泌体样品滴加在芯片上孵育；② 预先包被的抗体特异结合外泌体表面蛋白以捕获外泌体；③ 再使用荧光抗体特异性标记需要表征的标记物； ④ 后用ExoView R100检测外泌体粒径、计数、蛋白表达（CD9，CD81，CD63等）及共定位。检测流程产品类别产品货号产品名称EV-TETRA-C人外泌体检测试剂盒EV-TETRA-P人血浆外泌体检测试剂盒EV-TETRA-M2鼠外泌体检测试剂盒EV-TETRA-C-CAR人外泌体内容物检测试剂盒EV-TETRA-P-CAR人血浆外泌体内容物检测试剂盒EV-TC-FLEX自由捕获人外泌体检测试剂盒EV-TP-FLEX自由捕获人血浆外泌体检测试剂盒EV-TC-FLEX-CAR自由捕获人外泌体内容物检测试剂盒EV-TP-FLEX-CAR自由捕获人血浆外泌体内容物检测试剂盒EV-TM-FLEX自由捕获鼠外泌体检测试剂盒EV-TM-FLEX-CAR自由捕获鼠外泌体内容物检测试剂盒EV-FLEX-2自由捕获外泌体检测试剂盒EV-FLEX-2 -CAR自由捕获外泌体内容物检测试剂盒EV-CTETRA-1/2/3人外泌体检测试剂盒+1/2/3个自定义捕获抗体EV-CTETRA-1/2/3-CAR人外泌体内容物检测试剂盒+1/2/3个自定义捕获抗体EV-CUST-1/2/3/4/5/6自定义1/2/3/4/5/6抗体捕获外泌体检测试剂盒EV-CUST-1/2/3/4/5/6-CAR自定义1/2/3/4/5/6抗体捕获外泌体内容物检测试剂盒试剂盒特点特异性捕获芯片上可包被多达6种捕获抗体，特异性捕获含特定蛋白标记物的外泌体。阳性外泌体计数芯片捕获外泌体后，可通过SP-IRIS技术直接检测样品中外泌体的数量。 单个外泌体蛋白共定位分析检测每个外泌体的荧光信号并进行统计，可获得荧光共定位信息，用于分析样品中不同表型外泌体的比例（如右图所示）。 无需纯化使用抗体捕获模式，防止样品中杂质影响结果，可直接检测血液、尿液和细胞培养液中的外泌体，未纯化样品的测量结果与纯化后基本一致（如右图所示）。粒径分辨率高 高精度SP-IRIS技术，可检测≥50 nm的外泌体，测量结果与电子显微镜检测结果基本一致，并统计生成外泌体的粒径分布结果（如右图所示）。可检测外泌体内容物 试剂盒配套相应的穿膜剂，可穿透外泌体并对外泌体内容物进行染色并检测，未穿膜时只能检测到跨膜蛋白CD9的荧光信号，穿膜后即可检测到外泌体内容物Syntenin的表达（如右图所示）。测试数据外泌体荧光数量统计 外泌体粒径检测荧光强度与粒径关系 荧光共定位分析 发表文章• Andras Saftics.(2021) Data evaluation for surface-sensitive label-free methods to obtain real-time kinetic and structural information of thin films: A practical review with related software packages. Advances in Colloid and Interface Science. • Kyoung-Won Ko.(2021) Integrated Bioactive Scaffold with Polydeoxyribonucleotide and Stem-Cell-Derived Extracellular Vesicles for Kidney Regeneration. ACS Nano. • Tanina Arab. (2021) Characterization of extracellular vesicles and synthetic nanoparticles with four orthogonal single‐particle analysis platforms. Journal of Extracellular Vesicles. • Niaz Z.Khan.(2021) Spinal cord injury alters microRNA and CD81+ exosome levels in plasma extracellular nanoparticles with neuroinflammatory potential. Brain, Behavior, and Immunity. • Dario Brambilla. (2021) EV Separation: Release of Intact Extracellular Vesicles Immunocaptured on Magnetic Particles. Analytical Chemistry. • Enkhtuya Radna. (2021) Extracellular vesicle mediated feto-maternal HMGB1 signaling induces preterm birth. Lab on a Chip. • Li, M., Soder. (2021) WJMSC‐derived small extracellular vesicle enhance T cell suppression through PD‐L1. Journal of Extracellular Vesicles. • Crescitelli, R. (2021) Isolation and characterization of extracellular vesicle subpopulations from tissues. Nature protocols. • Berger, A. (2021). Local administration of stem cell-derived extracellular vesicles in a thermoresponsivehydrogel promotes a pro-healing effect in a rat model of colo-cutaneous post-surgical fistula. Nanoscale. • Vidal, M. (2020) Exosomes and GPI-anchored proteins: Judicious pairs for investigating biomarkers from body fluids. Advanced drug delivery reviews. • K Cho, H Kook.(2020)Study of immune-tolerized cell lines and extracellular vesicles inductive environment promoting continuous expression and secretion of HLA-G from semiallograft immune tolerance during pregnancy. Journal of Extracellular Vesicles. • Maximillian A. Rogers.(2020)Annexin A1–dependent tethering promotes extracellular vesicle aggregation revealed with single–extracellular vesicle analysis. Cell Biology. • Annette M. Marleau.(2020)Targeting tumor-derived exosomes using a lectin affinity hemofiltration device. Cancer Research. • Alessandro Gori.(2020)Membrane-Binding Peptides for Extracellular Vesicles On-Chip Analysis. Journal of Extracellular Vesicles. • Rossella Crescitelli.(2020)Subpopulations of extracellular vesicles from humanmetastatic melanoma tissue identified by quantitative proteomics after optimized isolation. Journal of Extracellular Vesicles. • Maria S. Panagopoulou.(2020) Phenotypic analysis of extracellular vesicles: a review on the applications of fluorescence. Journal of Extracellular Vesicles.• WeiYan.(2020) Immune Cell-Derived Exosomes in the Cancer-Immunity Cycle. Trends in Cancer. • Daniel Bachurski. (2019) Small RNA Sequencing across Diverse Biofluids Identifies Optimal Methods for exRNA Isolation. Cell.用户单位 外泌体检测流程：仅需7步实现外泌体快速检测
    供应商： QUANTUM量子科学仪器贸易（北京）有限公司
    品牌： NanoView Biosciences
    价格： 面议
  • 华龛生物 细胞外泌体
    外泌体（Exosomes)是细胞外囊泡的一种，粒径大小在 30-150nm。目前主要应用于疾病治疗、药物载体、疾病诊断等。• 华龛生物生产的3D ExoTrix细胞外泌体产品在3D仿生培养环境中获得，质量高，产量大• 采用自动化、规模化、标准化的3D FloTrix® 干细胞大规模扩增培养工艺实现封闭式培养、自动化收集，单批次可实现1013个外泌体收获，同时避免了人工操作增加染菌风险• 外泌体高表达TSG101、CD81和CD63，电镜结果显示外泌体结构完整，为经典外泌体结构
    供应商： 北京华龛生物科技有限公司
    品牌： 华龛生物
    价格： 面议
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提取外泌体相关的仪器

  • 天隆科技核酸提取GeneMix Pro样品处理系统 400-696-6689
    天隆科技核酸提取GeneMix Pro样品处理系统，16分钟内可实现96份样本管信息录入、样本混匀、蛋白酶K/内参添加、开盖/关盖、样本转移、深孔板信息录入、样本管回收至样本架、将样本加载至深孔板等功能。全程自动化，将您从繁琐机械的操作中解放出来，有效提高工作效率，节省人力，保障人员安全，为医护健康智造新动力。全程自动化超强兼容性八大措施保障安全2023年“美国IDEA工业设计奖”01便捷高效从样本管信息录入到深孔板加样完成，全程自动化，96份样本16分钟内完成。02兼容性强兼容5~20mL螺旋盖样本采集管（支持单管，含拭子5混1、10混1、20混1采样管直接上机）。适配各类常规SBS规格深孔板（16T/32T/48T/96T 1mL深孔板；天隆8T 3mL深孔板)。03八大措施保障安全内置紫外灯，实验舱及废料舱独立紫外消毒全封闭设计，气压调节，形成内航负压系统定向排风，99.999%级别HEPA过滤枪头三重压力感应，排除拭子头影响警报声加三色指示灯，仪器运行状态实时监控专属废料回收区，杜绝二次污染液滴捕获技术气密性防滴落设计仪器型号GeneMix Pro最大通量96运行时间96 样本小于等于 20 分钟主要功能1. 自动开关盖（两组独立高扭矩开关盖部件、四组采样管夹紧部件）2. 样本转移、分注3. PK/IC 试剂加载4. 样本管自动混匀5. 自动信息系统，“样本-结果”全流程信息识别&传递6. 整机污染防控系统7. 自动故障处理系统适配采样管规格直径：13-26mm；高度：54-115mm兼容5-20mL螺旋盖样本采集管 支持单管，含拭子5混1、10混1、20混1采样管直接上机原管带盖上机、支持含拭子样品上样仪器预置多种常规采样管规格程序，客户可调用或增加采样管参数适配深孔板规格6×16T标准1mL深孔板1×96T标准1mL深孔板兼容3mL深孔板；3×8T 3mL大体系深孔板（天隆）仪器预置多种深孔板规格，客户可调用或增加规格移液功能两个独立移液模块、移液泵间距可调，实现深孔板按顺序逐孔加样移液范围：5 -1000μL气压式液面探测功能移液量检测功能、吸排液随液功能移液准确度5μL~50μL： Er≤3.5%50μL~200μL： Er≤2.5%≥200μL： Er≤2.0%移液精密度5μL~50μL： CV≤2.5%50μL~200μL： CV≤1.5%≥200μL： CV≤1.0%自动信息系统采样管信息扫描（一维码&二维码）深孔板状态识别（开放系统）/信息扫描（天隆系统）样本架自动条码扫描“样本-样本架-深孔板-PCR”信息关联，样本信息-结果信息闭环管理LIS系统连接整机污染防控系统实验舱及废料舱独立紫外消毒功能独立废料舱，隔绝废物污染负压功能，5pa 负压值HEPA过滤，过滤效率 99.999% at 0.3μm液滴捕捉功能机械精密运动控制高精度编码器反馈，确保机械运行准确无误运动实时监测及自动处理自动故障处理系统故障信息示警&操作提示开关盖监测及异常处理，开关盖异常不停机条码异常处理不停机移液检测异常处理系统样本管转移异常处理触摸屏12.1寸液晶触摸显示屏USB口USB 3.0网口网口尺寸1130mm（L）×780mm（W）× 920mm（H）净重200kg电源电压：100 ~ 240 V；频率：50/60HZ；额定功率：600VA温度15℃-35℃相对湿度35%RH~70%RH，无冷凝大气压范围56~106Kpa（海拔≤4000m）
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    厂商： 西安天隆科技有限公司
    品牌： 天隆科技/TIANLONG
    型号： GeneMix Pro
    价格： 30万元
  • ThermoScientific KingFisher Flex全自动核酸提取仪 400-807-5250
    仪器简介： KingFisher Flex全自动磁珠纯化系统是适于分离DNA/RNA、蛋白和细胞的全自动提取系统，本产品基于专利的KingFisher技术（专利号US 6447729，US 6448092）而设计。通过特制的磁棒吸附、转移和释放磁珠，实现样本的提取，避免了液体处理过程，提高了自动化程度。自上市以来，获得了众多客户的认可，已成为磁珠提取领域的行业金标准。 一、产品特点? 专利的KingFisher样品提取方式：采用专利的磁棒式转移磁珠，直接吸附磁珠并高度聚集于磁棒末端，通过特异性磁珠获得高纯度样品，全程无需离心或抽真空。独特的低吸附聚丙烯耗材，确保无磁珠残留，即使痕量样品的提取依然表现出色。? 快速高通量标准化：借助于专利的KingFisher磁珠转移技术，KingFisher Flex系统可同时使用96根磁棒工作，15-40min内快速完成96份样品的提取纯化，不仅极大地提升实验工作效率，而且实现了实验室样品提取流程的标准化。? 灵活的配置满足多种需求：配置兼容不同板型的多种磁头以满足各种提取需求：96DW磁头——兼容96深孔板和96浅孔板96KF磁头——96浅孔板24DW磁头——24深孔板96PCR磁头——PCR板便捷的磁头更换操作，无需任何工具，徒手即可完成。? 卓越的稳定性和重复性：特殊设计的磁套，以及针对不同工作体积优化的安全运动距离与方式，使得纯化过程中形成液封，确保孔间无气溶胶相互干扰。特制的磁棒，确保磁珠只吸附在磁棒末端，无孔间窜吸现象，避免样品间的交叉污染。? 优化的三维加热模块：针对不同板型设计的深U型凹槽嵌套式加热模块，与提取板底部完美贴合，确保每孔底部及四周均匀受热，升温迅速，从而保证加热效率。加热模块可根据提取程序的要求，在设定的控温步骤，如裂解或洗脱时，自动上升就位。? 自由开放的平台：作为一个开放的体系，不仅可以使用Thermo旗下包括Dynabeads、MagMax、Pierce、SMART Digest等磁珠试剂，还可兼容市场上其他品牌的进口和国产磁珠试剂，应用包括核酸提取、蛋白纯化、细菌富集等。配套的BindIt软件简单易学，用户可自主进行程序的编辑及优化。? 图形化界面与控制面板：彩色LCD显示屏，图形化界面，多菜单切换，程序信息、运行状态和参数一目了然。简洁易操作的控制面板。多达512个程序的预置内存空间，满足客户各种提取纯化需求。? 无限的自动化升级空间：KingFisher Flex可与自动移液工作站(Liquid Handl ing)， 如Hamilton、 Tecan等整合为一体化的磁珠工作平台，也可作为磁珠纯化单元，通过自动机械臂(Robotics)，与其他外周设备，如荧光定量PCR、封膜机、工作站等构建轨道式机器人工作站，实现更高的通量和更强大的功能平台。二、技术参数产品名称KingFisher Flex技术原理专利的KingFisher磁珠转移技术运行通量96或24样本/批磁头四种磁头可选磁棒类型末端充磁的非拼接式一体化永磁棒提取板位可放置板位数≥8工作体积20-5000μl，标准磁头:30-1000 μl 大体积磁头: 200-5000 μl磁珠回收率＞95%振荡模式低/中/高等多种上下混匀速度，底部/中部/表明等多种混匀方式操作界面LCD彩色屏幕，图形化用户界面仪器内存可储存512个程序操控模式单击独立运行；或PC端控制温控范围室温+5℃至+115℃，每个板位均具有温控功能温度准确性±1℃，up to +80℃；±2℃，up to +115℃计算机接口USB接口或串口RS-232C试剂兼容性试剂开放，兼容其他品牌磁珠试剂软件BindIt 4.0，权限开放，用户可自行编辑自动化升级可与机械臂及移液工作站一体化整合外部尺寸680x600x380mm（WxDxH）重量28kg
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    厂商： 赛默飞世尔科技生命科学产品
    品牌： Thermo Scientific
    型号： KingFisher Flex
    价格： 面议
  • 天隆科技Npex 192全自动核酸提取仪 400-696-6689
    天隆科技Npex 192全自动核酸提取仪是天隆科技匠心推出的一款体积小、通量大、高精度运行、便捷性操作的全自动核酸提取仪。该产品采用震荡式磁珠法提取技术，8位矩阵式深孔板位排布，协同平移、震荡、磁吸、防滴液电机和裂解、洗脱双功能温控模块，快速实现核酸的高质量纯化与富集。超高通量 操作便捷提取快速 温控高效紧凑型设计 断电保护污染控制高效 01超高通量 提取快速一次性可以处理192份样本的核酸提取，适配1mL规格96孔深孔板，高效应对大规模样本的检测工作。提取时间短，约10分钟即可完成192份的核酸提取，实现平行样本的高通量处理，为下游检测快速提供高质量核酸。02控温高效 提取效率高裂解、洗脱双功能温控，室温～120°℃的精准温控范围，以适配更多试剂程序，为样本核酸纯化提供热学保障。搭配相应提取试剂重复20次进行新冠样本核酸提取，与同类某品牌产品提取效率相比，Npex 192提取核酸对应两个目标基因检出率都是，明显优于同类某品牌产品。03操作便捷 紧凑型设计配备7英寸彩色液晶触控操作屏，触控灵敏；一键操作，仪器内置扫码器自动扫描识别提取程序并运行。深孔板8位矩阵式排布，Z轴机械臂短运动轨迹设计，在市面上相同通量产品中体积，既满足一次性处理高通量样本的需求，又解决实验室空间有限的问题。04重复性好 精密度高以提取肠道样本RNA核酸为例，用Npex 192提取后进行荧光定量RT-PCR检测，用相同的条件提取扩增10次，进行重复性测试，得出重复性CV值=0.9%，实测显示Npex 192重复性好，精密度高。仪器型号Npex 192样品通量1~192处理体积30~1000pL磁珠残留量≤1%温控范围裂解、洗脱双功能温控，温控范围：30~120℃振荡混合多模式8档可调试剂种类磁珠法提取试剂（96T/板）操作语言内置中/英文两种操作语言，可自由切换操作界面7英寸彩色液晶屏触控操作程序管理可灵活新建、编辑、应用及删除相应程序二维码扫描内置扫码枪、一键操作，自动扫描识别应用程序并运行运行监控可视化监控核酸提取阶段及进度实验存储可存储10000组程序，可存储100000条实验记录，可存储100000条实验日志污染控制1.负压HEPA排气过滤模块2.紫外消毒模块3.防滴液板设计自动关机紫外消毒后，自动关机断电保护意外断电再供电时，可自由选择是否继续运行实验计算机接口USB网络通讯可扩展以太网远程控制产品外形尺寸710mmx535mmx515mm（LxWxH）重量55kg电源电压AC 220V，50Hz环境温度10℃~30℃相对湿度≤80%
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    厂商： 西安天隆科技有限公司
    品牌： 天隆科技/TIANLONG
    型号： Npex 192
    价格： 20万元
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    【原创大赛】新型外泌体分离方法

    [align=center][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]新型[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]外泌体分离方法[/color][/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]肿瘤细胞来源的外泌体在分子水平上促进肿瘤的进展、侵袭和转移。因此，在探索细胞间信号传导，分析功能分子成分（蛋白质、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mRNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]microRNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）前需要有效的检测和分离肿瘤源性外泌体的能力，这可能为癌症诊断和预后提供关键信息。[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][color=#000000]1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]基于尺寸排阻的外泌体分离技术[/color][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]外泌体是直径在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]30-200 nm[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的囊泡，其尺寸小于绝大部分的细胞外囊泡，因此，基于这一特性，可利用具有限制相对分子量或大小的过滤器来分离外泌体。目前，最常用的基于尺寸的外泌体分离技术就是超滤离心法。该方法是一种基于悬浮颗粒或聚合物大小的外泌体分离技术，小于膜孔径的物质会通过过滤膜，大于膜孔径的物质被截留在膜上。超滤法比[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]UC[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]速度更快，且不需要特殊的设备，已有研究表明该方法可以成功从[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0.5 mL[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]尿液中分离外泌体。[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]目前已经开发了一种适合无细胞样品的商用外泌体分离试剂盒，兼具外泌体分离和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]提取的功能。如图所示，该试剂盒利用注射过滤器双层膜结构，当样品通过两层膜时，较大的细胞外囊泡（如凋亡小体和微囊泡）被保留在上层膜上，而外泌体捕获在下层膜上。与[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]UC[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和外泌体沉淀法相比，超滤法从尿液中获得的外泌体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]产量最高。该方法的主要缺点在于分离的外泌体容易堵塞过滤膜，导致分离效率下降。此外，该方法可能会导致囊泡的变形和破裂，影响下游分析的结果。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]另一种基于尺寸的外泌体分离方法是尺寸排除色谱法[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]SEC[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。该方法利用多孔固定相将悬浮颗粒和聚合物按照大小进行分类[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]流体动力半径小的物质能够通过孔隙，而流体动力半径较大的物质会被截留在孔隙上。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]此外，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]该方法结合其他方法使用可取得更好的效果[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]例如，与单纯的超滤法或[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]UC[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]相比，该方法分离的外泌体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]结合[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]后续超速离心可以[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]提高[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]尿外泌体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的捕获效率[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，从而有利于寻找肾脏疾病生物标志物。该方法分离外泌体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]主要[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]缺点在于干扰物多[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]孔隙极易堵塞，导致色谱柱重复率低，分离效率较低。[/size][/font][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108012209419773_3887_5111497_3.png[/img][/align][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman']1-3[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']连续过滤原理图[/font][font='times new roman'][size=13px][68][/size][/font][/align][align=center][font='times new roman']Figure [/font][font='times new roman']1-[/font][font='times new roman']3[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']Schematic illustration of sequential filtration[/font][font='times new roman'][size=13px][68][/size][/font][/align][align=center][/align][font='times new roman'][color=#000000]2[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]基于聚合物沉淀的分离技术[/color][/font][font='times new roman'][size=16px]聚合物沉淀[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]技术是通过添加水性聚合物使外泌体溶解度或分散性改变，减少外泌体的水合作用，使外泌体沉淀以达到分离的技术。通常使用分子量为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]8000 Da[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的聚乙二醇（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PEG[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）与样品共孵育，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]℃过夜后，用低速离心或过滤法分离含有外泌体的沉淀物。目前，已开发了一系列聚合物沉淀试剂盒可用于体液和培养基中外泌体的分离。聚合物沉淀分离外泌体的方法易于使用、回收率高，且不需要专门的设备。该方法的主要缺点在于容易引入蛋白质和聚合物材料等其他污染物，使得提取的外泌体纯度较低。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000000]基于免疫亲和的分离技术[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]外泌体磷脂双层膜中含有丰富的蛋白质和受体，如[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD81[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD63[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]TSG101[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、上皮细胞粘附分子等，利用这些受体与配体之间的相互作用，使外泌体与特殊设计的磁性颗粒之间建立免疫亲和作用，可用于外泌体的分离富集。例如，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Zarovni[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]等报道了一种基于微孔板的酶联免疫吸附试验（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]ELISA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）用于捕获和定量检测外泌体。尽管与[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]UC[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]产量相当，但是该方法具有快速、易于使用和与常规设备兼容的优势。该报道继续开发了一种基于磁免疫捕获的外泌体分离试剂盒用于从细胞培养基和生物液中分离外泌体，其质量和纯度均优于其他技术。此外，这种方法对样品的初始体积没有要求，可以很容易地缩小或增大样品容量。而该技术主要缺点在于缺乏最佳的外泌体标志物。此外，随着肿瘤的进展，肿瘤抗原表达和调节的异质性可能导致低估和假阴性，并且有些抗原表位可能被阻断或掩蔽。[/size][/font]

  • 【原创大赛】外泌体蛋白质的提取

    [align=center][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]外[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]泌[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]体蛋白质的提取[/color][/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]RIPA[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]裂解液的配置：正常购买的裂解液中分别加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.1%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]和[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]8%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]SDS[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，配置系列[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]RIPA[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]裂解液。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）将提取的外[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]泌[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]体溶液加入等体积的蛋白裂解液在[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]冰浴[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]上[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]进行裂解。为了使其充分裂解，每[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]振荡一次，共裂解[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]50 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。随后加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]×[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]蛋白变性缓冲液[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]100[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃煮沸[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，将变性的蛋白样品放入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-20[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]冰箱中保存备用。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]蛋白浓度的测定[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]首先，将上述外[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]泌[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]体裂解后的蛋白原液于[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃以[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]12000[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]rp[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]m[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]离心[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]15[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，弃去沉淀。取[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]15[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]μ[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]上清液与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]45[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]μL[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] PBS[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]缓冲液混合（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]稀释[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]倍[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）配置蛋白稀释液[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。然后用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PBS[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]缓冲液稀释[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]BSA[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]标准蛋白溶液，配制终浓度为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]mg[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]/mL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.025[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]mg[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]/mL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.05[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]mg[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]/mL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]mg[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]/mL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]mg[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]/mL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]mg[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] /mL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]mg[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]/mL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.5mg[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] /mL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]溶液[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。以[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]A[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]液：[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]B[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]液[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]=50[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]：[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的浓度配制工作液。最后，将上述[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]配制好的标准蛋白和蛋白稀释液[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔板中，每孔加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]200[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]工作液，设置[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]个复孔，吹打混匀，避免出现气泡。将锡箔纸覆盖的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔板放入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃恒温箱孵育[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]30[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。酶标仪的检测[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]波长设置为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]562[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]nm[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，检测各孔的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]OD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]值。根据酶标仪算出的标准蛋白拟合曲线计算蛋白原液的浓度。[/color][/size][/font][align=left][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]Western blotting[/color][/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]分离胶的配置[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]将玻璃板清洗干净后组装起来，加入适当的三蒸水，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]20 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]后，观察液面是否下降，来检查装置是否紧密。待玻璃板干燥后按比例配置分离胶：[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]mL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]去离子水；[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3.3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]mL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]30%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]丙烯酰胺；[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2.5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]mL [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]p[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H=8.8 Tris-HC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]l[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]；[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]100[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]SDS[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]；[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]100[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 10%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]APS[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]；[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] TEMED[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。将分离胶混匀后加入玻璃板中，在该过程中应避免产生气泡，随后在玻璃板中加入适量的酒精压平界面，待[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]30-40 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]后，分离胶凝固，倒掉上层酒精。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）基层胶的配置[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]待玻璃板干燥后加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]已[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]配置好的基层胶（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2.7 mL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]去离子水；[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]670[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 30% PAGE[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]；[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]500 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]p[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H=6.8 Tris-HC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]l[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]；[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]40 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 10%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]SDS[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]；[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]40 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 10% APS[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]；[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] TEMED[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]），立刻插入梳子，避免产生气泡，等待基层胶凝固。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]电泳[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]清洗并组装电泳装置，固定[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]SDS-PAGE[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]凝胶，倒入配置好的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]×电泳缓冲液[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]14.4 g [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]甘氨酸，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3 g Tris[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1 g SDS[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，加入去离子水，搅拌溶解，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]定容至[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1000 mL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）。拔出梳子，用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]20[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url][/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]吹打每个[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]加样孔以[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]去除杂质，用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]40 V[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]电压电泳[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]20 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]疏通每个泳道，关闭仪器。然后按照试验要求加入变性后的目的蛋白和[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Marker[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，样品的两边可以加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]×[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]上样缓冲[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]液进[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]行补齐。打开仪器开关，将电压调至[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]60 V[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]进行电泳，当溴酚蓝到达基层胶和分离胶的连接处，将电压调整到[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]90 V[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]继续电泳，直至溴酚蓝跑到接近底部。电泳结束后，拆除装置，取出凝胶，切除多余的部分备用。如需考马斯亮蓝染色，将凝胶放入考马斯亮蓝染色液中，摇床振荡[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]30 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]后，用蒸馏水洗涤[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]次后放入洗脱液中进行洗脱。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]转膜[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]配置[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]×[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]转膜缓冲[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]液（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]14.4 g [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]甘氨酸，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3 g Tris[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]150 mL [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]甲醇，加入去离子水，搅拌溶解，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]定容至[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1000 mL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）。将适当大小的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PVDF[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]膜放入甲醇中激活[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，随后放入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]转膜液[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]中。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]转膜夹[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]白色面朝下放入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]转膜液[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]中，然后放入泡沫层、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]层滤纸、激活后的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PVDF[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]膜、切好的胶、三层滤纸和最后一个泡沫层。在上述过程中应保证每层均无气泡存在。将装置[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]放入转膜槽中[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]转膜液[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]中可以加入小冰袋，防止[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]转膜过程[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]中温度过高。将装置放入冰盒，恒流[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]200 mA[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]进行转膜，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]转膜时间[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]由目的蛋白的分子量所决定。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]封闭和免疫反应[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]转膜结束[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]后，将膜和含[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5% BSA[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TBST[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]溶液放进封闭盒中，室温[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]摇床慢摇[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。随后[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TBST[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]洗[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]次，每次[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。配置适合比例的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]一[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]抗溶液，将膜放入其中，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃摇床孵育过夜。第二天，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TBST[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]洗[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]次，每次[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，在室温下摇床[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孵育二抗[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，随后[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TBST[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]洗[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]次，每次[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]6[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]显影[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]避光配置[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ECL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]发光液。将发光液滴加到膜上，避光孵育[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，放入预冷后的发光板上，调整膜的位置，用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]BIO-RAD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]凝胶成像仪显影并拍照。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体的成功捕获进一步通过[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Western blotting[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]进行验证。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]HSP70[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD63[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]TSG101[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD81[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]是四种典型的普遍存在的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体标记蛋白。通常这些蛋白在整个细胞上清裂解液中的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]表达水[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]平极低。然而，通过所开发的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Tim4@ILI-01[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]免疫亲和材料富集后，这四种蛋白质均可以被显著识别（图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3-7[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）。以上结果进一步表明所开发的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Tim4@ILI-01[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]免疫亲和材料可用于成功捕获外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体。[/size][/font][table][tr][td][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108012201079391_8222_5111497_3.jpeg[/img][/align][/td][/tr][/table][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman']1[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']培养基中外[/font][font='times new roman']泌[/font][font='times new roman']体特异性蛋白质[/font][font='times new roman']HSP70[/font][font='times new roman']、[/font][font='times new roman']CD63[/font][font='times new roman']、[/font][font='times new roman']TSG101[/font][font='times new roman']和[/font][font='times new roman']CD81[/font][font='times new roman']的[/font][font='times new roman']Western blotting[/font][font='times new roman']结果[/font][/align]

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  • 【聚焦外泌体】之从细胞培养上清液中分离外泌体的准备
    对于外泌体研究的新手来说，细胞培养上清液是非常好的实验材料，外泌体相对容易收集。我们可以首先从细胞上清开始来熟悉整个外泌体的研究流程，充分了解整个流程需要使用的仪器、试剂以及准备时间，对我们后续的实验安排有很大帮助。其中比较重要的一点是要确定有足够的初始细胞上清液来收集外泌体，以保证我们能够拿到足够多的蛋白、核酸来进行后续分析。我们可以逆向思维，通过后续检测所需蛋白/核酸量——外泌体量——细胞上清量，来确定初始细胞上清体积。先从细胞上清开始，熟悉了整个过程后，我们再进行其他相对较难的实验材料进行研究。01细胞系选择无论贴壁细胞或是悬浮细胞，能分泌更多外泌体的细胞系肯定是优先选择的。一般说来，肿瘤细胞的外泌体分泌水平要高一些，但并不是所有肿瘤细胞系都能分泌足够多的外泌体，我们可以借鉴文献中的细胞系推荐1。以常用基因转染的HEK293为例，是比较公认的分泌外泌体水平较高的细胞系。或者，以每100ml的细胞上清收集到的外泌体蛋白可达到5~20μg范围作为标准2，例如我们可以从100ml的细胞上清中获得10μg的外泌体蛋白，如果后续要做蛋白质组学分析（需50μg蛋白），那么初始细胞上清就需要扩大到之前的5倍，500ml，500ml上清差不多是通过离心方法可处理的大样品量了。如果后面收集到的外泌体蛋白都不够进行一次WB，那就要考虑一下是不是要换个细胞系了。如果外泌体蛋白小于3μg，那么考虑到扩大体系的实验难度和后续实验的顺利进行，那证明我们用的细胞系不太合适做外泌体研究。*虽然很多生物样品或是细胞系在文献中没有出现过，许多外泌体相关的数据库（ExoCarta, Vesiclepedia, Evpedia等）可以提供帮助，在上面我们可以查到有哪些细胞系已经有人成功进行外泌体提取了。或者也可以咨询一些做外泌体的生物公司，看看他们是用哪些细胞系来制备商业化的标准外泌体样品的。02优化细胞培养条件及细胞系选择影响外泌体质量和回收率的另外一个重要因素是在收集之前细胞的培养状态。好的收集时间段是细胞状态好、生长旺盛，即处于对数期的细胞3，并且在细胞传代之前收集细胞上清，这个时候细胞所分泌的外泌体量达到高4。准备好的细胞上清液，细胞密度也要适合，贴壁细胞如果细胞密度过高会出现接触抑制，对所分泌的外泌体也会有影响。所以，理想的条件是在细胞融合达到70%~80%后的40~48h后收集外泌体（此时约融合至90%）。要注意，为了避免FBS外泌体的污染5，收集外泌体的40~48h之前需换成无血清培养基，注意此时40~48h仅作为推荐参考。像有些细胞在无血清培养基培养24h后没有发生存活率和细胞形态改变，那么可以进行上清收集。如果出现死细胞增加、细胞形状改变、状态变差等情况时，使用EV-delepted FBS培养基来代替无血清培养基，EV-delepted FBS可以直接购买也可以自己制备（使用SW 41Ti转头在4℃，35,000rpm(Rmax 210,000 ×g)离心16h后小心收集上清）。但是这样仍无法完全避免血清外泌体的污染，需要清楚样品中血清外泌体的含量，增加一组没有培养细胞的培养基的平行样品作为阴性对照是必要的。03外泌体的提取方法目前被大家认可的方法就是超速离心，因为超离的方法可以收集到完整的细胞外囊泡群，并且几乎所有的实验材料（细胞上清、血液、体液等）都可以通过超离的方法来进行外泌体提取。当然超离的方法也有需要改善的地方，比如样品量很小的情况下，超离对外泌体的回收率不高，但是超离作为一种物理分离的方法，可以在不破坏外泌体群体特性的情况下进行分离的。当前，除了超离外还有许多外泌体分离方法，每种方法都有它的优势和劣势，首先我们需要理解各种分离方法的原理和特点，再根据我们的实验需求才能找到合适的外泌体提取方法。超离方法是可以获得整个外泌体群体，适合于研究整个外泌体群体特性。Yoshioka博士：众多外泌体分离方法中，我们使用超离沉降的方法作为实验室提取外泌体的标准方法5（见下图）。这个Protocol主要包括三个步骤：1.小心收集细胞上清并低速（4℃，2,000xg，10分钟）去除悬浮细胞（死细胞）。2.用0.22μm孔径过滤器过滤上步中收集到的包含外泌体的上清液，去除大颗粒和细胞碎片。3.将上步中的滤液进行超离处理，使用贝克曼库尔特SW 41Ti水平转头、13.2ml超净离心管（Product Number:344059，Beckman Coulter），4℃下35,000rpm(Rmax 210,000xg)离心70分钟。离心过后外泌体在离心管底聚集成沉淀，通常是肉眼不可见的。然后用预先过了0.22μm孔径过滤器的PBS进行清洗，洗掉与外泌体一起沉降的成分，例如微颗粒和蛋白。小心倾倒掉第3步超离后的上清，残留少量液体进行2~3s的涡旋振荡重悬沉淀，然后加入PBS，重悬后的样品同样的条件再进行一次超离。再次超离过后的外泌体仍然需要重悬，倾倒掉上清后，再进行2~3s的涡旋振荡重悬，这时的外泌体样品就可以进行下步分析了。从离心管中转移外泌体样品到储存管（比如1.5ml微量离心管）时，在吸取时我们可以用移液枪先大概测量一下样品体积，后面在储存管中补充PBS到我们之前预估的样品体积，比如，我们想收集到100μl的外泌体样品，但是从离心管中转移到微量管中只有80μl（注意：使用13.2ml超净离心管，平均下来每次收集到的外泌体样品大概80μl），我们加20μl PBS到微量管中再混匀一下就可以保存了。外泌体样品可以在4℃保存，并且要尽量早的用于分析。另外，外泌体样品是不能反复冻融的，与细胞类似，反复冻融过程会破坏外泌体。现在大家普遍认为外泌体是具有异质性的，整个外泌体群还可以细分为亚群（例如尺寸、蛋白表达等），不同的亚群也具备不同的特性，正如前文所说，通过超离的方法可以收集完整的外泌体群体。也有些文献也报道过使用不同的离心条件，可以将尺寸大小不同的外泌体亚群分开。目前，还没有特别统一的外泌体超离提取步骤，像转头类型、离心管类型、离心力以及离心时间等离心条件在不同的文献上都会有些许的差异。04参考文献1. Yokoi A. In Takahiro Ochiya, Yusuke Yoshioka. Exosomes encourage the medical innovation. Kagaku-Dojin Publishing Co., 2018 p.122-134 [Article in Japanese]2. Valadi H et al. Nat Cell Biol. 2007 9(6): 654–6593. Beckman Coulter. Interview article: Basics and Vision of Exosome Research. 20154. Urabe F et al. Clin Transl Med. 2017 6(1): 455. Yokoi A. In Takahiro Ochiya, Yusuke Yoshioka. Exosomes encourage the medical innovation. Kagaku-Dojin Publishing Co., 2018 p.122-134 [Article in Japanese]
    时间： 2019-09-04
    作者： 北京德泉
  • 国家纳米中心在肿瘤外泌体microRNA高灵敏检测方面取得进展
    p　　近日，国家纳米科学中心孙佳姝课题组在肿瘤外泌体microRNA高灵敏检测方面取得新进展。相关研究成果“Thermophoretic Detection of Exosomal microRNAs by Nanoflares”于 2020年3月在线发表于《美国化学会志》(J. Am. Chem. Soc. 2020, DOI: 10.1021/jacs.9b13960)。/pp　　外泌体是由细胞分泌的含有蛋白质与核酸等生物大分子的纳米尺度(30-150 nm)脂质囊泡，通过运输活性分子参与细胞通讯，是肿瘤液体活检的靶标之一。microRNA是一种长度约为22核苷酸的非编码单链RNA。肿瘤细胞中高表达的microRNA会被包载在外泌体中，参与肿瘤增殖与转移，是新型肿瘤诊断标志物。现有的外泌体microRNA检测方法面临外泌体microRNA含量低、样本消耗量高以及需要RNA提取等挑战。因此，发展微量样品中外泌体microRNA的高灵敏检测新方法对癌症早期诊断具有重大意义。/pp　　在前期工作中，孙佳姝课题组利用热泳富集与核酸适体标记，实现了细胞外囊泡表面蛋白组测量和癌症分类(Nat. Biomed. Eng. 2019, 3, 183-193, J. Am. Chem. Soc. 2019, 141, 9, 3817-3821, Adv. Mater. 2019, 31, 1804788)。在此基础上进一步开发了结合纳米耀斑(nanoflare)与热泳的检测新方法，实现了0.5 μL血清样本中外泌体microRNA的高灵敏检测，检出限低至0.36 fM，接近qRT-PCR。纳米耀斑通过被动输运进入外泌体后，可以特异性识别靶标microRNA并产生荧光信号。外泌体在热泳作用下快速汇聚，有效放大其中纳米耀斑产生的荧光信号，提高外泌体microRNA的检测灵敏度。临床血清样本中，外泌体肿瘤相关microRNA表达信息可以用于ER+乳腺癌的早期诊断。与常规检测手段相比，该方法灵敏度高，样本消耗量小，排除了非外泌体microRNA的干扰，为外泌体microRNA检测与癌症早期检测提供了新思路，新工具。/ppbr//p
    时间： 2020-03-10
    作者： 常用仪器-非坤
  • “干细胞外泌体质量控制标准”又一团标上线
    干细胞衍生的细胞外囊泡(stem cell-derived extracellular vesicles, SC-EVs)作为一种“无细胞的干细胞疗法新秀”，已在多种疾病中表现出显著的治疗效果。与传统干细胞移植相比，SC-EVs结构组成简单，不存在免疫排斥、成瘤等干细胞移植风险，表现出更高的治疗安全性。根据全球市场报告，到2030年全球外泌体市场预计将达到10.3亿美元，其中干细胞外泌体相关的研究和产业化稳坐C位。Clinical Trials搜索结果显示，目前全球已有167项注册在案的外泌体相关疗法的研究，其中31项围绕干细胞来源的外泌体所开展，覆盖呼吸道疾病、传染病及肿瘤等多个方面。EVs的高度复杂性和异质性，导致其临床转化和工业生产仍存在着诸多亟待突破的瓶颈。国际细胞外囊泡协会联合领域内300多位专家发布研究指导——Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018(MISEV2018)，以规范化该领域内相关研究并给予研究者们相关实验指导；此外，FDA也发布了关于干细胞和外泌体产品的公共安全公告，强调了基于SC-EVs治疗的标准化及其法规建立。对于SC-EVs研究来说，分离与鉴定、质量控制等环节仍存在不同程度的分歧和争议，尚缺乏统一标准。为了推进SC-EVs在疾病治疗领域的研究与应用，2022年1月1日，中国研究型医院学会细胞外囊泡研究与应用分会围绕SC-EVs制定了两项全国团体标准——《人多能干细胞来源的小细胞外囊泡》(T/CRHA 002-2021)和《人间充质干细胞来源的小细胞外囊泡》(T/CRHA 001-2021)正式发布启用。其中，厦门福流生物(NanoFCM Inc.)自主研发的纳米流式检测技术被正式纳入其中，作为SC-EVs的重要表征标准。 上海市生物医药行业协会依据协会团体标准管理办法规定，结合国内外研究进展和参编单位的实践经验，制定了《间充质干细胞外泌体质量控制标准》（T/SBIAORG 001-2023），并于2023年3月27日起正式实施，以进一步推动SC-EVs相关技术的落地、建立行业标准、规范行业发展并为研究人员提供指导！该团体标准规定了间充质干细胞外泌体的质量控制方法，适用于间充质干细胞外泌体的制备、储存、运输和应用等多个环节的质量控制。 在该标准中，纳米流式检测技术承担了外泌体粒径、浓度和表面标志蛋白表征的重要角色，具体操作方法详见标准（标准文件点击链接下载）：https://pan.baidu.com/s/12qLuckmS-zi2Ft1w9iDPQw?pwd=w9zg （提取码：w9zg）扫描二维码获取厦门福流生物科技有限公司自主研发的纳米流式检测仪覆盖了传统流式200 nm以下的检测盲区，除了外泌体，在核酸药物、病毒、细菌等天然及合成纳米粒子多维表征均有应用，具有快速、高通量、多参数等优势。目前客户遍布全球顶级研究机构和制药企业。为了更好的服务外泌体领域客户，2022年Q2我们全新发布了外泌体解决方案，涉及外泌体粒径分布、颗粒浓度，生化性质等多参数表征，可在纯化方法评估、质量控制、载药策略选择及疾病诊断等场景下应用。EVers福利为了庆祝NanoFCM进入新的干细胞外泌体团体标准，打通了流式进入干细胞外泌体临床和产业化质控之路，我们计划为20个干细胞外泌体临床研究和产业化的客户提供限时限量的免费检测，活动时间：即日起——5月31日，可扫码添加下方微信号，向NanoFCM客服获取测样申请表。（注：活动解释权归厦门福流生物有限公司所有）
    时间： 2023-04-23
    作者： 福流生物
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