巨大芽孢杆菌的作用与应用！一、概述巨大芽孢杆菌(Baeillusmegatherium)属于芽孢杆菌属，是一种好氧产芽孢的革兰氏阳性细菌，菌体直径大于1.0μm，俗称“大芽孢”菌，是一种有益的土壤细菌，具有对环境友好、对粮食作物安全、对人畜无害等优点而受到了人们的普遍关注和深入研究。自1935年苏联学者蒙基娜从土壤中分离了一株具有解磷作用的巨大芽孢杆菌并投人生产开始，对巨大芽孢杆菌应用的研究已有相当长的一段时间。二、解磷作用陈凯等研究了巨大芽孢杆菌P1的解磷效果，巨大芽孢杆菌P1在蛋黄培养基上溶磷圈明显，具有解有机磷的作用。张维娜等研究了巨大芽孢杆菌JD-2的溶磷效果，发现JD-2具有较强降解有机磷、无机磷的能力，发酵液接人土壤后，能达到比较好的解磷效果。研究解磷机理发现解磷作用是由菌株生长过程中的代谢产物决定的，代谢产物包括有机酸、质子和多糖等，其中有机酸通过羟基和羧基对不溶性磷酸盐进行螯合使其溶解，质子通过降低周围的pH来溶解不溶性磷酸盐，多糖通过与有机酸的协同效应来推动不溶性磷酸盐的溶解。巨大芽孢杆菌可以提高作物的产量。柳艳艳等研究了不同浓度的巨大芽孢杆菌BM002微生物菌剂对油菜的促生作用，0.1g／kg浓度对提高油菜产量和促进根系生产有显著作用。常慧萍等从小麦根际分离了固氮菌、解磷菌和解钾菌并研究了相互问的作用，解磷菌能促进固氮菌和解钾菌的生长繁殖，3种菌混合使用可促进小麦的生长发育并提高产量。三、应用芽孢杆菌是植物病害生物防治的主要生防细菌，在生长发育过程中产生拮抗性或竞争性的代谢产物，可抑制病原菌生长或杀死病原菌。最常用的生防芽孢杆菌主要有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌。近年来关于巨大芽孢杆菌生防作用的研究较多，秦健研究了巨大芽孢杆菌B196的抑菌作用，巨大芽孢杆菌B196可以抑制水稻纹枯病菌、水稻细菌性条斑病菌、水稻白叶枯病、番茄青枯病菌、烟草赤星病菌、烟草灰霉病菌、玉米白绢病菌和西瓜枯萎病菌等病原菌的生长。孔青研究了海洋巨大芽孢杆菌抑制黄曲霉的生长，并能抑制在花生上黄曲霉毒素的生物合成，其机理为通过竞争性生长和产生某种次级代谢产物，抑制黄曲霉的生长和黄曲霉毒素合成基因的表达。巨大芽孢杆菌的生防作用应用到农业中，可以减少农药的使用，降低农资成本，并可以间接地降低农产品的农药残留，具有非常重要的意义。目前对巨大芽孢杆菌的研究逐渐从传统的菌种筛选、发酵条件优化和生理生化功能到特殊功能的研究，如巨大芽孢杆菌具有水体净化的作用。关于巨大芽孢杆菌的水体净化的研究主要集中在对水体有机物与磷的降解、修复水体富营养化以及在水产养殖中的应用。王琳等采用投菌法对富营养化景观水体的试验研究，巨大芽孢杆菌对富营养化水体中的总氮(TN)、总磷(TP)和CODcr均有一定的去除效果。侯颖等从养鱼池水中分离筛选到一株具有氨氮降解作用的巨大芽孢杆菌，菌株在24h内的氨氮降解率>95％，并具有硝酸还原和亚硝酸还原能力，可作为益生菌应用到水产养殖中，有望决养殖水体中的氨氮污染问题。利用巨大芽孢杆菌净化水体，可以避免利用化学制剂引起的二次污染问题，且成本较低，具有非常重要的意义。与传统的大肠杆菌表达系统相比，巨大芽孢杆菌体积是大肠杆菌的100倍以上，巨大芽孢杆菌不产内毒素且蛋白分泌能力远远高于大肠杆菌；与其他芽孢杆菌表达系统相比，巨大芽孢杆菌不产生碱性蛋白酶，表达的外源蛋白不会被降解，且重组质粒在巨大芽孢杆菌中能稳定存在，不易丢失阎，现已广泛应用于工业和学术研究。巨大芽孢杆菌具有表达率高、遗传稳定、产物可分泌和发酵工艺成熟的优点。另外，巨大芽孢杆菌的细胞壁只含有肽聚糖和磷壁质，成分简单，在分泌的蛋白质产品中不会混杂有内毒素，且蛋白跨越细胞膜后，直接或加工后分泌到培养基中以活性结构存在而不发生聚集，不需要再对蛋白质进行复性，因此巨大芽孢杆菌适用于工业大规模的蛋白质生产。巨大芽孢杆菌是革兰氏阳性细菌，其转化方法与革兰氏阴性细菌不同。一般有原生质体转化法和电击转化法。巨大芽孢杆菌的原生质体转化法是由PEG-6000介导的。巨大芽孢杆菌在溶菌酶的作用下转化为原生质体，构建好的携带外源基因的质粒转化进巨大芽孢杆菌中，原生质体转化法比较复杂。电击转化法简单快速且转化效率高，可有效地将DNA转入巨大芽孢杆菌中，是巨大芽孢杆菌最常用的转化方法。巨大芽孢杆菌除了具有解磷作用、生物防治作用、水体净化作用、和表达外源蛋白作用外，还有一些作用逐渐被发现。刘露等筛选并鉴定了一株巨大芽孢杆菌2-2具有降解泡叶藻的作用，巨大芽孢杆菌2-2同时具有海藻胶裂解酶、蛋白酶和纤维素酶活性，将构成海藻的大分子物质降解成小分子、水溶性的物质，zuida限度完整地保留了海藻中的生物活性物质和营养物质，有望取代传统的物理法和化学法，采用生物法进行海藻降解。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     细胞培养基的种类与应用！中国微生物菌种查询网： 经典的培养基有很多种，其中 DMEM、 RPMI 1640、 MEM 、 DMEM/F12 都是应用最广泛的培养基。其他如M199 、 IMDM 、 L15培养基等也用于某些细胞的培养。其具体的特征及应用如下：1、BME细胞培养基基础Eagle培养基（Basal Medium Eagle），1955年Eagle设计，BSS＋12种氨基酸＋谷氨酰胺＋8种维生素。简单、便于添加，适于各种传代细胞系和特殊研究用，在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMDM等。2、MEM细胞培养基又称低限量Eagle培养基（Minimal Essential Medium），1959年在Eagle's基础培养基（BME）上修改而来，删去赖氨酸、生物素，氨基酸浓度增加，适合多种细胞单层生长，有可高压灭菌品种，是一种最基本、试用范围最广的培养基，但因其营养成分所限，针对生产之特定细胞培养与表达时，并不一定是使用效果zuijia或者最经济的培养基。3、DMEM细胞培养基DMEM是由Dulbecco改良的Eagle培养基，起初是为小鼠成纤维细胞设计的。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L，后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L，这就是大家常说的低糖和高糖了。低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。高糖更适合高密度悬浮细胞培养，也适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。4、IMDM细胞培养基Guilber 和Iscove将Dulbecco' Medium 改良为 Iscove's Medium，用于培养红细胞和巨噬细胞前体。此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES。并用硝酸钾取代了硝酸铁。IMDM还能够促进小鼠B淋巴细胞，LPS刺激的B细胞，骨髓造血细胞，T细胞和淋巴瘤细胞的生长。IMDM为营养非常丰富的培养液，因此可以用于高密度细胞的快速增殖培养。5、RPMI-1640细胞培养基Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制，针对淋巴细胞培养设计，含BSS＋21种氨基酸＋维生素11种等。现也用于悬浮细胞培养，如哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。6、HamF10细胞培养基1963年Ham设计，含微量元素，可在血清含量低时用，适用于克隆化培养。F10适用于仓鼠、人二倍体细胞，特适于羊水细胞培养。7、DMEM/F12细胞培养基Ham's F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用，得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物，这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。由于营养成分丰富，且可以使用较少血清，故也常作为无血清培养基的基础培养基。8、M199细胞培养基1950年Morgan等设计的具有确定化学成分的细胞培养液，即M-199。除BSS外，含有53种成分，为全面培养基，主要用于鸡胚成纤维细胞培养。此培养液必须辅以血清才能支持长期培养。M-199可用于培养多种种属来源的细胞，并能培养转染的细胞。现广泛用于病毒学、疫苗生产。9、McCoy5A培养基1959年MeCoy为肉瘤细胞设计，BSS＋40种成分。可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29、BHL-100等上皮细胞。10、L15 细胞培养基L-15培养液适用于快速增殖瘤细胞的培养，用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株。此培养液采用磷酸盐缓冲体系，氨基酸组成进一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。至于选择何种培养基并没有一定的标准，有几点建议可供参考：(1)建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞shouxuan的培养基。可以查阅参考文献，或在购买细胞株时咨询。也可以在一些生物公司的网站上搜索，如Invitrogen网站上有一个Cell Line Database的工具，选择你感兴趣的细胞类型，它就会弹出推荐的培养基、血清和转染试剂等，有时还有优化好的转染步骤，很方便。(2) 其它实验室惯用的培养基不妨一试，许多培养基可以适合多种细胞。(3) 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选RPMI1640 。(4) 用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验结果选择zuijia培养基，这是最客观的方法，但比较繁琐。

                 微生物菌剂的标准和作用以及使用！中国微生物菌种查询网：在农资市场上微生物菌剂品牌真的是太太多了，五花八门，很多企业可以自己生产，也有的企业直接找各种工厂代工生产。微生物菌剂的价格也从50~120元不等。为什么价格会有这么大的差距呢？今天带大家了解一下微生物菌剂。一、微生物菌剂的标准微生物菌剂是所有微生物肥料中标准zuigao的，不管从原料，菌种等各方面讲，微生物肥料中zuihao的，也是价格zuigao的。按照国家规定，微生物菌剂使用20287的标准，要求有益菌每克大于2亿以上。虽然没有有机制的标注，但是一般微生物菌剂的载体中，都是含有有机质。微生物中的有益菌大量繁殖是需要合适的载体，才能达到更好的效果。二、微生物菌剂的载体和菌种微生物菌剂的载体，简单说就是微生物的环境，只有良好的环境微生物才会大量的繁殖。当然这样的载体一般都是以有机制的形式存在。现在我们市场上能买到的微生物菌剂，多数都是单一或者多种菌种混合的。比如枯草芽孢杆菌，胶冻样芽孢杆菌，巨大芽孢杆菌等，这样的菌种我们使用z多。在选择微生物菌剂时，三种菌种混合以上的菌群就比较难，因为菌种就属于微生物，有相互的影响作用。三种以上多种复合菌种效果远远大于单一菌种。有益菌群可以相互协同，共同作用，让作物达到高产丰产的效果。尤其是对于土传病害有很好的预防作用。三、微生物菌剂预防病害的原理微生物在使用到土壤中作用有很多，主要的原理是把微生物菌剂施用到土壤中以后，有合适的土壤环境，合适的温度，合适的水分，让有益菌大量的繁殖，在根系周围，形成以有益菌为主的保护层。这样可以有益菌可以占领有害菌的位置，抑制有害菌的繁殖，让根系更好的生长。四、微生物菌剂的作用微生物菌剂的作用有很多，比如可以解磷解钾固氮，分解土壤中的中微量元素，释放中微量元素让根系吸收。有益菌还可以分解土壤中的重金属，刺激根系生长。微生物菌剂还可以调节土壤，增加土壤的通透能力，改变土壤的团粒结构，让打破土壤板结，增加植物抗旱，抗病，抗寒，抗逆性的能力。五、微生物菌剂的使用微生物菌剂相比微生物菌肥原料更加高级，可以达到全部水溶。一般情况下微生物菌剂都是作为苗期追施抗病，养根生根，效果zuihao。当然在用底肥时，也可以在有机肥中加入微生物菌剂，这样混合后可以增加土壤的有益菌。追肥过程中，微生物菌剂也可以叶面喷雾。多数微生物菌剂的载体都是氨基酸类的肥料，加入了合适的有益菌制作成微生物菌剂。氨基酸可以促进植株细胞快速分裂，让叶片出现，又厚又大，有蜡质层。六、那怎样选择微生物菌剂呢？大家了解这么多微生物菌剂的知识，zuihou教大家怎样选择微生物菌剂。首先选择正规渠道出售的微生物菌剂，其次看包装，查各种证件，包装上必须要有标准，登记证，含量，厂家厂址，电话等信息。同时注意微生物菌剂的载体，原料，功效，使用方法，微生物菌的种类等信息。微生物菌剂，多数的价格区间在80~120比较正常。假如没有明确的选择方向，在底肥使用微生物菌剂，可以选择价格较低的菌剂，当苗期抗病或者叶面喷雾时，建议选择最贵的微生物菌剂，最为合适。因为微生物菌剂的用量很少，所以选择质量好的微生物菌剂很有必要。

                   酵母的种类与发酵因素有哪些？酵母菌作为发酵素，吸收面团中的养分并生长繁殖，将面粉中的葡萄糖转化为水和二氧化碳气体，使面团膨胀、松软，产生蜂窝状的组织结构。当然还有一个前提，是面团在揉面 时产生了足够的面筋，这些面筋能够包裹这些二氧化碳气体，并且能使这些气体不外溢，保持住面团膨胀和松软的状态。酵母菌必须有水才能存活，最适合生长的温度是在20℃~35℃，0℃以下或者高于47℃的温度下，酵母细胞一般不能生长，最适合作用的湿度是75%左右。酵母的种类：野生酵母、工业酵母、鲜酵母有何区别？1.鲜酵母，鲜酵母是酵母乳液经过压榨，色泽为淡黄色或乳白色的方块状。鲜酵母活细胞数量大，所以发酵速度快，产品香气足，而且价格便宜。但是鲜酵母的发酵作用不稳定，而且使用前需要活化（用35℃温水将酵母浸泡，搅拌均匀），再者它对保存温度要求严格（在0~4℃的低温下保存）不适合运输，保质期也比较短，大概1个月吧。所以鲜酵母都是生产厂家专用，家庭用户一般也不容易购买到。鲜酵母的用量一般是面粉的2%-4%。2.活性干酵母：是将鲜酵母压榨后低温干燥制成的细小淡黄色的小颗粒。这种酵母保质期很长，大约2年。干酵母活力大也很稳定，但是这种酵母发酵时间很长，并且事先也需要20多分钟的活化，才能放入面粉使用。所以并不广泛被使用。3.即发干酵母：是目前家庭最常用的一种，它是zuixin工艺将酵母乳液分离低温脱水干燥而成。色泽呈微淡黄色细小颗粒。一般用真空包装。密封时酵母聚集成块状。打开包装后，呈松散颗粒状。密封情况下，可在常温贮存，保质期未开封时大约1年，开封后要尽快使用，如果存放时间长要加大使用的剂量。一般使用量是面粉的0.6-1.5%。即发的干酵母使用比较简单，直接跟所有材料混合，或者先跟少量液体混合再混入面粉，经过搅拌后即可进行发酵。4.天然野生酵母：利用植物的根茎叶果自己培育、氤氲的野生酵母。影响酵母发酵的因素：温度、湿度、时间酵母的量水量与水温盐量糖量甘油山梨糖醇脱氢与山梨酸钾以及超霸其它原料。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 枯草芽孢杆菌在土壤中需要的条件！简介：枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）- 细菌科芽胞杆菌属，因广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖而得名。革兰氏阳性杆状细菌，可产生内生芽孢，耐热抗逆性强，是植物体内常见的一种内生菌，对人畜无毒无害，不污染环境。生长速度快、营养需求简单，在植物的表面易于存活、定殖与繁殖， 生产工艺简单，制剂稳定，施用方便，储存期长，是一种理想的生防微生物。一、生长条件土壤水分、温度和有机质含量对枯草芽孢杆菌的生长繁殖均有影响，一般情况下，适宜植物生长的条件和环境也适宜枯草芽孢杆菌的生长和繁殖。反之，干旱、低温和有机质匮乏对枯草芽孢杆菌的生长繁殖不利。二、土壤温度枯草芽孢杆菌在土温10-40℃范围内能够正常生长繁殖，在10-24℃生长繁殖较缓慢，并随着温度增高而繁殖加快，25-37℃最适宜生长繁殖，在碳源充足（也就是有机质丰富）时约20--30min繁殖一代，超过48℃后生长繁殖受到抑制，但也能繁殖，在60℃条件下可长期存活，在120℃条件下可存活20min。三、土壤湿度水分是枯草芽孢杆菌生长的先决条件，在缺少水分的条件下，枯草芽孢杆菌表现为芽孢状态（休眠），不能生长和繁殖。在土壤湿度低于15%时，枯草芽孢杆菌不能正常生长和繁殖。在土壤湿度15-30%时，枯草芽孢杆菌可生长繁殖，当土壤湿度在30-45%范围内最适宜枯草芽孢杆菌的生长繁殖。实际上，当土壤湿度大于45%时，并不影响枯草芽孢杆菌的生长和繁殖，但是这个湿度条件往往对农作物不利。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 苏云金杆菌的部分生化试验鉴定！一、目的要求： 本实验是通过简单的生化测定来了解苏云金杆菌的生化鉴定技术。 鉴定苏云金杆菌的生化指标是：V、P反应，卵磷脂酶，蛋白水解，吐温酶，水杨素，七叶灵、蔗糖、甘露糖、表膜、酶、淀粉、几丁质酶、精氨酸脱羟酶等。二、实验材料： 1、天平 2、电炉 3、药勺4、量筒5、烧杯6、pH试纸7、高压锅（手提式）8、接种环 三、实验内容： 1、糖利用： 蛋白胨                                     1% 琼脂                                        2% 蔗糖（甘露糖）                         1%（水杨素为0.5%） 1%酸性复红水溶液                     0.5% 蛋白胨加热溶于水中，加入酸性复红水溶液。分别加入一种糖加热溶解，以不加糖的蛋白胨作对照。分装试管，调pH至7.58磅灭菌30分钟。 接种后于30℃恒温培养检查产酸情况，若培养基变红者为正反应。 2、七叶灵利用： 牛肉膏                                1% 七叶灵                                0.5% 琼脂                                  2% 另配5%三氯化铁水溶液单独灭菌。培养基溶后，先将三氯化铁每皿滴入2滴，后倒平板混匀。凝固后电接菌种，30 ℃培养3-5天。菌苔周围出现深褐色区为阳性反应。 3、V、P反应： 蛋白胨5克  葡萄糖5克  NaCl 5克  蒸馏水 1000毫升 分装试管   8磅30分钟灭菌 接菌后于37 ℃培养24小时，每管加入4%KOH溶液10-20滴，再加等量的5%的一萘酚乙醇水溶液后，用力振荡。然后置37 ℃下保温0.5小时。培养物出现红色即为V、P正反应，并设未接种的试管为对照。 4、淀粉水解试验： 牛肉膏 5克  NaCl 5克  可熔性淀粉 5克  琼脂  10克  蒸馏水 1000毫升  将试验菌点种于平板上，徒长出菌落后，收Lugoc氏碘液倾注于平板表面，菌落四周有透明圈者为阳性放应。5、菌膜形成试验： 肉汤试管接种，30。C静止培养24小时后观察菌膜形成情况及摇动后膜破粹情况。6、卵磷脂酶试验 蛋白胨1%   酵母膏  0.3%  NaCl  0.5%  琼脂 2%  卵黄2-3%  pH 7-7.2 用75%酒精将新鲜鸡蛋进行表面消毒，并用经火焰灭菌的镊子将蛋两端各打一个孔，倾去蛋清，然后用无菌5ml吸管取出卵黄，加至触化后冷却至50。C左右的培养基中，使卵黄含量为培养基总体积的2~3%。混匀后倒平板，点接菌种24小时后观察，菌液边缘出现混浊圈者表示卵鳞酯酶为阳性。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

               细菌对于蛋白质和氨基酸的代谢试验！细菌对于蛋白质和氨基酸的代谢原理为：不同种类的细菌分解蛋白质的能力不同。细菌对蛋白质的分解，一般先由胞外酶将复杂的蛋白质分解为短肽（或氨基酸），渗入菌体内，然后再由胞内酶将肽类分解为氨基酸。具体试验方法有：①明胶液化试验；②吲哚试验（靛基质试验）；③硫化氢试验；④尿素酶试验；⑤苯丙氨酸脱氨酶试验；⑥氨基酸脱羧酶试验。  1.明胶液化试验  （1）原理：某些细菌可产生一种胞外酶-明胶酶，能使明胶分解为氨基酸，从而失去凝固力，半固体的明胶培养基成为流动的液体。  （2）方法：将被检菌穿刺接种于明胶培养基，于22℃培养7d，逐日观察结果。若用35℃孵育，因明胶在此温度下自行液化，故在观察结果前，先置4℃冰箱内30min，再看结果。  （3）结果：培养基呈液化状态为阳性。  （4）应用：肠杆菌科细菌的鉴别，如沙雷菌、普通变形杆菌、奇异变形杆菌、阴沟杆菌等可液化明胶，而其他细菌很少液化明胶。有些厌氧菌如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等也能液化明胶。另外多数假单胞菌也能液化明胶医学教|育网搜集整理。  2.吲哚（靛基质）试验  （1）原理：某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚（靛基质），当加入吲哚试剂（对位二甲氨基苯甲醛）后则形成红色的玫瑰吲哚。  （2）培养基：蛋白胨水培养基。  （3）方法：将待检菌接种于上述培养基中，于35℃培养24～48h，沿试管壁慢慢加入吲哚试剂。  （4）结果：于两者液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。  （5）应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。  3.硫化氢试验  （1）原理：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸）产生硫化氢，硫化氢遇铅或亚铁离子则形成黑褐色的硫化铅或硫化铁沉淀。此试验可间接检测细菌是否产生硫化氢。  （2）培养基：醋酸铅培养基。  （3）方法：将待检菌穿刺接种于醋酸铅培养基，于35℃培养24～48h观察结果。  （4）结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性。  （5）应用：主要用于肠杆菌科中属及种的鉴别。如沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属细菌，绝大多数硫化氢阳性，其他菌属阴性。沙门菌属中也有硫化氢阴性菌种。  4.尿素分解试验  （1）原理：某些细菌具有尿素分解酶，能分解尿素产生大量的氨，使培养基呈碱性。  （2）培养基：尿素培养基。  （3）方法：将待检菌接种于尿素培养基，于35℃培养18～24h观察结果。  （4）结果：培养基呈碱性，使酚红指示剂变红为阳性，不变为阴性。  （5）应用：主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。奇异变形杆菌和普通变形杆菌脲酶阳性。另外雷氏普罗威登菌和摩根菌为阳性，而斯氏和产碱普罗威登菌阴性。  5.苯丙氨酸脱氨酶试验  （1）原理：某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基，形成苯丙酮酸，加入氯化铁试剂后产生绿色反应。  （2）培养基：苯丙氨酸琼脂培养基。  （3）方法：将被检菌浓厚接种于苯丙氨酸琼脂培养基斜面上，于35℃培养18～24h，滴加10％三氯化铁试剂3～4滴，自斜面上方流下。  （4）结果：出现绿色为阳性。应立即观察结果，延长反应时问会引起褪色。  （5）应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根菌属细菌均为阳性，肠杆菌种中其他细菌均为阴性。  6.氨基酸脱羧酶试验  （1）原理：具有氨基酸脱羧酶的细菌，能分解氨基酸使其脱羧生成胺（赖氨酸→尸胺，鸟氨酸→腐胺，精氨酸→精胺）和二氧化碳，使培养基变碱。使指示剂显示出来。  （2）培养基：氨基酸脱羧酶培养基和氨基酸对照培养基。  （3）方法：将被检菌分别接种于赖氨酸（或鸟氨酸或精氨酸）培养基和氨基酸对照培养基中，并加入无菌液体石蜡或矿物油，于35℃培养l～4d，每日观察结果医学教|育网搜集整理。  （4）结果：对照管应呈黄色，测定管呈紫色（指示剂为溴甲酚紫）为阳性，若测定管呈黄色为阴性。若对照管呈现紫色则试验无意义，不能作出判断。  （5）应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。如沙门菌属中除伤寒和鸡沙门菌外，其余沙门菌的赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶均为阳性。志贺菌属除宋内和鲍氏志贺菌外，其他志贺菌均为阴性。       欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                大鼠子宫内膜上皮细胞提取物的应用！一、背景大鼠子宫内膜上皮细胞提取物是从大鼠原代子宫内膜上皮细胞提取的，大鼠原代子宫内膜上皮细胞从正常大鼠子宫组织制备可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。二、生理结构及功能子宫内膜上皮细胞是指构成哺乳类子宫内壁的一层，子宫内膜上皮细胞主要功能：（1）子宫内膜亦称子宫粘膜，是指构成哺乳类子宫内壁的一层。（2）子宫内膜对动情素和孕激素都起反应，因此可随着性周期（发情周期、月经周期）发生显著的变化。子宫内膜层（endometrium，uterine endome-trium）是指构成哺乳类子宫内壁的一层，对雌激素和孕激素都起反应，因此可随着性周期（发情周期、月经周期）发生显著的变化。子宫内膜分为功能层和基底层2层。内膜表面2/3为致密层和海绵层统称功能层，受卵巢性激素影响发生周期变化而脱落。基底层为靠近子宫肌层的1/3内膜，不受卵巢性激素影响，不发生周期性的变化。雌激素可引起子宫肥大，孕激素可促使子宫内膜发生特殊的妊娠初期变化，或改变子宫内膜的性质，使之具有产生蜕膜的能力。 子宫内膜覆盖着粘膜，由粘膜上皮与其下方的固有层所组成。粘膜上皮为柱状上皮、立方上皮或复层柱状上皮，雌激素分泌时，各上皮细胞将长大、分裂使数目增多。固有层中粘膜上皮下方的部分称为机能层，上皮细胞进入其中形成子宫腺，并对雌激素起反应。机能层的下层称为基底层，富有血管。三、应用大鼠子宫内膜上皮细胞提取物可用于粒细胞集落刺激因子对大鼠薄型子宫内膜治疗的初步研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠薄型子宫内膜的治疗作用及其可能的机制。方法取性成熟未交配雌性具有规律动情周期的SD大鼠36只,采用宫腔内保留灌注无水乙醇5分钟建立薄型子宫内膜大鼠模型,随机分为4组：①急性损伤治疗组：于模型制备后立即皮下注射生理盐水(NS)稀释的G-CSF(40μg/kg/d),连续5d；②急性损伤对照组：于模型制备后立即皮下注射等量NS,连续5d；③慢性损伤治疗组：于模型制备3个动情周期后皮下注射NS稀释的G-CSF(40μg/kg/d),连续5d；④慢性损伤对照组：于模型制备3个动情周期后皮下注射等量NS,连续5d。均于注射G-CSF或NS后的第4个动情期处死大鼠,取双侧子宫组织行苏木精-伊红(HE)染色观察子宫内膜形态学改变(测量子宫内膜厚度),免疫组织化学方法检测子宫内膜单位面积中细胞角蛋白和波形蛋白的表达。结果1.急、慢性损伤对照组子宫内膜形态学均表现为薄型子宫内膜。与此相比,急性损伤治疗组子宫内膜明显增厚,表面呈波浪形,腺上皮及腔上皮细胞完整,呈立方状,腺体数目稀少,部分管腔囊性扩张,间质疏松,新生毛细血管数目明显增多；慢性损伤治疗组子宫内膜厚度增加,但不及急性损伤治疗组,表面略可见波浪形,腺体数目无变化,间质疏松,新生血管数目增多。波形蛋白主要表达于间质细胞和少量内皮细胞中,以此反映间质细胞再生长情况。四组单位内膜面积中波形蛋白面积依次为：13.40±0.63%、7.27±0.48%、12.86±0.71%、7.30±0.53%,各治疗组与相应对照组间比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论1.宫腔内保留灌注无水乙醇5分钟经过约7个动情周期(约28-35天),子宫内膜仍表现为薄型,进一步证实薄型子宫内膜大鼠模型的可重复性和稳定性。2.G-CSF对子宫内膜的急性损伤和慢性损伤均具有一定的治疗作用,但对急性损伤的治疗效果佳,可能与间质细胞增生和血管新生有关。中国微生物菌种查询网自设细胞系板块，是细胞株提供中心,专业提供代次低、周期短、活性好的细胞株。与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                多粘类芽孢杆菌的生防机制与应用！多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa；P.polymyxa)在分类学上的地位是：厚壁菌门，芽孢杆菌科，类芽孢杆菌属（Paenibacillus）。类芽孢杆菌属的细菌在自然界中分布较广，它们是一类生理特性多样的杆状细菌，也是土壤与植物微生态的优势种群之一。 一、细菌介绍生防菌类别 ： 细菌应用作物 ： 棉花、玉米、水稻、花生、马铃薯、黄瓜、青椒防治对象 ： 棉花黄萎、黑根腐、炭疽病、赤霉病；玉米全蚀病；水稻白叶枯病；花生青枯病；马铃薯软腐病；黄瓜角斑；青椒疮痂二、生理特性1.生理特征多粘类芽孢杆菌属于类芽孢杆菌属，是一种产芽孢的革兰氏阳性细菌，好氧或兼性厌氧生活。其细胞呈直杆状，大小为(0.5～2.5μm)×(1.2～10 μm)，G+C含量为40%～50%；其菌落特征多呈浅黄或白色的粘稠状，表面湿润光滑；可利用周生鞭毛运动，膨大孢子囊中产生椭圆型芽孢；最适生长pH为7.0，最适温度为28～35℃；分解葡萄糖和其他糖类，能产酸，有时产气，在营养琼脂上无可溶性色素。 2.代谢活性物质多粘类芽孢杆菌可产生多种可利用的代谢活性物质，按其结构可分为肽类、蛋白质类、多糖类等。这些物质大多具有拮抗微生物、促进植物生长等功能。1)肽类 多粘类芽孢杆菌产生的肽类可拮抗细菌和真菌。拮抗细菌的细菌的抗生素包括多粘菌素(Polymyxin)、粘菌素(Colistin)、环杆菌素；拮抗真菌的抗生素为乔利肽菌素(Jolipeptin)、多肽菌素(Polypeptins)、谷缬菌素(Gatavalin)、杀镰孢菌素(Fusaricidins)。多粘菌素是由多粘类芽孢杆菌产生的碱性脂肽类抗生素，由多种氨基酸和脂肪酸组成，它能够与细胞壁脂多糖、脂蛋白的磷酸基结合，使细胞膜通透性增加，细胞浆成份外渗，导致细菌死亡。谷缬菌素对革兰氏阳性细菌和分支杆菌、酵母、黑曲霉、苹果青霉、链孢霉等真菌有抑制活性。2)蛋白质 多粘类芽孢杆菌的抗菌蛋白主要为水解酶类包括多糖水解酶和蛋白水解酶。姚乌兰等发现多粘类芽孢杆菌WYll0产生的抗茵蛋白能降解革兰氏阳性细菌细胞壁葡聚糖的β-1，3或β-l，4-葡聚糖酶类似物。3)多糖 中药百部的组织中的植物内生多粘类芽孢杆菌EJS．3能产胞外多糖，其代谢产物天然果聚糖，可以用作食品增稠剂、免疫激活剂等。除此之外，多粘类芽孢杆菌还能产核苷酸类、吡嗪类、酚类化合物、植物激素等。 三、应用P.polymyxa 在农业中的应用主要体现在两个方面：一是作为微生物肥料促进植物的生长和增产；二是作为生物农药防治植物多种病害。1.作为微生物肥料微生物肥料是含有一种或数种有益活体微生物的制品，通过微生物的代谢过程 或代谢产物，达到增加植物养分供应和促进植物生长的目的。在农业生产中化肥一 直是人们的shouxuan，然而长期施用化肥会破坏土壤结构，使土壤酸碱化、板结，造成 土壤肥力下降，农产品品质降低，还会污染环境。而微生物肥料具有活化土壤养分、 改善作物品质、提高作物产量、生产成本低、效果好、不污染环境等优点，在农业 可持续发展中占有重要地位。 如前所述，P.polymyxa 能分泌植物激素，能生物固氮，能溶磷、解钾，还能促进 植物光合作用。当其作为微生物肥料施用给植物时，能迅速在植物根际、内部定植 并形成“生物膜”，促进植物对营养物质的吸收。有研究报到，对种植的小扁豆施用 P.polymyxa，将它与未施用进行对照，发现植株的不管是分支数、重量、千粒豆重量 还是豆子的干重、蛋白质和磷的含量都有显著的提高。在小扁豆种植过程中同时施用 rhizobium（根瘤菌）、P.polymyxa 和 15kg 氮肥，通过检测，小扁豆的种子产量、 豆子含磷量、氮肥重复利用均达到zuigao值，分别为 1911.45kg/ha、1.06%以及 66.86kg/ha。何飚等发明了一种有机食品、绿色食品的理想微生物肥料 (CNl255471)，其主要成分就是 P.polymyxa CGMCC0395.1。美国的 Burnham 也将 P.polymyxa 作为主要成分的生物肥料申请了专利(US6841515)。 2.作为生物农药生物农药是指直接利用生物活体（细菌，真菌，昆虫病毒、天敌等）或其产生的生物活性物质针对农业有害生物进行抑制或杀灭的制剂。P.polymyxa 就是其中重要的一员，其通过拮抗作用、空间位点竞争和诱导抗病性来抑制和杀灭植物病害。 P.polymyxa 的一个菌株常常可以抑制或杀灭多种植物病原菌，它所能防治引起植物病害的病原菌分布于细菌门 6 个属、真菌门 24 个属、卵菌门 2 个属。此外研究发现 P.polymyxa 还对番茄中寄生的根结线虫有很好的抑制效果。 目前国内外有很多关于 P.polymyxa 能防治多种细菌性病害（桑树细菌性枯萎病、 烟草青枯病、茄科作物的青枯病、白菜软腐病、芋头软腐病、黄瓜角斑病等）和真菌性病害（烟草赤星病、茄科和葫芦科的枯萎病、稻瘟病、番茄灰霉病等）的报道。 徐玲等用实验证明 P.polymyxa HY96-2 对番茄青枯病病原菌 Nb-1 有很好的拮抗作用，防治番茄青枯病zuihao的施用方法是用其生防制剂浸根。 李静等分离得到一株 P.polymyxa CX-PA，该菌能进入白菜体内定植，并对菜心炭疽病及霜霉病有显著的抑制效果。四、生防机制植物根际促生细菌（PGPR）指的是一群附生于植物根系，可增强植物对矿物质营养的吸收及利用，可以促进植物生长和抑制它种有害微生物的根际细菌。多粘类芽孢杆菌作为 PGPR 重要的一员，在促进植物生长及防治植物病害方面都有显著的效果，其作用机制比较多样，主要有四个方面。1.拮抗作用拮抗作用是指一类微生物抑制或杀死它类微生物的作用。如前面所述，多粘类芽孢杆菌能产生多种抗菌物质，这些抗菌物质种类不同，抗菌机制也各不同。有的抗菌物质（抗菌肽等）能够溶解细菌细胞膜或真菌细胞壁，造成原生质泄漏，使细胞畸形或菌丝断裂；有的抗菌物质（抗菌蛋白等）能抑制病原菌的孢子萌发和管芽伸长；有的抗菌物质（表面活性素等）则作用于病原菌染色体 DNA，影响 DNA 的复制、转录与表达，导致蛋白质的合成受阻，妨碍病原菌繁殖。某些菌株还能同时产生多种结构类似的抗菌物质，他们有协同增效的作用。2.竞争作用竞争作用是指拮抗菌与病原菌在水分、氧气、营养物质及空间上竞争，拮抗菌迅速生长、繁殖，排除同一生境中的某些病原菌。竞争作用主要是营养及空间位点的竞争。营养竞争是指对土壤中氮、磷、铁等营养元素的竞争。其中生防细菌抑制植物病原微生物的一个重要手段就是铁载体对铁的竞争。某些拮抗菌能产生可以和铁结合的小分子物质，即铁载体（嗜铁素），它与 Fe3+形成鳌合物，且结合能力很强。铁载体从土壤环境中夺走 Fe3+，导致环境中的铁浓度降低，病原菌自己本身不能产铁载体或产生很少，又不能利用拮抗菌产生的铁载体，其生长繁殖因缺铁而受阻，生防细菌可以通过这种方式抑制植物病害的发生。在植物病害防治中，与营养竞争相比，空间位点竞争占主导地位。空间位点竞争就是微生物在植物的体内、体表、根际、根系土壤中快速定植和繁殖，形成一层“生物膜”，并且在植物根部细胞内维管束外的空间积累。当病原菌入侵时，因拮抗菌抢先占据植物的有利空间位点，干扰和阻止了病原菌在植物上的定植与侵染，有效的抑菌控病。罗远婵等在研究 P.polymyxa HY96-2 菌株的防治机制时发现，在番茄根际和植株内该菌能很好地定植，将青枯病菌和它同时灌根接种番茄，它能在 21 天内就迅速地阻止青枯病菌侵入番茄植株。Timmusk 将 P.polymyxa B1 用绿色荧光蛋白(GFP)标记之后接种植物拟南芥，发现 Bl 能快速在拟南芥根部的一些区域定植并形成“生物膜”，阻止病原菌从相同位点入侵。 3.诱导植物抗性诱导植物抗性（ISR）是指生物或非生物物质促使植物形成物理或化学屏障，从而帮助植物抵抗生物类（病原细菌、真菌、病毒和线虫等）侵害和非生物（重金属、干旱、盐分等）胁迫。前者其实是植物本身对病原菌就存在潜在防御机制，而 PGPR菌株或病原菌可以诱发这种防御机制。植物可介导 PGPR 产生水杨酸、脂多糖等物质来防治病害，PGPR 并未直接抑制或杀死病原菌。Timmusk 等研究发现用P.polymyxa B2 接种拟南芥可增强其对软腐病的抗性，随后利用 RNA 差异展示技术和 RTPCR 分析了拟南芥的基因表达水平，证明 P.polymyxa B2 可诱导拟南芥中水杨酸途径相关抗病基因和茉莉酸/乙烯途径的相关抗病基因的表达。童蕴慧等发现P.polymyxa Y2-11-1 和 W3 的菌悬液及其滤液能增强番茄植株内多种酶的活性，使番茄对灰霉病产生抗性。Lee B 等发现 P.polymyxa E681 产生的挥发性有机物（十三烷、2,3-丁二醇等)能诱导一系列相关抗病基因(ChiB、PRI 及 YSP2)的表达来使宿主获得系统抗性，从而抵御植物叶斑病。 4.促进植物生长已有研究表明 P.polymyxa 对植物的促生作用主要通过下面三种方法：一是P.polymyxa 通过产生长素、分裂素等植物激素来促进植物生长；二是 P.polymyxa 通过生物固氮为植物提供氮源，将 P、K 复合物降解为植物可吸收利用的营养物质，促进植物的生长和增产；三是 P.polymyxa 通过增强植物的光合作用来促进植物生长。张高峡等从农作物根际分离的某些多粘类芽孢杆菌在有氧或厌氧条件下能够合成固氮酶进行生物固氮。顾小平等从毛竹根围分离的 P.polymyxa 具有较高的固氮活性。目前对微生物溶解磷的作用机理研究比较深入，对溶解钾的研究还停留在对菌株溶解钾能力的测定上。土壤中的磷元素因为易与钙、镁、铝、铁结合形成磷酸不溶复合物（磷酸钙、磷酸铵镁、磷酸铝及磷酸铁）不能被植物吸收而流失，PGPR 菌株可以将这些复合体溶解并转化为有机磷，提供给植物，不仅能提高土壤中矿物磷的利用效率，还能提高作物产量。有研究者从辣椒根际筛选出一种P.polymyxa SC2，通过实验证明该菌株除了具有广谱抗菌作用外，还具有较好的溶磷、解钾能力。有学者研究了在不同土壤肥力条件下 P.polymyxa BcP2 对玉米生长的影响，结果表明该菌种在贫瘠的土壤能使玉米对氮、磷、钾的吸收作用增强。P.polymyxa 还能提高植物的光合作用。史应武等研究了内生 P.polymyxa S-7 对甜菜产量及叶片光合参数的影响，结果显示，该菌能影响甜菜光合参数，显著增强甜菜的光合作用，提高甜菜的品质和产量。 五、生防特点多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)对植物黄萎病、鹰嘴豆枯萎病、油菜腐烂病、黑松根腐病等多种植物病害均具有一定的控制作用。美国环境保护署(EPA)已将其列为可商业上应用的微生物种类之一。无论是采用HY96-2（P. polymyxa）发酵液，还是由HY96-2制成的细粒剂(KDLD)，在温室内和田间都取得了稳定的防治效果，并且KDLD细粒剂在田间表现的效果更为突出。在试验过程中，特别注意了生防菌株发酵液的使用。新鲜的发酵液在防治试验中表现出稳定的防治效果，而放置一段时间的发酵液，防治效果会出现较大差异，不同批次的试验效果不稳定。我们认为，放置一段时间的发酵液的活菌含量、活力及代谢产物都会发生变化，这种变化会对防治试验产生较大的影响。因此，使用新鲜的发酵液或制成稳定的制剂开展田间防治试验，是我们开展菌株筛选和应用研究必须注意的一个关键问题。

                  培养基的组成成份：营养物质中国微生物菌种查询网：尽管不同的细菌对营养的要求不同，但细菌需要的营养物质应含有水、氮源、碳源、无机盐类和生长因子等，常用的营养物质如下：1.蛋白胨：蛋白胨是制备培养基时最常用的成分之一，提供细菌生长繁殖所需要的氮源。是动物或植物蛋白质经酶或酸碱分解而成。植物胨和动物胨各有优点，配制培养基常将两者按一定比例混合使用，提高培养基的营养价值。蛋白胨易溶于水，遇酸不沉淀，不因受高温而凝固，并为两性电解质有缓冲作用。但吸水性强，应注意干燥密封保存。2.肉浸液：是用新鲜牛肉浸泡、煮沸而制成的肉汁。其中含有可溶性含氮浸出物（肌酸、黄嘌呤、腺嘌呤、次黄嘌呤核苷酸、谷氨酸、甘氨酸等）和非含氮浸出物（肝糖、乳酸、琥珀酸、磷酸己糖、脂肪、无机盐类等）。还有一些生长因子。肉浸液可为细菌提供氮源和碳源，但肉浸液中所含氮物质过少而不能满足细菌的需要，因此在制备培养基时应再加入l%～2%的蛋白胨和0.5%氯化钠。3.牛肉膏：由肉浸液经长时间加热浓缩而制成。糖类在加热过程中被破坏，所以其营养价值低于肉浸液，但因无糖可用作肠道杆菌鉴别培养基的基础成分。由于使用方便，常用于制备培养基。4.糖类、醇类：为细菌生长提供碳源和能源。制备培养基所用的糖类、醇类有多种，常用的糖类有单糖（葡萄糖、阿拉伯糖等）、双糖（乳糖、蔗糖等）和多糖（淀粉、菊糖等）；常用的醇类有甘露醇、卫茅醇等。除葡萄糖、蔗糖主要作为碳源和能源的基本成分外，其他糖类和醇类主要用于鉴定细菌所做的发酵反应。5.血液：血液中既含有蛋白质、多种氨基酸、糖类、无机盐类等营养物质，又能提供辅酶（如V因子）、血红素（X因子）等特殊生长因子，所以培养基中加入血液用于培养营养要求较高的细菌。另外，还可根据细菌在血液培养基中的溶血现象而进行鉴定。6.无机盐类：提供细菌生长的各种元素，如：钾、钠、铁、镁、钙、磷、硫等。用于制备培养基的无机盐类有多种，其中最常用的有氯化钠和磷酸盐，前者对维持酶的活性、调节菌体内外的渗透压非常重要，后者是细菌良好的磷源，并在培养基中具有缓冲作用。7.鸡蛋和动物血清：虽然不是构成培养基的基本成分，但却是某些细菌生长所必需的营养物质，所以仅用于制备一些特殊的培养基，这些细菌直接从鸡蛋和动物血清中获取营养。如培养结核分枝杆菌的鸡蛋培养基和培养白喉杆菌的吕氏血清培养基等。8.生长因子：是细菌生长所必需的，但需要量很小。在制备培养基时，常在肝浸液、肉浸液、酵母浸液和含血液培养基中加入维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等生长因子。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   发酵工业中常用常见的酵母菌！（一）酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）这是发酵工业上最常用的菌种之一。按细胞长与宽的比例可将其分为三组。1）细胞多为圆形或卵形，长与宽之比为1～2。这类酵母除了用于酿造饮料酒和制作面包外，还用于乙醇发酵。其中德国2号和12号（RasseII和RasseXII）最有名，但因其不能耐高浓度盐类，故只适用于以糖化的淀粉质为原料生产乙醇和白酒。2）细胞形状以卵形和长卵形为主，也有些圆形或短卵形细胞，长与宽之比通常为2。常形成假菌丝，但不发达也不典型。这类酵母主要用于酿造葡萄酒和果酒，也可用于酿造啤酒、蒸馏酒和酵母生产。葡萄酒酿造业称此为葡萄酒酵母（Sac．ellisoideus）。3）大部分细胞长宽之比大于2，它以俗名为台湾396号酵母为代表。我国南方常将其用于糖蜜原料生产乙醇。其特点为耐高渗压，可忍受高浓度盐类。该酵母原称魏氏酵母（Sac．willanus）。在啤酒酿造中最早采用的酵母是卡尔斯伯啤酒厂的E．C．Hansen（1842～1909年）在1883年分离的卡尔斯伯酵母（Saccharomyces carlsbergensis），这是一种底面发酵酵母。酿酒酵母也可用于啤酒酿造，但属上面发酵酵母，这两种酵母发酵的过程和啤酒风味都有所不同。目前在分类上皆采用酿酒酵母的学名。底面发酵酵母其细胞为圆形或卵圆形，直径为5～10μm。它与酿酒酵母在外形上的区别是，卡氏酵母部分细胞的细胞壁有一平端。另外，温度对这两类酵母的影响也不同。在高温时，酿酒酵母比卡氏酵母生长得更快，但在低温时卡氏酵母生长较快。酿酒酵母繁殖速度zuigao时的温度为33℃，而卡氏酵母需在36℃。但在8℃时卡氏酵母较酿酒酵母繁殖速度几乎快一倍。（二）异常汉逊酵母（Hansenula anomala）细胞为圆形，直径4～7μm，椭圆形成腊肠形，大小为（2.5～6）μm×（4.5～20）μm，甚至有长达30μm的长细胞，多边芽殖，发酵，液面有白色菌醭，培养液混浊，有菌体沉淀于管。生长在麦芽汁琼脂斜面上的菌落平坦，乳白色，无光泽，边缘呈丝状。在加盖片的马铃薯葡萄糖琼脂培养基上培养，能生成发达的树状分枝的假菌芽生孢子圆或椭圆形。菌丝顶端的细胞很长，可达20μm。子囊是由细胞直接变成的。每个子囊有1～4个（多为2个）帽形孢子，子囊孢子由子囊内放出后常不散开。从土壤、树枝、树木中流出的汁液、储存的谷物、青储饲料、湖水或溪水、污水和蛀木虫的粪便中，都曾分离到异常汉逊酵母。由于异常汉逊酵母能产生乙酸乙酯，故它常在调节食品的风味中起到一定作用。如将其用于无盐发酵酱油可增加香味，有的厂还用这种菌参与以薯干为原料的白酒的酿造，采用浸香和串香法可酿造出比一般薯干白酒味道醇和的白酒。它氧化烃类的能力较强，能利用煤油，可以用乙醇和甘油作为碳源，在100mL无机盐合成培养基（以3g硫酸铵为氮源）中，逐步加入6mL乙醇（每次加2mL），经6天培养可得3.9g菌体。不少真菌在培养液中能积累游离氨基酸，其中异常汉逊酵母积累L-色氨酸更为突出。（三）粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）　　细胞呈圆柱形或圆筒形，末端圆钝，也有的呈椭圆形，大小为（3.55～4.02）μm×（7.11～24.9）μm。营养繁殖为裂殖，无真菌丝，无醭，在麦芽汁中能发酵，液体混浊有沉淀（图2-86）。培养在麦芽汁琼脂斜面上的菌落为乳白色，光亮、平滑、边缘整齐。在加盖片的马铃薯葡萄糖琼脂培养基上培养不生成假菌丝，也无真菌丝。子囊由两个营养细胞接合后形成，每个子囊有1～4个光面的圆形子囊孢子，大小为3～4μm。该酵母最早是从非洲粟酒中分离出来的，以后不同的人曾多次在甘蔗糖蜜中将它分离出来，在水果上也常能发现它。有人曾对在用菊芋（鬼子姜）制成的未水解糖液中粟酒裂殖酵母的发酵能力进行研究，结果发现，由此可得到产量很高的乙醇。（四）黏红酵母黏红变种（Rhodotorula glutinis）细胞呈卵形到球形，大小为（2.3～5.0）μm×（4.0～10）μm，某些菌株细胞较长，可达12～16μm，其宽度可增到7μm。在麦芽汁琼脂斜面上培养，细胞较液体麦芽汁中小一些，有时也长一些。在斜面上培养一个月以上，菌苔呈现珊瑚红到橙红色或微带橘红色；表面由光滑到褶皱，有光泽，质地黏稠有时发硬；其横切面扁平，有较宽的凸起部分，边缘由不规则到整齐，顶端常有较原始的假菌丝。在加盖片的玉米粉琼脂培养基上培养，通常无假菌丝或只是较原始类型的假菌丝，但偶尔也有某些菌株的假菌丝很发达，有时甚至出现真菌丝。人们曾从空气、水、花、土壤、鳟鱼肠道、泡菜水、腌小虾、榆树叶的液汁、白杨树的黏液中分离出黏红酵母。这个种能氧化烷烃，是较好的产脂肪菌种。据报道，其脂肪含量可达干物重量的50％～60％，但合成脂肪速度缓慢，如在培养液中添加氮和磷，则可增大合成速度。产1g脂肪约需4.5g葡萄糖，在一定条件下，还可产生L-丙氨酸和L-谷氨酸。其产蛋氨酸的能力很强，蛋氨酸的产量可达干重的1％。（五）产朊假丝酵母（Candida utilis）细胞呈圆形、椭圆形或圆柱形（腊肠形），大小为（3.5～4.5）μm×（7～13）μm，无醭，管底有菌体沉淀，能发酵。培养在麦芽汁琼脂斜面上的菌落为乳白色，平滑，有光泽或无光泽，边缘整齐或呈菌丝状。在加盖片的玉米粉琼脂培养基上培养，仅能生些原始假菌丝，或不发达的假菌丝，或无假菌丝；不产生真菌丝。有人曾从酒坊的酵母沉淀、牛的消化道、花、人的唾液中分离出产朊假丝酵母。在微生物蛋白中，人们研究得最多的是酵母蛋白。其中以产朊假丝酵母和啤酒酵母是最常用的，而产朊假丝酵母的蛋白质含量和维生素B含量均比啤酒酵母高，它能够以尿素和硝酸作为氮源，在培养基中不需要加入任何刺激生长的因子即可生长。特别重要的是，它能利用五碳糖和六碳糖，既能利用造纸工业的亚硫酸废液，也能利用糖蜜、马铃薯淀粉废料、木材水解液等生产出人畜可食的蛋白质。在工业生产酵母时，一般不用淀粉废料，即使需要利用时，也常常要将能分泌淀粉酶的肋状拟内孢霉（Endomycopsis fibuliger）或柯达氏拟内孢霉（Endomycopsis chodati）同时加入培养，这样，产朊假丝酵母便可利用拟内孢霉分解淀粉所产生的糖作为其菌体生长的碳源。（六）白地霉（Geotrichum candidum）28～30℃在麦芽汁中培养1天，产生白色醭，呈毛绒状或粉状，韧或易碎。具有真菌丝，有的有两叉分枝，横隔多或少，菌丝宽2.5～9μm，一般为3～7μm，裂殖，节孢子单个或连接成链，呈长筒形、方形，也有椭圆形或圆形，末端圆钝。节孢子绝大多数为（4.9～7.6）μm×（5.4～16.6）μm。28～30℃在麦芽汁琼脂斜面划线培养3天，菌落白色，呈毛状或粉状，皮膜型或脂泥型。菌丝及节孢子的形状与麦芽汁中的近似。28～30℃在麦芽汁琼脂上悬滴培养14h，节孢子发芽形成菌丝，有横隔，悬滴边缘处有的菌丝断裂为节孢子；22h后一部分菌丝末端断裂成节孢子。25～28℃在麦芽汁琼脂上的巨大菌落，经培养3天后，直径为30～40mm，5天达50～70mm；培养5天的菌落为白色，呈绒毛状或粉状。此菌能水解蛋白，其中多数能液化明胶及胨化牛奶，少数则只能胨化牛奶，但不液化明胶；其生长zuigao温度为33～37℃。从动物粪便、有机肥料、烂菜、蔬菜、青菜、树叶、青储饲料、泡菜及土壤垃圾中都可分离到白地霉。其中以烂菜上分布最多，肥料和动物粪便次之。白地霉的营养价值并不比产朊假丝酵母差，因此可供食用及用作饲料，也可用于提取核酸。白地霉还可合成脂肪，但产量不如红酵母、脂肪酵母等高。（七）粉状毕赤酵母（Pichia farinosa）毕赤酵母属细胞形状多样，多边出芽；能形成假菌丝，常有油滴，表面光滑，发酵或不发酵，不同化硝酸盐，能利用正癸烷及十六烷，可发酵石油以生产单细胞蛋白，在酿酒业中为有害菌，代表种为粉状毕赤酵母（Pichia farinosa）。粉状毕赤酵母是最近迅速发展的一种基因工程表达宿主，它有许多优点：①含特有的AOX（醇氧化酶基因）启动子，用甲醇可以严格地调控其表达；②有完备的发酵方法，可以高密度连续培养，其转化子能够非常稳定地表达外源蛋白质，蛋白产量高；③适应能力强，易于操作，可以在廉价的非选择性培养基中生长；④基因表达产物既可在胞内，又可被分泌到胞外，分泌的异源蛋白质占所有被分泌蛋白的30％以上，利于工业规模的生产；⑤能对要表达的多肽和蛋白质进行翻译后加工处理。利用重组的基因工程毕赤酵母已高效表达植酸酶。毕赤酵母是一种甲醇酵母，对外源蛋白的糖基化等更接近于哺乳动物细胞，而目前较为广泛使用的酿酒酵母则往往出现过度糖基化，这些都是毕赤酵母日益受到重视的主要原因。其表达系统已经迅速地成为重要的蛋白质表达系统之一，现广泛使用于各类实验室。用毕赤酵母表达蛋白水平高出酿酒酵母10～100倍，又适用于高密度发酵，因此更适用于工业化生产。（八）产甘油假丝酵母（Candida glycerinogens）细胞圆筒形、卵圆形，大小为（2.5～4.4）μm×（4.4～12.0）μm，菌落为干燥、灰白、平薄。芽殖，易形成假菌丝，不产生子囊孢子。线粒体DNA分子量为20kb左右，符合假丝酵母属典型特征。碳源主要是葡萄糖、蔗糖和乙醇，对甘油、柠檬酸微弱且利用缓慢，不能同化肌醇、赤藓醇、阿拉伯醇、甘露醇及硝酸盐，与DBB显色反应为阴性。该菌具有独特的生理生化特征，该菌株厌氧时仅对葡萄糖微发酵，对麦芽糖、蔗糖、乳糖和半乳糖不发酵，同化葡萄糖，但不同化麦芽糖、蔗糖、乳糖和半乳糖，能同化乙醇和烃类，生长不需要外源维生素；在25℃、30℃、37℃及40℃下生长；在含500g/L葡萄糖的培养基及10mL/L醋酸的培养基中良好生长，zuidi生长水活度为0.890。它具有合成并分泌高浓度甘油的特性，是目前我国用于发酵甘油工业化生产的优良菌株。该菌株甘油产率高，工业化生产也已经达到100～130g/L；耐高渗压，可以在含500g/L葡萄糖的培养基中生长，因而发酵过程很少出现染菌，发酵条件粗犷；耗糖转化率达60％以上。该菌株与克鲁斯假丝酵母（Candida krusei）多处相似，早期曾定名克鲁斯假丝酵母。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     厌氧菌的分离与培养方法！厌氧菌的分离培养主要分初代培养和次代培养两个阶段，其中初代培养相对比较困难，关键的问题就是厌氧环境和培养基的选择。 初代培养的一般原则是：  （1）先将标本涂片染色直接镜检，指导培养基的选择。  （2）尽量选用在厌氧菌中覆盖面宽的非选择性培养基。  （3）zuihao多选1～2种覆盖面不同的选择性培养基。  （4）尽量保证培养基新鲜。  （5）要考虑到微需氧菌存在的可能医.学教育网搜集整理。  1.选用适当的培养基接种：应接种固体和液体两种培养基；  （1）培养基的使用，应注意下列各点：  1）尽量使用新鲜培养基，2～4h内用完；  2）应使用预还原培养基，预还原24～48h更好；  3）可采用预还原灭菌法制作的培养基（用前于培养基中加入还原剂，如L-半胱氨酸、硫乙醇酸钠、维生素C及葡萄糖等，尽可能使预还原剂处于还原状态）；  4）液体培养基应煮沸10min，以驱除溶解氧，并迅速冷却，立即接种医.学教育网搜集整理；  5）培养厌氧菌的培养基均应营养丰富，并加有还原剂与生长刺激因子（血清、维生素K、氯化血红素、聚山梨酯-80等）。  （2）培养基的选择：初次培养一般都使用选择培养基和非选择培养基。  1）非选择培养基：本培养基使分离的厌氧菌不被抑制，几乎能培养出所有的厌氧菌。常使用心脑浸液琼脂（BHI）、布氏琼脂（BR）、胰豆胨肝粉琼脂（GAM）、胰胨酵母琼脂（EG）、CDC厌氧血琼脂等。  2）选择培养基：为有目的选择常见厌氧菌株，以便尽快确定厌氧的种类。  2.每份标本至少接种3个血平板，分别置于有氧，无氧及5%～10à2环境中培养，以便正确地培养出病原菌，从而判断其为需氧菌、兼性厌氧菌、微需氧菌或厌氧菌中的哪一类。 　 3.厌氧培养法 　 （1）厌氧罐培养法。 　 （2）气袋法医.学教育网搜集整理。 　 （3）气体喷射法：又称转管法。 　 （4）厌氧手套箱培养法：是迄今厌氧菌培养的zuijia仪器之一。 　 （5）其他培养法：平板焦性没食子酸法；生物耗氧法；高层琼脂培养法。 　 4.厌氧状态的指示：美蓝和刃天青。无氧时均呈白色，有氧时美蓝呈蓝色，刃天青呈粉红色。 　 5.分离培养厌氧菌失败的原因：①培养前未直接涂片和染色镜检；②标本在空气中放置太久或接种的操作时间过长；③未用新鲜配制的培养基；④未用选择培养基；⑤培养基未加必要的补充物质；⑥初代培养应用了硫乙醇酸钠作为weiyi厌氧菌培养基；⑦无合适的厌氧罐或厌氧装置漏气；⑧催化剂失活；⑨培养时间不足；⑩厌氧菌的鉴定材料有问题。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    根霉菌的菌落特征与主要应用！根霉菌（Rhizopus）在显微镜下顶部呈蘑菇状，内含孢子，即包囊孢子，菌体细长。根霉的适宜生长温度是30~37℃，40℃也能生长。根霉在生长时，由营养菌丝体产生匍匐枝，匍匐枝的末端生有假根，在假根处长出成群的孢子囊梗，顶端孢子囊产生许多孢子 。成熟的囊孢子从破裂的囊壁释放出来，散布各处进行繁殖 。根霉菌还是条件致病菌，通常对人体无害，食用甜酒药及糖化饲料就是选用此菌制备的，可引起食品霉变，也可导致实验室污染。1.菌落特征菌落：生长快，开始为白色棉花样菌丝充满斜面，以后变为深灰色。 镜检：菌丝不分隔，有营养菌丝，分生孢子椭成丛状生长，顶端膨大，谓之生芽头，外有孢子囊，襄内有密集孢子囊孢子。根霉菌是真核生物，其核有核膜包围，具各种细胞器。根霉菌是真菌其菌丝体类型为单细胞多核（无膈），以包囊孢子繁殖。另外在根霉麸皮成曲的生产中可看到的厚壁孢子，是根霉菌丝体内原生质浓缩而形成的抵抗不良环境的一种繁殖器官，一旦遇到适宜的条件即可直接发芽生长成菌丝体。 2.生长条件根霉是需氧型微生物，在整个培养过程中必须供给充足的氧，否则就会影响繁殖和生长。根霉菌喜欢在微酸性环境中生长，其最适pH范围为5-5.5。根霉菌对营养条件的要求也不是很高，试管菌种一般用米曲汁或马铃薯蔗糖琼脂培养基，二级曲种和大批曲生产，麸皮就是zuihao的培养基，一般不需另加营养物质。3.生长繁殖根霉菌丝没有横隔膜，一般认为是单细胞的真菌。根霉在培养基上生长时，由营养菌丝体产生弧形的匍匐菌丝，向四周蔓延。匍匐菌丝接触培养基处，分化成一丛假根(类似根状菌丝)，吸收养料。从假根处丛生出直立的孢囊梗，梗的顶端膨胀形成圆形的囊，称为孢子囊。孢子囊里面有许多孢子，称为囊孢子。成熟以后的囊孢子从破裂的囊壁上被释放出来，散布各处，或随风飘扬，遇有机会，即温度、水分及营养条件适宜处就开始繁殖。4.酶系特点根霉含有丰富的淀粉酶，一般包括液化型和糖化型淀粉酶，两者的比例约为1：3.3，而米曲霉则为1：1，黑曲霉为1：2.8。可见小曲的根霉中糖化型淀粉酶特别丰富。尽管由于液化型淀粉酶的活力较低而使糖化反应速度降慢，但它的zuida特点是糖化型淀粉酶丰富，能将大米淀粉结构中的α-1，4键和α-1，6键打断，最终较完全地转化为可发酵性糖，这是其他霉菌无法相比的。根霉细胞中还含有酒化酶，具有一定的酒化酶活力，能边糖化边发酵。这一特性是其他霉菌所没有的。由于根霉具有一定的酒化酶，可使小曲酒整个发酵过程中自始至终能边糖化边发酵连锁进行，所以发酵作用较彻底，淀粉出酒率进一步得到提高。5.分布范围根霉菌是常见的霉菌，在空气、土壤中，以及各种器具表面都有它的孢子存在。6.主要应用根霉的用途很广，其淀粉酶活力很强，能产生乳酸、反丁烯二酸、琥珀酸及微量酒精，还能产生芳香的酯类物质。食用甜酒药及糖化饲料就是选用此菌制备的。已知的根霉有多种，由土壤及五谷分离出来的根霉菌的糖化力远不及酒药中分离出的活力强。在酿造上根霉扮演着重要角色。我国小曲酒，是以根霉为主的霉菌类为糖化剂。根霉菌在生命活动中能产生糖化酶，将淀粉转化成糖，所以它是酿酒工业的糖化菌。根霉菌还可以处理造纸污泥生产乳酸，以及生产富马酸。7.主要危害根霉菌为条件致病菌，可引起食品霉变，致病的有匍枝根霉、小孢根霉、少根根霉和米根霉等。 在日常生活中，它也常会引起淀粉质食品如馒头、面包等发霉变质，也能引起蔬菜霉烂。 8.常用菌种3866、3851：由中国科学院微生物研究所提供。具有糖化发酵力强的特点，适用于小曲酒的生产。 Q303：由贵州省轻工业科学研究所分离。它具有糖化发酵力强、生长速度快、性能稳定的特点，适用于小曲酒生产。 YG5-5：由重庆永川酒类研究所（简称酒研所）诱变、分离。具有糖化发酵力强、生酸少、生长速度快、性能稳定的特点，适用于小曲酒的生产。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

              食品工厂微生物学检验实验室的建设标准！中国微生物菌种查询网：食品与人们生活密切相关，食品质量的好坏直接影响到人们的健康，所以广大消费者对食品的质量十分关注。质量是产品的生命，也是产品能否有效地进入市场为企业创得高效益的关键。保证产品质量的关键是抓好质量标准、质量管理、质量监督，而微生物的检验工作是重要的质量监督方法，是保证食品安全性的一个重要手段。    微生物学检验是一项要求高、技术性较强的工作，为了确保微生物学检验工作的顺利进行，微生物学检验实验室的建设很重要，以达到检验工作快速、方便。食品工厂微生物学实验室的装备条件，直接影响产品微生物学检验结果的准确性、可靠性和科学性。本文就食品工厂微生物检验实验室的建设进行讨论，为一般食品工厂建立微生物检验实验室提供参考。一、食品工厂微生物检验学实验室的硬件建设    实验室的房屋建设应符合中华人民共和国建筑法的总则和国家的建筑工程安全标准，提高房屋建筑设计水平。所以微生物学检验实验室的建设除了要符合质量安全外，还要根据其使用目的和特殊情况，要因地制宜建造经济、实用、科学、合理的实验室。实验室的周围环境要安静无明显粉尘污染，且要避开有毒有害场所和远离住宅区。1．1 实验室建设常用的材料设备1．1．1 常用的建筑材料    食品厂微生物学实验室建设所用的主要建筑材料有：钢材、木材、水泥、塑料、大理石、瓷砖、玻璃及铝合金属等，微生物学检验实验室的建设中各功能室可根据具体情况来选材建造。1．1．2 主要仪器设备   微生物学实验室常用的仪器设备主要有：显微镜、电冰箱、培养箱、水浴锅、均质器、电子天平、电炉、分光光度计、灭菌锅、超净工作台、紫外灯等，仪器设备可根据工厂实际情况和检验项目进行选择和配置。1．2 微生物学检验实验室的各功能室    食品厂微生物学实验室的功能室主要包括：办公室、通用实验室、灭菌室、准备室、更衣室、缓冲室、无菌室、培养室等。1．2．1 办公室    实验室的办公室是检验工作人员办公的地方，其面积应20平方米左右，通风采光好，内设基本的办公桌、椅、电脑、存放资料和留样的柜等。检验工作人员可以在办公室里登记待检验的样品、出检验报告和处理有关的文件资料等，也可供工作人员在工作过程中放松休息，以便更清醒地思考问、分析和解决问题，极大地提高工作效率。1．2．2 通用实验室    通用实验室是进行微生物学检验准备工作和非无菌操作实验时使用，也可供理化检验及科研工作使用。通用实验室应设有较大的长方形工作台作为实验操作台， 台下设计了各专用仪器柜，台面用石板加塑胶垫等不易腐蚀和稳固耐用的材料设置，并设有专用搁物架。另外，还应设置一个适当大小的通风橱， 内配有排气系统和安装给排水系统，如水槽及水槽上的各种水龙头。实验室的地面设计为水磨石地面，这样既容易清洁和不易积水方便工作。有良好的通风照明设备和消防设施。    通用实验室为了方便实验工作的开展，通常配备了常用的仪器(分光光度计、PH计、烘箱、电炉等)及常用的各种玻璃器皿和常用的各种化学试剂、药品。此外，还应配有清洁用工具和工作服。如果工厂条件许可，检验人员可以根据分工各自拥有专用的实验工作台或工作地方以达到快速、高效完成检验任务。1．2. 3 灭菌室    灭菌室是培养基及有关的检验材料灭菌之场所。灭菌设备是高压设备，具有一定的危险I生，所以灭菌室应与办公室保持一定距离以保证安全，使用时应有专人操作，但也要方便工作，通常设在通用实验室附近并与之保持一定距离(如隔一条走廊的距离或小房间的距离)，以减少影响。灭菌室内安装有灭菌锅等灭菌设备。如果有条件的工厂可以配置更好的仪器设备(如双扇高压灭菌柜和安全门等设施)。另外，灭菌室里应水电齐备并有防火措施和设备，人员要遵守安全操作制度。1．2．4 更衣室    更衣室是为微生物学检验时进入无菌室之前工作人员更衣、洗手的地方，室内设置无菌室及缓冲室的电源控制开关和放置无菌操作时穿的工作服、鞋、帽子、口罩等。有时还设有装有鼓风机的小型房间其作用是减少工作人员带入的杂菌，但相应其成本也很高。1．2．5 缓冲室    缓冲室是进入无菌室之前所经过的房间，安装有鼓风机，以减少操作人员进入无菌室时的污染，保证实验结果的准确性。进口和出口通常是呈对角线位置，以减少空气直接对流造成的污染。要求比较高的微生物学检验项目如致病菌的检验，应设有多个缓冲室。1．2．6 无菌室    无菌室是微生物学检验过程无菌操作的场所，要求密封、清洁，安装紫外灯和空调设备(带过滤设备)及传递物品用的传递小窗，传递小窗应向缓冲室内开口以减少污染和方便工作。另外，无菌室内还应配备超净 【作台和普通工作台。有条件的工厂可设置生物安全柜。1．2．7 培养室    培养室是为微生物学检验时培养微生物的房间，通常要配备恒温培养箱、恒温水浴锅及震荡培养箱等设备，或整个房问安装保温、控温设备。房间要求保持清洁，有防尘、隔噪音等功能。出于实际工作情况考虑，灭菌室与准备室可以合并在一起使用，有条件的工厂还可以设置样品室和仪器室。总的来说，微生物检验室的硬件建设要合理和实用，讲究科学性。二、食品工厂微生物学检验实验室的软件建设    微生物学检验实验室软件建设主要包括：工作人员的配置、工作管理制度的建设、微生物学检验项目的安排。2．1 人员配置    工作人员配置是实验室建设的重要组成部分，一般微生物学检验实验室通常有检验工作人员和管理人员，有条件的实验室还可配备专职清洁人员。2．1．1 检验工作人员    检验工作人员是从事食品的微生物检验和理化检验工作，并对食品原材料和食品包装材料进行检验微生物学项目实验室通常配备3～5个人左右，且要求拥有相关学历并取得职业资格职称的从业者。另外，由于从事食品生产工作，还要求有健康证证明等有效证明资料。从业人员还应该具有良好的卫生习惯和职业道德，工作认真负责。2．1．2 管理人员    管理人员职责是负责管理整个实验室的工作。主要从事监督和安排其他人员的工作并处理其他重要事件，但也是最终责任人。因此，管理人员必须有经验有能力和能灵活处理各有关事务，负责管理整个组织系统的各方面工作。2．2 工作管理制度的制定    每个企业都有自己的规章制度，对于食品生产工厂除要遵守国家的有关法律法规外，还要根据具体情况来制定严格的规章制度。微生物学检验实验室的制度直接影响食品微生物学检验的结果，是关系到广大消费者的身体健康问题，所以必须遵守国家的有关标准并结合工厂实际情况制定相关制度，做到各项规章制度健全、规范，使工厂工作达到程序化、规范化、科学化。     微生物学检验实验室制度的建设主要包括实验室管理制度和实验室技术操作要求。2．2．1 实验室制度建设    食品工厂微生物学检验实验室制度主要包括：实验室管理制度：仪器配备和管理制度；药品管理和使用制度：玻璃器皿管理和使用制度；安全制度；环境条件要求等。2．2．2 实验室技术操作要求    食品工厂微生物学检验实验室技术操作主要要求：无菌操作要求：无菌间使用要求；消毒灭菌要求：有毒有菌污染物处理要求；菌种保管要求；培养基制备要求：样品采集及处理要求：样品检验、记录和报告要求等。    具体的工作管理制度在此不作详细讨论，企业可根据具体情况结合实际需要作适当调整使用。2.3 微生物学检验项目    微生物广泛分布于自然界中，其中绝大多数的微生物是有益的，但对于食品而言由于微生物的污染，所造成粮食和食品的霉变、腐败，以致引起食物中毒和传染疾病等，此时对人类是有害的，直接关系到广大人民的人身安全。食品的微生物检验项目主要有：菌落总数的测定、大肠菌群的测定和致病菌的测定等。2．3．1 菌落总数的测定    菌落总数指食品样品经过处理，在一定条件下培养后(如培养基成分、培养温度、和时间、PH 值、需氧性质等)，所得lml(g)样品中所含菌落总数，是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数测定可参考GB4789．2—2o03《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定》。2．3．2 大肠菌群的测定    大肠菌群指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，主要包括：大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白化菌、阴沟肠杆菌等。该菌群主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量推断食品中大肠菌群及肠道致病菌污染，发现潜伏的食物中毒可能。大肠菌群测定可参考GB4789．3．2003《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》。2．3．3 致病菌的测定    致病菌的测定对实验室及检验人员的条件要求较高，一般食品厂主要以送检的形式来测定，由专门的有权威性机构进行检测。对于致病菌的测定在此不作详细论述。三、结语    一般来说，技术监督部门对食品工厂微生物学检验实验室建设都有严格的要求和规定，除符合技术监督部门的要求外，要建设实用、经济、科学的微生物学检验实验室，zuihao以国家标准为准并结合实际情况来建设。如有条件的zuihao以可建立能通过国家质检总局组织的实验室注册考核为目标，配备一支高水平的专业技术人员队伍，制定良好、高效的工作管理制度和安全制度，拥有齐全的各种使用硬件设备。这样不仅利于保证产品质量的稳定性，保障食品的安全性，而且还使产品有强大的竞争能力，从而促进技术进步和产品质量改进，有利于生产企业的自身发展。

                   血清学试验概述！百欧博伟生物研究抗原抗体在体外的反应有很高的实用价值。微生物学在这方面的应用主要有以下三个方面。一、微生物的分类和鉴定该研究被称为抗原分析，即抗体是已知的，而检测未知微生物。常用于流行病学的调查和细菌学分类，例如在调查一起突发性食物中毒事件时，从食物中已分离出沙门氏菌， 而且怀疑是引起食物中毒的可疑致病菌D这时就可以通过一系列沙门氏菌血清学试验进行鉴定,从病人的粪便中分离出的可疑沙门氏菌可以用同样的方法进行鉴定。载玻片凝集试验也可用于可疑菌的血清学鉴定。二、微生物及其毒素的分离和检测使用免疫学技术能够检测食品或培养基中的待测微生物，也可以富集和分离这些微生物o用已知抗体和酶结合(酶联免疫吸附试验)或免疫磁珠可进行微生物的富集。另一种技术是亲和色谱法，在该技术中，一种成分(例如抗血清)被固定到固定相中，例如使用琼脂糖珠，它可以从液相中(例如食品稀释液)吸收其他的成分(这里指已知抗原)。有许多市售的设备都是用这一技术来检测食品样品中特定的真菌毒素(例如黄曲霉毒素)。三、血液、奶和其他体液中抗体的检测和鉴定该技术是用已知的细菌来检测它们的特定抗血清,经常被用于临床微生物学和兽医微生物学中。菌的活性越大，发生作用的时间越短，则在病人血清中抗体的浓度越高。为了测定抗体的浓度，需要用凝集反应。配制一系列血清稀释液来检测微生物悬浮液,以确定发生凝结反应时血清所需的zuigao稀释倍数。在食品微生物学中，检测抗体试验的一个例子是布鲁氏杆菌牛乳环试验，用于诊断奶牛是否患有布鲁氏杆菌病。例如用苏木清对死的布鲁氏杆菌细胞的悬浮液染色，以此作为已知抗原，检测动物的奶液，如奶液中存在布鲁氏杆菌抗体则呈阳性反应。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

           微生物检测中常用的化学杀菌剂和消毒剂配制方法！一、乙醇溶液乙醇溶液是实验室常用的消毒剂，它能够杀灭细菌、真菌和含脂病毒，但对孢子无效，也不能杀灭所有类型的非含脂类病毒。乙醇水溶液最有效的使用浓度约为70%～75%（体积分数），乙醇与其他试剂混合使用比单独使用消毒效果更好，如含有2g/L有效氯的乙醇溶液，70%（体积分数）乙醇和100g/L的甲醛混合使用。70%（体积分数）乙醇溶液可以用于消毒皮肤、实验台和生物安全柜的工作台面。配制z浓度的乙醇溶液时，按y：x的体积比分别取a浓度和b浓度的乙醇溶液混合即可。需要注意的是：配制好的z浓度乙醇溶液的体积要略小于a浓度和b浓度的乙醇溶液体积之和。二、84消毒液84消毒液也是实验室常用的消毒剂。可用于器皿和工作台面的消毒，也可在废液缸加入一定浓度的84消毒液，盛放移液枪枪头，防止污染。0.5%的84消毒液配制方法：用自来水或蒸馏水1000mL加入5mL 84消毒液。三、新洁尔灭新洁尔灭一般用于盖片、载片、器皿和皮肤的消毒。新洁尔灭溶液分0.1%和0.25%的两种消毒液。器皿消毒一般用0.1%的浓度，药物杀菌实验一般用0.25%的浓度。0.1%的新洁尔灭溶液配制方法：用5%新洁尔灭原液和蒸馏水按1：50稀释。0.25%的新洁尔灭溶液配制方法：用5%新洁尔灭原液和蒸馏水按1：20稀释。四、福尔马林（甲醛）溶液福尔马林溶液有0.3%和10%两种消毒液。0.3%用于免疫血清的制备，10%用于浸泡绒毛尿囊膜。0.3%福尔马林溶液的配制方法：称取0.3g甲醛，溶解定容至100mL 0.85%生理盐水中。10%福尔马林溶液的配制方法：称取10g甲醛，溶解定容到100mL蒸馏水中。五、碘酊溶液碘酊溶液俗称碘酒，用于药物杀菌试验。碘酊溶液的配制方法：称取2g碘和1.5g碘化钾，加入少量的50%乙醇，搅拌溶解，完全溶解后，再加入50%乙醇稀释至100mL即可。六、汞溴红汞溴红又称红汞、红溴汞。用于伤口和体表的消毒。汞溴红的配制方法：称取2g红汞，加入少量无菌蒸馏水溶解，稀释至100mL，即配成2%的水溶液，也就是我们常见的红药水。七、石炭酸（苯酚）溶液石炭酸溶液既可以用来做杀菌剂又可以做防腐剂。3%～5%的溶液可用于空气、地面、桌面和器皿的消毒，0.5%的石炭酸溶液可用做免疫血清的防腐剂。5%、2%、0.5%石炭酸溶液的配制：先将50g石炭酸在水浴锅内加热溶解后，再用蒸馏水定容至1000mL，即得5%的石炭酸溶液。取100mL5%的石炭酸溶液，加入150mL蒸馏水，即得2%的。将5%石炭酸按1：9稀释即得0.5%的石炭酸溶液。八、来苏尔溶液来苏尔水的成分是肥皂乳化甲酚。可用作皮肤消毒（2%）或浸泡微生物实验的废弃物（3%～5%）。5%和2%来苏尔溶液的配制：取5mL来苏尔水，加95mL无菌蒸馏水，即得5%的来苏尔原液。取5%来苏尔原液100mL，加入150mL无菌蒸馏水，即得2%来苏尔溶液。九、过氧乙酸溶液过氧乙酸属高效消毒剂，过氧乙酸的气体和溶液都具有很强的杀菌能力。常用于器皿、地面等的消毒。配制方法：取冰乙酸（99%）2000mL、过氧化氢（30%）2500mL、硫酸（99%）70mL～90mL，先在5000mL体积的小口玻璃瓶中注入冰乙酸，然后慢慢地加入硫酸，稍加摇匀后，缓慢地加入过氧化氢。小心摇匀，并静置在阴凉处，3d～4d后即可得到浓度为9.8%~10.1%的过氧乙酸母液。市售过氧乙酸为加有稳定前的过氧乙酸水溶液，浓度一般为20%，消毒前稀释至使用浓度。稀释方法可采用十字交叉法：取浓度20%过氧乙酸母液2mL，加入90mL水中，即得20%过氧乙酸水溶液。另一种剂型为二元包装型：将加有催化剂硫酸的冰乙酸装于一瓶，将过氧乙酸装于另一瓶，临用前，将两瓶液体混匀，静置2h以上，即可产生预定浓度的过氧乙酸。十、漂白粉溶液漂白粉的有效成分是次氯酸钠，可用于喷刷接种室、培养室，进行灭菌。配制方法：取20g~50g漂白粉，放入1000mL水中，即得2%~5%漂白粉水溶液。十一、升汞水升汞水是HgCl2的水溶液，用于接触面的消毒。配制方法：取0.1g升汞，先溶于0.2mL的浓盐酸（HCl）中，在加入100mL的水中，即得0.1%的升汞水溶液。十二、过氧化氢水溶液过氧化氢又称双氧水．3%过氧化氢水溶液常用于清洗伤口。配制方法：30%过氧化氢原液100mL，加入900mL水中，即得3%过氧化氢水溶液。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                四硫磺酸钠煌绿增菌液换用方法！一、基础液　　蛋白胨　　　　　　 10g　　牛肉膏　　　　　　 5g　　氯化钠　　　　　　 3g　　碳酸钙　　　　　　 45g　　蒸馏水　　　　　　 1000mL　　将各成分加入于蒸馏水中，加热至约70℃溶解，校正pH至7.0±0.1，121℃高压灭菌20min。二、硫代硫酸钠溶液　　硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)　　　　 50g　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　　　加至100mL 三、碘溶液　　碘片　　　　　　　　　　　　　　　20g　　碘化钾　　　　　　　　　　　　　　25g　　蒸馏水加至　　　　　　　　　　　　100mL　　将碘化钾充分溶解于是少量的蒸馏水中，加入碘片，振摇玻瓶至碘片全部溶解，再加入蒸馏水至规定量。贮于棕色玻瓶内，紧塞瓶盖备用。 四、煌绿水溶液　　煌绿　　　　　0.5g　　蒸馏水　　　　100mL　　存放暗处，不少于1d，使其自然灭菌。 五、牛胆盐溶液　　干燥的牛胆盐　10g　　蒸馏水　　　　100mL　　煮沸溶解，121℃高压灭菌20min。　　　六、制备　　基础液　　　　　　900mL　　硫代硫酸钠溶液　　100mL　　碘液　　　　　　　20mL　　煌绿溶液　　　　　2mL　　牛胆盐溶液　　　　50mL　　临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入于基础液中，每加入一种成分，均应摇匀后再加入另一种成分。分装于灭菌瓶中，每瓶100mL。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  胶冻样芽孢杆菌的作用与适用范围！胶冻样芽胞杆菌（过去称为硅酸盐细菌）俗称钾细菌，是农田中常见的一种土壤细菌。可人工培育主要做生物功能菌添加并适于各种作物。一、胶冻样芽孢杆菌的作用1、提高肥效、促进磷钾元素的吸收可在土壤中繁殖生长，并产生有机酸、荚膜多糖等代谢产物，破坏硅铝酸盐的晶格结构、难溶性磷化合物等，分解释放出可溶的磷钾元素及钙、硫、镁、铁、锌、钼、锰等中微量元素，既增进了土壤肥力，又为作物提供了可吸收利用的营养元素，2、改善作物品质产生赤霉素、细胞激动素、微生物酶、细菌多糖等生理活性物质，促进作物营养吸收和生长代谢。能大量、有效增加土壤中速效磷、速效钾等含量。3、提高作物抗逆性有效菌在土壤中生长代谢，产生多种的激素类物质、生物酶、氨基多糖类物质和蛋白质、氨基酸类物质，促进作物生长发育，诱导作物增强抗性，增强抗寒、抗旱、抗病和抗逆能力，改善产品品质。4、抑制土传病害有效菌给土壤补入大量有益微生物，在作物根部形成有益菌群，有效抑制土壤有害和致病微生物的繁殖，显著减少多种土传病害的发生，减少农药的使用，减轻农药污染。二、适用范围胶冻样类芽孢杆菌肥料适用于粮食、蔬菜、果树等各类农作物，尤其适用于土壤问题突出的农田。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                沙眼衣原体的生物学特性与检测方法！一、简介沙眼衣原体《伯氏系统手册》(1984)的记载，将沙眼衣原体Chlamydia trachomatis 分为3个生物型，即小鼠生物型(biovar mouse)、沙眼生物型(biovar trachoma)和性病淋巴肉芽肿生物型(biovar lymphogranulomavenereum,LGV)。后二者与人类疾病有关。用间接微量免疫荧光试验，沙眼生物型又分A、B、Ba、C、D、Da、E、F、G、H、I、Ia、J、K14个血清型，LGV生物型又有L1、L2、L2a、L34个血清型。二、生物学特性(一)形态与染色将鸡胚卵黄囊或细胞培养的沙眼衣原体高度提纯，于电镜下检查，可见原体呈球形或类球形，胞浆膜外有刚性细胞壁，壁外有平滑表层。始体的体积较大，形状不甚规则，其包膜富有韧性，无刚性的细胞壁，原体和始体内皆含有DNA与RNA。沙眼衣原体具有特殊的染色性状，不同的发育阶段其染色有所不同。成熟的原体以Giemsa 染色为紫色，与监色的宿主细胞浆呈鲜明无比。始体以 Giemsa 染色呈蓝色。沙眼衣原体对革兰氏染色虽然一般反应为阴性，但变化不恒定。沙眼包涵体在上皮细胞浆内，很致密，如以Giemsa染色，则呈深紫色，由密集的颗粒组成。其基质内含有糖原，以Lugol液染色呈棕褐色斑块。(二)培养人类是沙眼衣原体的自然宿主。它主要寄生于机体粘膜上皮细胞。猴和猩猩的眼及泌尿系可实验感染各型沙眼衣原体(包括LGV在内)。灵长类外的动物，对LGV之外的其他沙眼衣原体均无致病性。鸡胚只对大多数沙眼衣原体敏感，但禽类则对各型沙眼衣原均不敏感。小白鼠对LGV衣原体是敏感的，尤其是脑内感染，病死率可达30%。此外，大白鼠、豚鼠和家兔对LGV衣原体的敏感性幼龄高于成年。所有沙眼衣原体都能在鸡胚卵黄囊内生长繁殖，并致死鸡胚。将沙眼衣原体悬液接种6～8天胚龄卵黄囊内，置35℃温箱，一般于6～8天后死亡。剖检时胚体及卵黄囊膜充血。卵黄囊膜涂片可散在衣原体，病理切片则可见卵黄囊膜细胞内包涵体。所有沙眼衣原体均可在细胞培养中生长，现多采用McCoy或HeLa229细胞株，在接种衣原体前，以X线照射细胞，或于细胞培养中加入代谢抑制如细胞松弛素B、DEAE葡聚糖呈放线菌酮，其目的在于细胞生长代谢缓慢，以利于衣原体的寄生性生长。三、所致疾病(一)沙眼：由衣原体沙眼生物变种A、B、Ba、C血清型引起。主要经直接或间接接触传播，即眼～眼或眼～手～眼的途经传播。当沙眼衣原体感染眼结膜上皮细胞后，在其中增殖并在胞浆内形成散在型、帽型、桑椹型或填塞型包涵体。该病发病缓慢，早期出现眼睑结膜急性或亚急性炎症，表现流泪、有粘液脓性分泌物、结膜充血等症状与体征。后期移行为慢性，出现结膜瘢痕、眼睑内翻、倒睫、角膜血管翳引起的角膜损害，以致影响视力，zuihou导致失明。据统计沙眼居致盲病因的首位。1956年我国学者汤飞凡等人用鸡胚卵黄囊接种法，在世界上首次成功地分离出沙眼衣原体，从而促进了有关原体的研究。　　(二)包涵体包膜炎：由沙眼生物变种D～K血清型引起。包括婴儿及成人两种。前者系婴儿经产道感染，引起急性化脓性结膜炎(包涵体脓漏眼)，不侵犯角膜，能自愈。成人感染可因两性接触，经手至眼的的途径或者来自污染的游泳池水，引起滤泡性结膜炎又称游泳池结膜炎。病变类似沙眼，但不出现角膜血管翳，亦无结膜瘢痕形成，一般经数周或数月痊愈，无后遗症。　　(三)泌尿生殖道感染：经性接触传播，由沙眼生物变种D～K血清型引起。男性多表现为尿道炎，不经治疗可缓解，但多数转变成慢性，周期性加重，并可合并副睾炎、直肠炎等。女性能引起尿道炎、宫颈炎等，输卵管炎是较严重并发症。该血清型有时也能引起沙眼衣原体性肺炎。　　(四)性病淋巴肉芽肿：由沙眼衣原体LGV生物变种引起。LGV要通过两性接触传播，是一种性病。男性侵犯腹股沟淋巴结，引起化脓性淋巴结炎和慢性淋巴肉芽肿。女性可侵犯会阴、肛门、直肠，出现会阴～肛门～直肠组织狭窄。四、免疫性机体感染衣原体后，能诱导产生型特异性细胞免疫和体液免疫。但通常免疫力不强，且为时短暂，因而常造成持续性感染、隐性感染和反复感染。此外，也可能出现免疫病理损伤，由迟发型超敏反应引起，如性病淋巴肉芽肿等。五、微生物学诊断多数衣原体引起的疾病可根据临床症状和体征确诊。但对早期或经症患者，须行实验室检查来帮助诊断。　　(一)直接涂片镜检沙眼急性期患者取结膜刮片，Giemsa或碘液及荧光抗体染色镜检，查上皮细胞浆内有无包涵体。包涵体结膜炎及性病淋巴肉芽肿，也可从病损局部取材涂片，染色镜检，观察有无衣原体或包涵体。　　(二)分离培养用感染组织的渗出液或刮取物，接种鸡胚卵黄囊或传代细胞，分离衣原体，再用免疫学方法鉴定。　　(三)血清学试验主要用于性病淋巴肉芽肿的辅助诊断。常用补体结合试验，若双份血清抗体效价升高4倍或以上者，有辅助诊断价值。也可用ELISA、凝集试验。　　(四)PCR试验设计不同的特异性引物，应用多聚酶链式反应可特异性诊断沙眼衣原体，具有敏感性高，特异性强的特点，现被广泛应用。　　六、防治原则沙眼无特异的预防方法，疫苗在试用，效果不肯定。注意个人卫生，不使用公共毛巾和脸盆，避免直接或间接接触传染，是预防沙眼的重要措施。生殖道衣原体感染的预防同其他性病一样。治疗一般用利福平、四环素、氯霉素、强力霉素及磺胺等药物。七、快速检测衣原体按其特性分为三类：沙眼衣原体(Chlamydia Trachomatis)、鹦鹉热衣原体(Chlamydia Psittas)和肺炎衣原体(Chlamydia Pneumoniae)。沙眼衣原体有15个已知的血清型，其中12个血清型与沙眼和生殖道的感染有关；另外3个则与性病性淋巴肉芽肿(Lymphor Ganuloma Venereun, LGV)的发生有关。沙眼衣原体快速检测目前分定性和定量快速检测。目前流行常用的为金标定性快速检测。其检测原理为：用抗衣原体脂多糖单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体分别固定于固相硝酸纤维素膜，并和胶体金标记的另一抗衣原体脂多糖单克隆抗体及其他试剂和原料制成，应用胶体金免疫层析技术，采用双抗体夹心的形式建立的衣原体检测方法，用于女性宫颈和男性尿道中衣原体的检测。从而达到检测女性宫颈和男性尿道中衣原体的存在，临床辅助诊断衣原体感染，试验结果还需要临床医生结合患者症状、体征及其它检查结果进一步确定的目的。金标法定性沙眼衣原体快速检测有着快速、方便、准确性高的优点。为临床医生的辅助诊断等节省了很多时间。为目前市面上沙眼衣原体快速检测的主流。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   细胞因子的检测方法有哪些？细胞因子(cytokine)是由细胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物质的统称。在免疫应答过程中，细胞因子在免疫调节、炎症应答、肿瘤转移等生理和病理过程中起重要作用。细胞因子的检测不仅是基础免疫研究的有较手段，同时在临床疾病诊断、病程观察、疗效判断及细胞因子治疗监测方面具有重要价值。 但是，由于细胞因子在体内的含量甚微，给细胞因子的检测带来困维，细胞因子的检测尚未在临床诊断上广泛开展，已知目前采用的细胞因子检测方法均不完善，且不同的检测方法所得的结果差异较大，给临床诊断与治疗带来一定的困难。因此，有必要了解各种检测方法的特性及影响因素。 目前，细胞因子生物学活性检测和浓度测定方法主要有以下几类。 一、生物学检测法 生物学检测又称生物活性检测，是根据细胞因子特定的生物活性而设计的检测法。由于各种细胞因子具有不同的活性，例如IL-2促进淋巴细胞增殖，TNF杀伤肿瘤细胞，CSFci 激造血细胞集落形成，IFN保护细胞免受病毒攻击，因此选择某一细胞因子独特的生物活性，即可对其进行检测。生物活性检测法又可分为以下几类： 1．细胞增殖法 许多细胞因子具有细胞生长因子活性，特别是白细胞介素，如IL-2 刺激t细胞生长、IL-3 刺激肥大细胞生长、IL-6刺激浆细胞生长等。利用这一特性，现已筛选出一些对特定细胞因子起反应的细胞，并建立了只依赖于某种因子的细胞系，即依赖细胞株(简称依赖株)。这些依赖株在通常情况下不能存活，只有在加入特定因子后才能增殖。例如IL-2依赖株ctll-2在不含IL-2的培养基中很快死亡，而加入IL-2后则可右体外长期培养。在一定浓度范围内，细胞增殖与IL-2量呈正比，因此通过测定细胞增殖情况(如使用3h-tdr掺入法、MTT法等)鉴定IL-2的含量。除依赖株外，还有一些短期培养的细胞，如胸腺细胞、骨髓细胞、促有丝分裂原刺激后的淋巴母细胞等，均可作为靶细胞来测定某种细胞因子活性。 2．靶细胞杀伤法 是根据某些细胞因子(如TNF)能在体外杀伤靶细胞而设计的检测方法。通常靶细胞多选择体外长期传代的肿瘤细胞株，利用同位素释放法或染料染色等方法判定细胞的杀伤率。 3．细胞因子诱导的产物分析法 某些细胞因子可刺激特定细胞产生生物活性物质，如IL-2、IL-3诱导骨髓细胞合成胺、IL-6诱导肝细胞合成α1-抗糜蛋白酶等。通过测定所诱生的相应产物，可反映细胞因子的活性。 4．细胞病变抑制法 病毒可造成靶细胞的损伤，干扰素等则可抑制病毒所导致的细胞病变，因此可利用细胞病变抑制法检测这类因子。 二、免疫学检测法 细胞因子均为蛋白或多肽，具有较强的抗原性。随着重组细胞因子的出现，可较方便地获得细胞因子的特异性抗血清或单克隆抗体，因此可利用抗原抗体特异性反应的特性，用免疫学技术定量检测细胞因子。尽管细胞因子种类繁多，只要获得了针对某一因子的特异性抗体(包括多克隆抗体或单克隆抗体)均可采用相似的技术开展工作。常用的方法包括ELISA、RIA及免疫印迹法。目前，几乎所有常见细胞因子的检测试剂盒均有商品供应。此外还可利用酶标或荧光标记的抗细胞因子单克隆抗体，原位检测因子在细胞内的合成及分布情况，如近来来发展起来的细胞内染色法和酶联免疫斑点(ELISPOT)技术等。免疫学检测法可直接测定样品中特定细胞因子的含量(用ng/ml表示)，为大规模检测临床病人血清中细胞因子的含量提供了方便。本法仅测定细胞因子的抗原性，与该因子活性不一定相平行，因此要了解细胞因子的生物学效应，必须结合生物学检测法。 三、分子生物学方法 这是一类利用细胞因子的基因探针检测特定细胞因子基因表达的技术。目前所有公认的细胞因子的基因均已克隆化，故能较容易地得到某一细胞因子的cDNA探针或根据已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探针。利用基因探针检测细胞因子mRNA表达的方法多种多样，常使用斑点杂交、Northern blot、逆转录PCR，细胞或组织原位杂交等。实验的关键在于制备高质量的核酸探针和获得合格的待测物(提取的mRNA样品或细胞/组织标本)。核酸探针是指一段用放射性同位素或其他标记物(如生物素、地高辛等)标记并与目的基因互补的DNA  片段或单链DNA、RNA。根据其来源可分为cDNA探针、寡核核苷酸探针、基因组基因探针及DNA探针等。其中cDNA探针和人工合成寡核苷酸探针常用于斑点杂交及Northern blot，而RNA探针因穿透性好更适用于原位杂交。核酸探针技术的应用已经程序化，以cDNA探针为例主要包括：①质粒DNA的提取；②靶DNA  片段的分离；③靶DNA  片段标记；④待测样品mrna的提取；⑤标记cDNA探针对待检样品的杂交；⑥放射自显影或显色分析。近年来出现的RT-PCR检测特异性mRNA的方法也广泛用于细胞因子研究领域。该法具有灵敏、快速等优点，甚至从1～10个细胞中就可检出其中的特异mRNA。 上述三种方法，各有优缺点，可互相弥补，在实际应用中，可根据各自的实验目的和实验室条件进行选择。生物学检测法比较敏感，又可直接测定生物学功能，是最可靠的方法，适用于各种实验目的，是科研部门最常用的技术，但需要长期培养依赖性细胞株，检测耗时长，步骤繁杂，影响因素多，不容易熟练掌握。免疫学检测法比较简单，迅速，重复性好，但所测定的只代表相应细胞因子的量而不代表活性，同时敏感度也低于生物活性检测法(约低10～100倍)。分子生物学法只能检测基因表达情况，不能直接提供有关因子的浓度及活性等资料，主要用于机制探讨。在检测细胞因子时，必须考虑到细胞因子的作用具有网络性的特点，人们需明确检测方法所测定的细胞因子成分，并考虑其抑制剂和可溶性受体的水平，将各种结合使用，有可能得到较为可靠的结果。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得zui优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

            实验室微生物限度检查仪设备系统全面介绍！微生物限度检查仪又可称为微生物限度检测仪、无菌过滤器、纯化水薄膜过滤器、小型真空抽滤装置、微生物限度过滤装置、微生物限度检验仪等等。一、微生物限度检查仪实际应用：疾控：江、河、湖、海、水样；食品：纯净水、矿泉水、饮料；化工：各种需测试微生物水样；化妆品：各种用水及产品；制药：纯化水、注射用水、原料药、胶囊、生物制品、片剂、口服制剂。二、微生物限度检查仪种类分析：1、从处理量上可分为：单联、三联、六联；2、从设备性能上可分为：内置泵、外置泵；3、从过滤杯特点上可分为：一次性（塑料杯）、重复利用型（不锈钢）。三、微生物限度检查仪主要特征：1、一体化超小型设计，减小了对层流台操作空间的占用。2、滤膜预先灭菌,即拆即用,可将主要污染物源降到z低,提高检测可靠性3、过滤杯采用独特的唇形密封设计,不使用夹钳和 O 型圈,确保无泄 漏操作和均匀的微生物回收率4、可同时抽滤多张滤膜，大大提高了工作效率。5、滤杯采用可重复使用材料设计，经久耐用，节省成本，操作方便。6、每个滤头采用独立控制的方式，方便操作人员灵活使用。7、无油真空泵设计，噪音低。8、仪器表面经镜面处理，便于清洁和消毒。9、过滤头可以火焰快速灭菌,方便连续实验操作；10、已氧化的美观的把手分布基座两端，使其更加稳固；11、稳固的低重心设计使其不会因溶液满载而发生翻倒。四、微生物限度检查仪技术参数1、适用滤膜直径：Φ47mm/50mm；2、有效过滤直径：40mm；3、滤杯容量:150ML(250ml 可选）；3、过滤头数量：1/3/6 ；4、检测方法：薄膜过滤法；5、抽滤方式：隔膜泵负压抽滤，无需抽气瓶；6、抽液速率：100ml/15s(带膜)；7、过滤头灭菌方式：湿热灭菌、火焰枪快速灭菌；8、滤头：可拆装。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   铜绿假单胞菌超标了怎么办？ 铜绿假单胞菌是一种致病菌。在自然界分布广泛，各种水、空气、正常人的皮肤、呼吸道和肠道等都有铜绿假单胞菌的存在。铜绿假单胞菌存在的重要条件是潮湿的环境，是一种重要的水源性致病菌，对抵抗力较弱的人群存在较大健康风险，容易引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病。由于铜绿假单胞菌的特质，饮用水和饮料等最容易检测出铜绿假单胞菌，因为饮用水和饮料行业生产过程中会有大量的水，生产过程中控制不严格就会使铜绿假单孢菌污染，由于铜绿假单胞菌的耐药机制异常复杂，使用传统的氯制剂的消毒剂已经很难杀灭它，所以也是困扰企业的一个难题。那怎样才能有效的杀灭铜绿假单胞菌并能抑制它的生长繁殖呢？1、从源头严格把控，对于生产用水要做到完善的消毒灭菌，从源头制止铜绿假单胞菌的侵入。2、对生产设备、管道、包装材料及生产车间做到消毒规范化、标准化、特别生产设备和管道，很容易形成污染，应保持清洁无菌。3、生产员工进入加工车间必须规范化消毒，更换工作服、戴上头套口罩等，清洗消毒手部，杜绝非生产员工进入生产区，避免交叉污染。同时对生产员工进行系统的消毒规范培训，让员工充分了解消毒环节对食品安全的重要性。4、储存运输环节也要保证好灭菌消毒工作，以及合适的储藏温度。5、选择适当的多种消毒剂搭配使用。铜绿假单胞菌具有很强的耐药性机制，很短时间就能产生耐受臭氧消毒的生命系统，造成臭氧消毒无效，长期使用低效消毒水平的二氧化氯、次氯酸钠也同样会使铜绿菌产生抗性，导致无法杀灭。铜绿假单胞菌分泌的外毒素，是最重要的致病、致死性物质，进入敏感细胞后被活化而发挥毒性作用，使哺乳动物的蛋白合成受阻并引起组织坏死，造成局部或全身疾病过程。因此，在包装食品安全方面，监管部门是不允许检测出铜绿假单胞菌的。在生产过程中，污染的微生物种类繁多，而不同种类的消毒剂对不同种类微生物的杀灭时间、使用浓度、作用效果是不一样，但由于目前加工都是流水线作业，消毒作用时间上无法达到理想化的效果，然而诺福的出现解决了企业的后顾之忧。诺福作为全球最纯净的杀菌，消毒，防腐剂，目前已广泛应用于欧洲大陆，其合作伙伴包括，欧洲上千家食品企业，荷兰大部分的饮用水企业、比利时可口可乐公司、英国国家饮用水部门，苏格兰饮用水部门以及德国、比利时等近千家单位、机构、公司。诺福消毒系列产品，作为作为新一代的生态型灭菌、消毒、保鲜剂，诺福以其独有的生产技术，基于“胶质银”以及“稳定性过氧化氢”，采用氧化杀菌原理高效灭菌，无毒无残留，不会使细菌产生耐药性。成为lingxian全球性的产品，诺福具有以下优点：1、完全环保，安全可分解，是目前最安全、高效的消毒剂，作用完仅产生水和氧气，对人、畜无害，无腐蚀性，无残留。2、诺福能够彻底的避免二次污染。由于诺福是通过氧原子的释放来进行杀毒，所以不会产生任何残留，完全环保，不会产生耐药菌，可长期使用。3、见效快，应用弹性大，作用时间长，效果明显，能完全杀死铜绿假单胞菌。不受ph值影响在低浓度时，依然有显著效果，在高达95摄氏度时仍然能起作用。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

             环境变化会影响肠道微生物群落的稳定性！中国微生物菌种查询网：你的指纹一辈子都不会变。但是，在儿童双胞胎的肠道中共享的微生物菌株的“指纹”又如何呢？研究人员利用阿拉巴马大学伯明翰分校(University of Alabama at Birmingham)开发的基因组学压力跟踪生物信息学工具，调查了在一起生活了几十年的成年双胞胎开始分开生活后，这些共享的菌株是否保持稳定，对饮食或环境的变化有弹性。发表在《公共科学图书馆综合》(PLOS ONE)杂志上的UAB研究分析了两对双胞胎的宏基因组测序数据库，一组是仍住在一起的儿童，另一组是年龄在36岁至80岁之间的成年双胞胎，他们分开居住的时间从1年到59年不等。这项研究使用了先前由UAB开发的一种称为基于窗口的相似单核苷酸变异(WSS)的生物信息学应变跟踪工具。UAB遗传与基因组学核心系的Hyunmin Koo博士领导了信息学分析。这项研究产生了大约6tb的数据，在Cheaha UABgrid超级计算机和UAB信息技术研究计算小组的帮助下进行了分析。研究人员已经在之前的几项应变跟踪研究中使用了这种微生物指纹工具。2017年，他们发现，用于医疗难辨梭状芽胞杆菌复发感染的粪便供体微生物在粪便移植后在受体体内存留了数月或数年。2018年，他们发现通过肥胖术导致上消化道的变化导致了新菌株的出现，2019年，他们分析了抗生素医疗后新菌株在个体中的稳定性。目前的研究使用了来自8个双胞胎儿童个体和50个双胞胎成人个体粪便样本的宏基因组测序数据库。UAB的研究人员发现，与分开居住一段时间后的成年双胞胎相比，仍然住在一起的儿童双胞胎有更多共享的菌株对。在成年双胞胎中，那些分开生活不到10年的双胞胎与那些分开生活较长时间(从10年到60年)的双胞胎相比，有更多的相关菌株对。具体来说，在一起生活了79年，然后分开1年的80岁双胞胎显示出最多的相关菌株对。其次是56岁的双胞胎，他们一起生活了51年，然后分开了5年，73岁的双胞胎一起生活了66年，然后分开了7年，36岁的双胞胎分开了19年。在3对分开生活了22 - 54年的双胞胎中发现了单共享菌株，但这些零星的共享菌株与分开生活的时间长短没有相关性。美国医疗团队和生元获悉，虽然某些肠道微生物菌株在人体内可以保持稳定，但在某些情况下可以保持几十年，随着时间的推移，宿主环境条件的变化可能会影响肠道微生物群落的稳定性。这可能导致新菌株的出现，可能会影响对人类健康至关重要的微生物相互作用。

                  人脂肪细胞提取物的背景与应用！一、背景人脂肪细胞提取物是从人原代脂肪细胞提取的，人原代脂肪细胞从正常人脂肪组织制备。人脂肪细胞提取物可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。人体内的脂肪细胞可分为白色和棕色脂肪细胞两大类，两类脂肪细胞在形态、功能和来源方面都有很大的差异。每个成人体内，大约含有300亿个白色脂肪细胞，其组织又称脂肪组织，常呈白色，在幼儿期大量增殖，到青春期数量达到dianfeng，此后数量一般不再增加。细胞内含有大量富含脂肪的小泡，称为脂质泡，富含光面内质网。此外，还有一种褐色脂肪细胞，在人体内主要存在于肩胛骨间、颈背部、腋窝、纵隔及肾脏周围，含有高度团缩的褐色脂肪，作用是将脂质分解产热，调节体内脂质比例。白色脂肪细胞形态为单泡脂肪细胞，即在一个白色脂肪细胞内，90%的细胞体积被脂滴占据，把细胞质挤到细胞的边缘，形成一个“圆环”样细胞质；并且细胞核也被挤扁、挤平，形成一个“半月”形的细胞核，只占细胞体积的2%～3%。一层薄薄的膜把脂滴和细胞质分开来。细胞质内的细胞器比较少，细胞中心的脂滴95%的成分都是三酰甘油（甘油三酯），也包含一些游离脂肪酸、磷脂和胆固醇。每个白色脂肪细胞的大小不同，不同人种、不同性别和不同地理环境下，脂肪细胞可以小至20μm，大至200μm。为了储存足够的脂质，脂肪细胞的体积最多能增加1000倍，达到1～3 nI。在正常体重的成人中，白色脂肪组织占据15%～20%的体重，它储存的三酰甘油（甘油三酯）能释放每千克体重29288 kJ（7 000 kcal）的热量。褐色脂肪细胞属于多泡脂肪细胞，其细胞内散在许多小脂滴，线粒体大而丰富，核圆形，位于细胞中央。二、应用可用于脂肪细胞共培养及白介素-6、抵抗素对HepG2细胞ABCA1表达的影响及可能机制探讨研究：脂肪组织作为重要的内分泌器官在肥胖时分泌异常的脂肪因子如白细胞介素-6(IL-6)、抵抗素(Resistin)、肿瘤坏死因子-α(TNF-、)等。HDL主要在肝脏合成,其中三磷酸腺苷结合转运子A1(ABCA1)和载脂蛋白A1(ApoA1)是其合成的关键蛋白。近来发现微小RNA-33(miR-33)位于胆固醇调节元件结合蛋(SREBP)基因内含子中,可抑制ABCA1的表达,调节HDL的代谢。肥胖时紊乱的脂肪因子对肝脏HDL生成是否产生作用,并且此作用是否与miR-33相关暂不清楚。目的：建立脂肪细胞与肝细胞共培养模型,探讨促分化成熟脂肪细胞及脂肪因子IL-6和Resisin干预分别对肝细胞表达ABCA1、ApoA1、miR-33a/b及SREBP2/1c等的影响。方法：培养小鼠3T3-L1前体脂肪细胞,诱导分化至成熟的脂肪细胞；由行腹部外科手术患者的皮下脂肪组织中分离培养人脂肪源间充质干细胞(ADSCs),诱导分化14天至成熟的脂肪细胞。将人肝癌细胞株HepG2细胞分别与未促分化小鼠3T3-L1及促分化小鼠成熟3T3-L1脂肪细胞共培养48小时；另外将HepG2细胞分别与未促分化的人ADSCs及促分化成熟的人ADSCs共培养48小时。将单独培养的HepG2设为正常对照组。提取各组细胞的蛋白及总RNA,通过Western Blot方法检测各组HepG2细胞ABCA1蛋白表达量；实时荧光定量PCR(Real-time PCR)比较各组中miR-33a,miR-33b,SREBP-lc,SREBP-2,ABCA1,APOA1基因的相对表达量。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  分子生物学在微生物检验中的应用！中国微生物菌种查询网：21世纪是以分子生物学为代表的生命科学的时代，近年来,随着现代生物技术的快速发展,人类基因组计划的完成,尤其是生物化学、免疫学、生物仪器及计算机理论与技术的进步，分子生物学技术在医学、遗传学、法医学、生物学等各个领域广泛应用, 新的诊断技术和方法不断涌现并被广泛应用于微生物检测，为传染病的流行病学调查、基因的多样性、微生物的生物学特性、微生物的致病性和药物的耐受性、微生物的生物降解能力等各个方面提供了重要的信息。 一、核酸杂交法最初应用于微生物检测的分子生物学技术是基因探针方法,它是用带有同位素标记或非同位素标记的DNA 或RNA 片段来检测样本中某一特定微生物核苷酸的方法。核酸杂交有原位杂交、打点杂交、斑点杂交、Sorthern杂交、Northern杂交等,核酸分子探针又可根据它们的来源和性质分为DNA探针、cDNA探针、RNA探针及人工合成的寡聚核苷酸探针等。其原理是通过标记根据病原体核酸片段制备的探针与病原体核酸片段杂交,观察是否产生特异的杂交信号。核酸探针技术具有特异性好、敏感性高、诊断速度快、操作较为简便等特点。目前,已建立了多种病原体的核酸杂交检测方法,尤其是近年来发展起来的荧光原位杂交技术(FISH) 更为常用。 二、质粒DNA图谱分型技术　细菌质粒分析是较早被使用的对病原微生物流行病学进行调查的分子分型技术。这种技术包括萃取质粒DNA ,通过琼脂糖凝胶电泳分离DNA。由于不同菌株质粒DNA序列和大小不同,通过琼脂糖凝胶电泳分离得到的DNA质粒图谱也将不同,因此,与流行病相关的分离株能够被分类分型。质粒图谱分析的再现性和分辨力可通过限制性内切酶消化质粒而提高。虽然2个不相关质粒有相同的分子量, 但性内切酶位点的位置和频率是不同的。但质粒是可移动的非染色体遗传物质,细菌能自发的失去或很容易的获得,结果流行病相关的菌株可以展示不同质粒指纹图谱。许多质粒带有抗性决定因子的基因,存在于转位子上,而转位子很容易丢失或获得,这同样可以迅速改变质粒DNA组成。产生图谱的再现性也会由于质粒空间存在的不一致性(超螺旋的、断口的和线形的)而被影响,而凝胶电泳时具有不同迁移速度。大多数病原微生物有质粒,但没有质粒的就不能用此技术分型。此外,由于有些分离株中含有1个或2个质粒,会使菌株间的分辨力降低。 三、染色体DNA 限制性内切酶分析技术　染色体DNA经限制性核酸内切酶消化,消化后的片段再通过琼脂糖凝胶电泳进行分离。用限制性内切核酸酶BglⅡ和EcoRI等消化病原微生物基因组DNA可以产生大量短的片段。电泳后,将获得一系列被分离的DNA图谱。通过比较图谱,就可以进行菌相似性研究。几乎所有的病原微生物分离株都可以通过这种方法分型,但由于基因组DNA巨大,酶切后产生的片段众多,且含有大量的重叠片段,这将导致菌株间图谱一致性分析产生困难。但若细菌只含一个或少量核糖体操纵子, 则只产生1～ 2条带, 这限制区分密切相关菌株的能力。RFLP分析分辨力低于脉冲场凝胶电泳分型技术（PFGE）, 且比较复杂图谱(数百条带) 的难度较大。 四、DNA 的脉冲场凝胶电泳分型技术　脉冲场凝胶电泳分型技术（PFGE）是使用对染色体有很少酶切位点的限制性核酸内切酶消化细菌DNA ,产生大的DNA片段(10～800 kb) ,这些大片段不能通过常规电泳方法进行有效分离。在电场方向周期改变(脉冲)的凝胶电泳条件下,DNA片段根据大小有效分离。PFGE产生的染色体DNA图谱比用那些高频率切割的限制性内切酶产生的图谱更为简单清晰。理论上,所有的细菌都能使用PFGE 进行分型分类,结果具有极高的再现性和分辨率, 常作为分子生物学分型方法的“金标准”使用。PFGE 也有一些局限,例如所需时间长,使用的试剂非常昂贵,要求专门的仪器等。另外,很小的电泳条件的不同就可以改变每条光谱带间距离,使用不同凝胶进行电泳得到的结果也比较复杂,这为不同实验室间的结果比较带来一定麻烦。 五、聚合酶链反应技术　聚合酶链反应( PCR)技术自1985年发明以来,因其高度灵敏性和良好的特异性受到了人们的高度重视,各种各样以PCR 为基础的DNA序列的扩增和检测方法得到了迅猛发展,几乎已应用于基础研究的各个领域。各种衍生技术如反转录PCR ( RTR) 、多重PCR 、巢式PCR、PCR单链构象多态性(PCRSSCP)、限制性片段长度多态性（RFLP）、随机扩增的多态性DNA 技术(RAPD)和重复序列PCR技术(Rep - PCR)、荧光定量PCR等。其中定量PCR 既可以用于临床感染性疾病的诊断,又可用于监测其疗效，PCR及其衍生的技术近年来在病原微生物分型研究上得到了广泛应用。 1、随机扩增的多态性DNA 技术随机扩增的多态性DNA 技术（RAPD）是一种典型PCR衍生技术, 在低复性温度下用短任意序列引物( 10～15m ers) 扩增有密切同源性的基因组DNA序列, 模板上任意引物杂交点的数目和位置因种的不同株而异, 理论上特定株形成特定图谱。基因组在这些杂交区段如发生了DNA片段缺失、插入或碱基突变,就可能导致这些特定结合位点分布发生相应的变化。通过电泳对扩增产物DNA片段的多态性进行检测、分析就可以反应出不同菌株基因组的DNA特点,从而对他们进行分型，RAPD是目前最简单的DNA分型方法, 分辨力高于RFLP, 但低于Rep－PCR，RAPD技术的使用范围也非常广,分辨结果也有较好的实验室再现性。虽然RAPD技术简单、快速, 但由于其对引物和DNA浓度、DNA模板质量、凝胶电泳和DNA聚合酶类型的变化高度敏感, 故RAPD的重复性不够理想。虽然RAPD的分型结果在不同实验室间变化较大,分辨力不如PFGE技术,但在疾病暴发流行时,PAPD仍是一种分析相关菌株和排除不相关菌株的良好技术。 2、重复序列PCR技术重复序列PCR技术（Rep－PCR是利用细菌基因组中广泛分布的短重复序列为引物靶序列,进行PCR扩增,通过对PCR产物电泳结果的比较,分析菌株间基因组存在的差异。这些重复序列在原核生物界广泛存在,在一些细菌属和种中是保守的。在这种方式获得的图谱中,光谱带的大小和数量的不同代表着不同菌株重复序列间的距离和重复序列的数量。已成功地用于分型的细菌重复DNA序列有肠道菌重复基因间共有(ERIC) 序列、重复基因外回纹序列(REP)和BOX序列的分析，与其他分类技术相比,这种技术有更高的分辨力。研究表明,虽然有时Rep-PCR分辨力稍低,但与PFGE获得的结果却有很好的相关性。 3、免疫PCR免疫PCR(immuno polymerase chain reaction ,IM PCR) 是1992 年Sano 等建立的一种检测微量抗原的高灵敏度技术。该技术把抗原抗体反应的高特异性和聚合酶链反应的高敏感性有机结合在一起,它的基本原理是用一段已知DNA分子标记抗体作为探针,用此探针与待测抗原反应, 用PCR扩增粘附在抗原抗体复合物上的这段DNA分子,电泳定性,根据特异性PCR产物的有无,来判断待测抗原是否存在。目前,国内外报道的免疫PCR的敏感性一般比现行的ELISA 法高102 ～105 倍。由于PCR产物在抗原量未达到饱和前与抗原抗体复合物的量成正比,因此免疫PCR 还可用于抗原的半定量试验。PCR－ELISA是PCR与ELISA技术结合的检测方法，其综合了PCR、分子杂交和ELISA三种技术的优点，主要用于检测样品中的特定基因。它引入地高辛(或生物素) 标记的dNTP或引物进行PCR扩增,利用酶标抗地高辛抗体(或酶标记亲和素) 进行ELISA检测,代替了用于常规PCR产物检测的电泳方法,方便快捷,易于处理大量样品,且其灵敏度比使用琼脂糖凝胶电泳检测方法高100倍,当有适当的标准品时,还可进行定量测定。 六、DNA 序列测定　与检测全染色体的PFGE、Rep－PCR和RAPD分析相比,DNA测序只检测细菌或真菌株间潜在变化序列的很小一部分。用于辨别菌株的被测序DNA区域必须满足以下条件:DNA区的结构必须是可变序列，两侧为高度保守区;DNA序列的可变性必须能足以区分特定种的不同株;DNA序列不能水平转移到其它株。对细菌和真菌, 极少序列满足这些条件。相反,DNA测序被认为是病毒分型的 “金标准” 。DNA测序费用高、需要很高的技术条件, 而且自动化DNA 测序仪十分昂贵。 七、基于16SrRNA的检测技术自Woese 等于1987年首次运用rRNA分析以来,rRNA数据库快速扩大起来,成为研究细菌多样性、进化、系统发育中被广泛采用的序列。16SrRNA存在于所有原核生物细胞中,它们相对稳定且有较高的拷贝数(每个细胞几千个拷贝) ,其序列中含可变区及高度保守区,因此可设计群、属、种特异性的探针。现阶段各种常见细菌的16SrRNA基因几乎全部测序完成,16S rRNA编码基因的这些特点使之成为较理想的细菌基因分类的靶序列,逐渐成为细菌鉴定、分类的“金标准”。目前, 16SrRNA 检测技术已在医学界得到广泛应用,可以用现有病原菌标准菌株制作DGGE(变性梯度凝胶电泳) 标准marker , 然后对疑似“病原菌”扩增16SrRNA进行DGGE分析,这样可以做到快速检测。 八、生物芯片生物芯片技术是将生物大分子,如寡核苷酸、cDNA、基因组DNA、肽、抗原以及抗体等固定在诸如硅片、玻璃片、塑料片、凝胶和尼龙膜等固相介质上形成生物分子点阵,当待测样品中的生物分子与生物芯片的探针分子发生杂交或相互作用后,利用激光共聚焦显微扫描仪对杂交信号进行检测和分析。微生物检测基因芯片是指用来检测样品中是否含有微生物目的核酸片段的芯片。基于高通量、微型化和平行分析的特点,微生物检测基因芯片在微生物病原体检测、种类鉴定、功能基因检测、基因分型、突变检测、基因组监测等研究领域中发挥着越来越重要的作用。目前,许多细菌、病毒等病原体的基因组测序已经完成,将许多代表各种微生物的特殊基因制成1张芯片,经反转录就可检测样本中有无病原体基因的表达及表达水平,由此判断病人感染病原、感染进程以及宿主反应等。这样就大大提高了检测效率。基因芯片诊断病原菌的原理基于细菌的16SrRNA基因的高度保守性,由于RNA易于降解,因此多采用检测16SrRNA 所对应染色体上的16SrDNA序列。对16SrDNA而言,如果出现3个碱基以上的差异就可以断定细菌不属于同一种属,因此可用于细菌的分类和鉴别。对病毒和耐药性病原菌的检测是通过将待测的特定基因(病毒特异性基因和耐药基因) 经体外转录、PCR、逆转录、末端标记等处理成标记有荧光分子的核酸分子,然后与芯片上的探针进行杂交,用计算机对杂交信号进行处理,依信号和强度即可得出核酸含量。液态芯片（Suspension Array Technology，SAT），又称微球蛋白芯片（Protein Bead arrays，PBA），是近年来出现的一种新的芯片技术，也是weiyi被美国食品和药品监督管理局（FDA）批准的用于临床诊断的生物芯片。其原理是用两种荧光染料按照不同比例将直径为5.6um的微球（beads/microfluorospheres）染成100种染色，每种颜色的微球共价结合一种生物探针，可以是抗原、抗体、配体，也可以是核酸或酶，分别针对一种待检物。混合载有100种不同颜色的微球，就可以在一个反应孔里同时完成100种不同的生物反应。随后微球成单列通过两束激光照射的管道，计算机采集并处理每种颜色微球的荧光强度变化就可以分别对每个待测物进行定性或定量的检测，该系统可用于多种微生物抗原、抗体和特定基因的联合检测，与固态芯片相比，液态芯片在反应动力学、反应速度、检测敏感性、稳定性以及自动化程度方面都有较大的优越性，因此不少学者看好液态芯片的应用前景。 九、生物传感器生物传感器是将新兴的传感器技术和分子诊断技术相结合而成的一种新技术,是现代临床检验诊断发展的一个新方向。由于生物传感器检测准确、操作简便等特点,近年来已经在许多领域取得了很大的进展,在生物分子相互作用、药物筛选、临床诊断、食物检测等领域获得了广泛的应用，其中临床中用于病原体检测的以DNA生物传感器最为常见。尽管生物传感器作为一种新的传感元件近年来得到了很大的发展,许多光化学、电化学以及压电晶体都相继在生物传感器中得到应用。与常规的核酸和蛋白质检测相比,具有检测准确、操作简单等特点,但由于它存在灵敏度不够、容易受杂质干扰等缺点,随着研究的进一步深化和技术方法的改进,这些问题将会得到解决。 十、蛋白质指纹图谱技术蛋白质指纹图谱技术是随着蛋白质组学兴起的一种新技术，其中表面增强激光解吸电离飞行时间质谱蛋白芯片技术(SELDI-TOF-MS，下称SELDI-TOF-MS) 是由T. William Hutchens 和 Tai-Tung Yip等科学家在上世纪90年代早期所创立的一种蛋白指纹图谱分析技术，并获得了2002年诺贝尔化学奖，为研究蛋白质的结构、属性、功能提供了高效而可靠的技术平台。其原理是利用各种方法（共价键、电荷等）将蛋白“富集”到芯片表面，在激光的轰击下，蛋白解吸附并电离成带电粒子，并在电场作用下飞行，其飞行单位距离的时间取决于其所带电荷数量和其分子量之比（质荷比），从而达到分离和分析蛋白质的目的。该技术是目前最有前途的比较蛋白质组分析方法，为蛋白质组学研究提供了一个利器，具有独特的优势和能力：可直接用粗生物样品（血清、尿、体液）进行分析、可同时快速发现多个生物标记物、具有高通量的验证能力、能发现低丰度蛋白质（灵敏度高达fmol/ml），与“双相电泳加飞行质谱”相比，除了有相似功能外，并可增加测定疏水蛋白质，可在同一系统中集发现和检测为一体，SELDI在微生物检验方面将发挥重要的作用。 十一、适体技术1990年,Tuerk和Gold[1]分别独立研制了一种新型的体外筛选技术,即指数富集的配体系统进化技术(Systematic evolution of ligand by exponential enrichment, SELEX),用于研究小分子核酸与靶物质相结合的部位、序列及空间构像。适体（aptamer），又称适配分子或适配子，实质是运用SELEX技术从人工体外合成的随机寡核苷酸序列库中反复筛选得到的能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的一段寡核苷酸序列。由于适体分子可用酶、放射性核素、荧光物质及生物素等标记以作为检测分子，它协同传统的单克隆抗体在流式细胞技术、生物传感器、荧光偏振、分子灯塔和毛细管电泳等检测技术上得到了广泛的运用。适体与抗体相比，具有针对靶分子的范围广、亲和力和特异性高、性能稳定、便于修饰等诸多优点。利用针对微生物的特定蛋白和基因的适体对微生物进行鉴定和分型以及耐药基因的检测方面，适体将具有良好的前景，有的学者认为，未来适体有可能取代抗体。 十二、结语长期以来,人们试图找到一种既简便又快速、又有足够分辨力的技术来鉴别和区分各种病原微生物，各种新方法和新技术不断涌现，但每一种方法都有其局限性，为了弥补各自的不足，使用一种以上的技术即采用多种方法联合使用的策略,一种技术的缺点会被其他技术的优点所代替。选择检测方法应考虑到自身所拥有的条件,检测所要求达到的灵敏度,而提高灵敏度和去除假阳性是检测方法发展的趋势。近年来,随着计算机技术的不断发展,临床病原菌检测将向着简便、快速、高通量、自动化的方向发展。分子生物学技术通过自动化仪器的使用,将在病原菌诊断、鉴定和耐药基因检测方面越来越广泛地应用于临床。

                      霉菌酵母菌样品的稀释方法！霉菌、酵母菌样品的稀释固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225mL灭菌蒸馏水的锥形瓶中,充分振摇，即为1:10稀释液。或放入盛有225 mL无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器(不推荐使用刀片式均质器)拍打2min，制成1:10的样品匀液。液体样品：取25mL样品至盛有225 mL无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预臵适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。取1mL1:10稀释液注入含有9mL无菌水的试管中, 另换一支1mL无菌吸管反复吹吸,此液为1:100稀释液。样品的稀释不推荐使用刀片式均质器原标准为“反复吹吸50次”(原标准为“反复吹吸50次”)。可使用漩涡混匀器。可使用漩涡混匀器拍击式均质器取1mL1:10稀释液注入含有9mL无菌水的试管中, 另换一支1mL无菌吸管反复吹吸原标准为“反复吹吸5次”,此液为1:100稀释液。制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1 mL无菌吸管。5.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个(原标准为“3个”) （液体样品可包括原液）在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1 mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1 mL稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。及时将15mL～20 mL冷却至46℃的马铃薯-葡萄糖琼脂或孟加拉红培养基(可放置46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。中国微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到Z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得Z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！为更好服务社会，创造双方利益较大化，中国微生物菌种查询网提供的产品：质控菌种，标准菌种，中国微生物菌种4万多株，细胞系/株1万多株其中金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌（大肠杆菌），沙门氏菌，黑曲霉，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，链球菌，白色念珠菌，志贺氏菌等为常用菌株。欢迎您的咨询！

              大肠埃希氏菌背景及概述与生物学特性！一、背景及概述大肠埃希氏菌通称为大肠杆菌，存在于人类和动物肠道中。从对肠道作用来看，可分为致病性与非致病性两大类。非致病性大肠杆菌是人类肠道中兼性厌氧正常菌群的优势菌种，一般情况下对人体无害，并可在肠道内合成维生素B和维生素K，产生的大肠菌素能抑制痢疾杆菌等病原菌的生长，对人体有利。但在机体抵抗力下降或侵入肠道外组织或器官时，可作为条件致病菌引起肠道外感染。致病性大肠杆菌可致肠道感染，又称致腹泻大肠杆菌或肠道毒力大肠杆菌，依据致病机制、临床症状、流行病学特点和血清型分为肠致病性大肠杆菌(EPEC)、产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠出血性大肠杆菌(EHEC)和肠聚集粘附性大肠杆菌(EA．AggEC)等5类。每类菌株限于一定血清型，其毒力由质粒编码，产生肠毒素或细胞毒素，对肠粘膜的作用具有特征性，可致腹泻、出血性肠炎等疾病。二、生物学特性1．形态与染色 为革兰氏染色阴性，两端钝圆、中等大小的杆菌，无芽胞，有周鞭毛，能运动。有菌毛。2．培养特性 本菌生命力较强，在46℃仍可生长。营养要求不高。在液体培养基中，呈均匀混浊生长，形成薄菌膜，管底有粘性沉淀物，培养物具有粪臭。在血液琼脂平板上，某些菌株可出现溶血环。在鉴别培养基上，大肠埃希氏菌与肠道致病菌的菌落易于区别。如在伊红美蓝平板上呈紫黑色，具有金属光泽的菌落。而肠道致病菌由于不分解乳糖，均呈无色的菌落。  3，生化反应 大肠埃希氏菌生化反应活跃。分解乳糖的意义更大，可与肠道致病菌区别。能迅速分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇等多种糖类，产酸产气。产生靛基质，甲基红试验阳性，不产生尿素酶、苯丙氨酸脱氨酶和硫化氢。V—P试验阴性、氧化酶试验阴性。不能利用柠檬酸盐，对赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸有脱羧作用．在粘液酸中不产酸，能利用醋酸钠作为碳的weiyi来源。4．抵抗力 大肠埃希氏菌在自然界生存能力较强，在土壤、水中可存活数月。胆盐、煌绿对本菌有选择性抑制作用。5．抗原型别 大肠埃希氏菌有O抗原、H抗原和表面(K)抗原三种。O抗原为细菌细胞壁上的糖、类脂、蛋白质复合物，已分为160多个血清群。H抗原为蛋白质；现已发现40种以上。K抗原位于细胞壁外层。新分离的大肠埃希氏菌70％具有K抗原，并具有型特异性。K抗原又分为A、B、L三类，致病性大肠埃希氏菌的K抗原主要为B抗原，少数为L抗原。根据K抗原和H抗原，将各O血清群再进一步区分为不同的血清型或亚型。三、大肠埃希氏菌食物中毒埃希氏菌属(Escherichia)俗称大肠杆菌属。大肠埃希氏菌为人类和动物肠道的正常菌群，多不致病。当宿主免疫力下降或细菌侵入肠外组织和器官时，可引起肠外感染。2001年我国有2万多人发生大肠杆菌O157：H7食物中毒，死亡177人。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    微生物鉴定中常用的生化反应！一、实验概要有些细菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再变蓝色。细菌产生的脂肪酶能分解培养基中的脂肪生成甘油及脂肪酸。脂肪酸可以使培养基pH下降，可通过在油脂培养基中加入中性红做指示剂进行测试。中性红指示范围为pH6.8(红)～8.0(黄)。当细菌分解脂肪产生脂肪酸时，则菌落周围培养基中出现红色斑点。某些细菌分泌蛋白酶分解明胶，产生小分子物质。如果细菌具有分解明胶的能力，则培养基可由原来固体状态变成液体状态。牛乳中主要含有乳糖、酪蛋白等成分。细菌对牛乳的利用主要是指对乳糖及酪蛋白的分解和利用。牛乳中常加入石蕊作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。石蕊中性时呈淡紫色，酸性时呈红色，碱性时呈蓝色，还原时则部分或全部脱色。细菌对牛乳的利用可分三种情况：1、酸凝固作用：细菌发酵乳糖后，产生许多酸，使石蕊牛乳变红，当酸度很高时，可使牛乳凝固，此称为酸凝固。2、凝乳酶凝固作用：某些细菌能分泌凝乳酶，使牛乳中的酪蛋白凝固，这种凝固在中性环境中发生。通常这种细菌还具有水解蛋白质的能力，因而产生氨等碱性物质，使石蕊变蓝。3、胨化作用：酪蛋白被水解，使牛乳变成清亮透明的液体。胨化作用可以在酸性条件下或碱性条件下进行，一般石蕊色素被还原褪色。二、主要试剂淀粉培养基：牛肉膏蛋白胨培养基加0.2%的可溶性淀粉；油脂培养基：牛肉膏蛋白胨培养基加花生油10mL、0.6%中性红水溶液1mL；明胶液化培养基：蛋白胨5g，明胶100～150g，水1000mL，pH7.2～7.4，115℃灭菌20min。石蕊牛乳培养基：牛奶粉100g、石蕊0.075g、水1000 mL、pH6.8，121℃灭菌15 min。三、实验材料大肠杆菌(E. coli)、枯草杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、黏乳产碱杆菌(Alcaligenes viscolactis)、铜绿假单胞菌(Psudomonas aeruginosa)、普通变形杆菌(Proteus vularis )四、实验步骤1、淀粉水解试验1) 准备淀粉培养基平板：将熔化后冷却至50℃左右的淀粉培养基倒入无菌平皿中，待凝固后制成平板。2) 接种：用记号笔在平板底部划成两部分，在每部分分别写上菌名，用接种环取少量的待测菌，点接在培养基表面的相对应部分的中心，其中一个菌种应是枯草杆菌做对照菌。3) 培养：将接种后的平皿置于28℃恒温箱培养24h。4) 检测：取出平板，打开平皿盖，滴加少量的碘液于平板上，轻轻旋转，使碘液均匀铺满整个平板。菌落周围如出现无色透明圈，则说明淀粉已经被水解，表示该细菌具有分解淀粉的能力。可以用透明圈大小说明测试菌株水解淀粉能力的强弱。2、油脂水解试验1) 将装有油脂培养基的三角瓶置于沸水浴中熔化，取出并充分振荡，使油脂均匀分布，再倾入无菌平皿中，待凝固成平板。2) 接种：于同一平皿的两边接种，其中一种是金黄色葡萄球菌作为对照菌。置于37℃恒温箱培养24h，取出后观察平板菌苔颜色，如果出现红色斑点，即说明脂肪被水解了，此反应为正反应。红色斑点大小说明测试菌株水解脂肪能力的强弱。3、明胶液化试验1) 接种：用穿刺接种法接种大肠杆菌或产气肠杆菌于明胶培养基中。2) 培养：放20℃恒温箱中培养48h。若细菌在20℃下不长，则应放在最适温度下培养。3) 观察结果：观察培养基有无液化情况及液化后的形状。因明胶在低于20℃时凝固，高于25℃时自行液化，若是在高于20℃下培养的细菌，观察时应放在冰浴中观察，若明胶被细菌液化，即使在低温下明胶也不会再凝固。4、石蕊牛乳试验1) 接种：将黏乳产碱杆菌和铜绿假单胞菌接种入石蕊牛乳培养基中。2) 培养：将接种后的试管于37℃恒温培养7d，另外保留一支不接种的石蕊牛乳培养基作为对照。3) 结果观察：取出培养物，以不接种任何细菌的试管为对照，观察接种不同细菌生长后的变化情况。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

              蜡样芽胞杆菌平板计数法样品处理方法！蜡样芽胞杆菌平板计数法样品处理方法1、样品处理冷冻样品应在45 ℃以下不超过15 min 或在2 ℃～5 ℃不超过18 h 解冻，若不能及时检验，应放于-10℃ ~ -20℃保存；非冷冻而易腐的样品应尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于2 ℃～5 ℃冰箱保存，24 h 内检验。2、样品制备称取样品25 g，放入盛有225 mL PBS 或生理盐水的无菌均质杯内，用旋转刀片式均质器以8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min，或放入盛有225 mLPBS 或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态，吸取25 mL 样品至盛有225 mL PBS 或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀，作为1:10 的样品匀液。3、样品的稀释吸取上述1:10 的样品匀液1 mL 加到装有9 mL PBS 或生理盐水的稀释管中，充分混匀制成1:100 的样品匀液。据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1 次，换用1 支1mL 无菌吸管或吸头。4、样品接种根据对样品污染状况的估计，选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），以0.3 mL、0.3 mL、0.4 mL 接种量分别入三块MYP 琼脂平板，然后用无菌L 棒涂布整个平板，注意不要触及平板边缘。使用前，如MYP琼脂平板表面有水珠，可放在25 ℃～50 ℃的培养箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

            牛肉膏蛋白胨培养基的实验步骤与注意事项！一、实验概要培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素、能源和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基要选择合适的配比关系；选择合适的理化性质；配后要及时灭菌。牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，平板划线法等。二、主要试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等。三、主要设备试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅等。四、实验步骤1. 牛肉膏蛋白胨培养基的制备1) 计算  根据配方计算出实验中各种药品所需要的量，然后再分别称量。2) 称量  准确称取各种成分。一些不易称量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放硫酸纸上称量，然后连同硫酸纸一起放入烧杯中。3) 溶解  向烧杯内加入所需的水量，将牛肉膏用水洗下后，取出硫酸纸弃去。加热搅拌全溶后稍放冷。4) 调pH值  用酸度计或精密pH试纸测定其pH值，并用10％NaOH调至所需pH值，必要时用滤纸或脱脂棉过滤。一般比要求的pH高出0.2，因为高压蒸汽灭菌后，pH常降低。5) 分装  根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内（附图1-1）。注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。6) 包扎  试管扎成捆。试管和三角瓶的棉塞外用硫酸纸和牛皮纸包扎，纸上表明培养基的名称、配制日期等。7) 灭菌  培养基用0.1Mpa（15lb/in2）高压蒸汽灭菌15~20min。2. 培养基的高压蒸汽灭菌灭菌原理：水的沸点可随压力的增加而提高，当高压蒸汽灭菌锅中水煮沸时，因锅是密闭的，蒸汽不能溢出，而使压力增加，水的沸点和温度也随之增加。因此，高压蒸汽灭菌是利用高压蒸汽产生的高温，以及热蒸汽的穿透能力来达到灭菌的目的。一般在0.1Mpa（15lb/in2）的压力时，温度可达121℃只要维持15~20min，就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子。灭菌方法：1) 加水于灭菌器内到规定的水平面。2) 需灭菌的物品（分装在试管、三角烧瓶中的固、液体培养基），棉塞、硅胶泡沫塞等用防潮纸包好（防止锅内水汽把棉塞淋湿），放入灭菌锅内的套筒中。摆放要疏松，不可太挤，否则阻碍蒸汽流通，影响灭菌效果。3) 将灭菌锅盖的排气管插人套筒侧壁的凹槽内，关闭灭菌锅盖旋紧螺栓，切勿漏气。4) 打开放气阀，加热，热蒸汽上升，以排除锅内冷空气，排气约5~ l0min，关闭放气阀。5) 关闭放气阀后，整个灭菌锅成为密闭状态，而蒸汽又不断增多，这时压力和温度都上升，直至压力表指针达到所需压力时，开始计时，通过调节热源，维持此压力到所需时间。6) 灭菌完毕，待压力自然降至0时，打开放气阀，注意不能打开过早，否则突然降压致使培养基冲腾，使棉塞、硅胶泡沫塞沾污，甚至冲出容器以外。7) 打开灭菌锅盖，取出已灭菌的器皿及培养基。8) 灭菌锅用完后，将锅内剩余的水倒掉，以免日久腐蚀。3. 微生物的分离与纯化借助于划线将混杂的细菌材料逐步稀释，zuihou在琼脂平板上分散开来，使之出现单一菌落而达到分离纯化的目的。五、注意事项1. 要严格按配方配制。2. 调pH不要过头。3. 高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。4. 划线法分离纯化微生物注意各区勿相互交叉。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！