pcDNA3.1(+) Seamless Cloning Kit（线性化质粒）

pcDNA3.1(+) Seamless Cloning Kit（线性化质粒）

商品属性：

 产品介绍：

产品介绍：
pcDNA3.1(+)载体为哺乳动物细胞表达载体，具有人巨细胞病毒(CMV)启动子，在哺乳动物细胞中高水平表达；新霉素抗性基因，用于选择稳定细胞系。本产品提供pcDNA3.1(+)经EcoRⅠ酶切后的线性化载体，可用无缝克隆技术将单个或多个DNA片段组装到载体上。
无缝克隆技术可在重组酶的作用下，只需一步反应，便可将片段克隆到任何载体中的任意位置，得到重组质粒。无缝克隆技术作为一种非常强大的克隆技术，具有快速、简便、高效、多片段组装和定向克隆等特点，用于单个 DNA 片段的克隆，多个 DNA 片段组装克隆以及多位点突变构建等实验目的。

操作方法：

1. pcDNA3.1(+)线性化载体使用方法：
(1) pcDNA3.1(+)线性化载体当做克隆载体使用，可以在扩增PCR产物的
上游引物 5’端添加序列：TAGGGAGACCCAAGCTGGCTAGCgccacc（gccacc为Kozak序列）
下游引物 5’端添加序列：CACTGTGCTGGATATCTGCAGAATTC
通过无缝克隆连接到pcDNA3.1(+)中。
(2) 测序引物
pcDNA3.1-F:CTAGAGAACCCACTGCTTAC
pcDNA3.1-R(BGH-R):TAGAAGGCACAGTCGAGG
(3) pcDNA3.1(+)线性化载体为 EcoRⅠ酶切后的线性化载体，图谱及多克隆位点见下图。

产品特点：

1. pcDNA3.1(+)具有人巨细胞病毒(CMV)启动子，在哺乳动物细胞中高水平表达。
2. pcDNA3.1(+)具有新霉素抗性基因，用于选择稳定细胞系。
3. pcDNA3.1(+)经EcoRⅠ酶切后的线性化载体，省时省力。
4. 无缝克隆技术只需要简单的 PCR 扩增就可以制备片段DNA。

pcr相关试剂实验结果分析：

PCR实验结果的分析涉及多个方面，‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等，‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：‌

循环次数过多：‌增加模板量减少循环次数，‌缩短退火时间及延伸时间，‌或改用两种温度的PCR循环，‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低：‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增，‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题：‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题，‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题：‌运输储存不当可能引起试剂盒失效，‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板：‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果：‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果，‌需要注意以下几点：‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染，‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析，‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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