K1735小鼠黑色素瘤细胞的特点与应用及培养操作！

                K1735小鼠黑色素瘤细胞的特点与应用及培养操作！

一、背景

K1735小鼠黑色素瘤细胞系是一种来源于C57BL/6小鼠的黑色素瘤细胞系。它是一种常用的实验材料，被广泛用于研究肿瘤生物学、药物筛选和治疗策略等领域。

二、K1735小鼠黑色素瘤细胞系具有以下特点

高度增殖：K1735小鼠黑色素瘤细胞系具有快速增殖的能力，可以在体外培养条件下快速生长。

高转移性：K1735小鼠黑色素瘤细胞系具有高转移性，可以穿过人工基质并进入周围组织。

多药耐药性：K1735小鼠黑色素瘤细胞系对多种化疗药物表现出耐药性，这使得它成为研究肿瘤耐药机制的重要模型。

K1735小鼠黑色素瘤细胞系可以通过多种方法进行培养和扩增，包括贴壁培养、悬浮培养和三维培养等。此外，它还可以被用于制备肿瘤疫苗、基因治疗和药物筛选等实验。

三、K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞培养操作

1)复苏K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

四、应用

K1735小鼠黑色素瘤细胞系可以用于冬凌草甲素固体脂质纳米粒的制备及其抗肿瘤作用研究：

采用四甲基偶氮唑盐染色(MTT)法测定冬凌草甲抑制体外肿瘤细胞生长增殖，并具有浓度和时间依赖关系，IC50为7.4～55.1μM。流式细胞测定结果证明冬凌草甲素可将K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞阻断于S期和G2+M期，并能诱导其凋亡。冬凌草甲素诱导K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞形态分化，形成长的树突状结构。

此外，研究发现，冬凌草甲素能降低K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞的侵袭能力，提示冬凌草甲素抑制肿瘤细胞增殖可能是多种生物学效应综合的结果。动物实验研究结果表明，冬凌草甲素能明显抑制移植性H22、S180、B16瘤株的生长，但对Lewis肺癌瘤株作用不明显，其作用机理有待于进一步研究。

本文采用乳化溶剂法制备冬凌草甲素固体脂质纳米粒(ORI-SLN)，在单因素考察的基础上，采用正交试验法优化处方及制备工艺。建立了冬凌草甲素固体脂质纳米粒含量测定的HPLC方法，灵敏度高，分离度好，重现性强，结果平均回收率为100.22％，相对标准差为1.55％。用低温高速离心法测定纳米粒的包封率，结果平均包封率为91.43％，相对标准差为1.25％。用透射电镜观察纳米粒的形态，用激光粒度散射仪测定纳米粒粒径和zeta电位。

结果表明纳米粒为均匀圆整的球体，含量为0.9642mg／ml，平均粒径为82.5nm，多分散性指数为0.28，zeta电位为-48.2mv。此外考察了放置1，3，6个月后，纳米粒的粒径和zeta电位的变化，结果表明纳米粒较为稳定，6个月后粒径和zeta电位才有明显的变化。采用低温高速离心法考察了纳米粒的体外释药行为，并对药物释放曲线进行拟合，结果表明，冬凌草甲素固体脂质纳米粒体外释放符合Weibull分布模型，相关系数为0.9862。采用热分析及X-射线衍射法考察冬凌草甲素固体脂质纳米粒是否形成。

本文考察自制的冬凌草甲素固体脂质纳米粒对K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞的作用。MTT法结果表明，冬凌草甲素固体脂质纳米粒能体外抑制肿瘤细胞生长增殖，并具有浓度和时间依赖关系，IC50为6.4μM。流式细胞测定结果证明冬凌草甲素固体脂质纳米粒可将K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞阻断于S期和G2+M期，并能诱导其凋亡，并能诱导细胞形态分化，形成长的树突状结构。此外，研究发现，冬凌草甲素固体脂质纳米粒能降低K1735小鼠黑色素瘤细胞系细胞的侵袭能力，作用稍强于冬凌草甲素。动物实验研究结果表明，冬凌草甲素固体脂质纳米粒能明显抑制移植性H22、S180、B16、Lewis瘤株的生长，其作用机理有待于进一步研究。

北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！