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线粒体膜电位检测试剂盒(RHO123)是利用Rhodamine 123探针检测线粒体膜电位变化的试剂盒,可以快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化,可以用于早期的细胞凋亡检测。 粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。Rho123是一种可以通透细胞膜的选择性染色活细胞线粒体的荧光染料,广泛用作检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)的荧光探针。Rho123是阳离子荧光染料,在正常细胞中能够依赖线粒体跨膜电位进入线粒体基质。在细胞凋亡发生时,线粒体膜完整性破坏,线粒体膜通透性转运孔开放,引起线粒体跨膜电位(ΔΨm) 的崩溃,Rho123 重新释放出线粒体。通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化,可用于培养的细胞或从组织中提取出的线粒体的膜电位检测。
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线粒体膜电位检测试剂盒(DiOC6(3)法),使用方法
样品染色:
1. 离心收集悬浮细胞。离心机约300×g力,2-8°C,离心时间5分钟,弃培养基。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次。
3. 用400 μl 1X Annexin V结合液重新悬浮细胞,浓度大约为1×106 cells/ml。
4. 在细胞悬浮液中加入5 μl Annexin V-FITC染色液,轻轻混匀后于2-8°C避光条件下孵育15分钟。
5. 加入5-10 μl 7-AAD染色液后轻轻混匀于2-8°C避光条件下孵育2-5分钟。 6. 立即用流式细胞仪或荧光显微镜检测。
线粒体膜电位检测试剂盒(DiOC6(3)法),使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小,重悬细胞是动作要轻柔,避免多次反复的激烈吹打。不用涡旋振荡器。
3.Annexin V-FITC(等)和Propidium iodide(等)是光敏物质,在操作时请注意避光,尽量减少它们暴露在光下的时间。有必要时可以使用带盖子的冰盒或铝箔纸避光。标记后将细胞保持在避光环境中。移液过程中短暂暴露在光线下(<30秒)是可以接受的。
4.由于细胞凋亡是一个快速和动态的过程,因此最好在染色后立即进行分析。
5.使用Annexin V-FITC(等) 试剂盒检测凋亡需要针对活细胞。不要固定细胞,固定操作会对结果产生干扰。
线粒体膜电位检测试剂盒(DiOC6(3)法),产品特点
1.方便:可用流式细胞仪或荧光显微镜检测;
2.快速:1小时内即可完成实验;
3.准确:能准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞,并计数各群细胞的比例。
保存温度:2-8℃避光
有限期:1年
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