pcDNA3.1(+) Seamless Cloning Kit(线性化质粒)
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1225-20 μl | 20 μl | pcDNA3.1(+) Seamless Cloning Kit(线性化质粒) |
产品介绍:
产品介绍:
pcDNA3.1(+)载体为哺乳动物细胞表达载体,具有人巨细胞病毒(CMV)启动子,在哺乳动物细胞中高水平表达;新霉素抗性基因,用于选择稳定细胞系。本产品提供pcDNA3.1(+)经EcoRⅠ酶切后的线性化载体,可用无缝克隆技术将单个或多个DNA片段组装到载体上。
无缝克隆技术可在重组酶的作用下,只需一步反应,便可将片段克隆到任何载体中的任意位置,得到重组质粒。无缝克隆技术作为一种非常强大的克隆技术,具有快速、简便、高效、多片段组装和定向克隆等特点,用于单个 DNA 片段的克隆,多个 DNA 片段组装克隆以及多位点突变构建等实验目的。
操作方法:
1. pcDNA3.1(+)线性化载体使用方法:
(1) pcDNA3.1(+)线性化载体当做克隆载体使用,可以在扩增PCR产物的
上游引物 5’端添加序列:TAGGGAGACCCAAGCTGGCTAGCgccacc(gccacc为Kozak序列)
下游引物 5’端添加序列:CACTGTGCTGGATATCTGCAGAATTC
通过无缝克隆连接到pcDNA3.1(+)中。
(2) 测序引物
pcDNA3.1-F:CTAGAGAACCCACTGCTTAC
pcDNA3.1-R(BGH-R):TAGAAGGCACAGTCGAGG
(3) pcDNA3.1(+)线性化载体为 EcoRⅠ酶切后的线性化载体,图谱及多克隆位点见下图。
产品特点:
1. pcDNA3.1(+)具有人巨细胞病毒(CMV)启动子,在哺乳动物细胞中高水平表达。
2. pcDNA3.1(+)具有新霉素抗性基因,用于选择稳定细胞系。
3. pcDNA3.1(+)经EcoRⅠ酶切后的线性化载体,省时省力。
4. 无缝克隆技术只需要简单的 PCR 扩增就可以制备片段DNA。
![1.png 1.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/6c3845b4-40f6-4da9-9255-cd3d60482c38.jpg)
![5.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/e61abc57-2a7c-4156-9260-f14e6ba63934.jpg)
![6.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/62851bc5-3a8d-40e2-a984-d347a9c64d3e.jpg)
![7.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/1321522b-6687-4131-a7b4-7a74974aa01c.jpg)
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
公司正在出售的产品:
鸡促甲状腺素(TSH)elisa分析检测试剂盒 | 碳酸氢钠协转运蛋白4-A7抗体 Anti-Slc4a7/Nbcn1 |
组织低密度脂蛋白(LDL-Cholesterol)酶连续循环比色法定量检测试剂盒 | 软骨肉瘤相关蛋白2抗体 Anti-RED/CSA2 |
远西方杂交(FAR WESTERN BLOT) 印迹位素检测试剂盒 | 细胞核分离基因C蛋白抗体 Anti-NUDC |
小鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH/G3PDH)elisa检测试剂盒 | 白介素14抗体 |
小鼠脂解激活脂蛋白受体(LSR)elisa检测试剂盒 | Taxilin alpha |
大鼠内皮型一氧化氮合酶(NOS3)elisa检测试剂盒 | 赖氨酸缺陷型蛋白激酶1抗体 Anti-WNK1 |
甲基化样蛋白7A抗体 METTL7A | Mitochondrial ribosomal protein L11 |
间隙连接蛋白31抗体 GJB3 | 线粒体核糖体蛋白L11抗体 |
双链RNA结合蛋白Staufen2抗体 Anti-STAU2 | Human IgA / PE |
磷酸甘油酸脱氢酶抗体 Anti-PHGDH | 肿瘤坏死因子受体相关因子7抗体 Anti-TRAF7 |
磷酸化血小板源性生长因子受体α/β抗体 Anti-Phospho-PDGFRA(Tyr849)/PDGFRB(Tyr857) | PE标记人IgA |
髓鞘少树突胶质细胞糖蛋白抗体 MOG | 特异性钾离子通道蛋白抗体 ERG/KCNH2 |
G蛋白偶联受体C5家族亚型D抗体 | 多能发育相关基因5抗体 DPPA5 |
GPRC5D | 嗅觉受体5M11抗体 OR5M11 |
淀粉样蛋白β前体样蛋白1抗体 APLP1 | pcDNA3.1(+) Seamless Cloning Kit(线性化质粒)SALFf蛋白抗体 SALF |
血小板膜糖蛋白Ⅱb(CD41)重组兔单抗 CD41/ITGA2B | Rho GTP酶激活蛋白32抗体 ARHGAP32 |
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