甲型溶血性链球菌的培养方法与使用范围！甲型溶血性链球菌（α-hemolytic streptococcus）是2019年全国科学技术名词审定委员会公布的感染病学名词。链球菌属菌种。菌落周围有1～2mm宽的草绿色溶血环，大多为条件致病菌。 一、菌种简介平台编号：bio-00006规格：冻干粉拉丁属名：α-Hemolytic streptococcus菌株名称：甲型溶血性链球菌培养基：血琼脂培养基（培养基 109）或适宜培养基。培养条件：35~37℃，需氧保存条件：常温,避光批号：32213-8用途：教学注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、启开方法1)复苏菌种前应准备各适于该菌种生长的固体、液体培养基和培养设备，所 有操作均应在合适的生物安全防护条 件下进行；2)启开菌种宜采用锯开法(锯开前用 75% 酒精棉消毒菌种管外壁)。用吸管将液体培养基 0.5ml 左右注入被启开的菌种安瓿中并吹打，使安瓿中的冻干菌种溶解成菌悬液；3)将上述菌悬液全部吸出，分别接种到固体斜面和液体培养基中，于 35~37℃培养箱中培养 18~24 小时；4)次日观察菌种的生长情况，如菌种未生长，应继续培养至 72 小时；5)复苏后的菌种按规定使用。三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。四、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 五、注意事项1、该菌种仅限用于实验室检验及研究用，不能用于商业用途。2、如使用该菌种发表文章，应在文章中注明。3、本中心仅对从本中心直接获取菌种的客户负责。

                  卷枝毛霉的特点与功效及使用方法！                                                        一、菌种简介菌种名称：卷枝毛霉规格：冻干粉培养保藏法：培养后于4—6℃冰箱内保存。培养温度：35-37℃贮藏条件：-20℃避光储存，使用后放入冰箱内。保质期：8-10年，应根据菌种状况及时转接。发货时间：菌种1-2天内均可发货，全国免费快递发货。保质期：斜面菌种：1-2个月。冻干菌种：5-10年保存条件：2-8℃二、卷枝毛霉功效1、分解出长石、云母等矿物中的钾、硅，也能分解出磷灰石中的磷，，具有溶磷、释钾和固氮功能，同时能在生长繁殖过程中产生有机酸、氨基酸、多糖、激素等有利于植物吸收和利用的物质。2、本品在土壤中繁殖后，分泌植物生长刺激素及多种酶，以增强作物对一些病害的抵抗力；也抑制其他病原菌的生长。3、菌体内的钾在菌体死亡后，游离出来，又可被植物吸收利用。作为微生物肥料中的一种重要功能菌，可提高土壤速效钾、磷含量，提高作物产量和品质等多种效.三、卷枝毛霉特征特性营养体：粗长杆状，两端钝圆，革兰氏染色反应不定，产生聚β-*盐（PHB）颗粒。菌体大小为（1.0～1.2）×?（2.5～7.0）μm?，菌体周围有厚荚膜。芽孢：壁厚，椭圆形，中生或近端生，芽孢囊不膨大或微膨大。菌落圆形，无色，隆起，胶质粘稠，透明或半透明，边缘整齐。好氧或兼性厌氧生长，水解淀粉，接触酶反应阳性，氧化酶和卵磷脂酶反应阴性，在无氮培养基上生长良好，生长温度10?℃?～?45?℃。四、卷枝毛霉特点1、该菌具有解磷、解钾的功能。2、具有活化土壤中硅、钙、镁中量元素作用。 3、具有提高铁锰铜锌钼硼供应的功效。 4、提高或延长肥效，减少化肥用量。 5、提高作物抗逆性，预防或减轻病害。  五、卷枝毛霉使用方法生产符合行业标准的生物有机肥、复合微生物肥料（有效菌数≥0.2亿/克）。以100亿cfu/克为例，每吨有机肥添加2000克。本品可配合其他复混肥冲施，用量按250-500克/亩地。微生物菌肥用量：粉劑每噸添加膠質芽孢桿菌20公斤、顆粒加10公斤。六、卷枝毛霉单层安瓿瓶菌种培养及打管说明1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长。4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。七、卷枝毛霉特别注意事项1、微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方,室温放置时问过长会导致菌种衰退；2、菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染；3、斜面菌种保藏时间通常为1-2个月,应根据菌种状况及时转接;冻干菌种保藏时间通常为5~10年；4、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时与微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。

                   唾液乳杆菌的培养条件与注意事项！                                                         刺激免疫细胞分泌抗过敏相关细胞激素浓度的唾液乳杆菌。是革兰氏染色阳性杆菌，不生成孢子，不具触酶、氧化酶及运动性，在好氧及厌氧环境均能生长，属于兼性异质发酸性菌株，葡糖代谢时不产生气体。一、菌种简介平台编号：bio-61667提供形式：冻干物拉丁属名：Lactobacillus salivarius中文名称：唾液乳杆菌拉丁名称：Lactobacillus salivarius来源历史：←北京林业大学食品微生物实验室（1.0235）收藏时间：2008/10/31原始编号：CH2原产国：中国资源归类编码：15131319101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：发酵果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蜜二糖、棉籽糖、蔗糖。不发酵阿拉伯糖、纤维二糖、甘露糖、松三糖、鼠李糖、核糖、木糖。革兰氏阳性，接触酶阴性。具体用途：发酵酸奶、奶酪辅发酵剂，益生菌。生物危害程度：四类培养基编号：CM0006培养基名称：MRS培养基培养基成分：酪蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母粉 5.0g，葡萄糖 5.0g，乙酸钠 5.0g，柠檬酸二铵 2.0g，Tween 80 1.0g，K2HPO4 2.0g，MgSO4.7H2O 0.2g，MnSO4.H2O 0.05g，CaCO3 20.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.8。培养温度：37℃需氧类型：好氧分离基物：母鸡粪便采集地：河北省廊坊市保存方法：真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。三、培养条件1、培养基编号：CM00062、培养基成分：酪蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母粉 5.0g，葡萄糖 5.0g，乙酸钠 5.0g，柠檬酸二铵 2.0g，Tween 80 1.0g，K2HPO4 2.0g，MgSO4.7H2O 0.2g，MnSO4.H2O 0.05g，CaCO3 20.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.8。3、需氧类型：好氧4、培养温度：37℃四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。

                  假单胞菌的代表品种与培养特性！假单胞菌为直或稍弯的革兰氏阴性杆菌，是无核细菌，以极生鞭毛运动，不形成芽孢，化能有机营养，严格好氧，呼吸代谢，从不发酵。有些株产生荧光色素或（和）红、蓝、黄、绿等水溶性色素。氧化酶和触酶均为阳性（除少数菌株外）。蓝绿色或荧光色菌落，有生姜味。假单胞菌广泛分布于自然界，如土壤、水、食物和空气中。有荚膜、鞭毛和菌毛。营养要求不高，种类多，与人类感染有关的主要有铜绿假单胞菌(P. arugino.sa)、类鼻疽假单胞菌(P．pseudomallei)、荧光假单胞菌(P．fluorescens)等。铜绿假单胞菌是常见条件致病菌，特别是医院感染；类鼻疽假单胞菌可引起局部地区（东南亚）人和动物的类鼻疽病；输入荧光假单胞菌污染血液或血制品，可导致败血症或休克。 一、形态特征假单胞菌为需氧的革兰阴性小杆菌。菌体呈杆状或略弯曲，有单端鞭毛或丛鞭毛，有荚膜，无芽胞。该菌属中有些菌株在代谢中能产生多种水溶性的色素，如绿脓素、荧光素、红脓素、黑脓素等，有的菌可产生多种，有的只产生1—2种。铜绿假单胞菌与荧光似单胞菌和恶臭假单胞菌的鉴别：三者均可产生荧光色素，但铜绿假单胞菌42℃时生长，后两者则不能生长。 二、生化特性氧化酶试验阳性；分解葡萄糖，不分解乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖；动力、枸橼酸盐、精氨酸双水解酶和硝酸盐还原试验均阳性；吲哚、赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶试验阴性。 三、培养特性假单胞菌属于非发酵型细菌，不发酵糖类，无特殊营养要求，在普通培养基上即可生长。最适生长温度35℃，少数菌种能在4℃或42℃生长。 在血琼脂平板上35℃培养18-24 h，形成篮绿色、透明溶血环的菌落，有生姜味。在麦康凯琼脂平板上，可形成5种不同的菌落。典型型：菌落不规则，边缘呈伞状伸展。 大肠菌样型：菌落圆形凸起，无色透明，似大肠埃希菌菌落。 粗糙型：菌落呈纽扣状，表面粗糙，或菌落中央隆起边缘扁平。 黏液型：菌落光滑，隆起，呈黏液状，嵌入培养基中，不易挑起，似肺炎克雷伯菌菌落，但是无色。 侏儒型：生长缓慢，培养18 h尚不见菌落，24 h后才有细小菌落。 四、主要分布主要分布在水、土壤和空气中，在临床标本如伤口创面分泌物、脓汁、血液等检出率较高，是医院内感染常见的条件致病菌。五、代表品种假单胞菌属种类繁多，含有200余种。 包括铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、斯氏假单胞菌、门多萨假单胞菌、类产碱假单胞菌、产碱假单胞菌、维罗纳假单胞菌和蒙太利假单胞菌、摩西假单胞菌等。铜绿假单胞菌是假单胞菌属的代表菌种。 1、铜绿假单胞菌菌体为直或稍弯、两端钝圆的杆菌。单端有1-3根鞭毛，运动活泼，革兰染色阴性杆菌。大小为(0. 5-1. 0)μmX (1. 5-5. 0)μm，有单端鞭毛，某些菌有多糖荚膜。在普通培养基上生长良好，产生带荧光素的水溶性色素：青脓素和绿脓素等，使培养基呈绿色。分离的菌株常有菌毛和微荚膜，不形成芽胞。铜绿假单胞菌虽为非发酵型细菌，但能利用葡萄糖、核糖、葡萄糖酸盐等几种糖，氧是最终受氢体，细胞色素氧化酶阳性可与肠道杆菌科细菌相区别；虽为专性需氧菌，但可利用硝酸盐作为受氢体在厌氧条件下生长。 铜绿假单胞菌抵抗力较强。耐许多化学消毒液与抗生素，在潮湿环境中能较长期存活。56℃ 1h可杀死该菌。 2、荧光假单胞菌荧光假单胞菌为革兰氏阴性单端丛毛菌，专性需氧，具有嗜低温性，其最适生长温度为25-30℃，4℃可生长，35℃以上不生长。荧光假单胞菌广泛分布于水、土壤及正常人体皮肤等部位。 该菌产生在紫外线照射下发出黄绿色荧光的荧光素，不产生绿脓素。该菌是一种环境污染菌，为少见的条件致病菌。可从脓、痰、胸水、尿和血液中分离出来，但35℃培养时检出率较低。该菌可在冰箱贮存的血液中繁殖，自溶后释出内毒素，若此血液输入病人体内，可导致不可逆性的休克而死亡，故血库血液应严防该菌污染。 荧光假单胞菌是植物根际最普遍的微生物类群，具有分布广，数量多，营养需要简单，繁殖快，竞争定殖力强的特点。世界许多国家均有人报道分离到抗植物病害的荧光假单胞菌，而且许多菌株能产生几种活性物质，抗多种植物病害。 3、恶臭假单胞菌革兰阴性杆菌，有极端鞭毛，无芽胞，无荚膜。在血琼脂平板上35℃培养18-24 h。形成大而湿润、灰色的菌落。在麦康凯琼脂平板上呈较大无色、湿润的菌落。在营养琼脂平板上呈黄绿色的菌落。在紫外线下可见荧光。 恶臭假单胞菌为革兰氏阴性，具动力的短杆菌；氧化酶、过氧化氢酶、枸缘酸利用阳性、精氨酸双水解酶阳性；硝酸盐还原、鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶、明胶酶、尿素酶、V-P反应、吲哚反应阴性。对氟哌酸、妥布霉素、卡那霉素、庆大霉素敏感。 六、主要危害对动物或人类致病的主要有铜绿假单胞菌（P. aeruginosa）、荧光假单胞菌（P. fluorescens）和类鼻疽假单胞菌（P. Pseudomallei）、恶臭假单胞菌和产碱假单胞菌。铜绿假单胞菌是条件致病菌，在一定条件下方可引起疾病，也是导致医院感染的主要病原之一。该菌能天然抵抗多种抗生素；形成生物膜的能力强，可在外伤伤口或医疗植入物上形成生物膜。在治疗过程中，易出现抗药性。 荧光假单胞菌是一种条件致病菌. 可引起菌血症、泌尿道感染等疾病。本菌对卡那霉素、多黏菌素敏感。对常用抗菌药物易产生耐药性。 恶臭假单胞菌可引起呼吸道、泌尿道感染和伤口感染，及化脓性关节炎和菌血症，并常污染血库制品。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     深度解读：微生物污染的奥秘！微生物菌种查询网：随着中国经济发展，《食品安全法》、《农产品质量安全法》的实施和修订，人们对食品质量安全的要求也不断提高生产的微生物一般菌种特定，对人体无害，而有害微生物种类较多，危害较大，易引发食品安全事件，由微生物引发的食品安全问题占总量的40%，因此我们在日常工作中应主要检测食品中有害微生物，以保证食品安全。食品中的微生物有许多种类，有的对人类无害，有的会导致疾病产生，下边是程诚小编总结的食品中常见的微生物污染及检测标准。1、大肠菌群大肠菌群，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌。2、霉菌霉菌，是丝状真菌的俗称，意即"发霉的真菌"，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不像蘑菇那样产生大型的子实体。在潮湿温暖的地方，很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，那就是霉菌。3、酵母酵母是一些单细胞真菌，并非系统演化分类的单元。是子囊菌、担子菌等几科单细胞真菌的通称，一般泛指能发酵糖类的各种单细胞真菌，有的为致病菌。4、金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属，有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。5、沙门氏菌沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌。沙门氏菌属有的专对人类致病，有的只对动物致病，也有对人和动物都致病。沙门氏菌病是指由各种类型沙门氏菌所引起的对人类、家畜以及野生禽兽不同形式的总称。微生物污染检测标准：食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定GB4789.2-2016食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数GB4789.3-2016食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验GB4789.4-2016食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验GB4789.5-2012食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验GB4789.7-2013食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验GB4789.10-2016食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验GB4789.11-2014食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验GB4789.14-2014食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数GB4789.15-2016食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验GB4789.35-2016微生物检测常用的方法有固体培养基法，液体培养基发酵法，检测人员进入无菌室进行检测工作之前必须做好前期准备工作，必须用消毒液或肥皂洗手消毒，然后在缓冲间更换无菌服、鞋，佩戴帽子、口罩、手套（酒精多次擦拭双手），避免对样品造成污染。温馨提示：为了避免微生物污染的食品对健康的损害，我们一方面要尽量通过有保障的渠道来购买食物，另一方面购买回来后也要妥善保存。一般来说，家用冰箱冷藏室中的食物尽量在一周内吃完，冷冻室内的食物也不要超过两个月。

             阴沟肠杆菌阴沟亚种的培养方法与注意事项！                                       一、菌种简介平台编号：bio-53193规格：冻干物拉丁属名：Enterobacter cloacae subsp. cloacae菌株名称：阴沟肠杆菌阴沟亚种其他编号：21539 =ATCC13047=NCDC 279-56=IFO13535=NCTC10005培养基编号：2培养温度：37培养时间：18-24 小时用途：模式菌株。质量控制菌株。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。二、培养基*营养琼脂培养基（NA）*胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSA）*LB 培养基（以上三种任选一种即可）三、培养方法1、平板划线分离法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的，但平板划线分离法不能对菌落计数，而稀释涂布平板法培养过程复杂，对平板的要求比较高，可参照以下步骤：a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃，向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均匀，然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿，轻轻摇动培养皿，使培养基溶液均匀分布在培养皿底部，待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g，放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇15～20min混合均匀，用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培养基表面的中央位置，用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀。四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌五、保藏条件斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。 六、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用 0.2m 左右培养液或无菌水溶解，接种在 2 个斜面上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面或平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。

              LMH 鸡肝癌细胞的培养步骤与处理方法！一、细胞简介平台编号：bio-115153规格：1*10 6拉丁属名：LMH 鸡肝癌细胞细胞名称：鸡肝癌细胞细胞用途：科学研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、细胞特性1）来源：鸡肝2）形态：上皮细胞样，贴壁生长3）含量：>1x106  细胞数4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装5）用途：仅供科研使用。三、细胞的运输和保存干冰运输及复苏好存活细胞（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备DMEM/F-12 培养基；特级胎牛血清，10%；双抗1%。注：细胞贴壁性差，补液的时候不要冲刷到细胞层，2-3天换液，90%以上汇合度传代。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

               乳酸菌的形态分类与生理功能及主要应用！乳酸菌（lactic acid bacteria，LAB）是一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的统称。这类细菌在自然界分布极为广泛，具有丰富的物种多样性，至少包含18个属，共200多种。除极少数外，其绝大部分都是人体内必不可少的、且具有重要生理功能的菌群，广泛存在于人体的肠道中。乳酸菌不仅是研究分类、生化、遗传、分子生物学和基因工程的理想材料（在理论上具有重要的学术价值），而且在工业、农牧业、食品和医药等与人类生活密切相关的重要领域具有极高的应用价值。 一、存在分布乳酸菌是一种益生菌，其能够将碳水化合物发酵成乳酸，因而得名。乳酸菌分布广泛，通常存在于肉、乳和蔬菜等食品及其制品中。此外，乳酸菌也广泛存在于畜、禽肠道及少数临床样品中，其中，在人类和其他哺乳动物的口腔、肠道等环境中的乳酸菌，是构成特定区域正常微生物菌群的重要成员。 二、形态分类 乳酸菌是发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌，其包含许多种属。大多数乳酸菌不运动，少数以周毛运动，菌体常排列成链。乳酸链球菌族，菌体球状，通常成对或成链。乳酸杆菌族，菌体杆状，单个或成链，有时成丝状，产生假分枝。普通的乳酸菌，活力极弱，它们只能在相对受限制的环境中存活，一但脱离这些环境，其自身就会遭到灭亡。 从分类上而言，乳酸菌作为真细菌纲目中的乳酸细菌科，形态上可分成球菌、杆菌。其中，球形乳酸菌包括链球菌、明串珠菌属、片球菌；杆状菌包括乳球菌、乳杆菌、双歧杆菌等；从生长温度上而言，可分成高温型、中温型；从发酵类型而言，可分成同型发酵、异型发酵；从来源上分，大体上可分为动物源乳酸菌和植物源乳酸菌。按照Berry细菌学手册中的生化分类法，乳酸菌可分为乳杆菌属、链球菌属、明串珠菌属、双歧杆菌属和片球菌属，共5个属。1、乳杆菌属乳杆菌细胞形态多样，（0.5~1.2）μm×（1.0~10.0）μm。长或细长杆状弯曲形短杆状及棒形球杆状，通常成短链。革兰氏阳性，不生孢。细胞罕见以周生鞭毛运动。在营养琼脂上的菌落凸起、全缘无色，直径2mm~5mm。 2、片球菌属片球菌的细胞呈球形，永不延长，直径12μm~20μm。在适宜条件下，分裂以直二个方向形成四联，虽有时也可出现成对排列，单个细胞见，不形成链状。不运动，不产芽孢。 3、链球菌属链球菌的菌体球成卵圆形，直径不超过2μm，呈链状排列。无芽孢，大多数无鞭毛，幼龄菌（2~3小时培养物）常有荚膜。在液体培养基中常呈沉淀生长，但也有的呈均匀混浊生长（如肺炎链球菌）；在固体培养基上形成细小表面光滑、圆形灰白色、半透明或不透明的菌落。在血平板上生长的菌落周圉，可出现性质不同的溶血圈。 4、双歧杆菌属双歧杆菌是形态很不一致的杆菌，（0.5~1.3）μm×（1.5~8）μm，常呈弯、棒状和分支状。单生、成对、Ⅴ字排列，有时成链，细胞平行成栅栏状，或玫瑰花结状。偶尔呈膨大的球杆状。 5、阴串珠菌属阴串珠菌细胞呈球形或豆状，成对或成链排列。在自然生长环境中，明串珠菌细胞呈对或短链状排列；在某些竞争性生长的环境中，细胞排列成较长的链。 三、繁殖发育 乳酸菌在固体培养基上菌落较小，生长缓慢。在液体发酵培养基内可以很快的生长，离心洗涤后可以获得纯度较高的菌体，且兼具需氧和厌氧的性能。研究表明，低聚糖能够促进乳酸菌增殖，其促进有益菌增殖、抑制病原微生物的功能有多种途径：其一是屏障作用，描述为对肠道黏膜上皮的竞争性抑制；其二是代谢产物对病原菌和抑制作用。Stewart等（1993），Tomilka等（1992）证实异麦芽低聚糖（IMO）能促进双岐杆菌、乳酸菌增殖，这些菌代谢产生的低能脂肪酸可以降低pH值，因而大肠杆菌、沙门氏菌等都对酸性条件敏感的细菌生长受到低pH的抑制。而肠道的乳酸菌（如双岐杆菌）本身凝集素的活性明显高于致病菌（如大肠杆菌和沙门氏菌），这可能是肠道正常菌群在竞争性排斥作用中具有明显竞争优势的原因之一。 四、生理功能 乳酸菌通过发酵产生的有机酸、特殊酶系、酸菌素等物质具有特殊生理功能。大量研究资料表明，乳酸菌能促进动物生长，调节胃肠道正常菌群、维持微生态平衡，从而改善胃肠道功能、提高食物消化率和生物效价、降低血清胆固醇、控制内毒素、抑制肠道内腐败菌生长、提高机体免疫力等。 1、促进机体生长乳酸菌在体内能够正常发挥代谢活性，分解食物中的蛋白质、糖类、合成维生素以及对脂肪。在乳酸菌蛋白酶的作用下，食物中的大分子蛋白质部分降解为宿主可以直接利用的小分子肽和必需氨基酸，显著提高了食物的消化率和生物价，促进胃肠的吸收。经乳酸菌发酵后，食物中的乳糖可被乳酸菌转化成葡萄糖和半乳糖，进而转变为乳酸等小分子化合物，易于消化。部分脂肪可被乳酸菌发酵降解，易于消化并增加其中游离脂肪酸、挥发性脂肪酸的含量。乳酸菌在代谢过程中消耗部分维生素，同时合成叶酸等B族维生素，提高矿物元素的生物活性，进而达到为宿主提供必需营养物质、增强营养代谢、促进其生长的作用。此外，乳酸菌产生的酸性代谢产物可以使肠道环境呈现偏酸性，与一般消化酶的最适pH符合(淀粉酶6.5、糖化酶4.4)，有利于营养素的消化吸收。 2、维持肠道菌群平衡动物的整个消化道在正常情况下都寄生有大量的微生物，按照它们的作用可分为三类：①共生性类型，主要是兼性厌氧菌。在生态平衡时，它们的各项生理功能都对宿主有利。②致病性类型，正常情况下数量较少，寄生于正常部位，不致宿主发病；失控时可导致宿主的不良反应。③中间性类型，同时具有生理和致病两种作用。肠道内微生物群的平衡对机体健康十分重要，而乳酸菌能够调节这种微生态的平衡，保证了宿主正常的生理状态。乳酸菌是肠道常在菌（常生菌），其可改变肠道内环境，抑制有害菌繁殖，调整维持胃肠道菌群的平衡。乳酸菌可通过粘附素与肠粘膜细胞紧密结合，在肠粘膜表面定植占位，成为生理屏障的主要组成部分，从而达到恢复宿主抵抗力，修复肠道菌群屏障、治愈肠道疾病的作用。如果这个屏障遭到抗生素或其他因素的破坏，宿土丧失了对外来菌抵抗力，会使具有耐药性的肠内菌异常增殖而取代优势菌的位置，造成肠道内微生态平衡的失调（占位及屏障作用）。 3、改善免疫能力乳酸菌制剂能够增强免疫力表现在两方面：一是影响非特异性免疫应答，增强单核吞噬细胞、多形核白细胞的活力，刺激活性氧、溶酶体酶和单核因子的分泌；二是刺激特异性免疫应答，如加强粘膜表面和血清中IgA、IgM、IgG等免疫球蛋白的水平，加强体液免疫，促进T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖，加强细胞免疫。 乳酸杆菌和双歧杆菌一方面能明显激活巨噬细胞的吞噬作用，另一方面由于它能在肠道定植，相当于天然自动免疫。它们还能刺激腹膜巨噬细胞、诱导产生干扰素、促进细胞分裂、产生抗体及促进细胞免疫等，所以能增强机体的非特异性和特异性免疫反应，提高机体的抗病能力。当异物侵入机体时，免疫细胞被乳酸菌激活，增强了机体对异物产生抗体的作用。Chndra（1984）认为，乳酸菌之所以具有刺激机体产生抗体的作用，是由于菌体通过淋巴结、粘膜刺激淋巴细胞接受刺激的淋巴细胞再通过肠系膜淋巴结（MIN）循环到血流中，并分布全身，从而调节机体的免疫应笞。 4、抑制有害菌群生长乳酸菌对一些腐败菌和低温细菌有较好的抑制作用，可用于防治腹泻、下痢、肠炎、便秘和由于肠道功能紊乱引起的多种疾病以及皮肤炎症。其抗菌机制主要体现于以下几个方面：①产生的乳酸等有机酸能显著降低环境pH值和Eh（氧化还原电位）值，使肠内处于酸性环境，对于致病菌如痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、弯曲杆菌、葡萄球菌等有拮抗作用；②产生的过氧化氢能够激活牛乳中的“过氧化氢酶-硫氰酸”系统，抑制和杀灭革兰氏阴性菌、过氧化氢酶阳性细菌如假单胞菌属、大肠杆菌类和沙门氏菌属等；③产生类似细菌素的细小蛋白质或肽类（抗菌肽），如各种乳酸杆菌素和双歧菌素，对葡萄球菌、梭状芽孢杆阔以及沙门氏菌和志贺氏菌有拮抗作用。另外，双歧杆菌等还可将结合的胆酸分解为游离的肌酸，后者对细菌的抑制作用比前者更强。 五、主要应用 （一）食品工业1、发酵乳制品加工酸奶是利用乳酸菌发酵牛乳、羊乳等动物乳类制成的发酵乳制品，在世界范围内历史都非常悠久。由于动物乳中的乳糖和酪蛋白等营养物质经乳酸菌分解后，易于人体吸收且可以缓解亚洲人种普遍存在的乳糖不耐症，因此广受欢迎。 活性乳酸菌饮料是利用乳酸菌对乳类发酵进而调配制成的发酵乳饮料，它以清爽的口感、独特的风味和较高的营养保健功能得到广大消费者的青睐。其最大优势在于饮料中的乳酸菌是以活菌形式存在于产品中，从而有助于发挥乳酸菌在人体肠道中的生理功能。 奶油和干酪。乳酸菌发酵可用于生产稀奶油，发酵中产生的乳酸在某种程度上可以抑制腐败菌繁殖，提高奶油的稳定性；而另一作用则是产香，因此发酵法生产的酸奶油比甜奶油具有更浓的芳香味。干酪是在乳中加入适量的乳酸菌发酵剂，使乳中蛋白质凝固后，排除乳清，将凝块压制而成的产品。加入的乳酸菌发酵剂发酵产酸，可使干酪成熟，产生风味。  2、果蔬及谷物制品加工泡菜加工：在泡菜生产加工过程中，乳酸菌利用蔬菜的养料发酵，可提高蔬菜制品的营养价值，改善蔬菜制品风味，防止败坏。 发酵豆乳制品：大豆制成豆浆，接种嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌或植物乳杆菌等发酵剂，38～42℃培养6～10h，可以制得无豆腥味、凝固状态良好、酸甜比合适的酸豆乳产品。 3、发酵肉制品加工乳酸菌在肉制品中繁殖产酸，可将NO-2还原成NO，NO通过与肉中肌红蛋白结合可以赋予肉制品明亮的鲜红色。乳酸菌的产酸作用还可以抑制杂菌的生长繁殖，从而防止了肉色变绿和脂肪氧化。利用乳酸菌发酵肉制品，还可以延长发酵肉制品的货架期，降低发酵肉制品中亚硝酸盐含量，提高该类食品的食用安全性。 4、天然食品防腐剂乳酸菌素是一类由乳酸菌在代谢过程中合成产生并分泌到胞外的抗菌多肽或蛋白，具有溶菌作用。因为乳酸菌被认为是世界公认安全的食品级微生物，其产生的抗菌物质可作为天然的食品防腐剂直接应用于食品工业。 5、调味品生产酿造发酵酱油过程中适当地人工接种乳酸菌能使酱油香气浓，风味佳，质地好。在豆酱发酵中加入乳酸菌产生有机酸，能产生多种风味物质，而且豆酱发酵稳定，可以防止豆酱酸败。液体深层发酵制醋时，加入的乳酸菌可代谢产生有机酸、双乙酰及其衍生物等食醋中的主要风味物质。另外，乳酸菌还可与酵母菌一起用于啤酒、葡萄酒及奶酒的生产。 6、生产乳酸乳酸不仅是一种优良的食品工业原料，更作为一种重要的有机酸在化工工业中有着广泛的用途。通过淀粉、粮食、纤维素、工农业及民用废物等可再生资源，利用乳酸菌等微生物发酵法大规模生产乳酸，因其原料来源广泛、生产成本低、产品光学纯度高、安全性高等优点而成为生产乳酸的重要方法。 （二）禽畜牧业1、制作优质青贮饲料青贮饲料的制成是依靠乳酸菌的发酵来完成的，乳酸菌作为一种厌氧菌，依靠植物中的糖分维持生存，两者相互依存。乳酸菌在畜牧业的应用中一般是对同型乳酸菌进行接种，从而使青贮饲料中 pH 值适当降低， 使其中的乳酸含量上升，从而使青贮饲料的品质得到提高。在青贮过程中，乳酸菌通过不断生长繁殖，将植物中的糖分转换成乳酸，而大量的乳酸菌的生长又制了其他菌类的繁殖，保持了植物养分的完整性和安全性。而且，青草植物通过乳酸菌的发酵，还能提高牲畜的食欲。同时，有乳酸菌发酵制成的青贮饲料在冬季等枯草季节也能为牲畜提供口感好、养分高的优质草料，受到各类家畜和养殖畜牧业的热烈欢迎。 2、提高禽畜生产性能在禽畜的生产过程中， 使用乳酸菌能够使其生产性能得到改善。例如，分别添加 0.50%浓度、0.10%浓度、0.05%浓度的乳酸菌，能够发现使用乳酸菌，可以使雏鸡的成活率得到显著提高；防止仔猪腹泻病的发生是养猪的关键。当其发生腹泻时，乳酸菌可将乳糖转化为乳酸，因而降低了肠道 pH 值，抑制了大肠杆菌的生长。研究证实，乳酸菌制剂能明显提高断奶仔猪的生产性能。 乳酸菌代替抗生素在水产养殖中的应用主要体现在水质改良、治疗疾病以及对水产动物免疫等方面。以饲料形式饲喂的乳酸菌一部分可以在肠道内定植，大部分则通过粪便排泄到水中，从而使水体中乳酸菌的数量升高成为优势菌。这样不仅可通过竞争性抑制作用明显抑制肠道和水体的弧菌，而且还可通过直接的化学作用和间接的促进微生物的反硝化作用消除水体中的亚硝酸盐，起到净化水质的效果。 乳酸菌类微生态制剂为饲料和畜牧水产养殖业提供了一条高效、无害、无污染的新选择。随着越来越多的新菌种和特异性菌株在生产中使用，我们要充分考虑动物菌群自身特点以及寄生与环境之间的关系，科学合理地使用，使其达到最大的生态效应和经济效益。 

                微生物食品知识解析及其前景展望！百欧博伟生物：随着世界人口的不断增长，目前70多亿的人口，预估还会持续增长到2025年的80亿，2045年将达到90亿。“民以食为天”，持续增长的人口带来的食品不足，蛋白质缺乏等问题也日益严重。面对这些棘手的问题，科学家将目标瞄准了微生物食品。1、开发微生物食品的优势微生物具有表面积大、转化能力、繁殖速度、变异与适应性、几乎在地球上的每个角落都广泛分布等优点。微生物24 h 所合成的营养物质相当原来体重的30 倍~40 倍，而一头500 kg 的乳牛一昼夜只能合成0.5 kg 蛋白质，相差1 000 倍。细菌在适宜的条件下20 min 繁殖一代，经24 h 培养，一个细胞可繁殖成4 万亿个细胞，细菌比植物繁殖快500 倍，比动物繁殖快2 000 倍。开发微生物工程菌，将在常温、常压条件下消耗很少的能源，很少污染环境可以获得优质的食物，相较普通生产获得的食物而言微生物具有较大的生产优势和经济效益。这就是为什么科学家要将目光转向微生物的理由。2、微生物食品⑴微生物发酵深加工发酵工程技术是一项比较古老的生物技术，它在食品加工业上得到广泛应用。通过微生物代谢产生的代谢产物，我们可以获得所需要的各种酶， 各种氨基酸、核苷酸，蛋白质等。通过不同微生物菌种发酵， 可获得形形色色的重要产品，在人们生活和其他方面具有重要作用。这些产品包括各种酒类、食醋、酱油、乳酪、乳酸饮料、乙醇、丙酮、r-亚麻酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、葡萄糖酸、Vc、VB1 、VB2 、味精、核苷酸、右旋糖、青霉素、链霉素、土霉素等。⑵蛋白质通过基因工程，设计分泌蛋白质的微生物、由工程菌、大肠菌、酵母生产蛋氨酸、大豆球蛋白、鸡卵清蛋白成功。用微生物发酵生产的真菌蛋白（禾杀镰刀菌）、蛋白质含量44 ％，无胆固醇，低脂肪，深受消费者欢迎。过去氨基酸的生产采用植物蛋白提取和化学合成法生产，成本高，产量低，现采用基因重组和细胞融合技术的工程菌生产，成本降低、产量增加。⑶糖国外以淀粉为原料生产果葡糖浆。美国将吡喃环糖氧化酶固定在载体上并与化学催化剂相结合生产纯果糖。新的甜味剂多用微生物发酵法生产甜度高，低热量的产品，如天冬精（门冬酰苯丙氨酸甲酯）甜度是砂糖的2400 倍，用酶法或发酵法生产的氯化砂糖是砂糖甜度的600 倍。国外也在进行某些植物含有天然蛋白质甜味剂的研究，将这种植物蛋白质甜味剂的基因用基因转换技术移植到微生物，就可用发酵法大量生产。我国也找到一些酵母菌可在常温、常压、正常通气条件下生产新的糖源。3、问题微生物发酵法生产的蛋白质，菌体除含蛋白质外还含有核酸脂肪和碳水化物等成分，其中核酸不被人体完全分解，长期大量食用就会引起痛风症。许多国家对待直接食用生物工程生产的食品是小心翼翼的，多数产品是二次加工的原料，这些问题有待于今后继续研究解决。4、展望目前，微生物食品正逐渐步入市场，随着人们对生物工程技术的发展，这些食品越来越受到人们的好评。传统的食品要依靠农牧渔业提供原料，而这些原料供给要受时间、空间等因素制约，而且在数量、质量方面不能满足人类日益增长的要求。微生物食品的开发大大提升了食品的生产效率和品质， 还可以得到合乎营养保健要求的食品，从而切实有效地改善人们膳食结构，提高人们健康水平。欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

             ID8(小鼠卵巢癌细胞)的处理方法与培养步骤！一、细胞简介平台编号：bio-105840规格：1*10 6拉丁属名：ID8(小鼠卵巢癌细胞)细胞名称：ID8 小鼠卵巢上皮癌细胞细胞用途：仅供科研使用。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。二、细胞特性1）来源：小鼠卵巢癌组织2）形态：上皮细胞样，贴壁生长3）含量：>1x106 个/mL4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装三、细胞的运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。     四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备DMEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。下面T25瓶为例；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 弯曲乳杆菌的培养方法与注意事项！一、菌种简介平台编号：bio-53341提供形式：冻干物拉丁属名：Lactobacillus paracasei中文名称：类干酪乳杆菌拉丁名称：Lactobacillus paracasei来源历史：←乳品科学教育部重点实验室(1.0399)收藏时间：2007/2/9原始编号：128-2原产国：中国资源归类编码：15131319101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：菌落中等，表面光滑有光泽，隆起整齐乳白色不透明；发酵果糖、葡萄糖、乳糖等；不发酵蔗糖、棉子糖、蜜二糖、阿拉伯糖、山梨糖、山梨醇、木糖；耐4%和6.5% NaCl；45℃生长。生物危害程度：四类培养基编号：CM0006培养基名称：MRS培养基培养基成分：酪蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母粉 5.0g，葡萄糖 5.0g，乙酸钠 5.0g，柠檬酸二铵 2.0g，Tween 80 1.0g，K2HPO4 2.0g，MgSO4.7H2O 0.2g，MnSO4.H2O 0.05g，CaCO3 20.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.8。*培养CICC 10774时pH需调至5.0.培养温度：37℃需氧类型：好氧分离基物：酸奶子采集地：内蒙古自治区保存方法：真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、培养基MRS 培养基酪蛋白胨 10 克 牛肉浸取物 10 克酵母提取液 5.0 克 葡萄糖 20 克乙酸钠 5.0 克 柠檬酸二胺 2.0 克吐温 80 1.0 克 磷酸氢二钾 2.0 克七水硫酸镁 0.2 克 七水硫酸锰 0.05 克碳酸钙 20.0 克 琼脂 20.0 克蒸馏水 1.0 升 PH 6.8如果要配制液体培养基，则不用加入碳酸钙和琼脂三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。 四、注意事项乳酸菌需要在比较厌氧的环境下培养1) 首次活化，用尽量少的复水液溶解，接种在 5ml 的液体培养基中，静止培养，如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。五、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。4、冻干管打开后需一次用完，不能留存。5、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

               微生物添加剂在动物营养中的发展前景！百欧博伟生物：目前，大量使用抗生素和合成药物的种种弊端已成为严重的社会、生态和经济问题。首先，由于抗生素作为饲料添加剂的长期大量使用，畜产品和环境中抗生素残留问题严重，给从事动物养殖社会群体的安定和动物养殖生产秩序的稳定，以及作为动物产品消费者的人类健康都带来了严重危害。其次，抗生素的大量使用导致细菌产生抗药性，动物胃肠道正常菌群失调和机体免疫力下降，畜禽内源性感染和二重感染及综合发病等，动物养殖生态环境受到很大的负面影响。此外，由于抗生素等药物的滥用，导致动物免疫功能和饲料利用率下降，养殖中药物和饲料成本投入增加，药物残留限制了动物产品的出口创汇；动物产品质量的下降、企业间的恶性竞争、疾病的风险等，使动物养殖生产利润空间也越来越小，这些问题又最终严重影响到动物生产的经济效益。　　要保障畜牧业的安全生产，推广应用安全的抗生素和合成药物替代产品非常必要。微生物添加剂作为新型安全、高效的饲料添加剂，不仅可避免容易带来动物及其产品安全隐患的问题之外，还可以提高动物健康状况和动物产品质量，增加动物养殖生产的经济价值，不失为一条能促进畜牧业健康、持续发展的有效途径。　　一、常用微生物添加剂种类及特点　　微生物添加剂亦称益生素(Probiotic)、促生素、生菌素、益菌素及微生态制剂等。　　到目前为止，开发应用的饲用微生物的品种很多，但出于对菌种安全性的考虑，我国《饲料添加剂品种目录(2006)》准予使用的有16种。按其菌种类型，饲用微生物添加剂可分为乳酸菌类、芽孢杆菌类、酵母菌类和光合细菌类。按产品所含菌种又可将其分为单一菌剂和复合菌剂。　　乳酸菌是一类可以分解碳水化合物产生乳酸的细菌总称，其中以乳酸杆菌属、双歧杆菌属为代表。乳酸杆菌是动物胃肠道中的优势菌群，应用历史最早，种类很多，均为无孢子生成苗，厌氧或兼性厌氧，不耐高温；实际生产中的此类产品有乳酸菌发酵饲料、乳酸菌粉及乳酸菌提取物。我国允许作为饲料添加剂的乳酸杆菌有嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、粪肠球菌(粪链球菌)、乳酸肠球菌、屎肠球菌、乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌及保加利亚乳杆菌；而双歧杆菌有两歧双歧杆菌(农业部公告第318号，2006)。目前主要应用的是嗜酸乳酸杆菌和粪链球菌。　　芽孢杆菌在动物肠道中仅零星存在，属需氧菌。此类菌普遍存在于土壤、水、发酵食品和动物粪便中，易培养。比起乳酸杆菌属具有能耐受胃内低pH环境，在肠道的正常生态中只有少量存在，不会大量增殖，多种有效的酶促活性等优点。其孢子对热、压、酸、碱、酶及某些药物、X射线等不良环境具有很强的耐受性，在饲料加工、储存及消化道中稳定性好。我国允许作为饲料添加剂的芽孢杆菌有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌(农业部公告第318号，2006)。我国目前畜禽用的微生物添加剂产品以芽孢杆菌为主。　　酵母菌零星存在于动物肠道微生物群落中，好氧，富含蛋白质和多种B族维生素、不耐热。我国允许作为饲料添加剂的酵母菌有产朊假丝酵母和酿酒酵母(农业部公告第318号，2006)。　　光合细菌主要在水产养殖中使用，用作饲料添加剂或水质净化剂。我国允许作为饲料添加剂的光合细菌有沼泽红假单胞菌(农业部公告第318号，2006)。　　单一菌属微生物添加剂包括不同作用的菌株通过不同比例而组合的芽孢杆菌类微生物生长促进剂，以及类似组合的乳酸杆菌类微生物添加剂。在实际生产应用中，真正由单一菌株作为添加剂是比较少见的，多以复合菌的形式使用。复合菌属微生物添加剂通常由芽孢杆菌与乳酸杆菌联合组成或乳酸杆菌属与酵母联合组成，具有很好的协同作用和更好的使用效果。　　二、微生物添加剂作用机理　　微生物添加剂的作用与消化道的微生态平衡有关，其作用机理主要体现在以下几个方面：　　1、维持消化道菌群正常化　　在微生态系统中，优势菌群对整个菌群起决定作用，一旦失去优势种群，则该微生态平衡失调。使用微生物添加剂则通过补充某一特定微生物，维持有益细菌菌群的优势地位，保持菌群的正常。饲料中添加微生物添加剂是通过以下四种方式维持有益细菌的优势的：①直接充实有益的优势菌群，并使之在肠道内定植；②与有害菌竞争养分或竞争附着部位，形成生物屏障作用；③与病原菌竞争营养物质，消耗消化道内的氧气，造成不利有害菌的环境；④产生不利有害菌的产物，例如产生乳酸、过氧化氢、溶菌酶和抗菌物质等。　　2、调节动物消化代谢　　根据已有的研究成果认为：①有益微生物可产生各种消化酶(例如酵母菌和芽孢杆菌能产生脂肪酶、淀粉酶和蛋白酶)，直接消化饲料营养成分，有些微生物还能产生分解复杂碳水化合物的酶或植酸酶，改善消化道食糜的物理特性或消除日粮中的抗营养因子，直接提高饲料转化率，促进动物的生长和生产。②有益细菌可产生B族维生素，例如生物素等，提供营养物质。此外，微生物添加剂可提高动物体内抗体水平或提高巨噬细胞的活性，增强机体免疫功能。　　3、防止产生有害产物　　肠内大肠杆菌活动增强，导致蛋白质转化为氨和胺，两者都具有刺激性和毒性。饲喂微生物添加剂可使肠道、粪便及门静脉血液中的氨量降低，阻止肠道内细菌产生胺及中和肠内毒素等。　　三、微生物添加剂的使用方法　　微生物添加剂的剂型主要有固体粉剂和液体两种类型，在此基础上的使用方法包括直接添加于饲料，制作发酵饲料，饮水或养殖水体添加，喷雾等。其中以粉剂直接添加于饲料比较多见，添加的水平因菌种、活菌浓度等而存在一定的差异，也有直接以发酵菌液的形式添加于饲料中。还有就是在饲料饲喂前使用于饲料中制作发酵饲料。而冯定远等(2004)在获得广东省科学技术三等奖的成果：“JBC‘乐图’乳酸菌提高猪生产性能及改善猪肉品质的效果”中建立的方法，则是综合了制作发酵饲料、饮水及喷雾等几种使用方法，具体方法是：在饲料中添加0．3％JBC“乐图”乳酸菌液，40℃发酵约8小时后饲喂，同时在饮水中添加0．3％JBC“乐图”乳酸菌液，还可同时通过喷雾方式来净化畜舍养殖环境。最后，就是水产动物养殖生产中也有把沼泽红假单胞菌等光合细菌微生物添加剂使用于养殖水体中来改善水中生态环境。　　四、微生物添加剂在动物营养中应用的发展前景　　首先，推广使用微生物添加剂，实施健康养殖可提升现有动物产品的商品价值，开发名、特、优动物产品，完善动物产品价格结构体系，满足我国发达地区对高品质动物产品的需求。其次，通过推广使用微生物添加剂，开发新型安全、优质的动物产品，是在保障动物健康基础上，人们生活健康、社会安定团结的急切需要，具有重要的社会效益。此外，通过推广使用微生物添加剂，可降低养猪场的NH3、H2S和SO2等浓度，净化养猪场污水，使之再循环成为生猪饮用水，节约水资源，降低环境污染，提高生态效益，具有重要的环保意义。随着人们对食品安全和环境保护的日益关注，微生物添加剂的应用前景必将更加广阔。　　在此需求基础上，今后有关微生物添加剂的研究和开发应该加强以下几个方面的工作：①从细胞水平和分子水平上进一步深入研究益生素的作用机理；②通过基因工程手段获得能“永久性”定居在肠道的益生菌和“多功能性”微生态制剂；③加强益生素与酸化剂、中草药制剂等绿色饲料添加剂的协同效应和作用机理的研究。

                   ATCC 9080酿酒酵母单层冻干管打管说明书！                                           酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），又称面包酵母或者出芽酵母。酿酒酵母是与人类关系最广泛的一种酵母，用于制作面包和馒头等食品及酿酒。酿酒酵母的细胞为球形或者卵形，直径5-10μm。其繁殖的方法为出芽生殖。酿酒酵母与同为真核生物的动物和植物细胞具有很多相同的结构，又容易培养，酵母被用作研究真核生物的模式生物。酿酒酵母被认为是最具潜力的大规模生产菌种。一、菌种简介平台编号：bio-53342规格：冻干物拉丁属名：Saccharomyces cerevisiae菌株名称：酿酒酵母其他编号：NBRC0565=ATCC9080培养基编号：144培养温度：25-28培养时间：48h用途：测定肌醇、泛酸、吡哆醇、维生素B6；发酵麦芽糖，产α-葡萄糖苷酶、麦角甾醇、烟酸、焦磷酸注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、培养基*麦芽汁琼脂培养基*YM 培养基（酵母粉 3.0 g ； 麦芽提取物 3.0 g ；葡萄糖 10.0 g ；蛋白胨 5.0 g； 琼脂 20.0 g；蒸馏水 1000 ml ；pH 6.2 +/- 0.2 ）三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。 四、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用 0.1-0.2ml 的培养液或无菌水溶解，接种在 2 个斜面上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。五、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

        人微血管內皮細胞株的培养操作规程与处理方法！细胞简介平台编号：bio-106081规格：1×10⁶cells/T25培养瓶拉丁属名：HMEC-1（人微血管內皮細胞株）(通过STR鉴定）细胞名称：人微血管內皮細胞株种属：人源细胞系/血液、淋巴系统到货周期：10-15个工作日细胞用途：仅供科研使用。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。细胞特性1）来源：血管2）形态：内皮细胞，贴壁生长3）含量：>1x10e6 个/mL4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装细胞接受后的处理：1）收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。2）请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。3）弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的完全培养基。4）如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。5）接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。                   本公司的细胞培养操作规程，供参考一、培养基及培养冻存条件准备：1）内皮培养基（ECM: Sciencell 1001）；添加10 ng/mL EGF；1 ug/mL氢化可的松；10mM 谷氨酰胺；优质胎牛血清，10%；双抗1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。二、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。3、轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。4、移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。下面T25瓶为例；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   口腔微生物平衡有助抵御新冠病毒！百欧博伟生物：人的口腔内含有大量的益生菌群，它们是抵御病毒的重要屏障之一。如果口腔微生态处于“失守”状态，那么，口腔黏膜的“防疫工事”就极易被病毒攻破，人体的各个系统都将遭到无情打击。近日，由中华预防医学会微生态学全国口腔微生态学组组长、黑龙江省口腔微生态技术创新中心主任马晟利教授课题组完成的一项课题“宏基因组学分析揭示新冠肺炎患者口腔微生物群改变”，相关论文被《自然》杂志子刊发表。这项研究成果首次揭示，新冠病毒侵入人体后，引起口腔微生物多样性下降，打破了口腔微生态平衡，最终使“脱缰野马”般的病原体由口腔闯入肺内，导致肺部合并感染。“上述研究结果提示，良好的口鼻咽腔环境有助于守牢‘病从口入关’，不让病毒和细菌乘虚而入后兴风作浪，人体才能避免滑入亚健康甚至疾病状态的‘深潭’中。”6月28日，在接受科技日报记者采访时，马晟利介绍，口腔、鼻腔、咽腔共同建造了消化道与呼吸道的共同通道，并各司其职。其中，口腔和鼻腔直接与外界环境相通，食物由口腔经口咽进入食管，空气由鼻腔经鼻咽进入气管，而外来的细菌或病毒往往利用口鼻咽部黏膜表面的“定居点”而侵入人体。为阻挡这些微生物的来犯，口鼻咽腔内的固有菌群则构筑了天然且坚固的“堡垒”；同时，围绕在鼻腔、口腔和咽腔连通处的周围，还有咽扁桃体、腭扁桃体、舌扁桃体围成的咽淋巴环“防线”，用来抵御外敌。让人们想不到的是，人体微生物种类繁多，数量巨大，在口腔、肠道、皮肤、阴道等4大贮菌库中，竟然库存了1—1.5公斤细菌。如此“海量”的菌群，犹如牢固的“城墙”一样，不让外来的细菌、病毒在人体黏膜表面“落地生根”。而菌群的防线一旦被突破，微生态平衡就会被颠覆，导致人体免疫力下降，诱发疾病。马晟利指出，口腔和鼻腔是新冠病毒的一个主要进入门户，通过宏基因组测序技术，课题组锁定了新冠肺炎患者口咽部高度聚集的菌群，特别是小韦荣球菌；同时发现某些菌群如克雷伯菌、不动杆菌、沙雷氏菌等的介入，有可能直接或间接影响到新冠肺炎病情的严重程度。马晟利介绍，大多数感染者为轻型或普通型疾病，经科学治疗可逐步康复；但大约有5%的病例会发展为重症至危重症。这其中，严重的新冠肺炎主要并发症，例如肺炎和急性呼吸窘迫综合征，被怀疑是由细菌过度感染造成的。此外，死亡的重型新冠肺炎患者中，有50%伴有继发性细菌感染。而细菌二重感染和抗生素的使用，对引发新冠肺炎并发症无疑起到了“推波助澜”的作用。马晟利进一步解释说，大剂量或长期应用抗生素，特别是广谱抗生素，在对致病敏感菌杀灭或抑制的同时，其他不敏感菌则借机翻身，大量生长繁殖。此类无害菌在正常情况下，本来可以和人体和平共处，但由于菌群“此消彼长”，角色互换，随着敏感菌的“退群”，无害菌则不再被压制，摇身一变，转化为致病性菌，或者可以被视为“原发感染菌的耐药菌株”。临床上，抗生素的不良反应及毒性反应包括肝肾毒性和神经、血液系统损害，以及变态反应和二重感染。马晟利带领科研团队进行深入研究后还发现，新冠肺炎患者口咽部微生物组的抗生素耐药基因显著增加，尤其是危重症患者组表现更显著。他分析说，抗生素耐药性呈渐进式的缓慢积累，因为大多数危重病例有多重复杂的“共病”(即两种疾病共存)，并可能有高抗生素摄入的历史。换句话解释，抗生素的滥用对体内的益生菌和正常定居的固有菌群同样“不留情面”，在改变微生物群的同时，逐渐增强了细菌的耐药性，进而酿成了严重的病毒感染，给人体带来了巨大的“微生态灾难”。

             人甲状腺癌细胞的运输和保存及培养方法！一、产品信息平台编号：bio-106174规格：1ml/T25拉丁属名：K1（人甲状腺癌细胞）细胞名称：人甲状腺癌细胞种属：人源细胞系/眼、耳、鼻、喉、口腔价格：询价到货周期：10-15个工作日细胞用途：仅供科研使用。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、细胞介绍该细胞系源自于一名19岁车祸罹难的健康男性的视网膜组织，由Amy Aotaki-Keen建系于1986年。该细胞系表达视网膜色素细胞特有的分子标记如胞内视黄醛结合蛋白和PRE-65。三、细胞特性1）来源：视网膜2）形态：上皮细胞样3）含量：>1x106 个/mL4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装四、细胞的运输和保存使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。                     五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备DMEM/F12培养基(DMEM/F12，GIBCO，货号10565-042)；胎牛血清，10%；双抗1%。2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。下面以T25瓶为例；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

                  黄曲霉的检验检疫方法与注意事项！黄曲霉，半知菌类，一种常见腐生真菌。多见于发霉的粮食、粮制品及其它霉腐的有机物上。菌落生长较快，结构疏松，表面灰绿色，背面无色或略呈褐色。菌体有许多复杂的分枝菌丝构成。营养菌丝具有分隔；气生菌丝的一部分形成长而粗糙的分生孢子梗，顶端产生烧瓶形或近球形顶囊，表面产生许多小梗（一般为双层），小梗上着生成串的表面粗糙的球形分生孢子。分生孢子梗、顶囊、小梗和分生孢子合成孢子头，可用于产生淀粉酶、蛋白酶和磷酸二酯酶等，也是酿造工业中的常见菌种。一、菌种简介平台编号：bio-52621规格：冻干物拉丁属名：Aspergillus flavus Link菌株名称：黄曲霉其他编号：AS3.3928培养基编号：15培养温度：25-28℃培养时间：5-7 天用途：科研注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、培养基综合马铃薯培养基（PDA）20%马铃薯汁 1L 葡萄糖 20g MgSO4.7H2O 1.5g KH2PO4 3gVitanib B1 (硫胺素) Trace 微量约 8mg Agar (琼脂) 20g pH 自然20%马铃薯汁配制方法：马铃薯洗净去皮，取 200 克切成小块 , 加水 1000 毫升煮沸 20 分钟后滤去马铃薯块，将滤液补足 1000ml。 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20°C 保存。 四、检验检疫方法1、薄层层析薄层层析（thin-layer chromatography,tlc)是在黄曲霉毒素研究方面应用最广的分离技术.自1990年，它被列为aoac (association of official agricultural chemists)标准方法，该方法同时具有定性和定量分析黄曲霉毒素的功能。2、液相色谱液相色谱（liquid chromatography,lc)与薄层层析在许多方面具有相似性，二者互相补充.通常用tlc进行前期的条件设定，选择适宜的分离条件后，再用lc进行黄曲霉毒素的定量测定。3、免疫化学分析利用具有高度专一性的单克隆抗体或多克隆抗体设计的黄曲霉毒素的免疫分析方法，也是最常用的黄曲霉毒素检测方法.这类方法通常包括放射免疫分析方法（radioimmunoassay,ria),酶联免疫法（enzyme-linked of immunosorbent assay,elisa)和免疫层析法（immunoaflinity column assay,ica).它们均可以对黄曲霉毒素进行定量测定。(1) 免疫亲和柱-荧光分光光度法和免疫亲和术-hplc法免疫亲和柱法和酶联免疫吸附法虽然都可达到速简便效果，但酶联免疫吸附法仅能检测单一毒素（如黄曲霉毒素b1)含量，而且易出现假阳性结果，难以控制.免疫亲和柱法（包括荧光光度法和hplc法）却能达到既定量准确又快速简便的要求。(2) 酶联免疫吸附法1996年，nakane 建立了辣根过氧化物酶标记抗体的测定技术.由于该方法简便，敏感，特异，可作为多种抗原或抗体的测定，20世纪70年代后期，该方法引入真菌毒素的检测中，下面介绍的是竞争性酶联免疫吸附间接法检测黄曲霉毒素b1。原理：将已知抗原吸附在固态载体表面，洗除末吸附抗原，加入一定量抗体与待测样品（含有抗原）提取液的混合液，竞争培养后，在固相载体表面形成抗原抗体复合物.洗除多余抗体成分，然后加入酶标记的抗球蛋白的第二抗体结合物，与吸附在固体表面的抗原抗体结合物相结合，再加入酶底物.在酶的催化作用下，底物发生降解反应，产生有色物质，通过酶标检测仪测出酶底物的降解量，从而推知被测样品中的抗原量。(3) 微柱筛选法 可以用来半定量测定各种食品中黄曲霉毒素b1,b2,g1,g2的总量。原理：样品提取液中的黄曲霉毒素被微柱管风硅镁型吸附层吸附后，在波长365nm紫外光灯下显示蓝紫色荧光环，其荧光强度与黄曲霉毒素在一定的光密度范围内成正比例关系.若硅镁型吸附剂层未出现蓝紫色荧光，则样品为阴性（方法灵敏度为5-10ug/kg).由于在微柱上不能分离黄曲霉毒素b1,b2,g1,g2,所以测得结果为总的黄曲霉毒素含量。(4) 一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法.由此产生的一步式黄曲霉毒素快速检测试纸可在5—10分钟完成对样品中黄曲霉毒素的定性测定.借助黄曲霉毒素标准样品，这种方法能估算黄曲霉毒素的含量，非常适用于现场测试和进行大量样品的初选。五、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支斜面或平板；或直接接种液体培养基）； 经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。6）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖， 注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入 0.5ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3 滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。

             猪扁桃体上皮细胞的使用方法与培养步骤！一、细胞简介平台编号：bio-108896规格：5*10e5拉丁属名：猪扁桃体上皮细胞（永生化）细胞名称：猪扁桃体上皮细胞（永生化）注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、细胞详述扁桃体是一对扁卵圆形的淋巴器官，位于扁桃体窝内。按其位置分别称为腭扁桃体、咽扁桃体和舌扁桃体。其中，腭扁桃体最大，通常所说的扁桃体即为腭扁桃体。腭扁桃体呈卵圆形，粘膜一侧表面覆有复层扁平上皮，其主要由上皮细胞构成。该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。三、细胞特性1) 组织来源于实验动物的正常扁桃体组织。2) 细胞鉴定：广谱角蛋白（PCK）或细胞角蛋白-19（CK-19）免疫荧光染色为阳性。经鉴定细胞纯度高于90%。3) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。4) 细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1) 1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2) T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。五、产品使用1) 本产品仅能用于科研2) 本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3) 本产品未通过用于活体诊断的审核六、培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法三：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。七、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。微生物菌种查询网自设细胞系板块，是细胞株提供中心,专业提供代次低、周期短、活性好的细胞株。与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                凝结芽孢杆菌单层冻干管打管说明书！                                                          凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans），革兰阳性，属于硬（或厚）壁菌门。凝结芽孢杆菌分类学上属于芽孢杆菌属，细胞呈杆状，革兰氏阳性菌，端生芽孢，无鞭毛。分解糖类生成L-乳酸，为同型乳酸发酵菌。最适生长温度为45-50℃，最适pH为6.6-7.0。一、菌种简介平台编号：bio-53283规格：冻干物拉丁属名：Bacillus coagulans中文学名：凝结芽孢杆菌拉丁学名：Bacillus coagulans培养基编号：104培养温度：37培养时间：48 小时用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、培养基MRS 培养基酪蛋白胨 10 克 牛肉浸取物 10 克酵母提取液 5.0 克 葡萄糖 20 克乙酸钠 5.0 克 柠檬酸二胺 2.0 克吐温 80 1.0 克 磷酸氢二钾 2.0 克七水硫酸镁 0.2 克 七水硫酸锰 0.05 克碳酸钙 20.0 克 琼脂 20.0 克蒸馏水 1.0 升 PH 6.8如果要配制液体培养基，则不用加入碳酸钙和琼脂三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。 四、注意事项1）乳酸菌需要在比较厌氧的环境下培养首次活化，用尽量少的复水液溶解，接种在 5ml 的液体培养基中，静止培养，如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。五、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

               人胎盘绒毛癌细胞的操作流程与处理方法！细胞简介名称：JAR (人胎盘绒毛癌细胞) 别称：Jar; JAr; JaR种属：人年龄（性别）：男；胎儿组织来源：胎盘；绒毛绒膜癌生长特性：贴壁细胞细胞形态：上皮细胞样背景描述：JAR细胞源自胎盘滋养层肿瘤。生物安全等级：1生长培养基：RPMI-1640(PM150110)＋10% FBS(164210-500)＋1% P/S(PB180120)推荐传代比例：1:3-1:4推荐换液频率：2~3次/周倍增时间：20-30 hours冻存条件冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO温度：液氮培养条件气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃基因表达情况：estrogen; progesterone; human chorionic gonadotropin (hCG); human chorionic somatomammotropin (placental lactogen); hCG production averages 22.5ng/mL after reculturing保藏机构：ATCC; HTB-144 BCRC; 60491 DSMZ; ACC-462操作流程1、您收到JAR人胎盘绒毛癌细胞后，请按照以下方法进行操作：取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。2、细胞传代：1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，*后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。3、细胞冻存：1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 4、细胞复苏：1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。细胞处理方法一、贴壁细胞1、 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张）。2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。3、严格遵循无菌操作规范，打开细胞培养瓶。4、37度平衡1-2小时。5、用移液管吸取培养基，到50ml离心管中，剩下细胞密度达到80%至90%可以传代，如没有达到添加6ml新鲜培养基继续培养。6、如果肉眼检查上清有细胞，对50ml上清进行离心收集细胞，如果细胞连片状态，弃掉上清对收集的细胞进行胰酶消化（1ml胰酶37度），接种培养。 二、悬浮细胞1、接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张）。2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。3、严格遵循无菌操作规范，打开细胞培养瓶。4、细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒）。5、1000rpm，5min 离心，用吸管小心吸出上清，加入培养基，重悬细胞。6、将重悬好的细胞转入六孔板或者细胞培养瓶种，加入新鲜培养基，置于 37℃，5%CO2 培养（大部分细胞）。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

           枯草芽孢杆菌枯草亚种的实验内容与注意事项！                                                       一、菌种简介平台编号：bio-59397提供形式：冻干物拉丁属名：Bacillus subtilis subsp. subtilis中文名称：枯草芽孢杆菌枯草亚种属名：Bacillus种名加词：subtilis subsp. subtilis来源历史：←天津科技大学(11002)收藏时间：2007.2.9资源归类编码：15131311101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产具体用途：发酵产纳豆激酶。特征特性：对温度、pH、抗生素有较强耐受性;对病原菌有强抑制能力和对有益菌有良好共生能力;同时又具有较好产蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶能力    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：35-38℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；生产；发酵产纳豆激酶。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。二、培养基*营养琼脂培养基（NA）*胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）*LB 培养基（以上培养基三选一即可）三、枯草芽孢杆菌枯草亚种实验内容1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌四、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。 五、枯草芽孢杆菌枯草亚种保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。2、悬液保存法：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。3、载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。4、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃)：是适用范围最广的微生物保存法。六、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，参照“开管说明”，用无菌吸管吸取 0.3ml适宜的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，或接种液体培养基，不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。10）西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖， 注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入 0.2ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。

                       微生物技术与环境污染控制！对于环境保护的认识观念 1、重视预防问题的发生，而不是等问题发生后才试图解决问题。要将污染视为一种可用资源。这种资源能够通过生物的作用，既经济又有效地将2.污染物质转化为有益的量化生物。3、停止一切使用化学药品和药物解决生态问题的行为。这种做法收益短暂，随之而来的一系列问题更加严重：收益锐减，动物的栖息地遭到毁灭性破坏。4、运用生态工程和生态治理方案获得可持续生产和收益。利用再循环技术，既能提高产量，增加收益能力，又能有效地保护生态系统。5、微生物产品中所有的生物都是天然的、不含病原菌、非遗传设计的，对人类及动植物无害，不会对环境造成二次污染。关于微生物 微生物和动物、植物一样，是自然界三大物种之一。只是因为微生物个体过于微小，而不像一般动物和植物那样易让人们感知它的存在和功能，这不仅影响了人们对微生物的正确认识，也阻碍了对微生物技术开发的支持和投入。随着社会的发展和科学的进步，微生物在工业、农业、能源、医药、食品等领域中所发挥的作用愈来愈令人瞩目。尤其是循环经济的建设，将离不开微生物的参与及其应用技术的发展和创新。  微生物的定义 微生物（microorgnisms）一词并非生物分类学上的专用名词，而是指所有形体微小，单细胞，或个体结构较为简单的多细胞，甚至无核细胞，必须借助光学显微镜甚至电子显微镜才能够观察到的低等生物的通称。微生物的特点 1、个体微小、分布广泛微生物的大小用微米甚至纳米来表示，从零点几微米到几百纳米不等。由于微生物个体微小而且轻，故可通过风和水的散播而广泛分布。江、河、湖、海、高山、陆地、人体等，甚至寒冷的北极冰层中也发现有微生物的存在。2、种类繁多、代谢旺盛据统计，已发现的微生物有十几万种。而且不同种类的微生物具有不同的代谢方式，能用各种各样的有机物和无机物作为营养物质，使之分解和转化。同时，又能将无机物合成复杂的有机物。因此，微生物在自然界的物质循环中起着重要的作用。3、繁殖快速、易于培养微生物在最适宜的条件下具有高速繁殖的特性。尤其是细菌，其细胞一分为二，即裂殖。大多数微生物都能够在常温常压下，利用简单的营养物质生长繁殖，这就使我们容易培养微生物，特别是获得纯种微生物。4、容易变异、利于应用 微生物技术的发展 微生物学本身就是通过解决实际问题，并伴随着其他学科的发展而发展起来的，也是在不断深入以及实践需要的基础上逐渐发展起来的。19世纪初，人们开始注意到污水中细菌的存在及其对环境的影响，1913年英国的费拉开创了活性污泥法，并随着欧美各国一些城市先后建立和发展了自来水厂。20世纪50年代，英美法一些国家的学者陆续发表了研究报告。 20世纪60—70年代，由于世界经济的飞速发展，环境污染的日趋严重，人类充分认识到环境保护与生态平衡的重要性，污染控制技术有了许多突破性发展，生物膜和活性污泥法更加完善，污染控制微生物有了很大发展。微生物学与生物化学的结合，诞生了遗传工程。20世纪80年代以后，污染控制微生物日臻成熟。 微生物技术在环境保护中的应用 微生物在循环经济发展中，扮演着十分重要的角色——污水和垃圾的处理者。几乎所有的污水处理都是靠微生物的作用完成的。污水和污物处理中既需要微生物分解和除掉各种有害物质，此外，还要靠微生物进行除臭。污水与污物的处理速度、处理效果取决于微生物的种类和功能。微生物技术的前景微生物作为一个生物界别，它的开发前景是不可限量的。当今和未来世界的发展中，微生物工程技术是“生产-经济-资源-环境-社会-保健”大系统中占有极重要地位和快速见效的重大技术。中国是生物资源、生物多样性最丰富的国家之一。幅员辽阔，地跨寒温至热带，内陆海拔高差-155至8848米，地形复杂、环境多变，生物资源丰富。据不完全统计，中国拥有动植物、微生物约26万种，其中植物3万种、动物20万种、微生物3万种，是世界生物资源、生物多样性最丰富的国家之一。发展生物技术及其产业，中国有着雄厚的资源基础。在20世纪最后20年里，中国成为世界上经济发展最快的国家之一。为了依靠科技，推动21世纪经济持续快速发展，中国政府十分重视生物技术研究开发与产业化。生物技术已成为中国研究开发经费投入最多的领域，我国的生物技术产业必将蓬勃发展并迅速崛起。欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 果蝇胚胎细胞的培养操作与注意事项！一、细胞简介平台编号：bio-51705规格：暂不提供拉丁属名：S2细胞株名称：果蝇胚胎细胞种属：果蝇组织来源：胚胎生长特性：悬浮贴壁混合生长。形态特征：上皮细胞样微生物，支原体检测：阴性注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、细胞说明1、细胞培养条件是26°C–28°C，空气中即可，不用二氧化碳。在培养皿中是半贴壁细胞，在摇瓶中是悬浮细胞。2、S2果蝇细胞的完全培养基是：Schneider's  Drosophila medium + 10% 热灭活胎牛血清+ 0.1% Pluronic F-68. 这个完全细胞培养基在瞬时表达和稳表达细胞系构建的时候，都可以使用。Pluronic F-68在悬浮培养的时候需要加入，但是在贴壁培养的时候不用添加。可以选择性的加入终浓度为50 单位/ml的青霉素和50 ug/ml的链霉素。细胞转染和冻存的时候，需要确保细胞的活力大于95%。3、S2果蝇细胞培养时倍增的时间是24小时，细胞进行传代的时候在细胞对数生长期。4、S2果蝇胚胎细胞的冻存条件是：45% 用过的完全培养基（条件培养基）+45% 新鲜完全培养基+10% DMSO，液氮储存。用过的完全培养基（条件培养基）中含有S2果蝇细胞的生长因子，有助于S2细胞的生长，所以一定要保留一点用过的培养基在里面。5、培养S2细胞的时候，如果使用未灭活的胎牛血清，会抑制S2细胞的生长。6、果蝇Schneider 2（s2）细胞可以转染表达载体用于蛋白瞬时表达或共转染一个筛选载体（例如pcohygro或pcoblast）构建稳表达细胞系。我们建议你测试一下你的蛋白的瞬时表达情况，然后再构建稳表达细胞系。一旦你证明你的蛋白质在s2细胞中表达，你可以构建稳表达细胞株，增加蛋白表达，扩大蛋白表达的生产规模。果蝇S2稳表达细胞系通常包含多拷贝基因插入，形成500多个-1000个拷贝数，首尾相接，插入的基因拷贝数可以通过改变表达质粒和选择质粒的比例来控制。我们建议使用表达质粒与选择质粒比例是的19:1（w/w）。你可以改变比率以优化特定基因的表达。质粒转染建议使用磷酸钙，但一些脂基转染试剂，例如Lipo2000转染试剂同样适用。7、果蝇表达系统的筛选载体是pCoHygro载体和pCoBlast载体，他们分别含有潮霉素（Hygromycin）和杀稻瘟菌素（Blasticidin）筛选抗性。在这两个载体中，抗性基因都是在Copia启动子的作用下调控的。8、构建稳表达细胞系时，使用pCoHygro筛选质粒和表达质粒一起共转染S2果蝇细胞的时候，潮霉素的筛选浓度是300ug/ml, 一般要筛选3-4个星期。使用使用pCoBlast筛选质粒和表达质粒一起共转染S2果蝇细胞构建稳表达细胞系的时候，杀稻瘟菌素的筛选浓度是25 ug/ml, 一般要筛选2个星期就可以了。在筛选过程中，细胞死亡会经常发生。   三、细胞特征如下1、用于蛋白质的瞬时表达或构建稳表达细胞系果蝇s2细胞可单独用重组表达载体进行瞬时表达研究，或使用载体（如pcohygro或pcoblast）以构建稳表达细胞系。有多种果蝇表达系统试剂盒可用于在S2细胞中表达感兴趣的重组蛋白。2、细胞株质控标准每批S2细胞都经过冷冻后细胞生长和活力测试。此外，还对S2细胞株进行了细菌、酵母菌、支原体和病毒污染检测，并对其进行了同工酶和核型分析。四、接受后处理1) 收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。2) 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。3) 弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的完全培养基。4) 如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。5) 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。五、培养操作1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。2.加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消 化。3.按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。4.将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；1.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2.4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。六、注意事项1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。2、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题，责任由客户自行承担。3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。4、静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细胞汇合度80%左右时正常传代。5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

                   长枝木霉的特征鉴别与培养方法！长枝木霉，属于半知菌门，开始时为白色，致密，圆形，向四周扩展，生长一段时间后从菌落中央产生绿色孢子，中央变成绿色。菌落生长迅速、有明显的轮纹，周围有白色菌丝的生长带。最后整个菌落全部变成绿色。一、菌种简介为害食用菌的木霉菌种类很多，主要有哈茨木霉，长枝木霉，多孢木霉，绿色木霉，和康氏木霉。均属于半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、从梗孢科、木霉属。木霉对蘑菇、香菇、平菇、银耳、木耳等多种食用菌菌种和栽培菇床都能侵染为害，导致菌种成品率降低和产量收获大幅度减少。菇床感染了木霉菌后2-4天，就能生长出大量白色菌丝，随后由于产生大量的分生孢子而呈现绿色。木霉菌生长快，活力强，使食用菌菌丝发育受到严重影响，木霉侵染了蘑菇菇床，严重时菌丝不能生长，子实体被木霉菌丝包裹而变软，导致死亡，有些子实体受侵染后，表面出现褐色斑点，不仅产量低下，而且品质低劣。香菇菌块被侵染后，在料面形成一堆堆绿色霉层，使菌丝不能扭结形成菇蕾，即使长出少量的子实体也会腐败而失去食用价值。二、特征鉴别在PDA上20℃~30℃黑暗条件下，菌落半径为65~70mm，40℃为(13~)44(~70)mm，30℃~40℃时24小时内可以形成分生孢子，30℃以及35℃分生孢子产量最大，20℃一般不产生分生孢子。35℃在66小时内产生的分生孢子多多少少均匀地布满整个菌落，30℃时分生孢子倾向于形成同心轮纹排列；分生孢子堆黑绿色，有时有白色的杂斑点，经常伴有不太明显的黄色菌丝条纹。产生黄色的可扩散色素，30℃产量最高，35℃和20℃产量最低，40℃不产生色素。在CMD上1周内，20℃培养，给予12小时冷白光和12小时黑暗交替条件，菌落的分生孢子梗沿着稀疏的菌丝区域形成，有时形成汇合的垫状聚合体结构。一般不形成分生孢子簇，分生孢子可从生，形成细小的从生点，直径小于0.5mm。分生孢子梗的可育延伸物不可见。缺乏不育的毛状结构。在CMD培养基上，典型分生孢子梗结构包括发育强壮的中轴，在中轴上向顶端产生单生的瓶梗，随着离顶端距离的延伸，产生成对的长度逐渐增加的二次分枝。瓶梗直接产生于二次分枝上，很少成涡状排列。分生孢子梗的主轴宽度为(1.2~)2.2~3.2(4.7)。瓶梗主要为单生，很少排列为二岐分枝式的涡状，典型形状为圆柱形，但呈涡状排列时，中间部分膨大，或呈状，直或者弯曲成钩状，长度为(2.2~)5.5~9.5(~17.2)μm，最宽(1.0~)2.2~3.2(~4.2)μm，基部宽度为(1.0~)1.5~2.2(~4.5)μm，长宽比例为(1.0~)1.6~3.7(~7.3)，母细胞的宽度为(1.2~)2.2~3.2(~4.7)μm。间生瓶梗比较常见而且明显可办。在CMD上分生孢子绿色，椭圆形或细长椭圆形，大小为(2.5~)3.5~4.7(~7.8)x(2.0~)2.3~3.0(~4.0)μm，长宽比例为(0.9~)1.5~20(2.7)，光滑。在CMD上厚垣孢子丰富，端生厚坦孢子为亚球形或球形，间生厚垣孢子为其母细胞形状，大小为(3.7~)6.0~9.7(~18.2)μm。三、生长环境常见的木霉属菌种有绿色木霉、康宁木霉、棘孢木霉、深绿木霉、哈茨木霉、长枝木霉等。长枝木霉具有较强的适应性，在15~40℃之间都能生长和产孢。在25~35℃之间菌丝生长较好，35℃生长最好；在25~35℃之间产孢较多。四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。五、使用范围1、合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 2、天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 3、半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 

                   动物病原微生物的分类主要有哪些？百欧博伟生物：根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》第七条、第八条的规定，对动物病原微生物分类如下：一、一类动物病原微生物口蹄疫病毒、高致病性禽流感病毒、猪水泡病病毒、非洲猪瘟病毒、非洲马瘟病毒、牛瘟病毒、小反刍兽疫病毒、牛传染性胸膜肺炎丝状支原体、牛海绵状脑病病原、痒病病原。二、二类动物病原微生物猪瘟病毒、鸡新城疫病毒、狂犬病病毒、绵羊痘/山羊痘病毒、蓝舌病病毒、兔病毒性出血症病毒、炭疽芽孢杆菌、布氏杆菌。三、三类动物病原微生物多种动物共患病病原微生物：低致病性流感病毒、伪狂犬病病毒、破伤风梭菌、气肿疽梭菌、结核分支杆菌、副结核分支杆菌、致病性大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、致病性链球菌、李氏杆菌、产气荚膜梭菌、嗜水气单胞菌、肉毒梭状芽孢杆菌、腐败梭菌和其他致病性梭菌、鹦鹉热衣原体、放线菌、钩端螺旋体。牛病病原微生物：牛恶性卡他热病毒、牛白血病病毒、牛流行热病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒腹泻/粘膜病病毒、牛生殖器弯曲杆菌、日本血吸虫。绵羊和山羊病病原微生物：山羊关节炎/脑脊髓炎病毒、梅迪/维斯纳病病毒、传染性脓疱皮炎病毒。猪病病原微生物：日本脑炎病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪丹毒杆菌、猪支气管败血波氏杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、猪肺炎支原体、猪密螺旋体。马病病原微生物：马传染性贫血病毒、马动脉炎病毒、马病毒性流产病毒、马鼻炎病毒、鼻疽假单胞菌、类鼻疽假单胞菌、假皮疽组织胞浆菌、溃疡性淋巴管炎假结核棒状杆菌。禽病病原微生物：鸭瘟病毒、鸭病毒性肝炎病毒、小鹅瘟病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、鸡马立克氏病病毒、禽白血病/肉瘤病毒、禽网状内皮组织增殖病病毒、鸡传染性贫血病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡减蛋综合征病毒、禽痘病毒、鸡病毒性关节炎病毒、禽传染性脑脊髓炎病毒、副鸡嗜血杆菌、鸡毒支原体、鸡球虫。兔病病原微生物：兔粘液瘤病病毒、野兔热土拉杆菌、兔支气管败血波氏杆菌、兔球虫。水生动物病病原微生物：流行性造血器官坏死病毒、传染性造血器官坏死病毒、马苏大麻哈鱼病毒、病毒性出血性败血症病毒、锦鲤疱疹病毒、斑点叉尾鮰病毒、病毒性脑病和视网膜病毒、传染性胰脏坏死病毒、真鲷虹彩病毒、白鲟虹彩病毒、中肠腺坏死杆状病毒、传染性皮下和造血器官坏死病毒、核多角体杆状病毒、虾产卵死亡综合症病毒、鳖鳃腺炎病毒、Taura综合症病毒、对虾白斑综合症病毒、黄头病病毒、草鱼出血病毒、鲤春病毒血症病毒、鲍球形病毒、鲑鱼传染性贫血病毒。蜜蜂病病原微生物：美洲幼虫腐臭病幼虫杆菌、欧洲幼虫腐臭病蜂房蜜蜂球菌、白垩病蜂球囊菌、蜜蜂微孢子虫、跗腺螨、雅氏大蜂螨。其他动物病病原微生物：犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒、犬副流感病毒、猫泛白细胞减少综合症病毒、水貂阿留申病病毒、水貂病毒性肠炎病毒。四、四类动物病原微生物是指危险性小、低致病力、实验室感染机会少的兽用生物制品、疫苗生产用的各种弱毒病原微生物以及不属于第一、二、三类的各种低毒力的病原微生物。

          人卵巢腺癌顺铂耐药性细胞的处理与培养方法！细胞简介平台编号：bio-81818规格：5×10⁵cells/T25培养瓶拉丁属名：SK-OV-3/DDP细胞名称：SK-OV-3/DDP（人卵巢腺癌顺铂耐药性细胞）种属：人年龄（性别）：组织来源：卵巢腺癌生长特性：细胞形态生长培养基：McCoy's 5A(货号:PM150710)＋DDP＋10% FBS(货号:164210-500)＋1% P/S(货号:PB180120)培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用人卵巢腺癌顺铂耐药性细胞接收后的处理方法1、冻存细胞接收后的处理：1）干冰运输，收到细胞后立即转入液氮或直接复苏；2）收到细胞后，若发现干冰已经完全挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。2、复苏细胞接收后的处理：1）收到细胞后，请首先检查培养瓶是否破损或漏液，培养液是否混浊，如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。2）75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后，在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片，若有贴壁细胞脱落，可收集上清离心，将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。3）建议收到当天不要消化处理，如果细胞长满90%，可选择传代处理。4）如您收到细胞3天内没有反馈相关问题，出现的细胞问题将不提供免费重发服务。人卵巢腺癌顺铂耐药性细胞培养方法1）细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。2）细胞复苏：①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好是进行细胞冻存①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入2ml0.25%胰酶（T25瓶）②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。微生物菌种查询网自设细胞系板块，是细胞株提供中心,专业提供代次低、周期短、活性好的细胞株。与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

             微生物发酵培养基的成分与设计及优化方法！微生物菌种查询网：对于微生物的生长及发酵，其培养基成份非常复杂，特别是有关微生物发酵的培养基，各营养物质和生长因子之间的配比，以及它们之间的相互作用是非常微妙的。面对特定的微生物，人们希望找到一种最适合其生长及发酵的培养基，在原来的基础上提高发酵产物的产量，以期达到生产最大发酵产物的目的。发酵培养基的优化在微生物产业化生产中举足轻重，是从实验室到工业生产的必要环节。能否设计出一个好的发酵培养基，是一个发酵产品工业化成功中非常重要的一步。以工业微生物为例，选育或构建一株优良菌株仅仅是一个开始，要使优良菌株的潜力充分发挥出来，还必须优化其发酵过程，以获得较高的产物浓度（便于下游处理），较高的底物转化率（降低原料成本）和较高的生产强度（缩短发酵周期）。设计发酵培养基时还应时刻把工业应用的目的留在脑海里。一、发酵培养基的成分现代分离的微生物绝大部分是异养型微生物，它需要碳水化合物、蛋白质和前体等物质提供能量和构成特定产物的需要。其营养物质一般包括碳源、氮源（有机氮源、无机氮源）、无机盐及微量元素、生长因子、前体、产物促进和抑制剂等。另外，在设计培养基时还必须把经济问题和原材料的供应问题等因素一起考虑在内。此外，还要考虑所筛选的菌种来源的地点环境，比如本实验室长期从事红树林微生物的分离及其研究工作，红树林的环境处于海洋与陆地之间，所以配制培养基所用的水除了一般的去离子水外还包括陈海水。如果在知道产物结构或者产物合成途径的情况下，我们可以有意识地加入构成产物和合成途径中所需的特定结构物质。我们也可以结合某一菌株的特定代谢途径，加入阻遏或者促进物质，使目的产物过量合成。例如青霉素的合成会受到赖氨酸的强烈抑制，而赖氨酸合成的前体α-氨基已二酸可以缓解赖氨酸的抑制作用，并能刺激赖氨酸的合成。这是因为α-氨基已二酸是合成青霉素和赖氨酸的共同前体。如果赖氨酸过量，它就会抑制这个反应途径中的第一个酶，减少α-氨基已二酸的产量，从而进一步影响青霉素的合成。二、发酵培养基的设计和优化由于发酵培养基成份众多，且各因素常存在交互作用，很难建立理论模型；另外，由于测量数据常包含较大的误差，也影响了培养基优化过程的准确评估，因此培养基优化工作的量大且复杂。许多实验技术和方法都在发酵培养基优化上得到应用，如：生物模型（Biologicalmimicry）、单次试验（One at a time）、全因子法（Full factorial）、部分因子法（Partialfactorial）、Plackett andBurman法等。但每一种实验设计都有它的优点和缺点，不可能只用一种试验设计来完成所有的工作。1、单次单因子法实验室最常用的优化方法是单次单因子(one-variable-at-a-time)法，这种方法是在假设因素间不存在交互作用的前提下，通过一次改变一个因素的水平而其他因素保持恒定水平，然后逐个因素进行考察的优化方法。但是由于考察的因素间经常存在交互作用，使得该方法并非总能获得最佳的优化条件。另外，当考察的因素较多时，需要太多的实验次数和较长的实验周期。所以现在的培养基优化实验中一般不采用或不单独采用这种方法，而采用多因子试验。2、多因子试验多因子试验需要解决的两个问题1)哪些因子对响应具有最大(或最小)的效应，哪些因子间具有交互作用。感兴趣区域的因子组合情况，并对独立变量进行优化。（1）正交实验设计正交实验设计是安排多因子的一种常用方法，通过合理的实验设计，可用少量的具有代表性的试验来代替全面试验，较快地取得实验结果。正交实验的实质就是选择适当的正交表，合理安排实验的分析实验结果的一种实验方法。具体可以分为下面四步：①根据问题的要求和客观的条件确定因子和水平，列出因子水平表；②根据因子和水平数选用合适的正交表，设计正交表头，并安排实验；③根据正交表给出的实验方案，进行实验；④对实验结果进行分析，选出较优的“试验”条件以及对结果有显著影响的因子。正交试验设计注重如何科学合理地安排试验，可同时考虑几种因素，寻找最佳因素水平结合，但它不能在给出的整个区域上找到因素和响应值之间的一个明确的函数表达式即回归方程，从而无法找到整个区域上因素的最佳组合和响应面值的最优值。正交方法可以用来分析因素之间的交叉效应，但需要提前考虑那些因素之间存在交互作用，再根据考虑来设计实验。因此，没有预先考虑的两因素之间即使存在交互作用，在结果中也得不到显示。对于多因素、多水平的科学试验来说，正交法需要进行的次数仍嫌太多，在实际工作中常常无法安排，应用范围受到限制。（2）均匀实验设计如果仅考虑“均匀分散”，而不考虑“整齐可比”，完全从“均匀分散”的角度出发的实验设计，叫做均匀设计。均匀设计按均匀设计表来安排实验，均匀设计表在使用时最值得注意的是均匀设计表中各列的因素水平不能像正交表那样任意改变次序，而只能按照原来的次序进行平滑，即把原来的最后一个水平与第一个水平衔接起来，组成一个封闭圈，然后从任一处开始定为第一个水平，按圈的原方向和相反方向依次排出第二、第三水平。均匀设计只考虑试验点在试验范围内均匀分布，因而可使所需试验次数大大减少。例如一项５因素10水平的试验，若用正交设计需要做102次试验，而用均匀设计只需做10次，随着水平数的增多，均匀设计的优越性就愈加突出。这就大大减少了多因素多水平试验中的试验次数。（3）Plackett-Burman法Plackett-Bunnan设计法是一种两水平的实验优化方法，它试图用最少的实验次数达到使因子的主效果得到尽可能精确的估计，适用于从众多的考察因子中快速有效地筛选出最为重要的几个因子，供进一步优化研究用。理论上Plackett-Bunnan设计法可以达到99个因子仅做100次试验，但该法不能考察各因子的相互交互作用。因此，它通常作为过程优化的初步实验，用于确定影响过程的重要因子。许多文献都对此有报道。Castro PML报道用此法设计20种培养基，做24次试验，把gamma干扰素（gammainterferon）的产量提高了45%。（4）部分因子设计法部分因子设计法与P1ackett-Burman设计法一样是一种两水平的实验优化方法，能够用比全因子实验次数少得多的实验，从大量影响因子中筛选出重要的因子。根据实验数据拟合出一次多项式，并以此利用最陡爬坡法确定最大响应区域，以便利用响应面法进一步优化。部分因子设计法与Plaekett-Burman设计法相比实验次数稍多，如6因子的26-2部分因子设法需要进行20次实验，而Plackett-Burman设计法只需要7次实验。（5）响应面分析法响应面分析（response surfaceanalysis，RSM）方法是数学与统计学相结合的产物，和其他统计方法一样，由于采用了合理的实验设计，能以最经济的方式，用很少的实验数量和时间对实验进行全面研究，科学地提供局部与整体的关系，从而取得明确的、有目的的结论。它与“正交设计法”不同，响应面分析方法以回归方法作为函数估算的工具，将多因子实验中，因子与实验结果的相互关系，用多项式近似，把因子与实验结果（响应值）的关系函数化，依此可对函数的面进行分析，研究因子与响应值之间，因子与因子之间的相互关系，并进行优化。近年来较多的报道都是用响应面分析法来优化发酵培养基，并取得比较好的成果。RSM有许多方面的优点，但它仍有一定的局限性。首先，如果将因素水平选的太宽，或选的关键因素不全，将会导致响应面出现吊兜和鞍点。因此事先必须进行调研，查询和充分的论证或者通过其它试验设计得出主要影响因子；其次，通过回归分析得到的结果只能对该类实验作估计；第三，当回归数据用于预测时，只能在因素所限的范围内进行预测。响应面拟合方程只在考察的紧接邻域里才充分近似真实情形，在其他区域，拟合方程与被近似的函数方程毫无相似之处，几乎无意义。中心组合设计是一种国际上较为常用的响应面法，是一种5水平的实验设计法。采用该法能够在有限的实验次数下，对影响生物过程的因子及其交互作用进行评价，而且还能对各因子进行优化，以获得影响过程的最佳条件。三、结论培养基的优化通常包括以下几个步骤：⑴所有影响因子的确认；⑵影响因子的筛选，以确定各个因子的影响程度；⑶根据影响因子和优化的要求，选择优化策略；⑷实验结果的数学或统计分析，以确定其最佳条件；⑸最佳条件的验证。经以上几种方法的比较，我们可以通过把几种试验方法的结合，减少实验工作量，但又得到比较理想的结果。首先充分调研和以前实验的基础上，用部分因子设计对多种培养基组分对响应值影响进行评价，并找出主要影响因子；再用最陡爬坡路径逼近最大响应区域；最后用中心组合设计及响应面分析确定主要影响因子的最佳浓度。已经有许多报道利用这几种试验相结合的方法成功地优化了目的菌株的发酵培养基。 另外，在缺乏某一菌株的生理代谢和合成调控机制知识的情形时，可通过摇瓶实验先用Plackett-Burman法从手边可获得的多种培养基中确定出重要因素，然后用响应面优化设计法或均匀设计法得到各重要因素的最佳水平值。

            德氏乳杆菌保加利亚亚种单层冻干管打管说明书！                                                                 德氏乳杆菌保加利亚亚种是Lactobacillus属的微生物，原产地为中国。细胞形态呈杆状，多呈链状，过氧化氢酶为阴性，革兰氏阳性，消耗的葡萄糖50以上转化为乳酸，不形成芽孢。同型发酵。主要用途为研究。一、菌种简介平台编号：bio-52481规格：冻干物拉丁属名：Lactobacillus delbrueckii subsp. Bularicus中文名：德氏乳杆菌保加利亚亚种属：Lactobacillus原产地：中国模式菌株：非模式菌株其他编号：6045培养基编号：44,56培养温度：30℃培养时间：48 小时用途：生产酸奶注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、培养基MRS 培养基酪蛋白胨 10 克 牛肉浸取物 10 克酵母提取液 5.0 克 葡萄糖 20 克乙酸钠 5.0 克 柠檬酸二胺 2.0 克吐温 80 1.0 克 磷酸氢二钾 2.0 克七水硫酸镁 0.2 克 七水硫酸锰 0.05 克碳酸钙 20.0 克 琼脂 20.0 克蒸馏水 1.0 升 PH 6.8如果要配制液体培养基，则不用加入碳酸钙和琼脂三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。 四、注意事项1）乳酸菌需要在比较厌氧的环境下培养首次活化，用尽量少的复水液溶解，接种在 5ml 的液体培养基中，静止培养，如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。五、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖，注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入0.5ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；4、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理;8、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

                人皮脂腺细胞与雄激素关系的研究进展！雄激素是最重要的促皮脂腺活性激素。在雄激素作用下，人皮脂腺细胞大量分泌脂质是发生痤疮的前提条件。人皮脂腺细胞不仅是雄激素作用的靶位点，同时也具有合成活性雄激素的能力，是维持皮肤中雄激素稳态的主要场所。本文综述了人皮脂腺细胞和雄激素相互作用关系的研究进展。雄激素是调节人皮脂腺活性的主要激素。传统概念上的雄激素是在垂体控制下由性腺和肾上腺分泌，通过血循环作用于靶器官上相应受体，行使生物学功能或参与相关疾病发生。然而，近年来在雄激素研究领域中的一个重要发现是：雄激素靶器官在雄性激素代谢酶作用下，可以将雄激素前体转化为活性雄激素，并通过自分泌、旁分泌或内在分泌( i nt r a c r i n e ) 途径行使其生物学功能，或释放到血循环中作为血循环中雄激素的一部分，这样，局部组织就可以根据需要来调节雄激素的合成和代谢。人皮肤就是这样一个雄激素内分泌器官，而人皮脂腺细胞则是皮肤中雄激素合成和代谢的主要场所。现对人皮脂腺细胞和雄激素相互关系的研究进展作一综述。一、皮肤中脱氢表雄酮 ( DHEA) 是活性雄激素的前体皮肤产生的活性雄激素主要由该激素的前体DHEA转化而来。6～8岁时，肾上腺分泌的 DHEA和硫酸脱氢表雄酮( DHEAs ) 增加。成年男性血循环中DHEAs的水平比睾酮高100～500倍，比雌二醇高1000～10000倍，这为DHEA在靶器官中向活性雄激素和雌激素转化提供了巨大的储库。肾上腺的这种高DHEA分泌功能为人类所特有，在低等动物中，性激素只通过性腺分泌( 猴子除外) 。靶器官内性激素代谢酶的不同，决定了DHEA在靶器官中转化为雄激素还是雌激素。研究发现，DHEA在皮肤中表现为雄激素作用，而在女性阴dao中则表现为雌激素作用。皮肤中的DHEA除来源于肾上腺外，皮肤本身也具有合成DHEA的能力，尤其是皮脂腺细胞可以合成性激素的前体胆固醇。在类固醇急性调节蛋白作用下，胆固醇从线粒体膜外转移到膜内开始类固醇合成；在细胞色素p450侧链裂解酶 ( p450scc) 作用下，胆固醇转化为孕烯醇酮；然后细胞色素p450 17-羟化酶催化孕烯醇酮形成DHEA的前体17or一羟孕烯醇酮；最后在类固醇生成因子-1的作用下形成DHEA。研究发现，人皮脂腺细胞和角质形成细胞(KC)表达类固醇形成所需要的类固醇急性调节蛋 白、p450scc、细胞色素p450 17-羟化酶和类固醇生成因子-1 。二、雄激素在皮肤中的代谢雄激素前体DHEA在皮肤中经过一系列代谢酶的作用向活性雄激素转化，其激活和失活的过程是：首先，DHEA在3β-羟固醇脱氢酶(3β-HSD) 作用下转化为雄烯二酮。3β-HSD有I和Ⅱ型两种形式，在人类，I型存在于皮肤，Ⅱ型存在于肾上腺中。第二步，雄烯二酮在 17β-HSD的作用下转化为睾酮。17β-HSD有7种异构酶，其中17β-HSD 3和17β-HSD 5具有还原性，其作用是将无活性的雄激素前体转化为活性雄激素；而17β-HSD 2具有氧化性，能将活性雄激素转化为无活性的前体。因此说，17β-HSD的作用是调节局部组织中活性雄激素的浓度，从而使其免受高浓度激素的过强作用。第三步，睾酮在5α-还原酶( 5α-R)的作用下不可逆地转化为5α-双氢睾酮(5α-DHT)，5α-DHT是最强的活性雄激素。5α-R是皮肤中最重要的雄激素代谢酶，它具有I型和Ⅱ型两种异构酶，皮肤中的5α-R主要是I型，Ⅱ型主要存在于前列腺中。最后，3α-HSD催化活性雄激素成为不能连接雄激素受体的复合物，经葡萄糖醛酸化后，形成水溶性复合物通过肾脏代谢。此外，在一些细中，芳香酶可以将睾酮转化为雌激素。三、皮脂腺细胞是维持皮肤中雄激素稳态的主要场所人皮脂腺是雄激素的重要靶组织，同时也是雄激素在皮肤中代谢的主要场所，具有维持皮肤中雄激素稳态的作用。Courchay等发现在各种皮肤细胞中，3β-HSD mRNA仅定位 于皮脂腺中；Dumont等也发现皮脂腺细胞和皮脂腺导管具有高水平的3β-HSD免疫活性，而周围组织则未发现。Chen等发现，和成人皮肤中的KC、真皮乳头细胞、黑素细胞和内皮细胞相比，人皮脂腺细胞的I型5α-R mRNA和蛋白的表达最高。Fritsch等用RT-PCR、高效薄层层析研究人皮脂腺细胞、KC和黑素细胞中雄激素代谢酶，发现3β-HSD、17β-HSD 3仅存于皮脂腺细胞；17β-HSD 2 、I型5α-R在皮脂腺细胞中的活性及 表达最高。因此认为，皮脂腺细胞是维持皮肤中雄激素稳态的重要场所。四、 雄激素受体(AR)皮肤是雄激素重要的靶器官，皮肤中许多细胞均表达AR，其中皮脂腺细胞的AR表达水平最高，并随着细胞分化而增强。AR是类固醇受体超家族的主要成员，编码A R的基因大约100kb，定位于X染色体的q11-12区；AR蛋白约由917～919个氨基酸组成，包括3个特异性结构域：结合DNA的中心结构域；与转录激活有关的N-末端结构域；结合类固醇的 c末端结构域。DHT和睾酮结合相同的AR，但它们和AR的亲和力及分离率常数不同，DHT和AR的亲和力明显高于睾酮 。五、雄激素促进人皮脂腺细胞的增殖和分化雄激素是最重要的促皮脂腺活性激素。皮脂腺细胞内合成的睾酮和DHT是雄激素的主要来源，其中DHT是最强的活性雄激素。睾酮和DHT主要通过内在分泌作用和胞浆内AR形成稳定复合物，进入细胞核与DNA 结合，从而触发特定基因转录。体内雄激素具有明显的促进皮脂腺细胞的增殖和分化作用，但体外研究很难发现雄激素具有诱导皮脂腺细胞 分化的作用，目前认为，雄激素的促分化作用可能需要过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)的激活。Rosenfield等发现，PPARγ激活剂和DHT都有促进皮脂腺细胞脂质集合作用，但两者之间的作用具有叠加性，这说明PPARγ的促分化作用和雄激素有关，但又不同于雄激素的作用，可能雄激素以某种方式增加PPARγ的表达，启动了皮脂腺细胞的分化。PPARγ仅在新鲜的皮脂腺组织中高表达，而在培养组织中呈低表达，所以DHT 在体外很难诱导皮脂腺细胞的分化。六 、雄激素与痤疮痤疮是毛囊皮脂腺单位慢性疾病。青春期，在雄激素的作用下，皮脂腺活性增强导致脂质大量分泌是痤疮发生的前提条件。研究发现，除青春期早期粉刺形成和血循环中DHEAs 相关外，大多数痤疮患者血循环中雄激素水平并无异常，因此痤疮并不是单纯的内分泌失调引。皮脂分泌的增多也可能是靶器官对雄激素敏感性增加所致。这可能与两方面因素相关：①皮脂腺内雄激素代谢酶如5α-R 活性增加，使DHT的合成增加；②皮脂腺细胞的雄激素受体数目增加。Thiboutot等发现，面部皮脂腺内5α-R活性高于非痤疮好发部位的皮脂腺内的5α-R活性。Akamatsu等发现睾酮抑制下肢的皮脂腺细胞增殖。而刺激面部皮脂腺细胞增殖，DHT能刺激上述两个部位皮脂腺的增殖，但对面部皮脂腺细胞的作用更强，这种部位上的差异可以解释为什么身体不同部位对痤疮具有不同的易患性。Thiboutot等还发现，在痤疮易患部位的皮脂腺细胞中，非痤疮患者的17β-HSD的氧化活性明显高于痤疮患者；面部皮脂腺细胞中的17β-HSD的还原活性高于非面部皮脂腺细胞。Seiffert等发现，选择性I型5α-R抑制剂4,7β-二甲基-4-氮5α-胆甾烷-3-酮(MK386) 在较低的浓度即可抑制皮脂腺内的5α-R活性，而非那司提等Ⅱ型5α-R抑制剂要达到同样的效果，其浓度比MK386要高100倍，I型5α-R抑制剂也许是治疗痤疮的潜在药物。Schmidt等检测了痤疮患者的皮脂腺中的雄激素受体数，发现较正常者为高。因此在痤疮发生中，雄激素是必需的刺激因素；DHEA在痤疮形成的早期起重要作用；I型5α-R是最重要的雄激素代谢酶；痤疮不完全是由内分泌失调引起，皮脂腺细胞对雄激素的敏感性增加也是痤疮发生的重要原因。总之，深入研究人皮脂腺细胞的生理功能与雄激素的关系，将有助于了解痤疮的发病机制及开拓治疗痤疮的有效药物。

                 微生物检验中常用的生化反应有哪些？百欧博伟生物：各种细菌所具有的酶系统各不相同，对营养物质的利用能力各异，因而在代谢过程中所产生的合成或分解产物也不同。应用生物化学方法检测细菌的代谢产物，有助于细菌的种、属鉴定。这种利用生化方法来鉴别细菌的试验，统称为细菌的生化试验或生化反应，是识别细菌的重要方法之一。微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其他方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。 微生物检验中常用的生化反应有：一、糖酵解试验各种微生物因含有不同的分解糖(醇、苷)类的酶，所以分解糖类的能力各不相同，而且分解相应糖类后形成的终末产物亦随细菌种类而异，有的产酸，有的还可以产生气体，因此可作为鉴别细菌的依据，对肠道杆菌的鉴别尤为常见。可用指示剂及发酵管检验。试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基鲁，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。接种后，置36℃ ±1.0 ℃培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培养物可呈弥散生长。本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫、溴百里蓝和An-drade指示剂。二、淀粉水解试验某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。试验方法：以18h~24h的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区接种，试验数种培养物）或直接移种于淀粉肉汤中，于36℃ ±1 ℃培养24 h ~48 h,或于20℃培养5d。然后将碘试剂直接滴浸于培养基表面，若为液体培养物，则加数滴碘试剂于试管中。立即检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环、或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色。淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间、培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。培养基pH必须为中性或微酸性，以pH7. 2最适。淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用时制备为妥。三、V-P试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V-P（+）反应。1、O'Meara氏法将试验菌接种于通用培养基，于36 ℃ ±1 ℃培养48 h,培养液1 mL加O‘Meara试剂（加油0.3%肌酸或肌酸酐的40%氢氧化钠水溶液)1mL，摇动试管1min~2min，静置于室温或36 ℃ ±1 ℃恒温箱，若4h内不呈现伊红即判定为阴性。亦有主张在48 ℃-50 ℃水浴放置2h后判定结果者。2、Barritt氏法将试验菌接种于通用培养基，于36℃±1℃培养4d,取培养液2.5 mL先加入5%α-萘酚纯酒精溶液0.6%mL，再加40%氢氧化钾水溶液0.2mL，摇动2min~5min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或36℃±1℃恒温箱，如2h内仍不显现红色可判定为阴性。3、快速法将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中，挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入5% a-萘酚3滴， 40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min,判定结果。不产酸的培养物不能使用。本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。在用于芽孢杆菌和葡萄球菌等其他细菌时，通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基甲醇的产生，故应省去或以氯化钠代替。本试验常与甲基红试验一起使用。本试验阳性，甲基红试验阴性，反之亦然。四、甲基红试验大肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸、琥珀酸、乙酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基pH下降至4.5以下，使甲基红指示剂变红。试验方法：挑取新的待试纯培养物少许，接种于通用培养基，培养于36℃±1℃或30℃(以30℃较好)3d-5d,从第二天起，每日取培养液1mL,加甲基红指示剂1~2滴，阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色。迄至发现阳性或至第5天仍为阴性即可判定结果。甲基红为酸性指示剂， pH范围为4.4-6.0,其pH为5.0,故在pH5.0以下，随酸度增加而红色增强，在pH5.0以上，则随碱度增加而黄色增强，在pH5.0或上下接近时，可能变色不够明显，此时应延长培养时间，重复试验。五、靛基质试验某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。试验方法：将待试纯培养物小量接种于试验培养基管，于36℃±1 ℃培养24h后，取约2mL培养液，加入Kovacs氏试剂2滴~3滴，轻摇试管，呈红色为阳性；或先加少量乙醚或二甲苯，摇动试管以提取和浓缩靛基质，待其浮于培养液表面后，再沿试管壁徐缓加入Kovacs氏试剂数滴，在接触面呈红色，即为阳性。实验证明靛基质试剂可与17种不同的靛基质化合物作用而产生阳性反应，若先用二甲苯或乙醚等进行提取，再加试剂，则只有靛基质或5-甲基靛基质在溶剂中呈现红色，因而结果更为可靠。六、硝酸盐还原试验有些细菌具有还原硝酸盐的能力，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨或氮气等。亚硝酸盐的存在可用硝酸试剂检验。1、试验方法临试前将试剂的A (磺胺酸冰乙酸溶液)和B(a-萘胺乙醇溶液)试液各0.2mL等量混合，取混合试剂约0.1mL,加于液体培养物或琼脂斜面培养物表面，立即或于10min内呈现红色即为试验阳性，若无红色出现则为阴性。用a-萘胺进行试验时，阳性红色消退很快，故加入后应立即判定结果。进行试验时必须有未接种的培养基管作为阴性对照。a-萘胺具有致癌性，故使用时应加注意。2、试验方法将含有0.02%-0.2%硝酸钾的蛋白胨水分装至试管中，每支试管预先放一个倒置的发酵管，然后在121℃高压灭菌15min。按肉汤培养基方法接种，连同已灭菌的对照管一起在最佳生长温度培养2d-7d,在接种管和对照管中加上Griess Ilosvay试剂1 mL或亚硝酸盐试纸，几分钟内出现红色表明亚硝酸盐产生。对照管应为微红色或无色。阴性结果应进行确证。向试管中加入微量锌粉，将残存的硝酸盐还原成亚硝酸盐，出现红色表明有硝酸盐存在；如没有颜色变化，则说明没有硝酸盐存在，硝酸盐已被微生物还原成亚硝酸盐。发酵管中有气体产生表明有氮气生成。七、明胶液化试验有些细菌具有明胶酶(亦称类蛋白水解酶),能将明胶先水解为多肽，又进一步水解为氨基酸，失去凝胶性质而液化。1、营养明胶培养基在营养肉汤中加入10%~15%的明胶，调节pH至7.2，115℃高压灭菌20min。试验方法：挑取18h-24h待试菌培养物，以较大量穿刺接种于明胶高层约2/3深度或点种于平板培养基。于20℃-22℃培养7d~14d,明胶高层亦可培养于36℃±1℃。每天观察结果，若因培养温度高而使明胶本身液化时应不加摇动、静置冰箱中待其凝固后，再观察其是否被细菌液化，如确被液化，即为试验阳性。平板试验结果的观察为在培养基平板点种的菌落上滴加试剂，若为阳性，10min -20min后，菌落周围应出现清晰带环，否则为阴性。2、Frazier明胶琼脂(改良型)培养基在营养琼脂中加入0.4%明胶，调节pH至7.2, 115℃高压灭菌20 min。试验方法：在已倒好干燥培养基的平皿上划线接种或点接种。在最佳生长温度下培养2d-14d。使用8mL~10mL1%盐酸(HCI不像氯化汞溶液那样能很快的产生清晰的沉淀，但本书仍建议使用盐酸，这是为了避免汞盐的毒性及对环境造成的危害)试剂充满培养皿，没有水解的明胶与试剂慢慢形成不透明的白色沉淀，水解的明胶部分呈现了一个清晰的环带。以毫米为单位记录从菌落边缘到环带边缘的清晰带的大小。八、尿素酶试验有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解，产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7.00。试验方法：挑取18h-24h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中，摇匀，于36℃±1℃培养10min、60min和120min,分别观察结果；或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要到到达底部，留底部作变色对照。培养2h、4h和24h分别观察结果，变为粉红色为阳性，如阴性应继续培养至4d,做最终判定。九、氧化酶试验氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。这个试验最适用于假单胞菌属和其他革兰氏阴性杆菌的鉴别。试验方法：在琼脂斜面培养物上或血琼脂平板菌落上滴加试剂1滴~2滴，阳性者Ko-vacs氏试剂呈粉红色-深紫色， Ewing氏改进试剂呈蓝色。阴性者无颜色改变。应在数分钟内为判定试验结果。十、硫化氢试验有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物，而产生硫化氢气体，硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物。在肠杆菌科的细菌鉴别中有重要作用。试验方法：在含有硫代硫酸钠等指示剂的培养基中，沿管壁穿刺接种，于36℃±1℃培养24h-28h,培养基呈黑色为阳性。阴性应继续培养至6d。也可用乙酸铅纸条法：将待试菌接种于一般营养肉汤，再将乙酸铅纸条悬挂于培养基上空，以不会被溅湿为适度，用管塞住置36℃±1℃培养为1d-6d,纸条变黑为阳性。十一、三糖铁(TSI )琼脂试验试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36℃±1℃培养18h-24h,观察结果。本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气(变黄),产生硫化氢(变黑)。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。注意：TSI琼脂培养基可以代替Kligler铁琼脂检测硫化氢的产生。但是，柠檬酸杆菌和变形杆菌属中的一些产硫化氢的菌株，在TSI琼脂培养基中产生的硫化氢会被蔗糖发酵产物所掩盖，因此，在做这些菌的产硫化氢试验时， Kligler铁琼脂是更为可靠的试验培养基。十二、硫化氢-靛基质一动力琼脂试验试验方法：以接种针挑取菌落或纯养物穿刺接种约二分之一深度，置36℃±1℃培养18h-24h,观察结果。培养物呈现黑色为硫化氢阳性，混浊或沿穿刺线向外生长为有动力，然后加Kovacs氏试剂数滴于培养表面，静置10min,若试剂呈红色为靛基质阳性。培养基未接种的下部，可作为对照。本试验用于肠杆菌科细菌初步生化筛选，与三糖铁琼脂等联合使用可显著提高筛选功效。十三、柠檬酸盐利用试验以柠檬酸钠为唯一碳源、pH 7.0的培养基上，某些细菌能分解柠檬酸钠产生碳酸盐，使培养基由中性变为碱性，培养基中指示剂溴麝香草酚蓝由浅绿色变为深蓝色，此为柠檬酸盐利用试验阳性。如不能利用柠檬酸盐，此试验为阴性反应。将细菌分别接种于柠檬酸盐培养基斜面上，于37℃培养1d-4d,每日观察结果。培养基斜面上有细菌生长，而且培养基变成蓝色为阳性；无细菌生长，培养基颜色不变保持绿色为阴性。十四、邻硝基苯-8-D吡喃半乳糖苷酶测定乳糖发酵过程中需要乳糖通透酶和B-半乳糖苷酶才能快速分解。有些细菌只有半乳糖苷酶，因而只能迟缓发酵乳糖，所有乳糖快速发酵和迟缓发酵的细菌均可快速水解邻硝基酚-B-D-半乳糖苷(0-nitophenyl-β-D-galactopyranoside, ONPG)而生成黄色的邻硝基酚。用于柠檬酸菌属、亚利桑那菌属与沙门菌属的鉴别。将0.6g ONPG溶解于100mL,磷酸缓冲液内，过滤灭菌后，与300 ml.蛋白胨水混合，无菌分装小试管，于冰箱内保存，备用， 1年内使用有效。挑取幼龄斜面培养物一环于上述培养基内，适温培养24 h;制备浓的菌悬液(于0.5 mL生理盐水的细管)中加ONPG纸片，35℃-37℃培养24h后，观察结果。黄色为阳性，无色为阴性。也可直接将培养物接种ONPG试剂， 35℃-37 ℃培养1h-3h即可以观察结果，如为阴性继续培养至24h,培养基变黄则为阳性。十五、胆汁-七叶苷水解试验在10% ~40%胆汁存在下，测定细菌水解七叶苷的能力。七叶苷被细菌分解生成七叶素，七叶素与培养基中的柠檬酸铁的二价铁离子发生反应形成黑色化合物。主要用于鉴况D群链球菌与其他链球菌的区别，以及肠杆菌科的某些种、某些厌氧菌(如：脆弱拟杆菌等)的初步鉴别。D群链球菌本试验为阳性。将被检菌接种于胆汁-七叶苷培养基中， 35℃孵育18h~24h后，观察结果。培养基完全变黑为阳性，不变黑为阴性。十六、苯丙氨酸脱氨酶试验苯丙氨酸脱氨酶试验可用于鉴别肠道细菌，例如对大肠杆菌与变形杆菌的鉴别。变形杆菌具有苯丙氨酸脱氨酶，能将苯丙氨酸氧化脱氨，产生苯丙酮酸；而大肠杆菌不具有苯丙酸脱氨酶，不能将苯丙氨酸氧化脱氨，故不能产生苯丙酮酸。具体操作为：将大肠杆菌和普通变形杆菌分别接种到苯丙氨酸斜面培养基上(注意接种量要大),置于37℃恒温箱中，培养4h(或18h-24h)。观察结果时，在培养好的菌种斜面上滴加2滴-3滴10%一氯化铁溶液，试液自培养物上方流到下方，苯丙酮酸遇三氯化铁形成绿色化合物，此为阳性反应；若培养基不出现颜色变化，则为阴性反应。十七、色氧酸脱氨酶试验此法可同时测定色氨酸脱羧酶、脲酶和吲哚3个项目。1、方法一(1)培养基L-色氢酸    3g；  NaCl    5g；KH2PO4  1g;   乙醇(95% ) 10 mL:K2 HPO4   1g;    蒸馏水   900 mL加酚红(25mg~30mg)至微橙的黄色， pH约为6.8~6.9,分装于三角瓶中， 121℃蒸气灭菌20min。另将20g尿素溶于100mL水中，过滤灭菌，用无菌操作与上述热灭菌的培养基相混，并分装于无菌试管内，每管液层高约3cm ~4cm。(2)接种与测定：将试验菌株的幼龄培养物接种于上述培养液中，适温培养24h,取2滴~4滴培养液，与1滴三氯化铁溶液(约33%)相混。如呈红褐色，则为色氨酸脱氨酶阳性反应。如无颜色变化则为阴性反应。可用变形菌作为阳性对照。(3)结果观察：如培养后的培养液由黄色转红色，表示有脲酶存在。如用对甲基氨基苯甲醛试剂测定，可检查有无吲哚形成。如不拟测定脲酶，配制培养基时可不加酚红和尿素。2、方法二(1)试液L-色氨酸           0.2% -0.5%FeCl3              33%生理盐水或pH6. 8缓冲液A液：KH2PO4, 0.2 mol/L (27. 2 g/L)  50 mLB液：Na2CO3, 0. 2 mol/L (8.0 g/L)  23. 6 mL注：A液与B液相混即为pH6.8的缓冲液。(2)接种与培养：将试验菌接种于肉汁胨斜面，适温培养24h。(3)测定方法：取干净的试管2支，每管中加4滴L-色氨酸溶液和4滴生理盐水(或4滴pH6.8缓冲液),然后将测定菌的菌苔混到上述溶液的2支试管中制成浓溶液。另2支试管中不加菌苔作为对照。置室温15min ~20min后，每管中加入1滴三氯化铁(33%)溶液，立即呈现红褐色，表示阳性反应，不变色者表示阴性反应。可用变形菌作为阳性对照。十八、氰化钾试验原理：氰化钾可以抑制某些细菌的呼吸酶系统。细胞色素、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶均以铁卟啉作为辅基，氰化钾能和铁卟淋结合，使这些酶失去活性，使细菌生长受到抑制。培养基：蛋白胨        10.0g;   KH2 PO4    0. 225 g Na2HPO4   5.64 g  蒸馏水        1000 mLNaCl          5.0g。此为基础液。调节pH至7.6, 121℃灭菌15min,冷却，置冰箱。于冷基础液中加以15 mL0.5%氰化钾溶液(0.5g氰化钾溶于100 ml，冷却的灭菌蒸馏水中),分装于灭菌小试管，每管约1ml,立即用随有热石蜡的软木寒塞紧，可于冰箱中保存2周。方法：将20h-24h肉汤培养物，接种。大环到氰化钾培养基中，立即用软木塞塞紧，置37℃培养，连续观察2d,有细菌生长时为阳性反应。大多数沙门氏菌在此培养基中不能生长，即无浑浊现象。注意：氰化钾为剧毒药，宜在通气橱内操作。由于氰化钾有剧毒，接触皮肤的伤口或吸入微量粉末即可中毒死亡。与酸接触分解能放出剧毒的氰化氢气体，与氯酸盐或亚硝酸钠混合能发生爆炸。如果必须要进行氰化钾试验，使用的都为氰化钾的替代品。十九、鸟氨酸、赖氨酸和精氨酸脱羧酶试验1、培养基涣甲酚紫(1.6% )       0.625 mL甲酚红(0.2% )          2.5ml蛋白胨                    5g琼脂(半固体)            3g~6gD-葡萄糖                 0.5 g牛肉膏                     5g蒸馏水                  1000 mL 维生素B6 (吡哆醛Pyridoxal) 5 mg;将以上成分加热溶解，调pH为6,再加指示剂。将上列基础培养基分为四等份，其中三份分别加入： L-鸟氨酸、L-赖氨酸、L-精氨酸的盐酸盐，使浓度达到1%。如用DL型氨基酸，则浓度达到2%。再调pH到6.0~6.3,未加氨基酸的一份基础培养基作为空白对照。分装小试管，每管3 mL ~4 ml，121℃灭菌10min，鸟氨酸的培养基中可能有少量絮状沉淀，但无碍作用。2、接种用幼龄培养物作为种菌直接接种，接种后封油。对照管与测定管同时接种。3、结果观察对肠杆菌科的细菌，一般于37℃培养4d,每天观察。但对非临床来源的菌可于30℃培养，连续观察7d.指示剂呈紫色或带红色调的紫色者为阳性，呈黄色者为阴性。一般肠杆菌科的细菌于1d-2d呈阳性反应，但也有迟缓阳性者，培养3d-4d才出现阳性反应，对照管应呈黄色。二十、精氨酸双水解酶试验1、培养基(索恩利Thornley)K2HPO4    0.3g;L-精氧酸盐  10g蛋白胨        1g琼脂           6gNaCl          5g蒸馏水        1000 mL;酚红           0.01 g;L-精氧酸盐  10gpH7.0-7.2,分装试管，培养基高度约4cm ~5 cm, 121℃灭菌15 min。2、接种与培养用幼龄种菌穿刺接种，并用灭菌凡士林油封管，适温培养3d, 7d, 14d观察。3、结果观察培养基转为红色者为阳性，应有不含精氨酸空白对照。二十一、过氧化氢酶试验过氧化氢酶试验又名接触酶试验，所用试剂为3%过氧化氢溶液(现配现用)。实验方法：挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加3%过氧化氢溶液2mL,观察结果。结果观察：于0.5min内发生气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性。二十二、血浆凝固酶试验血浆凝固酶常用于金黄色葡萄球菌的检测，当发现可疑菌落时，挑取平板上的可疑菌落1个或以上，分别接种到5ml脑心浸液肉汤(BHI)和营养琼脂小斜面， 36℃±1℃培养8h-24h。取新鲜配置的免血浆(现在有很多厂商生产的方便使用的冻干兔血浆) 0.5mL,放入小试管中，再加入BHI培养物0.2ml~0.3mL,振荡摇匀，置36℃±1℃温箱或水浴箱内，每0.5h观察一次，观察6h,如呈现凝固(即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块)或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。使用商品化的试剂时，按说明书进行操作。结果如果可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mL, BHI, 36℃ ±1℃培养18h-48h,重复试验。