RTS BL21(DE3)Chaprone助溶表达感受态
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1331-10T | 10T | RTS BL21(DE3)Chaprone助溶表达感受态 |
产品介绍:
描述:BL21(DE3) Chaprone 感受态细胞中含有分子伴侣蛋 白质粒,其表达产物可协助重组蛋白正确折叠形成可溶活性 蛋白。分子伴侣蛋白质粒为氯霉素抗性(chloramphenicol, Cmr)的表达受控于四环素(tetR)操纵子,因此该感受态 不适用于氯霉素抗性表达质粒的转化。 本品使用 独有的化学感受态专利技术制备, 其室温可保存 3 天、-20°C 可保存 2 年(推荐保存温度)、 -80°C 可长期保存性能无下降。运输过程中无需干冰,可常 规冰袋运输(推荐运输温度)。该感受态细胞为热激感受态 细胞,转用于蛋白表达(不可用于克隆和载体构建),经 42°C 热激 1min 可获得 105~106 cfu/μg 效价,可满足质粒转化要 求。该制品使用简单、运输、储存方便。
组分
RTS BL21(DE3)Chaprone Competent Cell(10T) 1 瓶
Nano E.coli Transfection Reagent 1 mL
储存:RTS 系列感受态为干粉形式,均可室温保存 3 天,长期保存-20°C(2 年)。经 Nano E.coli Transfection Reagent溶解后的感受态必须分装后,并于-60°C 以下保存。溶解后的感受态细胞避免反复冻融,在-60°C 以下可保存 6 个月。
操作方法:
1. 从-20°C 冰箱中取出 Nano E.coli Transfection Reagent彻底融化,放置于冰上。取 300 μl Nano E.coli TransfectionReagent 加入到一支冻干感受态细胞中,并分装到 10 支 1.5ml EP 管中(每支 30 μl),于-60°C 以下保存(或立即使用)。
2. 将 10~100 ng 质粒 DNA(不可使用连接产物、不可使用氯霉素筛选标记质粒)加入到分装的感受态细胞中,轻弹EP 管(或枪头轻轻吹打),置于冰上 15min。
3. 置于 42°C 热激 1 min 后,迅速置于冰上急冷 2 min。
4. 热激完毕后,向上述感受态细胞中加入 450 μL 不含抗生素的 SOC(或 LB)培养基,37 °C 振荡(225 rpm)培养60 min。使质粒上抗性标记基因表达,菌体复苏。
5. 取200 μl复苏菌液涂布到含相应抗生素的LB琼脂平板表面。(含相应质粒抗生素和 20 μg/ml 氯霉素)
6. 将平板置于 37 °C 培养,12~18 小时后可出现菌落。
7. 挑选生长良好的菌落,接入 LB 培养基(含相应质粒抗生素,20 μg/ml 氯霉素),37 ℃剧烈振荡培养过夜。
8. 1/50 比例接入新的 LB 培养基(含相应质粒抗生素,20μg/ml 氯霉素,0.5 mg/ml L-阿拉伯糖)37 ℃剧烈振荡培养至菌体密度 OD600 约 0.3(约 2h)。
9. 加入终浓度 2 ng/ml 四环素(诱导 chaprone 伴侣蛋白表达),37℃剧烈振荡培养至 OD600 约 0.5(约 2~4h)。
10. 加入适量 IPTG(0.1-1 mM), 15℃振荡培养 24h(培养摇床无法制冷条件下,室温诱导 8~12h)。
11. 4,000 rpm 室温离心 15 min,收集细胞,进行蛋白表达和可溶性表达分析。![1.png 1.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/6c3845b4-40f6-4da9-9255-cd3d60482c38.jpg)
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![6.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/62851bc5-3a8d-40e2-a984-d347a9c64d3e.jpg)
![7.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/1321522b-6687-4131-a7b4-7a74974aa01c.jpg)
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
公司正在出售的产品:
小鼠凋亡相关因子(FAS/CD95)elisa检测试剂盒免费代测 | 乳腺癌抗雌抵抗蛋白2抗体 Anti-TReP132/RAPA |
大鼠Ras相关蛋白Rab-11A elisa检测试剂盒 | 磷酸化6磷酸果糖激酶2抗体 Anti-Phospho-PFK2 (Ser467) |
猴超敏C反应蛋白(hs-CRP)elisa检测试剂盒 | 磷酸化磷脂酰肌醇激酶PIK3-γ抗体 Anti-phospho-PIK3 gamma (Ser1101) |
HRP标记抗体稳定/稀释溶液 | T细胞激活蛋白6E抗体 |
组织短链羟脂酰脱氢酶(HYDROXYACYL COA DEHYDROGENASE)活性比色法定量检测试剂盒 | LY6E/Stem cell anti 2 |
双试剂直接法分光光度计 100ml | 信号肽肽酶SPP抗体 Anti-SPP/Signal Peptide Peptidase |
溶质载体家族蛋白20成员A1抗体 SLC20A1 | OR5AP2 |
三聚氰胺单克隆抗体 Melamine(1B12) | 嗅觉受体5AP2抗体 |
信号通路Wnt2B抗体 Anti-WNT2B | BTC ELISA Kit |
NIFK蛋白抗体 Anti-NIFK | 肺表面活性蛋白B抗体 Anti-SP-B |
环指蛋白180抗体 Anti-RNF180 | 大鼠β细胞素(BTC)elisa分析检测试剂盒 |
/睾丸抗原2.4抗体 BAGE4 | 周期素A1蛋白抗体 Cyclin A1 |
人黑色素瘤相关抗原D4(MAGED4/MAGED4B)elisa分析检测试剂盒 | 磷酸化α-连环蛋白抗体 phospho-CTNNA1 (Ser641) |
HumanMAGED4/MAGED4BELISAKit | Bax单克隆抗体 Bax |
磷酸化Bcl-xL(Ser62)抗体 phospho-Bcl-xL (Ser62) | RTS BL21(DE3)Chaprone助溶表达感受态含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族8抗体 ASB8 |
CCDC44/卷曲螺旋结构域蛋白44抗体 FLJ36733 | 骨骼肌细胞线粒体膜蛋白PARL抗体 PARL |
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