人脂肪细胞提取物的背景与应用！

                  人脂肪细胞提取物的背景与应用！

一、背景

人脂肪细胞提取物是从人原代脂肪细胞提取的，人原代脂肪细胞从正常人脂肪组织制备。人脂肪细胞提取物可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。人体内的脂肪细胞可分为白色和棕色脂肪细胞两大类，两类脂肪细胞在形态、功能和来源方面都有很大的差异。每个成人体内，大约含有300亿个白色脂肪细胞，其组织又称脂肪组织，常呈白色，在幼儿期大量增殖，到青春期数量达到dianfeng，此后数量一般不再增加。

细胞内含有大量富含脂肪的小泡，称为脂质泡，富含光面内质网。此外，还有一种褐色脂肪细胞，在人体内主要存在于肩胛骨间、颈背部、腋窝、纵隔及肾脏周围，含有高度团缩的褐色脂肪，作用是将脂质分解产热，调节体内脂质比例。白色脂肪细胞形态为单泡脂肪细胞，即在一个白色脂肪细胞内，90%的细胞体积被脂滴占据，把细胞质挤到细胞的边缘，形成一个“圆环”样细胞质；并且细胞核也被挤扁、挤平，形成一个“半月”形的细胞核，只占细胞体积的2%～3%。一层薄薄的膜把脂滴和细胞质分开来。细胞质内的细胞器比较少，细胞中心的脂滴95%的成分都是三酰甘油（甘油三酯），也包含一些游离脂肪酸、磷脂和胆固醇。

每个白色脂肪细胞的大小不同，不同人种、不同性别和不同地理环境下，脂肪细胞可以小至20μm，大至200μm。为了储存足够的脂质，脂肪细胞的体积最多能增加1000倍，达到1～3 nI。在正常体重的成人中，白色脂肪组织占据15%～20%的体重，它储存的三酰甘油（甘油三酯）能释放每千克体重29288 kJ（7 000 kcal）的热量。褐色脂肪细胞属于多泡脂肪细胞，其细胞内散在许多小脂滴，线粒体大而丰富，核圆形，位于细胞中央。

二、应用

可用于脂肪细胞共培养及白介素-6、抵抗素对HepG2细胞ABCA1表达的影响及可能机制探讨研究：

脂肪组织作为重要的内分泌器官在肥胖时分泌异常的脂肪因子如白细胞介素-6(IL-6)、抵抗素(Resistin)、肿瘤坏死因子-α(TNF-、)等。HDL主要在肝脏合成,其中三磷酸腺苷结合转运子A1(ABCA1)和载脂蛋白A1(ApoA1)是其合成的关键蛋白。近来发现微小RNA-33(miR-33)位于胆固醇调节元件结合蛋(SREBP)基因内含子中,可抑制ABCA1的表达,调节HDL的代谢。肥胖时紊乱的脂肪因子对肝脏HDL生成是否产生作用,并且此作用是否与miR-33相关暂不清楚。

目的：建立脂肪细胞与肝细胞共培养模型,探讨促分化成熟脂肪细胞及脂肪因子IL-6和Resisin干预分别对肝细胞表达ABCA1、ApoA1、miR-33a/b及SREBP2/1c等的影响。

方法：培养小鼠3T3-L1前体脂肪细胞,诱导分化至成熟的脂肪细胞；由行腹部外科手术患者的皮下脂肪组织中分离培养人脂肪源间充质干细胞(ADSCs),诱导分化14天至成熟的脂肪细胞。将人肝癌细胞株HepG2细胞分别与未促分化小鼠3T3-L1及促分化小鼠成熟3T3-L1脂肪细胞共培养48小时；另外将HepG2细胞分别与未促分化的人ADSCs及促分化成熟的人ADSCs共培养48小时。将单独培养的HepG2设为正常对照组。提取各组细胞的蛋白及总RNA,通过Western Blot方法检测各组HepG2细胞ABCA1蛋白表达量；实时荧光定量PCR(Real-time PCR)比较各组中miR-33a,miR-33b,SREBP-lc,SREBP-2,ABCA1,APOA1基因的相对表达量。

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