RAPA3G植物组织直扩PCR试剂盒

RAPA3G植物组织直扩PCR试剂盒

商品属性：

 产品介绍：

描 述 ：

RAPA3G DNA 聚合酶为经电子重构架的第三代 Taq DNA 聚合酶，第三代 DNA 聚合酶具有高度的杂质耐受性、 长片段扩增能力、高扩增成功率、高产量，这些特点使得 RAPA3G 系列产品可用于粗制样品的直接扩增，无需核酸纯 化步骤。该 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、5’-3’的外切 酶活性、3’-5’的外切酶活性，产物部分带有”A“尾巴，部 分为平末端，因此产物可用于 TA 克隆或平端克隆。 

特点和用途：

（1）高杂质耐受性：该 PCR Mix 可直接使用多糖多酚含量极高的叶片等材料进行 PCR 扩增，无需基因组提取。
（2）高效的快速 DNA 释放剂：尽管该 PCR Mix 可以直接使用叶片进行扩增，但我们仍然推荐采用 DNA 释放剂进行样本的快速前处理（约需要 5min，可高通量操作）。DNA 释放剂的前处理，使得制备的 DNA 模板可以进行多次、多基因扩增，并长期保存植物 DNA，经 DNA 释放剂处理的样本，在室温条件下放置 1 个月，无任何后续影响，-20 可长期保存。
（3） 快速 PCR：该酶具有 6kb/min 以上的扩增速度，可显著的缩短 PCR 的扩增时间，在常规测试条件下，10s 的延伸时间可完成 1kb 的基因组 DNA 扩增。
（4）粗制样品的扩增能力：扩增能力>1.7kb。
（5） 高保真性能：该制品包含一定比例的 RAPA HiFi 超保真 DNA 聚合酶，因此其具有一定的保真性能（经蓝白斑测试，其保真性能约为 Taq DNA 聚合酶的 56 倍）。
（6）热启动，防止非特异性扩增：RAPA3G 系列产品均采用 专有的热启动技术，确保 50 度以下完全无活性，仅有 95 度加热 5min 以后才能恢复其活性，因此可最大限度的提高扩增的特异性，减少非特异性产物的产生。
包装：
2×RAPA3G PCR Mix (with Dye) 1mlX2
快速 DNA 释放剂 A 20 ml
快速 DNA 释放剂 B 20 ml
储存：长期储存置于-20°C 以下，可保存 2 年；短期使用置于 4°C（3 个月）保存。
使用方法
1. DNA 释放
（1）采用加热法：取 2-3mm 直径叶片（白 Tip 头上沿大小）、1-10mg 果实等材料，放入到 0.2ml EP 管中，加入 50 μl 快速 DNA 释放剂 A，于 PCR 仪中 98°C 加热 5min，加热完毕后加入 50 μl 快速 DNA 释放剂 B，混合均匀，即可使用。
（2）采用钢珠研磨法：取 2-3mm 直径叶片、1-10mg 果实等材料，放入到 2ml EP 管中，加入 250 μl 快速 DNA 释放剂 A 和 2-3 粒钢珠，研磨 1-2min 成浆体装。研磨完毕后加入 250 μl 快速 DNA 释放剂 B，混合均匀，即可使用。
2. 按下表配制 PCR 反应体系并混合均匀：
2×RAPA3G PCR Mix (with Dye) 25 μl
上游引物(10 μM) 2 μl
下游引物(10 μM) 2 μl
步骤 1 制备的模板 DNA 2 μl
ddH2O 19 μl
注意：当扩增片段>5kb 时，引物用量调整为 0.25-0.5μl。
3. PCR 扩增循环参数
循环数 温度 时间
预变性 95°C 5min
25-40 Cycles
95°C 20s
50~60°C 20s
72°C 4-6kb/min
末延伸 72°C 2min
请注意：（1）该制品为热启动制品预变性步骤 5min 不可缩短，否则 DNA 聚合酶无法恢复活性。（2）当扩增片段<1kb时，延伸时间使用 15s；扩增片段 1-2kb 时,延伸时间使用45s，扩增片段 2-3kb 时,延伸时间使用 1min，当扩增片段>3kb 时，请按照 2kb/min 的延伸时间进行设置。(3)尽管该酶具有 6kb/min 的延伸速度，但按照 2kb/min 设置延伸时间的条件下，能获得最高的产量。
3. 注意事项：(1) 当模板 GC 含量>70%时，请添加5× Q-Solution（Cat. No.: A3002）。(2)当采用全血、血浆等蛋白含量极高的样本时，扩增完毕后可能会有变性的蛋白沉淀，请离心后再进行点样和电泳。

pcr相关试剂实验结果分析：

PCR实验结果的分析涉及多个方面，‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等，‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：‌

循环次数过多：‌增加模板量减少循环次数，‌缩短退火时间及延伸时间，‌或改用两种温度的PCR循环，‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低：‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增，‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题：‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题，‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题：‌运输储存不当可能引起试剂盒失效，‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板：‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果：‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果，‌需要注意以下几点：‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染，‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析，‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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