RM-1小鼠前列腺癌细胞的应用！

                     RM-1小鼠前列腺癌细胞的应用！

一、背景

RM-1小鼠前列腺癌细胞是来源小鼠前列腺癌组织的上皮细胞样贴壁细胞，生长培养基RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S，培养条件：CO2：5%，37℃。

5-α-双氢睾酮可影响该细胞的生长和酸性磷酸酶的产生。该细胞不形成均一的单层而是成簇生长，所以传代的时候要反复吹打形成单个细胞；该细胞贴壁不牢，达不到汇合状态，而且会使培养基迅速变酸；传代后48h内一定要保持培养瓶静止.如果此时挪动培养瓶，会使大部分细胞从瓶底脱落。如果出现此种情况，需要重新孵育24~48h使细胞重新贴壁，细胞贴壁后可更换培养基。

二、操作步骤

1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养，补加培养基至6ml。

2、弃去培养液，用PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次。

3、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又将培养瓶倒转大约30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分散，轻敲几下培养培养瓶，细胞随即脱落下来。

4、加入6-8ml完全培养基，吸出，分到新的培养瓶中。1:3~1:6传代；2~3天1次。

三、应用

用于雷公藤内酯醇对小鼠前列腺癌作用及其机制的研究：

通过体内、体外实验，探讨方中有效抗癌成分雷公藤内酯醇对小鼠前列腺癌细胞株RM-1和小鼠前列腺癌模型的增殖抑制作用及其可能机制，以期为临床提供安全有效的抗前列腺癌药物。

方法：体外实验采用小鼠前列腺癌RM-1传代细胞，用MTT实验检测TL对RM-1细胞的增殖抑制作用；用吖啶橙荧光染色检测TL对RM-1凋亡细胞形态学影响；用流式细胞术分析TL对RM-1细胞周期及凋亡峰的作用；用梯状电泳方法检测TL对RM-1细胞DNA的凋亡作用；用RT-PCR法检测TL对RM-1细胞caspase-3、bcl-2 mRNA表达水平的影响。

体内实验采用C57BL／6小鼠皮下注射RM-1细胞，建立前列腺癌动物模型，检测肿瘤体积和重量计算肿瘤生长抑制率；TUNEL技术检测前列腺癌组织中凋亡细胞；免疫组化检测方法观察药物对实验动物肿瘤组织caspase-3基因及其蛋白bcl-2表达水平的影响。

结果：TL（5、10、20、40、80 ng／ml）处理后RM-1细胞生长抑制率分别为9.8％、25.1％、39.2％、48.8％、53.2％，以TL（10、20 ng／ml）处理RM-1细胞12、24、36、48h后，细胞生长抑制率分别为8.4％、25.1％、36.1％、42.4％和10.2％、39.2％、50.2％、58.5％，MTT检测显示雷公藤内酯醇呈剂量和时间依赖性抑制RM-1细胞的生长。

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