CHL 中国仓鼠肺细胞的处理方法与培养步骤！一、细胞简介平台编号：bio-54216规格： 1*10 6拉丁属名：CHL 中国仓鼠肺细胞细胞名称：中国仓鼠肺细胞注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用细胞用途：该细胞广泛应用于染色体异常测试。二、细胞特性1）来源：中国仓鼠肺2）形态：成纤维细胞样，贴壁生长3）含量：>1x106  细胞数4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装5) 用途：仅供科研使用。三、细胞的运输和保存干冰运输及复苏好存活细胞（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备DMEM 培养基；优质胎牛血清，10%；双抗1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 肺炎克雷伯氏菌冻干管打管说明书！一、菌种简介平台编号：bio-52829拉丁属名：Klebsiella pneumoniae菌株名称：肺炎克雷伯氏菌其他编号：CMCC46117培养基编号：2培养温度：35-37℃培养时间：18-24 小时用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、培养基*营养琼脂培养基（NA）*胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）*LB 培养基（以上三种任选一种即可）三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存四、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用 0.2ml 左右培养液或无菌水溶解，接种在 1-2 个斜面上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面或平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）斜面菌种保藏时间通常为 3-6 个月；应根据菌种状况及时转接；冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。五、冻干管打管说明书1、西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖，注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入0.2ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

              SHG-44人胶质瘤细胞的处理方法与应用！一、背景SHG-44人胶质瘤细胞源自一例2-3级前沿淋巴结星细胞瘤，染色体组型显示89.2%的超三倍体。SHG-44细胞在Wistar大鼠和裸鼠中接种都能成功，SHG-44细胞含有神经系统特有的S-100蛋白和星细胞特有的GFA蛋白。生长培养基：DMEM高糖＋10%FBS＋1%P/S；培养条件气相：空气，95%；CO2，5%；温度：37℃。二、细胞处理方法1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）SHG-44人胶质瘤细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。传代方法：1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。三、应用用于γ-羟丁酸钠对人胶质瘤细胞SHG-44放疗增敏的实验研究：探讨γ-羟丁酸钠（gamma-hydroxybutrate，GHB）对胶质瘤细胞SHG-44增殖抑制及放疗增敏机制研究。方法：以SHG-44细胞为研究对象，MTT法检测不同浓度GHB（2.5mmol/L、5mmol/L、7.5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L）作用人胶质瘤细胞不同时间（24h、48h、72h）细胞增殖抑制率。Hoechst33258实验观察不同浓度GHB（5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L）作用24h后细胞核变化。下列实验分为对照组、药物组、照射组、联合组（照射+药物）。流式细胞术（FCM）分析各组细胞周期、凋亡情况。克隆形成实验分析GHB联合不同剂量的X线照射对细胞存活率的影响，拟合存活曲线。细胞免疫荧光检测SHG-44细胞中HDAC1（Histone deacetylase1，HDAC1）mRNA表达情况。RT-PCR检测各组细胞HDAC1mRNA、ATM（Ataxiatelangiectasia-mutated gene）mRNA的转录水平。结果：MTT实验显示GHB明显抑制SHG-44细胞的生长，呈浓度和时间依赖性。Hoechst33258镜下观察时染色体浓缩，见强蓝色荧光。FCM检测联合组细胞周期S期细胞减少，G0/G1期细胞增多，凋亡显著。克隆形成实验显示联合组的D0、Dq及SF2各值低于照射组（1.764Vs2.237，1.251Vs1.873，0.561Vs0.769），联合组SER为1.27。细胞免疫荧光测得HDAC1主要在SHG-44细胞核中表达。欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 粗糙脉孢菌的生物学特性与研究进展！粗糙脉孢菌是南昌大学食品科学与技术国家重点实验室邓泽元教授研究团队在江西传统食品当中提取并纯化得到的菌种。该菌最重要的生物活性体现在有较强的生产类胡萝卜素的能力，同时能有效分解纤维素。粗壮脉纹孢菌属真菌门，真子囊菌亚纲，鹿角菌目，粪壳菌科，脉纹孢菌属，是粗壮串珠霉的有性世代。固态发酵时可产大量分生孢子，分生孢子自下而上成熟，孢子为球形或者卵形，直径6~8μm，孢子团成黄色或者淡橙色，富含类胡萝卜素。因该菌固态发酵易受污染，易退化，来源单一等，目前该菌仍未实现大规模产业化应用，只有少部分企业尝试并取得一定成果。一、生物特性粗壮脉纹孢菌（Neurospora crassa），是子囊菌门（Ascomycoya），子囊菌纲（Ascomycetes），粪壳目（Sordariales），粪壳菌科（Sordariaceae），脉纹孢菌属（Neurospora）的真菌。其气生菌丝有隔膜、多核、无性繁殖，可产生大量的分生孢子，分生孢子大多为球形或者卵圆形，直径6~8μm，孢子团成黄色或者淡橙色。其同种属的粗糙脉孢菌作为模式生物在国内外主要用于基础研究，微循环产孢机制，生物钟机制等，也有利用其进行发酵产纤维素酶，乙醇，黑色素，漆酶，谷氨酸脱羧酶等产物的研究。粗壮脉孢菌与众多的粗糙脉孢菌相比，其在亚种上面的分类不一样，会导致其性状方面的差异。二、合成类胡萝卜素粗壮脉纹孢菌在固态发酵的过程中产生分生孢子，随着发酵代谢进程的进行，可代谢合成类胡萝卜素。粗壮脉纹孢菌产生的类胡萝卜素种类很多，包括八氢番茄红素、六氢番茄红素、ζ-胡萝卜素，链孢红素、番茄红素、3,4-脱氢番茄红素、β-zeacarotene、γ-胡萝卜素、Torulene、链孢霉黄素等。孢子中色素含量明显高于菌体中的含量。粗壮脉纹孢菌中的类胡萝卜素主要以色素颗粒的形式存在，而且主要存在于菌丝体细胞壁以及孢子中孢子壁附近，另外孢子所含色素颗粒数量远大于菌丝体。李红艳等发现粗壮脉纹孢菌在有氧的条件下可以产生类胡萝卜素，并对其所产的类胡萝卜素进行定性定量检测发现在未优化的条件下粗壮脉纹孢菌的类胡萝卜素产量可达158.5μg/g孢子，而且发现所产大部分类胡萝卜素为β-胡萝卜素。此后，刘志刚等对此菌发酵稻谷加工副产物（砻糠和脱脂米糠）生产类胡萝卜素，其类胡萝卜素含量可高达366μg/g培养物。目前在粗壮脉纹孢菌发酵产类胡萝卜素的机理和工艺方面基本上是空白，仅有极少量企业在尝试产业化，目前取得一定的进展。类胡萝卜素具有多个共轭双键，属于萜烯基团类不饱和化合物，包括胡萝卜素和叶黄素两大类。类胡萝卜素是自然界中广泛存在天然色素之一，现已发现600余种，存在于很多进行光合作用的植物细胞和微生物细胞中，可通过食物链传递，在动物细胞中累积。动物不能自行合成类胡萝卜素，只能通过食物摄取和转化获得。粗壮脉纹孢菌所产类胡萝卜素的抗氧化实验结果显示：与常见的抗氧化剂相比，粗壮脉纹孢菌所产类胡萝卜素对DPPH自由基，超氧自由基，羟基自由基这三种不同的自由基具有较强的清除能力，同时比同浓度的番茄红素，β-胡萝卜素清除自由基能力强，此外粗壮脉纹孢菌所产类胡萝卜素还具有较高的总抗氧化能力和较强的金属螯合能力。1、类胡萝卜素的生产途径类胡萝卜素的生产方法主要有三种：化学合成、微生物发酵、提取法。化学合成和天然的类胡萝卜素在分子结构、物理化学性质上无差异，但是在药理性质和生理功能上差别较大，主要是因为人工合成的是单一纯物质，而天然产物中有多种顺反异构体存在，在生物体内具有特殊的功能性质。而且化学合成法所使用的化学反应物在类胡萝卜素产品中会有不同程度的残留，由于双键立体选择比较难控制产物的纯度，因而其产品质量及使用范围受到限制。另外生产工艺条件要求苛刻，成本比较昂贵，生产效率也不高，其生产污染物的排放对环境造成较大的污染。微生物法生产类胡萝卜素是指利用微生物培养方法，通过微生物自身代谢产生类胡萝卜素然后通过一定的分离法分离提取所需的类胡萝卜素。与合成法相比，其所产的类胡萝卜素为天然色素，活性与天然存在的状态相差不多，更易于人体吸收，功能性更显著，而且生产成本低，产物质量低，而且相对环境的污染较小。另外，微生物发酵有固态和液态两种方式，固态发酵相对液态发酵产类胡萝卜素的微生物主要有细菌、真菌和某些藻类。光合细菌是研究最多的产类胡萝卜素微生物群，如红球菌属（Rhodopila）、红螺菌属（Rhodobacter）、红假单细胞菌属（Rhodospirillum）等。这一类细菌合成的类胡萝卜素种类有80多种，非光合细菌主要产C45和C50类胡萝卜素，这一类微生物有橙色爸叠球菌（Sacina aureus）、黄杆菌（Flavobacterium sp）等。真菌是重要的工业发酵产类胡萝卜素的菌种，主要有深红酵母（Neurospora crassa）、三孢布拉氏霉（Blakeslea trispora）、布拉克须霉（Phycomyces blakesleeanus）、红酵母属（Rhodotorula）等。深红酵母（Neurospora crassa）主要合成β-胡萝卜素、酵母素以及红酵母烯，三孢布拉氏霉合成β-胡萝卜素能力强，粗壮脉纹孢菌产类胡萝卜素种类比较丰富，有番茄红素、红酵母烯、链孢霉黄素、β-胡萝卜素等。2、类胡萝卜素的生理功能类胡萝卜素是国际公认的具有生理活性的功能性色素，整理国内外的研究成果，主要体现在以下几个方面：——维生素A的前体人体不能自行合成维生素A，只能从外界摄取，自然界约有50余种类胡萝卜素可转化成维生素A，其中以β-胡萝卜素活性最强，是人体获取维生素A的重要来源。维生素A缺乏症主要包括眼角膜上皮增厚，脱落和角质化造成的角膜溃疡甚至失明；泪腺分泌障碍造成的夜盲症、干眼病等；皮肤干燥，表皮组织改变导致的病菌感染，肠胃粘膜表皮受损造成的腹泻等。——抗氧化功能类胡萝卜素特别是β-胡萝卜素和番茄红素是较强的抗氧化剂，它们能高效猝灭单线态氧，清除人体内的自由基。在有机体正常的代谢过程中或受到紫外线强烈照射后会产生高能活性氧，高能活性氧非常不稳定，可迅速将能量传递给其他分子而产生自由基。自由基中异常活跃的孤对电子可造成蛋白质、核酸、细胞膜等分子或组分损伤，导致细胞突变或死亡。三线光敏分子（Sen）在光敏反应中可经两种途径衰变成基态，一种是与生物分子的反应，产生能引发自由基反应和对细胞造成损害的自由基物质，从而衰变回基态；另一种是直接与氧分子反应，是出于三线基态的分子样跃迁为非常活跃的单线态氧（O2）,从而使自己回到基态。一般情况下，三线态光敏分子（Sen）在与生物分子或氧分子反应之前可悲类胡萝卜素猝灭。但在某些情况下，类胡萝卜素无法使所有的三线态光敏分子都失活，从而会产生一定的自由基物质和单线态氧。在这种情况下，类胡萝卜素超强的清除自由基和猝灭O2的能力可钝化自由基和单线态氧，使他们重新回到基态。——增强免疫，延缓衰老，预防癌症类胡萝卜素能增强人体特异性及非特异性免疫功能，也能增强人体免疫系统对肿瘤的免疫力，预防肿瘤的发展和扩散。类胡萝卜素能增强免疫系统中B细胞的活力，减少外援病菌的入侵；类胡萝卜素也能增强淋巴辅助T细胞活力，协助免疫B细胞产生抗体，并增强其他免疫组分的活性；而且还能增加自然杀伤细胞数目，提高机体消除被感染细胞或癌细胞的能力。另外，与衰老相关联的色斑退化的发生率与维生素A前体类胡萝卜素的摄取也存在显著负相关，并且β-胡萝卜素最为显著。大量的流行病学研究表明，癌症的低发病率与血清中高水平的类胡萝卜素之间存在密切关系，经常摄入类胡萝卜素可有效降低多种癌症的发病率，如口腔癌、胃癌、肺癌和食道癌等。在1975年到1992年的46项研究膳食或血清中类胡萝卜素含量水平与肺癌之间的发病率之间的关系报道中，有41项研究发现日常摄入高水平的类胡萝卜素或血清中类胡萝卜素高的受试者，其肺癌的发病率明显较低。另外，类胡萝卜素预防癌症还与其可加强细胞间的缝间联接交流有关。细胞缝间交流对于多细胞生物体的进化和组织的构建、细胞功能的协调，细胞生长和分裂的控制是必须的。β-胡萝卜素能诱导细胞间通讯，可增强已转化癌起始细胞与健康细胞间的交流，从而抑制细胞的恶性转化。三、产降解纤维素酶及低聚糖粗壮脉纹孢菌可分泌较高活性的纤维素酶。该菌所产纤维素酶系健全，包括外切葡聚糖酶、内切葡聚糖酶和葡聚糖苷酶等，并且该菌在高纤维含量的培养基上能够旺盛生长，可完成培养基中的纤维素的降解过程。研究集中在利用粗壮脉纹孢菌液态发酵，对其所产生的纤维素酶进行了分离纯化并测定了相关酶的分子量。也有通过对粗壮脉纹孢菌进行诱变育种，筛选高产菌株并鉴定了其生理生化性质，利用粗壮脉纹孢菌讲解纤维素的能力在优化培养基和发酵条件后达到降解农副产品提升其循环利用价值。叶俊等利用粗壮脉纹孢菌发酵富含粗纤维的农副产品，如豆渣、米糠、玉米芯、甘蔗渣等，成功将粗纤维降解为低聚糖，主要以2-10的聚合度为主。粗壮脉纹孢菌所分泌的纤维素酶酶的最适催化反应pH为4.8～5.3，最适催化反应温度为45～50℃，在50℃及pH为4．8时该酶稳定。CMC、C1和β-葡萄糖苷酶活力变化范围有一定差别。锰离子对该酶活力有一定的增强作用，而铜离子和铝离子对其活力有明显的抑制作用。在产酶培养基中加入洗衣粉可以促进产纤维素酶活力，而洗洁精则会抑制产酶活力。低聚糖一般可分为普通低聚糖和功能性低聚糖。普通低聚糖可以直接被人体消化吸收而产能，而功能性低聚糖因不能被人体消化吸收而直接进入肠道内被有益菌所利用。低聚糖的主要生理功能主要有促进肠道益生菌增殖，改善肠道菌群环境；增强机体免疫能力，改善健康；润肠通便，防止便秘和肠癌；防止口腔龋齿。四、改善鸡蛋蛋黄色泽方面研究成果鸡蛋蛋黄的色泽是衡量鸡蛋品质的重要指标之一。蛋黄中的主要呈色物质就是类胡萝卜素，主要是玉米黄质、叶黄素等，他们是强大的抗氧化剂，可以高度保护眼睛，减少你的眼睛黄斑变性和白内障等疾病的风险。蛋黄的颜色主要受鸡的日粮影响，摄食含类胡萝卜素多的食物，蛋黄的颜色就会偏深。普通的鸡蛋一般含有非常微量的类胡萝卜素，大约含0.2mg/100g。通过将粗壮脉纹孢菌发酵所产的富含类胡萝卜素的饲料通过其他辅助的饲料和添加剂可以有效强化鸡蛋中的类胡萝卜素。鸡蛋中的类胡萝卜素在转化效率方面，相比蔬菜水果的类胡萝卜素，鸡蛋中的类胡萝卜素在人体转化效率要高。类胡萝卜素是脂溶性化合物，多存在于生物体内的脂类或蛋白质的疏水区。鸡蛋中的类胡萝卜素多以与大分子化合物结合的状态存在，存在于高脂肪、高蛋白，富含高不饱和脂肪酸的脂溶性环境，这些物质进入人消化道后更利于促进分泌胰酶和胆盐，使得类胡萝卜素更容易形成乳糜颗粒被人体直接吸收。而蔬果的环境大部分是水溶性的，会造成摄取后类胡萝卜素吸收率不高；同时蔬果含有大量的粗纤维等影响类胡萝卜素吸收的拮抗因子也阻碍了类胡萝卜素的利用率。五、废物高效利用到产品高附加值的“双杠杆”粗壮脉纹孢菌的经济价值不仅仅反映在它的发酵产物具有很高的营养价值，更重要的是它能高效利用农产品加工的副产物，比如豆渣、甘蔗渣、啤酒糟、玉米芯、稻草秸秆等。这些多是农业生产或食品加工的副产物，因粗纤维高，利用率低，基本上用于燃料和肥料，部分作为饲料在体内吸收差，转化效率很低，不仅浪费大量的生物质资源，而且引起严重的环境污染。随着环境污染加重以及人们的环保意识的加强，亟需寻找高效利用这些副产物的技术方法，提高这些廉价原料的附加值，提高经济收益，变废为宝，降低环境污染，这是建设资源节约和环境友好型社会，实现经济增长的需要。粗壮脉纹孢菌相比其他种类的真菌，在产纤维素酶的活力上面有明显的优势。粗壮脉纹孢菌强降解纤维素的功能使得其可以利用低廉的原料作为发酵底物，大大节约了规模化生产的成本。粗壮脉纹孢菌的发酵产物主要包括类胡萝卜素、低聚糖、蛋白和多肽等，这些成分都是可以直接被动物或者人类吸收利用的。因此在投入和产出方面呈现“双杠杆”，具有较大的经济价值。

                  细胞培养基的质量标准和检测方法！一、细胞培养基的质量标准二、细胞培养基的检测方法1、澄清度水是细胞培养基的溶剂。细胞培养基中的营养成分只有完全溶解于水才能被细胞吸收摄取，细胞才能生长增殖，因此细胞培养基是否溶解以及培养液是否透明澄清直接影响培养基使用。该项目是通过对水溶解后的细胞培养基的澄清度检查，判断细胞培养基的澄清度。2、pH 值哺乳类动物细胞生长需要合适的酸碱度，pH过高或者过低都会导致细胞死亡。pH值的测定也可以检查细胞培养基的批间差。清大天一标准规定取规定量供试品，用注射用水（水温20℃-30℃）溶解至1L，加入规定量碳酸氢钠到上述溶液中，用与细胞培养基溶液pH值相近的两点标准缓冲液校准后的酸度计进行测定。3、干燥减量的质量分数细胞培养基具有吸湿性，在空气中放置水分会很快升高，干燥减量的质量分数表示产品中含湿量。细胞培养基是有菌制剂，其丰富的营养成分有利于微生物生长，控制细胞培养基中的水分可以防止微生物的繁殖，保持细胞培养基的养分。4、渗透压溶剂通过半透膜由低浓度向高浓度溶液扩散的现象称为渗透，阻止渗透所需施加的压力，称为渗透压。细胞必须生活在等渗环境中，动物细胞借助K＋、Na＋维持渗透平衡。大多数细胞对渗透压有一定的耐受性。但是培养液渗透压过高容易使细胞脱水萎缩，培养液渗透压过低容易使细胞膨胀破裂，因此要控制培养基的渗透压范围。5、细菌内毒素细菌内毒素是许多病原性细菌所产生的毒素。它的特殊性在于不是细菌或细菌的代谢产物，而是细菌死亡或解体后才释放出来的一种具有生物活性的物质。培养基细菌内毒素过高，对生物制品疫苗（如狂犬、乙肝疫苗）、基因工程药品等注射用的药品都需要检查细菌内毒素。因此本项目的检验符合生物制品质量控制要求。常规细胞培养基的细菌内毒素标准定为＜10 EU/ml。称取本品规定量（见表4-12）的1/100，加入细菌内毒素检查用水10 mL溶解，吸取该溶液0.1 mL加细菌内毒素检查用水3.9 mL，混匀即得试样。6、微生物限度细胞培养基不是无菌产品，其中的微生物在一定条件下会吸收细胞培养基中的营养物质滋生繁殖，导致细胞培养基变质失效。控制细胞培养基中细菌和霉菌，是延长细胞培养基有效期的方法之一。清大天一在参考《中华人民共和国药典》2005版二部附录第100页的口服给药制剂的微生物限度标准，并严于该标准，规定细胞培养基产品的细菌数每1g不得超过200个，霉菌数每1g不得超过50个。称取样品1 g，加入无菌纯化水10 mL溶解，混匀即得试样。按中华人民共和国药典2005年版二部附录Ⅺ J 微生物限度检查法进行，检查项目为细菌数、霉菌数。检查法采用平皿法。7、细胞生长试验这是一个性能特性表述的要求。细胞培养基的功能就是培养哺乳类动物细胞，因此经过细胞培养效果的检验是产品质量优劣的直观表述，这也是很多生物制药用户要求的一项指标。目前国内尚无细胞培养和计数的法定方法，可参考《体外培养的原理与技术》中细胞计数法论述的内容给出。按产品说明书配制培养液进行细胞培养，前四天用含10％小牛血清的培养液培养，观察细胞形态并计数，检查细胞培养基是否有促生长的能力。后三天用不含小牛血清的培养液维持培养，观察细胞形态并计数，检查细胞培养基中是否有不利细胞生长的毒素。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

              人支气管上皮细胞的培养步骤与处理方法！一、细胞简介平台编号：bio-73469规格：1*10 6拉丁属名：16HBE 人支气管上皮细胞细胞名称：人支气管上皮细胞细胞用途：科学研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、细胞特性1）来源：人支气管2）形态：上皮细胞样  贴壁生长3）含量：>1x106  细胞数4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装5) 用途：仅供科研使用。三、细胞的运输和保存干冰运输及复苏好存活细胞（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备：准备角质细胞无血清培养基或者 KM (SCIENCELL CAT NO:2101) ，添加对应因子，1% P/S 来培养细胞。2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。2、细胞处理：1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。  对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

           唾液乳杆菌水杨素亚种的培养方法与使用范围！一、菌种简介平台编号：bio-61671提供形式：冻干物拉丁属名：Lactobacillus salivarius subsp. salicinius中文名称：唾液乳杆菌水杨素亚种属名：Lactobacillus种名加词：salivarius subsp. salicinius来源历史：←北京林业大学食品微生物实验室（1.0237）收藏时间：2008.10.31原始编号：CH4资源归类编码：15131319101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究具体用途：潜在益生菌特征特性：发酵果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蜜二糖、棉籽糖、蔗糖。不发酵阿拉伯糖、纤维二糖、甘露糖、松三糖、鼠李糖、核糖、木糖。革兰氏阳性，接触酶阴性。    生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：鸡肠道采集地：北京通州培养基：酪蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母粉 5.0g，葡萄糖 5.0g，乙酸钠 5.0g，柠檬酸二铵 2.0g，Tween 80 1.0g，K2HPO4 2.0g，MgSO4.7H2O 0.2g，MnSO4.H2O 0.05g，CaCO3 20.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.8。培养温度：37℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享。用途：研究；潜在益生菌。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。储存条件：冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。二、培养条件1、培养基编号：CM00062、培养基成分：酪蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母粉 5.0g，葡萄糖 5.0g，乙酸钠 5.0g，柠檬酸二铵 2.0g，Tween 80 1.0g，K2HPO4 2.0g，MgSO4.7H2O 0.2g，MnSO4.H2O 0.05g，CaCO3 20.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.8。3、需氧类型：好氧4、培养温度：37℃三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。四、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。

                   支原体琼脂培养基的背景与应用！一、背景支原体琼脂培养基适用于临床解脲脲原体、支原体分离培养。支原体琼脂培养基主要由含有适合解脲、人型支原体生长的营养琼脂培养基和平皿组成。支原体琼脂培养基主要组成成份：琼脂粉3%,纯化水70%,尿素0.1%,酪蛋白胨2%,大豆蛋白胨1.5%,精氨酸0.5%,葡萄糖2%。支原体（mycoplasma）是一类没有细胞壁、高度多形性、能通过滤菌器、可用人工培养基培养增殖的最小原核细胞型微生物。由于能形成丝状与分枝形状，故称为支原体。支原体培养是指将支原体接种到培养基中，并观察其生长情况，以判断有无支原体感染。支原体的营养要求比一般细菌高，除基础营养物质外还需加入10%～20%人或动物血清以提供支原体所需的胆固醇和酵母。支原体的最适pH 7.8～8.0之间，低于7.0则死亡，但解脲支原体最适pH 6.0～6.5。分离培养是支原体实验室诊断的惟一方法。大多数支原体兼性厌氧，有些菌株在初分离时加入5%CO2生长更好。生长缓慢，在琼脂含量较少的固体培养基上孵育2～3天出现典型的“荷包蛋样”菌落（圆形，直径10～16μm），核心部分较厚，向下长入培养基，周边为一层薄的透明颗粒区。解脲支原体在含尿素和以硫酸锰为产氨指标的完全诊断培养基上生长良好，形成具有特征性的深棕色菌落。二、应用用于牛支原体PCR检测方法的建立及临床应用研究：采集病牛的肺脏、肝、胸腔渗出物等,接种支原体肉汤培养基,同时剪碎病料呈小块状或直接接取胸腔渗出液,在20%马血清琼脂培养基上划线接种,置5%CO2、37℃温箱中培养,5～7d观察判定。肉汤培养基中生长初期呈轻微浑浊或呈白色点状、丝状生长,以后逐渐均匀浑浊,半透明稍带乳光,不产生菌膜或沉淀,也无颗粒悬浮。在20%马血清琼脂培养基上生长迟缓,为极小的水滴状圆形略带灰色的微细菌落,中央有乳头状突起。姬姆萨染色,显微镜观察,菌落为多形态,以球点状最常见,大小在125～250 nm。对病牛肺部实变组织进行DNA模板的提取,并分别以牛支原体、无乳支原体、丝状支原体等为阳性对照,利用支原体通用引物扩增其16SrRNA,建立了扩增16S rRNA序列进行支原体检测的方法,扩增到16S rRNA的基因片段,大小为1.5kb左右,经过测序,并与GenBank公布的支原体16S rRNA基因序列进行比较,分别与几种支原体阳性样本的序列同源性均在97-100%。支原体的培养困难,生长周期长,营养条件苛刻,使其不能作为早期、快速的检测方法。PCR技术为DNA体外扩增技术,呈2n放大效应,可检测样品中微量级的DNA,具有高灵敏性,因此适于早期检测。对导致牛支原体病的丝状支原体丝状亚种、牛支原体、无乳支原体和绵羊肺炎支原体设计了4对特异引物,建立了多重PCR方法,以期达到快速检测的目的,试验具有特异性强,敏感性高的特点,为临床检测提供了强有力的技术支持,为临床疑似支原体感染病例的鉴别诊断提供较有效的快速诊断方法。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  实验室细菌菌种的保存方法有哪些？百欧博伟生物：在微生物学、环境科学、分子生物学、毒理学、酶学、疫苗制备、药品生产等等领域的实验过程中，都需要应用各种细菌，储备标准菌种、参考菌种、特殊菌种是必不可少的，下面就几种实验室菌株的保存方法简述如下。    1、斜面低温保存法 将分纯的待存菌接种于适宜的固体斜面培养基上，得到充分生长后，用封口膜封口，贴上标签，保存于4℃的冰箱中。此法操作简单、使用方便、不需要特殊设备，是实验室菌种保存最常用的方法。但保存时间短，一般每个月都要移种1次，而且菌种容易变异，所以此方法只适合实验室短期实验菌株的保存。 2、半固体琼脂法 用接种针将以分纯的待存菌，穿刺接种于半固体中，放入培养箱培养后取出，封上无菌的液体石蜡，贴上标签，放4℃冰箱保存。此方法简便易操作，不需特殊设备、技术难度不大，但保存的时间不长，一般只能保存1年以内，而且对抵抗力弱以及一些特殊菌种大概只能存活3～6个月，需要频繁的传代，这样很容易使菌株受到污染、变异。所以此方法不适用菌种的长期保存，只适合实验室一些要求不高的菌种的短期保存。 3、液体石蜡保存法 将液体石蜡灭菌，放于37℃恒温箱中，使水汽蒸发掉备用。再将已分纯的待存菌在最适宜的斜面培养基中培养，使得到健壮的菌体，用无菌吸管吸取已灭菌的液体石蜡，注入已长好的斜面培养基上，用量以高出斜面1cm为准，将试管直立，贴上标签，置4℃下保存。此法制作简单，不需要特殊设备，菌种可以保存1年左右不需要经常移种，缺点是保存的时候需要直立放置。此方法适合实验室短期菌株的保存，而且保存时需要一定的空间。 4、高层半固体琼脂石蜡保存法 将待存菌经平板划线分离后，挑单个菌落用接种针反复穿刺接种到高层半固体琼脂培养基中，经培养箱培养后取出，用灭菌过的液体石蜡滴加到半固体琼脂菌种管表层约0.5cm高度，贴上标签，存放4℃冰箱。此法操作简便，不需要特殊设备，效果好，可以保存菌株1～2年。所以适合实验室菌株的较长期的保存。 5、纸片法 将已分纯的待存菌用无菌镊子镊取纸片，在纸片上刮取4～5个菌落，放入冻存管内，盖上盖子后用封口胶布封住边缘，贴上标签，放入冰箱冷冻保存（－20℃左右）。此方法具有操作简单、不需特殊设备、经济实用、保存空间小等，而且保存时间至少2年，但对一些营养要求比较高的菌种，存活率不理想。所以此方法适合实验室一些营养要求不高的菌种较长时间的保存。 6、甘油液保存法 将已分纯的待存菌接种于肉汤中，37℃培养18～24h，然后按5份肉汤溶液、2份甘油－生理盐水保存液的比例分装于灭菌的微量离心管或细胞冻存管中，贴上标签，置－80℃～－20℃冰箱保存。此法操作简便，不需要特殊设备，效果好，可以保存菌种3年左右，无变异现象，而且此方法还可以保存一些要求较高的特殊菌种，适用范围广。所以此方法适合实验室普通菌种或特殊菌种的较长期的保存。 7、湿牛奶冻存法 将待存菌种于各自生长良好的平板培养基上，经分纯后放入培养箱培养。用准备好的保护剂牛奶洗下菌苔，再用无菌毛细滴管吸取菌悬液滴入菌种管球部，每管球部约有一半的菌液，之后火焰封口，贴上标签，保存于－20℃冰箱。此方法操作比较简便，不需特殊设备、不需要花费很多时间，而且保存时间大约3年，时间较长，不易变性，也不容易污染。所以此方法适合实验室菌种较长时间的保存。 8、蒸馏水保存法 取灭菌蒸馏水6～7ml加于已接待存菌斜面培养基的试管内，用吸管研磨，洗下斜面上的菌苔，充分混匀，将此菌液分装于灭菌的螺旋小瓶中，或用胶塞密封，贴上标签，置于4℃保存。此法制作简单，不需要特殊设备，且不需要经常移种，而且可以保存数年，但要注意保存的时候需要直立放置。所以此方法适合实验室菌种的长期保存。 9、冷冻真空干燥法 将待存菌分纯后，用准备好的保护剂牛奶洗下菌苔，把菌悬液滴入菌种管后，在管口抽取少许棉花塞入管内细颈处，放入冰箱－40℃速冻40min，放入准备好的混有盐的冰中，接上真空泵，真空抽干呈粉末状，火焰封口，贴上标签，保存于－40℃冰箱。此法保存时间长，可达15年，不易变性，但需要专用仪器，一般实验室难以配备，而且过程复杂，操作难度大，需要较长时间才能完成。所以此方法适合具有条件的实验室菌种的长期保存。 10、小结 综上所述，我们在做实验过程中或者短期保存菌种时，可以选择斜面低温保存法、半固体琼脂法、液体石蜡保存法、高层半固体琼脂石蜡保存法、纸片法，进行保存；如果需要较长时间的保存菌株，可以选择甘油液保存法、湿牛奶冻存法、蒸馏水保存法、冷冻真空干燥法保存菌株，其中冷冻真空干燥法需要实验室配备好相应的仪器设备。如果一些菌株营养要求比较高的话，可以选择甘油液保存法、冷冻真空干燥法保存。当然上述菌株保存的方法不是最理想、最方便的保存法，还需要我们不断的探索，不断的研究，找到一种或几种简单、方便、时间长的保存方法。

           ATCC 56765里氏木霉的保藏条件与注意事项！里氏木霉（Trichodermareesei）是多细胞的真核微生物，红褐肉座菌(Hypocrea jecorina)的无性型,隶属于丛梗孢目（Moniliales）木霉属（Trichoderma）。其作为工业菌株用于生产分解不同植物材料的酶类，包括纤维素酶、半纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶等，已有多年历史。一、菌种简介平台编号：bio-67985规格：冻干物拉丁属名：Trichoderma reesei菌株名称：里氏木霉其他编号：ATCC 56765=NRRL 11460 =NRCC 2906来源历史：←美国ATCC←NRRL←Rutgers Univ. RUT-C30培养基编号：17,144,151培养温度：25-28℃培养时间：5-7 天用途：乙酰胆碱酯酶、碱性木聚糖酶、α-半乳糖苷酶、α-葡萄糖醛酸酶、纤维二糖水解酶I和II、内切葡聚糖酶、果胶酶、纤维素酶等注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用培养基信息培养基编号：17名称：Synthetic Potato Medium (综合马铃薯培养基)可用于培养菌种：适用范围：米曲霉、酱油曲霉、栖土曲霉、宇佐美曲霉、出芽短梗霉、白僵霉、灰葡萄孢、顶头孢霉、巴西毛客、备注：20%Potato extract (马铃薯汁) 1L Glucose (葡萄糖) 20gKH2PO4 3g MgSO4.7H2O 1.5gVitanib B1 (硫胺素) Trace (微量) Agar (琼脂) 15gpH 6 培养基编号：144名称：YM 培养基备注：酵母提取物　　3.0 g 麦芽提取物　3.0 g 葡萄糖　10.0 g 蛋白栋　5.0 g 琼脂　20.0 g 蒸馏水　1000 ml pH 6.2 +/- 0.2 培养基编号：151名称：ATCC Medium: 28　Emmons改良沙氏葡萄糖琼脂备注：Neopeptone 　 10.0 g 葡萄糖　 20.0 g 琼脂 20.0 g 蒸馏水　1000 ml pH 7.0 +/- 0.2此培养基是由正规的沙氏葡萄糖琼脂改变而来，具有减少量的葡萄糖和中性的pH。二、培养基综合马铃薯培养基（PDA）20%马铃薯汁 1L 葡萄糖 20g MgSO4.7H2O 1.5g KH2PO4 3gVitanib B1 (硫胺素) Trace 微量约 8mg Agar (琼脂) 20g pH 自然20%马铃薯汁配制方法：马铃薯洗净去皮，取 200 克切成小块 , 加水 1000 毫升煮沸 20 分钟后滤去马铃薯块，将滤液补足 1000ml。 三、保藏条件斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20°C 保存。 四、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支斜面或平板；若直接接种液体培养基）； 经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间；若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。6）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖，注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入0.5ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。

                   OP9小鼠骨髓基质细胞的应用！一、背景OP9小鼠骨髓基质细胞源自新生的op/op小鼠颅盖。因编码M-CSF的基因中的一个突变，OP9细胞不能生成有功能的巨噬细胞克隆刺激因子(M-CSF)。M-CSF的存在对胚胎干细胞(ES)分化成血细胞而不是其他巨噬细胞有抑制功能。OP9细胞可以用于与小鼠胚胎干细胞共培养以诱导胚胎干细胞分化成成红血球来源的、骨髓来源的和B细胞谱系的血细胞。与OP9细胞共培养不需要外源的生长因子或复杂的胚胎结构，这个系统对研究造血细胞的发育和分化的分子机理有用。二、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。三、应用用于与OP9细胞共培养诱导人ES细胞向造血分化体系的研究：通过探究最佳OP9细胞的接种密度,以达到缩短诱导分化周期的目的,优化体外造血分化体系。通过体外诱导造血分化的技术,建立人胚胎干细胞体外诱导造血分化的平台,为干细胞治疗奠定基础,也为研究造血细胞的发生生育的调控机制提供了依据。探索OP9共培养诱导造血分化的最优条件,为体外诱导分化及机制研究建立平台。方法：传统的与小鼠骨髓间充质细胞OP9细胞共培养诱导造血分化,OP9细胞前期培养以及诱导分化过程的周期约为2-3周,利用本实验室已建系的人胚胎干细胞株HN14,将OP9细胞设置成实验组和对照组,实验组:OP9细胞密度设置6个梯度即1.5,2.5,3.5,5.0,6.5,8.0×105/ml接种至10cm皿培养24h后,即与HN14共培养诱导造血分化;对照组：应用传统方法,将OP9细胞按1.5×105/ml接种培养4天后,达到融合状态后进行共培养。通过观察形态变化、流式检测、实时荧光定量PCR及集落形成实验比较造血分化的效率。结果：无论是实验组还是对照组,镜下观察,ES细胞均出现不同程度地分化。采用流式细胞术检测共培养过程中第8、10、12天的CD34细胞阳性率,对照组在第12天达高峰,CD34的阳性率达10%左右,相较而言,在实验组中,CD34的阳性率提前2天达高峰,即在共培养第10天达高峰,且分化效率与对照组无差异（P值>0.05）。实时荧光定量PCR结果显示,中胚层的标志性基因BRACHYURY,呈现先升高后下降的趋势,在对照组在第6天达高峰,而实验组在第4天表达达高峰,这与CD34的表达高峰出现时间相一致。欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     酿酒酵母单层冻干管打管说明书！酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），又称面包酵母或者出芽酵母。酿酒酵母是与人类关系最广泛的一种酵母，用于制作面包和馒头等食品及酿酒。酿酒酵母的细胞为球形或者卵形，直径5-10μm。其繁殖的方法为出芽生殖。酿酒酵母与同为真核生物的动物和植物细胞具有很多相同的结构，又容易培养，酵母被用作研究真核生物的模式生物。酿酒酵母被认为是最具潜力的大规模生产菌种。野生型酿酒酵母的主产物为乙醇。一、菌种简介平台编号：bio-52550规格：冻干物拉丁属名：Saccharomyces cerevisiae Hansen菌株名称：酿酒酵母其他编号：1340培养基编号：50培养温度：28-30℃培养时间：48h用途：生产面包注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、培养基*麦芽汁琼脂培养基*YM 培养基（酵母粉 3.0 g ； 麦芽提取物 3.0 g ；葡萄糖 10.0 g ；蛋白胨 5.0 g； 琼脂 20.0 g；蒸馏水 1000 ml ；pH 6.2 +/- 0.2 ）三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。 四、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用 0.1-0.2ml 的培养液或无菌水溶解，接种在 2 个斜面上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。五、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

               凝结芽孢杆菌的特点与优势及主要作用！凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans），革兰阳性，属于硬（或厚）壁菌门。凝结芽孢杆菌分类学上属于芽孢杆菌属，细胞呈杆状，革兰氏阳性菌，端生芽孢，无鞭毛。分解糖类生成L-乳酸，为同型乳酸发酵菌。最适生长温度为45-50℃，最适pH为6.6-7.0。一、菌种简介平台编号：bio-53285规格：冻干物拉丁属名：Bacillus coagulans菌株名称：凝结芽孢杆菌培养基编号：104培养温度：30培养时间：48 小时用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。保藏条件：斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。二、培养基MRS 培养基酪蛋白胨 10 克 牛肉浸取物 10 克酵母提取液 5.0 克 葡萄糖 20 克乙酸钠 5.0 克 柠檬酸二胺 2.0 克吐温 80 1.0 克 磷酸氢二钾 2.0 克七水硫酸镁 0.2 克 七水硫酸锰 0.05 克碳酸钙 20.0 克 琼脂 20.0 克蒸馏水 1.0 升 PH 6.8如果要配制液体培养基，则不用加入碳酸钙和琼脂三、菌株特点1、有效抑制有害菌的生长，改良肠道微生态环境，促进肠道发育，增强肠道功能。2、提高饲料品质，促进饲料的消化吸收，降低料重比。3、有效改善断奶仔猪由于应激、过敏反应引起的菌群失调性腹泄。4、无任何毒副作用，使用安全，并可降低环境中的氨气、硫化氢等有害气体，改善养殖环境。四、菌株优势1、菌含量高，全部为芽孢体，耐高温等不良环境。2、杂菌含量低，每克产品杂菌含量低于100个，远远高于杂菌含量低于3000个的行业标准，产品质量非常稳定。3、用量少，每吨饲料纯菌粉用量为5—8克可达到非常明显的效果。4、目数高，纯菌粉可过80目筛，可大大增加在饲料中的匀度。五、菌株作用凝结芽孢杆菌是兼性厌氧菌，在有氧及无氧的环境下都可生长，能适应低氧的肠道环境，对酸和胆汁有较高的耐受性，能够进行乳酸发酵，产生的L-乳酸能降低肠道pH 值，抑制有害菌，并能促进双歧杆菌等有益菌的生长和繁殖。凝结芽孢杆菌能够形成芽孢，与其他不产乳酸的芽孢杆菌相比有利于恢复胃肠道的微生态平衡。凝结芽孢杆菌芽孢在人体中约4-6h便可萌发，其中85%的菌体可顺利通过消化系统，最终于肠道中萌发并繁殖。但值得关注的是，凝结芽孢杆菌不同于其它的益生菌，由于菌体在肠道上皮细胞的粘附性较弱，所以在自然条件下一般很难在肠道中存在。因此，作为肠道内的“移民”，凝结芽孢杆菌只能在肠道内做短暂的停留，一次性口服凝结芽孢杆菌后，经过大约4~7d时间肠道内的凝结芽孢杆菌便会通过排便而消失殆尽。所以只有持续服用凝结芽孢杆菌菌剂，才能使得该菌在肠道中充分发挥其益生作用。六、注意事项乳酸菌需要在比较厌氧的环境下培养1) 首次活化，用尽量少的复水液溶解，接种在 5ml 的液体培养基中，静止培养，如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。

                人肝正常细胞的培养步骤与注意事项！一、基本信息平台编号：bio-73052拉丁属名：HL-7702(L-02)规格：1×10?cells/T25培养瓶细胞名称：HL-7702 [L-02]（人正常肝细胞）种属：人生长特性：贴壁细胞形态：上皮细胞样背景描述：HL-7702 [L-02]细胞是人正常肝细胞；HL-7702 [L-02]细胞群体倍增时间约为20小时，细胞形态呈上皮样细胞。在电子显微镜下，亦显示上皮细胞所具有的桥粒和张力原纤维，HL-7702 [L-02]细胞增殖迅速，AFP与CK-19表达阴性，ALB表达在10μg/ml水平，部分细胞多次传代后发生形态变异，ALB表达缺失。生长培养基：RPMI-1640(货号:PM150110)＋10% FBS(货号:164210-500)＋1% P/S(货号:PB180120)培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。细胞用途：仅供科研使用。二、细胞介绍L-02细胞建系鉴定于1980年。该细胞是一株正常肝细胞系,具有典型的肝细胞形态学特征,可用于多种实验研究。三、细胞特性1)来源：*2)形态：上皮细胞样,贴壁生长3)含量：>1x106 个/mL4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5)规格：T25瓶或者1mL冻存管包装四、细胞的运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：(1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。                      五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091);北美胎牛血清,20%;双抗1%。2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。2、细胞处理1)复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。2)细胞传代：如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。对于贴壁细胞,传代可参考以下方法：1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。下面T25瓶为例；1、细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3、将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。六、注意事项1、收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100*,200*各一张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响,故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态,故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明,期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

                  立枯丝核菌的培养条件与保藏方法！一、菌种简介平台编号：bio-21560提供形式 ：斜面培养物拉丁属名：Rhizoctonia solani中文名称 ：立枯丝核菌拉丁属名 ：Thanatephorus种名加词 ：cucumeris (A.B. Frank) Donk收藏时间* ：2008-11-18来源历史 ：甘肃农科院植保所转原产国 ：中国资源归类编码 ：15151700000模式菌株 ：非模式菌株主要用途 ：研究；教学具体用途 ：进行分析检测及抗病性鉴定，指导生产。特征特性 ：AG4-HG-I融合群；PDA培养基上培养，初期菌落白色，轮纹状扩展，后期菌落颜色加深，7－10天产生褐色菌核。生物危害程度 ：四类寄主中文名称 ：马铃薯致病对象 ：无分离基物 ：马铃薯病叶采集地区 ：甘肃榆中采集具体地点 ：马铃薯田块培养基信息 ：培养基编号: 66 培养基名称: 马铃薯蔗糖琼脂培养温度 ：25资源保护类型 ：培养物保藏方法 ：定期移植法共享方式 ：资源纯交易性共享；资源交换性共享实物状态 ：有实物用途：进行分析检测及抗病性鉴定，指导生产。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。二、菌株特点1、该菌为需氧芽孢杆菌，细菌繁殖体G兰氏染色阴性呈紫色，细菌芽胞孔雀绿着色。其细菌繁殖体对培养基要求低，在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨琼脂上生长良好，表面粗糙呈米黄色。2、适生长繁殖湿度为56－65℃，培养24h即可形成菌落，37℃下24h看不到菌落。3、本生物指示剂载体为高级滤纸片，染菌量为5×105－5×106cfu/片或1×106cfu/片，封装在小纸袋内，热死亡时间为121℃，3.9 min阳性，19 min阴性；D10值1.3－1.9 min，符合美国药典第十一版规定标准。4、该菌无毒，热抗稳定，在冰箱内4℃下保存一年抗力无明显下降，在常温（20℃左右）可保存1个月。三、培养条件1、营养肉汁琼脂：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.0。[注]培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。pH7.0。121℃，15min。2、需氧类型：好氧3、培养温度：55℃四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌1-2天，酵母3天，霉菌5-7天，大型真菌7-10天。2、试管斜面种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，BNCC不负责任。4、使用者应保证菌种的安全储存和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。五、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                微生物如何处理环境中的有毒重金属？百欧博伟生物：重金属对生物具有一定的毒性，当它们出现在环境中，会对生物体造成严重伤害，但是科学家发现部分细菌已经有了对付这种毒性的方法。微生物是体型微小的生物体，在地球环境中无处不在，从土壤、岩石到海洋，从最高山脉到最深的海沟，从最炽热的热液喷口到最冰冷的冰川，任何角落都有微生物，它们甚至存在于植物、动物和人类身体之中。微生物朝气蓬勃，可以在任何区域顽强地生存下来，然而，微生物如此快速的生长是具有一定的先决条件的，其中包括含有碳源、氮源、维生素和矿物质的营养物质，它们还需要水分、适当的pH值、适当的盐浓度和氧气条件。什么是重金属？重金属是一种无机元素，当其浓度超过某一特定环境的阈值限制时，可能会对生物体产生毒性。但不要混淆矿物质和金属，虽然许多矿物质就是含量较低的金属，但并非所有的金属都是矿物质。矿物质是具有一定结构和组成的无机复合物，这两个因素对细菌的生长都是至关重要的，从本质上讲，矿物质可以是金属，例如：钾、镁、钙和铁，也可以是非金属，例如：磷、硫和氯，矿物质在生物体机能中经常发挥着生物学作用。大多数矿物质缺乏生物学作用，当超过一定的阈值浓度时，可能被证明对生物体是有毒的，例如：铅、铬、铜、镉、砷、锌、汞、镍，我们能从食物中摄入矿物质，但是重金属来源何处呢？重金属在环境中沉积的来源有农业、工业或者家庭，农业来源包括：无机肥料、杀虫剂、杀菌剂和污水废物的使用；工业来源包括：炼油厂、金属矿石开采、煤炭开采、石油化工溢出和火力发电；家庭来源包括：家庭焚烧生物量、有机和无机生活垃圾、使用过的电池和过滤器等生活垃圾也是导致环境中重金属沉积的来源之一。这些累积的重金属在土壤中存留时间比有机污染物更长，由于土壤是重金属沉积的主要方式，以土壤为家的生命形式将面临着危险，土壤微生物群落多样性最高，微生物负荷也最高，土壤微生物受重金属污染的风险较大。重金属对微生物有什么影响？土壤中重金属积累对微生物的危害远大于有机污染物，主要原因是有机污染物具有沥滤属性，随着时间的推移，其危害性将逐渐降低，而重金属在土壤中存留时间会更长，重金属既不能被破坏，也不能被分解成更小的结构。重金属将影响土壤微生物活性和土壤微生物群落构成，让我们了解一下该进程是如何发生的：金属对微生物活性的影响重金属阻碍了微生物的多种功能，例如：土壤结构的维持、土壤有机质的形成、生物地球化学循环的维持和有毒化合物的分解，从长远角度来看，这些功能可能威胁土壤生态系统的功能。哪些重金属会影响微生物代谢机制？研究表明，汞、镉和铅会抑制细胞分裂、酶活性和编辑、蛋白质变性、诱导DNA损伤、并通过离子失衡损伤细胞膜，当重金属替代细胞膜上的重要矿物质时，就会发生离子不平衡。此外，汞还会抑制DNA转录，而砷会导致DNA受损，铜、镍和锌抑制酶活性，导致离子失衡。重金属还能抑制超氧化物歧化酶、过氧化氢 酶、抗坏血酸过氧化物酶的酶活性，同时，重金属还能促进活性氧的产生和诱导氧化损伤。因此，重金属极大地影响微生物的形态、代谢、生长和繁衍。重金属对微生物群落的影响土壤中积累的重金属会改变土壤养分质量，如果养分质量持续恶化，土壤中健康的微生物数量也会减少，这种减少将限制土壤中二氧化碳释放，从而影响生活在土壤中微生物群落，这是一个自然生态循环。只有那些能够忍受重金属的细菌，即耐金属细菌，才能存活下来，这将最终导致土壤微生物群落的改变。微生物对重金属的耐受机制是怎样的？部分微生物已进化发展出相应的机制来对抗或者耐受环境中逐渐增多的重金属，微生物对重金属耐受性存在多种机制，第一种机制是最直接的——防止重金属进入细胞，它可以通过两种方式来实现，其一是阻断转运体（允许分子出入细胞的通道），这对重金属从细胞外运输到细胞内非常重要；其二是在细胞外制造黏液化合物，用于捕获金属并阻止它们进入细胞。如果微生物无法抑制对重金属的吸收，它们可以尝试将这些金属踢出细胞，尽管该过程会消耗能量，但与金属对微生物的众多负面影响相比，该方法是可行的。微生物可能试图与重金属结合形成不可溶解的复合物，也被称为隔离或者积聚过程，这样它们就不会产生有害的影响，该进程可以在细胞内或者细胞外进行，而实现这一功能的机制因微生物而异。部分微生物甚至会利用有毒重金属发电，这将带来双重益处，不仅使金属无毒，也从中获得了能量。你能相信微生物有多聪明吗？它们不仅进化出对抗金属毒性的机制，甚至还使用相同的有毒金属发电！总结伴随着地球不断增加的人类活动，导致重金属等污染物在土壤中过度积累，它们的持久性、毒性和生物不可降解性不仅使土壤质量恶化，而且使其微生物丰富度逐渐下降。微生物对环境胁迫性更为敏感，现已成为土壤质量的一个重要指标。重金属对微生物的持续暴露将导致微生物进化出适应机制，帮助它们在重金属环境下生存。

               人皮肤黑色素瘤细胞的培养方法与应用！一、背景SK-MEL-1人皮肤黑色素瘤细胞是由Oettgen·F及其同事从一名29岁的患有广泛、快速进展性恶性黑色素瘤的白人男性患者的胸导管中分离建立的。SK-MEL-1细胞可产生黑色素，电镜检测发现SK-MEL-1细胞中色素颗粒与自身合成和吞噬作用相关。在63%的恶性黑色素瘤患者和10%其他疾病患者体内发现了针对SK-MEL-1细胞的抗体。二、培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。传代方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。三、应用用于microRNA-33a通过靶向HIF-1α抑制黑色素瘤侵袭转移的分子机制研究：通过real-time PCR法检测miR-33a/b在低转移侵袭力的皮肤黑色素瘤细胞株WM35及高转移侵袭力的皮肤黑色素瘤细胞株WM451、A375和SK-MEL-1中的表达量。明确miR-33a/b在黑色素瘤细胞系中的表达情况,筛选miR-33a/b高表达和低表达的黑色素瘤细胞系作为进一步的实验研究对象。构建pYr-LVX-pri-miR-33a慢病毒载体,并将其包装成慢病毒,然后感染A375细胞,建立hsa-miR-33a稳定过表达细胞系A375-pYr-LVX-pir-miR-33a;构建pYr-LVX-miR-33a-sponge慢病毒载体,并将其包装成慢病毒,然后分别感染WM35、WM451细胞,建立hsa-miR-33a表达抑制的稳定细胞系WM35-pYr-LVX-miR-33a-sponge和、VM451-pYr-LVX-miR-33a-sponge o以1niR-33a表达稳定上调／抑制细胞系为研究对象,运用MTT法检测细胞增殖能力。平板克隆形成实验检测细胞克隆数；流式细胞术检测细胞凋亡率；细胞划痕实验、Transwell实验检测细胞迁移侵袭力；、Vestern Blot法检测与EMT相关的E-钙粘连蛋白（E-Cadherin）、N-钙粘连蛋白（N-Cadherin）的表达情况。多层面探讨miR-33a的表达对细胞增殖、细胞凋亡、侵袭转移和EMT等表型的影响。通过皮下接种及尾静脉注射A375及A375-pYr-LVX-pir-miR-33a细胞建立裸鼠种植瘤及移植瘤模型,观察裸鼠皮下种植瘤的大小、体积、质量及肺脏转移灶数目的变化情况。采用生物信息学分析法预测HIF-1α可能为miR-33a的下游靶因；Western Blot法检测miR-33a表达变化时HIF-1α蛋白的表达水平；应用双荧光素酶基因报告法进一步验证HIF-1α是否为miR-33a的直接靶基因。研究结果：miR-33a与1niR-33b在低转移侵袭力的人皮肤黑色素瘤细胞株WM35中表达量均高,而在高转移侵袭力的人皮肤黑色素瘤细胞株VM451、A375和SK-MEL-1中的表达量相对较低（WM35>WM451>A375>SK-MEL-1）;上调A375细胞株中1niR-33a的表达能抑制细胞增殖、侵袭转移和上皮-间质转化；抑制WM451和WM35细胞株中miR-33a的表达能促进细胞增殖、侵袭转移和上皮-间质转化；miR-33a对细胞凋亡的影响无统计学差异。

                产气荚膜梭菌培养与储存及注意事项！一、菌种简介平台编号：bio-61421提供形式：冻干物拉丁属名：Clostridium perfringens中文名称：产气荚膜梭菌属名：Clostridium种名加词：perfringens其它中心编号：=ATCC 13124来源历史：←中国检验检疫科学研究院（23901）收藏时间：2008.11.13资源归类编码：15131711101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；分析检测具体用途：研究、质量控制特征特性：G+杆菌，精氨酸双水解酶阳性，卵磷脂酶阳性，脂酶阴性，尿素酶阴性，发酵葡萄糖、海藻糖、棉子糖，不发酵阿拉伯糖、木糖。专性厌氧，最适pH5.5~8.0。生物危害程度：三类致病对象：人畜共患致病名称：肠胃炎传播途径：经口、消化道培养基：牛肉胰酶消化液 500.0ml，牛肉浸液 500.0ml，NaCl 5.0g，葡萄糖 5.0g，琼脂 1g，硫乙醇酸钠 0.5g，碎肉渣 10g，pH7.2～7.4。培养温度：37℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究、质量控制，《GB 4789.13-2012产气荚膜梭菌检验》阳性对照菌株，《GB 4789.28 培养基和试剂的质量要求》标准菌株。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。三、培养条件1、培养基编号：CM01212、培养基成分：牛肉胰酶消化液 500.0ml，牛肉浸液 500.0ml，NaCl 5.0g，葡萄糖 5.0g，琼脂 1g，硫乙醇酸钠 0.5g，碎肉渣 10g，pH7.2～7.4。3、需氧类型：厌氧4、培养温度：37℃四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系菌种。五、西林瓶打管说明书1、开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖，注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入 0.2ml适宜的液体培养基复溶冻干粉末。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。9、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理。

               非洲绿猴肾细胞的培养步骤与处理方法！一、细胞简介细胞名称：非洲绿猴肾细胞拉丁属名：Vero 规格：1*10e6细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、细胞特性1）来源：非洲绿猴正常肾2）形态：上皮细胞样，贴壁生长3）含量：>1x1064）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装三、细胞的运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。                  五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备MEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。下面T25瓶为类；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

                李斯特氏菌的感染性及对环境的抵抗力！一、背景李斯特氏菌属(Listeria)为革兰氏阳性、两端钝圆、兼性厌氧、稍弯曲的无芽孢短杆菌。过氧化氢酶阳性，氧化酶阴性，不产生H2S，不产生荚膜，能发酵葡萄糖，菌体细胞单在排列，有时呈“V”字形或栅栏状。在20～25℃下培养可形成鞭毛。发酵乳糖产生L(+)乳酸，并可利用多种糖类产酸，但不产气。本属由以单核细胞增生性李斯特氏菌(L.monocytogenes)为代表的具有致病性和无害 李斯特氏菌(L.innocua)等不致病的菌株组成。其中单核细胞增生性李斯特氏菌侵害人和家畜中枢神经，引起脑膜炎，也能导致怀孕母畜乳房炎和流产，以血液中单核细胞增多为主要特征。该菌呈较小的球杆状，大小为(1.0～3.0)μm×0.5μm，无芽孢，不形成荚膜，以周身鞭 毛运动。在含有肝浸汁、腹水、血液或葡萄糖的培养基上能更好地生长。在pH9.6的10% NaCl溶液中能生长，过氧化氢酶阳性，不液化明胶，甲基红和VP实验阳性。本菌广泛分布于河水、污泥、劣质青贮饲料、牛乳及乳制品中。有些健康动物往往携带菌，并经粪便排出，污染环境。本菌可在冷藏的牛乳中生长，但生长缓慢。牛乳中的污染主要来自于被带菌乳牛粪便污染的挤乳设备或劣质青贮饲料以及清洗用水等。由于该菌体可通过细胞吞噬作用进入巨噬细胞中，因此，具有较强的抗热性。二、分布产单核细胞增生性李斯特氏菌研究现状李斯特氏菌在自然界中分布极为广泛，野生动物、家畜、家禽、健康人群均可携带，目前己从42种不同哺乳动物和22种禽类分离到产单核细胞增生性李斯特氏菌，另外鱼类、蜱类、蝇类及甲壳类动物中也分离出该菌，实际上动物起到携带、繁殖、排放该菌的作用。在含水份较高的物品如土壤、地面水、牛奶及奶制品、肉制品，水产品，冰箱内，洗碗布中也常能检出该菌，据对食品加工场所检测发现，地坂、墙壁、排水管道、传送装置，清洗材料和设备表面等潮湿处易被污染。从河水、屠宰场污水、新鲜猪粪便、新鲜牛粪便、新鲜人粪便、庄稼地土壤、菜地土壤、生肉、熟肉，鲜牛奶、乳制品、蔬菜、活鱼虾中均检出该菌。三、食品污染产单核增细胞生性李斯特氏菌属于李斯特氏菌属，能引起人和动物脑膜炎，败血症、流产等症状，死亡率达20—-30％。李斯特氏菌是一种重要的食源性致病菌，从世界各地爆发的李斯特氏菌病来看，主要病因是食用了被污染的农畜产品及水产品，我国虽未有爆发性流行，但食品受到单增李斯特氏菌污染的报告也屡见不鲜。1、奶及奶制品： 奶及奶制品中检出率较高，1988年加拿大安大略省鲜奶的单增李斯特氏菌的检出率高达45.3％，1995年10月到1996年5月进行的调查中检出率为2.73％。调查了不同奶站的3000个巴氏消毒奶样，其中有3份检出了单增李斯特氏菌，检出率为0.1％ 。我国在对l2省七类食品的调查中发现，乳的污染率为0.72％ ，乳制品污染率为0.52％。研究发现，山羊奶污染李斯特氏菌与季节有关，秋、冬两季比春、夏两季污染率高。调查发现，刚生产的奶酪样品中单增李斯特氏菌的含量较低，但零售样品含量较高，证实单增李斯特氏菌在工厂污染食品，并在4℃ 增殖。研究发现，如果奶酪在成熟前被单增李斯特氏菌污染，冷冻条件下(-18℃--38℃)保存，该菌能存活7.5个月，奶酪的高PH 和乳中丰富的蛋白质、脂肪可能支持了单增李斯特氏菌的生长。2、肉及肉制品：1992-1995年，对法国和比利时禽屠宰加工场生产的产品进行单增李斯特氏菌污染的调查发现：鸡胴体、鸡分割肉及禽类熟制品的单增李斯特氏菌的污染率从1992年的32.1％ 下降到1995 年的9.2％，分割肉中鸡腿和鸡翅的污染率最高，应当注意的是煮过的样品污染率最高，达到50％。英国一次单增李斯特氏菌污染率的调查显示，生鸡肉为49％ 、生猪肉灌肠为9.2％，熟食鸡肉制品为16％ ，即食牛肉干儿为3.0％t。1999年底，法国以生产肉酱和冷盘肉为主的加工生产的部分肉酱和猪舌肉被李斯特氏菌污染，造成9人发病，2人死亡。我国十二省七类食品的单增李斯特氏菌的污染率调查显示，生肉制品为1.53％，熟肉制为0.47％，河南省的调查显示，生肉单增李斯特氏菌的污染率为5.8％，熟肉为3.3％。3、水产品：1986年发现22例围产期感染与食用被污染的生鱼或贝类呈弱相关，1988年，瑞士爆发一起热熏鱼引起的李斯特氏菌病.热熏鱼的污染率为8.9％。1993年，新西兰发生因食用被污染的熏制贝类而引起李斯特氏菌病。对810份热熏鱼进行了单增李斯特氏菌污染率调，检出率为7.1％，薰产品比热熏产品单增李斯特氏菌污染率高。对即食鳌虾单增李斯特氏菌污染情况进行调查发现，煮过的全虾只有3％被污染，而冷冻真空包装未经充分加热的鳌虾尾肉有17％。4、蔬菜：除了动物产品，蔬菜也是单增李斯特氏菌的主要污染对象，调查了河南省5个地区的6类食品单增李斯特氏菌的污染情况，其中蔬莱的污染率是5.5％。蔬菜的污染除与运输、储存过程关外与菜地施用未经腐熟的农家肥及灌溉水的污染也有关。该菌在4种粗加工的蔬菜中有不同程度存活和繁殖，蔬菜叶质的品种对该菌的繁殖和存活影晌较大。四、李斯特氏菌病李斯特氏菌病是由单核细胞增生李斯特氏菌 (Listeria monocyto-genes)引起的一种散发性传染病。至少有37种哺乳类动物和17种鸟类可被感染。该菌至少可分为16个血清型或亚型。家畜以绵羊、猪、家兔较多发生，牛、山羊次之，马、犬、猫发生较少。家禽以鸡、火鸡、鹅发生较多，鸭较少，鸽有抵抗力。啮齿动物和一些野生动物常为自然界中的贮存宿主，从寄生的蜱也可分离出这种细菌。发病和带菌动物是本病的传染源。病原菌通过消化道、呼吸道、眼结膜以及受损伤的皮肤等途径而传播。用稻草作青贮喂猪，易发生此病，故有"青贮病"之称。潜伏期2～3周，有的只有数天。症状不一：一般幼龄动物以败血症为主；年龄较大的则多呈现脑炎症状，病畜转圈，又称"转圈病"；成年动物症状多不明显；妊娠动物常发生流产。死于本病的动物一般没有特殊的肉眼可见病变。有神经症状的病畜，其脑膜和脑有炎症，血管周围有以单核细胞为主的细胞浸润。肝可能有小坏死灶，流产母畜子宫内膜和胎盘有充血以至广泛坏死。病禽的心肌和肝脏有大小坏死灶。确诊须用实验室诊断方法，如微生物学试验和血清学试验等。病的初期可试用较大剂量抗生素或磺胺类药物治疗。人可感染此病，症状不一，以脑膜炎为多见；从事与病畜、禽有关的工作人员应注意防护。五、疾病预防由于李斯特氏菌在食品和环境中的广泛存在，其引起的李斯特氏菌病又有极高的病死率，对人体健康造成极大的威胁。各国对防止李斯特氏菌污染食品和预防李斯特氏菌病开展丁多项研究。WHO和美国FDA于1986年设立丁李斯特氏菌研究中心。美国FDA和USDA于1999年用危险性分析的方法对单棱细胞增生李斯特氏菌进行专题研究针对李斯特氏菌耐低温和耐热性稍差以及乳制品、熟食易污染等特点，美国CDCI I对一般人群推荐了降低李斯特氏菌病的5条措施，即：①生的动物性食品.如牛肉、猪肉和家禽，要彻底加热；②生食蔬菜食用前要彻底清洗；@未加工的肉类与蔬菜、已加工的食品和即食食品分开；④不吃生奶(未经巴氏消毒的)或用生奶加工的食品；⑤加工生食品后的手、刀和砧板要清洗。对高危人群(如孕妇、免疫低下者)踪上述措施外，还提出特别忠告，即：①不吃软奶酪，如feta、Camembert、blue—vdned、Mexican式奶酪，而硬奶酪、已经加工过的奶酪、奶油奶酪、cot.tage奶酪和酸奶可以食用；②吃剩食品和即食食品食用前应重新彻底加热；③不吃改刀熟食或者食用前经重新彻底加热。六、李斯特氏菌对环境的抵抗力李斯特氏菌在5～45℃均可生长，在5℃低温下生长是该菌的特征。在-20℃可存活1年，耐碱.不耐酸，在pH 9.6中仍能生长。能在l0％或40％(W／V)胆计、0.025％醋酸亚铊、0 04％钛酸钾、l‰亚碲酸钾肉汤中生长，也可在10％NaCl培养基中生长，其耐受力达20％。但在0.02％叠氨钟中不生长；次亚氯酸钠50×10 以上、转化皂需50×10 以上始有灭菌效能；对各种抗生素大多敏感，依次为氨苄青霉素+庆大霉素>氨苄青霉素>利摇霉素>青霉素>四环素>氯霉素。对磺胺、枯草杆菌素、头孢菌素和多粘菌素有抵抗力.对链霉素可很快产生耐药性。对热耐力较强，需60℃，20min，或70℃，5min才能杀灭，可耐受牛奶巴氏消毒温。将人工污染单核细胞增生李斯特氏菌(10 efu/mL)的生牛奶，经60-72"C加热16 2秒试验。直至加热到67 5℃，仍能检出该菌；同时用白然污染的牛奶，用HTST巴氏消毒器处理，在60～66℃仍检出；69℃及以上则未检出单核细胞增生李斯特氏菌。

                    生物实验室培养箱的类别与原理！百欧博伟生物：在过去的数十年间，细胞生物学、分子生物学、药理学等的研究领域都有了惊人的长足进步，同时，这些领域中的技术应用也不得不跟上“脚步”。虽然典型的生命科学实验室设备有了很大的改变，但培养箱依然是实验室中的主要组成部分，其使用的最终目的也都是维持和促使细胞和组织更好地生长。然而，随着技术的进步，其功能和运作都变得越来越精确、可靠和方便。如今，培养箱已成为实验室最普遍使用的常规仪器之一，已广泛应用于医学、免疫学、遗传学、微生物、农业科学、药物学的研究和生产。除此之外高等院校以及各科研院所只要涉及到需要做低温恒温试验、培养试验、环境试验、储藏菌种、生物培养之用时，培养箱自然是不可缺席的重要设备。一、生化培养箱目前应用最为广泛的主要有生化培养箱、二氧化碳培养箱、直接电热式培养箱、隔水电热式培养箱四种类型，每种类型都有其特点和独特的功用，以用于不同的科研及教学领域。其中生化培养箱的应用最为普遍，这种培养箱同时装有电热丝加热和压缩机制冷。可适应范围很大，一年四季均可保持在恒定温度，因而逐渐普及，被广泛应用于细菌、霉菌、微生物、组织细胞的培养保存以及水质分析与BOD测试，适合育种试验、植物栽培等，在高校所开设的如环境保护、卫生防疫、药检、农畜、水产等专业都有使用。二、二氧化碳培养箱二氧化碳培养箱是在普通培养的基础上加以改进，通过对周围环境条件的控制制造出一个能使细胞/组织更好地生长的环境，条件控制的结果就会形成一个稳定的条件：如恒定的酸碱度（pH值：7.2-7.4）、稳定的温度（37°C）、较高的相对湿度（95％）、稳定的CO2水平（5％），这就是为什么上述领域的研究员如此热衷于使用方便稳定可靠的二氧化碳培养箱。此外，由于增加了二氧化碳浓度控制，并且使用微控制器对培养箱温度进行精确控制，使生物细胞，组织等的培养成功率、效率都得到改善。总之，二氧化碳培养箱是普通电热恒温培养箱不可替代的新型培养箱。三、电热式和隔水式培养箱电热式和隔水式培养箱的外壳通常用石棉板或铁皮喷漆制成，隔水式培养箱内层为紫铜皮制的贮水夹层，电热式培养箱的夹层是用石棉或玻璃棉等绝热材料制成，以增强保温效果，培养箱顶部设有温度计，用温度控制器自动控制，使箱内温度恒定。隔水式培养箱采用电热管加热水的方式加温，电热式培养箱采用的是用电热丝直接加热，利用空气对流，使箱内温度均匀。四、光照培养箱是具有光照功能的高精度恒温设备；光照培养箱是细菌、霉菌、微生物的培养及育种试验的专用恒温培养装置，特别实用于生物工程、医学研究、农林科学、水产、畜牧等领域从事科研和生产使用的理想的设备。五、微生物培养箱主要适用于环境保护、卫生防疫、农畜、药检、水产等科研、院校实验和生产部门。是水体分析和BOD测定细菌、霉菌、微生物的培养、保存、植物栽培、育种实验的专用恒温，恒温振荡设备。六、植物培养箱植物培养箱实际就是一个有光照的带湿度恒温培养箱，其中的光照、温度、湿度等条件能够满足植物的生长需求。植物培养箱原理是几组灯管和一套控温装置（通常5-50度）。如果高级点的还有光照设置比如几点开灯几点关灯，什么时候光照强一些等。七、人工气候室可人工控制光照、温度、湿度、气压和气体成分等因素的密闭隔离设备小型的称“人工气候箱”。八、恒温恒湿箱恒温恒温箱可以准确地模拟恒温、恒湿等复杂的自然状环境的，有着精确的温度和湿度控制系统的一种箱体，实验室一般用在用于植物培养、育种试验；细菌、微生物培养，用作育种、发酵、微生物培养、各种恒温试验、环境试验、物质变性试验和培养基、血清、药物等物品的储存等。可广泛适用于药物、纺织、食品加工等无菌试验、广泛应用于医疗卫生、生物制药、农业科研、环境保护等研究应用领域。恒温恒湿箱工业一般用在适用于电子电工、家用电器、汽车、仪器仪表、电子化工、零部件、原材料及涂层、镀层进行高低温,高低湿的实验、在航天、航空、船舶、兵器、电子、石化、邮电、通讯、汽车、等领域倍受青睐。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

             大鼠视网膜神经节细胞的操作步骤与应用！一、背景大鼠视网膜神经节细胞采用胶原酶消化和密度梯度离心制备而来，细胞纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。大鼠视网膜神经节细胞来源于成年大鼠神经层视网膜组织，细胞贴壁后呈单层排列，部分细胞聚集成团，细胞呈圆形或椭圆形，核圆且相对透明，有些细胞膜上伸出短而小的突起。RGCs是青光眼病理性损害的主要细胞，RGCs的死亡可导致视功能不可逆损伤，研究RGCs损害的细胞学和分子生物学机制有利于青光眼发病机制的研究。二、操作步骤1、取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。2、视网膜神经节细胞为终末分化的细胞，建议直接使用，不建议扩大培养。3、待细胞状态最佳时准备转孔培养，进行实验：1)吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；2)添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴2~3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；3)用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；4)待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。三、应用用于RCS大鼠视网膜重构中谷氨酸变化对神经节细胞的影响研究：通过研究RCS大鼠视网膜重构过程中谷氨酸的释放、摄取和转化各阶段的变化规律，以及谷氨酸作为神经递质的输出改变对视网膜节细胞功能的影响，进而揭示视网膜变性过程中谷氨酸改变对视网膜神经节细胞存活的影响，以及变性过程中视网膜神经节细胞电生理功能的改变，为视网膜变性后神经元的保护、视功能挽救和重建提供线索，为视网膜重构的基础研究和临床治疗研究提供理论依据。方法：1、采用免疫组织化学技术研究重构视网膜中蛋白激酶C的α亚单位（PKCα）和谷氨酰胺合成酶（GS）的分布；实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测不同时间点重构视网膜中PKCα与VGLUT-1mRNA表达量的变化规律；2、Western免疫印迹技术检测视网膜中GLAST蛋白和GS蛋白的表达水平；3、膜片钳技术检测不同时间点视网膜神经节细胞对谷氨酸的电生理反应性，最终阐明视网膜变性过程中，视网膜神经节细胞的电生理功能的变化规律。结果：1、RCS大鼠视网膜变性首先累及光感受器细胞，存活的视杆双极细胞所占百分比随变性发展逐渐增高；到视网膜变性晚期，内核层和节细胞层的细胞仍有大量残留。2、RCS大鼠视网膜变性发展到中后期，作为神经递质的谷氨酸释放逐渐增多，但Müller细胞摄取谷氨酸的能力并不相应地增加，只是Müller细胞内对谷氨酸的转化能力逐渐增强；到视网膜变性晚期，谷氨酸的释放量相对减少。3、正常大鼠视网膜神经节细胞钳制在-80mV水平下受光刺激后诱发的内向电流包括三种成份，即AMPA受体成份，GABA受体成份，诱发动作电位后产生的Na＋内流成份；在此钳制电压下，视网膜神经节细胞主要通过AMPA受体和GABA受体接受上级神经元的输入；并且内向电流强度随年龄增加无明显改变，稳定在一定水平，且谷氨酸电流强度也无明显改变；NBQX不影响视网膜神经节细胞内向电流的各时程。

           鼠疫杆菌的生物学特性与微生物学检验方法！鼠疫杆菌(Yersinia pestis)属于耶尔森氏菌属(Yersina)。是引起烈性传染病鼠疫(Plague)的病原菌。也是帝国主义使用的致死性细菌战剂。一、 生物学特性鼠疫杆菌为短小的革兰氏阳性球杆菌，新分离株以美兰或姬姆萨染色，显示两端浓染，有荚膜(或称封套)。在病灶标本中及初代培养时，呈卵园形。在液体培养基中生长呈短链排列。本菌为需氧及兼性厌氧菌，最适温度为27~28℃，初次分离需在培养基中加入动物血液，亚硫酸钠等以促进生长，在血平板上，28℃培养48小时后，长成不透明的，中央隆起，不溶血，边缘呈花边样菌落，这种菌落形态为本菌的特征。在液体培养基中24小时孵育逐渐形成絮状沉淀，48小时在液表面形成薄菌膜，从菌膜向管底生长出垂状菌丝，呈钟乳石状。鼠疫杆菌对外界抵抗力强，在寒冷、潮湿的条件下，不易死亡，在-30℃仍能存活，于5~10℃条件下尚能生存。可耐直射日光1~4小时，在干燥咯痰和蚤粪中存活数周，在冻尸中能存活4~5个月，但对一般消毒剂、杀菌剂的抵抗力不强。对链霉素、卡那霉素及四环素敏感。鼠疫杆菌毒株有下列抗原成份和毒素。1、荚膜FI(Fraction I)抗原在荚膜中存在两种抗原成份，一种是多糖蛋白质(F~I)，另一种为蛋白质。只在37℃培养时产生，有抗御吞噬作用。2、毒力V/W(Virulcnce)抗原在细菌表面，V抗原是蛋白质，有保护作用;W抗原为脂蛋白，不能使豚鼠获得保护力，V/W抗原结合物有促使产生荚膜，抑制吞噬作用，并有在细胞内保护细菌生长繁殖的能力，因此，与侵袭力有关。3、鼠毒素(Murine toxin)鼠疫杆菌产生的外毒素(毒性蛋白质)，主要作用是抑制辅酶还原，损害心肌细胞内线粒体呼吸，毒害末稍血管系统及淋巴管内皮细胞，造成血压下降及休克，又可使肝、肾及心肌组织变性、出血、坏死。鼠毒素抗原性强，可制成类毒素。4、内毒素与一般革兰氏阴性杆菌的内毒素性质相同，但毒性较强，耐热，能引起发热、弥漫性血管内凝血，和中毒性休克。5、杀菌素(Pesticin I)有杀死其他菌的作用，侵袭力有关，有助于侵袭扩散。二、 致病性与免疫性(一)致病性本病为多途经传染，靠荚膜，多种毒性抗原，内毒素及毒性酶，透明质酸酶，溶纤维蛋白酶等致病。按传播方式不同分为：1、鼠间的鼠疫一般在人间发生流行之前发生。通过鼠蚤吸血传播。2、人间的鼠疫人被感染的鼠蚤叮咬而传染。也可因宰杀感染后的动物，由破损创口侵入，或因吸入含本菌的气溶胶感染。临床常见的病型有:（1）腺鼠疫主要由野鼠传染家鼠，再由家鼠叮咬人时，将鼠疫杆菌注入人体皮下。再进入淋巴结内繁殖侵害，最常侵犯腹腹股沟淋巴结或腋窝淋巴结，引起淋巴结肿胀化脓及全身中毒，毒死率很高。（2）败血性鼠疫继发于腺鼠疫之后，这时机体抵抗力极度损害，细菌侵入血流，发生败血症，病死率极高。（3）肺鼠疫或继发性鼠疫由吸入空气中鼠疫杆菌直接引起，传染性极强，在寒冷季节里很容易造成扩大流行，此型病症最危险。继发性肺鼠疫由腺鼠疫或败血症鼠疫患者体内细菌侵入自身肺内引起的并发性肺炎，由病人呼吸散播，病死率极高。(二)免疫性人体对鼠疫杆菌无天然免疫力，容易感染。患过鼠疫病愈者可获得持久性免疫力，很少再次感染。三、微生物学检验鼠疫杆菌的检验必须严格执行烈性菌管理规则，注意防止气溶胶感染或防蚤叮咬。动物实验应有防护设备，实验用过培养物及器材应及时消毒。取检材涂片，用甲醇或酒精乙醚混合液固定5~10分钟，然后进行革氏或美兰染色，镜检观察鼠疫杆菌的形态特征。将检材划线接种于普通琼脂平板上，龙胆紫血琼脂平板及厚金格尔(Hottinger)琼脂平板上。28℃孵育48小时后观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片、染色、镜检。必要时，接种厚金格尔斜面和肉汤，作噬菌体裂解、凝集或沉淀试验等进一步鉴定。确诊第一例鼠疫报告时，须作豚鼠皮下或擦皮接种试验。四、特异性防治预防鼠疫的基本原则：1、严格控制传染源，隔离可疑病人或病人，严格执行检疫制度；2、切断传播途径，灭鼠、灭蚤；3、提高人群免疫力(预防接种鼠疫无毒活疫苗)和个人防护。高效价鼠免疫血清在治疗上有效，可与抗生素并用。

                     行动起来，保护生物多样性！百欧博伟生物：珍稀濒危野生动物频频现身，新物种、新记录种不断发现……我国生物多样性状况持续改善，越来越多的地方成为野生动物的安居家园。生物多样性是经济社会可持续发展的根基。作为世界上生物多样性最丰富的国家之一，我国是全球生态文明建设和生物多样性保护的参与者、贡献者与引领者。我国是最早签署《生物多样性公约》的国家之一，将生物多样性保护纳入国家各类规划和计划。通过实施天然林保护、退耕还林还草、自然保护地体系建设等措施，植被覆盖不断恢复和增长，珍稀濒危物种实现恢复性增长。生态保护红线初步划定，绝大多数重要物种和重要生态系统在红线内得到了有效保护。与此同时，我国也是生物多样性受威胁最严重的国家之一。可喜的是，随着绿色发展理念深入人心，各地坚持走生态优先、绿色发展之路，更加重视在资源利用过程中减少对生态环境、生物多样性的损害，努力实现人与自然和谐共生。今年10月，联合国《生物多样性公约》第十五次缔约方大会将在云南昆明举办，让我们以此为契机，行动起来保护生物多样性，努力建设人与自然和谐共生的现代化，共建繁荣、清洁、美丽的世界，共同呵护好人类赖以生存的地球家园。欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

            ATCC 15973醋酸醋杆菌冻干管打管说明书！一、菌种简介平台编号：bio-53021规格：冻干物拉丁属名：Acetobacter aceti菌株名称：醋酸醋杆菌其他编号：ATCC15973。= BCRC11688 =CCUG18122 =CIP103111 =DSM3508=LMG1504 =NBRC4818 =NCIMB8621培养基编号：119培养温度：30培养时间：24-48 小时用途：模式菌株。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。二、培养基醋酸菌培养基Glucose (葡萄糖) 10g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 15g无水酒精 20ml Agar (琼脂) 20g Distilled water (蒸馏水) 1000ml不必调 PH，无水酒精在培养基灭菌后冷却至 50-60°C 加入。 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。 四、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用 0.1-0.2ml 的培养液或无菌水溶解，接种在 2 个斜面上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面或平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。五、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

                 NIH:OVCAR-3人卵巢癌细胞的应用！一、背景NIH:OVCAR-3人卵巢癌细胞是由T·C·Hamilton在1982年建系，取材于患进行性卵巢腺癌病人的恶性腹水。NIH:OVCAR-3[OVCAR3]细胞与107细胞联合皮下接种5只裸鼠21天后全部成瘤。NIH:OVCAR-3[OVCAR3]细胞是研究卵巢癌药物抗性的一个合适的模型系统且由于存在激素受体，这对于激素治疗的评估或许是有用的。二、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备RPMI-1640培养基；优质胎牛血清，20%；双抗，1%。2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。三、应用用于GSK-3β稳定错配修复蛋白PMS2抑制卵巢癌的探索研究：检测PMS2,GSK-3β和p-GSK-3β在人卵巢癌细胞株A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3中的表达与相互关系及意义。方法：1、实时荧光定量PCR法检测PMS2和GSK-3βmRNA水平在A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3细胞及正常卵巢组织中的表达。2、Western blot免疫印迹法检测PMS2,GSK-3β和p-GSK-3β的蛋白水平在A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3细胞中的表达。3、免疫组化双染法检测卵巢组织中PMS2和p-GSK-3β的表达。4、分析PMS2与GSK-3βmRNA水平的相关性和PMS2与GSK-3β磷酸化水平（p-GSK-3β/GSK-3β）的相关性。5、MTT法检测LiCl阻断GSK-3β活性后,细胞增殖的改变。结果：1、PMS2 mRNA在A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3细胞的表达相对量分别为正常卵巢组织的74.59±41.376,1.85±0.369,50.16±30.316,1.65±0.901,3.04±0.887倍;GSK-3βmRNA在A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3细胞的表达相对量分别为正常卵巢组织的54.27±32.137,0.47±0.010,92.04±30.316,17.44±2.621,5.08±0.256倍。2、PMS2,GSK-3β和p-GSK-3β在人卵巢癌细胞株A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3中均有表达。3、PMS2和GSK-3βmRNA在人卵巢癌细胞株和正常卵巢组织中的表达呈正相关性,R=0.853,P结论：PMS2,GSK-3β和p-GSK-3β在人卵巢癌细胞株A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3中均有表达,PMS2的表达可能受GSK-3β的调控。欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                         菌种培养基的背景与应用！一、背景菌种培养基用于四环素检定中蜡样芽孢杆菌的培养(SN标准)，成分（g/L）：胰蛋白胨：10.0；牛肉浸粉：5.0；氯化钠：2.5；琼脂：14.0；pH值6.4-6.6。检验原理：胰蛋白胨提供碳源和氮源;牛肉膏提供维生素和氨基酸;琼脂是培养基的凝固剂;氯化钠能维持均衡的渗透压。用法：称取本品31.5克，加热溶解于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟备用。蜡样芽孢杆菌（学名：Bacillus cereus），又称仙人掌杆菌，是一种革兰氏阳性菌，β溶血性的杆状细菌。蜡样芽孢杆菌是兼性厌氧性。与其他芽孢杆菌相同，它会产生防御性的内芽孢。它的致病因子包括施普善（cereolysin）和磷脂酶C（Phospholipase C）。菌体细胞杆状，末端方，成短或长链，1.0～1.2×3.0～5.0微米。产芽孢，芽孢圆形或柱形，中生或近中生，1.0～1.5微米，孢囊无明显膨大。革兰氏阳性，无荚膜，运动。菌落大，表面粗糙，扁平，不规则。菌落形态：在普通琼脂平板培养基上，37℃，培养24 h，可形成圆形或近似圆形、质地软、无色素、稍有光泽的白色菌落(似蜡烛样颜色)直径5-7 mm。在M.Y.P培养基上生长更旺盛，菌落直径达8-10 mm，质地更软，挑起来呈丝状，培养时间稍长，菌落表面呈毛玻璃状，并产生红色色素。在蛋白胨酵母膏平板上菌落为灰白色，不透明，表面较粗糙，似毛玻璃状或融蜡状，菌落较大。蜡状芽胞杆菌细菌对外界有害因子抵抗力强，分布广，是典型的菌体细胞，有部分菌株能产生肠毒素，呈杆状(约1.5μm)，有色，孢子呈椭圆形，有致呕吐型和腹泻型胃肠炎肠毒素两类。二、应用用于产细菌素蜡样芽孢杆菌的筛选、鉴定及培养基优化研究：以金黄色葡萄球菌为指示菌，从土壤中分离筛选得到目的菌株，命名为XH25。在排除有机酸与过氧化氢实验以及蛋白酶K敏感试验后综合推测出菌株XH25的抑菌效果可能来源于细菌素。筛选得到的XH25菌株的各项生理生化测定结果显示：革兰氏染色试验、过氧化氢酶试验、淀粉水解试验、硝酸还原试验、酯酶试验、M.R试验、V.P试验、卵磷脂酶水解试验、酪素水解试验和糖醇类发酵试验都呈阳性，H2S试验呈阴性；再结合菌株XH25的16S rRNA分子鉴定通过序列比对分析、系统发育树的构建，鉴定出菌株XH25为蜡样芽孢杆菌。采用Plackett-Burman（简称PB）试验设计和响应面分析法（Response surface methodology，简称RSM）对菌株XH25的发酵培养基进行优化。先用Plackett-Burman试验设计筛选出对细菌素产生有显著影响的因素，确定影响细菌素产生的主要成分；然后通过最陡爬坡试验找出RSM设计的中心点；最后利用RSM分析法对培养基进行优化。优化结果表明，培养基的最优组合为：可溶性淀粉15.32g/L、硫酸铵6.02g/L、大豆蛋白胨12.5g/L、硫酸镁0.25g/L、培养基pH6.15、温度30℃时，抑菌圈直径比优化前提高了21.7%。通过模型验证试验得出实际值12.90mm与模型预测值12.76mm有很好的拟合性，说明实验准确性高。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

            缓症链球菌的培养方法与使用范围及注意事项！缓症链球菌属于草绿色链球菌的一种，属于人体正常菌群之一，分布口腔为多。此类菌群仍是感染性心内膜炎的主要病原菌。该菌可致败血症，亚急性心内膜炎；脑膜炎，此外，尚可致肺炎、心包炎、腹膜炎、唾腺炎、口面部感染、牙源性感染、中耳炎、鼻窦炎等。青霉素仍是治疗草绿色链球菌感染的首选药物。具体致病机理不是很清楚。一、菌种简介平台编号：bio-79618规格：冻干物拉丁属名：Streptococcus mitis菌种名称：缓症链球菌拉丁文名：Streptococcus mitis其他编号：ATCC 49456培养基编号：35或114培养温度：37℃用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、培养基TSA+5%脱纤维蛋白羊血（血琼脂平板）三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。四、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 五、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存.请勿长期置于室温。 六、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留；用无菌吸管吸取 0.3ml-0.5ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。

                     RM-1小鼠前列腺癌细胞的应用！一、背景RM-1小鼠前列腺癌细胞是来源小鼠前列腺癌组织的上皮细胞样贴壁细胞，生长培养基RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S，培养条件：CO2：5%，37℃。5-α-双氢睾酮可影响该细胞的生长和酸性磷酸酶的产生。该细胞不形成均一的单层而是成簇生长，所以传代的时候要反复吹打形成单个细胞；该细胞贴壁不牢，达不到汇合状态，而且会使培养基迅速变酸；传代后48h内一定要保持培养瓶静止.如果此时挪动培养瓶，会使大部分细胞从瓶底脱落。如果出现此种情况，需要重新孵育24~48h使细胞重新贴壁，细胞贴壁后可更换培养基。二、操作步骤1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养，补加培养基至6ml。2、弃去培养液，用PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次。3、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又将培养瓶倒转大约30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分散，轻敲几下培养培养瓶，细胞随即脱落下来。4、加入6-8ml完全培养基，吸出，分到新的培养瓶中。1:3~1:6传代；2~3天1次。三、应用用于雷公藤内酯醇对小鼠前列腺癌作用及其机制的研究：通过体内、体外实验，探讨方中有效抗癌成分雷公藤内酯醇对小鼠前列腺癌细胞株RM-1和小鼠前列腺癌模型的增殖抑制作用及其可能机制，以期为临床提供安全有效的抗前列腺癌药物。方法：体外实验采用小鼠前列腺癌RM-1传代细胞，用MTT实验检测TL对RM-1细胞的增殖抑制作用；用吖啶橙荧光染色检测TL对RM-1凋亡细胞形态学影响；用流式细胞术分析TL对RM-1细胞周期及凋亡峰的作用；用梯状电泳方法检测TL对RM-1细胞DNA的凋亡作用；用RT-PCR法检测TL对RM-1细胞caspase-3、bcl-2 mRNA表达水平的影响。体内实验采用C57BL／6小鼠皮下注射RM-1细胞，建立前列腺癌动物模型，检测肿瘤体积和重量计算肿瘤生长抑制率；TUNEL技术检测前列腺癌组织中凋亡细胞；免疫组化检测方法观察药物对实验动物肿瘤组织caspase-3基因及其蛋白bcl-2表达水平的影响。结果：TL（5、10、20、40、80 ng／ml）处理后RM-1细胞生长抑制率分别为9.8％、25.1％、39.2％、48.8％、53.2％，以TL（10、20 ng／ml）处理RM-1细胞12、24、36、48h后，细胞生长抑制率分别为8.4％、25.1％、36.1％、42.4％和10.2％、39.2％、50.2％、58.5％，MTT检测显示雷公藤内酯醇呈剂量和时间依赖性抑制RM-1细胞的生长。欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    麦芽汁培养基的分类与配制方法！麦芽汁培养基是一种培养基，分为固体和液体2种。一、基本信息平台编号：bio-56073规格：250g名称：麦芽汁培养基种类：分为固体和液体2种麦芽汁：150mL  琼脂：3g用途：用于霉菌和酵母菌增菌培养注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、培养基成分新鲜麦芽汁一般为10-15波林。三、培养基分类1、固体培养基麦芽汁　 150mL琼脂　3gpH　 自然（约6.4）灭菌 1.05kg/cm2，20min高温灭菌后倒平板。2、液体培养基麦芽汁 70mLpH 自然（约6.4）灭菌 1.05kg/cm2，20min麦芽汁琼脂培养基，市场上可以买的的配方如下：氯霉素Chloramphenicol.....................0.1g最终pH Final pH...........................6.0±0.2麦芽膏粉Melt extract......................130g琼脂Agar..................................15g麦芽汁培养基中加入适当的碳酸钙，并配成半固体培养基后，可以用于保存乳酸菌。四、配制方法1、用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。2、取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液，加2滴碘液，如无蓝色出现，即表示糖化完全)。3、糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清，加水20ml，调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，再过滤)。4、用波美比重计检测糖化液中糖浓度，将滤液用水稀释到10-15波林，调pH至6.4。如当地有啤酒厂，可用未经发酵，未加酒花的新鲜麦芽汁，加水稀释到10-15波林后使用。5、如配固体麦芽汁培养基时，加入2%琼脂，加热融化，补充失水。6、分装、加塞、包扎。7、高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！