苹果盘二孢菌的病原特征与传播途径及防治措施！ 苹果盘二孢菌是Diplocarpon属的微生物，原产地为中国。分生孢子盘长，色浅，分生孢子双胞无色，基细胞小，尖，顶细胞大钝圆。主要用途为研究；教学，具体用途为植物病原物，用于该病的防治研究。 一、产品信息平台编号：Bio-19798 规格：培养物 拉丁属名：Diplocarpon Mali 中文名称：苹果盘二孢菌拉丁属名：Diplocarpon种名加词：mali Y. Harada & Sawamura收藏时间*：2007-6-20来源历史：北京林业大学转原产国：中国资源归类编码：15151500000模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；教学具体用途：植物病原物，用于该病的防治研究特征特性：分生孢子盘长，色浅，分生孢子双胞无色，基细胞小，尖，顶细胞大钝圆生物危害程度：四类寄主中文名称：苹果树致病对象：植物分离基物：苹果叶片采集地区：陕西武功采集具体地点：果园培养基信息：培养基编号: 14 培养基名称: PDA培养温度：25资源保护类型：培养物保藏方法：定期移植法共享方式：合作研究共享提供形式：斜面培养物实物状态：有实物用途：植物病原物，用于该病的防治研究 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、病原特征褐斑病菌无性世代产生菌素，多分枝，粗20～40μm，细胞深褐色，菌索交叉点上方着生分生孢子盘；大小108～306×45～50μm，成熟后突破表皮外露。分生孢子梗无色、单生、圆柱形，大小15～20×3～4μm，栅状排列，顶生分生孢子。分生孢子无色、双胞、中间缢缩，上胞大且圆，下胞小而尖，呈葫芦状，大小14～20×5～9μm，内含2～4个油球，偶生少数单胞的分生孢子混生在一起。拟分生孢子盘灰白色，虫粪状，吸水膨胀后涌出大量拟分生孢子，散布于病斑表面。子囊盘肉质，钵状，大小105～200×80～125μm，子囊阔棍棒状，具囊盖，大小40～49×12～14μm，内含8个子囊孢子。子囊孢子香蕉形，一端稍弯曲，通常具一隔膜，大小24～30×5～6μm。 三、症状叶片染病，初发生在树冠下部和内膛叶片上，初现直径0.2～0.5mm单生或数个连生的褐色小点，后扩展为三种病斑。一是同心轮纹型：初发病叶面现黄褐色小点，渐扩大为直径10～25mm圆形病斑，中心暗褐，四周，具绿色晕圈，中央产生肉眼可见轮纹状排列的黑粒点，即病菌分生孢子盘；病斑背面中央深褐色，四周浅褐色，有时老病斑的中央灰白色。国光、青香蕉和白龙等多属这一类型。二是针芒型：病斑小，呈针芒放射状向外扩展，无固定形状，微隆起。后期叶片渐黄，病部周围及背部仍保持绿褐色。病斑较轮纹斑小。沙果、山荆子、海棠等多属这一类型。三是混合型：病斑暗褐色，较大，近圆形或不规则形，其上散生黑色小点，不呈明显的轮纹状；后期病斑中央灰白色，边缘绿色，有时病斑边缘呈针芒状。红玉、金冠、元帅、红星、祝光等多属这种症状。越冬和越夏：以菌丝、分生孢子盘或子囊盘在落地的病叶上越冬，经春产生拟分生孢子和子囊孢子，借风雨传播，从叶的正面或背面侵入，以叶背锚主，潜育期6～12天，干旱年份长达45天，潜育期随气温升高缩短。病菌从侵入到引起落叶约13～55天，田间5～6月始发，7～8月进入盛发期，10月停止扩展。 四、传播发病该病的发生、流行与雨水、树势、栽培管理及品种有关。病菌发育适温20～25℃，分生孢子发芽适温20～25℃。分生孢子的传播和侵入需有水，冬季温暖潮湿是病叶与落叶上子囊盘形成的必要条件，冬季不干、春雨早且多的年份有利病害发生流行，特别是春秋雨季提前且降雨量大的年份，病害大流行。从树势、树龄来看，同一品种的幼树较老树抗病；同一株树的当年结果枝发病率较歇果枝高，树冠内膛下部比外部、上部发病早且多，这可能与树冠内部、下部荫蔽、通风透光差、湿度大有关。寄主品种抗性：苹果各品种中，红玉、富士、金帅、倭锦、香蕉、元帅、红星、国光易感病；鸡冠、祝光、大珊瑚、翠玉较抗病；小国光抗病。 五、地理分布全国各苹果产区 六、防治措施加强栽培管理，增强树势，提高树体抗病力。土壤黏重或地下水位高的果园要注意排水，保持适宜的土壤含水量；合理修剪，使树冠通风透光，以减轻病害发生；清除越冬菌源。秋末冬初清除落叶，集中烧毁；药剂防治：可用1：2：200倍式波尔多液或30%绿得保胶悬剂300～500倍液、36%甲基硫菌灵（甲基托布津）悬浮剂500倍液、70%代森锰锌可湿性粉剂500～600倍液、50%混杀硫悬浮剂500～600倍液、50%扑海因可湿性粉剂1000～1500倍液、10%宝丽安可湿性粉剂1000～1500倍液、64%杀毒矾可湿性粉剂500～600倍液、80%抗菌剂402乳油800～1000倍液、60%防霉宝超微粉（多菌灵盐酸盐）600～800倍液、50%甲基硫菌灵·硫磺悬浮剂800倍液。喷药时间可根据发病期确定，一般可在花后结合防治白粉病或食心虫喷第一次药，以后隔20天1次，连续防治3～4次。喷药时加0.5～1%大豆汁、“6501”粘着剂1000倍液或皮胶3000～4000倍液，可增加药液飘着力，提高药效；加强贮藏期管理。入窖前严格剔除病果，控制好窖内温度与湿度。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 微生物知识分享：发酵，传承千年的微生物力量！ 百欧博伟生物：传承数千年的传统发酵食品是中华饮食文化的重要载体。世界上绝大多数人每天都在享用着发酵食品，或许是你正在吃着的包子，或许是手里端着的咖啡——包子从面团发酵而成，咖啡豆的处理过程也离不开发酵。 在冰箱和现代灭菌技术发明之前，人类主要依靠风干、腌制和发酵3种方式用于延长食物的保存时间，但是风干易使食物因脱水而变硬；腌制因大量使用盐分易使食物变得过咸。发酵则是通过微生物的生长和食品成分的酶转化，微生物进行繁殖并形成绝对数量优势，进而抑制其他有害菌的生长。较之前两者，发酵食品具有更美味、更营养、更安全、更长期保存的特点。 发酵现代化的关键历史事件： 1、公元前 10,000 年：发生自发的乳制品发酵 在公元前10,000年之前，人类主要以狩猎和采集为主要的食物来源。然而，当人类开始定居并开始农业生产时，他们开始驯化动物，其中包括奶牛、山羊和其他奶制品动物。这一时期的农业为人类提供了更加稳定和可预测的食物来源，同时也为奶制品的发酵创造了条件。 自发的乳制品发酵是一个复杂的过程，它涉及到微生物的作用。当奶制品暴露在自然环境中时，空气中的细菌和酵母开始对奶制品中的糖类进行发酵。这一发酵过程产生了乳酸和其他有益的化合物，不仅增加了食物的保质期，还赋予了奶制品特殊的风味和口感。酪乳、酸奶、开菲尔、酸奶油和奶酪是益生菌含量最高的乳制品。 值得一提的是，乳制品的发酵也在一定程度上影响了人类社会的文化和宗教信仰。在许多文化中，乳制品被视为神圣的食物，与神话传说和宗教仪式紧密相连。乳制品的发酵过程也成为了一种传统技艺，代代相传，成为了各个文化的骄傲。 公元前10,000年发生的自发的乳制品发酵事件，不仅改变了人类的饮食习惯，还对人类社会和文化产生了深远的影响。这一事件标志着人类社会向更加复杂和多样化的食物生产和消费模式的转变，同时也为人类社会的进步和发展奠定了坚实的基础。 2、公元前7000年：中国古代文明开始酝酿 2004 年，考古学家通过对可追溯到公元前 7,000 年的新石器时代中国陶器进行化学测试，发现了世界上最古老的酿造饮料。这种酿造指的是人们利用发酵来制作食物和饮料，比如发酵大米制作米酒，发酵豆类制作豆腐和酱油等。这些发酵食品不仅丰富了人们的饮食，还为中国的饮食文化奠定了基础。 同时，发酵也被应用于其他方面，比如在医药领域，人们开始利用发酵来制作药物，比如发酵大蒜制作蒜泥，发酵黄酒制作黄酒等。这些发酵技术的发展为中国的医药和食品产业打下了基础。 比之前在伊朗发现的最古老的酿造证据的记录早了近 1500 年。古代饮料中的成分仍然存在于现代酒精饮料中：发酵水果用于酿酒，发酵米用于清酒，发酵蜂蜜用于蜂蜜酒。 3、公元前 3,500 至 300 年：古埃及人完善了发酵面包的艺术 古埃及位于尼罗河流域，这里的土壤肥沃，气候适宜，非常适合小麦的种植。古埃及人开始意识到小麦的重要性，并逐渐将其种植和加工工艺发展到了一个新的高度。在这个过程中，他们发现了发酵面包的制作方法，这成为古埃及人饮食文化的重要组成部分。 面包是古埃及饮食中的主食，提供富含维生素、矿物质、蛋白质和淀粉的营养来源。发酵面包的制作过程需要面粉、水和发酵剂。古埃及人使用酵母和发酵剂来制作面包，这使得面包变得更加松软和美味。他们还在面包中添加了各种香料和坚果，使得面包的口感更加丰富多样。这些技艺的发展不仅提升了古埃及人的饮食享受，也为他们的社会生活增添了色彩。 4、公元前 2,000 年：黄瓜被腌制 黄瓜腌制的历史渊源可以追溯到古代的美索不达米亚地区，当时人们开始利用盐水和醋来保存食物，其中黄瓜成为了其中的一种重要食材。古代人们发现，将黄瓜放入盐水中腌制，不仅可以延长其保存时间，还可以增加风味。这种古老的腌制技艺逐渐传播到欧洲和亚洲其他地区，成为当时人们饮食生活中不可或缺的一部分。 在不同的文化中，黄瓜腌制技艺也得到了独特的发展。在中国，腌制黄瓜通常使用盐腌或者酱腌的方式，不同地区还有各自的特色口味和配方。在东欧国家，如波兰、俄罗斯等地，腌制黄瓜被视为传统美食，人们在夏季采摘新鲜黄瓜后，会用盐水和香料腌制成为美味的小食。而在地中海地区，黄瓜腌制通常会加入橄榄油、香草和蒜等调料，形成独特的地中海风味。 随着时间的推移，黄瓜腌制技艺也在不断演变和创新。在当代，人们在传统的黄瓜腌制工艺基础上，结合现代科技和工艺，开发出了更多种类的腌制黄瓜产品。比如，醋泡黄瓜、甜腌黄瓜、泡菜黄瓜等，不仅口味多样，而且更加符合现代人的口味需求。此外，黄瓜腌制也成为了一种特色小吃，受到了许多人的喜爱。在餐桌上，黄瓜腌制不仅可以作为开胃菜，还可以作为配菜，为人们的饮食生活增添了更多的选择。 虽然中国古代文化以倡导蔬菜发酵而闻名，但大约 1700 年前中东地区的黄瓜酸洗技术真正打开了大门。从那时起，泡菜取得了长足的进步，成为世界各地许多家庭的主食。由于发酵，泡菜可以增加抗氧化剂的摄入量，喝泡菜汁可以帮助平衡电解质和缓解肌肉痉挛。 5、公元前500年：中国人使用发霉的大豆作为抗生素 公元前500年，中国人开始使用发霉的大豆作为抗生素，这一发现在当时无疑是医学史上的一大突破。这一发现不仅展示了中国古代医学的卓越成就，也为后世的医学研究和发展提供了宝贵的经验和启示。 在当时的中国，人们对草药和自然疗法有着深厚的了解和丰富的经验。因此，他们对植物和食物的利用也相当熟练。据史书记载，古代中国人发现了发霉的大豆具有治疗感染性疾病的功效。他们将发霉的大豆加工成药物，用于治疗感染性疾病，这一做法在当时被认为是一种奇迹。 发霉的大豆所含的青霉素是一种强效的抗生素，能够有效地抑制细菌的生长，从而治疗感染性疾病。这一发现不仅在当时解决了人们面临的医疗难题，也为后世的医学研究提供了重要的启示。青霉素的发现和应用，为人类的医学事业带来了性的变革，也为后世的抗生素研究和开发奠定了重要的基础。 中国古代医学的这一伟大成就，不仅展现了古代中国人民对自然的深刻理解和对医学的卓越贡献，也为世界医学史上的发展留下了浓墨重彩的一笔。这一发现的影响不仅局限于古代，而是在后世的医学研究和发展中发挥了深远的影响，成为医学史上的一大奇迹。 6、公元前200年：茶叶发酵 茶叶发酵的历史可以追溯到中国古代，公元前200年左右，茶叶开始被人们发现并使用。产生了广受欢迎的、对肠道有益的饮料康普茶。茶、糖、细菌和酵母的混合物发酵一周，制成这种略带甜味、略带醋味、起泡的饮料。根据酿造的不同，大多数康普茶都富含抗氧化剂、矿物质、B 族维生素和益生菌。尽管如此，明智地选择康普茶还是很重要的，所以选择低糖含量和天然提取的调味品。 在早期，茶叶的发酵过程并不像现代那样精确，而是通过自然条件下的发酵来实现。茶叶在发酵的过程中，叶中的化学成分会发生变化，从而赋予茶叶独特的风味和香气。这种发酵过程不仅提高了茶叶的口感，也为茶叶的保存和运输提供了更多的可能性。 茶叶发酵的历史不仅仅是一项技术进步，更是一种文化传承和生活方式的体现。在中国古代，茶叶被视为一种重要的饮品，不仅在宫廷和贵族社会中流行，也渗透到了民间生活中。茶文化在中国的发展过程中，茶叶的发酵工艺也得到了不断的完善和提升，从而形成了独特的茶文化和茶道。 7、公元 500 至 1,000 年：谷物-豆类发酵走向全球 谷物-豆类发酵可能是历史发酵阶段中最具爆炸性的阶段。谷物——小麦、大米、黑麦、燕麦、大麦、玉米和高粱——以及豆类——豆类、豌豆和扁豆——的多样性导致了世界各地生产的各种发酵产品。谷物和豆类单独提供足够的营养来源，但发酵后，它们的营养密度会增加，使这些作物非常适合实现营养丰富的饮食。 谷物和豆类发酵食品对人类社会产生的深远影响。首先，发酵食品的出现使得人们能够更好地保存食物，这对于当时的社会来说具有重大意义。其次，发酵食品的出现丰富了人们的饮食，提高了饮食的多样性和营养价值。此外，发酵食品也在一定程度上影响了当时的社会结构和经济发展。例如，酿酒和面包的生产成为了当时社会中重要的产业之一，推动了当时的商业和贸易活动。因此，可以说谷物和豆类发酵食品在这一时期对人类社会产生了深远的影响，促进了社会的发展和进步。 8、1856 年：Louis Pasteur 用显微镜观察微生物 Antonie van Leeuwenhoek 于 1665 年首次发现微生物，为法国科学家 Louis Pasteur 在近 200 年后拼凑其余微生物奠定了基础。1856 年，巴斯德发现发酵需要活细胞，而酵母在这一过程中起着至关重要的作用。他与热相关的实验后来被用于巴氏杀菌的发展。 巴斯德的发现也为微生物学的发展铺平了道路。通过观察微生物的形态和结构，科学家们逐渐揭示了微生物的生命周期、生长规律以及与环境的相互作用，为微生物学的发展提供了重要的基础。巴斯德的发现也激发了更多科学家对微生物学的研究兴趣，推动了微生物学领域的快速发展。 9、1910 年至 1935 年：细菌菌株的鉴定 1900 年代，俄罗斯细菌学家埃利·梅奇尼科夫 (Elie Metchnikoff)在发酵乳中发现了细菌菌株保加利亚杆菌。他以他研究的保加利亚文化命名该菌株，因为它们的寿命很长，尽管后来它被重新归类为嗜酸乳杆菌。耶鲁大学研究员 Leo F. Rettger 使用 Metchnikoff 的发现作为平台，发现乳酸菌菌株在人体肠道内非常活跃，为益生菌的开发铺平了道路。 在1910年至1935年期间，微生物学家们对细菌的研究日益深入，他们开始意识到细菌在人类疾病和环境中的重要作用。随着科学家们对微生物的认识不断深化，对细菌菌株进行准确鉴定的需求也日益迫切。 在这一时期，细菌菌株的鉴定技术得到了长足的发展。科学家们开始利用显微镜和培养基等工具，对细菌进行观察和分离，从而识别不同的细菌菌株。同时，他们还开发了一系列新的实验方法和技术，例如染色技术和生物化学检测方法，以帮助区分和鉴定不同的细菌菌株。 例如，柯克曼和巴尔扎克等科学家通过他们的研究和实验，对细菌菌株鉴定技术做出了重大的推动。他们的工作不仅加深了人们对细菌多样性的理解，还为后来的细菌学研究奠定了坚实的基础。 10、1970 年至今：生产益生菌 自 1970 年代以来，益生菌的生产一直是一个备受关注的话题。益生菌作为一种有益的微生物，对人体健康具有重要意义。它们被广泛应用于食品、医药和保健产品领域，对促进消化系统健康、增强免疫力以及改善整体健康起着重要作用。在过去的几十年里，随着对益生菌研究的深入和对其价值的认识不断提高，益生菌的生产技术也在不断发展和创新。 1970 年代，第一批可摄入的益生菌出现在商店货架上。虽然这是设计益生菌的第一个实例，但益生菌背后的想法并不新鲜。Metchnikoff 称这种乳酸杆菌为他发现的益生菌，更早的时候，一本 4 世纪的中国手册提到了粪便微生物群移植。发酵意味着益生菌包含微生物的组合，这些微生物能够支持消化、免疫系统和心理健康。 随着生物工程技术和微生物学的发展，益生菌的生产方式发生了性的变化。通过对益生菌菌株的筛选、培养、发酵和提取，人们成功地实现了大规模的益生菌生产，从而使益生菌产品得以广泛应用于不同领域。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     副干酪乳杆菌的性质与用途及生产工艺！ 副干酪乳杆菌经发酵培养、离心、急速冷冻、干燥、包装等步骤生产而成。主要用于乳制品、保健食品、饮料、饼干、糖果、冰淇淋。 一、菌种简介平台编号：Bio-52492 规格：冻干物拉丁属名：Lacticaseibacillus Paracasei 中文名称：副干酪乳杆菌拉丁名称：Lactobacillus casei来源历史：收藏时间：2020-09-16 00:00:00.0原产国：美国模式菌株：否生物安全级别：一级其它保藏中心编号：ATCC 334培养基编号：58培养温度：37℃培养时间：24-48h需氧类型：兼性厌氧分离基物：瑞士奶酪采集地：瑞士保存方法：冷冻干燥管保藏用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基MRS 培养基酪蛋白胨 10 克 牛肉浸取物 10 克酵母提取液 5.0 克 葡萄糖 20 克乙酸钠 5.0 克 柠檬酸二胺 2.0 克吐温 80 1.0 克 磷酸氢二钾 2.0 克七水硫酸镁 0.2 克 七水硫酸锰 0.05 克碳酸钙 20.0 克 琼脂 20.0 克蒸馏水 1.0 升 PH 6.8如果要配制液体培养基，则不用加入碳酸钙和琼脂 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。甘油请置于-80°C。  四、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，酿酒酵母菌组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 五、注意事项乳酸菌需要在比较厌氧的环境下培养1）首次活化，用尽量少的复水液溶解，接种在 5ml 的液体培养基中，静止培养，如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或者不活等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理；7） 打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3 滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   S91小鼠黑色素瘤细胞的特点与应用及培养操作！ 一、背景 S91小鼠黑色素瘤细胞系是一种常用的实验动物模型，用于研究黑色素瘤的发生、发展和治疗。该细胞系来源于C57BL/6小鼠，具有高度的恶性程度和侵袭性，能够快速生长并形成肿瘤。 二、S91小鼠黑色素瘤细胞系的主要特点 高度恶性：S91小鼠黑色素瘤细胞系具有高度的恶性程度，能够在体外快速生长并形成肿瘤。 侵袭性：S91小鼠黑色素瘤细胞系具有较强的侵袭性，能够穿过基底膜并进入周围组织。 易转移：S91小鼠黑色素瘤细胞系容易发生转移，可以通过血液或淋巴系统扩散到其他部位。 可重复性好：S91小鼠黑色素瘤细胞系的生长和转移过程可以重复多次，且结果稳定可靠。 S91小鼠黑色素瘤细胞系广泛应用于肿瘤学研究中，包括肿瘤发生机制的研究、抗肿瘤药物的筛选和评价、肿瘤免疫治疗的研究等。 三、S91小鼠黑色素瘤细胞系培养操作 1)复苏S91小鼠黑色素瘤细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)S91小鼠黑色素瘤细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)S91小鼠黑色素瘤细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 四、应用 S91小鼠黑色素瘤细胞系可以用于细胞松弛素Q靶向肌酸激酶B抗黑色素瘤的作用及机制研究： 探究真菌Xylaria sp.DO1801次级代谢产物CQ的抗黑色素瘤作用,并解析其对细胞骨架微丝聚合的影响及分子机制。首先,本研究通过构建体内B16同种异体小鼠皮下瘤模型,结合体外实验检测CQ对黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移及微丝解聚作用的影响,研究CQ抗黑色素瘤的药理作用。 研究发现,CQ通过诱导微丝解聚导致S91小鼠黑色素瘤细胞系增殖抑制、凋亡增加、迁移受限,从而发挥良好的抗黑色素瘤效应。随后,通过LC-MC非靶向代谢组学技术系统地分析CQ对黑色素瘤细胞内小分子代谢物的影响,进一步探究CQ对黑色素瘤细胞代谢过程的影响并解析其作用分子机制。S91小鼠黑色素瘤细胞系研究发现,CQ主要影响黑色素瘤细胞内肌酸代谢通路,而磷酸肌酸预处理可拮抗CQ的作用,恢复胞内ATP水平、抑制微丝解聚、减少增殖抑制并抵抗凋亡诱导。此外,检测黑色素瘤细胞内葡萄糖代谢发现CQ抑制S91小鼠黑色素瘤细胞系内葡萄糖摄取、糖酵解和氧化磷酸化,表明CQ可抑制黑色素瘤细胞内肌酸代谢和葡萄糖代谢,从而抑制相关的ATP再生并诱使细胞骨架微丝解聚。 最后,基于肌酸激酶B(CKB)在肿瘤细胞肌酸代谢中的核心作用,通过细胞热转变分析实验(CETSA)、微量热泳动(MST)实验、体外酶活抑制实验和分子对接的方法研究CQ对CKB的作用方式,明确CQ的作用靶点和相关分子机制。S91小鼠黑色素瘤细胞系研究发现,CQ以底物竞争的方式抑制CKB酶活性。CKB低表达的S91小鼠黑色素瘤细胞系内ATP浓度降低、微丝聚合抑制、细胞增殖减少、凋亡增加,但对CQ敏感性降低。检测肿瘤相关代谢通路和肌酸代谢关键酶胍基乙酸-N-甲基转移酶(GAMT)和CKB发现,CQ处理或CKB沉默后,S91小鼠黑色素瘤细胞系内PI3K/AKT/FoxO1信号通路下调,然而肌酸和磷酸肌酸可逆转CQ对PI3K/AKT/FoxO1信号通路的下调;同时,CQ处理或CKB沉默抑制GAMT和CKB表达,而肌酸、磷酸肌酸、激活PI3K通路可恢复GAMT和CKB的表达。这提示肌酸代谢与PI3K/AKT/FoxO1通路间可形成反馈环并介导CQ促微丝解聚和抗黑色素瘤作用。综上所述,本研究发现CQ通过靶向抑制CKB,干扰肌酸代谢,并以反馈环的形式下调PI3K/AKT/FoxO1通路,从而促进微丝解聚并介导其级联的抗黑色素瘤作用。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  苛求脂环酸芽孢杆菌的特点与优势及培养方法！ 苛求脂环酸芽孢杆菌是Alicyclobacillus属的微生物，原产地为日本。主要脂肪酸为ω-环己烷或ω-环庚烷。主要用途为分类学研究，具体用途为模式菌株。 一、菌种简介平台编号：Bio-103977 规格：冻干物 拉丁属名：Alicyclobacillus Fastidiosus 中文译名：苛求脂环酸芽孢杆菌拉丁学名：Alicyclobacillus fastidiosus原始编号：DSM 17978菌株来源：←DSMZ保藏人：周宇光直接来源国家：德国保藏时间：3/30/2015生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株培养温度：45℃培养基：0437    分离源：苹果汁采集国家：日本提供形式：冻干物用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     A-72细胞（狗成纤维细胞）的培养操作规程！ 细胞简介平台编号：Bio-69896 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息： A-72 产品规格：1ml产品名称：A-72细胞产品用途：无数据保存条件：-196℃保存产品分类：细胞产品单位：支备注：细胞来源：犬；细胞种类：纤维瘤；生长状态：贴壁；建议培养基：MEM+10%牛血清+抗生素用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） A-72细胞ATCC CRL-1542狗成纤维细胞接受后处理1)收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。2)请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。3)弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的完全培养基。4)如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。5)接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。 A-72细胞ATCC CRL-1542狗成纤维细胞培养操作1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液 加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。2.加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3.按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL培养液后吹匀。4.将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面 T25 瓶为类；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO ，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 A-72细胞ATCC CRL-1542狗成纤维细胞培养注意事项1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。2、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确 认后我们为您再免费寄送一次。4、静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细胞汇合度 80% 左右时正常传代。5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户 自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 Procell 技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。7、该细胞仅供科研使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     棕灰口蘑的分布地区与生态习性及经济用途！ 一、知识简介棕灰口蘑，白蘑科口蘑属真菌，子实体中等。菌盖宽2-9cm，半球形至平展，中部稍凸起，灰褐色至褐灰色，干燥，具暗灰褐色纤毛状小鳞片，老后边缘开裂。菌肉白色，稍厚，无明显气味。 二、产品信息平台编号：Bio-28319 规格：培养物 拉丁属名：Tricholoma Myomyces 中文名称：棕灰口蘑拉丁属名：Tricholoma种名加词：myomyces (Pers.) J.E. Lange收藏时间*：2008-5-5来源历史：中国林业科学研究院资源昆虫研究所转原产国：中国资源归类编码：15152143111模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；教学特征特性：菌盖宽3-6cm，扁半球形，中部稍凸，干，浅棕灰色，复有暗色软毛小鳞片；菌肉薄，白色；柄圆柱形，长3-4.5cm，粗6-8mm，内部松软，上部白色，一部灰色；菌褶稍密，凹生，白色，后淡灰色；孢子无色，椭圆形至长方形，光涔，6-8×3.5-4.5μm。生于阔叶林中的地上或腐木。可食用。生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：子实体采集地区：云南昆明采集具体地点：农贸市场培养基信息：培养基编号: 14 培养基名称: PDA培养温度：25资源保护类型：培养物保藏方法：定期移植法共享方式：合作研究共享；资源交换性共享提供形式：斜面培养物实物状态：有实物用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 三、分类地位伞菌目、白蘑科、口蘑属 四、形态特征菌褶白色变灰色，稍密，弯生，不等长。菌柄柱形，长2.5-8cm，粗1-2cm，白色至污白色，具细软毛，内部松软至中空，基部稍膨大。孢子印白色。孢子无色，光滑，椭圆形，6.2-8μm×4.7-5μm。 五、生态习性夏秋季在松林或混交林中地上群生或散生。 六、分布地区河北、黑龙江、山西、江苏、河南、甘肃、辽宁、青海、湖南等。 七、经济用途此种味道较好，采食时要注意同突顶口蘑相区别。此种食用菌东北及华北地区的松林中大量生长，群众喜欢采食，并收集加工、盐渍出口。此种与松、云杉、山毛榉等多种树木形成外生菌根。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  乳酸杆菌的代表菌种与主要价值及应用领域！ 一、知识简介 乳酸杆菌是可使葡萄糖等糖类分解为乳酸的各种细菌的总称。广泛分布于自然界，有些菌株是人和动物口腔、肠道及阴道的正常菌群之一，很少致病，除极偶尔引起亚急性细菌性心内膜炎外，对人基本无害。寄生于口腔的乳酸杆菌在龋齿发生中起重要作用。一般认为寄生于肠道和阴道的乳酸杆菌对机体有保护作用某些乳杆菌如嗜酸性乳杆菌、保加利亚乳杆菌，常用于饮料的发酵工业。 二、代表菌种 在口腔内能分离的菌有15种，包括：干酪乳杆菌（L.caei）：亚种有干酪亚种（L.casei subst）、副干酪亚种（L. paracasei subs）、嗜酸乳杆菌（L.acidophilus）。亚种有：嗜酸亚种（L.acidophilus subsp）、卷曲亚种（L.crispatus），其他菌种有发酵乳杆菌（L.ferments）、唾液乳杆菌（L.salivarius）、植物乳杆菌（L.plantarum）、短乳杆菌（L.brevis）、布氏乳杆菌（L.buchneri）、戈氏乳杆菌（L.gassert）、口乳杆菌（L.orzs）、鼠李糖乳杆菌（L.rhamnosus）、齿龈乳杆菌（L.uli）、玉米乳杆菌（L.zeae） [3]在人的排泄物中发现了3种乳杆菌：嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌和唾液乳杆菌。  干酪乳酸杆菌（L.casei）、保加利亚乳酸杆菌（L.bulgaricus），嗜酸乳酸杆菌（L.acidophilus）、嗜热乳酸杆菌（L.thermophilus）等。 这些菌常用来作为乳酸，干酪、酸乳等乳制品生产的发酵菌种。  1、保加利亚乳酸杆菌 保加利亚乳酸杆菌为大杆菌，大小约为0.8-1× 2-20μm，单个或呈链状排列，革兰氏染色阳性，美兰染色菌体内可见异染颗粒，无运动性，不产生芽胞。 本菌微需氧或厌氧，在厌氧的环境下生长最佳。最适生长温度为44-45℃，在25-35℃下生长缓慢且弱，15℃停止生长。  本菌营养要求严格，在多数培养基上生长不良，营养琼脂上不能生长，所以此菌培养较困难。一般在乳清琼脂平板上培养，菌落呈现不规则圆形、灰白色，大小为1-3个mm，菌落具有卷发样构造，显微镜下观察呈现假根状。在乳内生长良好。产生乳酸。  本菌发酵乳糖，半乳糖及葡萄糖产酸，产生乳酸的能力极强。在形态及许多特征上与乳酸乳杆菌极为相似，但发酵糖类比乳酸乳桐：菌少，因此有人认为保加利亚乳杆菌可能是乳酸乳杆菌的突变型或变种。  保加利亚乳杆菌是制造酸奶首选和最常用的菌种之一。 2、乳酸乳杆菌 本菌为长杆菌，宽度不大于2μm，长度不定，通常呈细丝状卷曲交织在一起，幼龄时单在或成对。革兰氏染色阳性，无运动性，不产生芽胞，美兰染色可见菌体内有异染颗粒。  微需氧或厌氧，在微氧和含5%CO2的条件下生长良好。在含有蛋白胨、葡萄糖、酵母浸汁、吐温80的西红柿汁培养基上生长良好，菌落通常粗糙，直径1-3mm，白色至浅灰色致密或绒毛状。最适宜生长温度为37-40℃，最高生长温度为48℃，15℃停止生长。适宜pH值为6，牛乳凝固，最终产酸约达1.6%乳酸，同型发酵产D-乳酸。  乳酸杆菌可从牛奶和干酪中分离得到，是干酪制造中常用的菌种。 3、嗜酸乳杆菌 本菌呈杆状，菌端钝圆，革兰氏染色阳性，老龄培养物的菌体着色不匀，呈两极着色。菌体大小约为0.6-0.9X1.5-6.0μm，单在，成双或呈短链排列，无运动性，不产生芽胞。  本菌为微需氧菌，在一般情况下可以生长。最适宜培养温度为35-38℃，15-22℃不能生长或生长极弱，48-55℃可能生长或生长。最适pH为5.5-6.0，生长初期要求pH为5-7。在2%NaCl和2%胆盐中能生长。  营养要求较复杂，包括氨基酸、泛酸，核黄素、烟酸、叶酸，不需要硫胺素。在培养丛中添加葡萄糖、酵母浸汁和乳清可促其生长。在乳及乳清中生长良好。在琼脂平板培养基上菌落为粗糙的、小的不规则圆形，微隆起，灰白色、半透明，显微镜下观察，呈凹凸不平玻璃霜花状，边缘丝状或卷发状。  某些菌株可发酵糖原，一些菌株可发酵蜜二糖、棉子糖、或对二者都能发酵，同型发酵产生DL-乳酸。对牛奶的凝固和产酸不定，可产0.3-1.9%乳酸。 三、主要价值 乳酸杆菌在维护人和高等动物机体健康方面具有重要的作用。在营养生理方面，乳酸杆菌可提高蛋白质、乳糖和钙等营养物质的消化吸收，可产生多种维生素为机体消化吸收所利用；可抑制肠道内腐败菌、致病菌的繁殖，降低血氨和血中胆固醇的含量，并具有维持肠道内菌群平衡的整肠作用。乳酸杆菌具有免疫调节作用，如能明显促进细胞分裂、促进抗体产生、活化巨噬细胞，诱导产生干扰素等，提高机体的抗病能力。乳酸杆菌对巨噬细胞具有活化作用，使巨噬细胞的细胞毒性增强。而且乳酸杆菌还能诱导人外周血单个核细胞（PBMC）产生IL-12，IL-18和γ-干扰素，从而诱导产生Th1型细胞免疫反应。此外，乳酸菌能抑制羟甲基戊二酸辅酶A还原酶，减少肠道胆固醇的吸收，从而降低体内的胆固醇含量。很多研究也已证明乳酸菌具有降低血清胆固醇和甘油三酯的作用。乳酸杆菌对胃上皮细胞有高度的亲和力，可通过与病原菌竞争黏附位点，产生乳酸、乙酸、乙酸醋酸等有机酸，大量分布在消化道黏膜，对病原菌的黏附起屏障作用等机制拮抗病原菌，并产生有机酸细胞素样蛋白等物质和影响细菌毒物产生的相关代谢，对胃肠道起保护作用。值得指出的是，乳酸杆菌的作用具有株的特异性，即使是传统认为安全的乳酸杆菌菌种也不能保证种内所有菌株均安全，因此对乳酸杆菌进行鉴定和检测非常重要。  乳酸杆菌还是动物消化道、阴道的正常共生菌之一，对有害微生物的生长、繁殖具有一定的抑制作用。  乳杆菌携带许多隐形的质粒，利用这一点可在乳杆菌中进行基因操作。  四、主要危害 当然，它也有对生物不利的一面，如它能与口腔中的链球菌一样使糖类发酵，产生酸，溶解牙齿的釉质，形成龋齿。在龋病发生过程起到重要的促进作用。与龋发生较密切的菌种主要是干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌。但在消化道及阴道内属有益菌，促进消化的营养吸收，刺激免疫活性及防止阴道感染。  五、应用 乳酸杆菌在食品、饮料、饲料和医药等多个领域获得广泛的应用。 主要用于乳酸饮料、发酵乳、乙醇等。也用于某些维生素、氨基酸的微量测定。乳酸菌株还可用于真空包装的肉类。由消化乳杆菌菌株制成的高浓度冷冻干粉，能有效防腐。在肉制品中加入106-107个/克，即可抑制适冷菌丝，在9周内可保持不变，但不耐热。欧盟各国已准予使用。  乳酸杆菌功能食品主要包括活性菌微生态制剂和发酵食品。乳酸杆菌经扩后浓缩分离得到菌体，经添加保护剂，冷冻干燥制成，可制成胶囊或片剂。但的产品形式是与双歧杆菌活性粉剂混合制成多菌型微生态制剂。乳酸杆菌发酵括含活菌的发酵食品及发酵后经灭菌处理得以长期保存的食品。乳酸杆菌很少采用单菌发酵，常与乳酸链球菌、嗜热链球菌、嗜酸酵母菌及双歧杆菌混合发酵。  六、历史渊源 乳酸菌的历史源远流长，早在19世纪前，旧约创世纪中就提到：阿拉伯人饮用酸奶而长寿。公元1857年，Louis Pasteur开始以科学的方法描述酸乳中存在着微小的生物体。1873 年，Joserh L ister从酸乳中分离鉴定出该微生物为Bacteriumlactis。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 永生化人晶状体上皮细胞的培养步骤与注意事项！  一、细胞简介平台编号：Bio-134028 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：HLEC-SRA01/04 产品信息：HLEC-SRA01/04细胞 细胞名称：永生化人晶状体上皮细胞 细胞形态：贴壁生长培养基：高糖DMEM+20%FBS细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞的运输和保存 干冰运输及复苏好存活细胞 （1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。 （2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。  三、细胞接收后的处理1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。 3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。 4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。  四、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备： 1）准备1640培养基；优质胎牛血清，10%；0.05 mM β－巯基乙醇；丙酮酸钠 1%；双抗，1%。 2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 2、细胞处理： 1）冻存细胞的复苏： 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。  对于贴壁细胞传代可以参考以下方法 1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。  3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。  下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml. 2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 注意事项 1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。 2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。 3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。 4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 五、注意事项1、收到细胞后，首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。2、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天以及第 2,3 天请拍照），记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。3、由于运输的原因，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。4、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 ATCC 29062松鼠葡萄球菌的特点与优势及培养！ 松鼠葡萄球菌是Staphylococcus属的微生物，原产地为中国。主要用于教学，研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-74862 规格：Freeze-Dried 拉丁属名：Staphylococcus Sciuri Subsp. Sciuri 菌株名称：松鼠葡萄球菌用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Staphylococcus sciuri subsp. 拉丁名sciuri Kloos et al.(ATCC? 29062?)  菌株编号Strain Designations 菌株别名  SC116Application Quality control strain Quality control strain for BBL productsIsolation 分离源   Eastern gray squirrel skinBiosafety Level 生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式  freeze-driedStorage Conditions Frozen 保藏方法 : -80℃ or colderFreeze-Dried 冻干物 : 2℃ to 8℃Live Culture 活菌 : See Propagation SectionPreceptrol? noType Strain 模式菌株  yesMedium 培养基  ATCC? Medium 3: Nutrient agar or nutrient brothGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度 : 37℃Atmosphere 需氧情况 : AerobicName of Depositor WE KloosIsolation 分离源  Eastern gray squirrel skinReferences 参考文献  Kloos WE, et al. Characterization of Staphylococcus sciuri sp.nov. and its subspecies. Int. J. Syst. Bacteriol. 26: 22-37, 1976.Skerman VB, et al. Approved lists of bacterial names. Int J Syst Bacteriol 30: 225-420, 1980. 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                  寄生曲霉PCR试剂盒的知识与应用及操作步骤！  一、背景 寄生曲霉PCR试剂盒是一种用于检测寄生曲霉的实验工具，采用聚合酶链式反应（PCR）技术进行检测。该试剂盒具有高灵敏度和特异性，能够快速、准确地检测出寄生曲霉，对于该病的诊断和治疗具有重要意义。 寄生曲霉PCR试剂盒的组成通常包括引物、Taq酶、dNTPs等必要的PCR反应成分，以及可能包含的各种成分如染料、缓冲液、特异性结合探针等。引物是PCR反应的关键成分，它们与寄生曲霉基因的特定区域结合，从而启动DNA的扩增过程。Taq酶是一种耐热的DNA聚合酶，能够催化DNA的合成。dNTPs是合成DNA的基本原料。 使用寄生曲霉PCR试剂盒进行检测时，首先需要采集感染寄生曲霉的样本，如肺部或其他组织样本。将样本中的DNA或RNA与试剂盒中的引物和Taq酶等成分混合，进行PCR反应。反应过程中，DNA或RNA会不断扩增，最终形成大量的特定基因片段。通过凝胶电泳等技术对这些片段进行分析，可以判断出是否存在寄生曲霉基因，从而确定患者是否感染该病原体。 寄生曲霉PCR试剂盒具有高灵敏度和特异性，能够在极低浓度下检测出寄生曲霉基因。此外，该试剂盒还具有快速、简便、易于操作等特点，可以广泛应用于临床诊断和实验室检测领域。然而，试剂盒也存在一定的局限性，如对实验条件和操作要求较高，可能出现假阳性或假阴性结果等问题，需要在使用时注意。 二、寄生曲霉PCR试剂盒的操作步骤如下 1、样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。 2、DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。 3、PCR反应体系准备：根据寄生曲霉PCR试剂盒的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。 4、PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。 5、结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在寄生曲霉PCR试剂盒 三、应用 寄生曲霉PCR试剂盒可以用于栽培薏苡种质资源材料组织培养及其内生真菌的分离鉴定： 薏苡内生真菌的分离与鉴定在MS培养基中培养无菌苗5-6天后,出现内生真菌,提取转接到新鲜PDA培养基继续培养后观察。对正反面菌体特征和菌丝孢子的显微特征进行了拍照和详细描述。 采用寄生曲霉PCR试剂盒PCR技术以ITS1、ITS4为引物、薏苡基因组DNA为模板,测序获得每一个分离菌的ITS序列,并对该序列BLAST分析,分析了序列的同一性和相似性。通过菌落形态比较并结合寄生曲霉PCR试剂盒PCR扩增的ITS序列的分子分析,可较准确分离鉴定9种薏苡内生菌株:扩展青霉、波兰青霉、枝状枝孢菌、赤曲霉、链格孢霉、米曲霉、黄曲霉、锐顶镰刀菌、总状毛霉,还有一个菌株鉴定为镰刀菌属。其中扩展青霉、米曲霉、枝状枝孢菌和总状毛霉可产各种复合酶,在微生物化学、食品科学及发酵领域有极大应用;波兰青霉、黄曲霉、镰刀菌属和链格孢霉可产生相应毒素,危害植物、动物及人类。本研究的结果可为添加相应抗生素、杀菌剂等防止组织培养的污染提供参考,也可丰富禾本科植物内生真菌资源库,为作物的良种培育和改良及开发新天然药物提供新思路。 综上所述,该研究建立了系统的薏苡组织培养技术,可保存薏苡种质资源,为其快速繁殖提供了依据。初步建立薏苡花药体外培养及其愈伤组织增殖培养体系,为进一步薏苡花药单倍体育种等基础性研究奠定了较好基础。对9种薏苡内生真菌的寄生曲霉PCR试剂盒分离与鉴定,丰富了禾本科植物内生真菌资源库,也为新天然药物的发展、改善健康水平和提高薏苡的药用价值提供了新思路。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 KMST-6细胞系人胚成纤维细胞的培养及应用研究！ 一、背景 KMST-6细胞系人胚成纤维细胞是一种人胚成纤维细胞，这种细胞系被广泛应用于医学研究和测试工作，为医学研究和测试工作带来了极大的方便。 KMST-6细胞系人胚成纤维细胞是一种常见的细胞系，它们具有产生大量蛋白质和分泌细胞因子的能力，因此在组织工程、药物筛选和肿瘤研究等领域被广泛使用。 KMST-6细胞系人胚成纤维细胞的保存条件是低温避光，并且该细胞系的生长方式是贴壁生长，需要通过更换培养基来保持细胞的健康生长。这种细胞系可以通过传代的方式来扩增细胞数量，以适应不同的实验需求。 二、KMST-6细胞系人胚成纤维细胞培养操作 1)复苏KMST-6细胞系人胚成纤维细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)KMST-6细胞系人胚成纤维细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)KMST-6细胞系人胚成纤维细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 KMST-6细胞系人胚成纤维细胞可以用于硫酸铍致人胚肺成纤维细胞恶性转化机制的实验研究： 用不同浓度的硫酸铍作为受试物染毒KMST-6细胞系|人胚成纤维细胞,通过对靶细胞形态学变化、细胞毒性、遗传毒性、相关癌基因和抑癌基因蛋白表达的检测,探讨硫酸铍对体外培养的人胚肺成纤维细胞的恶性转化机制。为研究铍及其化合物致肺癌的机制提供一定的科学理论依据。为铍及其化合物所致职业危害的早期诊断和高危人群的监护提供重要的依据。 方法：采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察硫酸铍(终浓度分别为0.2μmol/L、2.0μmol/L、20.0μmol/L、100.0μmol/L、200.0μmol/L)对KMST-6细胞系|人胚成纤维细胞的细胞毒性;用单细胞凝胶电泳(SCGE)和微核试验测定硫酸铍对人胚肺成纤维细胞的遗传损伤情况。用不同浓度的硫酸铍对人胚肺成纤维细胞重复染毒(染毒24h后,终止染毒48h,再染毒24h)后,正常培养,分别传至第3、6、9代,观察靶细胞的形态学变化、癌基因蛋白(C-myc、H-ras蛋白)表达水平的改变和抑癌基因P16的异常甲基化。通过观察细胞形态变化、细胞生长速度的比较和转化细胞恶性程度测试(ConA凝集试验),对转化细胞进行生物学性状鉴定。 结果： (1)MTT比色法结果显示:硫酸铍重复染毒KMST-6细胞系|人胚成纤维细胞后,终浓度20.0200.0μmol/L硫酸铍染毒组对人胚肺成纤维细胞生长具有明显的抑制作用,其OD值与对照组比较差异具有统计学意义(P (2)遗传毒性情况:用硫酸铍染毒KMST-6细胞系|人胚成纤维细胞后,均出现DNA链断裂损伤,三个染毒组DNA损伤的测定指标(尾长、尾部DNA百分含量、尾矩和Olive尾矩)与对照组间差异均有显著性(P﹤0.05,P﹤0.01),且具有明显的剂量反应关系(rTL=0.840,r Tail DNA%=0.724,rTM=0.791,rOTM=0.851,P (3)相关癌基因蛋白检测结果:不同浓度硫酸铍染毒KMST-6细胞系|人胚成纤维细胞后,C-myc蛋白的表达在细胞分别传至第3、6、9代时,明显高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05,P﹤0.01),且具有剂量反应关系(r3=0.755,r 6=0.822,r9=0.792,P (4)抑癌基因P16甲基化的测定:对照组KMST-6细胞系|人胚成纤维细胞中抑癌基因P16表达非甲基化条带,细胞传至第3代时各染毒组细胞中也表达非甲基化条带,细胞传至第6、9代时,除第6代低浓度染毒组表达部分甲基化条带,其它均表达甲基化条带。 (5)细胞体外恶性转化试验结果:实验浓度范围内的硫酸铍可不同程度诱发KMST-6细胞系|人胚成纤维细胞形成转化灶,转化细胞生长失去接触抑制性、饱和密度增大、ConA凝集能力增强等多种细胞发生恶性变的生物学表型改变。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 UT-14人肾透明细胞癌细胞的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-132839 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：UT-14细胞名称：UT-14人肾透明细胞癌细胞产品类别：人源细胞系细胞形态：贴壁生长冻存条件：90%FBS+10%DMSO细胞名称：人肾透明细胞癌细胞；UT14形态特性：上皮样生长特性：贴壁生长特征特性：VHL基因232bp缺失突变。 培养条件：RPMI-1640+10%FBS传代方法：1:2~1:4传代；每周2~3次。传代情况：P18冻存条件：90%FBS+10%DMSO用途：研究 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特性 1）来源：人肾 透明细胞癌细胞 2）形态：不规则，多角样 贴壁生长 3）含量：>1x106 细胞数 4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装 5）用途：仅供科研使用。  三、细胞的运输和保存 干冰运输及复苏好存活细胞 （1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。 （2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。  四、细胞接收后的处理1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。 3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。 4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。  五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备： 1）准备1640培养基；优质胎牛血清，10%；0.05 mM β－巯基乙醇；丙酮酸钠 1%；双抗，1%。 2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 2、细胞处理： 1）冻存细胞的复苏： 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。  对于贴壁细胞传代可以参考以下方法 1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。  3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。  下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml. 2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 注意事项 1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。 2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。 3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。 4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  人肺巨噬细胞AM的复苏与传代及冻存操作说明！ 细胞简介平台编号：Bio-119748 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：AM 细胞名称：人肺巨噬细胞AM产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2细胞数量：1x10^6；1x10^6保存温度：37℃；-198℃运输方式：常温保温运输；干冰运输安全等级：1用途限制：仅供科研用途1类培养体系：DMEM高糖培养基+10%FBS+1%双抗培养温度：37℃二氧化碳浓度：5%简介：人肺巨噬细胞AM细胞取自女性供体，经过SV40永生化处理。用途：细胞系 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，水浴锅 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需复苏的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入 37℃温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管 ，打开盖子 ，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀。3、操作离心 ， 调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟4、弃去上清液 ，重悬离心管底部细胞沉淀 ，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基 ，计数 ，调整细胞密度，接种培养瓶 ，37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液，继续培养。6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中 细胞传代操作说明（贴壁细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中 ，愈合度达到 80% ，可进行传代。2、按 T25 培养瓶计 ，吸出完全培养基 ，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消 化 2min（具体时间视细胞而定） ，后用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10 min ，弃上清 收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。  细胞传代操作说明（悬浮细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。 细胞冻存操作说明实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需冻存的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管 ，冻存管 ，记号笔实验步骤：1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。 如果是悬浮生长的细胞 ，则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ，并登记。 验收细胞注意事项1、收到人肺巨噬细胞AM细胞，请查看瓶子是否有破裂，培养基是否漏出，是否浑浊，如有请尽快联系。2、收到人肺巨噬细胞AM细胞，如包装完好，请在显微镜下观察细胞。,由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，出现此状态时，请不要打开细胞培养瓶，应立即将培养瓶置于细胞培养箱里静止3-5小时左右，让细胞先稳定下，再于显微镜下观察，此时多数细胞会重新贴附于瓶壁。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，如台盼蓝染色证实细胞活力正常请按悬浮细胞的方法处理。3、收到人肺巨噬细胞AM细胞后，请镜下观察细胞，用恰当方式处理细胞。若悬浮的细胞较多，请离心收集细胞，接种到一个新的培养瓶中。弃掉原液，使用新鲜配制的培养基，使用进口胎牛血清。刚接到细胞，若细胞不多时血清浓度可以加到15％去培养。若细胞迏到80%左右，血清浓度还是在10％。4、收到人肺巨噬细胞AM细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养基吸出，留下5-10ML培养基继续培养：超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心3分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。5、将培养瓶置于37℃培养箱中培养，盖子微微拧松。吸出的培养基可以保存在灭菌过的瓶子里，存放于4℃冰箱，以备不时之需。6、24小时后，细胞形态已恢复并贴满瓶壁，即可传代。（贴壁细胞）将培养瓶里的培养基倒去，加3-5ml（以能覆盖细胞生长面为准）PBS或Hanks’液洗涤后弃去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化，消化时间以具体细胞为准，一般1-3分钟，不超过5分钟。可以放入37℃培养箱消化。轻轻晃动瓶壁，见细胞脱落下来，加入3-5ml培养基终止消化。用移液管轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后将溶液吸入离心管内离心，1000rpm/5min。弃上清，视细胞数量决定分瓶数，一般一传二，如细胞量多可一传三，有些细胞不易传得过稀，有些生长较快的细胞则可以多传几瓶，以具体细胞和经验为准。（悬浮细胞）用移液管轻轻吹打瓶壁，直接将溶液吸入离心管离心即可。7、贴壁细胞，悬浮细胞。严格无菌操作。换液时，换新的细胞培养瓶和换新鲜的培养液，37℃，5%CO2培养。特别提醒：原瓶中培养基不宜继续使用，请更换新鲜培养基培养。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    细胞的基本结构与主要组成部分有哪些？ 一、细胞的基本结构 细胞的基本结构是细胞质、细胞核、细胞膜。细胞分为动物细胞、细菌和真菌和植物细胞。细胞是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成，但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。 动物细胞结构：动物细胞有细胞膜、细胞质、细胞核。动物细胞的细胞质包括细胞质基质和细胞器。动物细胞的细胞器包括内质网、线粒体、高尔基体、核糖体、溶酶体、中心体。动物细胞与植物细胞相比较，具有很多相似的地方，如动物细胞也具有细胞膜、细胞质、细胞核等结构。但是动物细胞与植物细胞又有一些重要的区别，如动物细胞的最外面是细胞膜，没有细胞壁;动物细胞的细胞质中不含叶绿体，也不形成中央液泡。而高等植物细胞没有中心体。 细菌和真菌结构：细菌有细胞壁，细胞膜，细胞质，拟核。 真菌有细胞膜，细胞质，细胞核。细菌和真菌的细胞质包括细胞质基质和细胞器；细菌无成型细胞核，其细胞核是由遗传物质聚集形成的拟核，拟核没有核膜及核仁。有些细菌还带有鞭毛。 细菌的细胞器只有核糖体一种，真菌的细胞器包括：内质网，线粒体，高尔基体，核糖体，溶酶体。 植物细胞结构：植物细胞结构植物细胞是植物生命活动的结构与功能的基本单位。它由原生质体和细胞壁两部分组成。原生质体是细胞中有生命的部分，包括细胞核和细胞质。细胞核包括核膜、核仁、染色质和核基质四个部分，在传递遗传性状和控制细胞代谢方面起着重要作用。细胞质包括胞基质和细胞器，经常处于运动的状态。细胞质的外表为质膜，紧贴于细胞壁。质膜有选择透过性，与控制细胞内外物质的交换、接受外界信号、调节细胞生命活动等有关。细胞器包括线粒体、质体、内质网、高尔基体、液泡、溶体、圆球体、微体、核糖核蛋白体、微管、微丝等。质体是植物有的细胞器，有白色体、叶绿体和有色体三种。液泡具有贮藏、消化以及调节渗透等功能。  二、细胞的主要组成部分 细胞主要由细胞核与细胞质构成，表面有细胞膜。高等植物细胞膜外有细胞壁，细胞质中常有质体，体内有叶绿体和液泡，还有线粒体。动物细胞无细胞壁，细胞质中常有中心体，而高等植物细胞中则无。 细胞并没有统一的定义，比较普遍的提法是：细胞是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成，但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。 一般来说，细菌等绝大部分微生物以及原生动物由一个细胞组成，即单细胞生物，高等植物与高等动物则是多细胞生物。细胞可分为原核细胞、真核细胞两类，但也有人提出应分为三类，即把原属于原核细胞的古核细胞独立出来作为与之并列的一类。 研究细胞的学科称为细胞生物学。 组成细胞的基本元素是：O、C、H、N、Si、K、Ca、P、Mg，其中O、C、H、N四种元素占90%以上。细胞化学物质可分为两大类：无机物和有机物。在无机物中水是最主要的成分，约占细胞物质总含量的75%－80%。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 沙雷菌通用PCR试剂盒的组成与应用及相关研究！ 一、背景 沙雷菌通用PCR试剂盒是一种用于检测沙雷菌的PCR试剂盒。沙雷菌是一种常见的细菌，存在于各种环境中，包括水、土壤、食品等。该试剂盒通过特定的PCR引物和探针，能够特异性地检测沙雷菌的DNA，从而实现对沙雷菌的快速、准确检测。 沙雷菌是一种革兰氏阴性菌，可以引起多种感染，包括尿路感染、呼吸道感染和血液感染等。该试剂盒包含PCR反应体系和引物，可以扩增沙雷菌的DNA序列，从而实现对沙雷菌的快速检测和鉴定。 二、沙雷菌通用PCR试剂盒通常包括以下组分 PCR反应缓冲液：用于调节PCR反应体系的pH值和离子强度。 dNTPs:即脱氧核苷酸三磷酸，是PCR反应中必需的原料。 MgCl2:即二氢氧化镁，是PCR反应中必需的离子。 TaqDNA聚合酶：即热稳定DNA聚合酶，可以催化DNA的合成反应。 引物：即特异性DNA序列，可以与目标DNA序列互补结合，引导PCR反应进行。 三、沙雷菌通用PCR试剂盒的操作步骤如下 1、样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。 2、DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。 3、PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。 4、PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。 5、结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在沙雷菌的感染。 四、应用 沙雷菌通用PCR试剂盒可以用于临床分离黏质沙雷菌质粒编码的16S rRNA甲基化酶基因与β-内酰胺酶基因的研究： 安徽地区临床分离黏质沙雷菌药敏情况和质粒介导的16S r RNA甲基化酶检出率与基因型,为临床合理选择抗菌药物提供依据。研究临床沙雷菌通用PCR试剂盒分离黏质沙雷菌质粒介导的16S r RNA甲基化酶耐药基因与β-内酰胺酶基因的共转移情况。 材料与方法：菌株来源201株黏质沙雷临床分离菌株,来源于安徽省细菌耐药监测中心监测网所属34所医院(由皖南、皖中、皖北不同级别的医院组成)2005年2012年每年9月份住院和门诊患者的各类临床标本。药敏实验质控菌株大肠埃希菌ATCC25922,转移接合试验受体菌大肠埃希菌J53 AZR,二者均为安徽省细菌耐药监控中心保存。 方法： 1、采用MH琼脂倍比稀释法测定临床分离黏质沙雷菌株对抗菌药物的敏感性,质控菌采用E.coli ATCC 25922。 2、煮沸法提取细菌的总DNA,碱裂解法提取质粒DNA;用沙雷菌通用PCR试剂盒聚合酶链反应(PCR)方法扩增质粒介导16S r RNA甲基化酶基因;PCR产物纯化测序,测序结果在Gen Bank中经Blast程序比对分析,以明确16S r RNA甲基化酶基因的基因型别以及是否突变。 3、用16S r RNA甲基化酶基因阳性菌株与大肠埃希菌J53AzR行转移接合试验;对接合子进行生化鉴定并经PCR检测耐药基因,沙雷菌通用PCR试剂盒PCR扩增产物DNA测序确认;采用Muller-Hinton琼脂对比稀释法测定大肠埃希菌J53AzR与接合子对抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。 4、以16S r RNA甲基化酶基因阳性临床分离菌株的总DNA为模板,采用沙雷菌通用PCR试剂盒PCR方法扩增β-内酰胺酶基因;PCR产物纯化测序,测序结果在Gen Bank中经Blast程序比对,比较分析16S r RNA甲基化酶基因型别与β-内酰胺酶基因型别关系。 5、以16S r RNA甲基化酶基因阳性接合子菌株质粒DNA为模板,沙雷菌通用PCR试剂盒PCR扩增β-内酰胺酶基因;PCR产物纯化测序,测序结果在Gen Bank中经Blast程序比对,明确基因型。探究16S r RNA甲基化酶基因与β-内酰胺酶基因是否共转移。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    灰绿曲霉的储存与培养及注意事项与打管说明！ 灰绿曲霉是一种半知菌纲、壳霉目、杯霉科真菌。菌落表面紧密，中心凸起、黄褐色，边缘孢子黄色、菌丝白色，背面黄色。主要用于基因测序菌株。 一、菌种简介平台编号：Bio-104124 规格：甘油/培养物 拉丁属名：Aspergillus Glaucus 中文名称：灰绿曲霉拉丁名称：Aspergillus glaucus模式菌株：否其它保藏中心编号：=JCM 1575=ATCC 16469来源历史：←JCM收藏时间：2018/8/27原产国：美国特征特性：在含有20%葡萄糖的YM培养基20℃培养7天，菌落表面紧密，中心凸起、黄褐色，边缘孢子黄色、菌丝白色，背面黄色。参考用途：基因测序菌株。生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：未刷漆的木板采集地：美国华盛顿培养基编号：CM0016培养基名称：浓糖查氏琼脂(Concentrated Sucrose Czapek's Agar)培养基成分：CM0016:蔗糖 200.0g，NaNO3 3.0g，MgSO4・7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4.4H2O 0.01g，K2HPO4 1.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.0～6.5。培养温度：25 ℃需氧类型：好氧用途：基因测序菌株。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。 三、培养条件1、培养基编号：CM00162、培养基成分：蔗糖 200.0g，NaNO3 3.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4.4H2O 0.01g，K2HPO4 1.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.0～6.5。3、需氧类型：好氧4、培养温度：25℃ 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 五、打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。9、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    大鼠鼓膜上皮干细胞的运输和保存及使用方法！ 一、细胞简介平台编号：Bio-132526 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 细胞名称：大鼠鼓膜上皮干细胞注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述鼓膜也称耳膜，为一弹性灰白色半透明薄膜，将外耳道与中耳隔开。鼓膜穿孔不能愈合，可能与干细胞受损或增殖抑制有关。鼓膜上皮干细胞的分布与鼓膜的血供丰富的区域一致。鼓膜上皮干细胞高表达β1整合素，有很强的黏附型，对Ⅳ型胶原的黏附鼻其他细胞更快、更强。 三、细胞特性1)组织来源于实验动物的正常鼓膜组织。2)细胞鉴定：广谱角蛋白(PCK)免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、细胞培养操作收货处理：取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态传代密度：细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养传代比例：传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿传代方法： 1、吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；2、添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；3、用吸管轻轻吹打混匀，按1:2比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；4、待细胞贴壁后，培养观察；之后每2-3天换液一次新鲜的培养基。 七、注意事项1、收到细胞后，首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。2、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天以及第 2,3 天请拍照），记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。3、由于运输的原因，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。4、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   UMR-106(大鼠骨肉瘤细胞)的培养操作规程！ 一、背景 UMR-106(大鼠骨肉瘤细胞)也被称为大鼠骨肉瘤细胞，是一种通过注射放射性同位素磷(32P)诱导产生的可移植性大鼠骨肉瘤克隆而建立的细胞株。这种细胞对甲状旁腺激素（PTH）、前列腺素以及破骨甾体有响应。值得注意的是，与相关的细胞株UMR-108相比，UMR-106对PTH的响应度更高。蛋白激酶C的活化能够抑制ATP诱导的胞内钙水平的升高。 这种细胞通常在特定的培养基中生长，如DMEM培养基，并需要添加胎牛血清以提供必要的生长因子和营养物质。培养条件包括适宜的温度（通常是37摄氏度）和特定的气体环境（如空气和二氧化碳的混合气体）。 UMR-106细胞株的建立和研究为骨肉瘤和其他相关领域的科学研究提供了有价值的实验模型。通过对这种细胞的研究，科学家们可以深入了解骨肉瘤的发生机制、发展过程以及潜在的治疗方法。此外，这种细胞也常用于药物筛选和毒性测试等实验研究中。 二、UMR-106(大鼠骨肉瘤细胞)培养操作 1)复苏UMR-106(大鼠骨肉瘤细胞)：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)UMR-106(大鼠骨肉瘤细胞)传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)UMR-106(大鼠骨肉瘤细胞)冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 UMR-106(大鼠骨肉瘤细胞)可以用于KISS1/GPR54系统对大鼠骨肉瘤UMR-106细胞及原位移植瘤模型的作用： 目的： 1、构建大鼠骨肉瘤“原位移植-肺转移”模型，为研究KISS1/GPR54系统对大鼠骨肉瘤的影响构建实验平台。 2、检测KISS1/GPR54系统在大鼠骨组织和骨肉瘤模型中的表达。 3、研究KISS1的多肽片段对骨肉瘤UMR-106(大鼠骨肉瘤细胞)细胞迁移、侵袭能力的影响。 4、构建大鼠KISS1基因重组慢病毒并感染UMR-106(大鼠骨肉瘤细胞)，获得稳定表达外源性KISS1基因的UMR-106(大鼠骨肉瘤细胞)106细胞。5.探讨大鼠KISS1基因修饰对于大鼠骨肉瘤的影响及可能机制。 方法： 1、使用钡剂测定大鼠胫骨骨髓腔容积，向骨髓腔内注射适量的大鼠骨肉瘤UMR-106(大鼠骨肉瘤细胞)细胞悬液，观察胫骨原位肿瘤生长和肺部转移情况，应用RT-PCR检测碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）在细胞、原位肿瘤和肺转移结节中的表达 2、采用RT-PCR法和Western Blot法，从mRNA水平和蛋白水平检测KISS1和GPR54在大鼠骨组织、UMR-106(大鼠骨肉瘤细胞)、裸鼠模型的原位肿瘤组织中的表达情况。 3、采用50nM、100nM、200nM三个剂量的Kp-10（Kisspeptin10肽片段）作用于UMR-106(大鼠骨肉瘤细胞)单细胞层，划痕实验和Transwell实验分别观察细胞迁移和侵袭能力的变化。 4、构建携带大鼠KISS1基因的重组慢病毒并感染UMR-106(大鼠骨肉瘤细胞)，通过荧光表达法判定感染复数（Multiplicities of Infection,MOI），Western Blot检测感染前后的细胞中KISS1蛋白的表达情况。 5、体外实验：划痕实验和Transwell实验测定转染前后各组细胞的迁移、侵袭能力的变化。Western Blot检测转染前后各组细胞MMPs，TIMPs的表达变化。体内实验：观察转染前后各组细胞原位模型的肿瘤大小和肺转移结节的数量。 结果： 1、建立了骨肉瘤“原位移植-肺转移”模型。UMR-106(大鼠骨肉瘤细胞)、原位肿瘤和肺转移结节中均表达骨肉瘤标记物ALP、OPN。 2、KISS1mRNA和蛋白在UMR-106细胞中表达很低，在荷瘤鼠的原位肿瘤中表达极低，在骨组织中的表达量低于肝组织。GPR54在上述组织中均有表达。 3、Kp-10作用后的UMR-106(大鼠骨肉瘤细胞)的迁移距离缩短，穿膜细胞数量减少（P 4、构建了大鼠KISS1基因重组慢病毒载体，感染UMR-106(大鼠骨肉瘤细胞)最佳MOI值为20。转染后的UMR-106细胞KISS1蛋白的表达量明显增加，并能持续表达40天以上。 5、体外实验：转染KISS1基因的UMR-KISS1细胞的迁移距离缩短和穿膜细胞数量减少，MMP-2、MMP-9的表达量降低，TIMP-1、TIMP-2的表达量升高。体内实验：UMR-KISS1组裸鼠模型的原位肿瘤体积缩小，肺转移结节数量减少。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  细菌学检查的分离培养与接种实验方法有哪些？ 一、细菌的分离培养 1、培养基制作的原则和一般步骤 （1）培养基制作的原则  培养基是人工方法将多种物质按照各类微生物生长的需要而合成的一种混合营养料，一般用以分离和培养菌类。常用的培养基有基础培养基、增菌培养基、选择培养基、鉴别培养基等。在制作培养基时应掌握如下原则和要求： ①培养基必须含有细菌生长所需要的营养物质。 ②必须彻底灭菌,不得含有任何活细菌。 ③培养基的材料和盛培养基的容器上,没有抑制细菌生长的物质。 ④所制备培养基应该是透明的，以便观察细菌生长性状和其它代谢活动所产生的变化。 ⑤培养基的酸碱度应该符合细菌的生长要求，多数细菌生长适宜范围是弱碱（pH7.1~7.6）。 （2）培养基制备的一般过程  不同的培养基其制备方法不同，一般要经如下步骤： ①根据不同的菌类和用途，选择适宜的培养基。 ②精确称量各种成分。 ③将各种成分按规定加热溶解，调整pH到适宜的范围内。再加热煮沸10~15分钟（注意补加液体的损耗） ④过滤（用滤袋或纱布棉花），分装、灭菌（不同的培养基的灭菌温度和时间不同，通常为15磅压力下15~30分钟） ⑤培养基中的某些成分，象血清、腹水、糖类、尿素、氨基酸、酶等，在高温下易分解，变性，故应用滤菌器过滤，再按规定的温度和量加入培养基中。 ⑥无菌检验，取作好的培养基数管，置37℃恒温箱内24小时，若无细菌和霉菌生长即可使用。 2、细菌的分离培养 在细菌学诊断中，细菌的分离培养是不可缺少的一环，分离培养的目的是在病料中由多种细菌里挑选出可疑菌。在分离培养之前，首先应该注意下列事项： （1）选择适合于所含分离细菌生长的培养基。 （2）培养温度一般在37℃，但应考虑特殊细菌对温度的要求。 （3）考虑所分离的细菌是需氧性或厌氧性，进一步决定培养条件。 （4）初步分离时发现有多种细菌，应进一步选择可疑菌落进行纯培养 二、细菌的接种 1、平板划线法  此法为常用的细菌分离培养法。平板划线培养的方法甚多，可按各人的习惯选择应用，其目的都是将被检材料作适当的稀释，以求获得独立单在的菌落，防止发育成菌苔，以致不易鉴别其菌落性状。划线培养时须注意以下几点： （1）左手持皿，用左手拇指，食指及中指将皿盖揭开成20度左右的角度（角度愈小愈好，以免空气中的细菌进入皿中将培养基污染）。 （2）右手持接种环，将材料少许涂布于培养基边缘，然后将接种环上多余的材料在火焰中烧毁，待接种环冷却后，再与涂材料之处轻轻接触，开始划线。 （3）划线时先将接种环稍稍弯曲，这易和平皿内琼脂平行，不致划破培养基。 （4）划线中不宜过多地重复旧线，以免形成菌苔。 （5）平皿盖向下，在培养皿上标注样品名称、编号、接种日期后，置温箱中培养。 2、斜面接种法 3、液体培养基接种法 三、细菌培养性状观察 1、细菌在液体培养基中生长性状观察 （1）浑浊度  观察是否透明，轻度浑浊，中度浑浊或极度浑浊，还有均匀浑浊，颗粒状浑浊，絮状浑浊。 （2）沉淀  试管底有无沉淀，沉淀物呈颗粒状，粘稠状或絮状。轻摇时云雾状，絮状或发辫状开起。 （3）表面  有无菌膜及附着于管壁的菌环。 （4）色素及气味 2、细菌在固体培养基上菌落生长性状观察 （1）大小  各种细菌菌落大小差异很大，菌落直径在1毫米以下为露滴状菌落；1~2毫米为小菌落；2~4毫米为中等大菌落；4~6毫米或更大为大菌落。 （2）形状  有圆形、规则形、根足形、菌丝状等。 （3）边缘  有整齐、锯齿状、纤毛状、卷发状等。 （4）表面  有光滑、湿滑、粗糙、颗粒状、皱丝状、同心状、放射状等。 （5）降起度  有角平、隆起、脐状、扭扣状。 （6）颜色  有无色、白色、灰白色、金黄色、柠檬色、绿色、红色等。 （7）透明度 有透明、半透明、不透明等。 四、显微镜检查——细菌抹片制备、染色及镜检 细菌细胞微小，无色而半透明，原样直接在普通光学显微镜下观察，只能大致见到其外貌，制成抹片和染色之后，则能较清楚地显示其形态和特殊构造，也可以根据不同的染色反应，作为鉴别细菌的一种依据。 常应用各种染料对细菌进行染色，由于毛细管、渗透、吸附和吸收等物理作用，以及离子交换，酸碱等化学作用，染料就能使细菌着色，且因细菌细胞的结构和化学成分不同，而含有不同的染色反应。 1、细菌抹片的制备 进行细菌染色之前，须先作好细菌抹片，其方法如下： （1）玻片准备  载玻片应清晰透明、洁净而无油渍，滴上水后，能均匀展开，附着性好。如有油渍，可按下列方法处理： ①滴上95%酒精2~3滴，用洁净纱布揩擦，然后在酒精灯火焰上轻轻拖过几次。 ②若上法仍未能去除油渍，可再滴上1~2滴冰醋酸，用纱布擦净，再在酒精灯火焰上轻轻通过。 （2）抹片  所用材料情况不同，抹片方法亦有差异。 液体材料（如液体培养物、血液、渗出液、乳汁等）可直接用灭菌接种环取一环材料，于玻片的中央均匀地涂布成适当大小的薄层。 不是液体材料（如菌落、脓、粪便等）则应先用灭菌接种环取少量生理盐水或蒸馏水，置于玻片中央，然后再用灭菌接种环取少量材料，在液滴中混合，均匀涂布成适当大小的薄层。 组织脏器材料，先用镊子夹持局部，然后以灭菌或洁净剪刀取一小块，夹出后将其新鲜切面在玻片上压积或涂抹成一薄片。 如有多个样品同时需要制成抹片，只要染色方法相同，亦可以在同一张玻片上有秩序地排好，作多点涂抹，或者先用蜡笔在玻片上划分成若干小方格，每方格涂抹一种样品，需要保留标本片，应贴标签，注明菌名、材料、染色方法和制片日期等。 （3）干燥  上述涂片，应让其自然干燥。 （4）固定  有两类固定方法。 ①火焰固定  将干燥好的抹片，使涂抹面向上，以其背面在酒精灯火焰上来回通过数次，略作加热（但不能太热，以不烫手背为度）进行固定。 ②化学固定  血液、组织脏器等抹片要作姬姆萨（Giemsa）染色，不用火焰固定，而应用甲醇固定，可将已干燥的抹片浸入甲醇中2~3 分钟，取出晾干；或者在抹片上滴加数滴甲醇使其作用2~3分钟后，自然挥发干燥。抹片如作瑞特氏染色（Wright’s stain），则必先须作特别固定，染料中含有甲醇，可以达到固定的目的。 将抹片固定的目的有如下几种： ①除去抹片的水分，涂抹材料能很好地贴附玻片，以免水洗时易被冲掉 ②使抹片易于着色或更好地着色，因为死的蛋白质比活的蛋白质着色力较强。 ③可能杀死抹片中的微生物。 必须注意：在抹片固定过程中，实际上并不能保证杀死全部细菌，也不能完全避免在染色水洗时不将部分抹片冲脱。因此，在制备烈性病原菌，特别是带芽孢的病原菌的染色抹片时，应严格慎重处理染色用过残液和抹片本身，以免引起病原的散播。 固定好的抹片，即可进行各种方法的染色。 2、几种常用染色方法 常用的细菌染色方法，主要有两种类型： （1）简单染色法  只应用一种染料进行染色的方法，如美蓝染色法。 （2）复染色法   应用两种或两种以上的染料或再加媒染剂进行染色的方法。染色时，有些是将染料分别先后使用，有些则同时混合使用。染色后不同的细菌和物体，或者细菌构造的不同部分可以呈现不同的颜色，有鉴别细菌的作用，又可称为鉴别染色，如革兰氏染色法、抗酸性染色法、瑞特氏染色法和姬姆萨染色法。 ①美蓝染色法  在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的（足够覆盖涂抹点即可）美蓝染色液，经1~3分钟，水洗，干燥（可用吸水纸吸干，或自然干燥，但不能烤干），镜检。 ②革兰氏染色法 A．在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1~2 分钟，水洗。 B．加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1~2 分钟，水洗。 C．加95%酒精于抹片上脱色，约0.5~1 分钟，水洗。 D．加稀释石炭酸复红（或沙黄水溶液）复染10~30秒，水洗。 E．吸干或自然干燥，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 ③ 抗酸染色法 A．萋一尼（Ziehl-Neelsen）氏抗酸染色法  首先在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰微微加热至发生蒸气为度（不要煮沸），维持微微发生蒸气，经3~5分钟，水洗。然后用3%盐酸酒精脱色，至标本红色脱出为止，充分水洗。再用碱性美兰染色液复染约1分钟，水洗。最后吸干，镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸细菌呈蓝色。 B．又法之一：将固定后的抹片滴加金（Kinyoun）氏石炭酸复红液，历3 分钟。此液配法为： 碱性复红              4克        95%乙醇        20毫升 石炭酸（化学纯）     9毫升        蒸馏水        100毫升 溶碱性复红于酒精，再缓缓加水并摇振，再加入石炭酸混合。 连续水洗1.5分钟后滴加加鲍脱（Gabbott）氏复染液历1分钟。此液配法为： 美蓝             4克           无水乙醇          20毫升 浓硫酸         20毫升            蒸馏水           50毫升 先将美蓝溶于乙醇，再加蒸馏水，再加硫酸。 连续水洗1 分钟，吸干，镜检。抗酸菌呈红色，其他菌呈蓝色。 C.又法之二：滴加石炭酸复红液于抹片（已干燥固定过的）上染1 分钟；水洗；再用1%美蓝酒精溶液复染20秒；水洗，干燥，镜检。抗酸菌红色。 镜检前对光检查染色片，标本片务必全呈蓝色。如标本片呈现红色或棕色，表示复染不足，应再作复染5~10 秒，再观察。如仍未全呈蓝色时，仍可反复复染，至符合要求为止。 ④ 瑞氏染色法 方法一：抹片自然干燥后，滴加瑞特氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可稍多加些，或者看情况补充滴加，经1~3分钟，再加约与染液等量的中性蒸馏水或缓冲液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，经5分钟左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干，镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其他颜色。 方法二：抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况补滴，维持不使变干；染色3~5分钟钟，直接以水冲洗，吸干或烘干，镜检。此法的染色液经滤纸滤过，可大大避免沉渣粘附抹片上而影响镜检观察。 ⑤ 姬姆萨氏染色法 A.于5毫升新煮过的中性蒸馏水中滴加5~10滴姬姆萨染色液原液，即稀释成 常用的姬姆萨染色液。 B.抹片经甲醇固定并干燥后，在其上滴加足量染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中，染色30分钟，或者染色数小时至24小时，取出水洗，吸干或烘干，镜检。细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其他颜色，视野常呈红色。 3、细菌基本形态及构造的观察 （1）细菌的形态 ①球菌： 双球菌：注意其成双的排列，两个菌体接触面的形状以及菌体的形态。 链球菌：注意其链状排列，链的长短，个体的形态。 四联球菌：注意其四个联结成方形排列的形态。 八叠球菌：注意其八个堆叠一起，呈立体方形的形态。 葡萄球菌：注意其无一定次序，无一定数目，不规则地堆在一起的形态。 ②杆菌： 单杆菌：注意其单个散在的状态，菌体外形、大小、菌端的形状。 双杆菌：注意其成双的排列以及菌体外形、大小、菌端的形状。 链杆菌：注意其成链状排列，链的长短，菌体外形、大小、菌端的形状。 ③螺旋状菌： 弧菌：注意其弯曲成弧形以及菌体大小，菌端的形状。 螺菌：注意其具有两个弯曲以上的螺旋状及菌体的长度、大小，菌端的形状。 （2）细菌的一些构造 ①荚膜：注意荚膜的位置、形状、大小、染色及相互间的联结。 ②鞭毛：注意鞭毛的形状、长度、大小、数目及其在菌体上的排列（单毛、丛毛、周毛）。 ③芽孢：注意芽孢的形状，与菌体相比的大小以及在菌体中的位置（中央、偏端、末端）。 ④异染颗粒：注意其与菌体不同的染色反应、形状、大小、多少、位置等。 五、动物试验 为了作细菌或其它微生物的分离鉴定，致病力测定等，常用实验动物进行接种，常用的实验动物接种方法有下列数种。 1、皮下接种 （1）家兔皮下接种  由助手把兔伏卧或仰卧保定，于其背侧或腹侧皮下结缔组织疏松部分剪毛消毒，术者右手持注射器，以左手拇指、指食和中指捏起皮肤使成一个三角形皱褶，于其底部进针，感到针头可随意拨动即表示插入皮下。当压入注射物时感到流利畅通也表示在皮下。拔出注射针头时用消毒棉球压住针孔并稍加。 （2）豚鼠皮下接种  保定和术式同家兔。 （3）小白鼠皮下注射  作小白鼠皮下注射接种无须助手帮助保定。术者在做好接种准备后，以右手捏取鼠尾，此时鼠头会向前挣扎而可以紧牵其尾，然后用左手的拇指和食指捏住其两耳及其头颈部皮肤使其翻转，背部皮肤固定于左手中指、无名指及拇指基部之间，以小指压住其尾根，小白鼠即仰卧保定于左手上。右手操作局部消毒，把持注射器，以针头稍微挑起皮肤插入皮下，注入时见有水泡微微鼓起即表示注入皮下。拔出针头后，同家兔皮下注射时一样处理。 2、皮内接种  作家兔、豚鼠及小白鼠的皮内接种时，均需助手保定动物，其保定方法与皮下接种相同。接种时术者以左手拇指及食指夹起皮肤，右手持注射器，针头要很细，针头插入拇指与食指之间的皮肤内，针头插入不宜过深，同时针头插入角度要小，即与夹起的皮肤平行，注射时感到有阻力且注射完毕后皮肤上有小硬疱即为注入皮内的表现。皮内接种要慢，否则容易使皮肤胀裂或自针孔流出注射物而散播传染。 3、腹腔内接种  在家兔、豚鼠及小白鼠的腹腔接种，宜采取仰卧保定。接种时其后躯应稍抬高使其内脏倾向前腔，接种部位在腹后侧面，针头先插入皮下，后进入腹腔，注射后皮肤应无疱隆起。其余术式同于皮下接种法。 4、静脉注射 （1）家兔的静脉注射  将家兔纳入保定器内或由助手保定兔体露出其头。选一侧耳边缘静脉，助手以拇指及食指紧压耳根部，使静脉努张，术者剪去静脉管上皮肤的毛，消毒局部，若需对同一动物作多次接种时，应自接近耳尖初处开始刺入接种，以后逐次接近耳根。接种时术者左手执兔耳，右手持针（针头不宜太细），以与静脉平行方向刺入静脉，同时助手放松其紧压手指，以便血液流通。注射时无阻力且有血向前流即表示注入静脉。缓缓注射，注射完针头拔出后，用消毒棉球紧压针孔片刻，以免流血或注射物溢出。 （2）豚鼠静脉内接种  豚鼠静脉内接种比较困难，因为豚鼠没有裸露明显的静脉可寻，若必须作注射时，使豚鼠伏卧保定，腹面向下，将其后肢剃毛，用70%酒精消毒皮肤，施以全身麻醉，用锐利刀片向后肢内上侧向外下方切一长约一厘米的切口，使露出皮下静脉，用最小号针头（26号），刺入静脉慢慢注入接种物。接种完毕，皮肤应缝合一两针。 （3）小白鼠静脉接种  作小白鼠静脉内接种时，选尾侧静脉，体重在15~20克为宜。因其尾部皮肤比较柔软、菲薄，静脉管清晰可见，若体重在20克以上时，尾部皮肤较厚、较硬，对缺乏经验的人更难于注射好。接种时用一玻璃杯扣住小白鼠，露出尾部，用最小号针头刺入尾侧静脉，缓缓注入接种物，注射时无阻力，皮肤不变白、不隆起，表示注入到静脉内。 5、脑内接种法  作病毒学实验研究时，有时用脑内接种法，通常多用小白鼠，特别是乳鼠（1~3日龄），接种时通常使小白鼠以乙醚作轻度麻醉，用碘酒消毒其颅部毛皮再以酒精棉球拭去碘液，用1毫升结核菌素注射器，以最小号针头吸取接种，于两耳根连接线中点略偏左（或右）处，以皮肤及颅骨稍向下刺入少许即可，注射完毕拔出针头，以棉球压住针孔片刻。接种乳鼠时一般不麻醉，不用碘酒。        北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  犬流感病毒通用PCR试剂盒的应用及研究动态！ 一、背景 犬流感病毒通用PCR试剂盒是一种用于检测犬流感病毒的实验工具，采用聚合酶链式反应（PCR）技术进行检测。该试剂盒具有高灵敏度和特异性，能够快速、准确地检测出犬流感病毒，对于该病的诊断和治疗具有重要意义。 犬流感病毒是一种常见的病毒，可引起犬类呼吸道感染。该病毒可以通过直接接触感染犬或接触污染的环境进行传播。感染犬流感病毒的犬可能会出现咳嗽、流鼻涕、高热等症状，严重时可能导致肺炎和死亡。因此，对犬流感病毒进行快速、准确的检测对于控制该病的传播和预防具有重要意义。 犬流感病毒通用PCR试剂盒的组成通常包括一对引物、Taq DNA聚合酶、dNTPs等必要的PCR反应成分，以及可能包含的各种成分如染料、缓冲液、特异性结合探针等。引物是PCR反应的关键成分，它们与犬流感病毒基因的特定区域结合，从而启动DNA的扩增过程。Taq DNA聚合酶是一种耐热的DNA聚合酶，能够催化DNA的合成。dNTPs是合成DNA的基本原料。 使用犬流感病毒通用PCR试剂盒进行检测时，首先需要采集感染犬流感病毒的样本，如鼻拭子或咽拭子等。将样本中的DNA或RNA与试剂盒中的引物和Taq DNA聚合酶等成分混合，进行PCR反应。反应过程中，DNA或RNA会不断扩增，最终形成大量的特定基因片段。通过凝胶电泳等技术对这些片段进行分析，可以判断出是否存在犬流感病毒基因，从而确定犬是否感染该病原体。 二、犬流感病毒通用PCR试剂盒的操作步骤如下 1、样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。 2、DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。 3、PCR反应体系准备：根据犬流感病毒通用PCR试剂盒的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。 4、PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。 5、结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在犬流感病毒的感染。 三、应用 犬流感病毒通用PCR试剂盒可以用于H3N2犬流感病毒M1蛋白胞内抗体的制备及活性研究： 以流感病毒高度保守的M1蛋白为靶标,通过噬菌体抗体库筛选特异性抗M1蛋白的scFv,并对scFv进行免疫结合活性和生物学活性研究;然后将利用具有高效跨膜转导功能的TAT蛋白构建TAT-scFv穿梭胞内抗体,在细胞水平和SPF鸡胚中评价胞内抗体对A/Canine/Guangdong/05/2011(H3N2)、A/Duck/Guangdong/W12/2011(H3N2)和A/Beijing/1/1968(H3N2)三株异源流感病毒增殖的影响。 1、H3N2犬流感病毒M1蛋白的原核表达及鉴定为制备犬流感病毒(H3N2)M1蛋白纯品,针对H3N2犬流感病毒M1蛋白高度保守序列设计引物,犬流感病毒通用PCR试剂盒PCR扩增目的基因片段,扩增产物克隆至表达载体pET-SUMO中并转化至宿主菌BL21(DE3),诱导表达目的蛋白,探索纯化工艺,制备目的蛋白,Western blot检测纯化的M1蛋白。通过犬流感病毒通用PCR试剂盒PCR成功扩增出大小为771bp的M1基因,成功构建pET-SUMO-M1表达质粒,经酶切纯化后获得M1蛋白纯品,为进一步制备通用型抗H3N2犬流感病毒抗体提供纯品抗原。 2、抗H3N2犬流感病毒M1蛋白scFv的筛选及活性研究以M1为靶蛋白,采用固定相筛选法同时从噬菌体抗体库Tomlinson I库(库容量:1.47×108)和Tomlinson J库(库容量:1.37×108)中筛选抗M1蛋白的单链抗体,进行四轮生物淘洗后,显示每增加一轮筛选高亲和力阳性噬菌体克隆富集倍数都有所提高。通过间接ELISA法和犬流感病毒通用PCR试剂盒PCR鉴定筛选阳性菌株,最终获得C2菌株与M1靶蛋白的免疫结合活性最显著,对C2菌株抗体基因进行分析,具有完整的单链抗体结构。C2菌株扩大培养并成功纯化出H3N2-scFv纯品,BCA检测蛋白浓度为1.6mg/mL,薄层扫描显示纯度为98.9%,利用WB法对纯化的scFv进行鉴定,结果显示制备的scFv和M1靶蛋白具有良好的免疫结合活性。在细胞水平和SPF鸡胚模型中生物学活性研究显示,scFv在浓度高达1.6mg/mL对细胞和鸡胚没有显著的毒性作用,对A/Canine/Guangdong/05/2011(H3N2)株犬流感病毒复制具有显著的抑制作用,呈现剂量依赖性特征,细胞水平IC50=0.290mg/mL,鸡胚水平IC50=0.120mg/mL,证明在鸡胚中,scFv的灵敏度更高。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  白色短波单胞菌的培养方法与实验内容及注意事项！ 白色短波单胞菌是Brevundimonas属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类；研究；教学。 一、菌种简介平台编号：Bio-04891 提供形式：冻干物拉丁属名：Brevundimonas Alba 中文译名：白色短波单胞菌拉丁学名：Brevundimonas alba原始编号：DSM 4736菌株来源：←DSMZ保藏人：周宇光直接来源国家：德国保藏时间：11/1/2007其他保藏编号：=ATCC 15265生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株培养温度：30℃培养基：0007    其他培养条件分离源：土壤用途：模式菌株注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征菌落为圆形，凸起，不透明，表面湿润光滑，边缘整齐，呈乳白色。菌株为呈杆状，革兰氏染色为阴性，繁殖方式为裂殖。营养类型为异养，好氧，不需光照。可水解七叶灵，不能水解酪蛋白和纤维素。过氧化氢酶反应阳性。最适生长温度25-28℃, 最适pH 为8.0。  三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 六、注意事项1、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。2、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。3、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。4、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。  欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  大鼠脑动脉平滑肌细胞的作用与应用及使用方法！ 一、背景 大鼠脑动脉平滑肌细胞分离自脑动脉组织；脑动脉有成对的颈内动脉和椎动脉互相衔接成动脉循环；静脉系多不与同名动脉拌行，所收集的静脉血先进入静脉窦再汇入颈内静脉；各级静脉都没有瓣膜。它包括脑的动脉系统和脑的静脉系统。 大鼠脑动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。 二、大鼠脑动脉平滑肌细胞使用方法 大鼠脑动脉血管平滑肌细胞是一种贴壁细胞，细胞形态呈成纤维细胞样，在澳睿赛技术部标准操作流程下，可传5代左右；3代以内状态；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。 客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。 1、取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。 2、贴壁细胞消化 1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次； 2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化； 3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养； 4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。 3、大鼠脑动脉平滑肌细胞收货脱落 1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀； 2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化； 3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基(补加1%FBS，促进贴壁)重悬沉淀，接种于新的培养瓶内； 4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。 4、大鼠脑动脉平滑肌细胞实验 因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2），多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。 三、应用 大鼠脑动脉平滑肌细胞可以用于异甘草素对自发性高血压大鼠脑基底动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的作用： 研究异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)对自发性高血压大鼠(Spontaneously hypertension rats,SHR)脑基底动脉血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)大电导钙激活钾通道(Large conductance Ca-activated K 2++channel,BKCa)的调节作用。 方法：在使用异甘草素干预处理前后,用尾动脉测压仪观察SHR血压变化;依次用10-5mol/L苯肾上腺素(phenylephrine,PE)、10-5 mol/L苯肾上腺素和10-4 mol/L异甘草素、10-5mol/L苯肾上腺素分别对SHR脑基底动脉灌流后,脑基底动脉的直径应用压力型小动脉仪进行测量;用全细胞膜片钳技术研究SHR脑基底动脉平滑肌细胞(VSMC)BKCa通道电流的变化;用ELISA技术观察SHR脑基底动脉内c GMP水平变化。 结果： (1)ISL干预前SHR血压是(218.3±1.6)mm Hg,与WKY血压(119±2.1)mm Hg相比,两者具有显著统计学差异(p (2)含有PE(10-5 mol/L)的PSS液体在压力型小动脉测量仪水浴槽内持续对血管段进行灌流,待血管段收缩状态稳定后,再用含有ISL(10-4 mol/L)和PE(10-5 mol/L)的PSS液体持续灌流冲洗,血管舒张达到稳定状态后,给予含PE(10-5 mol/L)的PSS液体再次持续灌流冲洗,记录血管直径分别为:(235.6±26)μm、(309.2±25)μm和(241.1±27)μm,提示ISL舒张SHR脑基底动脉(n=6,p (3)单个脑基底动脉平滑肌细胞钳制电压在-40 m V,外向电流在刺激电压-40-20 m V区间内无显著变化,10-4 mol/L ISL在0-60 m V区间内可以呈电压依赖性增强脑基底动脉平滑肌细胞外向电流(n=6,p (4)在0、10-7、10-6、10-5、10-4和3×10-4 mol/L异甘草素作用下,平滑肌细胞+60m V时的外向电流分别是(144±25)p A、(156±24)p A、(173±24)p A、(211±21)p A、(252±21)p A和(262±20)p A。除10-7 mol/L异甘草素组和对照组没有明显差异外,其余各组均呈浓度依赖性增强外向电流,提示ISL呈浓度依赖性增强脑基底动脉平滑肌细胞外向电流(n=6,p (5)异甘草素干预后的SHR平滑肌细胞外向电流(+60m V)从(212.1±32)p A增加到(283.2±28)p A(p 该结果提示异甘草素增强的平滑肌细胞外向电流由BKCa通道介导;(6)预灌流10-5 mol/L亚甲蓝(MB,可溶性鸟苷酸环化酶阻断剂)3min后,异甘草素增强的平滑肌细胞外向电流(+60m V)从(324.3±74)p A减小到(171.9±42)p A(p 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  LICCF人肝内胆管癌细胞的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-133434 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：LICCF 细胞名称：LICCF人肝内胆管癌细胞产品类别：人源细胞系生长特性：贴壁生长培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS传代方法：1：2传代细胞形态：上皮细胞样冻存条件：无血清细胞冻存液保存条件：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞收到后处理细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 三、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 四、注意事项1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。2、先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时（4h左右），稳定细胞状态，切忌在温箱内静置过夜。3、静置后镜检，拍照，记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。4、悬浮细胞：将细胞瓶内液体都转移至无菌离心管内，1000 转/分钟离心5min，培养基上清可备用，管底细胞沉淀用培养基重悬。镜检时若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞瓶内培养；若密度未超过80%，细胞悬液移至原瓶继续培养，待达到80%时再正常传代。备注：聚团生长慢，有密度依赖，必须使用T25培养瓶竖立培养，3天一次半量换液一次，1-2周传代一次。贴壁细胞：若细胞密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，收集细胞瓶内的培养基，留8ml继续培养至80%左右再传代，瓶盖可稍微拧松。备注：细胞贴壁慢，传代后细胞放2天不动。5、细胞瓶内的培养基含血清和双抗，可收集后4℃保存备用，可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基，一半用客户自备的培养基，使细胞逐渐适应培养条件，以免因不适应而造成生长状态不佳。6、因为细胞培养过程外因太多，所以我们的售后保障期为一周，超过一周的细胞我们会酌情处理，但不提供免费更换服务。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                食品微生物检验工作的内容与质量及策略有哪些？ 百欧博伟生物：随着人们生活水平的提高和生活质量的改善，人们越来越重视食品质量和安全，因此确保食品微生物检测工作的质量是确保食物安全的重要举措，但是目前我国的食品检测工作还有待加强。食物微生物检测对于保证食品质量和安全意义重大。该文将会对食品微生物检测工作的内容、影响食品微生物检测工作质量因素和如何确保食品微生物检测工作的质量进行深入研究和探讨，为我国食品安全工作的总体进展做出更大的贡献。  一、食物微生物检验工作的内容  1、食物微生物检测概述  食品微生物检测是运用微生物学的理论与方法，检验食品中微生物的种类、数量、性质及其对人的健康的影响，以判别食品是否符合质量标准的检测方法。食品微生物检验方法是食品质量管理不可少的重要组成部分，它是贯彻“预防为主”的方针，可以有效地防止或者减少食物人畜共患病的发生，保障人们的身体健康。食品微生物检测是衡量食品卫生质量的重要指标之一，也是判定被检食品是否有食用价值的科学依据之一。通过食品微生物检测，可以判断食品加工环境及食品卫生情况，并且能够对食品被细菌污染的程度作出正确的评价，为各项卫生管理工作提供科学依据。  2、食物微生物检测的指标  目前，我国卫生部颁布的食品微生物指标有菌落总数、大肠菌群和致病菌三项。菌落总数主要是指食品检样在经过样品处理、培养基及其pH值、培养温度与时间、计数方法等条件的严格控制下的培养后，单位重量、容积或表面积上，所生成的细菌菌落总数;大肠杆菌来自人或温血动物肠道，这些细菌是寄居于人及温血动物肠道内的常居菌，它会随着大便排出体外。食品中如果大肠菌群数越多，说明食品受粪便污染的程度越大。故以大肠菌群作为粪便污染食品的卫生指标来评价食品的质量，具有广泛的意义;致病菌是能够引起人们发病的细菌。大肠菌群检验呈阳性，并怀疑食品可能受到致病菌污染时可进行致病菌检验。不同的食品和不同的场合，应选择的参考菌群进行检验。  二、确保食品微生物检测工作的质量的策略  1、提高检测人员的专业素质  食物微生物检测工作具有很强的专业性，需要对检验工作的各个方面进行严格的把握和科学的控制。为确保食品微生物检测工作的质量需要提高微生物检测人员的专业素质。检测人员具备严谨的工作态度和较强的责任感，还要注重不断的提升自己。检测人员要接受定期的专业培训，丰富自己的专业知识和专业技术，及时的发现和处理食物微生物检测工作中的问题，注重提高自身工作质量和工作效率。  2、保证食品微生物检测的设施和环境的质量  进行食品微生物检测工作的实验室环境的优劣会对检测结果造成重大的影响，实验室环境要保持清洁卫生，这样可以减少交叉污染，同时还要对它的湿度、温度和光照等进行合理的控制，保证食物微生物检测工作环境的质量。食品微生物检测的设施要齐全，不仅要保证食品微生物检测工作的顺利进行，还要对检测人员配备的保护设施，使他们免受伤害，也有效的避免环境污染，提高食品微生物检测工作的质量。  3、保证食品微生物检测仪器设备的质量  食品微生物检测仪器设备需要有专人保管并要对它们的使用和维护进行及时的记录，定期对这些仪器和设备的性能进行检查，保证其能准确的为食品微生物检测工作服务。还要注意对食品微生物检测仪器设备进行杀菌处理和保存，确保检测结果的准确性。  4、对食品微生物检测过程进行质量保证  在对食物进行微生物检测时，要严格按照科学的操作规程进行，规范检测过程。从食物微生物的取样、培养一直到得到检验结果，中间的各个环节和相应的操作流程和规范都需要检测人员的严格履行。在食品微生物检测结束后，及时的清理垃圾，将实验室消毒清洁。对食品微生物检测过程进行质量保证可以确保食物微生物检测工作的质量，进而保证食物安全和人们的生命健康。  三、结语  确保食品微生物检测工作的质量，提高我国的食品质量与安全的任务较为艰巨，需要采取科学有效的策略对食品微生物检测工作进行质量上的控制，保证食品微生物检验结果的正确性和可靠性，同时也需要提高相关人员的素质和工作能力，不断完善食品微生物检测工作，努力实现食品安全的目标。总之，食品安全和食品质量与人们的生命健康息息相关，食品检验部门要不断提高自身工作质量，更好地为广大人民服务。  北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 生物有机肥常用菌种巨大芽孢杆菌的功效有哪些？ 巨大芽孢杆菌为产孢杆菌，且为革兰氏阳性菌及好氧菌，也为常见的油中腐生菌。在工业上用于生产葡萄糖异构酶，同时也是有机磷的分解菌，因此，在农业上可用于制造磷细菌肥料。 巨大芽孢杆菌能够分泌合成多种有机酸、酶、生理活性物质等。有机酸类等物质溶解土壤中作物不易吸收的钙磷、铁磷、铝磷等化合物，促进土壤中无效磷的溶解及利用。因此，巨大芽孢杆菌多配合钾细菌用来生产解磷固钾肥，是生产生物有机肥的常用菌种，也是制作水体处理剂的常用菌种。 巨大芽孢杆菌的主要功效 1、溶解无效性磷能力强 巨大芽孢杆菌可溶解无效性磷，转变成植物能利用的磷素，其分泌的多糖物质，可使土壤团里构造变好，增加土壤之优良物理特性。 2、促进植物营养吸收 喷在作物的上部可促进作物生长、增强植物叶片的光合作用，提高碳水化合物含量来提高质量。促使土壤无效磷的溶解及利用，进而协助土壤中微生物之增长。 3、减少环境污染 过度使用化学肥料将对土壤造成污染，影响生物平衡，土壤微生物的应用，可减少大量使用氮磷肥料，对环境污染也减到最低。 4、增加植物抗病能力 可提高土壤中养分的有效利用，增进根系生长及养分吸收，加强作物对不良环境的抵抗能力，减少农药的施用。预防土壤病害发生，减少连作障碍等问题，以达到土壤改良之功效。 5、降低生产成本 增加根圈的有益微生物，可使土壤中被固定的有效性磷肥再次被利用，而降低化学肥料的施用，提高农民受益。 6、提高土壤肥力 可将土壤中难溶的磷钾分解出来，转变为作物可吸收的磷钾化合物使土壤中的营养元素供应增加。 7、提高肥料使用率 促进植物吸收养分，提高肥效，其代谢产生的聚麸胺酸具有较强的保水、保肥能力。 8、防治植物病害发生 对棉花立枯病菌、小麦纹枯病菌、全蚀病菌、茄假单胞杆菌、枯萎病菌、黄萎病菌、白叶枯病菌、根瘤镰刀病菌都有较强的抑制作用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   郝克氏青霉的培养方法与注意事项及打管说明！ 郝克青霉是Penicillium属的微生物，原产地为北冰洋，在中国分离。菌落中央为灰色，外层黄色，反面黄色，表面隆起，疏松，绒状。主要用途为研究，具体用途为极地真菌。 一、菌种简介平台编号：Bio-11081 规格：冻干物拉丁属名：Penicillium Herquei 中文译名：郝克氏青霉拉丁学名：Penicillium herquei原始编号：C11130菌株来源：←中国科学院微生物研究所保藏人：王龙直接来源国家：中国保藏时间：9/22/2000其他保藏编号生物危害：四类模式菌株：非模式菌株培养温度：25℃培养基：0013    分离源：土壤采集地点：广西凭祥市采集国家：中国用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请放-20°C 保存。甘油请置于-80°C。  三、培养基麦芽汁琼脂 112Brix.麦芽汁 1.0 L 琼脂 15.0 g 自然 PH13 号培养基或用下列培养基代替葡萄糖 1% 蛋白胨 1% 酵母提取物 0.5% 琼脂 2% 四、注意事项1、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。2、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。3、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。4、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。  五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3 滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2支，单位所提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。冻干管打开后需一次用完，不能留存。3、另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。4、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                K1735小鼠黑色素瘤细胞的特点与应用及培养操作！ 一、背景 K1735小鼠黑色素瘤细胞系是一种来源于C57BL/6小鼠的黑色素瘤细胞系。它是一种常用的实验材料，被广泛用于研究肿瘤生物学、药物筛选和治疗策略等领域。 二、K1735小鼠黑色素瘤细胞系具有以下特点 高度增殖：K1735小鼠黑色素瘤细胞系具有快速增殖的能力，可以在体外培养条件下快速生长。 高转移性：K1735小鼠黑色素瘤细胞系具有高转移性，可以穿过人工基质并进入周围组织。 多药耐药性：K1735小鼠黑色素瘤细胞系对多种化疗药物表现出耐药性，这使得它成为研究肿瘤耐药机制的重要模型。 K1735小鼠黑色素瘤细胞系可以通过多种方法进行培养和扩增，包括贴壁培养、悬浮培养和三维培养等。此外，它还可以被用于制备肿瘤疫苗、基因治疗和药物筛选等实验。 三、K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞培养操作 1)复苏K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 四、应用 K1735小鼠黑色素瘤细胞系可以用于冬凌草甲素固体脂质纳米粒的制备及其抗肿瘤作用研究： 采用四甲基偶氮唑盐染色(MTT)法测定冬凌草甲抑制体外肿瘤细胞生长增殖，并具有浓度和时间依赖关系，IC50为7.4～55.1μM。流式细胞测定结果证明冬凌草甲素可将K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞阻断于S期和G2+M期，并能诱导其凋亡。冬凌草甲素诱导K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞形态分化，形成长的树突状结构。 此外，研究发现，冬凌草甲素能降低K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞的侵袭能力，提示冬凌草甲素抑制肿瘤细胞增殖可能是多种生物学效应综合的结果。动物实验研究结果表明，冬凌草甲素能明显抑制移植性H22、S180、B16瘤株的生长，但对Lewis肺癌瘤株作用不明显，其作用机理有待于进一步研究。 本文采用乳化溶剂法制备冬凌草甲素固体脂质纳米粒(ORI-SLN)，在单因素考察的基础上，采用正交试验法优化处方及制备工艺。建立了冬凌草甲素固体脂质纳米粒含量测定的HPLC方法，灵敏度高，分离度好，重现性强，结果平均回收率为100.22％，相对标准差为1.55％。用低温高速离心法测定纳米粒的包封率，结果平均包封率为91.43％，相对标准差为1.25％。用透射电镜观察纳米粒的形态，用激光粒度散射仪测定纳米粒粒径和zeta电位。 结果表明纳米粒为均匀圆整的球体，含量为0.9642mg／ml，平均粒径为82.5nm，多分散性指数为0.28，zeta电位为-48.2mv。此外考察了放置1，3，6个月后，纳米粒的粒径和zeta电位的变化，结果表明纳米粒较为稳定，6个月后粒径和zeta电位才有明显的变化。采用低温高速离心法考察了纳米粒的体外释药行为，并对药物释放曲线进行拟合，结果表明，冬凌草甲素固体脂质纳米粒体外释放符合Weibull分布模型，相关系数为0.9862。采用热分析及X-射线衍射法考察冬凌草甲素固体脂质纳米粒是否形成。 本文考察自制的冬凌草甲素固体脂质纳米粒对K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞的作用。MTT法结果表明，冬凌草甲素固体脂质纳米粒能体外抑制肿瘤细胞生长增殖，并具有浓度和时间依赖关系，IC50为6.4μM。流式细胞测定结果证明冬凌草甲素固体脂质纳米粒可将K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞阻断于S期和G2+M期，并能诱导其凋亡，并能诱导细胞形态分化，形成长的树突状结构。此外，研究发现，冬凌草甲素固体脂质纳米粒能降低K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞的侵袭能力，作用稍强于冬凌草甲素。动物实验研究结果表明，冬凌草甲素固体脂质纳米粒能明显抑制移植性H22、S180、B16、Lewis瘤株的生长，其作用机理有待于进一步研究。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  菌种质量鉴定的定义与知识及内容与方法！ 一、基本内容 菌种质量的鉴定包括两个方面：一是显性性状，二是隐性性状。显性性状，即菌种的外观形态特征，如菌种的纯度、生活力强弱等，借用显微镜及肉眼观察比较容易鉴别。而隐性性状难以鉴别，必须通过出菇栽培试验才能鉴定。  二、基本知识 中文名：菌种质量鉴定 外文名：Identification of strain quality 应用领域：食用菌的鉴定 作用：保障食用菌的质量、品系、纯度 研究内容：外观特征、栽培出菇 鉴定方法：观察、镜检、培养、出菇 三、菌种定义 菌种是国家重要的生物资源，是食用菌生产、科研工作的基础。优良纯正的菌种是食用菌栽培的基本保证。菌种的优劣直接关系到食用菌生产的成败。因此，对分离、转化、选育、引进的菌种，应予质量鉴定，留优去劣。所谓菌种质量，一般应包括两个方面：一是菌种的“种性”。即菌种自身的生物学特性，这是菌种的内因与基础，栽培地的生产条件必须首先要适合它的“种性”。比如，一个菌种(株)在南方某地选育驯化成功，并表现良好，若将其引种至北方地区，就不一定有好的生产表现。二是菌种的制作质量。一个原本优良的菌种(株)，在配套设施设备不齐全、操作技术不规范等条件下，在逐级转接扩大生产的过程中，就会造成菌种的质量下降，如感染杂菌，菌种老化、退化等现象。这些菌种应用到栽培时，势必会有产量低、品质差、抗性差、发病率高，甚至不出菇等后果。  鉴定菌种是通过菌种质量标准进行的。菌种的质量标准就是衡量菌种培养特征、生理特征、栽培性状、经济效益所制订的综合检验标准。一般从菌种的纯度、长势、颜色、菌龄、均匀度和出菇快慢6个方面进行鉴定。 菌种的鉴定有多种方法，但是最可靠的也是最实际的方法就是出菇试验。只要通过出菇试验，就不难知道它是什么菌种以及菌种的产量及生产性能，只有产量高、品质好的菌种才是优良菌种。 四、鉴定的内容 各种食用菌的菌丝体形态特点虽然不同，但作为优质菌种鉴定的内容主要应注意以下几点： (1)菌种性能可靠：投入生产的菌种必须是经过试验，具有高产优质、适应性强的纯菌丝体。 (2)菌丝健壮：菌丝体生长应粗壮、洁白、浓密，生活力强，并具该品种所特有的风味。不能有菌丝萎缩、发黄、脱壁或产生菌皮等老化现象。 (3)无病虫害：菌种应无任何杂菌污染，无害虫侵蛀，无积水、高温圈、菌丝自溶等现象产生。 (4)菌龄适宜：一般母种菌丝占斜面2/3以上。原种瓶、栽培种袋菌丝长满后1周左右，且不能有大量原基出现。 (5)标志明显：出售菌种，必须注明种类、级别、品种、生产单位、接种日期等，否则不能使用。 五、鉴定的方法 1、直接观察法 直接观察法，即通过“观其形，嗅其味”来鉴别菌种质量的优劣。优质菌种一般菌丝健壮、浓密、色泽正、无杂菌，具有本品种特有的香味。如果培养基、瓶壁、管塞上出现异常颜色的菌落，说明已被杂菌污染；菌种瓶(袋)上有黄褐色高温圈，是由于异常高温导致菌丝生长不良而形成；脱壁是因菌龄过长，或不良环境(缺水、干燥、高温)导致的菌丝体萎缩、色泽变暗、培养基收缩的离壁现象；菌丝自溶是由于菌龄过长或高温影响，导致生理老化，菌丝自溶而产生黄褐色代谢水现象。除此之外，如有积水、菌皮或大量原基形成，均属不合格菌种。直观观察法简便易行，但必须具有一定的实践经验。  2、镜检法 镜检法，即挑取微量菌丝(或孢子)固定于载玻片上，在显微镜下观察菌丝的形态结构，锁状联合的有无、孢子的形状、大小等，从而鉴定菌种的类别及优劣，通过镜检还可区分培养菌丝与杂菌，从而鉴定侵染杂菌的种类。 3、培养观察法 对于分离、选育或者引进的菌种，通过培养，观察其菌丝体对干湿度和温度等方面的适应性。可将菌丝体置于偏干、偏湿和干湿相宜的条件下培养，若菌丝在前两种条件下能良好生长，而在干湿相宜的条件下生长最佳，则说明是好的菌种。也可在菌种瓶中挑取一小块菌丝体，接种在PDA斜面培养基试管中，置于23～25℃恒温箱中培养，经1周后检查菌种生活力及纯度，如果菌丝生长快、整齐纯一、健壮浓密，则是生活力强的菌种。 4、出菇耳试验法 对分离或引入的菌种，在投人生产之前，必须作出菇(耳)试验。通过试验鉴定其遗传性状、产量质量的高低优劣等。出菇试验应根据菌株的生物学持性及实际条件，采用床栽、瓶栽、袋栽、箱栽、块栽等方式试验栽培每次应达到一定数量，并且要有3次以上重复栽培过程，要详细记录发菌天数(菌丝恢复、定植天数)、出菇期(每潮菇的起止时间、持续天数)、产量(单产、总产)、子实体形态(菇形、色泽、菇盖直径及厚度，菌柄长度和直径、单菇质量等)以及对环境条件的反应等内容。  北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

               NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系的应用！ 一、背景 NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系是一种用于研究非霍奇金淋巴瘤(NHL)的细胞系。NHL是一种恶性肿瘤，起源于淋巴系统中的B细胞、T细胞或NK细胞。NK-92细胞系是从一名患有高级别B细胞淋巴瘤的患者中分离出来的，因此它具有高度增殖能力和对多种肿瘤细胞的杀伤作用。 NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系在肿瘤免疫治疗研究中具有重要价值，因为它可以作为体外实验模型来评估新的治疗方法和药物的有效性。研究人员可以通过改变培养条件、添加生长因子或使用基因编辑技术来改变NK-92细胞系的行为，以更好地模拟体内环境并提高治疗效果。 此外，NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系还可以用于研究肿瘤微环境对肿瘤生长和转移的影响。通过分析NK-92细胞与不同肿瘤细胞之间的相互作用，研究人员可以更好地了解肿瘤发展的机制，并为开发新的抗肿瘤药物提供理论基础。 二、NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系培养操作 1)复苏NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3)NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系可以用于树状大分子载体hFTH1转染NK-92细胞和体内外MR成像： 聚乙二醇化树状大分子包裹的纳米金颗粒作为非病毒载体,将人铁蛋白重链(FTH1)转染到自然杀伤细胞92(NK-92细胞)中,并进行体内外细胞MRI成像。 方法：将第五代聚酰胺胺树状大分子用聚乙二醇(PEG)修饰之后包裹纳米金颗粒作为非病毒载体,转染FTH1基因到NK-92细胞内。应用核磁共振氢谱、紫外分光光度计和透射电子显微镜等对合成的载体材料进行表征;采用琼脂糖凝胶电泳实验、CCK-8试剂盒、水动力粒径来检测其相关特性;应用荧光显微镜和流式细胞仪测定转染效率;应用3.0 T的MRI对转染FTH1的NK92细胞进行体内外成像。 结果：合成的聚乙二醇化的包裹纳米金颗粒的树状大分子{(Au0)25-G5.NH2-mPEG17}DENPs具有较好的生物相容性,材料细胞毒性较小,在氮磷比为1:1、2:1、5:1、10:1时,转染效率分别为57.8%、64.0%、80.2%、38.3%。在200和500μmol/L枸橼酸铁铵的条件下,MRI检查发现T2加权像信号均降低,后者更为明显。荷瘤小鼠的T2加权像信号也出现相应的改变。 结论：聚乙二醇化树状大分子包裹的纳米金颗粒能够成功地转染目的基因,MRI检查能有效地在体内外检测FTH1转染之后的NK-92细胞,本研究为MRI活体示踪自然杀伤细胞过继免疫肿瘤治疗奠定了基础。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！