人结直肠腺癌细胞的培养操作步骤及应用！ 一、背景 人结直肠腺癌细胞分离自直肠原位癌。人结肠癌Caco-2细胞系在标准培养条件下汇合后，自发分化为肠上皮样细胞，是常用的肠癌细胞模型。当长到满时，细胞表现出特征性的肠上皮细胞分化。Caco-2细胞表达维甲酸结合蛋白I和维甲酸结合蛋白II，并呈角质蛋白阳性。 二、人结直肠腺癌细胞的培养 1、培养基及培养冻存条件准备： 1）准备MEM基础培养基78% 优质胎牛血清20% P/S青霉素-链霉素1% MEMNEAA非必需氨基酸1% 2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 1）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 2、细胞处理： 1）冻存细胞的复苏： 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法： 1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2、加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 三、应用 人结直肠腺癌细胞可以用于大黄附子有效成分配伍在Caco-2细胞模型上的跨膜转运研究： 研究大黄酸、大黄素、去甲乌药碱、苯甲酰乌头原碱,以及大黄酸、大黄素分别与去甲乌药碱、苯甲酰乌头原碱、乌头碱配伍后在人结直肠腺癌细胞(Caco-2)细胞模型上转运过程,并探讨其配伍机制。 方法：以大黄酸、大黄素、苯甲酰乌头原碱、去甲乌药碱在Caco-2细胞上的累积转运量还有表观渗透系数Papp值为指标,采用高效液相色谱法(HPLC)对大黄酸、大黄素、去甲乌药碱、苯甲酰乌头原碱的含量进行检测,考察大黄酸、大黄素、去甲乌药碱、苯甲酰乌头原碱在Caco-2细胞上的转运行为,以及大黄素、大黄酸、与去甲乌药碱、苯甲酰乌头原碱、乌头碱分别配伍后转运行为的变化。 通过免疫荧光PCR方法检测大黄素、大黄酸与去甲乌药碱、苯甲酰乌头原碱、乌头碱配伍后对Caco-2细胞中外排转运蛋白:乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、P-糖蛋白(Pgp)、多耐药相关蛋白(MRP2、MRP3)基因表达的影响。通过western-blot方法检测大黄素、大黄酸与去甲乌药碱、苯甲酰乌头原碱、乌头碱配伍后对Caco-2细胞中外排转运蛋白乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、P-糖蛋白(P-gp)、多耐药相关蛋白(MRP2、MRP3)蛋白表达的影响。 结果：去甲乌药碱Papp值均在1×10-7cm·s-1数量级,外排与吸收比值约为1.5,配伍大黄酸、大黄素后其Papp值均显著性上升(P 大黄素配伍苯甲酰乌头原碱后Papp值显著性上升(P 配伍大黄酸后抑制P-gp的表达;配伍大黄素后抑制Caco-2中MRP2和BCRP的表达。苯甲酰乌头原碱可以促进BCRP、MRP2的表达,抑制MRP3的表达;配伍大黄酸后,下调MRP2、BCRP的表达。大黄酸可以抑制BCRP的表达量;配伍去甲乌药碱后,MRP2的蛋白表达量上调;大黄酸配伍苯甲酰乌头原碱后,促进BCRP的表达,下调MRP3的表达。 大黄酸配伍乌头碱后,诱导MRP2、BCRP的表达。大黄素诱导了MRP3和BCRP的表达。配伍去甲乌药碱后,促进MRP2的表达。配伍苯甲酰乌头原碱后P-gp外排。配伍乌头碱后,诱导了MRP2的外排作用。 结论：大黄通过增加附子中水溶性成分和单酯型生物碱的吸收来增加附子的治疗作用,而附子通过降低大黄蒽醌的吸收来降低大黄的寒性物质基础,减轻大黄对人体的副作用。其作用机理与各个成分对外排转运蛋白P-gp、MRP2、MRP3或BCRP的抑制或诱导作用有关。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     你知道贴壁细胞的消化的具体过程有哪些？ 贴壁细胞（adherent cells），这类细胞的生长必须有可以贴附的支持物表面，细胞依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长，繁殖。 贴壁细胞在培养时要贴附于培养（瓶）器皿壁上，细胞一经贴壁就迅速铺展，然后开始有丝分裂，并很快进入对数生长期。 下面来了解贴壁细胞的消化的具体过程： 1、吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。 2、加入少量Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。 3、显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。 4、如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。 5、如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     日勾维多细菌源菌的培养方法与注意事项！ 日勾维多细菌源菌是Pluralibacter属的微生物，原产地为法国。主要用途为分类；研究，具体用途为分类学研究、抗菌防腐剂试验研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-116109规格：冻干物拉丁属名：Pluralibacter Gergoviae中文名称：日勾维多细菌源菌拉丁名称：Pluralibacter gergoviae来源历史：←自行分离收藏时间：2017-10-16原始编号：X1-1原产国：中国资源归类编码：15131122000模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：TSA培养基，28℃培养24 h，菌落黄色，圆形，凸起，光滑，湿润，边缘整齐。菌体呈杆状，0.4-0.6 μm × 1.0-2.5 μm，单个或成对排列，革兰氏阴性。具体用途：发酵普洱茶中优势菌。生物危害程度：四类培养基编号：CM0847培养基名称：胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）(CAIQ0701)培养基成分：胰蛋白胨 15.0g，大豆胨 5.0g，氯化钠 5.0g，琼脂 13.0 g，蒸馏水 1.0L，pH7.3±0.2。推荐使用商品化成品培养基。培养温度：28℃需氧类型：好氧分离基物：普洱茶（渥堆，未翻堆）采集地：云南勐海保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：发酵普洱茶中优势菌。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征双倍乳糖胆盐培养基中44.5℃培养不生长。在伊红美蓝琼脂培养基上的菌落白色至浅粉色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润。16S rRNA 基因序列号：AB004748；rpoB 基因序列号：JX425263；infB 基因序列号：JX425133；gyrB 基因序列号：JX425004；atpD 基因序列号：JX424874。 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一种）、原种（二种）和栽培种（三种）三。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 四、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。  五、注意事项1) 首次活化，用尽量少的复水液溶解，接种在 5ml 的液体培养基中，静止培养，如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；2) 经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系；7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛；9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作；10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    人表皮成纤维细胞的实验室分离方法与质量检测！ 一、产品信息平台编号：Bio-135074规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶细胞信息：人表皮成纤维细胞产品名称：人表皮成纤维细胞组织来源：皮肤组织产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞简介人表皮成纤维细胞分离自皮肤组织；皮肤组织来源包括头部、脸部、手、脚、腿、背部、腹部、包皮等体表部位皮肤，可依据需求选用；表皮位于动物皮肤的外层，由胚胎时期外胚层形成，具有抗摩擦和抗损伤的作用。表皮是皮肤的浅层结构，由复层扁平上皮构成。从基底层到表面可分为五层，即基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的表皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。 三、细胞特性1)细胞来源于手术切除的正常包皮组织。2)细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：成纤维样细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、方法简介百欧博伟实验室分离的人表皮成纤维细胞采用先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。 六、质量检测百欧博伟实验室分离的人表皮成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 七、培养信息培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等换液频率每2-3天换液一次生长特性贴壁细胞形态成纤维细胞样传代特性可传5代左右；3代以内状态最佳消化液0.25%胰蛋白酶培养条件气相：空气，95%；CO2，5%人表皮成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用普诺赛配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 用于教学和研究及饲料生产的：法夫驹形氏酵母 法夫驹形氏酵母是Komagataella属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究，具体用途为菌株为表达菌株，可用于研究代谢产物、教学实验等领域。 一、菌种简介平台编号：Bio-64213规格：冻干物拉丁属名：Komagataella Phaffii中文名称：法夫驹形氏酵母拉丁名称：Komagataella phaffii来源历史：←黑龙江省轻工科学研究院(W260) ←广州微生物所收藏时间：2007/3/5原始编号：GWY-1资源归类编码：15151100000模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产特征特性：无性繁殖；细胞为芽殖；呈椭圆形。兼性厌氧。在含50%葡萄糖的高渗培养基中能生长。在添加1%乙酸的培养基中能生长。最适pH4.5-5.0。具体用途：用于饲料生产。　生物危害程度：四类培养基编号：CM0077培养基名称：5 °Bé麦芽汁琼脂培养基成分：5°Bé麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，自然pH。培养温度：25-28℃需氧类型：好氧保存方法：真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：研究；生产；用于饲料生产。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征法夫驹形氏酵母，菌落为乳白色，圆形，无褶皱，无脊状突起，边缘平滑，细胞为椭球型，无性繁殖方式为芽殖，28S rRNA基因登陆号为KU729167.1；菌株为组氨酸缺陷型，在缺失氨基酸的MD培养基中不生长。  三、保藏条件 斜面菌种和冻干菌种应在2~8℃保存。 四、培养条件 1、培养基编号：麦芽汁琼脂：12 Brix. 麦芽汁，1.0 L；琼脂，15.0 g；自然pH。2、培养温度：25℃ 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌1-2天，酵母3天，霉菌5-7天，大型真菌7-10天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 六、打管说明1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴2-3滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.5ml左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有4~5mL液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中1-2滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至2-3代恢复活力。4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。9、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后2个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                微生物检测中常见的生物化学试验方法与操作步骤！ 一、糖类代谢试验 1、糖（醇）类发酵试验 不同细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。即使某些能发酵同样的糖（醇），但其产物也不同，有的产酸产气，有的产酸不产气，可根据这些特点来鉴别细菌。 大致可分为： 液体发酵管：无糖肉汤或蛋白胨水中，加入1%糖（醇）类指示剂，一支小玻管，经灭菌后备用。若被检细菌对营养要求较高时，则在试验前加入2%~5%无菌血清。 半固体发酵管：在液体糖（醇）发酵培养基中，加入0.3%~0.5%琼脂，溶化后分装试管，灭菌后让试管直立，使琼脂凝固，做成高层培养基，接种细菌应用接种针穿刺接种。 固体发酵管：此类培养基一般不常用，仅用于营养要求较高的某些细菌，在含糖类及5%~10%血清琼脂斜面上进行发酵试验。另外固体高层糖发酵管，可用于厌氧细菌糖发酵试验，如产气荚膜杆菌在含糖的固体高层发酵管中出现汹涌发酵（产生大量气体）。 双糖（或三糖）高层斜面发酵管：这种培养基含有葡萄糖和乳糖（或再加蔗糖），这两种糖（或三种糖）混在一起，制成高层斜面，其中葡萄糖和乳糖（或蔗糖）比例为1:10。 各种糖（醇）发酵管含糖（醇）的浓度，一般为0.5%~1%，有时可达2%。经121℃20~30min灭菌，容易水解变质，特别是在碱性溶液中更易破坏。 故糖（醇）发酵培养基常用高压蒸115℃15min灭菌。 应用的糖（醇）种类很多： 单糖：葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、木胶糖、半乳糖； 双糖：乳糖、麦芽糖、蔗糖、覃糖； 多糖：菊糖、肝糖、糊精、淀粉； 醇：甘露醇、卫矛醇、山梨醇、侧金盏花醇、肌醇、丙三醇（甘油）； 糖苷：水杨苷等。 最常用的指示剂有酚红、溴麝香草酚蓝、溴甲酚紫、酸性复红。 前两者颜色反应较敏感，但稳定性差，后二者比较稳定。特别是一些迟缓发酵的细菌，培养时间长，应用后二者指示剂。 酚红pH6.8（黄色）~pH8.4（红色） 2、甲基红试验（methyl red） 甲基红指示剂变色范围是pH4.4（红色）~pH6.2（黄色），产气肠杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸，但又很快将丙酮酸脱羧，转化成醇等物质，则培养液的pH值仍在6.2以上，故此时加入甲基红指示剂，培养液呈黄色，此为阴性对照菌。阳性对照菌是大肠埃希氏菌，呈现红色为阳性。 3、V-P试验 伏-普试验，目的是检查细菌是否能分解葡萄糖，产生乙酰甲基甲醇。 阳性对照菌是产气肠杆菌，分解葡萄糖（被检细菌接种到葡萄糖蛋白胨水中，36℃18~24h）产生丙酮酸，再将丙酮酸脱羧形成乙酰甲基甲醇，在碱性条件下（乙液-40%KOH溶液），被氧化为二乙酰，与培养基蛋白胨中精氨酸等所含的胍基结合，通常在10min内形成红色化合物。 若不显色，放置于50℃水浴2h，或放置于37℃培养箱中4h，充分摇动，观察培养液反应结果，不显红色为阴性，阴性对照菌是大肠埃希氏菌。 4、ONPG试验 邻硝基酚-β-D-半乳糖苷的缩写，利用该试剂可以检查被检细菌有无β-半乳糖苷酶和渗透酶，发酵乳糖的细菌具有这两种酶。 渗透酶将乳糖分子带入菌细胞内，而β-半乳糖苷酶可将乳糖的β-半乳糖苷链切断，产生葡萄糖和半乳糖。 迟缓发酵乳糖的细菌，缺乏渗透酶，而ONPG渗入菌细胞内，被β-半乳糖苷酶分解产生邻位硝基苯酚，一般在20~30min内显黄色，为阳性，对照菌为枸橼酸盐杆菌和亚利桑那菌。 方法：将被检细菌接种到1%的乳糖肉汤琼脂培养基上，37℃培养过夜。取菌苔接种于0.25ml生理盐水中做成悬液。加入1滴甲苯，并充分振摇，使酶释放。在悬液中再加入ONPG液0.25ml，混匀，置于37℃培养箱或水浴箱中，分别在20min和3h后观察培养液反应结果不出现黄色者为阴性，对照菌是沙门氏菌。 5、氧化发酵试验 测定糖类的氧化或发酵及糖类未被利用的代谢类型。 氧化型：细菌在分解葡萄糖过程中，必须有氧分子参加。无氧环境中不能分解葡萄糖。 发酵型：在分解葡萄糖的过程中，可以进行无氧降解。发酵型细菌无论在有氧或无氧的环境中都能分解葡萄糖。 产碱型：不分解葡萄糖的细菌。 将待检菌同时穿刺接种两支HL培养基，其中一支培养基滴加无菌的液体石蜡油，高度不少于1cm，37℃培养48h或更长，观察反应结果。 培养基变黄色为产酸。 两支培养基均产酸为发酵型细菌，仅不加石蜡的培养基产酸的是氧化型细菌，两支培养基均不变化的为产碱型细菌。 二、蛋白质、氨基酸及含氮化物代谢试验 1、苯丙氨酸脱氨酶试验 原理：某些细菌具有苯丙氨酸脱氨酶，可使苯丙氨酸脱氨形成苯丙酮酸，苯丙酮酸与三氯化铁发生螯合作用，形成绿色络合物。 方法：将被检细菌的斜面培养物（先增菌）大量移种到苯丙氨酸琼脂斜面上，37℃培养18-24h，再从斜面上滴加10%三氯化铁溶液4-5滴，使其自斜面培养物上缓缓流下，观察结果。 结果：溶液出现绿色为阳性，对照菌是变形杆菌；不变色为阴性，对照菌是产气肠杆菌。 2、脱羧酶试验 原理：某些细菌具有某种氨基酸的脱羧酶，可使氨基酸脱去羧基产生胺和二氧化碳，胺使pH值>7，此时指示剂溴麝香草酚蓝由绿色变为蓝色。 溴麝香草酚蓝酸性显黄色，碱性显紫色。 方法：将被检细菌接种到两支脱羧酶培养基中，其中一支不加氨基酸，另一支加赖氨酸/精氨酸/鸟氨酸，再在培养基上覆盖一层灭菌的液体石蜡，37℃培养18-24h，观察结果。 结果：两管培养基均含有葡萄糖，产酸，溴麝香草酚蓝由蓝变黄。含有氨基酸的一管出现脱羧基降解作用，产生碱性反应，溴麝香草酚蓝再由黄变蓝，为阳性。 鸟氨酸阴性对照菌为阴沟肠杆菌，显黄色。 3、靛基质（吲哚）试验 原理：某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质（吲哚），靛基质与对二甲氨基苯甲醛结合，形成玫瑰红色化合物。 方法：将被检细菌接种到胰蛋白胨水培养基中，37℃培养24-48h后，滴加数滴试剂于培养基液面，轻轻摇动（不可剧烈振动），观察结果。 结果：出现红色为阳性，对照菌是大肠埃希氏菌；出现黄色为阴性，对照菌是产气肠杆菌。 4、硫化氢试验 原理：某些细菌能分解含硫的氨基酸（胱氨酸、半胱氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐反应，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。 方法：将被检细菌以接种针穿刺接种于醋酸铅或双糖铁培养基（乳糖+葡萄糖）中，37℃培养24h，观察结果。 结果：有黑色出现为阳性。 说明：在硫化氢试验的培养基加入硫代硫酸钠的作用是还原作用，以保持培养基处于还原状态，是产生的硫化氢不被氧化。 产硫化氢较少的菌种可在试管口放置醋酸铅试条。 5、尿素酶试验 原理：某些细菌具有尿素酶，在含有尿素的培养基中，分解尿素产生氨，使培养基呈碱性，此时培养基中的酚红指示剂显红色。 方法：将被检细菌接种的尿素固体斜面培养基上，36℃培养4h检查一次，再每天检查一次，培养5天，观察结果。 结果：出现红色为阳性，对照菌为变形杆菌；变色为阴性，对照菌是大肠埃希氏菌。 三、枸橼酸盐利用试验 原理：枸橼酸盐培养基系一综合性培养基，其中枸橼酸钠为碳的唯一来源，磷酸二氢铵是氮的唯一来源。有的细菌能利用枸橼酸钠为碳源，能在培养基上生长，并且能分解枸橼酸盐，最后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝色。不能利用枸橼酸盐为碳源的细菌在该培养基上不生长，培养基不变色。 方法：将被检细菌的菌悬液（挑取菌苔后，洗至生理盐水中）接种到枸橼酸盐培养基上，37℃培养24h，观察结果。 结果：培养基上有菌生长，培养基变为深蓝色为阳性，对照菌是产气肠杆菌；若培养基不变色，则继续培养7天，培养基仍不变色者为阴性，对照菌为大肠杆菌。 四、呼吸酶类试验 1、氧化酶试验 原理：某些细菌具有氧化酶，能将二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺试剂氧化（先使细胞色素C氧化，电子传递体）成红色醌类化合物。 方法：取白色洁净滤纸蘸取待测菌落，加盐酸二甲基对苯二胺溶液1滴；Ewing氏改进法，再加α-萘酚溶液1滴。 结果：阳性者立即出现粉红色，并逐渐加深，变为淡紫色，再到深紫色，Ewing氏改进法阳性于0.5min内呈现鲜蓝色，对照菌为绿脓杆菌（铜绿假单细胞菌）；阴性者颜色无变化，Ewing氏法阴性为2min内不变色，对照菌为大肠杆菌。 1%盐酸二甲基对苯二胺溶液要避免接触含铁物质，防止出现假阳性反应。此试剂应少量新鲜配制，于冰箱内避光保存，也可购置氧化酶试条。 该实验用于分辨革兰氏阴性杆菌中的肠杆菌科（阴性）与弧菌科（阳性）。 2、触酶活力试验 原理：具有触酶的细菌能催化过氧化酶，放出生态氧，继而形成氧分子，出现气泡。 方法：取3%过氧化氢0.5ml，滴加到不含血液的被检细菌琼脂培养物上，或滴加到不含血液的肉汤培养物中，观察结果。 结果：培养物出现气泡者为阳性。 说明：过氧化氢浓度过高（30%）会产生气泡出现假阳性；血液中含有触酶，容易出现假阳性。 3、硝酸盐还原试验 原理：某些细菌能将培养基中的硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐与醋酸作用生成亚硝酸，亚硝酸与试剂中的对氨基苯磺酸作用生成重氮苯磺酸，再与α-萘胺结合，生成N-α-萘胺偶氮苯磺酸（红色）。 方法：将被检细菌接种于硝酸盐培养基中，37℃培养1~4天，每天吸取培养物2ml，加甲液（对氨基苯磺酸0.8g，5mol/L醋酸100ml）和乙液（α-萘胺0.5g，5mol/L醋酸100ml）各数滴，同时以为接种细菌的培养基作对照，观察结果。 结果：出现红色为阳性。 说明：亚硝酸盐在自然界分布很广，容易污染试剂，硝酸盐不纯或保管不妥也可能含有亚硝酸盐，因此必须做空白对照；繁殖迅速而还原硝酸盐能力强的细菌如果培养时间过久，可能将亚硝酸盐全部分解为氨和氮，出现假阴性反应，故需每天试验，空白对照。 五、毒性酶类试验 1、溶血试验 原理：某些细菌在代谢过程中，产生溶血素，能使人或动物的红细胞发生溶解。 方法： 1）平板法：将被检细菌接种到血液琼脂平板培养基上，37℃培养24h。 2）试管法：取被检细菌16-18h肉汤培养物若干，加等量经生理盐水洗涤三次的2%羊红细胞悬液，置于37℃水浴箱中，30min后观察结果。 结果： 1）平板法：若菌落周围出现透明的溶血环，为完全溶血（β溶血），菌落周围出现绿色溶血环，为不完全溶血（α溶血），无溶血环为不溶血（γ溶血）。 2）试管法：液体澄清透明为溶血，阳性。 2、链激酶试验 原理：A群链球菌在代谢过程中，产生链激酶，能激活血液中的纤维蛋白酶原为溶纤维蛋白酶，促使纤维蛋白凝块溶解。 方法：取血浆0.2ml，放入灭菌小试管中，加无菌生理盐水0.8ml，再加被检细菌18-24h肉汤培养物0.5ml，充分混匀后，再加入0.25%氯化钙水溶液0.25ml，置于37℃水浴中，观察结果。 结果：10min内血浆先凝固，而后又开始溶解，溶解时间与链激酶含量成正比。链激酶含量多时，20min内凝固的血浆完全溶解。如无变化，应在水浴中持续2h、24h，分别观察结果。血浆凝块完全溶解者为阳性，时间越短表明毒性越强。24h血凝块仍不溶解者为阴性。 3、血浆凝固酶试验 原理：某些细菌能产生血浆凝固酶，分两种，一种结合在细菌细胞壁上，遇到血浆直接作用于血浆的纤维蛋白，使细菌凝成颗粒状，使用玻片法；另一种分泌到细菌细胞外，称为游离血浆凝固酶，能使血浆中的纤维蛋白原变为纤维蛋白，使用试管法试验。 方法： 1）玻片法：取生理盐水2滴，分别滴于载玻片上，以接种环挑取被检细菌菌落，放在2滴生理盐水中，研磨成浓菌悬液。在1滴悬液中加1滴未稀释的血浆，另一滴加入1滴生理盐水作为对照，迅速摇动，观察结果。 2）试管法：取3支小试管，每支加1:4稀释的新鲜血浆0.5ml，其中1支加被检细菌生理盐水悬液或肉汤培养物0.5ml，另一支加阳性菌株生理盐水悬液或肉汤培养物0.5ml作阳性对照，再一支加生理盐水或肉汤培养液0.5ml作阴性对照。3支试管置于37℃水浴箱中，每隔30min观察一次结果。 结果： 1）玻片法：若在加血浆的1滴中迅速出现凝固颗粒，在加生理盐水对照的1滴中未出现凝固颗粒，为阳性；若超过2min才开始出现凝固颗粒者不作阳性（多为非致病性）。 2）试管法：6h内，若试验管和阳性对照管出现凝固，阴性对照管不出现凝固，为阳性；多数阳性细菌在0.5-1h内发生凝固。 六、嗜盐试验 原理：在高于3%的氯化钠培养基上不生长或生长不好，但能在无言培养基上生长的，称为非嗜盐菌，如肠杆菌科。能在3%-6%氯化钠培养基上生长，但在无盐培养基上不生长，称为嗜盐菌，如副溶血性弧菌。在无盐和高盐培养基上均能生长，但长得不茂盛，称为耐盐菌，如葡萄球菌、铜绿假单细胞菌。 方法：取被检细菌分别接种到1支无盐葡萄糖蛋白胨水和一支5%-6%氯化钠葡萄糖蛋白胨水中，37℃培养6-24h，观察生长情况。 结果：培养物出现浑浊生长为阳性。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

              嗜热乳酸链球菌的保藏条件与培养方法及注意事项！ 嗜热链球菌被认为是“公认安全性（GRAS）”成分，广泛用于生产一些重要的发酵乳制品，包括酸奶和奶酪（如瑞士、林堡干酪）。嗜热链球菌也具有一些功能活性，比如生产胞外多糖、细菌素和维生素。 一、菌种简介平台编号：Bio-51842规格：冻干物拉丁属名：Streptococus Thermophilus Orla-Jensen菌株名称：嗜热乳酸链球菌其他编号：IFFI 6038培养基编号：5,44培养温度：50℃培养时间：48 小时用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基MRS 培养基酪蛋白胨 10 克 牛肉浸取物 10 克酵母提取液 5.0 克 葡萄糖 20 克乙酸钠 5.0 克 柠檬酸二胺 2.0 克吐温 80 1.0 克 磷酸氢二钾 2.0 克七水硫酸镁 0.2 克 七水硫酸锰 0.05 克碳酸钙 20.0 克 琼脂 20.0 克蒸馏水 1.0 升 PH 6.8如果要配制液体培养基，则不用加入碳酸钙和琼脂 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。甘油请置于-80 度。  四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 五、注意事项1) 首次活化，用尽量少的复水液溶解，接种在 5ml 的液体培养基中，静止培养，如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；2) 经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系；7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛；9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作；10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 六、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃)：是适用范围*的微生物保存法。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   大鼠心脏微血管内皮细胞的技术背景与应用领域！ 一、细胞简介平台编号：Bio-73706规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：原代细胞细胞名称：大鼠心脏微血管内皮细胞培养条件：原代细胞取组织现分用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述心脏是脊椎动物身体中最重要的一个器官，主要功能是提供压力，把血液运行至身体各个部分。心脏的作用是推动血液流动，向器官、组织提供充足的血流量，以供应氧和各种营养物质，并带走代谢的终产物（如二氧化碳、无机盐、尿素和尿酸等），使细胞维持正常的代谢和功能。微血管内皮细胞呈单层覆盖于微血管表面，构成血管内外物质交换的一种重要屏障，是循环血流动力和血液中危险因素的主要靶点。 三、细胞特性1）组织来源于实验动物的正常心脏组织。2）细胞鉴定：vWF免疫荧光染色为阳性。3）经鉴定细胞纯度高于90%。4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5）细胞生长方式：多角形细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、技术背景大鼠心脏微血管内皮细胞分离自心脏组织；心脏是脊椎动物身体中最重要的一个器官，主要功能是为血液流动提供压力，把血液运行至身体各个部分。心脏由心肌构成，左心房、左心室、右心房、右心室四个腔组成。左右心房之间和左右心室之间均由间隔隔开，故互不相通，心房与心室之间有瓣膜（房室瓣），这些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流。心脏的作用是推动血液流动，向器官、组织提供充足的血流量，以供应氧和各种营养物质，并带走代谢的终产物（如二氧化碳、无机盐、尿素和尿酸等），使细胞维持正常的代谢和功能。心脏微血管内皮细胞是组成心脏微血管腔面单层扁平上皮样细胞，它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等有重要作用，在心脏血管疾病的发病机制中有重要病理生理学意义。近年来大量研究表明，心肌微血管内皮细胞的功能和病理改变直接影响心肌细胞功能，也是诸多毒素、炎症因子及病毒等重要靶位，其作为体外研究的细胞模型在心肌缺血-再灌注发病机制和细胞间旁分泌细胞生长因子研究中起着重要作用。大鼠心脏微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经CD31/vWF免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。大鼠心脏微血管内皮细胞原代培养：用1～4d sd大鼠全身经体积分数75%的酒精消毒后，仰卧位固定于无菌操作台上(以下步骤均为无菌操作。开胸，剥离心包膜，取心脏下1/3，置于盛有预冷(4℃pbs的小瓶中，洗尽血液，浸入体积分数70%的乙醇中10s以灭活心外膜和心内膜内皮细胞。预冷pbs冲洗，剪碎心肌组织，加入10倍体积的质量分数0.1%的胰蛋白酶，37℃消化5min。轻轻吹打，静置1min后吸取上层液体(为分离出的内皮细胞(余下组织块用质量分数0.1%胰蛋白酶再消化5min，再收集上层液体用预冷的含体积分数15%小牛血清的培养基灭活残留胰酶活性。1000r/min，4℃离心10min收集细胞。将细胞重悬于含体积分数20%小牛血清m199培养基(内含100u/l青霉素、100mg链霉素、10mmol/l hepes、2mmol/l l_谷氨酰胺，200目筛网过滤，得到细胞混悬液，接种于培养瓶中，37℃培养30min以使成纤维细胞贴壁(重复此操作可提高细胞纯度。转移细胞悬液，混匀后计数，根据实验目的不同，调整细胞密度至合适浓度，接种于培养瓶、96孔培养板或放有盖玻片的6孔培养板内(预先用质量分数1.5%的明胶处理，放入37℃，体积分数5%的co2培养箱中孵育6h，去除未粘附细胞，再放入m199(质量浓度50mg/l肝素、质量浓度15mg/l ecgs、体积分数20%的胎牛血清完全培养基中培养。co2培养箱37℃培养，24h后换液1次，以后每2～3d换液1次，直至长成细胞单层，用质量分数0.125%的胰蛋白酶消化备用。细胞存活率用锥虫蓝染色判断。 七、应用领域大鼠脑微血管内皮细胞原代培养可用于：（1）血脑屏障的研究；（2）脑血管疾病的病理生理及分子生物学研究；（3）新药筛选；（4）脑微血管内皮细胞生理生化及药理学研究。制备多组大鼠心脏微血管内皮细胞脂多糖损伤模型,通过显微镜对细胞形态进行观察,为后续实验提供形态学依据。探讨乌司他丁(UTI,Ulinastatin)预处理对LPS诱导损伤心肌微血管内皮细胞相关炎性反应的影响。选取大鼠心肌组织,用PBS液洗除血液,同时对大鼠心脏细胞进行培养,直至长成细胞单层,选第3代内皮细胞,0.25%胰蛋白酶消化后将上述细胞分成6组:(1)空白对照组:加入无血清培养基;(2)模型组1:加入含0.01μg/mlLPS的无血清培养基作用24h;(3)模型组2:加入含0.1μg/mlLPS的无血清培养基作用24h;(4)模型组3:加入含1μg/mlLPS的无血清培养基作用24h;(5)模型组4:加入含10μg/ml LPS的无血清培养基作用24h;(6)模型组5:加入含100μg/mlLPS的无血清培养基作用24h。在倒置显微镜下、扫描显微镜及透射显微镜下观察孵育前和孵育24h后内皮细胞形态学改变情况。对于大鼠心脏微血管内皮细胞脂多糖损伤模型进行继续培养干预:1)对照组不做任何处理;2)阿托法他汀(10000u/ml)预处理组;3)低浓度(5000u/ml)乌司他丁预处理组;4)中浓度(10000u/ml)乌司他丁预处理组;5)高浓度(20000u/ml)乌司他丁预处理组。通过免疫组化以及Western blot等检测方法对处理前后各组细胞进行炎性因子检测,具体指标包括白细胞介素(IL-1)、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞自噬相关蛋白Atg5,Beclinl和LC等在细胞内的表达情况;后期进行数据总结和分析;通过Western blot法检测各组内皮细胞中Bcl-2、bax蛋白表达水平的变化;MTT法检测各组细胞活力;流式技术检测各组细胞凋亡率。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    阴城假单胞菌的形态特征与优势特点及培养方法！  阴城假单胞菌是Pseudomonas属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-02391提供形式：冻干物拉丁属名：Pseudomonas Umsongensis中文译名：阴城假单胞菌拉丁学名：Pseudomonas umsongensis原始编号：D0389菌株来源：←中国科学院微生物研究所保藏人：周培瑾直接来源国家：中国保藏时间：9/1/2006生物危害：四类模式菌株：非模式菌株培养温度：4-25℃培养基：0007    采集地点：新疆一号冰川采集国家：中国用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征阴城假单胞菌，直或微弯的杆菌，不呈螺旋状。许多种能积累聚β羟基丁酸盐为储藏物质。没有菌柄也没有鞘。不产芽孢。革兰氏阴性，以单极毛或数根极毛运动，罕见不运动者。有的种还具短波长的侧毛。需氧，进行严格的呼吸型代谢，以氧为最终电子受体。在某些情况下，以硝酸盐为替代的电子受体进行厌氧呼吸。 三、产品优势1、产品质量稳定，是为科研和生产提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装，冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法，保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序，确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业，疾控中心、质检局、出入境、药检局等等，得到广泛好评。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、培养方法1、平板划线分离法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。3、上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的，但平板划线分离法不能对菌落计数，而稀释涂布平板法培养过程复杂，对平板的要求比较高，可参照以下步骤：a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃，向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均匀，然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿，轻轻摇动培养皿，使培养基溶液均匀分布在培养皿底部，待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g，放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇15～20min混合均匀，用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培养基表面的中央位置，用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 AKR小鼠食管癌细胞收到后的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-133398规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：AKR细胞名称：AKR小鼠食管癌细胞产品类别：小鼠细胞系生长特性：贴壁生长培养体系：DMEM+10%FBS细胞形态：上皮细胞样传代方法：消化3-5分钟。1:2传代，3天内可长满。 培养体系：温度：37℃ ，气相：95%空气 ，5%CO2 细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 冻存条件：无血清细胞冻存液 用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞收到后的处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基） 三、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。 四、注意事项1、细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等；2、细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果；3、常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片）；4、干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染；5、细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力；6、细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   知识分享：湿热灭菌柜的相关验证及日常管理！ 百欧博伟生物：湿热灭菌是灭菌方法中比较常见和通用的一种灭菌方法，其中常用的湿热灭菌设备就是脉动真空灭菌器。 脉动真空灭菌器其灭菌原理是通过真空泵借助水的流动抽出灭菌柜室内冷空气，使其处于负压状态，然后输入饱和纯蒸气，如此反复，在高温和高压力的作用下使微生物蛋白质变性凝固而灭活达到灭菌要求。灭菌后，抽真空使灭菌物品迅速干燥。具有方便、省时、省力、总灭菌时间短、灭菌彻底可靠、物品干燥等特点。 湿热灭菌柜相关法规 1、无菌药品附录第六十三条 任何灭菌工艺在投入使用前，必须采用物理检测手段和生物指示剂，验证其对产品或物品的适用性及所有部位达到了灭菌效果。 2、无菌药品附录第六十四条 应当定期对灭菌工艺的有效性进行再验证（每年至少一次）。设备重大变更后，须进行再验证。应当保存再验证记录。 3、无菌药品附录第六十五条 应当通过验证确认灭菌设备腔室内待灭菌产品和物品的装载方式。 4、无菌药品附录第六十七条 应当按照供应商的要求保存和使用生物指示剂，并通过阳性对照试验确认其质量。使用生物指示剂时，应当采取严格管理措施，防止由此所致的微生物污染。 《中国药典（20 版）》第四部 1421：灭菌法 灭菌工艺的验证是无菌保证的必要条件。灭菌工艺经验证后，方可交付正式使用。验证内容包括： (1)撰写验证方案及制定评估标准。 (2)确认设备的设计与选型。 (3)确认灭菌设 备资料齐全、安装正确，并能正常运行。 (4)确认灭菌设备、 关键控制和记录系统能在规定的参数范围内正常运行。 (5)采 用被灭菌物品或模拟物品按预定灭菌程序进行重复试验，确 认各关键工艺参数符合预定标准，确定经灭菌物品的无菌保证水平符合规定。  (6)汇总并完善各种文件和记录，撰写验证报告。灭菌工艺的日常监控: 同时应持续评估灭菌工艺的有效性及被灭菌物品的安全性和稳定性，并建立相应的变更和偏差控制程序，确保灭菌工艺持续处于受控状态。灭菌工艺应定期进行再验证。当灭菌设备或程序发生变更(包括灭菌物品装载方式和数量的改变）时，应进行重新验证。 湿热灭菌（过度灭菌法） 对耐热性良好的物品，一般使用过度杀灭法（the overkill method）。使用过度杀灭法的目标是确保达到一定程度的无菌保证，而不管装载物的实际负载生物的数量多少和耐热性如何。 湿热灭菌（残存概率法） 不耐热产品/物品的灭菌使用过度杀灭法可能导致产品不可接受的降解。因此灭菌程序的确认就需研究产品的微生物数量和耐热性。一旦确定了微生物初始数量和耐热性，就可以设计出一个能达到P N S U为10-6的灭菌程序。 湿热灭菌柜验证 湿热灭菌验证的目的：就是通过一系列验证试验提供足够的数据和文件依据，从而找到有效合理的灭菌参数， 并把已经验证过的灭菌设备和灭菌工艺参数应用到药品生产的除菌过程中去，以证明用于药品生产过程中 的每一台蒸汽灭菌设备都能起到灭菌的效果，并且对不同灭菌物品的灭菌过程和灭菌效果具有可靠性和重现性。 3Q（安装确认、运行确认、性能确认） 安装确认(IQ)是对供应商所供技术资料的核查， 对设备、备品备件的检查验收以及设备的安装检查，以确证其是否符合GMP、厂商的标准及企业特定技术要求的一系列活动。 运行确认(OQ)试验系指通过按草拟的标准操作规程(SOP)进行单机或系统的运行试验，俗称试车。运行确认是证明设备或系统各项技术参数能否达到设定要求的一系列活动。 性能确认（PQ） 一、真空泄漏检测 启动检漏程序，设备开始抽真空，当内室压力达到限定值，平衡5分钟，开始保压计时，到设置的时间后（900s），如果保压正常，打印机会自动打印“保压结果正常”，如果有漏气现象，泄漏限度超过设定值，则程序会中断，出现报警，并打印“保压结果失败”。 二、BD测试 通过BD测试包确认灭菌腔体内去除冷空气能力。 注意事项：1、 确认BD包在有效期内并且性状良好未受潮变形。 2、开启程序前可先排除管道内的冷凝水，以防止湿包。 三、空载热分布和负载热穿透 （1）有线温度验证系统 （2）空载热分布要求： 灭菌时段内，平均温度应≥121.0℃；最热点和最冷点温度之差≤2.0℃。 （3）负载热穿透 要求：F0值＞12 布置温度探头和指示剂时尽可能在较为难灭菌的物品内部布点，如：硅胶软管内部，过滤器内部，工具盒内部等）。一般来说，生物指示剂应该贴近温度探头放置，以便来评估生物热致死率与基于热输入而预测得出的热致死率之间的关系。当确定了难灭菌的物品后，就必须特别注意这些难灭菌物品（过滤器、填充材料、泵等）的灭菌情况。此外，还必须特别注意紧紧包裹的地方、厚厚打 包的物品、考虑安全而系得很紧的材料、非常长的管子等等。 生物指示剂以及温度探头的位置应该被记录在验证记录中。根据验证中的装载形式，用来指导并应该记录后续生产的所有批次的装载情况。 湿热灭菌柜验证-后期输出 1、验证结果均符合要求后，会整理验证数据出具报告并审核批准，确定最终的灭菌相关参数，装载物品及数量； 2、将灭菌参数，装载物品及数量输出给车间，并配以装载模式图以供参考； 3、灭菌柜使用情况进行一定的跟踪，设备有无异常，灭菌装载是否合理和方便使用。 湿热灭菌柜日常控制 1、每批装载灭菌物品都会被记录，并有相应的温度记录及温度曲线； 2、每批灭菌物品放入灭菌指示带，用以区分已灭菌物品和未灭菌物品，以防混淆； 3、每天灭菌前都会进行保压测试，确保灭菌柜密封性； 4、设备有三级密码，防止操作员随意更改相关参数； 5、设备异常或维修会进行记录，温度控制探头的维修或更换会对探头进行温度确认； 6、新增灭菌物品会进行该物品装载验证，验证合格后方能正常灭菌； 7、灭菌柜每年进行周期性确认。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 树干毕赤酵母的培养条件与注意事项及打管说明！  树干毕赤酵母是Pichia属的微生物，原产地为中国。白色至奶油色的奶油样菌落，营养体细胞出芽生殖，有复杂的假菌丝。主要用途为研究，具体用途为共生微生物/鱼类共生菌。 一、菌种简介平台编号：Bio-06941提供形式：冻干物拉丁属名：Pichia Stipitis中文译名：树干毕赤酵母拉丁学名：Pichia stipitis原始编号：NBRC 1687菌株来源：←NBRC保藏人：周宇光直接来源国家：日本保藏时间：11/30/2006其他保藏编号：ATCC 58376 =CBS 5773 =JCM 10742 =NRRL y-7124生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株；Ethanol，production from xylose。培养温度：25℃培养基：0312    其他培养条件分离源：昆虫幼虫采集国家：法国用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 6-10℃冷藏。  三、培养条件营养肉汁琼脂蛋白胨 10.0g 牛肉浸取物 3.0g NaCl 5.0g 琼脂 15.0g蒸馏水 1.0L PH 7.0 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2 支，中国微生物菌种查询网提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  人子宫内膜癌细胞的复苏与传代及冻存操作说明！ 一、背景 人子宫内膜癌细胞（HEC-1-B细胞）是由H·Kuramoto于1968年分离的HEC-1-A细胞的亚株，不同于HEC-A-1的是，HEC-1-B细胞在培养第135天到190天之间表现出稳定的生长周期，且恢复扁平，与亲本细胞系相比更具铺路石样，HEC-1-B细胞的染色体对是亲本细胞的两倍。 细胞可以在裸鼠中形成与子宫内膜癌（II级）一致的中等分化的腺癌，可以在类固醇治疗的仓鼠中成瘤。HEC-1-B细胞可以用于3D细胞培养和癌症研究，也是一种合适的转染宿主。HEC-1-B是一种常用的人类子宫内膜癌细胞系，它来源于正常子宫内膜组织，具有较高的增殖能力和侵袭性。在医学研究中，HEC-1-B常用于体外实验，以研究肿瘤生长、侵袭和转移机制，以及药物筛选等。 二、人子宫内膜癌细胞复苏、传代、冻存操作 （一）人子宫内膜癌细胞复苏 ①新制100mm平皿1个，含12mL上述培养液； ②人子宫内膜癌细胞冻存管从液氮或-80℃中取出，37℃水浴1~2min,待完全溶解后尽快移入安全柜复苏； ③用无菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，顺时针摇匀； ④放入（37℃，5%CO2）培养箱中，过夜换液，2-4天长满。 注意：建议复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩，避免冻存管处于温差较大情况下发生爆炸造成人员伤害。 （二）人子宫内膜癌细胞传代 将人子宫内膜癌细胞旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入2mL（/100mm皿/T25瓶）胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA），在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，人子宫内膜癌细胞刚有脱落时，吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约1min取出。传代用6mL培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可1:2传代。 （三）人子宫内膜癌细胞冻存 冻存则用3mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为3支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存。 三、应用 人子宫内膜癌细胞可以用于Bmi-1基因在调控人子宫内膜癌细胞HEC-1B辐射耐受性中作用及机制的研究： 研究旨在探讨Bmi-1基因在电离辐射诱导人子宫内膜癌细胞HEC-1B增殖、凋亡、侵袭和迁移中的作用。 方法：采用qRT-PCR检测子宫内膜癌组织及癌旁组织中Bmi-1mRNA表达,IHC染色检测子宫内膜癌组织及癌旁组织中Bmi-1阳性表达率。将HEC-1B细胞随机分为4组:空白组(Control组)、辐射对照组(Radiation group)、Bmi-1过表达组(Bmi-1-OE group)和Bmi-1敲低组(Bmi-1-KD group)。CCK-8检测各组细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western Blot检测各组细胞MMP2、MMP7、MMP9、Rock1、RhoA、p53、p21、Bcl-2蛋白的表达。 结果：子宫内膜癌组织中Bmi-1 mRNA的表达及组织阳性表达均明显高于癌旁组织。经电离辐射后Bmi-1 mRNA水平降低。电离辐射后,与辐射对照组相比,Bmi-1过表达组HEC-1B细胞经电离辐射后的增殖、细胞迁移和侵袭能力明显增强(p Bmi-1过表达组细胞凋亡率显著降低,而Bmi-1敲低组细胞凋亡率显著升高(p 结论：Bmi-1在子宫内膜癌组织中高表达,抑制Bmi-1表达可降低电离辐射后HEC-1B细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡的发生,为肿瘤的临床放疗提供了新的见解。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                肠出血性大肠杆菌的感染源及控制和预防方法！ 一、肠出血性大肠杆菌（EHEC） 大肠杆菌（E.coli）是一种在人和温血动物肠道内常见的细菌。大多数大肠杆菌菌株无害。然而，一些菌株，例如肠出血性大肠杆菌（EHEC）可引起严重的食源性疾病。它主要通过食用被污染的食物传染给人类，这些食物如生的或烹调不彻底的绞碎肉制品和原料奶。它作为一个公共卫生问题的重要性得到承认是在1982年继美利坚合众国的一次该病暴发之后。 肠出血性大肠杆菌产生的毒素称为志贺样毒素或类志贺毒素，这是因为它们与志贺氏痢疾杆菌产生的毒素相似。肠出血性大肠杆菌可在7℃-50℃的温度中生长，其最佳生长温度为37℃。一些出血性大肠杆菌可在pH值达到4.4和最低水活度（Aw）为0.95的食物中生长。通过烹调食物，使食物的所有部分至少达到70℃以上时可杀灭该菌。O157:H7大肠杆菌是与公共卫生有关的最重要的出血性大肠杆菌的血清类型；然而在散在和暴发中也经常涉及其它血清类型。 二、肠出血性大肠杆菌引起的疾病 肠出血性大肠杆菌引起的疾病症状包括腹部绞痛和腹泻，一些可能发展为血性腹泻（出血性大肠炎）。还可能出现发烧和呕吐。潜伏期3至8天，平均为3至4天。大多数病人10天内康复，但是有少数病人（特别是幼儿和老年人）的染病可能发展为威胁生命的疾病，例如溶血尿毒综合症（HUS）。溶血尿毒综合症的特点是急性肾衰竭、溶血性贫血和血小板减少。据估计，10%的肠出血性大肠杆菌感染者可发展为溶血尿毒综合症，死亡率为3%至5%。总体来说，溶血尿毒综合症是幼儿急性肾衰竭的最通常原因。25%的溶血尿毒综合症病人可发生神经并发症（例如癫痫发作、中风和昏迷），在大约50%的幸存者中发生通常是轻型的慢性肾病。 不同年龄组的肠出血性大肠杆菌感染的发病不尽相同，所报的最高发病率发生在15岁以下的儿童中（美利坚合众国每10万中占0.7）。63%至85%的是由于通过食物感染病菌。肠出血性大肠杆菌发展为溶血尿毒综合症的百分比在散在（3%-7%）和与暴发相关的（20%或更多）之间有所不同。从流行病学的角度来看，偶然暴发一般存在有散在的背景。一些暴发涉及大量，例如1996年日本发生的情况，该次暴发与学校午餐中食用污染的萝卜缨有关，造成9451人发病。有关发展中国家这一情况的数据有限，因为没有对这种病菌进行常规监测。 三、感染源 大多数现有信息均关系到O157:H7血清型，因为从生物化学方面它容易与其它大肠杆菌菌株相区别。这一病菌的贮主看来主要是家畜和其它反刍动物，例如骆驼。它主要通过食用污染的食物，例如未经烹调或烹煮不透的绞碎肉制品和原料奶向人类传播。受粪便污染的水和其它食物以及食物制备期间的交叉污染（与牛肉和其它肉制品、受污染的板面和厨房用具）也将导致感染。涉及O157:H7大肠杆菌暴发的食物包括未煎透的汉堡包、风干肠、未经高温消毒的新鲜苹果酒、酸奶、奶酪和牛奶。越来越多的暴发与食用水果和蔬菜（芽苗菜、生菜、凉拌卷心菜、色拉）有关，污染可能是由于种植或处理期间的某一阶段接触到家畜或野生动物的粪便。也从水源（池塘、溪水）、井和水槽中分离出肠出血性大肠杆菌，并发现它们在粪便和水槽污垢中能够存活数月。有关于来自被污染的饮用水和游憩用水的水源性传播的报告。 人际接触是通过口粪传播的一个重要方式。有报告不症状带菌者的情况，这些人没有疾病的临床症状但是能够感染其他人。出血性大肠杆菌可在成人排泄物中存在大约一周或少于一周，但是在儿童中存在的时间更长。访问农场或其它公众可能直接接触耕畜的地方也被确定为感染出血性大肠杆菌的一个重要危险因素。 四、控制和预防方法 预防感染需要在食品链的所有阶段采取控制措施，从农场的农业生产到加工、制造以及在商业机构和家庭环境中对食品的制作。现有的资料不足以为减少生畜发生肠出血性大肠杆菌感染提出有关农场采取具体干预措施的建议。 然而，国家级开展的风险评估已指出，通过各种减少绞碎牛肉风险的策略（例如筛检屠宰前动物以减少将大量病菌带入屠宰场）可减少的数量。良好的卫生屠宰规范能够减少粪便对屠体的污染，但是不能保证制品不带有出血性大肠杆菌。向屠宰厂工人和参与生肉生产的人进行食品处理卫生教育对于将微生物污染降低到最低水平至关重要。 同样，预防牧场原料奶的污染实际上并不可能，但是应对牧场工人进行良好卫生规范原则方面的教育，以便将污染降低到最低水平。消灭食品中的出血性大肠杆菌的唯一有效方法是进行杀菌处理，例如加热（如烹煮或加热杀菌）或照射。一些国家实施一项政策，即如果发现生绞碎牛肉含有O157:H7大肠杆菌，则将被视为已被污染。  北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 人BURKITT'S淋巴瘤细胞的培养操作步骤及应用！ 一、背景 人BURKITT'S淋巴瘤细胞是由E·Klein和G·Klein于1967年5月从一位16岁黑人男性Burkitt's淋巴瘤患者建立的。Daudi细胞表面免疫球蛋白阳性(sIg+)、Β2-微球蛋白阴性，EBNA阳性，并有衣壳抗原VCA；Daudi细胞携带EB病毒。Daudi细胞是典型的B淋巴母细胞，广泛应用于白血病发生机理的研究。 二、人BURKITT'S淋巴瘤细胞培养操作 1)复苏人BURKITT'S淋巴瘤细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后轻轻吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)人BURKITT'S淋巴瘤细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心3-5min分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3)人BURKITT'S淋巴瘤细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 人BURKITT'S淋巴瘤细胞可以用于DAPT影响Burkitt's淋巴瘤细胞株（Raji细胞）的Notch信号通路了解Raji细胞内Notch信号通路激活情况;探索DAPT对Raji细胞生存的影响及其对Raji细胞Notch分子的作用;探讨在Raji细胞中Notch分子对NF-κB信号通路的影响,进一步认识Notch和NF-κB信号通路之间的相互作用。 方法：以正常人外周血单个核细胞(PBMC)为阴性对照,T-ALL细胞株Jurkat细胞为阳性对照,利用Western blot检测Raji细胞Notch1 transmembrane subunit(NTM)蛋白水平,q RT-PCR检测Notch1下游靶分子Hes1的转录水平;不同浓度DAPT作用Raji细胞后,利用CCK-8法检测Raji细胞增殖情况;DAPT作用Raji细胞48h后,利用流式细胞术检测细胞周期及其细胞凋亡情况;DAPT作用Raji细胞48h后,利用q RT-PCR检测Notch1、Hes1、c-myc、p65、p50 m RNA的改变,利用Western blot检测NTM蛋白水平变化,Rel A(p65)、p50在胞浆和胞核蛋白水平变化。 结果： 1、Western blot结果显示,相比正常人外周血单个核细胞(PMBC),Raji细胞可检测到较高的NTM蛋白,但二者均低于阳性对照Jurkat细胞;q RT-PCR结果提示,与正常对照相比,Raji细胞和Jurkat细胞内表达高水平的Hes1 m RNA; 2、DAPT作用Raji细胞后,其增殖受到抑制,且随着浓度的增加和作用时间的延长,抑制作用明显增强; 3、DAPT能促进Raji细胞凋亡比例增多; 4、DAPT作用后,Raji细胞增殖阻滞在S期; 5、DAPT作用Raji细胞后,Western blot结果显示NTM的蛋白水平轻度升高; 6、DAPT作用Raji细胞后,胞核内的p50和p65蛋白水平均增高,c-myc的m RNA水平增高。 结论： 1、Raji细胞表达较高的NTM蛋白和Hes1 m RNA; 2、DAPT可抑制Raji细胞增殖、促进细胞凋亡和促使细胞增殖阻滞于S期; 3、上述现象可能的机制是DAPT抑制NTM蛋白的酶切从而下调Hes1 m RNA的表达,同时增强NF-κB的活性。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   热葡糖苷酶芽孢杆菌的性质与用途及生产工艺！ 热葡糖苷酶芽孢杆菌，Geobacillus属的微生物，芽孢菌纲革兰氏阳性杆菌。主要用途为分类学研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-33404规格：培养物拉丁属名：Geobacillus Thurmoglucosidasius中文名称：热葡糖苷酶芽孢杆菌拉丁属名：Geobacillus种名加词：thurmoglucosidasius (55℃)收藏时间*：2007-1-19来源历史：中国林业科学研究院林业研究所原产国：中国资源归类编码：15131311103模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；教学生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：转基因银腺杨根圈土壤采集地区：河北培养基信息：培养基编号: 141 培养基名称: BP琼脂培养温度：28-30资源保护类型：培养物保藏方法：定期移植法共享方式：资源交换性共享提供形式：斜面培养物实物状态：有实物用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、菌种的培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。  五、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

               羊睾丸内膜成纤维细胞的培养操作步骤及注意事项！  一、细胞简介平台编号：Bio-69688规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：原代细胞细胞名称：羊睾丸内膜成纤维细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞培养操作步骤1、用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 2、将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 3、在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时; 4、将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中; 5、将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。  三、细胞培养的优点1、研究的对象是活细胞在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。2、研究条件可以人为控制pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。3、研究的样本可以达到比较均一性通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用*化等方法使细胞达到纯化。4、研究内容便于观察、检测和记录采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备  记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。5、研究的范围比较广泛应用的学科领域较为宽广,如细胞学、免疫学、学、生物化学、遗传学、分子生物学等; 适用的对象范围广,从低等动物到高等动物,一种动物的不同年龄阶段以及不同组织,都可进行有针对性的研究。6、研究的费用相对较经济可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。 四、操作流程1、主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。2、细胞的复苏培养传代及冻存:（1）细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。（2）细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。3、细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。4、细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。5、细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。 6、生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线。 五、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。5、客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术售后服务电话，我们随时给予解答。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

               嗜热一氧化碳链霉菌的培养与保藏方法及实验内容！  嗜热一氧化碳链霉菌是Streptomyces属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类；研究，具体用途为可作抗菌活性及抗肿瘤活性研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-115193规格：冻干物拉丁属名：Streptomyces Thermocarboxydus菌株名称：嗜热一氧化碳链霉菌中文名称：Streptomyces thermocarboxydus拉丁名称：Streptomyces thermocarboxydus来源历史：委托保藏（华南农业大学）收藏时间：2020-09-16 00:00:00.0原始编号：H2原产国：中国模式菌株：否生物安全级别：一级培养基编号：2培养温度：30℃培养时间：24-48h需氧类型：好氧分离基物：**采集地：**保存方法：冷冻干燥管保藏用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、微生物培养方法1、平板划线分离法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。3、上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的，但平板划线分离法不能对菌落计数，而稀释涂布平板法培养过程复杂，对平板的要求比较高，可参照以下步骤：a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃，向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均匀，然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿，轻轻摇动培养皿，使培养基溶液均匀分布在培养皿底部，待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g，放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇15～20min混合均匀，用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培养基表面的中央位置，用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃)：是适用范围最广的微生物保存法。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   小鼠淋巴细胞白血病的培养条件与步骤及其应用！ 一、背景 小鼠淋巴细胞白血病是由G.Moore等（1966）和P.Himmelfarb等（1967）报导。此细胞系广泛用于化学因子和天然产物细胞毒活性的常规筛选。接种裸鼠在21天内100%（5/5）成瘤。 二、小鼠淋巴细胞白血病细胞培养条件 1、大小鼠淋巴细胞白血病细胞培养基：RPMI-1640培养基（不含Hepes）+10%胎牛血清+1%双抗+800ng/ml Taxol 2、温度：37.0°C 3、气体:空气95%，CO2 5% 三、小鼠淋巴细胞白血病细胞培养步骤 （一）小鼠淋巴细胞白血病细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 （二）小鼠淋巴细胞白血病细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于小鼠淋巴细胞白血病细胞，传代可参考以下方法： 1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗小鼠淋巴细胞白血病细胞1-2次。 2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。 3、轻轻吹打小鼠淋巴细胞白血病细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4、按5-6ml/瓶补加培养液，将JeKo-1细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。 （四）小鼠淋巴细胞白血病细胞冻存： 1、小鼠淋巴细胞白血病细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待小鼠淋巴细胞白血病细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、用适量的冻存液重悬小鼠淋巴细胞白血病细胞，并放置于冻存管中； 4、先将小鼠淋巴细胞白血病细胞冻存管放置于-20℃1.5h，然后将其移入-80℃。 四、应用 小鼠淋巴细胞白血病可以用于AS2O3对L1210细胞增殖、凋亡及自噬的影响： 将As2O3应用于治疗M3型急性早幼粒细胞白血病(APL),之后又发展到治疗维甲酸治疗缓解后复发的M3型患者,完全缓解率达93%以上,已被公认为M3型白血病治疗首选药物。一般认为As2O3治疗APL的主要机制是诱导白血病细胞凋亡,很少考虑其对细胞自噬的影响。 本研究从As2O3对L1210细胞增殖、凋亡及自噬的影响,探讨其抗白血病的更可能的隐藏机制。本研究采用MTT法及Brdu-Elisa法测定不同浓度As2O3对L1210细胞增殖的影响,流式细胞术及AO/EB双染法检测细胞凋亡,AO染色及MDC染色检测细胞自噬,免疫印迹法检测增殖相关蛋白PCNA、凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、自噬相关蛋白LC3B的表达。 另用苯诱导的小鼠再生障碍性贫血模型检测As2O3是否能刺激骨髓细胞的造血功能。 细胞实验结果显示:As2O3对L1210白血病细胞呈剂量、时间依赖性生长抑制作用,24h、48h、72h半数抑制浓度(IC50)分别为11.61μmol/L±0.05、3.34μmol/L±0.03、0.13μmol/L±0.08。As2O3作用24h,细胞凋亡率随着As2O3浓度的升高而升高,5、10、20μmol/L的凋亡率分别为26.52%±0.02、30.99%±0.06、74.48%±0.05。AO/EB双染法可观察到细胞形态发生明显变化,如细胞核浓缩、凋亡细胞表面膜出泡、体积变小、细胞破裂并出现凋亡小体等形态学特征,并呈剂量依赖性。AO染色及MDC染色可观察到自噬阳性显色,且药物浓度越高,阳性率越高。 Western-blot结果显示:As2O3能上调自噬相关蛋白LC3B、促凋亡蛋白BAX的表达水平,使细胞增殖相关蛋白PCNA、抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达下降,并程剂量依赖性。体内实验表明,As2O3能使再障小鼠外周血细胞数量、骨髓细胞数量、网织红细胞绝对值、血红蛋白含量增高,改善肝、肾组织的损伤情况。 综上所述,As2O3通过诱导L1210细胞凋亡及自噬的产生来达到治疗淋巴细胞白血病,能刺激再障小鼠骨髓细胞的造血功能。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 实验室培养皿的分类与清洁及使用注意事项！ 百欧博伟生物：鉴于培养皿多功能的特性，它们是实验室中最常见的设备之一。它不仅为细菌，酵母，霉菌和病毒的生长提供了绝佳的环境，而且还有其他的用途。如何清洁、使用，我们一起来看看吧！ 一、培养皿是什么 培养皿是一种用于微生物或细胞培养的实验室器皿，由一个平面圆盘状的底和一个盖组成，培养皿材质基本上分为两类，主要为塑料和玻璃的，通常玻璃的可以用于植物材料、微生物培养和动物细胞的贴壁培养也可能用到。塑料的是聚乙烯材料的，适合实验室接种、划线、分离细菌的操作，也可以用于植物材料的培养。 它最初由在德国生物学家罗伯特·科赫手下工作的细菌学家朱利斯·理查德·佩特里(Julius Richard Petri，1852-1921)于1887年设计，故又称为"佩特里皿"。培养皿质地脆弱、易碎，故在清洗及拿放时应小心谨慎、轻拿轻放。使用完毕的培养皿最好及时清洗干净，存放在安全、固定的位置，防止损坏、摔坏。 培养皿分为：60mm、100mm、150mm三个尺寸。 二、培养皿的清洁 1、浸泡：新的或用过的玻璃器皿要先用清水浸泡，软化和溶解附着物。新玻璃器皿使用前得先用自来水简单刷洗，然后用5%盐酸浸泡过夜；用过的玻璃器皿往往附有大量蛋白质和油脂，干涸后不易刷洗掉，故用后应立即浸入清水中备刷洗。 2、刷洗：将浸泡后的玻璃器皿放到洗涤剂水中，用软毛刷反复刷洗。不要留死角，并防止破坏器皿表面的光洁度。将刷洗干净的玻璃器皿洗净、晾干，备浸酸。 3、浸酸：浸酸是将上述器皿浸泡到清洁液中，又称酸液，通过酸液的强氧化作用清除器皿表面的可能残留物质。浸酸不应少于六小时，一般过夜或更长。放取器皿要小心。 4、冲洗：刷洗和浸酸后的器皿都必须用水充分冲洗，浸酸后器皿是否冲洗的干净，直接影响到细胞培养的成败。手工洗涤浸酸后的器皿，每件器皿至少要反复“注水－倒空”15次以上，最后用重蒸水洗2－3次，晾干或烘干后包装备用。 5、一次性使用的塑料培养皿一般出厂时就已射线灭菌或者化学灭菌。 三、培养皿的分类 1、根据培养皿用途的不同可分为细胞培养皿和细菌培养皿。 2、根据制造材料的不同分为塑料培养皿和玻璃培养皿，但进口培养皿和一次性培养皿都是塑料材料。 3、根据大小的不同通常可分为直径为35mm，60mm，90mm。150mm培养皿。 4、根据分隔的不同又可分为2分隔培养皿，3分隔培养皿等。 5、培养皿材质基本上分为两类，主要为塑料和玻璃的，玻璃的可以用于植物材料、微生物培养和动物细胞的贴壁培养也可能用到。塑料的可能是聚乙烯材料的，有一次性的和多次使用的，适合实验室接种、划线、分离细菌的操作，可以用于植物材料的培养。 四、培养皿使用注意事宜 1、使用前经过清洁消毒，培养皿清洁与否对工作影响较大，可影响培养基的酸碱度，若有某些化学药品的存在，会抑制细菌生长。 2、新购的培养皿应先用热水冲洗，再置于质量分数为1%或2%的盐酸溶液中浸泡数小时，使游离碱性物质除去，再用蒸馏水冲洗2次。 3、若要培养细菌，再用高压蒸气(一般6.8*10的5次方Pa高压蒸气)，120℃的温度下30min灭菌，置室温中干燥，或用干热灭菌，就是将培养皿置于烘箱内，温度控制在120℃左右的情况下维持2h，即可杀死细菌的胞牙。 4、经过消毒的培养皿才能接种培养使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     梅花状青霉的培养方法与注意事项及打管说明！ 梅花状青霉，半知菌纲杯霉科生物。主要用于教学，研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-11081规格：冻干物拉丁属名：Penicillium Herquei中文译名：梅花状青霉拉丁学名：Penicillium herquei原始编号：C11130菌株来源：←中国科学院微生物研究所保藏人：王龙直接来源国家：中国保藏时间：9/22/2000生物危害：四类模式菌株：非模式菌株培养温度：25℃培养基：0013    其他培养条件分离源：土壤采集地点：广西凭祥市采集国家：中国用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请放-20°C 保存。甘油请置于-80°C。  三、培养基麦芽汁琼脂 112Brix.麦芽汁 1.0 L 琼脂 15.0 g 自然 PH13 号培养基或用下列培养基代替葡萄糖 1% 蛋白胨 1% 酵母提取物 0.5% 琼脂 2% 四、注意事项1、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。2、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。3、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。4、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。  五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3 滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2支，单位所提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。冻干管打开后需一次用完，不能留存。3、另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。4、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 小鼠脂肪干细胞的背景与应用及使用方法！ 一、背景 小鼠脂肪干细胞分离自脂肪组织；脂肪组织主要由大量群集的脂肪细胞构成，聚集成团的脂肪细胞由薄层疏松结缔组织分隔成小叶；贮存的脂肪，在需要时可迅速分解成甘油和脂肪酸，经血液输送到各组织以供利用。它们影响胰岛素敏感性、血压水平、内皮功能、纤溶活动及炎症反应，参与多种重要病理生理过程；脂肪组织已由过去单纯作为能量储存的器官而成为一个极其重要的内分泌系统。脂肪干细胞(ADSCs)是一种具有多向分化潜能的干细胞，主要恢复组织细胞的修复功能，促进细胞的再生，恢复年轻面容的同时，身体机能也得到充分改善，有效改善亚健康、早衰等疾病，由内而外真正的有效抵抗衰老。 小鼠脂肪干细胞具有很多优点：①具有自我更新及多向分化的潜能；②来源充足；③对供区的创伤较小；④获得率及体外扩增速率高。脂肪干细胞是目前被广泛应用于组织工程领域中理想的种子细胞。 二、小鼠脂肪干细胞使用方法 1、收到细胞后，请按照以下方法进行操作： 取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置4-6小时或过夜，以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。 2、小鼠脂肪干细胞传代： 1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2）添加0.125%胰蛋白酶消化液约2ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1500rpm/min，离心5min； 3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养； 4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。 3、小鼠脂肪干细胞冻存： 1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2）添加0.125%胰蛋白酶消化液约2ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后轻轻吹打细胞使之脱落，再加入完全培养液终止消化，然后将悬液转移至15ml离心管中，1500rpm/min，离心5min； 3）用适当量的冻存液（基础培养基：FBS：DMSO=7:2:1）重悬细胞，并放置于冻存管中； 4）先将细胞冻存管放置于-20℃1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。 4、小鼠脂肪干细胞复苏： 1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2）将冻存管中的细胞移至15ml无菌离心管中，滴加入完全培养液5ml混匀细胞，然后将细胞悬液转移至适当面积大小的培养皿中； 3）放置于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养； 4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。 三、应用 小鼠脂肪干细胞可以用于促进脂肪干细胞移植后存活和自体脂肪移植存活的研究： 壳聚糖支架负载SHH和CM-Dil标记的脂肪干细胞移植后存活分化研究： 目的：观察SHH、壳聚糖支架联合或分别使用对体内移植的脂肪干细胞存活和分化的影响。 方法：将健康C57BL/6小鼠随机分为A组(PBS+ADSCs)、B组(SHH+ADSCs)、C组(壳聚糖+ADSCs)、D组(壳聚糖+SHH+ADSCs)。将各组混合物分别注射到小鼠背部皮下。术后1、2、4、8周处死小鼠,通过对移植组织一般观察、荧光显微镜观察、HE染色、免疫组化染色、TUNEL染色来评价移植细胞存活分化的情况。[结果]术后八周,壳聚糖支架完全降解,大体观察、HE染色、免疫组化染色、TUNEL凋亡染色均说明壳聚糖支架同时搭载SHH和ADSCs脂肪干细胞存活率较高,血管新生增加,效果均优于A、B、C三组。 结论：壳聚糖支架同时负载SHH和ADSCs可有效促进干细胞存活,显著增加血管组织数量。 第二部分硫化氢提升小鼠脂肪移植存活率的研究： 目的：探讨提高血硫化氢(hydrogensulfide,H2S)浓度是否可以提高自体脂肪移植的存活率。 方法：选取18只6周龄健康BALB/c小鼠,将其随机分为3组.即空白组(单纯颗粒脂肪)、H2S组(单纯颗粒脂肪)、SHH(Sonichedgehog,SHH)组(颗粒脂肪混合SHH,混合后SHH浓度为500μg/L),每组6只。将各组混合物注射入BALB/c小鼠背部皮下,H2S组术后每日腹腔注射硫氢化钠(sodium hydrosulfide,NaHS)溶液50μmol/kg。术后1、2、4周处死小鼠,通过对手术取出的移植组织包块进行一般观察、流式细胞仪检测、HE染色、免疫组化染色来评价移植组织存活及血管新生的情况。 结果：大体观察、annexin V-FITC/Pi细胞凋亡实验流式结果显示第一周凋亡率SHH组低于H2S组,H2S组低于空白组,具有统计学意义(P 结论：提高血H2S浓度可以有效抑制移植组织细胞凋亡坏死,促进血管新生。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    急性髓系细胞白血病细胞的应用及培养操作规程！  一、背景 急性髓系细胞白血病细胞由H.P.Koeffler和D.W.Golde建立。骨髓抽自一个59岁的患有红白血病而后又发展成急性骨髓原性白血病的男性白人。KG1细胞在形态上类似急性髓原白血病，表现为明显的多形化，骨髓母细胞和骨髓细胞占优势。少量细胞是成熟的粒细胞，也有微量的巨噬细胞和嗜曙红细胞。 二、急性髓系细胞白血病细胞培养操作规程 1、急性髓系细胞白血病细胞培养基及培养冻存条件准备： 1）急性髓系细胞白血病细胞完全培养基：IMDM+20%FBS++1%双抗 2）急性髓系细胞白血病细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80% 3）急性髓系细胞白血病细胞冻存液：70%IMDM，20%血清，10%DMSO，现用现配。 2、急性髓系细胞白血病细胞处理： 1）复苏急性髓系细胞白血病细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入5mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入培养瓶中培养。 2）急性髓系细胞白血病细胞传代：当细胞密度达到1X106/mL时即进行传代培养 1.将培养瓶中细胞轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液。 2.按照2-4X105/mL细胞量密度用新鲜培养基重悬细胞，按照上述推荐接种密度将5mL新鲜培养液移入到T-25培养瓶中或15mL新鲜培养液移入到T-75培养瓶中培养。 3.每间隔2-3天对细胞进行换液或传代培养。 3）急性髓系细胞白血病细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。悬浮细胞直接计数后离心，用70%IMDM+20%FBS+10%DMSO冻存液重悬细胞沉淀，按每1ml的数量分配到冻存管中 三、应用 急性髓系细胞白血病细胞可以用于基于RNA-Seq技术探讨三氧化二砷对人急性髓系白血病细胞（KG-1a）基因表达的影响： 研究三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对急性髓系白血病KG-1a细胞增殖,周期和凋亡的影响,并且利用RNA-Seq技术筛选与三氧化二砷作用密切相关的应答基因,为阐明三氧化二砷的作用机制提供实验证据。 方法： 1、采用CCK-8法检测ATO对KG-1a细胞增殖的影响。 2、采用流式细胞术检测ATO对KG-1a细胞凋亡的影响。 3、采用流式细胞术检测ATO对KG-1a细胞周期的影响。 4、采用RNA-Seq技术获取ATO 2μmol/L组和control组的差异基因(DEGs)。 5、采用GO及KEGG进行生物功能富集分析。 6、利用String、Cytoscape构建DEGs的蛋白互作网络并筛选Hub gene; 7、采用荧光定量PCR技术验证m RNA水平表达情况； 8、采用蛋白印迹技术验证蛋白水平表达情况。 结果： 1、CCK-8结果显示ATO浓度在3μmol/L以下,不同浓度组间抑制率差异具有统计学意义(P值均 2、流式细胞术检测凋亡的结果显示,当ATO浓度在1.5μmol/L-3μmol/L之间,加药组细胞的凋亡率和对照组进行比较,差异具有统计学意义(P 3、流式细胞术检测细胞周期的结果表明,周期分布的变化主要集中在G2/M期。随着ATO浓度的增加,G2/M期细胞所占比例呈现上升趋势,和对照组相比差异具有统计学意义(P 4、经RNA-Seq分析,筛选到的差异基因共有5371个,上调的有2666个,下调的有2705个。 5、GO富集结果显示,上调的差异基因主要参与以下生物学过程:对未折叠蛋白的反应和对拓扑错误蛋白的反应,粒细胞活化以及介导的免疫反应,解毒过程,自噬以及自噬的调节等过程;下调的差异基因富集到的生物学过程条目主要涉及核糖核酸蛋白复合体生物发生,DNA复制,DNA生物合成,甲基化,细胞周期G1/S相转变,通过端粒酶进行端粒维护等过程。 6、KEGG富集的结果显示,上调的差异基因主要参与以下信号通路:吞噬体,细胞色素P450对外来物质的代谢作用,溶酶体,过氧化物酶体,谷胱甘肽代谢,氨基糖和核苷酸糖代谢,矿物质吸收,自噬,化学致癌作用,PPAR通路等相关信号通路;下调的差异基因主要参与真核生物中的核糖体生成,嘌呤及嘧啶代谢,RNA转运,细胞周期,剪接体,人T细胞白血病病毒Ⅰ型感染,DNA复制,RNA聚合酶,TGF-β通路等相关通路。 7、PPI互作网络结果显示,核心网络节点基因有MYC、MCM7和PCNA。 8、荧光定量PCR结果表明,在KG-1a细胞和其他三种AML细胞株中,差异基因(MYC、MCM7、PCNA、BCL2L1、CCNE1、BAX、BAD、CDKN1A、CDKN1C和CDKN3)m RNA的表达水平和RNA-seq的结果具有一致性。 9、蛋白印迹实验结果表明,在KG-1a细胞和其他三种AML细胞株中,MYC、MCM7、PCNA、BCL2L1、BAX、BAD、P21和P57蛋白的表达水平和RNA-seq的结果具有一致性。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   白松露菌的生长环境与分布范围及功效用途！ 一、菌种简介白松露是一种块菌类蘑菇，学名为大块菌Tuber magnatum。它产于意大利，被世人抬举，只出现于拍卖会及传媒头条新闻。 由于珍贵，有白色钻石之称。白松露菌是食物的调味料，要生吃，免煮，因为最有用的是白松露菌的香甜味，似蒜头的浓郁香味，遇火会走味。白松露菌于1950年首次被发现，之后更成为宴会中的佳肴。纽约苏富比拍卖行2014年12月6日举行世界最大的白松露菌拍卖会，这块重达1.89公斤的白松露菌以6万美元低价拍出。在中国，白松露生长较少，主要生长以黑松露为主，分布在四川、云南一带。四川省攀枝花市盐边县是以黑松露闻名的城市，当地饮食不少以黑松露入菜，代表菜品有黑松露炖鸡。 二、发现由于珍贵，有白色钻石之称。白松露菌于1950年首次被发现，之后更成为宴会中的佳肴。到目前为止，只在意大利和巴尔干半岛的克罗地亚发现过白松露。色泽为轻微的金色，浅褐色（米色）或者是淡棕色，并且带有棕褐色或者奶白色的斑块或者细小的纹理。气味介于大蒜和最好的parmesan cheese之间。大小不等，小的有高尔夫球那么大，大的就好似苹果了。在好的年份，白松露的世界产量也只有3吨，相对于年产量约35吨的黑松露，可想而知其珍贵程度。上世纪五六十年代，白松露王被聪明的意大利松露商人作为礼品，赠送给全世界最赫赫有名的人物，比如丘吉尔、玛丽莲梦露、希区柯克、帕瓦罗蒂和戈尔巴乔夫。明星光环加上白松露的神奇效应，让白松露的身价倍增，使之一下跃升为顶级的国际食材。如今，一克两百元的价格，比2004年前发现它时的价格涨了二十五倍还多。 三、生长松露喜欢碱性的石灰土，土壤粗松且易排水透气，夏天生长期时需要下雨，需一点水分但不能太多，它也怕春天时下又大又长的雨；因为松露无法自己进行光合作用来制造生长用的碳水化合物，因此必须和橡树的根须共生存活，利用橡树的根须来吸取养分，因此，松露的生长范围一般都在林木聚集的树丛间。也因此，松露的人工栽培更为不易，如在橡树根部植上松露菌丝，在7至10年后，幸运的话，就有收成松露的可能。过熟的松露会在土里解体腐烂，释出孢子，发芽长成菌丝，遇到橡树根须后产生共生长大。由于松露对于生长环境非常挑剔，只要阳光、水量或土壤的酸碱值稍有变化就无法生长，这也是为何松露如此稀有的缘故。 四、分布中国亦有白松露产出，主要集中在云南、四川周边地带。中国食用价值较高的白松露主要分为两种，相比欧产白松露个体略小，但在白松露特有的气味上并没有太大差距，成熟的白松露其品质依然上乘。早期的国产白松露因为大量抢占欧洲市场，被法国种植协会所排斥，因此在采购时出口价位较低，但随着世界白松露产量逐渐降低，其价格更是逐年快速上扬。中国“块菌学家”刘培贵教授在中国西南的野外考察中发现了大量尚未报道描述过的白块菌类群，结合形态解剖学和分子系统学的研究，初步鉴定为5个新分类群。“这些白块菌类群具不同的香味，其中不乏具有特殊怡人香味的类群。”刘培贵教授表示，这一发现可能改写块菌类起源于北美或西欧以及块菌起源和分化中心的学说，同时也表明我国白块菌类群具有巨大的经济价值和开发潜力。“要知道，白松露比黑松露更加珍稀和昂贵，过去只发现在意大利及克罗地亚的北部有生长，如今在云南发现大量的白块菌类群，这具有重大的经济意义。 五、世界纪录世界上最昂贵的食用菌，每公斤价格高达3000美元：生长在地下一英尺左右，它们只能在受过训练的狗的帮助下才能找到。价格略有不同，取决于季节的好坏。 六、吃法白松露菌是食物的调味料，要生吃，免煮，因为最有用的是白松露菌的香甜味，似蒜头的浓郁香味，遇火会走味的。清洗并切割后的白松露　由于白松露菌散发着一股带有蒜头味的浓郁香气，意大利平民喜欢用来伴着芝士片或面包同吃，用于菜式之上则有助提升食物的香气及味道。由于只能靠具有认可牌照的狗只以灵敏的嗅觉挖掘，并且为保持鲜度，挖掘后只可存放约十天，致令白松露菌身价不菲。在欧美地区，它就如鹅肝酱和鱼子酱般高贵，每克售价约需100港元，比起法国著名的黑菌，要贵上四倍。白松露菌一般重30至40克，外表色褐粗糙，质地坚硬。掘出后把表面泥土擦净便可以了，不必清洗，为保持鲜味，最好于两星期内食用。 七、味道松露本身吃起来并无特别的味道，但因为散发着特殊的气味，自古便有许多人为之着迷。1825年时法国著名美食家布里亚-萨瓦兰（JeanAnthelmeBrillat-Savarin）在其著作《味觉生理学》（PhysiologieduGoût）中便盛赞松露为「厨房的钻石」。欧洲人将松露与鱼子酱、鹅肝并列「世界三大珍馐」，属于高贵食材之一，特别是法国产的黑松露（Tuber melanosporumVitt.）与意大利产的白松露评价最高。食用松露，不能加热，也不能大口咀嚼。它更像一种香料，用专业刀具刨成极薄的片儿，现刨现吃，每次只需撒些碎屑在寻常菜品上，便能起到斗转星移、翻天覆地的效果。白松露的味道及气味被形容为世上独一无二，事实是，白松露的气味的确非文笔所能形容。”意大利名厨Carlo Cracco说，白松露有如乌托邦，“虽然知道却描摹不出，可以察觉却无法咀嚼，虽然靠近，却抓不住它的精魂”。可并不是所有的人都对白松露奇妙的气味买账，也有人就形容它的味道难闻得就像“刺鼻的大蒜”。 八、餐桌世界各地均有出产不同品种的松露，英国有红纹黑松露、西班牙有紫松露等。但论罕有及美味程度，则以法国黑松露及意大利白松露最为突出。还没有人工养殖的松露出现，只有野生的。每年11月为采松露最佳月份，寻找松露过程中，意大利人会利用“松露犬”凭气味找出松露踪迹，然后再作挖掘。法国人则爱用“松露猪”，并且指定是母猪，因为黑松露发出的气味近似公猪发情，可惜“寻松猪”的职业道德不高，常借工作之便偷嘴，故法国人也转用“寻松狗”代劳。一只受过训练的“寻松狗”，可卖到2.7万港元。意大利白松露菌是举世闻名的珍贵美食，有“餐桌上的钻石”之称，吸引着世界美食家的味蕾。每年秋冬季都是白松露菌产期，主要产自意大利及克罗地亚北部。今次这颗“世纪白松露菌”是产自意大利托斯卡纳(Tuscany)，重达1.5公斤，是半个世纪以来出土最大的白松露菌，体积仅次于1954年发现的重2.5公斤的超级白松露菌。 九、传说传说中，松露是闪电的女儿。古希腊与罗马人相信松露有壮阳的神奇功效，这又给松露平添一层神秘魔幻色彩。“可以吃的白钻石”、“天堂的味道……”这些都是用来形容白松露的。白色的松露是世界上最昂贵的食物之一。白松露与钻石一样，在未被加工前外表粗糙、笨重，但一经雕琢，它所展现的内在则像美钻一般璀璨。大理石般的纹路，象牙色的花纹及沁人心肺的醉人香气能给人以强烈的感官刺激。其实，松露是一种天然真菌类植物，主要生长在橡树须根部附近的泥土下。但奇特的是，松露无法人工养殖，并且要找到松露相当困难，只有受过严格训练的雌性的猪和狗才能嗅得出来。据说，奥妙在于松露中含有阿尔法男性荷尔蒙。人们认为正是这种味道引导雌性动物，使其误以为在追踪自己的异性伴侣。 十、传奇松露之于美食，正像劳斯莱斯之于汽车，范思哲之于时装，香奈尔5号之于香水一样，代表着这世上最昂贵的奢侈。集令人咋舌的价格、神秘魔幻的传说和如沐甘霖的味道于一身的松露，一直是世界各国豪客争相追逐的对象，他们不惜一掷千金以亲“芳泽”。在著名的白松露主要产区意大利的托斯卡纳小镇，意大利第一座松露博物馆将于13日正式开馆迎客，向游客讲述松露的传奇故事。主题博物馆这座以松露为主题的博物馆设立在意大利一座建于13世纪的城堡里。创办方特意邀请了一位药剂师，一位植物学家和一位大厨一起参与这个主题博物馆的创建。博物馆利用多媒体技术，用展品、录像、互动游戏等多种方式，向每个参观者讲述松露的历史并再现了现代寻找采集松露的场景。在众多展览项目中，“香气展”是创办方别出心裁并引以为傲的一个展项。在这个环节中，参观者能品味到几十种不同品种松露芬芳馥郁又各具特色香气。正如托斯卡纳镇财政长官弗兰奇尼所说，“松露对我们来说不仅仅是一种美食，它是我们文化的一部分……这不仅是一个主题博物馆，这还将是一场感官盛宴！”。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 产酸克雷伯氏菌的储存与培养方法及打管说明书！ 产酸克雷伯氏菌是Klebsiella属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；教学。 一、菌种简介平台编号：Bio-85068规格：冻干粉拉丁属名：Klebsiella Oxytoca中文名称：产酸克雷伯氏菌拉丁名称：Klebsiella oxytoca其它保藏中心编号：=DSM 5175=ATCC 13182=IAM 14201=JCM 1665来源历史：←DSMZ←ATCC收藏时间：2016/6/15原始编号：479-2原产国：美国资源归类编码：15131122108模式菌株：模式菌株主要用途：分类；研究特征特性：双倍乳糖胆盐培养基中44.5℃培养不生长。在伊红美蓝琼脂培养基上的菌落浅粉色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润。DNA 杂交参照菌株。具体用途：分类学研究。生物危害程度：三类培养基编号：CM0002培养基名称：营养肉汁琼脂培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：37℃需氧类型：好氧分离基物：扁桃体保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：分类学研究。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征产酸克雷伯氏菌，革兰氏染色为阴性（G－）；正常条件下可利用L组氨酸、D丝氨酸、L丝氨酸、尿苷、胸苷、甘油、D丙氨酸、L丙氨酸、L天门冬酰胺等碳源，但不利用N乙酰D半乳糖胺、D葡萄糖胺酸、α羟丁酸、β羟丁酸、γ羟丁酸、2,3丁二醇等。  三、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。 四、培养条件1、培养基编号：CM00022、培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入 5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。推荐使用商品化成品培养基。3、需氧类型：好氧4、培养温度：37℃ 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 六、打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。9、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   麻疹孪生球菌的生物介绍与培养方法及注意事项！ 麻疹孪生球菌心内膜炎属少见。麻疹孪生球菌为G+球菌，为链球菌属，兼有需氧及厌氧双重性，是人体口咽及肠道中共生菌丛中的一种，为条件致病菌，但其发病机制及转归尚不清楚，麻疹孪生球菌引起心包炎、左心房黏液瘤已有报道。 一、菌种简介平台编号：Bio-67914规格：冻干物拉丁属名：Gemella Morbillorum菌株名称：麻疹孪生球菌其他编号：ATCC 27824=JCM 12968培养基编号：116培养温度：37℃,厌氧用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基TSA+5%脱纤维羊血（建议购买市面上成品血平板培养） 三、保藏条件斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存。请勿长期置于室温。 四、生物介绍它是一种“细菌”感染的阴道炎症，不是真菌、病毒。麻疹孪生球菌属孪生球菌属.为革兰阳性兼性厌氧双球菌。麻疹孪生球菌感染的很少。最好做个痰菌培养。 五、小儿败血症麻疹孪生球菌属孪生球菌属，包括溶血孪生球菌和1998年Collins报道的柏格孪生球菌也属孪生球菌。均为革兰阳性兼性厌氧双球菌，成双排列，少有四联、短链状排列，氧化酶试验、触酶试验阴性。鉴别试验:麻疹孪生球菌在血平板上没有溶血环，APPA、GAT阳性;溶血孪生球菌在血平板上有溶血环。APPA、GAT阴性;柏格孪生球菌部分在马血平板上有溶血环，菌落扁平，光滑透明，6.5%NaˉCl、10℃和45℃生长、葡萄糖产酸、尿素、七叶苷、明胶、马尿酸、VP、靛基质、硝酸盐、精氨酸双水解酶均阴性。 六、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，参照“开管说明”，用无菌吸管吸取0.3ml-0.5ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板，操作完毕尽快置于厌氧环境下恒温培养；若接种液体培养，制作液体培养液时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养液中的氧气）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  人肾癌WILMS细胞的背景与应用及相关研究！  一、背景 人肾癌WILMS细胞来源于一名3个月大的婴儿的肾Wilms瘤，由于该类肿瘤分类的改变，经Garvin等鉴定后发现该细胞来源于肾横纹肌样瘤；G-401细胞分泌肾母细胞生长因子(NB-GF)。 二、人肾癌WILMS细胞培养步骤 1、培养基及培养冻存条件准备： 1）准备人肾癌WILMS细胞基础培养基(GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸钠0.11g/L)；优质胎牛血清，10%。 2）人肾癌WILMS细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）人肾癌WILMS细胞冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。 2、人肾癌WILMS细胞处理： 1）复苏人肾癌WILMS细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）人肾癌WILMS细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）人肾癌WILMS细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。 三、应用 人肾癌WILMS细胞可以用于吴茱萸碱诱导人肾癌细胞凋亡的分子机制研究： 吴茱萸碱(Evodiamine,EVO)是一种从吴茱萸(Evodia rutaecarpa)果实中分离得到的吲哚喹唑啉类生物碱。数千年来,它被认为是一种有效的中药,可用于治疗胃病,高血压和湿疹。在过去的十年中,越来越多的证据表明EVO可以表现出各种生物活性,包括抗菌、减肥和抗真菌活性。最近,已经确定EVO对胃腺癌、结肠(lovo细胞系)、结肠直肠癌和乳腺癌细胞具有抗肿瘤活性。 先前的研究表明EVO可以抑制癌细胞的增殖,侵袭和转移,然而针对癌细胞的作用机制仍有待阐明,并且尚未报道EVO在体外人肾癌中的功能研究。在本研究中,进行了细胞学实验和转录组分析研究,揭示了EVO的抗癌机制。 首先,在EVO处理下进行一系列人肾癌786-0细胞和Caki-1细胞和人肾上皮细胞系HK-2细胞活力和增殖的实验。然后,使用转录组分析研究来分析有关生长和凋亡的EVO-调节的基因和信号传导途径。此外,使用超微结构观察,流式细胞术和qPCR验证了EVO抑制生长和诱导细胞凋亡的分子机制。 我们发现EVO在体外不仅可以改变肾癌细胞形态并以时间和剂量依赖性方式抑制细胞的活力和增殖能力。另外,转录组分析表明EVO可以调节Caki-1细胞系的转录组。 共发现差异表达基因7243个,其中下调基因3347个,上调基因3896个,主要涉及细胞迁移、凋亡、细胞周期和DNA复制等。此外,我们证明EVO可以诱导细胞凋亡,使细胞停滞在G2/M期并且调节Caki-1细胞中细胞凋亡和细胞周期相关基因的基因表达。 研究通过细胞生物学和分子生物学探究EVO的抗肾癌作用,并表明EVO作为一种潜在的资源有望应用到肾癌治疗中。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  食品企业检测和预防微生物污染的方法和措施！ 百欧博伟生物：随着食品安全意识的不断提高，食品微生物污染问题也日益受到关注。食品企业作为食品安全的重要保障者，必须加强微生物污染的检测和预防工作。本文将介绍食品企业如何检测和预防微生物污染的方法和措施。 一、检测方法 1、快速检测法 快速检测法是一种简单、快速、准确、经济的微生物检测方法，可以快速确定微生物的种类和数量。目前市场上有许多快速检测产品，如快速检测仪、PCR检测仪等，这些检测仪器可以在几分钟到几小时之间得出检测结果，非常适用于食品企业现场快速检测。 2、传统检测法 传统检测法是指采用传统的微生物检测方法，如营养琼脂平板法、膜过滤法、浸润法等。这些方法需要较长的检测时间，但具有检测结果准确、检测范围广等优点。 二、预防措施 1、保持卫生环境 食品企业应该保持生产场所的卫生环境，防止微生物的滋生和繁殖。应该定期清洁和消毒设备、工具和场所，保持通风、除湿，避免水汽滋生，加强室内通风换气，保持适宜的温度和湿度。 2、保持生产工艺的卫生 食品企业应该建立严格的生产工艺卫生标准，确保生产过程中不会引入微生物。应该对生产工艺进行全面的分析和评估，确定每一道工序的卫生标准和检测要求，并严格执行。 3、加强原材料检验 食品企业应该对原材料进行全面的检验和筛查，排除微生物污染的可能性。对于可能存在微生物污染的原材料，应该采取合适的处理方法，如热处理、冷冻等，以杀灭微生物。 4、加强员工培训 食品企业应该加强员工的培训，提高员工的卫生意识和技能水平。应该对员工进行全面的卫生知识教育，建立健全的卫生管理制度，定期开展卫生培训和考核，确保员工掌握正确的卫生操作方法，减少微生物污染的可能性。 5、实施微生物控制计划 食品企业应该建立完善的微生物控制计划，包括微生物检测、记录、分析和改进措施等。应该建立微生物检测记录和分析系统，及时发现微生物污染的风险和问题，并采取相应的改进措施。同时，应该定期对微生物控制计划进行评估和更新，确保微生物污染的预防措施能够得到有效执行。 总之，食品企业必须采取多种措施，从源头控制微生物污染，保障食品安全。通过加强卫生环境管理、生产工艺卫生、原材料检验、员工培训和微生物控制计划等方面的工作，可以有效预防和控制微生物污染。同时，食品企业应该不断关注食品安全的新技术和新方法，积极引进和应用，提高食品安全保障能力。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 副蕈状芽胞杆菌的菌株培养与实验内容及保藏方法！ 副蕈状芽胞杆菌是Bacillus属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究，具体用途为模式菌株。 一、菌种简介平台编号：Bio-115614规格：冻干物拉丁属名：Bacillus Paramycoides中文名称：副蕈状芽胞杆菌拉丁名称：Bacillus paramycoides来源历史：MCCC原始编号：NH24A2原产国：中国模式菌株：是生物安全级别：一级其它保藏中心编号：MCCC 1A04098=KCTC 33709=LMG 28876培养基编号：2培养温度：25℃培养时间：24-48h需氧类型：好氧分离基物：表层沉积物采集地：中国保存方法：冷冻干燥管保藏用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征副蕈状芽胞杆菌属于模式菌株；与模式菌株Bacillus cereus IAM 12605(T) D16266相似性为100%（736/736）；在M2培养基上25℃1周，菌落呈白褐色，不透明，表面不光滑不湿润，边缘规则，中央微凸起，无晕环，菌落形态大小1.5-3mm。 三、菌种培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  人脑髓母细胞瘤细胞带荧光素酶的培养操作步骤！ 一、产品信息平台编号：Bio-132999规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：LN-229+Luc细胞名称：人脑髓母细胞瘤细胞带荧光素酶用途：荧光标记细胞（LN-229鉴定）注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞介绍该细胞建系于1979年，细胞来源于一个右额顶枕叶胶质母细胞瘤患者。细胞显示p53突变，同时在p16及p14ARF 肿瘤抑制基因可能存在缺失。他们均含有野生型PTEN 基因。该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。 三、细胞特性1）来源：胶质母细胞瘤2）形态：上皮细胞样，贴壁生长3）含量：>1x106  细胞数4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装5) 用途：仅供科研使用。 四、细胞筛选该细胞为稳定转染Luc的细胞，随细胞传代次数的增加，其Luc荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。建议收到细胞后至少传3代，冻存留种后再进行筛选。初次进行细胞筛选时，建议加入终浓度为1ug/ml嘌呤霉素的完全培养基维持培养，若无细胞漂浮或者漂浮较少，即可更换为含2ug/ml嘌呤霉素的完全培养基继续筛选，以此类推，至最高药物浓度为5ug/ml。若筛选过程中，漂浮细胞大于60%，则停止筛选，换成正常培养基培养，至细胞密度约80%，可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/ml嘌呤霉素时细胞正常增殖，可停止筛选，用不含药完全培养基正常培养。 五、细胞的运输和保存干冰运输及复苏好存活细胞（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 六、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。 七、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备1）准备DMEM培养基；优质胎牛血清，5%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！