大鼠鼓膜上皮干细胞的运输和保存及使用方法！

                    大鼠鼓膜上皮干细胞的运输和保存及使用方法！

一、细胞简介

平台编号：Bio-132526

规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

细胞信息：原代细胞

细胞名称：大鼠鼓膜上皮干细胞

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞详述

鼓膜也称耳膜，为一弹性灰白色半透明薄膜，将外耳道与中耳隔开。鼓膜穿孔不能愈合，可能与干细胞受损或增殖抑制有关。鼓膜上皮干细胞的分布与鼓膜的血供丰富的区域一致。

鼓膜上皮干细胞高表达β1整合素，有很强的黏附型，对Ⅳ型胶原的黏附鼻其他细胞更快、更强。

三、细胞特性

1)组织来源于实验动物的正常鼓膜组织。

2)细胞鉴定：广谱角蛋白(PCK)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养。

四、产品的运输和保存

视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

五、产品使用

1)本产品仅能用于科研

2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核

3)本产品未通过用于活体诊断的审核

六、细胞培养操作

收货处理：取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态

传代密度：细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养

传代比例：传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

传代方法：

1、吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2、添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；

3、用吸管轻轻吹打混匀，按1:2比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4、待细胞贴壁后，培养观察；之后每2-3天换液一次新鲜的培养基。

七、注意事项

1、收到细胞后，首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天以及第 2,3 天请拍照），记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。

3、由于运输的原因，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

4、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

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