pBM30 Toposmart Cloning Kit(TOPO克隆载体 原核表达)
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1209-20 次 | 20 次 | pBM30 Toposmart Cloning Kit(TOPO克隆载体 原核表达) |
产品介绍:
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产品介绍:
利用痘苗病毒的拓扑异构酶I(Topoisomerase I)的切割再连接的特点将PCR产物定向克隆到线性化的pBM30原核表达载体中。适用于克隆由Pfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5等高保真DNA聚合酶扩增的平末端PCR产物。引物T7和T7t可用于菌落PCR和测序鉴定。
产品特点:
(1) 连接反应仅需 5 分钟
(2) 只适合平末端PCR 产物的快速、高效、定向克隆。
(3) 载体采用了新的制备工艺,零背景,无需蓝白斑筛选。
(4) 具有T7 启动子,类似于 pET30 载体,具备原核表达所需的所有调控元件。适用于外源基因在大肠杆菌中的高水平表达。
(5) 带 His.tag 和 S.tag 两种纯化标签。
(6) 具有凝血酶和肠激酶两种蛋白酶酶切识别序列。
(7) 载体具有卡那霉素抗性。
注意事项:
(1) 引物要求:PCR 引物 5’端不能进行磷酸化修饰,普通商业化引物即可。上游引物的 5’端添加 CACC 四个碱基。如果表达蛋白需 C 端带 6His 标签,下游引物则需要去掉基因本身的终止密码子(3 个碱基)。目的蛋白的翻译终止由 6His 标签的终止密码子TGA 来实现。
(2) DNA 聚合酶:选用 Pfu、sPfu、Phusion、Q5、KOD 和 Xerox 等高保真 DNA 聚合酶用于 PCR 扩增。
(3) 连接时间:5-15 分钟,一般为 15 分钟。
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![6.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/62851bc5-3a8d-40e2-a984-d347a9c64d3e.jpg)
![7.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/1321522b-6687-4131-a7b4-7a74974aa01c.jpg)
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
公司正在出售的产品:
小鼠血小板/内皮细胞粘附分子1(PECAM1)elisa检测试剂盒 | 体液氧化型甘肽(GSSG)浓度比色法定量检测试剂盒 |
大鼠可溶性糖蛋白VI(sGPVI)elisa检测试剂盒 | 人CCAAT增强子结合蛋白δ(C/EBPδ)elisa检测试剂盒 |
人白介素5elisa检测试剂盒 | 大鼠C-肽(C-Peptide)elisa检测试剂盒 |
植物磷脂酶D2(Phospholipase D2)活性比色法定量检测试剂盒 | 前列腺相关蛋白MSMP抗体 |
LoTE分子生物级溶液 | MSMP |
小鼠蛋白激酶B(PKB)elisa检测试剂盒 | 小鼠凝溶胶蛋白(Gelsolin)elisa分析检测试剂盒 |
肌动蛋白解聚因子19抗体 Destrin | c20orf78 |
基膜聚糖蛋白抗体 Lumican | 20号染色体开放阅读框78抗体 |
宫颈癌原癌基因8抗体 Anti-TTC23 | Rabbit Anti-Chicken IgM / PE-Cy5 |
维甲酸相关孤儿受体β抗体 Anti-ROR beta | 细胞膜铁转运蛋白FP1抗体 Anti-SLC40A1 |
核受体相关因子-1抗体 Anti-Nurr1 | PE-CY5标记的兔抗鸡IgM |
双源蛋白4样蛋白9抗体 DUX4L9 | 丝氨酸蛋白酶抑制剂A11抗体 SERPIN A11 |
磷酸化转录因子RelB蛋白抗体 | 蛋白酶体20S亚基LMP7重组兔单克隆抗体 PSMB8 |
phospho-RelB (Ser551) | 锌指蛋白749抗体 ZNF749 |
胆囊收缩素8抗体 CCK8 | pBM30 Toposmart Cloning Kit(TOPO克隆载体 原核表达)RABIF蛋白抗体 RABIF |
信号细胞活化分子CD150抗体 CD150/SLAM | PE标记小鼠CD49b单克隆抗体 mouse CD49b/PE |
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