NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系的应用！

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一、背景

NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系是一种用于研究非霍奇金淋巴瘤(NHL)的细胞系。NHL是一种恶性肿瘤，起源于淋巴系统中的B细胞、T细胞或NK细胞。NK-92细胞系是从一名患有高级别B细胞淋巴瘤的患者中分离出来的，因此它具有高度增殖能力和对多种肿瘤细胞的杀伤作用。

NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系在肿瘤免疫治疗研究中具有重要价值，因为它可以作为体外实验模型来评估新的治疗方法和药物的有效性。研究人员可以通过改变培养条件、添加生长因子或使用基因编辑技术来改变NK-92细胞系的行为，以更好地模拟体内环境并提高治疗效果。

此外，NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系还可以用于研究肿瘤微环境对肿瘤生长和转移的影响。通过分析NK-92细胞与不同肿瘤细胞之间的相互作用，研究人员可以更好地了解肿瘤发展的机制，并为开发新的抗肿瘤药物提供理论基础。

二、NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系培养操作

1)复苏NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3)NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

三、应用

NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系可以用于树状大分子载体hFTH1转染NK-92细胞和体内外MR成像：

聚乙二醇化树状大分子包裹的纳米金颗粒作为非病毒载体,将人铁蛋白重链(FTH1)转染到自然杀伤细胞92(NK-92细胞)中,并进行体内外细胞MRI成像。

方法：将第五代聚酰胺胺树状大分子用聚乙二醇(PEG)修饰之后包裹纳米金颗粒作为非病毒载体,转染FTH1基因到NK-92细胞内。应用核磁共振氢谱、紫外分光光度计和透射电子显微镜等对合成的载体材料进行表征;采用琼脂糖凝胶电泳实验、CCK-8试剂盒、水动力粒径来检测其相关特性;应用荧光显微镜和流式细胞仪测定转染效率;应用3.0 T的MRI对转染FTH1的NK92细胞进行体内外成像。

结果：合成的聚乙二醇化的包裹纳米金颗粒的树状大分子{(Au0)25-G5.NH2-mPEG17}DENPs具有较好的生物相容性,材料细胞毒性较小,在氮磷比为1:1、2:1、5:1、10:1时,转染效率分别为57.8%、64.0%、80.2%、38.3%。在200和500μmol/L枸橼酸铁铵的条件下,MRI检查发现T2加权像信号均降低,后者更为明显。荷瘤小鼠的T2加权像信号也出现相应的改变。

结论：聚乙二醇化树状大分子包裹的纳米金颗粒能够成功地转染目的基因,MRI检查能有效地在体内外检测FTH1转染之后的NK-92细胞,本研究为MRI活体示踪自然杀伤细胞过继免疫肿瘤治疗奠定了基础。

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