pBM40 Toposmart Cloning Kit(TOPO克隆载体 真核表达)
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1211-20 次 | 20 次 | pBM40 Toposmart Cloning Kit(TOPO克隆载体 真核表达) |
产品介绍:
保存条件:-20℃保存
产品介绍:
利用痘苗病毒的拓扑异构酶I(Topoisomerase I)的切割再连接的特点将PCR产物定向克隆到线性化的pBM40哺乳动物表达载体中。适用于克隆由Pfu、sPfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5等高保真DNA聚合酶扩增的平末端PCR产物。引物CMVforward和SV40PolyArev可用于菌落PCR和测序鉴定。
产品特点:
(1)连接反应仅需 5 分钟。
(2)只适合平末端 PCR 产物的快速、高效、定向克隆。
(3)载体采用了新的制备工艺,零背景,无需蓝白斑筛选。
(4)具有 CMV 启动子,适用于外源基因在哺乳动物细胞中的表达,带新霉素抗性基因,便于稳转细胞株的筛选。C 端带 FLAG 标签序列便于表达的目的蛋白质的检测。
(5)相对于 pcDNA3.1 等其它哺乳动物表达载体,pBM40载体具有更小的质粒骨架,转染效率高。
(6)载体具有卡那霉素和新霉素抗性。
注意事项:
(1)引物要求:PCR 引物 5’端不能进行磷酸修饰,普通商业化引物即可。上游引物的 5’端添加 CACC 四个碱基(CACC 为真核表达所必需的 Kozak 序列)。如果目的蛋白需要在 C 端带 FLAG 标签,下游引物则需要去掉基因本身的终止密码子(3 个碱基),目的蛋白的翻译终止由 FLAG 标签的终止密码子 TAA(位于 Xho I 酶切位点前)来实现。
(2)DNA 聚合酶:选用 Pfu、sPfu、Phusion、Q5、KOD 和 Xerox 等高保真 DNA 聚合酶用于 PCR 扩增。
(3)连接时间:5-15 分钟,通常用 15 分钟。
(4)连接温度:室温 (22℃-30℃),可使用 PCR 仪控温。最佳反应温度为 25℃。若片段存在高 GC 等复杂结构,可在 37℃反应。
![1.png 1.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/6c3845b4-40f6-4da9-9255-cd3d60482c38.jpg)
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![6.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/62851bc5-3a8d-40e2-a984-d347a9c64d3e.jpg)
![7.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/1321522b-6687-4131-a7b4-7a74974aa01c.jpg)
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
公司正在出售的产品:
人E选择素(E-Sel)elisa检测试剂盒 | 糖原生成素相互作用蛋白抗体 Anti-TRIM7/RNF90 |
组织Akt/PKB激酶总活性定量检测试剂盒(A/B/C) | RAS癌基因相关蛋白Rab6C抗体 Anti-RAB6C |
大鼠P27蛋白(P27)elisa分析检测试剂盒 | 磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶NEK9抗体 Anti-phospho-NEK9(Thr210) |
小鼠鞘氨醇1磷酸酯裂解酶1(SGPL1)elisa检测试剂盒 | TRIM49蛋白抗体 |
纯化线粒体氧化酶活性测定试剂盒 | TRIM49 |
大鼠载脂蛋白C-II(APOC2)ELISA | 缬氨酰-tRNA合成酶抗体 Anti-vars2 |
跨膜蛋白酶丝氨酸1抗体 Hepsin/TMPRSS1 | MRPS25 |
类固醇受体复合物蛋白FKBP5抗体 FKBP51 | 线粒体核糖体蛋白S25抗体 |
环指蛋白142抗体 Anti-SH3MD2/RNF142 | OPG ELISA KIT |
氧化应激诱导生长抑制因子1抗体 Anti-OSGIN1 | 四分子交联体10抗体(四旋蛋白) Anti-TSPAN10/Oculospanin |
黑色素瘤优先表达抗原抗体 Anti-PRAME | 大鼠骨保护素(OPG)elisa分析检测试剂盒 |
细胞核受体Rev-Erb beta抗体 NR1D2 | 细胞色素C氧化酶蛋白7A3抗体 COX7A3 |
豚鼠孕(progestogen)elisa分析检测试剂盒 | 感觉神经性耳聋常染色体隐性遗传61抗体 Slc26a5 |
GuineapigprogestogenElisakit | 原肌球蛋白1抗体 Tropomyosin |
钙调神经磷酸酶调节蛋白3抗体(唐氏综合征候选区域蛋白1样蛋白3) Calcipressin 3 | pBM40 Toposmart Cloning Kit(TOPO克隆载体 真核表达)γ1氨基丁酸受体α5/GABRα5抗体 GABRA5 |
长链脂肪酸延长酶长ELOVL6抗体 ELOVL6 | ZPLD1蛋白抗体 ZPLD1 |
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