苏云金杆菌的部分生化试验鉴定！

                 苏云金杆菌的部分生化试验鉴定！

一、目的要求： 

本实验是通过简单的生化测定来了解苏云金杆菌的生化鉴定技术。 

鉴定苏云金杆菌的生化指标是：V、P反应，卵磷脂酶，蛋白水解，吐温酶，水杨素，七叶灵、蔗糖、甘露糖、表膜、酶、淀粉、几丁质酶、精氨酸脱羟酶等。

二、实验材料： 

1、天平 

2、电炉 

3、药勺

4、量筒

5、烧杯

6、pH试纸

7、高压锅（手提式）

8、接种环 

三、实验内容： 

1、糖利用： 

蛋白胨                                     1% 

琼脂                                        2% 

蔗糖（甘露糖）                         1%（水杨素为0.5%） 

1%酸性复红水溶液                     0.5% 

蛋白胨加热溶于水中，加入酸性复红水溶液。分别加入一种糖加热溶解，以不加糖的蛋白胨作对照。分装试管，调pH至7.58磅灭菌30分钟。 

接种后于30℃恒温培养检查产酸情况，若培养基变红者为正反应。 

2、七叶灵利用： 

牛肉膏                                1% 

七叶灵                                0.5% 

琼脂                                  2% 

另配5%三氯化铁水溶液单独灭菌。培养基溶后，先将三氯化铁每皿滴入2滴，后倒平板混匀。凝固后电接菌种，30 ℃培养3-5天。菌苔周围出现深褐色区为阳性反应。 

3、V、P反应： 

蛋白胨5克  葡萄糖5克  NaCl 5克  蒸馏水 1000毫升 

分装试管   8磅30分钟灭菌 

接菌后于37 ℃培养24小时，每管加入4%KOH溶液10-20滴，再加等量的5%的一萘酚乙醇水溶液后，用力振荡。然后置37 ℃下保温0.5小时。培养物出现红色即为V、P正反应，并设未接种的试管为对照。

4、淀粉水解试验： 

牛肉膏 5克  NaCl 5克  可熔性淀粉 5克  琼脂  10克  蒸馏水 1000毫升  

将试验菌点种于平板上，徒长出菌落后，收Lugoc氏碘液倾注于平板表面，菌落四周有透明圈者为阳性放应。

5、菌膜形成试验： 

肉汤试管接种，30。C静止培养24小时后观察菌膜形成情况及摇动后膜破粹情况。

6、卵磷脂酶试验 

蛋白胨1%   酵母膏  0.3%  NaCl  0.5%  琼脂 2%  卵黄2-3%  pH 7-7.2 

用75%酒精将新鲜鸡蛋进行表面消毒，并用经火焰灭菌的镊子将蛋两端各打一个孔，倾去蛋清，然后用无菌5ml吸管取出卵黄，加至触化后冷却至50。C左右的培养基中，使卵黄含量为培养基总体积的2~3%。混匀后倒平板，点接菌种24小时后观察，菌液边缘出现混浊圈者表示卵鳞酯酶为阳性。

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