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细胞凋亡是细胞的基本特征之一,它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定和一些疾病发生过程等方面起着十分重要的作用。 在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。在体内,巨噬细胞可以识别翻转到细胞膜表面的PS 从而将这些程序性死亡的细胞清除,因此凋亡过程中并不伴随局部的炎症反应,而在细胞坏死的过程中则常常伴随着炎症反应。 AnnexinⅤ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的PS高亲和力特异性结合。PS 外翻发生在细胞核破裂,DNA 片段化以及凋亡相关蛋白出现之前,这使得Annexin V 与PS 的结合成为凋亡早期的一种重要检测标志事件。
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正常细胞、凋亡细胞与坏死细胞检测试剂盒,使用方法
样品染色:
1. 离心收集悬浮细胞。离心机约300×g力,2-8°C,离心时间5分钟,弃培养基。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次。
3. 用400 μl 1X Annexin V结合液重新悬浮细胞,浓度大约为1×106 cells/ml。
4. 在细胞悬浮液中加入5 μl Annexin V-FITC染色液,轻轻混匀后于2-8°C避光条件下孵育15分钟。
5. 加入5-10 μl 7-AAD染色液后轻轻混匀于2-8°C避光条件下孵育2-5分钟。 6. 立即用流式细胞仪或荧光显微镜检测。
正常细胞、凋亡细胞与坏死细胞检测试剂盒,使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小,重悬细胞是动作要轻柔,避免多次反复的激烈吹打。不用涡旋振荡器。
3.Annexin V-FITC(等)和Propidium iodide(等)是光敏物质,在操作时请注意避光,尽量减少它们暴露在光下的时间。有必要时可以使用带盖子的冰盒或铝箔纸避光。标记后将细胞保持在避光环境中。移液过程中短暂暴露在光线下(<30秒)是可以接受的。
4.由于细胞凋亡是一个快速和动态的过程,因此最好在染色后立即进行分析。
5.使用Annexin V-FITC(等) 试剂盒检测凋亡需要针对活细胞。不要固定细胞,固定操作会对结果产生干扰。
正常细胞、凋亡细胞与坏死细胞检测试剂盒,产品特点
1.方便:可用流式细胞仪或荧光显微镜检测;
2.快速:1小时内即可完成实验;
3.准确:能准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞,并计数各群细胞的比例。
保存温度:2-8℃避光
有限期:1年
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正常细胞、凋亡细胞与坏死细胞检测试剂盒信息由上海雅吉生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于正常细胞、凋亡细胞与坏死细胞检测试剂盒报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应正常细胞、凋亡细胞与坏死细胞检测试剂盒外,上海雅吉生物科技有限公司还可为您提供Caspase 1 活性检测试剂盒-荧光、Caspase 6 活性检测试剂盒、Annexin V Alexa Fluor647 / 7-AAD 细胞凋亡检测试剂盒等产品,公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。