ATCC 26921 里氏木霉的性质与用途及生产工艺！ 里氏木霉（Trichodermareesei）是多细胞的真核微生物，红褐肉座菌(Hypocrea jecorina)的无性型,隶属于丛梗孢目（Moniliales）木霉属（Trichoderma）。其作为工业菌株用于生产分解不同植物材料的酶类，包括纤维素酶、半纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶等，已有多年历史。 一、菌种简介平台编号：Bio-74033规格：冻干物拉丁属名：Trichoderma Reesei菌种名称：里氏木霉拉丁文名：Trichoderma reesei其他编号：ATCC 26921 =CBS 392.92培养基编号：17,151培养温度：25℃培养时间：5-7 天用途：产纤维素酶、产葡萄糖苷酶、胞外水解酶、纤维二糖水解酶、乙酰胆碱酯酶等相关的培养基详细信息如下：培养基编号：17名称：Synthetic Potato Medium (综合马铃薯培养基)适用范围：米曲霉、酱油曲霉、栖土曲霉、宇佐美曲霉、出芽短梗霉、白僵霉、灰葡萄孢、顶头孢霉、巴西毛客备注：20%Potato extract (马铃薯汁) 1L Glucose (葡萄糖) 20g KH2PO4 3g MgSO4.7H2O 1.5g Vitanib B1 (硫胺素) Trace (微量) Agar (琼脂) 15g pH 6培养基编号：151名称：ATCC Medium: 28　Emmons改良沙氏葡萄糖琼脂备注：Neopeptone  10.0 g 葡萄糖　20.0 g 琼脂　20.0 g 蒸馏水  1000 ml pH 7.0 +/- 0.2 此培养基是由正规的沙氏葡萄糖琼脂改变而来，具有减少量的葡萄糖和中性的pH。用途：产纤维素酶、产葡萄糖苷酶、胞外水解酶、纤维二糖水解酶、乙酰胆碱酯酶等注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基综合马铃薯培养基（PDA）20%马铃薯汁 1L 葡萄糖 20g MgSO4.7H2O 1.5g KH2PO4 3gVitanib B1 (硫胺素) Trace 微量约 8mg Agar (琼脂) 20g pH 自然20%马铃薯汁配制方法：马铃薯洗净去皮，取 200 克切成小块 , 加水 1000 毫升煮沸 20 分钟后滤去马铃薯块，将滤液补足 1000ml。  三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 四、保藏条件安瓿瓶冻干菌种和培养物应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油保藏温度为-80°C;请勿长期置于室温。  五、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后 2 个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  大鼠睾丸支持细胞的培养操作与应用及相关研究！ 一、背景 大鼠睾丸支持细胞又称Sertoli细胞，是生精细胞的支架，为其提供必需的营养物质，能合成与分泌雄激素结合蛋白，为其提供高浓度的雄激素环境等，还具有构成血-睾屏障，形成睾丸内微环境，调节精子发生等功能。 睾丸支持细胞是存在于雄性睾丸间质中的主要细胞类型，其主要功能是分泌和合成睾丸酮，睾丸酮在刺激精子发生、精子成熟及性功能的维持等方面具有重要作用。目前，以睾丸支持细胞为靶向的药物研究备受关注。体外培养的睾丸支持细胞能直接反应药物对该细胞作用的特点，使分离纯化睾丸支持细胞成为必要的前提条件。 二、大鼠睾丸支持细胞培养操作 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。**天换液并检查细胞密度。 2）大鼠睾丸支持细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）大鼠睾丸支持细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为类； 1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2、4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 四、应用 大鼠睾丸支持细胞可以用于妊娠期镉暴露对父系子代大鼠睾丸支持细胞的影响及相关基因DNA甲基化作用的研究： 妊娠期镉暴露对子代大鼠睾丸支持细胞的影响目的:妊娠期镉暴露对子代大鼠睾丸支持细胞的影响。 方法：清洁级SD大鼠250±10g,雌雄1:1或1:2合笼饲养,次日清晨检查阴栓或进行阴道涂片检查,发现阴栓或涂片发现精子记为妊娠期第0天,将孕鼠(F0代)随机分成4组,氯化镉(0、0.5、1、2mg/kg/day)灌胃染毒,染毒时间为妊娠天直至分娩(即1-21天)。 F0鼠自然分娩产下F1代雄鼠,常规喂养至5、21和56天(PND5、PND21、PND56)后,随机抽取每组F1代成年雄鼠与外来健康的雌鼠1:2合笼交配产生F2代,F2代雄鼠常规喂养后以同样的方式产生F3代成年雄鼠。 收集F1、F2及F3代血清和睾丸,行组织病理学检查,经H&E染色后进行曲细精管(Seminiferous Tubule,ST)直径测量及Johnsen评分评价睾丸生长发育情况;透射电镜观察细胞超微结构;ELISA方法测定血清中促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone,Gn RH)、卵泡刺激素(Follicle Stimulating Hormone,FSH)激素水平;免疫组织化学方法进行睾丸组织细胞FSHR定位及表达量检测。 结果：1、妊娠期镉暴露对子代大鼠生长发育和睾丸组织病理学的影响 1.1基础数据显示:与对照组相比,F1代大鼠体重仅在PND5时,2mg/kg剂量组体重增加(P 1.2 H&E染色显示:F1代大鼠睾丸仅在PND5时,1mg/kg剂量组睾丸曲细精管直径减少(P 2、妊娠期镉暴露对子代睾丸支持细胞超微结构的影响透射电镜显示在F1代大鼠PND5、PND56睾丸支持细胞在对照组细胞膜完整、核膜完整与周围细胞联系紧密,剂量组观察到睾丸支持细胞超微结构发现改变,出现明显空泡化、水肿、坏死,并与周围细胞间隙增大。 3、妊娠期镉暴露对雄性子代血清激素的影响血清激素水平检测显示:F1代结果:Gn RH在PND21,0.5mg/kg水平发生上升(P 4、妊娠期镉暴露对子代睾丸支持细胞分泌FSHR蛋白的影响妊娠期镉暴露后F1代PND56睾丸组织经免疫组织化学染色后观察到支持细胞分布在曲细精管基底面,未见游离支持细胞,正常组FSHR分布于基底面,蛋白AOD值为0.5090,剂量组FSHR蛋白同样分布于曲细精管基底面,蛋白AOD值为0.4011,与对照组相比,FSHR蛋白AOD值降低(P 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                ATCC 32285 申克孢子丝菌的特点与优势及培养！ 申克氏孢子丝菌（学名：Sporothrix schenckii）是一种全球常见的温感二形性真菌，也是Sporothrix属的唯一物种。申克氏孢子丝菌是引起孢子丝菌病的唯一病原菌。广泛分布于自然界，自土壤、腐木及植物表面可分离出本菌。 一、菌种简介平台编号：Bio-80249规格：Freeze-Dried拉丁属名：Sporothrix Schenckii菌株名称：申克孢子丝菌用途：ATCC原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Sporothrix schenckii Hektoen et Perkins, anamorph 拉丁名(ATCC? 32285?) 统一编号Strain Designations 菌株别名 RV 14949 [379]Application 用途 Biomedical Research and Development MaterialBiosafety Level 生物安全等级 2Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedType Strain 模式菌株 no Preceptrol? noComments 注释 Antifungal activity of Bay b 5097Medium 培养基 ATCC? Medium 350: Emerson YpSs agarGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 25.0℃Name of Depositor 寄存人 R VanbreuseghemChain of Custody 来源国家 ATCC Isolation 分离基物 Lymphangitis of forearm, BrazilReferences 参考文献 Vanbreuseghem R, et al. Experiences with BAY b 5097. Mykosen 18: 199-211, 1975. PubMed: 1099443 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                 微生物知识分享：微生物培养基的主要成分综述！ 一、氮源 凡是微生物利用以构成细胞物质中或代谢产物中氮素来源的营养物质统称为氮源。氮源分为无机氮源和有机氮源，有机氮源：花生饼粉、黄豆饼粉、棉籽饼粉、麸皮水解液、玉米浆、废菌丝体水解液、毛发水解液、糖蜜、尿素、蛋白胨、鱼粉、牛肉膏。无机氮源：氨水、铵盐（硫酸铵、氯化铵）、硝酸铵。 无机氮源：无机氮源主要是氨水、硝酸盐、铵盐，成分单一，只有NH4+能够进行生物合成，在无机氮的培养基中会表现为生理酸性或生理碱性。 有机氮源：成分复杂，含蛋白质、肽类、氨基酸以及少量的糖类、脂肪、无机盐、生长因子等。豆粕和花生饼粉主要以大分子蛋白质形式存在，需要进一步降解成小肽和氨基酸才能被利用，为迟效氮源，在微生物培养过程中需要搭配速效和迟效氮源，以控制菌体生长和代谢产物合成。 玉米浆，是制玉米淀粉的副产物，原料为玉米糁、水、玉米汁。制造玉米淀粉须将玉米粒先用亚硫酸浸泡，将浸泡液浓缩即制成黄褐色的液体，叫玉米浆，含有丰富的可溶性蛋白、生长素和一些前体物质，含大约40%～50%固体物质。味道微咸，是微生物生长很普遍应用的有机氮源，其主要为较易吸收的蛋白质降解产物，特别是氨基酸通过转氨作用直接被机体利用，为速效氮源。它还能促进青霉素等抗生素的生物合成，含氮量3.6%以上。 蛋白胨：广义的讲是所有蛋白胨的总称。在国内习惯把蛋白胨特指为蛋白胨（主要原料是牛骨），价格低廉；被广大用户用于要求不太高的实验和生物发酵中。进口的蛋白胨没有专指一个具体的一种蛋白胨，如：BD、 OXOID、Pronadisa都会按照技术标准和原料的不同进行细分。 蛋白胨(peptone)国产 (狭义)是采用新鲜牛骨及牛肉混合提取，经过消化、过滤、浓缩、喷雾干燥而得到的一种浅黄色至类白色的干燥粉末。易溶于水，水溶液呈淡黄色。其不仅含有丰富的氨基酸，特别是含硫氨基酸较多，而且含有更多的细菌生长需要的维生素和其它生长因子。是生物制药发酵及各种培养基制备的基础原材料。在当中它起的主要作用是提供氮源。一般的用量为0.5%～5%能为微生物提供C源、N源、生长因子等营养物质。　 胰蛋白胨：国产和进口有很大差别，主要是原料来源不同。 1、胰蛋白胨（国产） 是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的浅黄色粉末。具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状。含有丰富的氮源、氨基酸等，可配制各种微生物培养基，生化制品及微生物学科研等领域中。 2、胰蛋白胨（进口）Tryptone 进口胰蛋白胨与国产的酪蛋白胨相同，也叫胰酪蛋白胨都是采用酪蛋白为原料，经过消化、脱色、过滤、浓缩、喷雾干燥而得到的一种浅黄色至类白色的干燥粉末。易溶于水，水溶液呈淡黄色。酪蛋白又称干酪素是从牛奶中提取的一种营养价值很高的磷蛋白，是生产蛋白胨常用的原料。用此原料生产的蛋白胨，其氨基酸比较齐全，特别是色氨酸的含量比较高。所以它在细菌生化试验中最适宜于做靛基质和糖发酵试验。但它缺乏胱氨酸、蛋氨酸等含硫氨基酸，故不适宜做硫化氢试验。 胰蛋白胨的特点： 适宜于：厌氧菌、真菌、肺炎球菌、乳酸杆菌、棒状杆菌、梭状杆菌的生长以及水和水乳等细菌检验；适宜于硝酸盐还原试验。 用于原生物的培养和抑菌或杀菌剂的检测、抗生素和其它抗菌素的检测及配制无菌试验用培养基等，是生物制药发酵及各种培养基制备的基础原材料。在当中它起的主要作用是提供氮源以及生长因子。一般的用量为0.5%～5%。 酵母产品介绍 酵母系列产品，我们可以看到酵母粉、酵母浸粉、酵母膏、酵母浸膏等不同名称，其中酵母粉和酵母膏是直接将酵母细胞用高温等方式杀死，其仍以单个个体存在，只是已经没有生物活性（不能用来发面），生产较为简单；酵母浸出物和酵母浸膏也以酵母细胞为原料，经过自溶酶解、分离、真空浓缩、喷雾干燥等工序精制而成，富含蛋白质、多肽、氨基酸、核苷酸、维生素、微量元素等营养成分，其生产工艺较为复杂，产品更精细，要求更高。 酵母粉主要采用糖蜜进行发酵而成，发酵完成后添加各种酶将其降解处理，然后经过三步浓缩至固形物含量在30%，然后进行喷雾干燥。食品级酵母浸粉FA、生物级别FP的区别在于厂家内控指标不同，食品级酵母浸粉要求鲜味、微生物指标、肽类含量比较集中，如正态分布一样，在某个区域较为集中；而微生物级别的要求稍低一点，但是其氨基酸和肽类分布比较广泛，适合微生物发酵。 二、碳源 凡是能够构成微生物细胞结构和代谢产物中碳素来源的营养物质统称为碳源，常见碳源包括：糖类、淀粉类、糖蜜、纤维素类、醇酸有机物、脂肪类等。 在工业生产中，将淀粉水解为葡萄糖的过程称淀粉的糖化，制得的溶液叫淀粉水解糖。其主要糖分是葡萄糖。根据水解条件不同，尚有数量不等的少量麦芽糖及其它一些二糖，低聚糖等复合糖。 淀粉水解制糖的意义： 1、大多数微生物不能直接利用淀粉（所有的氨基酸生产菌不能直接利用）； 2、有些微生物能够直接利用淀粉作原料，但必须在微生物产生淀粉酶后才能进行，过程缓慢，发酵周期延长； 3、若直接利用淀粉作原料，灭菌过程的高温会导致淀粉结块，发酵液粘度剧增。 三、无机盐 1、构成细胞的组分成分； 2、作为酶的组成部分和维持酶的活性； 3、维持生物体内的酸碱平衡，调节氢离子浓度，调节氧化还原电位； 4、维持细胞的渗透压。 作为微生物对无机元素的需求，分为主要无机元素和微量无机元素两种，其中磷、硫、钾、钠、镁、铁，磷硫钾镁可以添加磷酸二氢钾和硫酸镁即可满足，其他元素不必添加，可以在碳源和氮源中得到补充。 工业发酵中应用微生物的生长繁殖和产物合成中都需要无机盐和微量元素，如： 磷、硫、铁、锰、钙、镁等。许多金属离子对微生物生理活性的作用与其浓度相关，低浓度往往呈现刺激作用，高浓度却表现出抑制作用。 锰是枯草芽孢杆菌生长的必需元素，当培养基中缺少Mn2+时，不适合枯草芽孢杆菌的生长，促进芽孢的生成，提高Mn2+浓度将会导致培养基成分比例失调，渗透压升高等一系列变化，从而诱导芽孢生成。、 磷在菌体生长、繁殖和代谢活动中起着极其重要的作用。一方面，磷是构成核酸、磷脂、许多辅酶或辅基（辅酶I、辅酶Ⅱ、辅酶A、NAD和NADP等)以及高能磷酸化合物的重要原料，另一方面，磷在代谢调节方面也起着重要的作用，磷能促进糖代谢的进行，促进微生物的生长。因此，磷源是枯草芽孢杆菌发酵培养基中另一个重要的组成成分，它的浓度直接影响着枯草芽孢杆菌菌体的生长和芽孢的形成。 钾虽不参与细胞结构成分，但它是许多酶作用的激活剂，钾还对细胞原生质的胶体状态和细胞膜的透性起调控作用。 钙主要参与调节细胞的生理状态，如：维持细胞的胶体状态，降低细胞膜的通透性，调节pH值等，郭荣君等在研究生防菌BH1时也发现速效氮源如蛋白胨等对菌株芽孢的形成效果较差。在单一无机盐影响试验中，发现CaCO3有利于芽孢的形成。芽孢富含钙离子，而且大多数钙离子与芽孢所特有的化学成分吡啶二羧酸结合，形成的钙－吡啶二羧酸复合物约占芽孢干重的10%，复合物通过降低芽孢含水量增加芽孢抗逆性。CaCO3的添加可以为芽孢的形成提供大量的钙离子，可促进芽孢形成。Greene曾报道大量CaCO3能够通过调节pH来强烈启动芽孢的生成。而本试验在初始pH影响研究中发现，pH为中性时芽孢数量最大，推测CaCO3也有可能通过缓冲pH促进芽孢生成。 四、生长因子 生长因子，是一类调节微生物正常生长代谢所必需，但不能用简单的碳、氮源自行合成的有机物。广义的生长因子除了维生素外，还包括碱基、嘌呤、嘧啶、生物素和烟酸等，有时还包括氨基酸营养缺陷突变株所需要的氨基酸在内。 生物素是作为酶的活性基，其浓度范围1-50ug/L，需求量很好。 氨基酸，微生物生长需要L-氨基酸，在细菌细胞壁合成的D-丙氨酸等合成肽聚糖，是组成蛋白质和酶的主要结构。玉米浆中氨基酸含量高，含有11种氨基酸，其中D-丙氨酸占25%。 （1）玉米浆：虽然主要用作氮源，但含有乳酸，少量还原糖和多糖，含有丰富的氨基酸，核酸，维生素，无机盐等。常作为提供生长因子的物质。 （2）麸皮水解液：可代替玉米浆，但蛋白质，氨基酸等营养成分比玉米浆少。 （3）糖蜜：两种糖蜜（cane molasses，beet molasses）均可代替玉米浆。但氨基酸等有机氮含量较低。 （4）酵母：可用酵母膏，酵母浸出液或直接用酵母粉。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   假单胞菌属的储存条件与培养方法及打管说明！ 假单胞菌属，专性需氧的革兰氏染色阴性无芽胞、有荚膜杆菌，呈杆状或略弯。菌体大小(0.5～1)×(1.5～4)微米。具端鞭毛，能运动。有些株产生荧光色素或（和） 红、蓝、黄、绿等水溶性色素，不发酵糖类。 一、菌种简介平台编号：Bio-62167规格：冻干物拉丁属名：Pseudomonas Sp.中文名称：假单胞菌属属名：Pseudomonas种名加词：sp.来源历史：←甘肃省科学院生物研究所(31617)收藏时间：2008.11.21原始编号：H6资源归类编码：15131134101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；教学；生产具体用途：有机化工废水处理特征特性：直或微弯的杆菌，Gˉ, 单个，成对或成短链；肉汁琼脂斜面：薄，白色，闪光；  好氧，化能异氧型；氧化葡萄糖为葡萄糖酸；氧化酶、精氨酸、明胶液化阳性；吲哚、淀粉水解阴性；生长范围 10～42℃。    生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：化工废水采集地：兰化培养基：蛋白胨 5.0g，牛肉膏 10g，酵母膏 5.0g，葡萄糖 5.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.2培养温度：35℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；教学；生产；有机化工废水处理注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油请置于-80℃ 三、培养条件1、培养基编号：营养肉汁琼脂2、培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入 5mg MnSO4・H2O，则有利于产生芽孢。推荐使用商品化成品培养基。3、需氧类型：好氧4、培养温度：35℃ 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 五、打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。9、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 金色链霉菌的性状特征与保藏方法及注意事项！ 金色链霉菌形态特征：孢子丝紧密螺旋形，有的菌株柔曲、松敞螺旋形。孢子球形、呈卵圆形，表面光滑。金色链霉菌是链霉菌的一种，因其表现色为金黄色得其名，金色链霉菌在30℃以下时，合成金霉素的能力较强；当温度超过35℃时则只合成四环素。 一、菌种简介平台编号：Bio-33190规格：培养物拉丁属名：Streptomyces Aureus中文名称：金色链霉菌拉丁属名：Streptomyces种名加词：aureus Manfio et al., 2003收藏时间*：2006-10-20来源历史：中国林科院热带林业研究所        原产国：中国资源归类编码：15131517101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；教学生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：红豆杉叶采集地区：福建尤溪培养基信息：培养基编号: 12 培养基名称: 高氏合成一号琼脂培养温度：28资源保护类型：培养物保藏方法：定期移植法共享方式：资源交换性共享提供形式：斜面培养物实物状态：有实物用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、性状特征蔗糖硝酸盐琼脂：气丝薄，粉状，鼠灰色变为灰褐色。基丝薄，无色变为暗褐色。无可溶色素。葡糖天冬素琼脂：气丝浅褐灰色。基丝鲜橙色。边缘无色透明。淀粉琼脂：气丝浅橙黄色。基丝薄，透明。甘油苹果酸钙琼脂：气丝浅褐色。基丝乳脂色，表面几乎黑色。无可溶色素。营养琼脂：无气丝。基丝灰色。可溶色素深褐色。马铃薯块：气丝白色至烬灰色。基丝好，皱，褐色变黑色。可溶色素黑色。明胶液化，先快后慢，褐色素。牛奶胨化和凝固有限。淀粉水解良好。硝酸盐还原。产生类黑色素。生长适温25℃。产生抗真菌的多烯抗生素。某些株产生藤黄霉素(1uteomycin)，抑制革兰氏阳性细菌、分枝杆菌、真菌、肿瘤，对革兰氏阴性细菌作用弱。有的菌株产生抗霉菌素。  三、培养基MRS 培养基酪蛋白胨 10 克 牛肉浸取物 10 克酵母提取液 5.0 克 葡萄糖 20 克乙酸钠 5.0 克 柠檬酸二胺 2.0 克吐温 80 1.0 克 磷酸氢二钾 2.0 克七水硫酸镁 0.2 克 七水硫酸锰 0.05 克碳酸钙 20.0 克 琼脂 20.0 克蒸馏水 1.0 升 PH 6.8如果要配制液体培养基，则不用加入碳酸钙和琼脂 四、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。甘油请置于-80 度。  五、注意事项1) 首次活化，用尽量少的复水液溶解，接种在 5ml 的液体培养基中，静止培养，如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；2) 经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或者不活等情况，请在收到菌种后2 个月内联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛；8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作；9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    大鼠气管上皮细胞的知识与应用及培养操作步骤！ 一、背景 大鼠气管上皮细胞是一种在实验室研究中常用的细胞类型。这些细胞通常来自大鼠的气管组织，并被培养在实验室中以研究各种生理和病理过程。 在近端下呼吸道的上皮表面，主要是纤毛上皮细胞，它与基底细胞及杯状细胞一起构成假复层上皮，到达气管腔。 这些细胞可以用于各种实验，例如药物筛选、毒理学测试、免疫学研究等。然而，需要注意的是，这些细胞是经过人工培养的，可能存在一些与天然组织不同的特性。 二、大鼠气管上皮细胞培养操作 1)复苏大鼠气管上皮细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)大鼠气管上皮细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)大鼠气管上皮细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 大鼠气管上皮细胞可以用于苯并（a）芘对大鼠气管—支气管上皮细胞p16、RASSF1A基因甲基化的影响： 观察不同浓度的苯并(a)芘在不同时间对原代培养的大鼠气管上皮细胞p16、RASSF1A基因启动子区甲基化程度的影响。 方法： (1)采用组织块培养法培养原代大鼠气管上皮细胞； (2)噻唑兰(MTT)还原实验检测系列苯并(a)芘浓度和不同作用时间对原代大鼠气管上皮细胞增殖活性的影响； (3)应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测不同浓度的苯并(a)芘对原代大鼠气管上皮细胞p16、RASSF1A基因启动子区甲基化程度的影响。 结果： (1)在本实验室首次成功建立了用组织块培养法培养原代大鼠气管上皮细胞的方法； (2)MTT实验结果显示苯并(a)芘浓度在10.0μmol/L及以下时，72h内大鼠气管上皮细胞抑制率均小于50%，具有明显的抑制增殖作用，并呈剂量依赖性； (3)以0.1、1.0、10μmol/L的苯并(a)芘分别处理原代大鼠气管上皮细胞24h、48h、72h后，发现p16和RASSF1A基因启动子区均未发生甲基化，并通过测序验证。 结论： (1)组织块培养法是培养原代大鼠气管-支气管上皮细胞的较好方法，方法简便，易操作； (2)苯并(a)芘对大鼠气管-支气管上皮细胞的毒性随着苯并(a)芘浓度的增大而增大，具有明显的抑制增殖作用，并呈剂量依赖性； (3)0.1、1.0、10μmol/L的苯并(a)芘对原代大鼠气管-支气管上皮细胞分别作用24h、48h、72h，不会引起p16、RASSF1A基因启动子区甲基化。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    贝莱斯芽孢杆菌的拮抗功能及应用与研究进展！ 贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)属于芽孢杆菌属(Bacillus)的一个新种，是革兰氏阳性好氧细菌，菌体成杆状，大小为0.5×(1.5−3.5) μm，内生孢子，广泛分布于自然界的水体、土壤、空气、植物根系、植株表面和动物肠道等。贝莱斯芽孢杆菌最早是Ruiz-García等从位于西班牙马拉加省(Málaga)拖雷德尔马尔(Torredelmar)地区的一条名为贝莱斯河流(Vélez)的河口中分离的，因此被命名为贝莱斯芽孢杆菌，分离的两株菌分别编号为CR-14b和CR-502T。近年来，国内外有关贝莱斯芽孢杆菌的报道越来越多，研究主要集中在促进动植物生长、拮抗病原菌、诱导系统抗性、抑菌物质及其基因簇鉴定、拮抗作用机制等方面，该菌在生物防治、药物研发、食品发酵和工业应用等方面具有重要作用。考虑到近年来贝莱斯芽孢杆菌作为芽孢杆菌的一个新种被广泛关注，而且该菌在抑制病原菌和生物防治方面具有显著的优点。因此，本文对贝莱斯芽孢杆菌的分类地位、抑菌物质及其合成相关基因、拮抗作用机制以及应用研究等方面进行综述，为贝莱斯芽孢杆菌的深入研究提供参考。 一、贝莱斯芽孢杆菌的分类地位 贝莱斯芽孢杆菌的种分类地位的确定比枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和苏芸金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)等芽孢杆菌晚，贝莱斯芽孢杆菌最早在1999年被分离到，直到2005年被首次报道和命名。贝莱斯芽孢杆菌的生理生化特性鉴定结果显示：该菌能够发酵七叶苷、苦杏仁苷、L-阿拉伯糖、熊果苷、纤维二糖、D-果糖、甘油、葡萄糖、糖原、肌醇、乳糖、麦芽糖、甘露醇、D-甘露糖、甲基α-D-糖苷、D-核糖、D-棉子糖、水杨酸、山梨酸、蔗糖、海藻糖和D-木糖产酸；V.P试验(Voges-Proskauer test)、吲哚试验、硝酸盐还原等为阳性；能够水解淀粉和酪蛋白。贝莱斯芽孢杆菌CR-14b和CR-502T菌株不能发酵D-松二糖，也不能水解DNA、吐温20和吐温80，但是能够产生O-邻硝基苯基β-D-吡喃半乳糖(O-nitrophenyl β-D-galactopyranoside，ONPG)。Ruiz-García等[3]发现贝莱斯芽孢杆菌与其相近种在主要生理生化特征上的区别是该菌能够利用糖原、乳糖、甲基α-D-糖苷和D-棉子糖产酸，不能利用D-松二糖产酸；该菌不能水解DNA、吐温20和吐温80，精氨酸双水解酶为阴性，但是能够产生ONPG。在胰蛋白胨大豆琼脂(tryptic soy agar，TSA)培养基上，贝莱斯芽孢杆菌能够形成乳白色、粗糙、边缘不规则的菌落；在TSB液体培养基中，液体表面会形成一层薄膜，液体内混浊均匀。 经典的分类学方法如形态和生理特征、细胞壁成分、16S rRNA基因序列、(G+C)mol%含量和脂肪酸甲酯(fatty acid methyl ester，FAME)等难以有效区分枯草芽孢杆菌复合群的物种(包括贝莱斯芽孢杆菌)。贝莱斯芽孢杆菌与其亲缘关系相近的物种通过表型难以区分，随着分子生物学技术的快速发展，保守基因或基因组序列进化分析被广泛用于贝莱斯芽孢杆菌的物种鉴定。在分子水平上，基于16S rRNA基因序列进化分析结果显示，贝莱斯芽孢杆菌CR-14b和CR-502T菌株与枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp. subtilis)、解淀粉芽孢杆菌和死亡谷芽孢杆菌(Bacillus vallismortis)的亲缘关系最近，序列相似性高达99%，高于物种划分推荐的阈值> 98.65%。因此，仅仅通过16S rRNA基因序列分析不能有效区分贝莱斯芽孢杆菌与其相近种。近年来，更多的研究者通过保守基因gyrA、gyrB和rpoB等构建系统发育树来进一步确定贝莱斯芽孢杆菌的分类地位。 随着测序技术的进步和测序费用的降低，越来越多的微生物基因组被公布，通过比较基因组学方法分析物种间的亲缘关系逐渐成为主流。根据微生物基因组分类的描述，具有DDH (DNA-DNA hybridization)相似性(> 70%)、ΔTm ( 98%)被定义为同一种细菌。基于此，有学者将解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum) FZB42T菌株重新归类为贝莱斯芽孢杆菌。Dunlap等通过比较基因组学和in silico DNA-DNA杂交的方法对贝莱斯芽孢杆菌及其相近种进行了分类，认为贝莱斯芽孢杆菌不是解淀粉芽孢杆菌最近异模式的异名(a later heterotypic synonym)；甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)、解淀粉芽孢杆菌植物亚种和Bacillus oryzicola是贝莱斯芽孢杆菌的异名。近年来，有学者建议将枯草芽孢杆菌复合群分为4个支系，其中将解淀粉芽孢杆菌、植物相关的西姆芽孢杆菌(Bacillus siamensis)和贝莱斯芽孢杆菌(包含Bacillus methylotrophicus、B. velezensis和B. amyloliquefaciens subsp. plantarum)等细菌归类第二支系(clade Ⅱ)，并建议将这些芽孢杆菌归类为高于种分类水平但是低于枯草芽孢杆菌复合群分类单元的“Operational group B. amyloliquefaciens”中。随着芽孢杆菌基因组序列的陆续公布、物种分类学技术方法的更新以及物种分类规则的多样化，有些芽孢杆菌的物种分类地位也会相应调整，这些芽孢杆菌种属地位的变化也将更有利于研究者对其区分和理解。 二、主要抑菌物质及其合成相关基因 芽孢杆菌在生长与繁殖过程中会产生许多具有抑菌活性的代谢产物，例如细菌素(bacteriocins)、伊枯草菌素(iturin)、表面活性素(surfactin)、二磷酸硫胺素、几丁质酶、纤维素酶、碱性蛋白酶、β-甘露聚糖酶和氨肽酶等。芽孢杆菌产生的多种活性肽对常见病原菌具有良好的抑制作用，是一种潜在的传统抗生素替代品。贝莱斯芽孢杆菌通过合成次级代谢产物实现对病原菌的抑制作用，其中主要包括细菌素、抑菌蛋白、脂肽类物质和聚酮化合物等。贝莱斯芽孢杆菌产生的细菌素类物质主要有羊毛硫抗生素(lantibiotics)，因其含有如羊毛硫氨酸、甲基羊毛硫氨酸、脱氢丙氨酸等特殊的氨基酸而得名；抑菌蛋白主要有蛋白酶、几丁质酶和β-葡聚糖酶等；脂肽类物质主要有表面活性素、伊枯草菌素、泛革素(fengycin)、杆菌霉素等；聚酮类化合物主要有Macrolactin、Bacillaene、Difficidin等。贝莱斯芽孢杆菌产生的抗菌肽类物质根据合成途径可以分为核糖体合成肽和非核糖体合成肽。芽孢杆菌核糖体合成的一类具有抑菌活性的多肽或前体多肽通常被称为细菌素，一般包括12−50个氨基酸残基；根据核糖体合成之后是否经过翻译后修饰，将细菌素分为两类：经胞外修饰的细菌素Class Ⅰ和未经修饰的细菌素Class Ⅱ。 非核糖体合成肽是指通过非核糖体肽合成酶(non-ribosomal peptide synthetase，NRPS)合成的，多发生于菌体生长停止之后，通过NRPS识别特定的氨基酸，经过修饰如环化、酰基化、杂环化、甲基化和糖基化等过程，进而形成具有生物活性的分子肽。非核糖体合成肽根据其结构的差异又可分为表面活性肽、伊枯草菌素和泛革素等三大家族，以及近年来发现的Maltacines复合物、亲水性抗菌肽(bacilysin)、根霉素(rhizocticins)和Amicoumacins等。表面活性素、伊枯草菌素和泛革素都属于脂肽类抗生素，一般由1个疏水脂肪烃链与由7−10个氨基酸组成的以酰胺键或内酯键连接构成的环肽，脂肪链的碳原子个数、氨基酸种类以及脂肪链与肽链连接方式的不同可形成不同的脂肽类型。其中，伊枯草菌素家族包括伊枯草菌素A、抗霉枯草菌素(mycosubtilin)、Bacilopeptins和杆菌霉素(bacillomycin) L、D、F。 贝莱斯芽孢杆菌抗菌肽类物质的合成通常由多基因控制。Surfactin合成相关的基因簇是srfABCD，包含7个模块，每个模块负责一种氨基酸的识别和缩合；基因簇srfAB分别含有3个模块，srfC含有1个模块，srfC基因的末端连接1个Ⅱ型硫酯酶基因srfD，其与Surfactin的环化和释放有关。此外，Surfactin的合成受到磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶编码基因sfp的控制，枯草芽孢杆菌168菌株的sfp基因发生突变，则导致该菌株不能产生表面活性素。Fengycin是一种环脂肽类化合物，其合成酶的基因fenA、fenB、fenC、fenD和fenE共同构成fen操纵子，它们分别编码5个单体酶(FenA、B、C、D、E)，每个单体酶一般含1−3个氨基酸激活模块，每个模块具有识别特定氨基酸和形成相应肽键的功能。Fengycin的合成从单体酶FenC开始，负责活化并组装第1位和第2位氨基酸；然后经过FenD、FenE和FenA分别负责活化第3−4、5−6和7−9位氨基酸；最后是单体酶FenB负责组装最后一位氨基酸，并且具有释放肽链的功能。伊枯草菌素是通过聚酮合酶(polyketide synthase，PKS)-NRPS杂合体系合成，编码伊枯草菌素合成酶的基因ituD、ituA、ituB和ituC共同构成itu操纵子。ituA编码的蛋白与氨基脂肪酸的形成有关，负责组装第1位氨基酸；ituB编码具有4个氨基酸腺苷酸化结构域的肽合成酶，负责组装第2−5位氨基酸；ituC编码含有2个腺苷酸化结构域、1个差向异构酶结构域和硫酯酶结构域的肽合成酶，有助于肽的环化，并且负责组装第6和第7位氨基酸；ituD编码丙二酰辅酶A转酰酶，可调控伊枯草菌素的产量，与脂肪酸合成有关。杆菌霉素Bacillomycin D基因簇为bmyCBAD和xynD，全长约39.4 kb。Plantazolicin的生物合成是由12个基因组成的基因簇决定的，其基因簇大小约10 kb。Amylocyclicin是一种高度疏水的环肽，由6个基因组成的基因簇控制(约4.2 kb)。芽孢杆菌的溶杆菌素Bacilysin是一种非核糖体合成的由N末端L-丙氨酸残基和C末端L-不典型的氨基酸残基组成的二肽，其合成基因簇为bacABCDEFG，其中bacA编码预苯酸脱羧酶、bacB编码异构/鸟苷酰基转移酶、bacC编码蛋白属于氧化还原酶/还原酶家族、bacD编码的是一种连接酶、bacE编码的是大环内酯输出蛋白/透性酶、bacF编码转氨酶、bacG编码的蛋白行使催化功能。综上，贝莱斯芽孢杆菌抗菌肽类物质的合成是由多基因控制的，这些基因通常是成簇出现在基因组上。随着新的抗菌肽类物质不断发现，也将会有新的拮抗基因(簇)被鉴定，抑菌物质的合成途径也会被进一步阐释。 三、拮抗和生防作用机制 拮抗芽孢杆菌产生的抗菌肽类物质能够造成细胞膜的损伤，破坏细菌细胞壁，导致细胞内容物外泄而杀灭细菌。例如：表面活性素能够溶解和破坏细胞膜进而发挥抗菌活性；伊枯草菌素能够引起细胞膜损伤，改变细胞的通透性，使细胞内物质外泄，进而达到抑菌目的；泛革素能够降低真菌细胞膜表面的张力，形成微孔，促使K+和其他离子的渗漏，通过干扰和破坏细胞膜造成细胞死亡，对真菌具有较强的抗菌活性；Difficidin是多烯类抗生素，可抑制细菌的蛋白质合成，破坏细胞膜的功能，具有广泛的抗细菌活性。 贝莱斯芽孢杆菌主要通过分泌脂肽类抗生素、聚酮类化合物和抗菌蛋白等产生抑菌作用。Chowdhury等研究表明FZB42菌株(现已归属贝莱斯芽孢杆菌，下同)在与莴苣(lettuce)根系相互作用过程中能够产生Surfactin、Fengycin和Bacillomycin D，并认为其代谢产物脂肽类和聚酮类物质不仅直接抑制立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)，还能够介导莴苣的防御性反应；而且FZB42菌株产生的Surfactin和非核糖体合成的次级代谢产物能够显著提高莴苣防御素基因FDF1.2的表达量，尤其是在莴苣遇到病原菌侵染时。FZB42菌株产生的杆菌霉素Bacillomycin D对真菌具有显著的抑制作用，能够改变菌丝体和分生孢子细胞壁以及细胞质膜的形态。刘雪娇等发现贝莱斯芽孢杆菌3A3-15能够产生表面活性素(C14−C15 surfactin A)等抑菌物质，该菌产生的次生代谢产物能够造成尖孢镰刀菌的菌丝膨大、弯曲、缠绕、螺旋、节间缩短甚至菌丝断裂等，具有明显的致畸作用，而且对孢子萌发的抑制率高达93.2%。贝莱斯芽孢杆菌V4菌株能够产生伊枯草菌素、Macrolactin和Difficidin等抗菌物质，而且该菌株分泌的抑菌物质能够破坏杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)细胞膜的完整性，与细胞表面相互作用，细胞膜形成穿孔，造成细胞内容物流失。贝莱斯芽孢杆菌Y6产生的脂肽类物质(75 μg/mL)能够抑制大约60%的真菌孢子萌发，其中伊枯草菌素对真菌孢子萌发表现出较强的抑制作用，泛革素表现出较弱的抗真菌活性，表面活性素则没有明显的抑制真菌活性。贝莱斯芽孢杆菌AP193菌株能够产生聚酮类化合物Difficidin，其表达相关基因dfnD缺失后，缺失株ΔdfnD对病原菌(Pseudomonas syringe、Rhizobium radiobacter和Xanthomonas axonopodis等)的抑菌活性丧失，而且缺失株ΔdfnD对番茄细菌性斑点病没有防控效果，认为Difficidin是贝莱斯芽孢杆菌AP193抑菌和生防作用中关键的次级代谢产物。 贝莱斯芽孢杆菌能够产生拮抗蛋白类的抗菌物质，如能够降解细胞壁的几丁质酶和葡聚糖酶等。从番茄树冠中分离的贝莱斯芽孢杆菌C2菌株能够产生蛋白酶、几丁质酶和β-葡聚糖酶，这些酶能够降解真菌细胞壁中的蛋白质、几丁质和β-葡聚糖，进而起到抑菌作用。从黑胡椒根际中分离的贝莱斯芽孢杆菌RB.DS29产生的抗菌物质具有蛋白酶、几丁质酶和β-葡聚糖酶活性，能够破坏疫霉菌(Phytophthora)等真菌的细胞壁，对真菌病原具有良好的拮抗作用。 贝莱斯芽孢杆菌能够诱导植物产生系统抗性，提高植物抗病力，还能够产生吲哚-3-乙酸(indole-3-acetic acid，IAA)，促进植物生长。诱导植物抗性是芽孢杆菌生防作用的重要机制之一。诱导植物抗性是通过非致病菌株、弱毒菌株、蛋白质或糖蛋白、胞外多糖和脂多糖等因子激活植物体内苯丙氨酸解氨酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶、几丁质酶和多酚氧化酶等防御酶，进而促使植物产生诱导系统抗性(induce systemic resistance，ISR)，增强植物的抗病能力，抵御病原菌的入侵。例如，芽孢杆菌FZB24®产生一种信号蛋白诱导植物抗性蛋白的合成，增加植物的抗性，还可以通过分泌丝氨酸专性肽内切酶直接诱导植物抗性。植物根际促生菌(plant growth promoting rhizobacteria，PGPR)可以通过JA/ET信号通路诱导植物ISR，通过活性氧暴发、细胞壁的强化、防御相关酶的累积以及抗菌物质的产生等诱导植物细胞的防御反应。此外，现已归属于贝莱斯芽孢杆菌的FZB42菌株产生的表面活性素和其他非核糖体合成的次级代谢产物可增强植物根系的防御性反应。 由于物种确定的时间较短，贝莱斯芽孢杆菌的抑菌物质分离纯化的相关研究较少，目前主要是通过分析基因组中是否携带脂肽类、聚酮类等已知抗菌物质相关基因(簇)以及蛋白酶、IAA等合成相关基因，并以此推测贝莱斯芽孢杆菌的抑菌作用及其生防作用潜力。在拮抗作用机制研究方面，由于贝莱斯芽孢杆菌通常分泌多种抑菌物质，具体到特定抑菌物质的生防作用，目前的研究尚不够深入，建议构建相关突变体深入分析抑菌物质的生防效果。因此，今后应加强贝莱斯芽孢杆菌抑菌物质的分离纯化及其抑菌作用机制研究，为进一步揭示其拮抗作用机理提供依据。 四、贝莱斯芽孢杆菌的应用 1、在工业上的应用潜力 蛋白酶是一种重要的生物酶，能够有效水解蛋白质，具有催化条件温和、效率高、产生一些功能肽等优点，广泛应用于食品、皮革、动物饲料、医药、环保和化工等行业。纤维素酶也是一种重要的工业酶。蛋白酶和纤维素酶在工业酶中占有很大的比例。研究发现，贝莱斯芽孢杆菌含有丰富的蛋白酶和纤维素酶，如从杜仲树皮中分离的贝莱斯芽孢杆菌157菌株富含内切纤维素酶、木聚糖酶、木质素酶和果胶酶等酶类，其中内切纤维素酶的产量最高，在饲料添加剂、洗涤剂和造纸领域具有良好的应用前景。从巴西阿蒙盆地鱼类肠道中分离的初步鉴定为贝莱斯芽孢杆菌的P11菌株具有显著的角蛋白溶解活性、蛋白酶水解活性和纤维素酶活性，该菌在工业生产上具有巨大的应用潜力。此外，甲基营养型芽孢杆菌(现已归属于贝莱斯芽孢杆菌，下同) F35产生的抗菌肽对罗非鱼片具有保鲜防腐效果，可使罗非鱼肉冷藏保质期延长4 d以上。甲基营养型芽孢杆菌FBKL1.0190分离自酱香型大曲中，因其产生高活性的中性蛋白酶、糖化酶、纤维素酶和脂肪酶等，对提高酱香型大曲的品质具有广阔的应用前景。贝莱斯芽孢杆菌SW5菌株能够缩短鱼露的发酵时间，增加风味物质的种类，可用于海洋蛋白质源的发酵和深加工。 2、在动植物病害防控中的应用 近年来，由于抗生素、消毒剂等化学药物的长期使用，甚至是滥用导致耐药菌的出现，严重威胁着人类的健康。在农业生产中，化学农药的滥用使得动植物病原菌对药物产生了耐药性，导致病害防治难度增加，同时农药残留也污染土壤、水体，破坏微生态平衡。拮抗益生菌如贝莱斯芽孢杆菌因其具有抑制病原菌、提高宿主免疫力、促进动植物生长等功能，广泛应用于农作物、畜禽、水产养殖动物的疫病防控。贝莱斯芽孢杆菌的来源非常丰富，如海水、底泥、土壤、植物根际和叶片、树枝、水稻、小麦、玉米、蔬菜、昆虫肠道、鱼类肠道、动物粪便等。由于贝莱斯芽孢杆菌在不同生境中广泛存在，为筛选不同生境中的优良菌株提供了良好的条件，这也说明贝莱斯芽孢杆菌具有广阔的应用前景。 （1）在植物病害防控中的应用 在植物病害防控方面，贝莱斯芽孢杆菌的生防作用表现尤为突出。贝莱斯芽孢杆菌能够有效预防由子囊菌引起的植物真菌性病害，例如，从种植番茄的园艺大棚土壤中分离到对番茄早疫病原菌(Alternaria solani)和灰霉病原菌(Botrytis cinerea Pers.)等有拮抗作用的贝莱斯芽孢杆菌S6，该菌的发酵液具有广谱抑菌作用，发酵液原液和100倍稀释液对番茄早疫病的田间防治效果分别为80.83%和64.88%。Sun等从梨园根际土壤中分离到一株对贝伦格葡萄座腔菌和粉红单端孢菌等梨轮纹病菌具有抑制作用的拮抗贝莱斯芽孢杆菌L-1株，该菌不仅能够在梨的伤口定殖，在皇冠梨接种该菌后第11天，对梨轮纹病的抑制率达到了76.55%，而且该菌能够诱导梨的过氧化氢酶、过氧化物酶活性，延缓丙二醛的积累，并且对梨的品质没有影响，是一种对梨轮纹病非常具有应用前景的生物防治剂。沙月霞等从水稻叶片中分离到一株对多种植物病原菌具有拮抗作用的贝莱斯芽孢杆菌E69，该菌能够定殖在水稻茎部表皮、薄壁组织和维管束，而且对水稻叶瘟病的田间预防效果高达85.97%。曾欣等从温郁金(Curcuma wenyujin)根茎中分离到一株具有拮抗活性的内生细菌贝莱斯芽孢杆菌B-11，该菌能够产生蛋白酶、β-葡聚糖酶和嗜铁素，同时产生伊枯草素、泛革素和表面活性素等3种脂肽类抗生素，生防实验结果显示该菌的发酵液对铁皮石斛炭疽病的防治效率可达64%。迟惠荣等从多花黄精的根部分离出对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)具有拮抗作用的贝莱斯芽孢杆菌ZJU-3，该菌不仅能够产生表面活性素、泛革素和伊枯草菌素等脂肽类化合物，而且可产生吲哚乙酸、激动素、玉米素和赤霉素等植物激素，该菌通过灌根对多花黄精具有显著的促生长作用。 此外，贝莱斯芽孢杆菌对由疫霉菌和细菌引起的植物病害也有良好的生防作用。例如，Trinh等从黑胡椒根际中分离对疫霉菌具有拮抗活性的贝莱斯芽孢杆菌(RB.DS29株)，该菌不仅能够促进植物生长，在温室条件下RB.DS29菌株浸泡黑胡椒幼苗后能够降低黑胡椒的发病率和死亡率。Cui等从马铃薯块茎中分离到一株对引起马铃薯疮痂病的病原链霉菌(Streptomyces galilaeus)具有较强抑菌活性的贝莱斯芽孢杆菌8-4株，田间试验结果显示该菌不仅能够有效控制马铃薯疮痂病的发病率，还能够显著提高马铃薯的产量。 已有研究表明贝莱斯芽孢杆菌对植物病原菌具有良好的拮抗作用，实验室或者田间试验结果显示该菌对植物具有良好的生防效果，例如促进植物生长、诱导植物系统抗性以及降低植物病害的发生等。贝莱斯芽孢杆菌FZB42已经被商业化应用，作为生物肥料和生物防治剂在农业领域被广泛使用。然而，目前绝大多数已分离的贝莱斯芽孢杆菌尚未规模化、商业化应用，因此，这些菌株在实际应用中的生防效果尚需进一步验证。截止2019年12月底，在中国农药信息网(http://www.chinapesticide.org.cn/hysj/index.jhtml)上可查询到的农药登记数据中，登记的甲基营养型芽孢杆菌(现已被归类为贝莱斯芽孢杆菌)有4条记录，尚无贝莱斯芽孢杆菌的记录，其中甲基营养型芽孢杆菌LW-6 (登记证号：PD20181621)主要防治对象为柑橘树溃疡病、黄瓜细菌性角斑病和水稻细菌性条纹病，施用方法为喷雾。甲基营养型芽孢杆菌9912 (登记证号：PD20181602)主要防治对象为黄瓜灰霉病，施用方法为喷雾。在应用过程中，贝莱斯芽孢杆菌的菌株特性、作用对象以及使用剂型、方式、周期都将影响到其应用效果。因此，不仅要加强贝莱斯芽孢杆菌抑菌产物的解析、抑菌机制和生防作用机制的研究，还要注重其生产工艺、产品剂型、使用方法和防治效果的研究。 （2）在动物病害防控中的研究与应用 在动物病害防控方面，虽然贝莱斯芽孢杆菌的相关研究较少，但是依然表现出优良的生防效果。在陆生动物病害防控方面，Nannan等从鸡粪中分离到一株贝莱斯芽孢杆菌CN026，该菌对大肠杆菌、肠炎沙门氏菌、空肠弯曲杆菌和李斯特菌等食源性病原菌具有拮抗作用，而且CN026菌株的基因组中含有多种抑菌物质的相关基因簇，这暗示该菌对预防鸡的食源性病原菌具有较好的应用潜力。在水生动物病害防控方面，Yi等从鲤鱼肠道中分离到一株拮抗嗜水气单胞菌、无乳链球菌和副溶血弧菌等水产常见病原菌的贝莱斯芽孢杆菌JW，该菌株饲喂鲫鱼后，可增强鲫鱼的体液免疫，提高鲫鱼对嗜水气单胞菌的抗病力。高艳侠等从罗非鱼肠道中分离到一株拮抗多种水产动物病原菌的贝莱斯芽孢杆菌LF01，该菌产生的抑菌物质具有耐热、耐酸碱、耐蛋白酶消化以及耐低温储藏等特性，而且对罗非鱼、乌鳢和斑马鱼具有良好的生物安全性。在实验室条件下，饲喂该菌后能够显著提高罗非鱼的非特异性免疫，降低罗非鱼肠道中爱德华氏菌属和假单胞菌属等潜在病原菌的丰度，增强罗非鱼对无乳链球菌的抗病力。王金燕等从刺参养殖池塘的底泥中分离到一株贝莱斯芽孢杆菌DY-6，该菌对假交替单胞菌和多种弧菌等病原菌均有良好的抑制作用，而且对刺参具有良好的生物安全性，通过浸浴和投喂均可以降低刺参的发病率。王纯研究发现贝莱斯芽孢杆菌V4菌株具有拮抗病原菌的能力，饲喂虹鳟后可提高虹鳟存活率、增强机体免疫应答和抗氧化应激，而且V4菌株对虹鳟肠道微生物菌群结构无显著影响。Li等从石斑鱼肠道中分离出一株贝莱斯芽孢杆菌K2，该菌能够拮抗多种水产常见病原菌，饲喂该菌后能够诱导石斑鱼某些免疫基因表达量的上调，增强石斑鱼对哈维氏弧菌的抗病力。Thurlow等发现饲料中添加贝莱斯芽孢杆菌AP193菌株饲喂斑点叉尾鮰后，具有改善池塘水质和促进生长的效果，同时能够提高鱼体对鮰爱德华氏菌的抗病力，但是尚未达到统计学显著性水平。 目前，贝莱斯芽孢杆菌在动物病害防控中的应用大多是在特定实验条件下进行，这可能是因为动物能够相对自由活动，考虑到贝莱斯芽孢杆菌应用过程中的生物安全性，研究者通常没有进行大规模示范与应用，当然这也与缺少商业化的菌株有关。贝莱斯芽孢杆菌在动物病害防控方面的研究尚局限于分离特定生境中的优良微生物资源、分析优良菌株的生物学特性及其应用潜力，到大规模的应用还需深入研究和系统评价。 五、总结与展望 贝莱斯芽孢杆菌作为生防细菌是近年来的研究热点，尤其是当其分类地位被确定以后。2016年以来，贝莱斯芽孢杆菌引起了研究者的广泛关注，发表的相关研究论文、专利呈现快速增长态势，其中相关研究主要集中在植物促生长和病害防控、食品发酵和加工应用、环境保护、动物饲料、水产养殖以及基因组测序和功能基因分析等方面。贝莱斯芽孢杆菌作为生防制剂具有广阔的应用前景：(1)主要用于植物根际和叶面的共生菌，促进植物生长，抑制病原菌的侵染，诱导植物系统抗性；(2)用于降低养殖动物肠道和生境中的病原菌丰度，降低发病率，减少化学药物使用量；(3)用于新型药物的开发与利用，筛选新型生物抗菌剂替代传统化学药物；(4)用于制备蛋白酶、糖化酶、纤维素酶等酶制剂，提高工业生产效率等。 1、存在问题和解决对策 目前，贝莱斯芽孢杆菌因其优良的生防作用在农业病虫害防控方面引起了广泛关注，但是国内外关于贝莱斯芽孢杆菌的研究主要集中在菌株的分离鉴定、抑菌活性分析以及初步应用示范等阶段，在研究及其应用方面存在一些问题，主要体现在以下几个方面： (1)优良种质资源筛选。贝莱斯芽孢杆菌作为拮抗菌株已被大量分离和鉴定，但是仍然不能满足当前人们对动植物生防制剂的需求。目前，农作物领域中贝莱芽孢杆菌的种质资源相对丰富，急需丰富动物源贝莱斯芽孢杆菌的种质资源库。在实际应用过程中，贝莱斯芽孢杆菌易受到宿主、气候、土壤、水质等多种因素的影响，干扰菌株的生长繁殖进而影响其生防效果。而且，由于抗生素、杀虫剂、消毒剂等药物的使用，土壤、水体、底泥和宿主中存在化学药物的残留和累积，会降低贝莱斯芽孢杆菌的作用效果，也会造成菌株产生耐药性风险。此外，由于一些贝莱斯芽孢杆菌对高浓度的重金属较为敏感，水体、土壤、肥料、饲料中的重金属污染也会削弱贝莱斯芽孢杆菌在病害防控中的应用效果。因此，筛选适应特定生境的优良菌株尤为必要。 (2)生防作用机制研究。贝莱斯芽孢杆菌产生的具有抑菌活性的次级代谢产物种类丰富、稳定性好、抗菌谱广。然而，贝莱斯芽孢杆菌在与宿主相互作用时分泌的抑菌物质有哪些，这些抑菌物质激发宿主的主要免疫应答是什么等机制尚不清楚。建议通过分子遗传操作构建突变株，定向研究某一种或某一类抑菌物质对宿主的生防作用，再利用多组学分析贝莱斯芽孢杆菌与宿主相互作用时的应答机制。 (3)贝莱斯芽孢杆菌的定殖能力。定殖能力是益生菌筛选的重要指标之一，拮抗益生菌能够在动物肠道和植物的根际、茎、叶片中定殖，可形成种群优势，有效减少益生菌的使用剂量和使用频率。一些植物内生贝莱斯芽孢杆菌因其具有良好的定殖能力，可提高菌株的生防效果。然而，贝莱斯芽孢杆菌定殖机理的研究报道较少，因此应加强这方面的相关研究，如：构建荧光标记菌株，通过荧光示踪方法分析贝莱斯芽孢杆菌在植物根、叶围等部位以及动物肠道中的定殖能力；挖掘与定殖相关基因(簇)，通过分子遗传改良技术增强菌株的定殖能力，提高其应用价值。 (4)贝莱斯芽孢杆菌的生物安全性。虽然贝莱斯芽孢杆菌作为拮抗益生菌具有巨大的应用潜力，但是其生物安全评价相关的研究较少，应加强其生物安全评估，例如贝莱斯芽孢杆菌本身对应用对象的致病性、次级代谢产物对作用对象的安全性以及使用贝莱斯芽孢杆菌后对生态环境的影响等，这也是今后贝莱斯芽孢杆菌走向商业化应用的必经之路。 (5)贝莱斯芽孢杆菌的规模化或商业化应用。虽然贝莱斯芽孢杆菌在生物防治、药物研发、食品发酵和工业酶制剂等领域具有良好的应用前景，但是尚未进行规模化或商业化应用。因此，应更加注重优良菌株的筛选和改良、生产工艺的优化及生防作用的生产性试验，让贝莱斯芽孢杆菌尽快走向产业化、商业化。 2、展望 随着人们对食品安全的重视和环保意识的提高，迫切需要符合现代社会发展需要的生物农药。贝莱斯芽孢杆菌因其无残留、无致病性、环境友好而且能够提高动植物生长性能和抗病力，日益受到学者们的青睐。我们认为在今后的研究中，应注重挖掘贝莱斯芽孢杆菌的功能基因(簇)，并通过基因组学、转录组学、蛋白质组学以及代谢组学等大数据解析功能基因的调控网络，深入研究贝莱斯芽孢杆菌与宿主的相互作用机制，加强贝莱斯芽孢杆菌生物活性物质的分离纯化和开发利用，重视贝莱斯芽孢杆菌的生物安全性评估研究等。贝莱斯芽孢杆菌对农业的可持续发展具有重要意义，其产生的抑菌物质具有良好的开发应用前景，相信贝莱斯芽孢杆菌在农业、医药、食品和环境等领域将很快发挥重要作用。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    临床微生物检验标本的采集原则和运送处理！ 百欧博伟生物：在临床微生物检验中标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误，不当的标本可导致假阴性、假阳性结果的出现，因此在标本采集、送检、保存等各个环节都要规范操作，严格控制，是确保实验结果准确可靠的前提。 一、标本采集的一般原则 1、早期采集：采集时间最好是病程早期、急性期或症状典型时，而且必须在使用抗生素或其他抗菌药物之前采集。 2、无菌采集：采集的标本应无外源性污染。 在采集血液、脑脊液、胸腔积液、关节液等无菌标本时，应注意对局部及周围皮肤的消毒，严格进行无菌操作； 对于与外界相通的腔道，如窦道标本应由窦道底部取活组织检查，而不应从窦道口取标本，以免受皮肤表面正常菌群的污染，造成混淆和误诊； 对于从正常菌群寄生部位（如口腔）采集的标本，应明确检查的目的菌，在进行分离培养时，采用特殊选择性培养基。 采集的标本均应盛于无菌容器内，盛标本的容器须先经高压灭菌、煮沸、干热等物理方法灭菌，或用一次性无菌容器，而不能用消毒剂或酸类处理。 3、根据目的菌的特性用不同的方法采集：厌氧菌、需氧或兼性厌氧菌，以及L型菌采用的方法不同。 4、采集适量标本：采集量不应过少，而且要有代表性，同时有些标本还要注意在不同时间采集不同部位标本。 5、安全采集：采集标本时不仅要防止皮肤和黏膜正常菌群对标本的污染。同时也要注意安全，防止传播和自身感染。 二、标本的处理 一些对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检，而其他所有的标本采集后最好在2h之内送到实验室。若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存，如尸检组织、支气管洗液、心包液、痰、尿等标本应保存在4℃环境中。脑脊液、滑膜液等则要在25℃保存。一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h。 厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器送。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   哈茨木霉菌在畜牧业中的应用及挑战与解决方案！ 哈茨木霉菌作为一种有潜力的微生物资源，在畜牧业中的应用具备突出的优势。哈茨木霉菌是一种常见的土壤真菌，具有快速生长、繁殖能力强、抗逆性强的特点，并表现出广谱杀菌和抑制病原微生物的作用，被广泛应用于农业和畜牧业生产。 哈茨木霉菌在畜牧业中的应用 1、饲料添加剂 哈茨木霉菌可以作为一种益生菌添加到动物饲料中，改善动物肠道环境、促进肠道健康。它能够降低肠道内有害细菌的数量，增加有益菌的优势，提高饲料利用率和动物免疫力。此外，哈茨木霉菌还能合成一些促生物质，如维生素和氨基酸等，为动物提供营养补充。 2、疾病防治 哈茨木霉菌具有广谱杀菌和抑制作用，可以用于预防和治疗畜禽常见病。例如，它可以抑制禽饲料中的霉菌和曲霉菌，减少霉变饲料对动物的损害。它还对一些畜禽病原微生物，如肺炎链球菌和大肠杆菌等，具有抑制作用，帮助减少疾病传播，降低抗生素使用。 3、环境净化 哈茨木霉菌对畜禽养殖环境中的氨气和硫化氢具有较强的降解能力。它能分解并转化这些有害气体成为低毒或无毒的物质，减少其对动物和饲养员的危害。通过降低养殖环境中气味的浓度，哈茨木霉菌还可以提高工作人员的工作舒适度和养殖环境的品质。 4、废弃物处理 畜禽养殖过程中产生的废弃物会对环境造成严重污染。哈茨木霉菌具有强大的分解能力，可以有效降解畜禽粪便中的有机物，减少气味和有害气体的释放，同时提高废弃物的无害化处理效率。这有助于减轻畜禽养殖对水体和土壤的污染，推动畜牧业的可持续发展。 5、生长促进 通过产生生长素和其他植物生长调节物质，哈茨木霉菌在畜牧业中可以促进动物的生长和发育。它有助于提高动物的体重、改善饲料转化率和生产效益。同时，其促生物质的作用还可以增强畜禽的食欲，提高对营养物质的摄取能力。 应用挑战及解决方案 1、质量控制 哈茨木霉菌产品的质量与成分要求严苛，需要实施严格的质量控制和监测体系。养殖业者应选择信誉良好、符合相关标准的供应商和品牌，并进行产品质量检测。 2、适应性调整 不同畜牧养殖条件下的哈茨木霉菌菌株可能存在适应性差异。因此，在选择和应用时，应根据具体畜禽养殖条件和种类需求进行菌株筛选和调整，以获得最佳效果。 3、合理应用 哈茨木霉菌在畜牧业中的应用需要合理施用和控制投入量，以避免浪费和过量使用。应根据畜禽的需求、环境条件和饲养管理规范，科学确定使用方式和频率。 哈茨木霉菌作为一种有潜力的微生物资源，在畜牧业中的应用展现了巨大的潜力。通过其在饲料添加剂、疾病防治、环境净化、废弃物处理和生长促进等多个方面的应用，可以提高畜牧业的生产效益、环境友好型和可持续发展。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   MZ-CRC-1人髓样甲状腺癌细胞的培养操作规程！ 一、细胞简介平台编号：Bio-133414规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：MZ-CRC-1细胞名称：人髓样甲状腺癌细胞产品类别：人源细胞系生长特性：贴壁生长培养体系：F12K+20%FBS传代方法：1：2传代细胞形态：上皮细胞样冻存条件：无血清细胞冻存液  传代方法：消化3-5分钟。1:2传代，3天内可长满。  培养体系：温度：37℃，气相：95%空气，5%CO2  细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。  冻存条件：无血清细胞冻存液  用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞收到后处理方法  细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基）   三、细胞培养步骤 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。  2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。  3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：  1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。  2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。  3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。  4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。   对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：  方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。  方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。  PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 四、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。5、客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术售后服务电话，我们随时给予解答。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      皱褶假丝酵母的形态特征与研究进展及其应用！ 一、知识简介 皱褶假丝酵母(Candida rugosa)，旧称柱状假丝酵母(Candida cylindracea)，是一种半子囊无孢子、假丝状、单细胞、非致病的酵母菌。该酵母通常被认为是对人类和其它生命形式都是安全的。 在巧克力的生产过程中，皱褶假丝酵母起到了很大的作用。它能将种子内的这些糖转化为乙醇，并分解果胶质。 二、基本信息 中文名：皱褶假丝酵母 外文名：Candidarugosa 原名：柱状假丝酵母 特征：半子囊无孢子、假丝状、单细胞 应用：生产脂肪酶 致病性：非致病 三、菌株定义 皱褶假丝酵母(C. rugosa)，原名柱状假丝酵母(C. cylindracea)，是一种半子囊不产孢子的假丝状单细胞非致病酵母真菌。该酵母通常被认为是对人类和其它生命形式都是安全的。其所产的脂肪酶（C. rugosa lipase , CRL）广泛应用于传统与现代工业，如脂肪酸的生产、各种酯类的合成等，是当前世界上应用最广泛的商品化脂肪酶之一。 另外，在巧克力的生产过程中，皱褶假丝酵母起到了很大的作用。可可树的种子内含有大量的糖，非常适合皱褶假丝酵母的生长。它能将种子内的这些糖转化为乙醇，并分解果胶质。如果没有皱褶假丝酵母的参与，最终的产品是非常苦涩的。最终，皱褶假丝酵母会由于高浓度的醇而死亡，可可豆经过一些后续化处理如干燥，包装得到最终的产品。  四、脂肪酶分子量 大多数微生物脂肪酶分子量在 30-40 kDa 之间，而 C. rugosa 脂肪酶（CRL）和Geotrichum candidum 脂肪酶（GCL）分子量较大，约 60 kDa。CRLs 和 GCLs 是一类与胆碱酯酶（cholinesterase）结构类似的脂肪酶，都具有 α/β 水解酶的折叠结构和Ser-His-Glu 三联体催化中心。随着脂肪酶的纯化及基因克隆与表达研究的深入，发现两种属脂肪酶均存在基因多态性现象，在 C. rugosa 中发现至少有 7 种脂肪酶同工酶，G. candidum 为 2 种，这些同工酶在一级结构和理化性质上都存在差异。工业上广泛用作催化剂的 GCL 和 CRL 大多是混有几种同工酶的粗酶。  五、研究进展 1990 年，有研究首次报道了 C. rugosa lip1 的突变体核酸序列，到目前为止，先后从 C. rugosa 克隆出 8 个脂肪酶基因，研究者通过 Southern 杂交从 C. rugosa 基因组文库中分别得到 lip1~lip5 全长核酸序列，并预测 lip6 和 lip7 基因。其中 lip1、lip3、lip4 和 lip5 基因序列全长为 1650 bp，lip2 基因序列全长为 1647 bp。研究发现这些同工酶的基因均不含内含子，基因定位在 C. rugosa 的 I 号染色体上，成熟的脂肪酶包含 534 个氨基酸，分子量约为 60 kDa，等电点在 4.5~6.0 之间，具有不同的糖基化程度和底物特异性，但是基因的同源性高达 70%。随后 Xu 等从 C.rugosa (ATCC14830) 菌株中克隆得到 lipJ08 基因，全长 1650 bp，编码 549 个氨基酸，其中包含一个 15 个氨基酸残基的信号肽，成熟的脂肪酶包含 534 个氨基酸，与该菌株同工酶的一级序列比对，同源性高达 89%。研究发现 C. rugosa 不遵循常用的密码子系统，通常编码亮氨酸的密码子 CTG，在 C. rugosa 中编码丝氨酸 (Ser) ，包括在 CRL各组分中的催化位点 Ser209 也是由 CTG 编码。因此，C. rugosa 脂肪酶基因直接异源表达，得到的是无活性的蛋白。为解决这个问题，可以选择密码子使用模式相同的微生物作为宿主菌株或者将非常规密码子 CTG 改为 TCT 再进行异源表达。Brocca等首次用全基因合成方法将密码子 CTG 突变为 TCN，其中包括催化位点Ser209，合成了的 lip1 基因，并在 Saccharomyces cerevisiae 和 Pichia pastoris 中异源表达，都得到有活性的蛋白，且转入 P. pastoris 的转化子在 1-L 摇瓶中 pH 6.0 条件下，发酵 280 h 酶活达到 150 U/mL，且对 C8 和 C10 长度的脂类显示较高的水解活力。 随后 Tang 等采用重叠延伸 PCR 技术将 lip4 基因中 19 个编码丝氨酸的密码子 CTG 进行改造，分别在大肠杆菌和毕赤酵母中进行表达。lip4 有唯一一个皱褶假丝酵母脂肪酶糖基化位点 Asn-351，在毕赤酵母中表达的重组酶经过糖基化后，热稳定从 52 °C 升至 58 °C，但是催化性质与大肠杆菌中表达的产物没有明显差异。对两种重组脂肪酶活性测定，发现对长链酯(C16 和 C18)有较高的酯活力，对不饱和的长链脂肪也有较高的活性。 2002 年，Lee 等克隆 C.rugosa 的脂肪酶 lip2 基因利用 Overlap extension PCR技术将该基因中的 17 个编码丝氨酸的 CTG 密码子突变为 TCT，在 P. pastorisSMD168H 成功表达。该酶最适 pH 为 7.0，在最适温度为 30~50 °C，对 C12~C16 的对硝基苯酯有较高的水解活力，转酯和醇酯化效果最佳的底物分别是丁酸和 C18。同时，对三丁酸甘油脂和十二酸胆固醇酯活性最高。Ferrer 等将 lip2 用 AOX 作为启动子在毕赤酵母中异源表达，重组酶 LIP2 的表达量比原始 C.rugosa 菌株发酵 LIP2产量提高了 10 倍。 2005 年，Chang 等人应用 RT-PCR 技术从 C.rugosa(X64703)菌株基因组中克隆 lip1 基因，利用 Overlap extension PCR 技术将该基因的成熟肽 19 个编码丝氨酸的CTG 密码子突变为 TCT，以 P. pastoris KM71 作为宿主菌株，表达产物经纯化后，以三丁酸甘油酯为底物，酶活力为 253.3 U/mL。 2006 年，Chang 等将 lip3 中 18 个编码丝氨酸的 CTG 密码子用重叠延伸 PCR技术定点突变为 TCT；同时将 5’端 339 个碱基进行密码子优化，改造后的两段基因在毕赤酵母中表达出有活性的蛋白，密码子优化后表达的重组酶活力比未优化的提高 1.44 倍。重组脂肪酶的最适温度范围为 20~50 °C，最适 pH 4.0~6.0，对 C8~C12的 pNP 酯有较高的水解活力。 2011 年，Lee 等将 lip5 基因的 16 个编码丝氨酸的 CTG 密码子定点突变，在毕赤酵母中表达。重组 LIP5 在最适反应温度为 50 °C，最适 pH 为 8.0。研究底物特异性发现，重组酶对短链 pNP 酯(C4)、丁酰辅酶 A (C4)有较高的水解活性， LIP5与 LIP4 和 LIP2 都对短链底物有较好的水解作用。  六、脂肪酶应用 皱褶假丝酵母脂肪酶可以催化水解、醇解、转酯和酯化等多种反应，根据该酶的不同特性应用于工业的不同领域。CRLs 对甘油三酯中的 Sn-2 和 Sn-1/3 位酯键的识别和水解具有不同选择特异性且对底物的立体对映结构 1 位和 3 位酯键的表现出较高的识别特异性和对映选择性，因此，常用于制备对映体有机化合物，药物手性拆分，外消旋醇和酯的动力学拆分和催化合成大量药品，例如催化合成有光学活性的非甾醇类抗炎药(苯酮苯丙酸、萘普生、布洛芬)，生物碱类的光学异构体合成、抗生素、二级醇、生化抑制剂和前药等。Chen 等固定化 C. rugosa 脂肪酶后在环己烷中合成了(S)－布洛芬酯。利用 C. rugosa 脂肪酶对长链不饱和脂肪酸催化活性低这一特性，可以从鱼油中生产 EPA 和 DHA。除此以外，皱褶假丝酵母脂肪酶还被广泛应用于生物传感器、生物材料、生物降解和生物识别等领域中。  北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  HCC1806人乳腺鳞状癌细胞系的培养及研究动态！ 一、背景 HCC1806人乳腺鳞状癌细胞系是一种来源于胸部乳腺的上皮样细胞系。这种细胞系是从一名60岁的黑人女性患者的乳腺中分离出来的，该患者患有TNM IIB期2级棘层松解性鳞状细胞癌（ASCC）。 HCC1806人乳腺鳞状癌细胞系于1995年启动，花了10个月的时间来建立。这种细胞系具有贴壁生长的特性，是一种较为常见的细胞系，被广泛应用于生物医学研究，以探索乳腺癌的发生、发展机制，以及寻找治疗乳腺癌的新药物和新方法等。 在研究过程中，研究人员可以通过对HCC1806人乳腺鳞状癌细胞系的基因表达、细胞周期、细胞凋亡等方面进行深入研究，从而进一步了解乳腺癌的生物学特性，为临床治疗提供理论依据。 二、HCC1806人乳腺鳞状癌细胞系培养操作 1)复苏HCC1806人乳腺鳞状癌细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)HCC1806人乳腺鳞状癌细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)HCC1806人乳腺鳞状癌细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 HCC1806人乳腺鳞状癌细胞系可以用于MicroRNA-139-5p靶向调节SOX8抑制三阴性乳腺癌的机制研究： SOX8及miR-139-5p在肿瘤调控中发挥的作用,有必要在TNBC中进一步探讨SOX8和miR-139-5p的关系,并寻找两者的调节机制。研究目的本研究旨在探讨miR-139-5p对TNBC病理发生和发展的调节作用,并探讨miR-139-5p通过调控SOX8表达,抑制TNBC发展的分子机制,为TNBC的诊断和治疗中新的生物标志物及靶点的探索提供理论基础。 研究方法： 1、研究SOX8在三阴性乳腺癌细胞中的表达模式实验选取两种常用的人类TNBC细胞系(HCC1806人乳腺鳞状癌细胞系和BT549),分别采用实时荧光定量PCR和免疫印迹方法(Western blot)检测其中SOX8在mRNA和蛋白水平上的相对表达量。 2、研究SOX8基因对三阴性乳腺癌细胞生物学行为的影响通过在HCC1806人乳腺鳞状癌细胞系和BT549细胞系中转染SOX8过表达质粒或microRNA-SOX8特异性短发夹RNA来增强或敲减基因表达,再用定量PCR和Western blot检测转染后细胞中SOX8 mRNA和蛋白的相对表达量,判断过表达和干扰的效率高低。随后分别进行CCK-8实验、克隆形成和Transwell实验,用于测定HCC1806和BT549细胞的活力、克隆形成能力和迁移情况,评估SOX8基因表达量改变对TNBC细胞增殖和迁移的影响。 3、SOX8对三阴性乳腺癌细胞凋亡及细胞干性形成的影响利用流式细胞分析SOX8过表达或干扰后,HCC1806人乳腺鳞状癌细胞系和BT549细胞凋亡的变化情况,同时用Western blot检测凋亡标志物Caspase3、Caspase9的表达水平。用体外成球实验鉴定两种肿瘤细胞自我更新能力即细胞的干性。 4、过表达SOX8对Wnt/β-catenin通路活性影响利用Targetscan、Starbase等网络软件,利用生物信息学方法预测出SOX8可能与Wnt通路受体FZD7的互补结合的位点,通过RT-PCR验证过表达SOX8对FZD7转录的影响。 5、miR-139-5p对三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移的影响利用定量PCR检测miR-139-5p在HCC1806人乳腺鳞状癌细胞系和BT549细胞与正常乳腺上皮细胞MCF-10A中的表达量。分别在两种细胞中过表达miR-139-5p,观察miR-139-5p表达量,以及SOX8 mRNA和蛋白的表达量与未转染组相比发生的变化,从而揭示二者的关系。通过CCK-8、克隆形成、Transwell实验研究miR-139-5p过表达对细胞增殖和迁移的影响。6.miR-139-5p对三阴性乳腺癌细胞凋亡及肿瘤球形成的影响分别在HCC1806人乳腺鳞状癌细胞系和BT549细胞中过表达miR-139-5p,流式细胞仪分析检测细胞凋亡率,Western blot检测活性Caspase3、Caspase9表达量,用体外肿瘤细胞成球实验检测细胞干性。 研究结果： 1、三阴性乳腺癌细胞系中SOX8表达上调与正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,SOX8 mRNA、蛋白在HCC1806人乳腺鳞状癌细胞系和BT549乳腺癌细胞系中的表达量均明显上调(P 2、SOX8可以促进三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移与对照组相比,在转染microRNA-SOX8特异性短发夹RNA的HCC1806人乳腺鳞状癌细胞系和BT549细胞中SOX8 mRNA和蛋白表达量均显著下调(P 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 曲霉属通用PCR试剂盒的操作步骤及应用研究！ 一、背景 曲霉属通用PCR试剂盒是一种用于检测曲霉属病原体的生物试剂，采用PCR技术进行检测。 曲霉属通用PCR试剂盒具有高灵敏度、特异性强、操作简便等特点，可用于科研实验、临床检测等领域。通过该试剂盒，用户可以快速、准确地检测曲霉属病原体，对于曲霉病的诊断和治疗具有重要意义。 曲霉属通用PCR试剂盒是一种用于检测曲霉属真菌DNA的PCR试剂盒。该试剂盒通常包括以下成分： 曲霉属通用PCR试剂盒PCR反应液：包括PCR缓冲液、dNTPs、引物、Taq聚合酶等。 标准品：用于定量检测曲霉属真菌DNA的浓度。 阴性对照：用于排除假阳性结果的可能性。 阳性对照：用于确认试剂盒的准确性和可靠性。 使用曲霉属通用PCR试剂盒时，首先需要提取样本中的DNA，然后将提取的DNA加入到PCR反应液中进行扩增。通过检测扩增产物的荧光信号强度，可以确定样本中是否存在曲霉属真菌DNA。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，适用于临床诊断和流行病学调查等领域。 二、曲霉属通用PCR试剂盒的操作步骤如下 1、样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。 2、DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。 3、PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。 4、PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。 5、结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在曲霉属的感染。 三、应用 曲霉属通用PCR试剂盒可以用于15种中药材表面污染真菌的分离鉴定及产毒性能分析： 通过对不同来源的15种45份中药材表面污染真菌的分离鉴定,以及对菌株产毒性能进行检测,探索一种中药材表面污染真菌的快速鉴定方法,为全面了解中药材真菌污染状况,实现中药材真菌毒素污染的预警报告奠定基础。 方法： 1、中药材表面真菌的分离、纯化与培养利用平板稀释法,对从广西、湖南、湖北三个地区的零售店购买的15种45份中药饮片表面污染真菌进行分离、纯化与培养。 2、菌株的显微鉴别利用乳酸酚棉蓝染色法对分离得到的菌株进行显微观察,做初步的鉴定。 3、真菌的分子鉴定选取文献中常用的真菌鉴定通用引物ITS1/ITS4,以及自行设计的ITS引物Wen1F/Wen1R、Wen2F/Wen2R,以分离到的菌株基因组DNA为模板,进行曲霉属通用PCR试剂盒PCR扩增,获得目的片段,测序并进行序列比对。 4、菌株产毒性能的检测根据显微观察和分子鉴定的结果以及有关参考文献,对部分菌株进行液体培养,采用LC-MS/MS方法对其培养物中的黄曲霉毒素(AFB1、AFB2、AFG1、AFG2)、赭曲霉毒素A(OTA)及杂色曲霉毒素(ST)检测。 结果： 1、中药材表面分离菌的情况及显微鉴别结果在检测的45份药材中43份检出有真菌污染,污染率达95%,真菌污染情况较为普遍。从实验的中药材样品表面共获得143株真菌,经过初步的形态学观察主要为子囊菌类和半知菌类,其中曲霉属(Aspergillus spp.),青霉属(Penicillum spp.)数量最多,是所测样品中的主要污染菌属。湖北样品中共分离到真菌44株,其中曲霉属17株,占38%,青霉属5株,占11%；湖南样品中共分离到真菌42株,曲霉属12株,占28%,青霉属10株,占23%；广西样品中共分离到真菌57株,曲霉属15株,占26%,青霉属19株,占33%。 2、曲霉属通用PCR试剂盒分子鉴定结果利用基于ITS序列的分子鉴定方法对所得的143株真菌进行鉴定,117株鉴定到属以上。曲霉属共39株,其中杂色曲霉(Aspergillus versicolor)7株,烟曲霉(Aspergillus fumigatus)4株,黄曲霉(Aspergillus fiavus)和棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)各3株；青霉属共34株；枝孢菌属(Cladosporium spp.)10株；散囊菌属(Eurotium spp.)5株；小光壳属(Leptosphaerulina spp.)3株、镰刀菌属(Fusarium spp.)3株；拟青霉属(Paceilomyces spp.)2株；链格孢属(Alternaria spp.)2株；炭团属(Hypoxylon spp.)2株；其他菌属17株；另有26株菌株未能准确分类。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   太平洋大洋杆状菌的冻干管打管说明及注意事项！ 太平洋大洋杆状菌是Oceanicola属的微生物，原产地为中国。细菌细胞不能运动，呈短杆状，长1.0-1.2毫米和0.6-0.7毫米宽。革兰氏染色反应呈阴性，菌落颜色为灰色。属中度嗜盐菌。主要用途为分类；研究；教学。  一、菌种简介平台编号：Bio-099599规格：冻干物拉丁属名：Oceanibaculum Pacificum菌株名称：太平洋大洋杆状菌收藏时间：2009/5/8原始编号：LMC2up-L3T原产国：中国资源归类编码：15130000000模式菌株：模式菌株主要用途：分类；研究；教学特征特性：菌体长约是1.7-2.1毫米，宽约0.5-0.7毫米。菌落表面光滑，灰色，直径1-2mm。中度嗜盐。生长在0-9％的NaCl（最佳为1.5-5.0％）和温度为10-45 UC（最佳温度是28-37 UC）的条件下。生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：西南部太平洋热液区沉积物培养基编号：444培养温度：30℃用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基细菌用海洋液体培养基（MB） BACTO MARINE BROTH DIFCO 2216酵母膏 1.0 g 蛋白胨 5.0 g Fe(III) citrate 0.1 gNaCl 19.45 g MgCl2 5.9 g KCl 0.55 gNa2SO4 3.24 g CaCl2 1.80 g Na2CO3 0.16 gKBr 0.08 g SrCl2 34.0 mg H3BO3 22.0 mgNaSiO3 4.0 mg NaF 2.4 g NH4NO3 1.6 mgNa2HPO4 8.0 mg 蒸馏水 1.0 L pH 7.6 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。  四、注意事项1）冻干粉以 200ul-500ul 无菌水或者推荐培养基的液态溶解，最适接种量为 2 支斜面（18*180试管）或者 2 支 5ml 液体（请不要在平板上，更不要在锥形瓶中复苏菌种）待菌种活化成功后才能扩大培养。如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时与微生物菌种查询网（www.biobw.org）联系。 五、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说，菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  海葵海洋杆菌的形态特征与优势特点及培养方法！ 海葵海洋杆菌是Pontibacter属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类；研究；教学。 一、菌种简介平台编号：Bio-096663规格：冻干物拉丁属名：Kocuria Sediminis菌株名称：海葵海洋杆菌收藏时间：2009/3/26原始编号：KMM 6156 KCTC 12367 = LMG 23027原产国：韩国资源归类编码：15131126000模式菌株：模式菌株主要用途：分类；研究；教学特征特性：革兰氏阴性杆菌，不能运动，无芽孢，细胞周围有丝状物质。可以降解明胶，淀粉，DNA。可以在干燥条件下存活，不需要特殊的生长因子培养基编号：33培养温度：30℃注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征海葵海洋杆菌，革兰氏染色阴性，无芽孢生成，氧化酶阳性，过氧化氢酶阳性，至少能耐受5000Gy辐射，菌落红色凸起，能够运动但无鞭毛，能利用糊精，糖原，葡萄糖，果糖，硝酸盐还原阴性，主要脂肪酸为饱和脂肪酸，分离自新疆沙漠。  三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 六、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  人子宫内膜癌细胞的知识与应用及培养操作规程！ 一、背景 人子宫内膜癌细胞来源于39岁患有子宫内膜腺癌的女性，表达ER、PR。有报道称该细胞可产生促肾上腺皮质激素释放激素，胎盘碱性磷酸酶、绒膜促性腺激素。 二、人子宫内膜癌细胞复苏、传代及冻存流程参考 1、人子宫内膜癌细胞复苏 1）配制完全培养基：基础培养基+胎牛血清+双抗（特殊培养基特殊配置）； 2）人子宫内膜癌细胞复苏：取5ml完全培养基于15ml离心管中，37℃水浴锅预热，从液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出冻存的细胞，放入37℃水浴锅中，摇晃使快速化冻（1min左右），然后将化冻的人子宫内膜癌细胞和预热的培养基，移入超净工作台中，化冻的人子宫内膜癌细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3）吸弃上清，得到人子宫内膜癌细胞沉淀，用2ml完全培养基轻轻重悬人子宫内膜癌细胞，加入到T25培养瓶中，做好标记，放入37℃，5%CO2饱和适度培养箱中培养（培养皿复苏效果更好）； 4）24h后，观察人子宫内膜癌细胞贴壁情况（未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞），吸弃旧培养基，加入新鲜的预热（室温或37℃）的完全培养基，继续培养。 2、人子宫内膜癌细胞传代 1）待人子宫内膜癌细胞生长到80%-90%汇合度时，吸弃旧的培养基，加入1ml无菌PBS润洗一次，以去除残余的培养基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），然后加入1ml 0.25%胰酶，37℃培养箱中消化（1~2min左右，不同细胞消化时间不同），取出人子宫内膜癌细胞，镜下观察细胞至细胞皱缩变圆； 2）加入1ml完全培养基（含FBS）终止消化，轻轻拍打，使人子宫内膜癌细胞脱落下来成单个细胞悬液，收集细胞于15ml无菌离心管中，1000rpm，离心5min； 3）收集人子宫内膜癌细胞沉淀，完全培养基重悬，一分为二（可根据细胞生长速度调整比例），分别加入到2个新的培养瓶中，做好标记，放入培养箱中培养。 3、人子宫内膜癌细胞冻存 1）按照人子宫内膜癌细胞传代方法，在超净工作台内消化收集细胞沉淀，取少量细胞用于计数； 2）用预冷的1ml冻存液（90%完全培养基+10%DMSO）或者无血清细胞冻存液重悬细胞，加入到1.2ml冻存管中，密度为1*106个/ml。 3）放入程序冻存盒，-80℃过夜后，转入液氮长期保存 三、应用 人子宫内膜癌细胞可以用于姜黄素诱导人子宫内膜癌细胞（HEC-1-B）凋亡及其机制的研究： 观察姜黄素对人子宫内膜癌细胞(HEC-1-B)体外增殖及相关蛋白表达情况的影响,探讨姜黄素诱导人子宫内膜癌细胞凋亡的机制。 方法：将体外养殖的HEC-1-B细胞进行随机的抽样分组,分别为对照组、姜黄素Ⅰ、姜黄素Ⅱ、姜黄素Ⅲ和姜黄素Ⅳ组共五个小组。分别给与不同浓度的姜黄素(0,10,20,40,80)μmol/L培养48h和72h。 采用MTT法：1.检测人HEC-1-B细胞生长抑制率2.Hoechest33258荧光染色观察人HEC-1-B田胞核形态的变化3.Western blot法检测相关蛋白的表达水平。用SPSS19.0统计学软件对上述检测结果做统计学分析。 结果：1、姜黄素对HEC-]-B增殖和凋亡的影响 (1)MTT实验结果显示,将所有的小组进行观察对比分析,结果发现姜黄素每个小组吸光度都比对照小组低,(P (2) Hoechest33258荧光染色观察显示,对照组细胞形态规则,而姜黄素各组细胞呈核碎裂、核固缩、荧光强度增强等凋亡特征。提示姜黄素可诱导人子宫内膜癌(HEC-1-B)细胞凋亡。 2、姜黄素对HEG-1-B细胞相关蛋白表达的影响Western blot法结果显示,与对照组比较,不同浓度的姜黄素作用48h和72h之后,和对比组进行对照,结果HEC-1-B细胞的Survivin蛋白表达在这段时间里呈现下降的趋势,它是伴随着姜黄素浓度的增加和作用时间的上升而表达减少(P 结论：姜黄素对体外培养的人HEC-1-B细胞具有抑制作用,且这种抑制作用在一定浓度范围内呈时间-剂量依赖方式。一定条件下,可抑制人HEC-1-B细胞生长,且诱导其凋亡,其机制可能是下调HEC-1-B细胞survivin蛋白的表达,直接激活caspase-3蛋白而诱导人HEC-1-B细胞凋亡。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   食品中霉菌污染产生的原因与危害及防治措施！ 百欧博伟生物：食品中常见的霉菌污染是指食品在生产、加工、储存、运输等过程中受到霉菌的侵染，导致食品中霉菌数量的增加和霉菌毒素的产生。霉菌是一种真菌，广泛存在于空气、土壤和水中，在适宜的条件下可以迅速繁殖。食品中常见的霉菌污染会对人体健康产生负面影响，因此需要采取措施加以预防和控制。 一、食品中常见的霉菌污染种类 黄曲霉：黄曲霉是一种常见的霉菌，可以侵染多种食品，如花生、玉米、大米等。黄曲霉可以产生黄曲霉毒素，是一种致癌物质，对人体肝脏、肾脏等器官具有损害作用。 青霉：青霉在食品中也比较常见，可以侵染乳制品、肉类、水果等。青霉可以产生青霉素等毒素，对人体神经系统、消化系统等产生损害。 毛霉：毛霉是一种在土壤中常见的霉菌，可以侵染谷物、豆类等食品。毛霉可以产生毛霉酸等毒素，对人体肝脏、肾脏等器官具有损害作用。 镰刀菌：镰刀菌是一种在土壤和水中常见的霉菌，可以侵染谷物、蔬菜等食品。镰刀菌可以产生多种毒素，对人体肝脏、肾脏等器官具有损害作用。 二、食品中霉菌污染的危害性 食品中霉菌污染的危害性主要表现在以下几个方面： 引起食品变质：霉菌在食品中繁殖时，会分解食品中的营养成分，导致食品变质、营养价值下降，甚至产生有害物质。 引起中毒：有些霉菌产生的毒素可以引起人体中毒，如黄曲霉毒素、青霉素等，对人体健康产生负面影响。 传播疾病：有些霉菌可以传播疾病，如肺结核等肺部感染疾病。 损害人体器官：长期食用含有霉菌毒素的食品会对人体器官产生损害作用，如肝脏、肾脏等。 三、食品中霉菌污染的原因 食品中霉菌污染的原因主要有以下几个方面： 环境因素：环境中的霉菌孢子和菌丝会通过空气、水、土壤等途径进入食品中，导致食品被污染。 原料因素：一些食品原料本身就含有霉菌，如谷物、豆类等。此外，原料在采摘、运输、储存等过程中也容易受到霉菌的侵染。 生产过程因素：生产设备、容器、工具等如果没有进行彻底清洁和消毒，会成为霉菌的生长环境。同时，生产过程中的温度、湿度等条件也适宜于霉菌的生长繁殖。 储存和运输因素：储存和运输过程中如果没有采取适当的措施，如控制温度和湿度、避免与污染物接触等，容易导致食品发霉变质。 人员因素：员工在操作过程中没有遵守卫生规定，如不洗手、不穿戴工作服等，会将霉菌引入食品中。 四、预防食品中霉菌污染的措施 为了预防食品中霉菌污染，需要采取一系列措施： 加强原料控制：对原料进行严格检查和筛选，避免使用含有霉菌的原料。同时，加强原料的储存和运输管理，保持清洁卫生。 加强生产过程控制：在生产过程中，要保持车间环境的清洁卫生，定期进行消毒处理。同时，对生产设备、容器和工具进行彻底清洁和消毒，避免残留物对食品造成污染。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 抗生素生产菌：芽孢杆菌属微生物的定义与特点！ 1、芽孢杆菌属微生物定义 芽孢杆菌属微生物是一类单细胞、杆状菌的总称，好氧或兼性厌氧。它们的共同特点是当环境条件不利时会形成内生孢子。属于革兰阳性菌，一般可以借助于侧生或有缘毛的鞭毛运动。芽孢杆菌通常作为腐生菌生活在土壤中，但是也有例外，如炭疽芽杆菌是人类病原菌，而苏云金芽孢杆菌是昆虫的病原菌等。 芽孢杆菌在工业发酵中主要用于胞外水解酶类生产，而苏云金杆菌芽孢中的毒蛋白晶体则可用作为生物杀虫剂，是一种广泛使用的生物农药。 2、芽孢杆菌产生的抗生素的特点 （1）一般都属于多肽类抗生素。多肽类抗生素的分子量小于蛋白质，分子结构中含有一些不同于蛋白质的特殊组分，如: D-氨基酸、脂肪酸及环状氨基酸等。多肽类抗生素与蛋白质的另一个不同点是生物合成途径存在显著的差别，杆菌产生的多肽通常不是通过核糖体进行转录和翻译，而是由复杂的多酶体系催化合成。芽孢杆菌合成的多肽类抗生素与链霉菌合成的多肽也有显著的差别，芽孢杆菌合成的多肽不含缩酚肽键，肽链的起始是一个酰基，而且肽链中没有甲基化的氨基酸残基。 芽孢杆菌产生的多肽类抗生素的抗菌谱差别很大，多数对革兰阳性菌有抑制作用，但多黏菌素能抑制革兰阴性菌生长，芽菌霉素则是抗霉菌剂。它们的作用机理也各不相同，如:伊短菌素有抑制聚核酸酶的功能；杆菌会阻碍肽聚糖合成；短杆菌则起着干扰细胞质膜的作用。 （2）芽孢杆菌也能够产生非肽类的抗生素，如环样芽孢杆菌产生氨基糖类抗生素丁苷菌素，巨大芽孢杆菌能够产生安沙霉素类的Lucomycotrienin。丁苷菌素并不用于医药，但是其结构特点帮助启发开发了各种氨基糖苷类抗生素的化学改性方法，在对付细菌对抗生素耐药性方面开辟了新的途径。 微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！ 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到Z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得Z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   用于抗菌防腐剂试验研究的：日勾维多细菌源菌 日勾维多细菌源菌是Pluralibacter属的微生物，原产地为法国。主要用途为分类；研究，具体用途为分类学研究、抗菌防腐剂试验研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-85070规格：冻干粉拉丁属名：Pluralibacter Gergoviae中文名称：日勾维多细菌源菌拉丁名称：Pluralibacter gergoviae其它保藏中心编号：=DSM 9245=ATCC 33028=CDC 604-77=CIP 76.01=JCM 1234=LMG 5739=NCTC 11434来源历史：←DSMZ←CIP收藏时间：2016/6/15原始编号：CDC 604-77原产国：法国资源归类编码：15131122105模式菌株：模式菌株主要用途：分类；研究特征特性：双倍乳糖胆盐培养基中44.5℃培养不生长。在伊红美蓝琼脂培养基上的菌落白色至浅粉色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润。16S rRNA 基因序列号：AB004748；rpoB 基因序列号：JX425263；infB 基因序列号：JX425133；gyrB 基因序列号：JX425004；atpD 基因序列号：JX424874。具体用途：分类学研究、抗菌防腐剂试验研究。生物危害程度：三类培养基编号：CM0847培养基名称：胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）(CAIQ0701)培养基成分：胰蛋白胨 15.0g，大豆胨 5.0g，氯化钠 5.0g，琼脂 13.0 g，蒸馏水 1.0L，pH7.3±0.2。培养温度：30℃需氧类型：好氧分离基物：小便采集地：法国克莱蒙费朗保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：分类学研究、抗菌防腐剂试验研究。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基* 营养琼脂培养基（NA）* 胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）* LB 培养基（以上三款培养基任选一种即可） 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，酿酒酵母菌组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 六、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间；若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后 2 个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   SW1271人肺腺癌贴壁细胞系的培养操作规程！ 一、背景 SW1271人肺腺癌贴壁细胞系是一种来源于人肺腺癌的贴壁细胞系。它是一种体外培养的肿瘤细胞系，可用于研究肺癌的发生、发展和治疗。 SW1271人肺腺癌贴壁细胞系的特点是具有高度的贴壁生长能力，能够在培养皿中形成紧密的单层细胞。此外，它还具有多药耐药性，即对多种化疗药物具有抵抗力。因此，SW1271细胞系在肺癌研究中具有重要的应用价值。 二、SW1271人肺腺癌贴壁细胞系细胞培养操作 1)复苏SW1271人肺腺癌贴壁细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)SW1271人肺腺癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)SW1271人肺腺癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 SW1271人肺腺癌贴壁细胞系可以用于硫化氢调控人肺腺癌细胞增殖、迁移及血管生成机制的研究： 检测了人肺腺癌组织和相邻癌旁组织中内源性硫化氢合成酶的表达情况。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和western blot实验结果显示,30对肺腺癌组织临床样本中3种硫化氢合成酶CBS、CSE和MPST的表达量显著高于癌旁组织。其中,CBS和CSE的表达水平与肺腺癌肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移程度有明显相关性,而MPST的表达水平主要与肿瘤大小有关。体外结果同样表明,SW1271人肺腺癌贴壁细胞系、肺腺癌A549、95D和NCI-H1395细胞中硫化氢合成酶以及H2S含量明显高于正常肺上皮BEAS-2B细胞。 本文选择H2S含量最多的A549细胞系和SW1271人肺腺癌贴壁细胞系进行后续实验。其次,以硫氢化钠(NaHS)作为H2S供体,通过MTT实验检测NaHS对A549细胞的作用。实验结果表明,低浓度的外源NaHS(0-50μM)可促进A549细胞增殖,而2000μM浓度的NaHS则显著促进A549细胞凋亡。选取与H2S在体内含量近似的50μM NaHS作为实验浓度刺激A549细胞24小时。 结果显示,该浓度可显著促进A549细胞增殖、迁移和侵袭,加快肿瘤上皮间质转化(EMT)过程。采用化学抑制剂和小干扰RNA(siRNA)基因沉默手段分别对肺腺癌中主要产生H2S的CBS和CSE进行抑制。结果表明,化学抑制剂氨基氧乙酸(AOAA)和DL-炔丙基甘氨酸(PAG)都能显著抑制细胞增殖,并将细胞周期阻滞在G2/M期,促进细胞凋亡;同时抑制细胞划痕愈合、transwell侵袭及EMT过程。上述结果在siRNA基因沉默实验中得到进一步验证。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  ATCC 4978 球形赖氨酸芽孢杆菌 百欧博伟生物 球形赖氨酸芽孢杆菌是Lysinibacillus属的微生物，原产地为中国。细胞呈直杆状，常以成对或链状排列，具圆端或方端。主要用途为分类；研究；教学。 一、菌种简介平台编号：Bio-82879规格：Freeze-Dried拉丁属名：Lysinibacillus Sphaericus菌株名称：球形赖氨酸芽孢杆菌用途：ATCC原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Lysinibacillus sphaericus 拉丁名(ATCC? 4978?) 统一编号Deposited As Bacillus rotans Roberts Strain Designations 别名 NRS 633 Biosafety Level 生物安全等级 1 Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country. Product Format 提供形式 freeze-dried Preceptrol? no Type Strain 模式菌种 no Medium 培养基 ATCC? Medium 3: Nutrient agar or nutrient broth Growth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 30.0°C Name of Depositor 寄存人 NR Smith References 参考文献 Roberts JL. A new species of the genus Bacillus exhibiting mobile colonies on the surface of nutrient agar. J. Bacteriol. 29: 229-236, 1935. Smith NR, et al. Aerobic spore forming bacteria. US Dep Agric Monogr 16: 1-148, 1952. Smith NR, et al. Aerobic mesophilic spore-forming bacteria. U.S. Dep. Agric. Misc. Publ. 559: 41, 1946. The genus Bacillus, Agriculture Handbook 427. Washington, DC: ARS/USDA; 1973. Ahmed I, et al. Proposal of Lysinibacillus boronitolerans gen. nov. sp. nov., and transfer of Bacillus fusiformis to Lysinibacillus fusiformis comb. nov. and Bacillus sphaericus to Lysinibacillus sphaericus comb. nov. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 57(Pt 5): 1117-1125, 2007. PubMed: 17473269 三、形态特征球形赖氨酸芽孢杆菌，细胞呈直杆状，常以成对或链状排列，具圆端或方端。细胞染色大多数在幼龄培养时呈现革兰氏阳性，以周生鞭毛运动。每个细胞产一个芽孢，能适应许多不良环境。好氧或兼性厌氧。化能异养菌，具有发酵或呼吸代谢类型。通常接触酶阳性。 四、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用；2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压；3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境；4、复活迅速,可在短期内成为优势种群；5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境；6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 五、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 六、微生物菌种的培养1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                    小鼠脑微血管内皮细胞株的特点与应用及培养操作！ 一、背景 小鼠脑微血管内皮细胞株是一种用于实验研究的细胞系，来源于小鼠的脑微血管内皮细胞。这些细胞通常被用于研究脑微血管的功能和疾病，以及进行药物筛选和实验验证等。 小鼠脑微血管内皮细胞株的获取和培养需要一定的技术和设备支持，建议在专业的实验室或科研机构进行。同时，由于这些细胞系具有一定的特殊性和差异性，其使用和实验结果也需要根据具体情况进行评估和分析。 鼠脑微血管内皮细胞株是一种来源于小鼠脑部微血管内皮细胞的细胞系。这些细胞通常在体外培养条件下生长和繁殖，并可以用于研究脑血管疾病的发生机制、药物筛选和治疗等。 二、小鼠脑微血管内皮细胞株具有以下特点 形态特征：小鼠脑微血管内皮细胞株呈多边形或长方形，大小不一，通常有较多的突起和伪足。 生长特性：小鼠脑微血管内皮细胞株生长迅速，可以在体外培养条件下持续传代。 耐药性：小鼠脑微血管内皮细胞株对多种化疗药物具有耐药性，这使得它成为研究脑血管疾病耐药性的重要工具。 应用前景：小鼠脑微血管内皮细胞株在脑血管疾病的诊断、治疗和预防方面具有广阔的应用前景。 三、小鼠脑微血管内皮细胞株培养操作 1)复苏小鼠脑微血管内皮细胞株：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)小鼠脑微血管内皮细胞株传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)小鼠脑微血管内皮细胞株冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 四、应用 小鼠脑微血管内皮细胞株可以用于小鼠神经细胞中CBS催化生成的H2S对脑微血管内皮细胞增殖、迁移和形成血管的影响及与VEGFR2的关系： 在体外观察了神经元CBS催化产生的H2S对小鼠脑微血管内皮细胞株的增殖、迁移和形成血管的影响,并初步探讨了其作用与VEGFR2的关系。 目的： 1、观察H2S对小鼠脑微血管内皮细胞株增殖迁移的作用。 2、探讨VEGFR2与H2S促进小鼠脑微血管内皮细胞株增殖迁移作用的关系。 3、探讨细胞内游离Ca2+浓度与H2S促进内皮细胞增殖迁移作用的关系。 4、观察H2S对内皮细胞血管生成的影响。 方法： 1、进行三种细胞株的传代培养,利用Transwell系统将小鼠海马神经细胞(HT22细胞)与小鼠脑微血管内皮细胞株(b End.3细胞)进行共培养。 2、采用siRNA小干扰技术,建立细胞转染模型。 3、CCK-8法检测小鼠脑微血管内皮细胞株的增殖。 4、细胞划痕法和Transwell法检测小鼠脑微血管内皮细胞株的迁移。 5、甲基蓝法检测共培养体系内H2S的含量。 6、钙荧光成像法检测小鼠脑微血管内皮细胞株胞内游离Ca2+浓度。7.血管生成实验检测H2S对内皮细胞成管能力的影响。 实验结果： 1、CCK-8实验结果表明与溶媒对照组比较,加入H2S供体Na HS(1×10-8～1×10-3.5 M)培养24 h时,小鼠脑微血管内皮细胞株b End.3细胞和人脐静脉内皮细胞HUVEC细胞增殖有明显的增强(P 2、细胞划痕实验中,与溶媒对照组相比,Na HS(1×10-6～1×10-3.5 M)加入24 h可明显并呈浓度依赖性地增加小鼠脑微血管内皮细胞株b End.3细胞和HUVEC细胞的迁移面积(P 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                       微生物的筛选与鉴定方法总结及误区解析！ 一、微生物的筛选方法 1、单菌落挑取法：利用平板划线法或稀释涂布平板法接种在固体培养基表面，根据目的微生物特定的菌落特征，利用单菌落挑取的方法挑选目的微生物 2、选择培养法：利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接筛选目的微生物  3、鉴定培养法：利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物 4、根据功能可分为选择培养基和鉴别培养基。 二、微生物的鉴别方法 1、菌落特征鉴别法:根据微生物在固体平板培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别  2、指示剂鉴别法:如在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种微生物后，若培养基变红说明该种微生物能够分解尿素  3、染色鉴别法:如在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入刚果红，培养某种微生物，若培养基中出现以菌落为中心的透明圈，说明该微生物能分解纤维素 三、走出微生物培养的4个误区 (1)不是所有微生物培养基中均需加入特殊营养物质。碳源、氮源、水分、无机盐是微生物生长必需的四大营养成分，有些微生物可自行合成特殊营养物质，而对那些合成能力有限或不能合成特殊营养物质的微生物(如乳酸菌)，则需在培养基中添加诸如维生素等物质。 (2)稀释涂布平板法统计样品中菌落的数目往往比实际数目“低”。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。而显微计数法由于不能区分死菌与活菌，故所得数值可能比实际值“偏高”。  (3)平板划线法只适用于微生物的提纯，不适用于微生物的计数，并且在最后一次划线的末端处的菌种最纯。 (4)倒平板的温度一般在50℃左右适宜，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。平板冷却凝固后需倒置，防止皿盖上的水珠落入培养基，造成培养基污染。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

               RSMC大鼠主动脉平滑肌细胞的性质与用途及生产工艺！ 一、细胞简介平台编号：Bio-133338规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：RSMC细胞名称：大鼠主动脉平滑肌细胞生长特性：贴壁生长培养体系：平滑肌细胞培养基，传代方法：1：2传代冻存条件：无血清细胞冻存液保存条件：＞85%用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞描述本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 三、细胞特性产品类别：大鼠细胞系生长特性：贴壁生长培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS传代方法：1：2传代细胞形态：上皮细胞样冻存条件：无血清细胞冻存液保存条件：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 　　四、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 五、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  新港沙门氏菌PCR试剂盒的知识与应用及操作步骤！ 一、背景 新港沙门氏菌PCR试剂盒是一种用于检测新港沙门氏菌的生物试剂，采用PCR技术进行检测。该试剂盒具有高灵敏度、特异性强、操作简便等特点，可用于科研实验、临床检测等领域。 使用新港沙门氏菌PCR试剂盒可以快速、准确地检测新港沙门氏菌，对于该菌引起的食物中毒、感染等的诊断和治疗具有重要意义。 新港沙门氏菌PCR试剂盒是一种用于检测新港沙门氏菌DNA的PCR试剂盒。该试剂盒通常包括以下成分： PCR反应液：包括PCR缓冲液、dNTPs、引物、Taq聚合酶等。 标准品：用于定量检测新港沙门氏菌DNA的浓度。 阴性对照：用于排除假阳性结果的可能性。 阳性对照：用于确认试剂盒的准确性和可靠性。 使用新港沙门氏菌PCR试剂盒时，首先需要提取样本中的DNA，然后将提取的DNA加入到PCR反应液中进行扩增。通过检测扩增产物的荧光信号强度，可以确定样本中是否存在新港沙门氏菌DNA。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，适用于临床诊断和流行病学调查等领域。 二、新港沙门氏菌PCR试剂盒的操作步骤如下 1、样本采集：从体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。 2、DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。 3、PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。 4、PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。 5、结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在新港沙门氏菌的感染。 三、应用 新港沙门氏菌PCR试剂盒可以用于沙门氏菌荧光PCR快速检测方法的建立与应用： 研究采用分子信标技术和TaqMan-MGB技术，建立了两种针对沙门氏菌的新港沙门氏菌PCR试剂盒特异性荧光PCR检测方法，并初步运用于临床诊断和食品污染调查。 实验结果如下： 1、新港沙门氏菌PCR试剂盒沙门氏菌荧光PCR检测体系的建立(1)研究6种增菌液对荧光PCR反应的影响，选择SC(亚硒酸盐胱氨酸)增菌液为最佳培养沙门氏菌的增菌液。建立快速简便的样品前处理方法。(2)根据沙门氏菌属特异性基因invA设计了四对引物，并和Rahn设计的引物同时检测大量沙门氏菌及非沙门氏菌菌株，选用了其中一对特异性最强的新引物。(3)在这对引物间选择一段寡核苷酸序列，两端分别用FAM和MGB标记，优化反应条件，建立沙门氏菌TaqMan-MGB检测方法。(4)在这对引物问选择另一段寡核苷酸序列，两端各加上6bp互补的寡核苷酸形成分子信标，优化反应条件，建立沙门氏菌分子信标检测方法。 2、沙门氏菌荧光PCR检测体系的评价(1)特异性：用这两种新港沙门氏菌PCR试剂盒荧光PCR方法分别检测200株沙门氏菌属菌株，均呈阳性；检测200株非沙门氏菌属菌株，均呈阴性。(2)灵敏度：以鼠伤寒沙门氏菌为实验菌株(40循环)。对于DNA抽提物，TaqMan-MGB方法的检出限为69fg／PCR体系，分子信标方法的检出限为346fg／PCR体系；对于菌液，TaqMan-MGB方法和分子信标方法的检出限均为2cfu／PCR体系；对于食品样品，TaqMan-MGB方法和分子信标方法的检出限均为2cfu／25g样品。(3)抗干扰性：反应不受其他杂菌的干扰，食品样品经处理后对反应无影响。(4)重复性：平行实验的结果一致性高，可重复性强。 3、新港沙门氏菌PCR试剂盒沙门氏菌荧光PCR检测体系的应用(1)对深圳市肉菜市场的生肉、熟食进行抽查，200份生肉样品中，荧光PCR方法和传统方法均为阳性的为32份，荧光PCR阳性而传统方法阴性的为33份。(2)对食品从业人员的肛拭子调查中，300份样品用荧光PCR方法和传统方法均有3份检出阳性，符合率100%。(3)细菌性食物中毒的快速诊断:45份样品用荧光PCR方法和传统方法均检出28份沙门氏菌阳性，符合率100%。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    农用微生物菌剂：真正做到花小钱解决大问题！ 百欧博伟生物：近年来，环保高效的微生物菌剂在行业中越来越受到重视，它在改良土壤和生物防治两方面表现出了优异的成绩，在发展生态农业中意义重大。 那微生物菌剂究竟有那些作用呢？ 农业高速发展的这些年，人们为了追求高产，大量使用化肥和农药，这导致土壤污染和退化问题及病虫的抗药性问题越来越严重，使用再多的化肥和农药都不能达到相应的效果，造成生产成本大幅上升，也使得农业生态进入恶性循环。 而微生物菌剂虽然不是肥料和农药，但它的效果却胜过肥料和农药。 这是为什么呢？ 微生物菌剂是各种有益微生物的集合，有益微生物能够通过提高土壤肥力、改善土壤理化性质、吸收重金属及降解农药残留等作用来改良土壤，也可以通过营养竞争、空间竞争、分泌次生代谢物质等作用来抑制植物病、虫、草害的发生，具有生物防治的功能。 第一，改善土壤，提高养分利用率。 微生物菌剂中的有益菌大多能够分解土壤中的有机质，促进团粒结构的形成，改善土壤物理性状；有些有益菌通过分泌活性物质来活化土壤中的磷元素，也能通过分解有机质产生腐殖酸来固定氮素和钾素，分泌铁载体螯合土壤铁元素，增加土壤肥力，提高养分利用率，减少资源浪费。 第二，促进作物生长，改善果实品质。 微生物菌剂中的有益菌可以通过分泌植物激素来促进作物根系生长，增加作物对水分和养分的吸收能力，显著促进作物生长，提高果实产量和品质。 第三，以菌抑菌，有效防病。 农业生产与微生物息息相关，很多农作物的病害都是由各种有害菌导致，而微生物菌剂中的有益微生物可以通过产生抗生素抑制植物病原菌的繁殖和生长；通过在根际土壤和作物体内外的定殖和大量繁殖从而占据生态空间来减少病原菌的入侵和繁殖；通过诱导激活作物自身防御系统来帮助作物抵抗病原菌及线虫等的侵害。 此外，还可以通过分泌水解酶、多糖酶等物质直接杀死病菌，通过释放信号物质调控微生物的群体感应等等作用，来达到以菌抑菌、有效防病的效果。 而且，微生物菌剂对于致病菌和害虫不会产生抗药性，生物防治效果更好。 微生物菌剂的作用远不止于此，是真正可以做到花小钱解决大问题的产品。 微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！ 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到Z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得Z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    巨细胞病毒的致病性与免疫性及防治与预防！ 巨细胞病毒(Cytomegaoviyns，CMV)是一种疱疹病毒组DNA病毒。分布广泛，其他动物皆可遭受感染，引起以生殖泌尿系统，中枢神经系统和肝脏疾患为主的各系统感染，从轻微无症状感染直到严重缺陷或死亡。巨细胞病毒(CytomegalovirusCMV)亦称细胞包涵体病毒，由于感染的细胞肿大，并具有巨大的核内包涵体，故名。 CMV在人群中感染非常广泛，我国成人感染率达95%以上，通常呈隐性感染，多数感染者无临床症状，但在一定条件下侵袭多个器官和系统可产生严重疾病。病毒可侵入肺、肝、肾、唾液腺、乳腺其他腺体，以及多核白细胞和淋巴细胞，可长期或间隙地自唾液、乳汗血液、尿液、精液、子宫分泌物多处排出病毒。通常口腔，生殖道，胎盘，输血或器官移植等多途径传播。 (一)先天性感染 妊娠母体CMV感染可通过胎盘侵袭胎儿引起先天性感染，少数造成早产、流产、死产或生后死亡。患儿可发生黄疸，肝脾肿大，血小板减少性紫斑及溶血性贫血。存活儿童常遗留永久必性智力低下，神经肌肉运动障碍，耳聋和脉络视网膜炎等。 (二)围产期感染 产妇泌尿道和宫颈排出CMV，则分娩时婴儿经产道可被感染，多数和症状轻微或无临床症状的亚临床床感染，有的有轻微呼吸道障碍或肝功能损伤。 (三)儿童及成人感染 通过吸乳、接吻、性接触、输血等感染、通常为亚临床型，有的也能导致嗜异性抗体阴性单核细胞增多症。由于妊娠，接受免疫抑制治疗，器官移植，肿瘤等因素激活潜伏在单核细胞、淋巴细胞中病毒，引起单核细胞增多症、肝炎、间质性肺炎、视网膜炎、脑炎等。 (四)细胞转化和可能致癌作用 经紫外线灭活的CMV可转化啮齿类动物胚胎纤椎母细胞。在某些肿瘤如宫颈癌、结肠癌、前列腺癌、Kaposis肉瘤中CMV DNA检出率高，CMV抗体滴度亦高于正常人，在上述肿瘤建立的细胞株中还发现病毒颗粒，提示CMV与其疱疹病毒一样，具有潜在致癌的可能性。 一、免疫性 机体的细胞免疫功能对CMV感染的发生和发展起重要作用，细胞免疫缺陷者，可导致严重的和长期的CMV感染，并使机体的细胞免疫进一步受到抑制，如杀伤性T细胞活力下降，NK细胞功能减低等。 机体原发感染CMV后能产生特异性抗体和杀伤性T淋巴细胞，激活NM细胞。抗体有限CMV复制能力，对相同毒株再感染有一定抵抗力，但不能抵抗内源性潜伏病毒的活化，及CMV其他不同毒株的外源性感染。而通过特异性杀性T淋巴细胞和抗体依赖细胞毒性细胞能发挥最大的抗病毒作用。 二、微生物学诊断 唾液、尿液、子宫颈分泌液等标本离心沉淀，将脱落细胞用姬姆萨染色镜检，检查巨大细胞及核内和浆内嗜酸性包涵体，可作初步诊断。 分离培养可将标本接种于人胚肺纤维母细胞中，由于CMV生长周期长，细胞病变出现慢，为了快速诊断，可将培养24小时的感染细胞固定，用DNA探针进行原位杂交，检测CMV DNA。 用ELISA检测lgM抗体和lgG抗体，适用于早期感染和流行病学调查。LgG抗体可终身持续存在，lgM抗体与急性感染有关。 不论是初次感染或复发感染，当病毒血症时，可用葡聚糖液提取外周血单个核细胞，制成涂片，加CMV单克隆抗体，采用免疫酶或荧光染色，检测细胞内抗原。 近年应用免疫印迹法和分子杂交技术直接从尿液，各种分泌物中检测CMV抗原和DNA是既迅速又敏感，准确的方法。 三、防治原则 丙氧鸟苷(ganciclovir DHPG)有防止CMV扩散作用。如与高滴度抗CMV免疫球蛋白合用，可降低骨髓移植的CMV肺炎并发症死亡率，如果耐丙氧鸟苷的CMV感染可选用磷甲酸钠，虽能持久地减少CMV扩散，但效果比前者差。国外研制CMV病毒活疫苗，能诱导产生抗体，但排除疫苗的致癌潜能，有待解决。 四、预防保健 (1)进行有意识的身体素质的锻炼。提高机体免疫机能及抗病能力，特别是育龄期妇女，以减少巨细胞病毒对胎儿的严重危害。 (2)对于孕妇或有慢性消耗性疾病、免疫力低下等患者要注意保护，使她们远离传染源。 (3)注意环境卫生、饮食卫生。 (4)乳汁中巨细胞病毒阳性者，不应哺乳。 (5)免疫防治，尚在研究和探索中。 CMV引起细胞内感染后，灭活疫苗无明显预防的作用。怀孕早期发现有CMV原发感染及/或羊水细胞中有CMV抗原时，应中止妊娠。减毒活疫苗可使被接种者产生抗体。并产生对CMV的细胞免疫，减少症状性CMV感染的发生。CMV高价免疫球蛋白对血清CMV阴性的骨髓移植受者的症状性CMV感染，有一定的保护作用，但不能预防再感染。在接触患儿尿液或唾液后应仔细洗手，以预防后天性CMV感染。 预防输新鲜血引起的CMV感染，可用下列方法：①使用冷冻血液或经冲洗的血液；②血液输入前须贮存48小时以上；③使用经放射线照射过的血液；④使用血液滤器除去血液中的巨细胞。 五、治疗 艾滋病人巨细胞病毒 由于CMV感染患者大多处于潜伏感染状态；即使CMV在体内复制活动，也多为无症状性感染。目前又无有效、安全的抗CMV药物，故对CMV感染的治疗，仍限于症状性感染时的对症处理；更昔洛韦因有骨髓抑制等毒副作用，因此只能在症状性感染时谨慎使用。丙氧鸟苷(ganciclovirDHPG)有防止CMV扩散作用。如与高滴度抗CMV免疫球蛋白合用，可降低骨髓移植的CMV肺炎并发症死亡率，如果耐丙氧鸟苷的CMV感染可选用磷甲酸钠，虽能持久地减少CMV扩散，但效果比前者差。国外研制CMV病毒活疫苗，能诱导产生抗体，但排除疫苗的致癌潜能，有待解决。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      临床常见非发酵菌的分布特征及耐药性分析！ 百欧博伟生物：非发酵菌是指一群不发酵糖类的革兰阴性杆菌，广泛存在于自然界中，是造成医院感染的重要病原菌之一。近年来随着介入性治疗技术的开展和新型抗菌药物的广泛应用，非发酵菌感染的发生率和耐药性都有增加的趋势，且非发酵菌普遍存在多药耐药现象，给临床治疗带来困难。为指导临床合理使用抗菌药物，作者对常见非发酵菌的临床分布特点及耐药性进行分析，现报道如下。 一、材料与方法 1、菌株来源 2006年10月至2008年6月作者所在医院住院患者送检的痰液或气管抽吸液、尿液、脓液、咽拭子、创口分泌物等各类临床标本，按法国梅里埃ATB分析系统鉴定菌种分离、培养获得的临床菌株。同一患者只统计初次分离株。 2、菌种鉴定 采用法国生物梅里埃公司ATP鉴定卡进行菌种鉴定。 向秀梅,等.临床常见非发酵菌分布特征及耐药性分析 成都医学院学报2008年12月，3(4) 3、药敏试验 采用KB纸片琼脂扩散法进行药敏试验，结果判读按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)制定(2006年版)的标准进行。培养基购自法国生物梅里埃公司，药敏纸片购自英国Oxoid公司产品。 4、质控菌株 药敏用质控菌株铜绿假单胞菌(ATCC 27853)、大肠埃希菌(ATCC25922)、金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)均购自临床检验中心。 二、结果 1、常见非发酵菌的分离率及构成比 2006年10月至2008年6月从各种临床标本中共分离出病原菌1020株，革兰阴性杆菌519株，其中非发酵菌140株，占总病原菌13.7%，占革兰阴性杆菌27%.其中列前3位的非发酵革兰阴性杆菌114株(占81.4%)，分别是铜绿假单胞菌75株(53.6% )，不动杆菌属22株(15.7%)，嗜麦芽寡养单胞菌17株(12.1％). 2、非发酵菌感染病房的分布 非发酵菌的临床分布在检出的140株非发酵菌中以呼吸科病房最多，检出53例，占37.9%；心脑血管病房检出38例，占27.1%；外科检出32例，占22.9%；其他科室检出17例，占12.1%. 3、非发酵菌感染部位的分布 在检出的140株非发酵菌中，痰液及气管抽吸液中检出94株，占67.1%；其次为脓液18株，占12.9 % ；咽拭子10株，占7.1% ；尿液8株，占5.7%；创口分泌物7株，占5%；其他标本3株，占2.1%. 4、非发酵菌的耐药率 3种常见非发酵菌对14种抗菌药物的耐药率（见表1）。表1  非发酵革兰阴性杆菌对14种抗菌药物的耐药率 三、讨论 非发酵菌是一群需氧无芽胞的G杆菌，不能利用葡萄糖作为能量来源，或者通过发酵以外的代谢途径分解利用葡萄糖。该群细菌属于条件致病菌，近年来由其所致的医院感染有增多趋势。本组140株非发酵革兰阴性杆菌所致感染中列前3位的非发酵革兰阴性杆菌114株占81.4%，比国内有关文献报道73.78%稍高，其中铜绿假单胞菌占53.6%，不动杆菌属占15.7%，嗜麦芽寡养单胞菌占12.1%.临床感染的病原菌主要来自痰、分泌物及中段尿等标本，其中痰的分离率最高，而且来自呼吸科的标本占37.9%，提示本院临床感染主要是以呼吸道感染为主。分析这些临床资料发现，大部分患者年老体衰、呼吸道分泌功能减退，纤毛运动减弱，不能及时排痰；并长期使用广谱抗菌药物后破坏了正常菌群维持的生态平衡，使得耐药性高的非发酵菌定植生长，这可能是非发酵菌在呼吸道标本中分离率高于其他标本的主要原因。不合理的使用抗菌药物、各种侵袭性检查和治疗、住院时间过长，以及机体免疫力低下是致病主要因素。 从监测结果来看，3种非发酵革兰阴性杆菌除表现为较高程度的单药耐药性和多重耐药性外，对不同抗菌药物的耐药性差异也存在统计学意义，同一种抗菌药物对不同3种非发酵革兰阴性杆菌耐药性也不一致。本次研究资料表明，非发酵菌占革兰阴性杆菌的27%，明显高于Sahm 等报道的20.13%，说明在医院感染的病原菌中非发酵菌占重要地位。非发酵革兰阴性杆菌所致的医院感染中以铜绿假单胞菌为多，其对三代头孢耐药率分别在37%～59%；高于国内相关报道的15.30%，说明其耐药率有逐年增加趋势。对铜绿假单胞菌一般感染可经验用药含酶抑制剂复合抗菌药物哌拉西林／他唑巴坦和替卡西林/棒酸；对重症感染首选亚胺培南及美罗培南。不动杆菌属对亚胺培南和美罗培南的耐药率为9%和5%，因此，亚胺培南和美罗培南可作为临床不动杆菌属感染的首选经验药物。但不动杆菌属对三代头孢和四代头孢的耐药率分别在41%～59%.嗜麦芽寡养单胞菌虽然分离率较铜绿假单胞菌和不动杆菌属低，但其耐药性较高；嗜麦芽寡养单胞菌由于天然产金属酶，面对碳青酶烯类和许多β内酰胺类耐药，治疗这种菌除了用哌拉西林／他唑巴坦和替卡西林/棒酸，还可以选用左氧氟沙星；对于嗜麦芽寡养单胞菌感染控制的关键在于预防。临床高度怀疑嗜麦芽寡养单胞菌感染，不宜使用碳青酶烯类，可选用加酶抑制剂的抗菌药物或氟喹诺酮类，待细菌药敏试验结果报告后再结合临床治疗反应调整治疗方案。由于非发酵菌感染呈逐年上升趋势，增加了临床抗感染治疗的难度，因此临床在治疗非发酵菌感染时应根据实验室的药敏结果合理用药，避免滥用抗菌药物，这对控制医院感染具有重要意义。加强医院环境和人员消毒，控制非发酵病原菌在医院内的定值与播散就更为重要了。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    皱膜假丝酵母的菌株培养与实验内容及保藏方法！ 皱膜假丝酵母是Candida属的微生物，原产地为日本。属子囊菌门，酵母纲，酵母目。主要用途为分类学研究，具体用途为模式菌株。 一、菌种简介平台编号：Bio-07943提供形式：冻干物拉丁属名：Candida Rugopelliculosa中文译名：皱膜假丝酵母拉丁学名：Candida rugopelliculosa原始编号：CBS 6377菌株来源：←CBS保藏人：白逢彦直接来源国家：荷兰保藏时间：7/1/1996其他保藏编号：=ATCC 24119 =CCRC 21642 =IFO 1577 =JCM 1593 =NRRL Y-17079生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株培养温度：25-28℃培养基：0013    分离源：大豆蛋白工厂采集国家：日本用途：模式菌株注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！