小鼠气管和支气管组织提取物的应用！一、背景小鼠气管和支气管组织提取物分离自小鼠气管和支气管组织，可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。气管trachea和支气管bronchi均以软骨、肌肉、结缔组织和粘膜构成。软骨为“C”字形的软骨环，缺口向后，各软骨环以韧带连接起来，环后方缺口处由平滑肌和致密结缔组织连接，保持了持续张开状态。管腔衬以粘膜，表面覆盖纤毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空气中的灰尘颗粒，纤毛不断向咽部摆动将粘液与灰尘排出，以净化吸入的气体。气管壁自内向外由粘膜层、粘膜下层及外膜组成。粘膜层有纤毛上皮，为假复层纤毛柱状上皮，夹有杯状细胞。上皮基膜明显，固有膜内有丰富的弹性纤维、淋巴组织和浆细胞，纤毛可向咽喉方向摆动，将尘粒与细菌等随粘液一起运到咽，经咳嗽反射排出。粘膜下层为疏松结缔组织，内有气管腺，开口于粘膜表面，上皮和腺体的分泌物是防止尘埃入肺的保护装置，分泌物中含有各种免疫球蛋白，具有抑菌和抗病毒的作用，是机体防御系统的组成部分。外膜由14～16个“C”字形透明软骨环和环间的结缔组织构成，软骨环的缺口朝向后面，缺口之间有平滑肌束及弹性纤维构成膜性壁。软骨起支架作用，有弹性，可使管腔保持开放状态，以维持呼吸功能的正常进行。平滑肌和弹性纤维可使管壁有一定的舒缩性，适于其后方的食管腔内食团顺利下行及颈的俯仰动作。二、应用小鼠气管和支气管组织提取物可用于TDI哮喘气道炎性反应中TSLP的作用及其调控机制研究：1、采用气管滴注的方式进行激发给药,改进TDI哮喘小鼠模型建立的方案,并对模型的建立进行评价。2、观察TDI哮喘过程中ROR-γt、Foxp3、IL-17A和TSLP基因m RNA表达及其启动子区甲基化变化,探讨TSLP及Th17/Treg细胞平衡在TDI哮喘发病中的作用。3、观察TSLP中和抗体干预对TDI哮喘的治疗作用以及TSLP与Th17/Treg细胞平衡间的相互作用,探讨TDI哮喘的发病机制。方法：1、动物模型的建立选用SPF级健康雄性8-10周龄BALB/c小鼠20只,适应环境1周后,随机分为TDI哮喘组(TDI组)和溶剂对照组(AOO组)。TDI组小鼠于第1、8天耳背分别涂抹20μL 0.3%TDI致敏(溶剂为丙酮:橄榄油=2:3),第15天采用气管滴注法给予20μL 0.01%TDI进行激发(溶剂为丙酮:橄榄油=1:4)。AOO组小鼠,按照上述方法给予等量的溶剂。两组小鼠在同样的饲养条件下饲养并观察小鼠一般生长状况,每天测量小鼠体重。于TDI激发结束后24小时处死小鼠,每组各取6只小鼠检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和细胞分类计数并将BALF中炎细胞涂片,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF白细胞介素4(IL-4)和IFN-γ水平的变化,每组另取4只小鼠多聚甲醛全身灌流固定后取部分肺组织苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学改变。2、TSLP表达及Th17/Treg细胞平衡在TDI哮喘中的变化及其相关基因启动子区甲基化改变模式选用SPF级健康雄性8-10周龄BALB/c小鼠32只,适应环境1周后,随机分为TDI组和AOO组。于TDI激发结束后24小时处死小鼠,每组各取6只小鼠检测BALF中细胞总数和细胞分类计数,每组各取4只多聚甲醛全身灌流固定后取部分肺组织HE染色观察气管和肺组织病理学改变。每组各取6只小鼠部分肺组织,实时荧光定量逆转录RT-PCR和Mass Array飞行质谱法分别检测TDI组和AOO组小鼠肺组织中ROR-γt、Foxp3、IL-17A和TSLP基因mRNA和基因启动子区甲基化水平。3、TSLP中和抗体干预对小鼠TDI哮喘的保护作用选用SPF级健康雄性8-10周龄BALB/c小鼠48只,适应环境1周后,随机分为TDI组、AOO组和TSLP中和抗体干预组(TSLP中和组),TDI组小鼠于第1、8天耳背分别涂抹20μL0.3%TDI致敏,(溶剂为丙酮:橄榄油=2:3),第15天采用气管滴注法给予20μL 0.01%TDI进行激发(溶剂为丙酮:橄榄油=1:4)。TSLP中和组在激发前30min给予TSLP中和抗体腹腔注射(15mg/kg),AOO组小鼠,按照上述方法给予等量的溶剂。三组小鼠在同样的饲养条件下饲养并观察小鼠一般生长状况。于TDI激发结束后24小时处死小鼠,每组各取6只小鼠血清检测Ig E水平的变化,同时取肺组织匀浆测IL-4、IFN-γ、IL-13的变化水平,每组各取4只小鼠多聚甲醛全身灌流固定后HE染色观察三组小鼠气管和肺组织病理学改变,每组各取6只小鼠的部分肺组织Western blot检测TSLP蛋白的表达水平,其余部分肺组织用实时荧光定量逆转录RT-PCR法分别检测肺组织中ROR-γt、Foxp3、IL-17A基因m RNA。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   细菌的分解与合成代谢产物的意义！一、糖类的分解细菌分泌胞外酶，将菌体外的多糖分解成单糖（葡萄糖）后再吸收。各种细菌将多糖分解为单糖，进而转化为丙酮酸，这一过程是一致的。丙酮酸的利用，需氧菌和厌氧菌则不相同。需氧菌将丙酮酸经三羧酸循环彻底分解成CO2和水。厌氧菌则发酵丙酮酸，产生各种酸类（如甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、乳酸、琥珀酸等）、醛类（如乙醛）、醇类（如乙醇、乙酸甲基甲醇、异丙醇、丁醇等）、酮类（如丙酮）。不同细菌具有不同的酶，对糖类的分解能力和代谢产物也不同，借此可以鉴别细菌。二、蛋白质的分解蛋白质分子在细菌分泌的蛋白质水解酶的作用下，在肽键处断裂，生成多肽和二肽。多肽和二肽在肽酶的作用下水解，生成各种氨基酸。二肽和氨基酸可被细菌吸收，氨基酸在体内脱氨基酶的作用下，经脱氨基作用生成氨。不同种细菌在不同的条件下所进行的脱氨基作用的方式（氧化脱氨基、水解脱氨基、还原脱氨基）及代谢产物也不同。可借此鉴别细菌。如有些细菌能使色氨酸氧化脱氨基，生成吲哚、C02和H20.细菌还可以用脱羧酶使氨基酸脱羧，生成胺类（如组胺）和C02.三、细菌对其他物质的分解细菌除能分解糖和蛋白质外，对一些有机物和无机物也可分解利用。各种细菌产生的酶不同，其代谢的基质不同，代谢的产物也不一样，故可用于鉴别细菌医学|教育网搜集整理。1、对其他有机物的分解：如变形杆菌具有尿素酶，可以水解尿素医学|教育网搜集整理，产生氨。乙型副伤寒沙门菌和变形杆菌都具有脱硫氢基作用，使含硫氨基酸（胱氨酸）分解成氨和H2S.2、对其他无机物的分解：产气肠杆菌分解柠檬酸盐生成碳酸盐，并分解培养基中的铵盐生成氨。细菌还原硝酸盐为亚硝酸盐，氨和氮气的作用，称为硝酸盐还原作用。四、细菌合成代谢产物的意义1、热原质：大多数为革兰阴性菌合成的菌体脂多糖。注入人体或动物体内能引起发热反应，故称热原质。2、毒素和侵袭性酶：细菌产生毒素，包括内毒素和外毒素。内毒素为草兰阴性菌的脂多糖。外毒素是革兰阳性菌产生的蛋白质，毒性强且有高度的选择性。有些细菌还能产生具有侵袭性的酶医学|教育网搜集整理，如卵磷脂酶、透明质酸酶等。毒素和侵袭性酶在细菌致病性中甚为重要。3、色素：有水溶性色素（铜绿假单胞菌的色素）和脂溶性色素（金黄色葡萄球菌的色素）。不同细菌产生不同的色素，在鉴别细菌上有一定意义医学|教育网搜集整理。4、抗生素：是由某些微生物代谢过程中产生的、能抑制或杀死另一些微生物和癌细胞的微量生物活性物质。5、细菌素：某些细菌菌株产生的一类具有抗菌作用的蛋白质，细菌素作用范围狭窄，仅对与产生该种细菌素的细菌有近缘关系的细菌才能起作用，如大肠菌素、绿脓菌素、变形菌素和弧菌素等。6、维生素。中国微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到Z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得Z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                        转基因食品的检测技术分享！一、概述    转基因食品又称遗传修饰食品（genetically modified food），简称GMF或GM食品。转基因食品大体上分为如下三类。1、转基因植物食品  由转基因植物如转基因的玉米、大豆、水稻、马铃薯、番茄、香蕉、苹果、菠菜等生产加工而成。2、转基因动物食品  如转基因的鱼、鸡、牛、羊等。目的主要通过导入外源基因或对自身基因加以修饰来使受体动物降低结缔组织交联度、改善肉质．或使受体生物个体肥大，或生产营养价值高的蛋、肉、乳等。3、转基因微生物食品  如转基因微生物发酵而制得的葡萄酒、啤酒、酱油等，此类食品是利用转基因微生物（如转基因酵母和酶）的作用而生产出来的食品。后两类转基因食品目前在市场上还很少。二、ELISA技术与转基因食品检测 1、ELISA基本原理建立在抗体抗原免疫学反应的基础上。 ELISA分析法必须具备待检测的固定相抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体、酶作用的底物三种试剂，且满足两个前提条件：待检测的抗原或抗体能够结合到不溶性载体表面并保持活性；标记酶能与抗原或抗体结合并同样 保持各自生物活性。ELISA分析基本步骤如下：①将抗原（Ag）或抗体Ab结合到固相载体平板的孔里；②待测溶液的特殊抗原或抗体结合到敏化载体表面；③加入酶标抗体使之与抗原或抗体化合物相结合；④结合物通过标记酶催化底物的颜色改变而被检测；⑤通过最后溶液的颜色深浅对待侧抗原或抗体进行定量分析。2、ELISA分析法的灵敏度3、ELISA分析法的要点特异性高，获得结果快，仪器简单，易于操作，对人员要求不高。免却了对样品进行核酸提取的麻烦，同时可降低检测的成本，由于酶既有很高的催化效率，可极大的放大反应效果，从而使测定达到很高的灵敏度和稳定性。三、PCR技术与转基因食品的检测 1、PCR技术对转基因食品的定性检测（1）PCR基本原理  PCR技术由美国Centus公司Kary Mullis发明，20世纪90年代逐渐成熟应用。简单地说PcR就是利用核酸DNA聚合酶、引物和4种脱氧单核苷酸在试管内完成模板DNA的快速复制． （2）PCR技术检测转基因食品的技术关键和理论依据 （3）PCR检测转基因食品的基本步骤  ①待检材料DNA提取：通常利用CTAB法从食品材料中提取核酸；②PCR反应：设计合适引物。PCR扩增待检样品中的靶标DNA；③观测PCR产物：通过凝胶电泳分析将PCR产物展现；④确定结果：有时为了避免假阻性，还需要对PCR产物进行限制性酶切分析进行质量控制。2、PCR技术对转基因食品的定量检测目前基于GMO特异DNA片段的定性PCR筛选方法已广泛应用于GMO食品检测．但是随着各国有关GMO标签法的建立和不断完善，对食品中的GMO含量的下限已有所规定。为此，研究者在定性筛选PCR方法的基础上发展了不同的定量GMO的PCR检测方法。目前，国外较为成熟的方法主要有半定量PCR法、定量竞争PCR(Quantitative competitive PCR)和Real—time PCR(实时定量PCR)法等三种。（1）半定量PCR法 ①样品DNA的提取和定量。按常规方法提取DNA后，取部分样品DNA在0.8％琼脂糖凝胶中电泳，与已知古量的Marker比较，用计算机凝腔成像分析系统处理结果，以确定所提取的DNA量。例如，一般700mg的玉米粉可提取lμg DNA。②PCR反应。a.样品DNA的质量分析b.建立内部参照反应体系c.测定CaMV35S启动子的定量PCR反应（2）定量竞争PCR法   PCR反应实质是对特定模板DNA的指数扩增放大，而在相同的条件下，获得DNA的量与最初模板DNA的浓度成正相关，竞争定量PCR就是依据这种扩增DNA与模板DNA之间的浓度相关性设计的。基本原理是先构建含有修饰过的内部标准DNA片段(竞争DNA)，竞争DNA由质粒组成，带有一个改造PCR扩增子，改造部分可以是DNA插人序列、缺失序列或者点突变，竞争DNA与待测目标DNA在同一反应管中进行PCR共扩增，因竞争DNA片段和待测DNA的大小不同，经琼脂糖凝胶可将两者分开，通过比较两种条带的量可进行定量分析。四、生物芯片与转基因产品检测就目前转基因食品检测中常用的ELISA和PCR技术而言，最大的缺点是检测范围窄，效率低，无法高通量大规模地同时检测多种样品，尤其是对转基因背景一无所知的情况下。对各种候选待检基因序列或蛋白的逐一筛查几乎是不可能的。而目前正在研究的转基因产品所涉及的基因数量有上万种，今后都有可能进入商品化生产，显而易见对进出口产品的检测，需要有更有效的、快速、特别是高通量的检测方法，最近几年出现的生物芯片技术能较好地解决这一问题。生物芯片根据所载探针种类分为基因芯片和蛋白质芯片两大类：基因芯片以DNA为探针。依据核酸杂交的原理检测样品中的特定基因序列；蛋白质芯片以蛋白质为探针，依据抗原抗体反应的免疫学原理检测样品中的特定蛋白质。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                克罗诺杆菌属的检验标准及限量要求！克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)因产生黄色素，最初被称为“黄色阴沟肠杆菌”，1980年更名为“阪崎肠杆菌”，2008年扩大为克罗诺杆菌属。  其名字来源于希腊神话中的巨神克罗诺，传说他的每个孩子一出生就被他一口吃掉，代表该菌对婴幼儿的致病特性。  该菌耐高渗透压、抗干燥，对温度的抗性比大多数革兰氏阴性菌强，这是它不同于其他食源性致病菌的重要特征。  克罗诺杆菌属广泛存在于土壤、水等自然环境中，甚至在婴幼儿奶粉、奶酪、腌肉、蔬菜、大米、面包、茶叶、草药、调味料及豆腐等多种食品中都曾被检测到。  该菌可在干燥环境下存活2年，并且水化后立刻繁殖。夏季气温更接近于其最适生长温度39℃，因此该季节是婴幼儿感染克罗诺杆菌属的高峰期，家长要引起高度重视。一、克罗诺杆菌属检验标准及限量要求  克罗诺杆菌属的检验原理为根据其在特定培养基上特定的生长、形态和生理生化特征。  首先用无选择性的缓冲蛋白胨水进行前增菌，使受损的目标菌细胞恢复到正常而稳定的生理状态并进行一定程度的增殖；转接到选择性较强的改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素中，利用该菌耐高渗透压、44℃可生长的特性，在万古霉素的作用下，抑制革兰氏阳性菌和大部分的其他肠杆菌科细菌，使目标菌得以持续增殖；之后用阪崎肠杆菌显色平板进行选择性分离，以得到肉眼可见的疑似菌落；zuihou对疑似菌落利用黄色素产生、氧化酶、发酵等生化反应鉴定，判定是否检出克罗诺杆菌属。  我国现行检验标准为GB 4789.40-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验》。  我国现行食品安全国家标准对克罗诺杆菌属的限量控制是针对特殊医学用途婴儿配方食品和供0～6月龄婴儿食用的配方食品，分别是GB 25596-2010《食品安全国家标准特殊医学用途婴儿配方食品通则》和GB 10765-2010《食品安全国家标准婴儿配方食品》，限量规定均为n=3，c=0，m=0（/100g）。  GB 29921-2013中未对克罗诺杆菌属做限量规定，新修订的征求意见稿增加了对特殊膳食用食品与GB 25596和GB 10765相同的限量规定。  2008年国际食品法典委员会修订颁布的《婴幼儿配方粉卫生操作规范》（CAC/RCP 66），2010年欧盟委员会发布的关于食品微生物标准2073/2005的修订条例No.365/ 2010，美国食品药品管理局颁布的21CFR106.55，均对6个月以下婴儿奶粉中克罗诺杆菌属的限量规定为n= 30，c=0，m=0（/10g）。  克罗诺杆菌属污染事件及原因2002年国际食品微生物标准委员会将阪崎肠杆菌列为“严重危害特定人群生命、引起长期慢性实质性后遗症的一种致病菌”。  2004年世界粮农组织和世界卫生组织经过风险性评估将阪崎肠杆菌和沙门氏菌共同列为婴幼儿配方奶粉A类致病菌,即与婴儿疾病之间有确定的因果关系，并且可能在受污染的乳粉中检出。  克罗诺杆菌属主要感染免疫力低下的人群，特别是婴幼儿，病死率高达40%～80%。因为婴儿胃酸pH值比成人高，克罗诺杆菌属在婴儿肠道内可以存活，引起坏死性小肠结肠炎和菌血症等病症；同时，因为婴儿血脑屏障未发育完全，该菌又可进一步进入脑部引发新生儿脑膜炎。该菌也可感染成年人，主要表现为脑卒中、骨髓炎、腹泻、急性胆囊炎、结膜炎和吸入性肺炎等。但因认知的局限性，自1958年克罗诺杆菌属被发现至今，国际上关于该菌感染致病的病例较少（截至2008年约有120起），而国内的临床感染bingli更为罕见，因此缺乏疾病发生的流行病学资料。  分析近年来婴幼儿奶粉克罗诺杆菌属污染的主要原因，如2018年欧盟食品饲料类快速预警系统发布的荷兰企业生产的婴幼儿配方奶粉中克罗诺杆菌属污染事件，污染源可能为奶粉以外的各种未经杀菌的原材料，以及加工车间的地面、干燥塔外部、包装车间、员工工作服等高风险部位。  另一方面，婴幼儿配方奶粉在冲调时易被周围环境、不卫生器具和双手等污染，而冲调好的奶粉作为营养丰富的培养基，细菌会在室温环境下快速增殖。二、风险防控建议  食品生产经营企业在遵守良好生产规范的同时，应逐步增强从业人员的食品安全意识，提高实验室微生物检验水平；不断完善原辅料和环境监控体系，提高对婴儿配方奶粉生产全过程监控，尤其是对无高温杀菌步骤的干法加工工艺；提升结果分析和风险评价能力。监管部门加强对食品生产企业加工车间、儿童医院婴儿护理室的卫生状况及从业人员健康状况的监督检查力度，定期开展科普宣传和危害解读。　三、婴幼儿喂养  在冲配奶粉前，奶瓶、勺子应清洗干净并经煮沸或蒸汽消毒，冲调人员应清洁双手，取完奶粉后尽快密封好奶粉罐。  使用温度不低于70℃的新沸后的水冲调婴儿配方奶粉，以杀死奶粉中的克罗诺杆菌属或其他病原菌；冲调后不要放置过长时间，应在2小时内尽快喂哺，预先冲调的奶粉冲调后应快速冷却且存放在不超过5℃的冰箱内，并在冲调后24小时内饮用，喂哺前重新加热。  除了奶粉，其他任何可能被婴幼儿接触到的食物和物品，都应该保证洁净。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     食品生产中致病菌的控制方法！百欧博伟生物：在食品生产加工过程中，由于人员、环境、设备设施、原辅料和包装材料、其他与产品接触面、生产加工工艺等多方面因素的影响，容易在食品中引入致病菌。无论是食品安全管理体系，还是危害分析与关键控制点（HACCP）体系，根据HACCP原理，对微生物的控制和管理要从以上方面进行充分的危害分析，特别针对不同食品中易产生的致病菌进行识别，确定可接受水平，制定相应的控制措施并实施控制，从而预防因致病菌导致食品安全事故的情况发生，为企业减少损失和降低风险。一、食品生产中可能存在的致病菌食品中的致病菌是指可以引起食物中毒或以食品为传播媒介的致病性细菌。常见的致病菌主要有金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、肉毒梭状芽孢杆菌等。致病性细菌直接或间接污染食品和水源，人经口感染可导致肠道传染病的发生、食物中毒以及畜禽传染病的流行。食源性致病菌是导致食品安全问题的重要来源。致病菌会产生内毒素和外毒素。外毒素主要是由革兰氏阳性菌产生（肉毒毒素、金黄色葡萄球菌等），内毒素（热原）主要由革兰氏阴性菌产生（脂多糖）。致病微生物引起食物中毒发生的机理主要有感染型（内毒素）、毒素型（外毒素）和混合型三种。食品中致病菌限量执行：GB29921-2013 食品安全国家标准 食品中致病菌限量上表给出了食品中致病菌的控制要求和可接受水平。二、控制措施（一）基础控制措施实施食品安全管理体系中的前提方案（PRP），HACCP体系中的良好生产规范（GMP）。主要有：1、中国国内食品企业中华人民共和国食品安全法卫生部的PRP和GMP包括:总则和部分食品生产单独制定的专则（欢迎关注：CHINA-HACCP）食品生产通用卫生规范GB14881-2013-我国食品PRP和GMP的总则（1）罐头食品生产卫生规范 GB 8950（2）畜禽屠宰加工卫生规范 GB 12694（3）蒸馏酒及其配制酒生产卫生规范 GB 8951（4）啤酒生产卫生规范 GB 8952（5）饮料生产卫生规范 GB 12695（6）食品安全国家标准乳制品良好生产规范GB12693（7）膨化食品生产卫生规范 GB 17404（8）保健食品良好生产规范GB 17405（9）食品安全国家标准 酱油生产卫生规范GB 8953（10）食醋生产卫生规范 GB 8954（11）包装饮用水生产卫生规范 GB 19304（13）蜜饯生产卫生规范 GB 8956（14）糕点、面包卫生规范GB 8957（15）食用植物油及其制品生产卫生规范 GB8955（16）速冻食品生产和经营卫生规范GB 31646 等（17）食品接触材料及制品生产通用卫生规范 GB31603（18）水产制品生产卫生规范 GB20941 等等……. 2、中国出口食品企业除了遵守以上国内相关要求外，还应遵守出口食品生产企业安全卫生要求-通用准则专则共10类，包括肉类屠宰加工、罐头、水产品、饮料、速冻方便食品、速冻果蔬、脱水果蔬、肠衣、茶叶、泡菜生产企业注册卫生规范出口国的相关要求（如：欧盟微生物限量、日本食品卫生法、美国食品生产企业GMP法规等）。根据以上要求转化成企业的具体要求，加以实施。（二）对面上的致病微生物控制对面上的致病微生物控制一般是指食品安全管理体系中的操作性前提方案（OPRP）、HACCP体系中的卫生标准操作程序（SSOP）有些致病菌需要通过OPRP或SSOP控制措施的实施和CCP（关键控制点）的实施才能达到预期的控制效果，满足可接受水平的要求。通过实施OPRP或SSOP反映食品卫生质量的细菌污染指标的控制程度可分为二个方面进行监控，一是菌落总数（环境污染），二是大肠菌群（个人卫生）。菌落总数、大肠菌群检测可按照：GB4789的检测方法进行，可接受水平根据具体产品的执行标准确定。OPRP和SSOP主要控制方面：1、与食品或食品接触表面接触的水或生产用冰的安全2、食品接触表面的状况和清洁3、防止交叉污染4、洗手、手消毒和卫生间设施的维护5、防止外来物质对食品、食品包装材料和与食品6接触的表面污染6、正确标识、存放和使用有毒化合物7、员工健康状况的控制，避免对食品、食品包装材料和与食品接触的表面造成微生物污染8、害虫的灭除9、废弃物的处置和管理其他相关可操作性的要求（如储存、运输、车间温度控制……）（三）对点上的致病微生物控制控制致病菌危害常用的方法有：1、控制pH值pH 4.6是酸性食品和低酸性食品的分界限。肉毒杆菌孢子不能在pH4.6以下的酸性食品中发育及产生毒素，肉毒杆菌在pH值小于4.8时，不会产生毒素要使得低酸食品成为酸性食品，可以采用直接添加酸，或者通过发酵产酸的方式。这个过程称为酸化，酸化的目标通常为pH2、控制水分活度微生物对水分活度的最低要求如：霉菌0.75、酵母菌0.88、肉毒杆菌0.93、金黄色葡萄球菌0.85、沙门氏菌0.93……当水分活度水分活度0.85是致病菌生产并产毒的界限（根据金葡产生毒素的最低水分活度得来），水分活动在0.85以上的是高风险食品。（水分活度低于0.6为致病菌污染低风险食品、水分活度0.6-0.85为致病菌污染中等风险食品、水分活度高于0.85为致病菌污染高风险食品）控制水分活度的两种传统方法：干燥（总水分，自然干燥—暴晒、阴干；人工干燥—热空气、喷雾、真空、冷冻）或腌制（游离水，盐或糖）3、冷藏和冷冻某些食品（如：水分活度>0.93、pH>4.6等）置于微生物繁殖的危险温度（5℃-46℃）区间的时间尽量不要超过4小时，超过以后容易感染致病菌，并导致致病菌的大量繁殖。在加工过程中有些场所或设备的温度应控制在0-4℃（如禽类屠宰分割的预冷工序、肉制品的腌制工序、畜类屠宰分割过程中的预冷排酸、水果蔬菜等某些食品的保鲜等），冷冻一般控制在冷冻温度在-28℃以下，冷藏温度一般控制在-18℃以下冷藏温度对控制病原菌的生长确实起到了很好的作用，但李斯特菌和耶尔森氏菌在接近冻结点时仍可生长。4、热处理1)热力杀菌的原理：a)酵母菌的大部分营养细胞在50-58℃下10-15min，孢子细胞在60℃下10-15min，即会死亡，若加热到100℃，所有酵母在数分钟内死亡。b)大多数霉菌菌丝和孢子在60℃下经5-10min会死亡。c)细菌具有更强的耐热性，在70℃下30min后死亡。细菌孢子在100℃下耐受数小时也不死亡。d)食品中大多数酶，在70-80℃情况下就会失活。热力杀菌主要是利用高温使细菌菌体变性或凝固，酶失去活性，而使细菌死亡。高温变可导致细菌的膜可能损伤而使小分子物质以及降解的核糖体漏出。2)热力杀菌是最可靠而普遍应用的杀菌法，包括湿热杀菌和干热杀菌法：湿热杀菌主要有：煮沸法、流通蒸汽杀菌法、间歇杀菌法、巴氏消毒法、高压蒸汽杀菌法.干热杀菌主要有：干烤、烧灼和焚烧、红外线、微波按杀菌过程可分为：（1）间歇式杀菌、（2）连续式杀菌3)在热力杀菌过程中要确定相关的杀菌值：F值：即在恒定的加热标准温度条件下（121℃或100℃），杀灭一定数量的细菌营养体或芽胞所需要的时间（min)，也称为杀菌效率值、杀菌致死值或杀菌强度。D值：即在指定的温度条件下(如121.℃、100℃等）杀死90%原有微生物芽孢或营养体细菌数所需要的时 (min)Z值：表示使加热致死时间变化为10倍时所需的温度。从而确定杀菌公式。对于水分活度大于0.85的高风险食品，生物危害的控制目标应当在6D-12D，达到灭菌效果。内毒素有很强的耐热性，在121℃、30分钟的干热环境下无法破坏其活性，只能经过180-200℃、30-60分钟干热才能处理。对于加工环境，生物危害的控制目标应当在3D达到灭菌效果。5、辐照辐射加工，是指将电子加速器(0.2MeV~10MeV)产生的电子线(β射线)或放射性同位素(Cs-137或Co-60)产生的γ射线的能量转移给被辐照物质，电离辐射作用到被辐照的物质上，产生电离和激发，释放出轨道电子，形成自由基，通过控制辐射条件，而使被辐照物质的物理性能和化学组成发生变化并能使其成为人们所需要的一种新的物质，或使生物体(微生物等)受到不可恢复的损失和破坏，达到人们所需要的目标。这种新的加工技术称为辐射加工技术。比如，使高分子材料分别实现接枝、聚合、裂变或交联，抑制或刺激生物生长，有效地杀灭害虫、虫卵、致病菌等。可能使用到主要品种1）特殊食品:病人食用的无菌食品。2）脱水食品:洋葱粉、八角粉、虾粉、青葱、辣椒粉、蒜粉、虾仁等脱水产品。3）延长货架期的食品:月饼、袋装肉制品、果脯等产品。4）冻品:冻鱿鱼、冻虾仁、冻蟹肉、冻蛙腿等产品。5）保健品:减肥茶、洋参、花粉、灵芝制品、袋泡茶、口服美容保健食品、螺旋藻等。根据以上的控制方法、食品类别、食品的预期用途等确定食品相关的CCP（关键控制点）实施控制。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   关于微生物与环境保护的知识解析！中国微生物菌种查询网：随着工业高度发展、人口急剧增长，在人类生活的环境中，大量的生活废弃物 ( 粪便、垃圾和废水 ) ，工业生产形成的三废 ( 废气、废渣和废水 ) 及农业上使用化肥、农药的残留物等，特别是生活污水和工业废水，不经处理，大量排放入水体，给人类生存环境造成严重污染。环境污染对人畜健康、工业、农业、水产业等都有很大危害。所谓环境污染即是指生态系统的结构和机能受到外来有害物质的影响或破坏，超过了生态系统的自净能力，打破了正常的生态平衡，给人类造成严重危害。所以保护生态环境已成为人类最关心的大问题。环境保护除保护自然环境外，就是防治污染和其他公害。水源的污染危害zuida、污染范围最广、种类最多。包括生活污水、工厂有机废水、有毒、有害污水。为了保护环境，节约水源，生活污水和工业废水必须先经处理，除去其杂质与污染物，待水质达到一定标准后，才能排放入自然水体或直接供给生产和生活重复使用。污水的生物处理较有效、最常用的是微生物处理法。微生物不但处理污染物，还可用于环境监测。所以微生物在环境保护方面起重要作用。一、微生物与污水处理微生物处理污水的原理：利用各种生理生化性能的微生物类群间的相互配合而进行的一种物质循环的过程。BOD 5 ：即“五日生化需氧量”它是一种表示水中有机物含量的间接指标，一般指在 20 ℃ 下， 1L 污水中所含的有机物，在进行微生物氧化时，5 日内所消耗的分子氧的毫克数。COD ：使用强氧化剂使 1L 污水中的有机物质迅速进行化学氧化时所消耗氧的毫克数。污水处理的方法有物理法、化学法和生物法。各种方法都有其特点，可以相互配合、相互补充。目前应用最广是生物学方法，其优点是效率高、费用低、简单方便。污水处理按程度可分为一级处理、二级处理和三级处理，一级处理也称为预处理，二级处理称为常规处理，三级处理则称为高级处理。一级处理主要通过格栅等过滤器除去粗固体。二级处理主要去除可溶性的有机物，方法包括生物方法、化学方法和物理方法。三级处理主要是除氮、磷和其他无机物，还包括出水的氯化消毒，也有生物、物理、化学方法。依处理过程中氧的状况，生物处理可分为好氧处理系统与厌氧处理系统。（一）好氧生物处理微生物在有氧条件下，吸附环境中的有机物，并将有机物氧化分解成无机物，使污水得到净化，同时合成细胞物质。微生物在污水净化过程，以活性污泥和生物膜的主要成分等形式存在。1、活性污泥法又称曝气法。是利用含有好氧微生物的活性污泥，由通气条件下，使污水净化的生物学方法。此法自 1914 英国人 Ardern 和 Lockett 创建以来，至今已有 80 多年的历史。经过反复改造，发展至今，已成为处理有机废水最主要的方法。所谓活性污泥是指由菌胶团形成菌、原生动物、有机和无机胶体及悬浮物组成的絮状体。在污水处理过程中，它具有很强的吸附、氧化和分解有机物的能力。在静止状态时，又具有良好的沉降性能。活性污泥是一种特殊的、复杂的生态系统，在多种酶的作用下进行着复杂的生化反应。活性污泥中的微生物主要是细菌，占微生物总数的 90 ％ -95 ％。常见的细菌主要有生枝动胶杆菌、假单胞菌属、无色杆菌属、黄杆菌属、节杆菌属、亚硝化单胞菌、原生动物以钟虫属最为常见。活性污泥与生物膜中的微生物基本相似，均以菌胶团的形式存在。污水处理中的特殊微生物随污水性质不同需要筛选、培养特殊的微生物，组建各种优势苗群，以处理相应的污水。例如处理含氰 ( 腈 ) 废水，需要筛选产生氰解酶和丙烯睛水解酶的细菌，主要有诺卡氏菌属、腐皮镰孢霉、假单胞菌属、棒杆菌属等。筛选特殊的微生物，降解相应的难分解的有毒污染物，以降低 BoD5 去除率，提高污水处理质量。活性污泥法根据曝气方式不同，分多种方法，目前最常用的是完全混合瀑气法。污水进人曝气池后，活性污泥中主要细菌、动胶菌等大量繁殖，形成菌胶团絮体，构成活性污泥骨架，原生动物附着上面，丝状细菌和真菌交织在一起，形成十个个颗粒状的活跃的微生物群体。曝气池内不断充气、搅拌，形成泥水混合液，当废水与活性污泥接触时，废水中的有机物在很短时间 ( 约 lO-30min) 内被吸附到活性污泥上，可溶性物质直接透入细胞内。大分子有机物通过细胞内产生的胞外酶的作用将大分子有机物分解成为小分子物质后渗入细胞内。进入细胞内的营养物质在细胞内酶的作用下，经一系列生化反应，使有机物转化为 CO 2 、 H 2 0 等简单无机物。同时产生能量。微生物利用呼吸放出的能量和氧化过程中产生的中间产物合成细胞物质，使菌体大量繁殖。微生物不断进行生物氧化，环境中有机物不断减少，使污水得到净化。当营养缺乏时，微生物氧化细胞内贮藏物质，并产生能量，这种现象叫自身氧化或内源呼吸。曝气池中混合物以低 BOD 5 溢流人沉淀池。活性污泥通过静止、凝集、沉淀和分离，上清液是处理好的水、排放到系统外。沉淀的活性污泥一部分回流曝气池与未生化处理的废水混合，重复上述过程。回流污泥可增加曝气池内微生物含量，加速生化反应过程。剩余污泥排放出去或进行其他理后应用。2、生物膜法是以生物膜为净化主体的生物处理法。生物膜是附着在载体表面，以菌胶团为主体所形成的粘膜状物，由于膜中的微生物不断生长繁殖致使膜逐渐加厚。膜的形成有一定规律，。初生、生长及老化剥落过程，脱落后再形成新的膜，这是生物膜的正常更新，剥落的膜随水排出。膜中的微生物相与活性污泥中的基本原理相同，因膜有一定厚度，在膜的表面、底部和中间分布着不同类型的微生物。生物膜的净化原理是：生物膜的表面总是吸附着一层薄薄的污水，称为附着水层或结合水层；其外是能自由流动的污水，称为运动水层；当“附着水”中的有机物被生物膜中的微生物吸附、吸收、氧化分解时，附着水层中有机物质浓度随之降低，由于运动水层中有机物浓度高，便迅速地向附着水层转移，并不断地进人生物膜被微生物分解；微生物所需要的氧是从空气一运动水层一附着水层而进人生物原，微生物分解有机物产生的代谢产物及最终生成的无机物以及 CO2 等，则沿相反方向移动。根据介质与水接触方式不同，生物转盘法、塔式生物滤池法等。3、氧化塘也称稳定塘，是利用自然生态系统净化污水的一处大面积、敝开式的污水处理池塘。氧化塘是利用细菌和藻类的共生关系来分解有机污染物的一种废水处理法。细菌利用藻类光合作用产生的氧和空气溶解在水中的溶解氧氧化分解塘内的有机污染物；藻类利用细菌氧化分解产生的无机物和小分子有机物作为营养源繁殖自身。如此不断循环，使有机物逐渐减少，污水得以净化。过多的细菌和藻体易被微型动物捕食。此外，流入污水中沉淀下来的固体及衰亡的细胞沉入塘底，这些有机物被兼性厌氧菌分解产生有机酸、醇等简单有机物，其中一部分被上层好氧菌或兼性厌氧菌继续分解，另一部分波污泥中的产甲烷细菌分解成 CH 4 。只要上述各个环节保持良好的平衡，氧化塘这个生态系统就能相对稳定，污水得以不断净化。效果好的氧化塘，能使污水中 BOD 去除率达到 80 ％一 95 ％，磷减少 90 ％，氮去除率 80 ％以上。由于供氧量低，处理同量污水同暖气池、生物转盘相比，氧化塘需面积大、时间长，但氧化塘构筑简单，投资少，操作容易。此法适宜处理生活污水以及、制革、造纸、石油化工、乙烯、焦化和农药等部门的工业废水，还可养藻、养鱼、养鸭、鹅等。（二）厌氧生物处理厌氧生物处理是在缺氧条件下，利用厌氧性微生物 ( 包括兼性厌氧微生物 ) 分解污水中有机污染物的方法。因为发酵产物产生甲烷，又称甲烷发酵。此法既能消除环境污染，又能开发生物能源，所以倍受人们重视。污水厌氧发酵是一个极为复杂的生态系统，它涉及多种交替作用的菌群，各要求不同的基质和条件，形成复杂的生态体系，甲烷发酸包括 3 个阶段：1、液化阶段由厌氧或兼性厌氧的细菌将复杂有机物如纤维素、蛋白质、脂肪等分解为有机酸、醇等。。2、产氢产乙酸阶段由产氢产乙酸细菌群利用液化阶段产生的各种脂肪酸、醇等进一步转化为乙酸、 H 2 和 CO 2 。3、产甲烷阶段产甲烷菌利用乙酸、甲酸、甲醇、 CO 2 、 H 2 等、形成甲烷。产甲烷菌属于古细菌，严格厌氧，主要包括甲烷杆菌属、甲烷八叠球菌属和甲烷球菌属等。产甲烷菌是严格厌氧菌，故污水的厌氧处理必须在厌氧消化池中进行。发酵后的污水和污泥分别从池的上部和底部排出，所产生的沼气则由顶部排出，可作为能源加以利用。发酵池中也可产生如 H 2 S 、 CO 等一些有毒的气体，故不能冒然进入。此法主要用于处理农业和生活废弃物或污水厂的剩余污泥，也可用工业废水处理。二、微生物对污染物的降解与转化由于微生物代谢类型多样，所以自然界所有的有机物几乎都能被微生物降解与转化。随着工发展，许多人工合成的新的化合物，掺入到自然环境中，引起环境污染。微生物以其个体小、繁侠、适应性强、易变异等特点，可随环境变化，产生新的自发突变株，也可能通过形成诱导酶、生新的酶系，具备新的代谢功能以适应新的环境，从而降解和转化那些“陌生”的化合物。大事实证明微生物有着降解、转化物质的巨大潜力。（一）环境中的主要污染物所谓污染物，是指人类在生产生活中，排人大气、水体或土壤内的能引起环境污染，并对人环境有不利影响的物质的总称。这些物质主要有农药、污泥、烃类、合成聚合物、重金属、放射性核素等。总体可归为无毒和有毒污染物 2 大类，前者如纤维素、淀粉等有机物和酸、碱等无机物，后者如苯酚、多氯联苯等有机毒物和氰化物、各种重金属等无机毒物。污染物对人类的危害是极其复杂的，有些污染物在短期内通过空气、水、食物链等多种媒介侵入人体，造成急性危。也有些污染物通过小剂量持续不断地侵人人体，经过相当长时间，才显露出对人体的慢性危害或远期危害，甚至影响到子孙后代的健康。（二）微生物对农药等有毒污染物的降解农药是除草剂、杀虫剂、杀菌剂等化学制剂的总称。我国每年使用 50 多万吨农药，利用率只“ 10 ％。绝大部分残留在土壤中，有的被土壤吸附，有的经空气、江河传播扩散，引起大范围污染。目前的农药多是有机氯、有机磷、有机氮、有机硫农药，其中有机氯农药危害性最大。这些有毒化合物在自然界存留时间长、对人畜危害严重。实验证明，环境中农药的清除主要靠细菌、放线菌、真菌等微生物的作用，微生物降解农药的方式有 2 种，一种是以农药作为weiyi碳源和能源，或作为weiyi的氮源物质，此类农药能很快被微生物降解，如氟乐灵，这是一种新型除草剂，它可作为曲霉属的weiyi碳源，所以很易被分解；另一种是通过共代谢作用，共代谢是指一些很难降解的有机物，虽不能作为微生物weiyi碳源或能源被降解，但可通过微生物利用其他有机物作为碳源或能源的同时被降解的现象，如直肠梭菌降解 666 时需要有蛋白胨之类物质提供能量才能降解。微生物降解农药主要是通过脱卤作用、脱烃作用，对酰胺及脂的水解、氧化作用、还原作用及环裂解、缩合等方式把农药分子的一些化学基本结构改变而达到的。（三）重金属的转化环境污染中所说的重金属一般指汞、锅、铬、铅、砷、银、硒、锡等。微生物特别是细菌、真菌在重金属的生物转化中起重要作用。微生物可以改变重金属在环境中的存在状态，会使化学物毒性增强，引起严重环境问题，还可以浓缩重金属，并通过食物链积累。另一方面微生物直接和间接的作用也可以去除环境中的重金属，有助于改善环境。汞所造成的环境污染最早受到关注，汞的微生物转化及其环境意义具有代表性。汞的微生物转化包括三个方面无机汞的甲基化；有机汞还原成汞；甲基汞和其他有机汞化合物裂解并还原成汞。包括梭茵、脉胞菌、假单胞菌等和许多真菌在内的微生物具有甲基化汞的能力。能使无机汞和有机汞转化为单质汞的微生物也被称为抗汞微生物，包括铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌等。微生物的抗汞功能是由质粒控制的，编码有机汞裂解酶和无机汞还原酶的是 mer 操纵子。微生物对其他重金属也具有转化能力，硒、铅、锡、镐、砷、铝、镁、把、金、钝也可以甲基化转化。微生物虽然不能降解重金属，但通过对重金属的转化作用，控制其转化途径，可以达到减轻毒性的作用。（四）固体废物的生物处理固体废弃物处理的方法有物理法、化学法和生物法。其中生物法主要是利用微生物分解有机物，制作有机肥料和沼气。且在发酵过程 70 一 80 ℃ 高温能杀死病原菌、虫卵及杂草种子，达到无害化目的。根据微生物与氧的关系，可分为好氧性堆肥法和厌氧发酵法两大类。1、好氧堆肥法好氧堆肥法是指有机弃废物，在好氧微生物作用下，达到稳定化，转变为有利于土壤性状改良并利于作物吸收和利用的有机物的方法。所谓稳定化是指病原性生物的失活，有机物的分解及腐殖质的生成。从堆肥到腐殖质的整个过程中有机污染物发生复杂的分解与合成的变化，可分为 3 个阶段。（1）发热阶段 堆肥初期，中温性好氧细菌和真菌，充分利用堆肥中易分解、可溶性物质 ( 淀粉、糖类 ) 而旺盛增殖，释放出热量，使堆肥温度逐渐上升。（2）高温阶段 堆肥温度上升到 50 ℃ 以上进入高温阶段。中温性微生物逐步被高温性微生物取代，堆肥中除剩余的或新形成的可溶性有机物继续被分解转化外，复杂有机物也开始分解，腐殖质开始形成。在 50 ℃ 左右，堆肥中的微生物主要是嗜热性真菌和放线菌，温度达到 60 ℃ 时，真菌几乎全部停止活动，只有嗜热放线菌和细菌活动，当温度升到 70 ℃ 时，微生物大部分死亡，或进人休眠状态。高温可使有机物快速腐熟，并可杀灭病原性生物。（3）降温腐熟保温阶段 当高温持续一段时间后，易分解或较易分解的有机物已大部分被利用，剩下难分解物质 ( 如木质素 ) 和新形式的腐殖质。此时微生物活动减弱，产生热量少，温度下降，中温性微生物逐渐形成优势种群。残留物质进一步被分解，腐殖质积累不断增加，堆肥进入腐熟阶段。为避免堆肥有机物矿化损失肥效，应把堆肥压紧，使造成厌氧状态。2、厌氧发酵法厌氧发酵法包括厌氧堆肥法和沼气发酵。厌氧堆肥法是指在不通气条件下，微生物通过厌氧发酵将有机弃废物转化为有机肥料，使固体废物无害化的过程。堆制方式与好氧堆肥法基本相同。但此法不设通气系统、有机废弃物在堆内进行厌氧发酵，温度低，腐熟及无害化所需时间长。利用固体废弃物进行沼气发酵与污水的厌氧处理情况基本相似。三、微生物与环境监测环境监测是测定代表环境质量的各种指标数据的过程。它包括环境分析、物理测定和生物监测。所谓生物监测就是利用生物对环境污染所发生的各种信息作为判断环境污染状况的一种手段。生物长期生活在自然界中，不仅可反映多种因子污染的综合效应，而且还能反映环境污染的历史状况。故生物监测可以弥补物理、化学分析测试的不足，特别是微生物具有得天独厚的特点，与环境关系极为密切，因此微生物学方法在生物监测中占有特殊的地位。（一）粪便污染指示菌粪便污染指示菌的存在，是水体受过粪便污染的指标。根据对正常人粪便中微生物的分析测定结果，认为采用大肠菌群及粪链球菌作为指标较为合适，其中以前者较为广用。大肠菌群是指一大群与大肠杆菌相似的好氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，它们能在 48h 内发酵乳糖产酸产气，包括埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克列氏菌属等。测定大肠菌群的常用方法有发酵法和滤膜法两种。大肠菌群数量的表示方法有两种，其一是“大肠菌群数”，亦称“大肠菌群指数”，即 1L 水中含用的大肠菌群数量。其二是“大肠茵群值”是指水样中可检出 1 个大肠菌群数的最小水样体积（ mL 数 ) 。该值越大，表示水中大肠菌群数越小。我国生活饮用水卫生标准规定，1L 水中总大肠菌群数不得超过 3 个，即大肠菌群值不得小于 333mL 。（二）水体污染指示生物带一般的生物多适宜于清洁的水体，但是有的生物则适宜于某种程度污染的水体。在各种不同污染程度的水体中，各有其一定的生物种类和组成。根据水域中的动、植物和微生物区系，可推该水域中的污染状况，污水生物带便是通过以上检测而确定的。通常把水体划分为多污带、中污和寡污带。中污带又分为甲型中污带和乙型中污带。（三）致突变物与致癌物的微生物检测人们在生活过程中不断地与环境中的各种化学物质相接触，这些物质对人类影响与危害怎样，特别是致癌效应如何，是人们普遍关心的问题。据了解， 80 ％一 90 ％的人类癌症是由环境因素引起的，其中主要是化学因素。目前世界上常见的化学物质有 7 万多种，其中致癌性研究较充分的仅占 1 ／ 10 ，而每年又至少新增千余种新的化合物。采用传统的动物实验法和流行病学调查法己远远不能满足需要，至今世界上已发展了上百个快速测试法，其中以致突变试验应用最广，测试结果不仅可反映化学物质的致突变性，而且可住推测它的潜在致癌性。应用于致突变的微生物有鼠伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、枯草杆菌、脉胞菌、酿酒酵母、构巢曲霉等。目前以沙门氏菌致突变试验应用最广。Ames 试验，全称沙门氏菌／哺乳动物微粒体试验，亦称沙门氏菌／ Ames 试验，是美国 Ames 教授于 1975 年研究与发表的致突变试验法。其原理是利用鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型菌株发生回复突变的性能，来检测物质的致突变性。在不含组氨骏的培养基上，它们不能生长。但当受到某致突变物作用时，因菌体 DNA 受到损伤，特定部位基因突变，由缺陷型回复到野生型，在不含组氨酸的培养基上也能生长，其关系如下：Ames 试验常用纸片法和平板掺入法。Ames 试验，准确性较高、周期短、方法简便，可反应多种污染物联合作用的总效应。通过对亚硝胺类、多环芳烃、芳香胺、硝基吱喃类、联苯胺、黄曲霉毒素等 175 种已知致癌物进行 Ames 试验，结果阳性吻合率为 90 ％；用 108 种非致癌物进行测定，其阴性吻合率为 87 ％。有人将 180 种物质进行 Ames 试验，其中已知致癌物有 26 种，经 Ames 试验测得 25 种为阳性，其吻合率达 95 ％。人们称此法是一种良好的潜在致突变物与致癌物的初筛报警手段。

                     HLEC细胞的知识概述与应用！一、背景HLEC细胞是衬覆于淋巴管内表面的一种单层扁平上皮，是构成淋巴管壁的主要结构，参与维持体液平衡，调节淋巴细胞再循环和机体的免疫反应和组织液及蛋白质的运输，在疾病过程中也起着重要作用。近年研究表明，人淋巴管内皮细胞还在伤口愈合、淋巴管水肿和炎症扩散等病理过程中起重要作用，而且与肿瘤转移密切相关。内皮细胞系指血管、淋巴管的内膜上皮将内腔面覆盖的细胞。多数是单层扁平上皮属中胎叶性的上皮。血液循环和组织中大单核的游走的吞噬细胞有人认为是来自增生的血管内皮。人淋巴管内皮细胞分离自淋巴管组织；淋巴管是淋巴液流经的管道。最小的淋巴管称毛细淋巴管，起始于盲端。人体除中枢神经、表皮、眼球的晶状体、角膜和内耳以外，全身都有分布。淋巴毛细管逐级汇合形成小、中、大淋巴管，zuihou形成两条总淋巴管：右淋巴导管和胸导管。前者收集右半胸、右侧上肢和头颈右侧半的淋巴入右侧静脉角，后者收集下肢、腹部、左半胸、左侧上肢和头颈左侧半的淋巴入左侧静脉角。淋巴管中途还通过淋巴结。淋巴管壁薄，压力低。毛细淋巴管的壁为单层扁平内皮细胞，通透性大。大淋巴管壁有平滑肌，受交感神经支配，能作主动收缩。淋巴管内有瓣膜，能防止淋巴倒流。局部淋巴管因病变而阻塞时，组织液积聚，可出现局部水肿。二、应用用于Fucoidan下调HLEC细胞中VEGFR3和PROX1的表达抑制淋巴管新生及机制研究：在淋巴管新生的过程中,淋巴管特异性标志物同源异形盒蛋白(PROX1)与血管内皮细胞生长因子受体3(VEGFR3)为主要调节因子。同源转录因子PROX1调控胚胎发育过程中淋巴管系统的发育和分化,维持淋巴管系统形成。激活VEGFR3及其配体血管内皮生长因子C(VEGF-C),诱导淋巴管内皮细胞(LECs)的增殖和迁移,并调节淋巴管新生。NF-кB/PI3K/Akt信号通路主要促进细胞粘附,增殖,转移和细胞外基质降解,通路上的靶蛋白的激活,对肿瘤的发生和发展具有促进的作用。利用实验室前期工作纯化后的fucoidan,以人淋巴内皮细胞HLEC细胞系为研究对象,采用细胞生物学、分子生物学及动物肿瘤模型探究fucoidan对肿瘤淋巴管新生的抑制作用,并且深入研究fucoidan抗淋巴管新生的作用机制和相关信号通路。方法：1、mtt法检测fucoidan对hlec细胞生长活力的影响,fucoidan对hlec细胞周期的作用是通过流式细胞术检测,westernblot检测细胞周期相关蛋白cdk4和cyclind1的表达水平。2、采用transwell小室法检测fucoidan对hlec迁移能力,并且利用细胞划痕实验检测fucoidan对不同时间点hlec细胞迁移过程的影响。3、体外实验检测fucoidan对hlec成管能力的影响。4、利用细胞骨架检测fucoidan对hlec细胞骨架结构的影响。5、细胞免疫荧光技术及rt-pcr方法检测fucoidan对hlec细胞中vegfr3蛋白及mrna的表达影响,并采用westernblot检测vegfr3及prox1的表达水平及nf-кb/pi3k/akt信号通路的影响。6、利用transwell小室共培养方法检测fucoidan对mhcc97h与hlec共培养下,hlec细胞淋巴管状结构形成能力的影响。7、利用淋巴道高转移hca-f细胞株建立小鼠肿瘤模型,通过对小鼠肿瘤组织的双标免疫荧光法检测fucoidan对淋巴管密度(lvd)的影响,并检测小鼠瘤重。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  微生物检测实验室的设施与设备！微生物检测实验室的设施与设备是开展微生物检测的物质基础和保证。因此开展微生物检测实验，离不开实验室设施与设备。但光有实验室设施与设备，而没有对实验室设施与设备的性能进行检测的验证，同样起不到保证作用。 一、微生物检测实验室的设施与设备 1、保证检测的无菌环境设施与器械︰如洁净室(无菌室)、无菌隔离系统、净化工作台等；2、保证检测用实验用品与用具的无菌(灭菌)设施或设备﹔如高压蒸汽灭菌器、电热恒温干燥箱等；3、保证检测细菌内毒素反应的器械用具∶如各种细菌内毒素反应测定仪；4、保证检测中微生物能恒温生长与菌种保存的恒温设备︰如恒温培养箱、冰箱；5、各种实验操作所用仪器∶全封闭薄膜过滤装置、电动匀浆仪、电热恒温水浴箱、离心机、天平、显微镜等；6、实验操作所用的玻璃器具∶各种刻度吸管、移液管、容量瓶、试管、三角烧瓶、双碟培养皿等常用玻璃器具；7、测量样品中微生物菌落数或其他有关测量仪∶如空气浮游菌采样器、空气悬浮粒子计数器等。 二、洁净室(无菌室) 洁净室(无菌室)是微生物检测的重要场所与最基本的设施。它是微生物检测质量保证的重要物质基础。因此它的设计要按国家标准一2013《洁净厂房设计规》、国家药品监督管理局颁发的《药品检验所实验室质量管理规范(试行)》中第十八条规定执行。微生物实验室洁净室的施工、安装、验收应按国家标准GB 50591-2010《洁净室的施工及验收规范》执行。对于微生物检测工作者和使用管理者来讲，更大量的工作是进行正常管理到日常的使用。洁净室(无菌室)的标准要符合GMP洁净度标准要求。具体级别标准见下表。1、我国GMP实施指南提出的洁净室（无菌室）级别2、洁净室(无菌室)的使用管理要求⑴洁净室(无菌室)要符合规范要求无菌室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。面积一般不超过10m2，不小于5m2；高度不超过2.4m。由1～2个缓冲间、操作间组成(操作间和缓冲间的门不应直对)，操作间和缓冲间之间应具备灭菌功能的样品传递箱。在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物;无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。操作间内不应安装下水道。无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18～26℃，相对湿度45%～65%。缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室(区)与室外大气的静压差大于10Pa。无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300lx。缓冲间和操作间所设置的紫外线杀菌灯(2～2.5W/m3)应定期检查辐射强度，要求在操作面上达40uw/cm2。不符合要求的紫外杀菌灯应及时更换。  ⑵建立使用登记制度微生物测检验室要建立使用登记制度。在登记册中可设置以下项目内容:如使用日期、时间、使用人、设备运行状况、温度、湿度、洁净度状态(沉降菌数、浮游菌数、尘埃粒子数)、报修原因、报修结果、清洁工作(台面、地面、墙面、天花板、传递窗、门把手)、消毒液名称等。  ⑶建立使用标准操作规范(SOP)并严格管理SOP内容至少要有以下几点：①规定净化系统的运转时间要求:每次实验前应开启净化系统使运转至少1h以上，同时开启净化台和紫外灯。②物品进入洁净室(无菌室)基本要求:凡进人洁净室(无菌室)的物品，必须先在diyi缓冲间内，对外部表面用消毒剂消毒灭菌，再经物流缓冲间、传递窗1h以上，及无菌空气吹干后送入无菌室。注意带纤维、易发尘物品不得带进净化实验室。无菌室内固定物品不得任意搬出。③人员进入洁净室(无菌室)要求:实验人员进入洁净室(无菌室)不得化妆、带手表、戒指等首饰;不得吃东西、嚼口香糖。应清洁手后进入diyi缓冲间更衣，同时换上消毒隔离拖鞋，脱去外衣，用消毒液消毒双手后戴上无菌手套，换上无菌连衣帽(不得让头发、衣等暴露在外面)，戴上无菌口罩。然后，换上或再戴上第二副无菌手套，在进入第二缓冲间时换第二双消毒隔离拖鞋。再经风淋室30s风淋后进入无菌室。④温湿度观察要求:观察温度计、湿度计上显示的温湿度是否在规定的范围内，并作为实验原始数据己录在案。如发现问题应及时寻找原因，及时报修和及时报告实验室主管，并将报修原因和结果记录归档。⑤沉降菌落计数与浮游菌测定要求:在每次实验同时，对操作室和层流台做微生物沉降菌落计数，将结果记录在使用登记本上，并作为实验环境原始数据记录在实验报告上。每周1次，或在无菌检查等必要时，在每次实验同时对操作室和净化台进行浮游菌测定，将结果记录在使用登记本上，并作为实验环境原始数据记录在实验报告上。⑥消毒要求:无菌室每周和每次操作前用0.1%新洁尔灭或2%甲酚液或其他适宜消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。方法∶用无菌纱布浸渍消毒溶液清洁超净台的整个内表面、顶面以及无菌室、人流、物流、缓冲间的地板、传递窗、门把手。消毒程序∶应从内向外，从高洁净区到低洁净区，逐步向外退出洁净区域。然后开启无菌空气过滤器及紫外灯杀菌1～2h，以杀灭存留微生物。在每次操作完毕，同样用上述消毒溶液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌30min。常用消毒剂的品种有:5～20倍稀释的碘伏水溶液、0.1%新洁尔灭溶液、1：50的84消毒液、75%乙醇溶液、3%碘酒溶液、5%石炭酸(来苏儿）消毒溶液、2%戊二醛水溶液、尼泊金乙醇消毒液等。所用的消毒剂品种与使用要进行有效性验证方可使用，并定期更换消毒剂的品种。尼泊金乙醇消毒液处方:对羟基苯甲酸甲酯21.5g ,对羟基苯甲酸丙酯8.6g，75%乙醇10.0ml.⑦其他要求:如遇停电，应立即停止实验，离开无菌室。关闭所有电闸。重新进入无菌室前至少开启机房运转1h以上。  ⑷洁净度检查的要求与方法无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数，以此判断无菌室是否达到规定的洁净度，常有沉降菌和浮游菌测定方法。①沉降菌检测方法及标准:以无菌方式将3个营养琼脂平板带入无菌操作室，在操作区台面左、中、右各放1个；打开平板盖，在空气中暴露30min后将平板盖好，置32.5℃士2.5℃培养48h，取出检查，3个平板上生长的菌落数平均小于1个。②浮游菌检测方法及标准:用专门的采样器，宜采用撞击法机制的采样器。一般采用狭缝式或离心式采样器，并配有流量计和定时器，严格按仪器说明书的要求操作并定时校检，采样器和培养皿进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，使用的培养基为营养琼脂培养基或药典认可的其他培养基。使用时，先开动真空泵抽气，时间不少于5min，调节流量、转盘、转速，关闭真空泵，放入培养皿，盖上采样器盖子后调节缝隙高度。置采样口采样点后，依次开启采样器、真空泵，转动定时器，根据采样量设定采样时间。全部采样结束后，将培养皿置32.5℃±2.5℃培养48h，取出检查，浮游菌落数平均不得超过5个/m3.每批培养基应选定3只培养皿做对照培养。无菌操作台面或超净工作台还应定期检测其悬浮粒子，应达到100级(—般用尘埃粒子计数仪)检测，并根据无菌状况必要时置换过滤器。  ⑸定期进行洁净度再验证定期(每季度、半年、1年)或当洁净室设施发生重大改变时，要按国家标准GB/ T16292—16294-2010《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》进行洁净度再验证，以确保洁净度符合规定，保存验证原始记录，定期归档保存，并将验证结果记录在无菌室使用登记册上，作为实验环境原始依据及趋势分析资料。并定期对洁净室的环境检测数据进行趋势分析和评估，根据评估结果，了解洁净室设施环境质量的稳定状况及变化榜势，决定是否有必要修订相应的警戒和纠偏限度。  ⑹定期更换新的紫外灯管、更换净化系统的初效、中效、高效头定期(至少每年1次)更换新的紫外灯管，以确保确保紫外灯管灭菌持续有效，并同时在使用登记本上做好更换纪录，定期归档保存。至少2年1次，或按洁净度验证实际情况，定期更换初效、中效、高效头，以确保净化系统的功能持续有效，并同时在使用登记本上做好更换记录，定期归档保存。  ⑺使用过程中应尽可能减少人员的走动或活动平时实验室内应尽可能减少人员的走动或活动，同向洁净室的门要关闭或安装自动闭门器使其保持关闭状态。  ⑻洁净度不符合规定时立即停止使用发现洁净度不符合规定时，应立即停止使用，寻找原因，彻底清洁，必须经洁净度再验证符合规定后才再使用，并同时将情况记录在无菌室使用登记册上，定期归档保存。  ⑼对进入的外来人员或维修人员进行指导和监督非微生物室检验人员不得进入洁净室(无菌室)，对必须进入的外来人员或维修人员要进行指导和监督。  ⑽洁净室(无菌室)的日常管理建立安全卫生值日制度，一旦发现通风系统、墙壁、天花板、地面、门窗及公用介质系统等设施有损坏现象，要及时报告并采取相应的修复措施，并保存记录及时归档。从洁净室(无菌室)环境中检测到的微生物应能鉴别至属或种，保留鉴别实验原始记录及菌种，作为无菌生产、无菌检查洁净室环境质量、消毒剂有效性评估及污染源调查的依据，并且也是为无菌检查阳性结果的调查提供diyi手资料。 三、局部100级控制室微生物检测实验室离不开对标准菌种以及所检测的菌种进行各种处理，如转接种、制备、鉴定、保藏和进行方法学验证;或对培养基灵敏度检查及阳性对照用菌株的接种以及抗生索效价测定用菌种的制备等;或必要时对样品中检出的或从洁净环境中分离到的微生物进行分类鉴别，此外有些实验还要自制生物指剂。这些活动就直接要接触处理微生物菌种，如果菌种控制或操作不当，会导致实验室环境污染或菌种间交叉污染。因此，菌种处理和微生物鉴别室必须与其他的微生物检查用洁净室严格分开。局部100级控制室通常应是由1个半无菌操作间和1个缓冲间组成的无菌室设施。室内安装灭菌紫外灯。按实验微生物性质的需要保持对该室的相对正压或相对负压。半无菌操作室的洁净度要求为10000级，净化层流台作为操作时的局部要求为100级洁净度，必要时可改用生物安全柜内进行，有关微生物暴露性棵作活动尽可能在生物安全柜内进行。菌种处理和微生物鉴别室的环境检测及使用管理的要求与洁净室的基本要求相同。每次试捡结束后要对无菌室、层流台或生物安全柜及整个实验室环境进行消毒，人员离开后，打开紫外灯消毒。所有与菌种相关的试验废弃物均应经过灭菌处理(在121℃下处理30min以上)后方可丢弃。使用管理中应注意制定与菌种处理相关的标准操作规程。此外，还包括生物安全柜的使用标准操作规程、带菌废弃物的处理标准操作规程以及环境消毒等的标准操作规程。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 超净工作台的工作原理与注意事项！超净工作台是一种提供局部无尘无菌工作环境的单向流型空气净化设备。广泛适用于医药卫生、生物制药、食品、医学科学实验、光学、电子、无菌室实验、无菌微生物检验、植物组培接种等需要局部洁净无菌工作环境的科研和生产部门。也可连接成装配生产线具有低噪声、可移动性等优点。它是一种提供局部高洁净度工作环境通用性较强的空气净化设备,它的使用对改善工艺条件,提高产品质量和增大成品率均有良好效果。注意：超净工作台（cleanbench）与生物安全柜（Biosafety Cabinet）不同。超净工作台只能保护在工作台内操作的试剂等不受污染，并不保护工作人员，而生物安全柜是负压系统，能有效保护工作人员。其工作原理为：通过风机将空气吸入预过滤器，经由静压箱进入高效过滤器过滤，将过滤后的空气以垂直或水平气流的状态送出，使操作区域达到百级洁净度，保证生产对环境洁净度的要求。超净工作台根据气流的方向分为垂直流超净工作台和水平流超净工作台，根据操作结构分为单边操作及双边操作两种形式，按其用途又可分为普通超净工作台和生物（医药）超净工作台。一、工作原理超净工作台原理是在在特定的空间内，室内空气经预过滤器初滤，由小型离心风机压入静压箱，再经空气高效过滤器二级过滤，从空气高效过滤器出风面吹出的洁净气流具有一定的和均匀的断面风速，可以排除工作区原来的空气，将尘埃颗粒和生物颗粒带走，以形成无菌的高洁净的工作环境。二、产品分类从气流流向分为：垂直流超净工作台和水平流超净工作台；超净工作台从操作人员数上分：分为单人工作台和双人工作台；超净工作台从结构上分：分为常规型和新型推拉以及自循环型（仅限垂直流）。超净工作台根据气流的方向分为垂直流超净工作台(vertical flow clean bench)和水平流超净工作台(horizontalflowclean bench)，垂直流工作台由于风机在顶部所以噪音较大但是风垂直吹多用在医药工程这样保证人的身体健康；水平流工作台噪音比较小风向往外所以多用在电子行业，对身体健康影响不大。根据操作结构分为单边操作及双边操作两种形式，按其用途又可分为普通超净工作台和生物(医药)超净工作台。三、注意事项超净台电源多采用三相四线，其中有一零线，连通机器外壳，应接牢在地线上，另外三线都是相线，工作电压是380V。三线接入电路中有一定的顺序，如线头接错了，风机会反转，这时声音正常或稍不正常，超净台正面无风（可用酒精灯火焰观察动静，不宜久试），应及时切断电源，只将其中任何两相的线头交换一下位置再接上，就可解决。三相线如只接入两相，或三相中有一相接触不良，则机器声音很不正常，应立即切断电源仔细检修，否则会烧毁电机。这些常识应在开始使用超净台时就向工作人员讲解清楚，免除不应造成事故与损失。超净台进风口在背面或正面的下方，金属网罩内有一普通泡沫塑料片或无纺布，用以阻拦大颗粒尘埃，应常检查、拆洗，如发泡沫塑料老化，及时更换。除进风口以外，如有漏气孔隙，应当堵严，如贴胶布，塞棉花，贴胶水纸等。工作台正面的金属网罩内是超级滤清器，超级滤清器也可更换，如使用年久，尘粒堵塞，风速减小，不能保证无菌操作时，则可换上新的。超净台使用寿命的长短与空气的洁净度有。在温带地区超净台可在一般实验室使用，然而在热带或亚热带地区，由大气中含有量的花粉，或多粉尘的地区，超净台则宜放在较好的有双道门的室内使用。任何情下不应将超净台的进风罩对着开敞的门或窗，以免影响滤清器的使用寿命。无菌室应定期用70%酒精或0.5%苯酚喷雾降尘和消毒，用2%新洁尔灭抹拭台面和用具（70%酒精也可），用福尔马林（40%甲醛）加少量高锰酸钾定期密闭熏蒸，配合紫外线灭菌灯（每次开启15分钟以上）等等消毒灭菌手段，以使无菌室经常保持度的无菌状。接种箱内部也应装有紫外线灯，使用前开灯15分钟以上照射灭菌，但凡是照射不到之处仍是有菌的。在紫外线灯开启时间较长时，可激发空气中的氧分子缔合成臭氧分子，这种气分有很强的杀菌作用，可以对紫外线没有直接照到的角落产生灭菌效果。由于臭氧有碍健康，在进入操作之前应先掉紫外线灯，后十多分钟即可入内。在超净工作台上亦可吊装紫外线灯，但应装在照明灯罩之外，并错开照明灯的排列，这样在工作时不妨碍照明。若将紫外线灯装入照明灯罩（玻璃板）里面，这是毫无用处的，为紫外线不能穿透玻璃，它的灯管是石英玻璃，而不是硅酸盐玻璃的。接种室内力求简洁，凡与本室工作无直接关系的物品一律不能放入，以保持无菌状。接种室内的空气与外界空气应绝对隔绝，预留的通气孔道应尽量密闭。通气孔道可设上下气窗，气窗面积宜稍大，需覆上4层纱布作简单滤尘。在一天工作之后，可开窗充分换气，然后再予以密闭。总之，既清洁无尘无菌，又空气新鲜，适宜工作。覆在通气窗上的纱布应经常换洗。但是上述种种措施只是理想的设计方案，往往不易全面做到，其实只严格无菌操作手续，在门窗敞开的室内，有一超净台的保护，接种的污染率仍可控在生产上可以容忍的水准。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

              伊红美蓝培养基(EMB)的使用方法与应用！一、背景伊红美蓝培养基(EMB)用于分离革兰氏阴性肠道菌特别是大肠菌群和粪大肠菌群(GB/T4789.38-2008，GB15979-2002，SN0169-92，化妆品卫生规范2007版和GB5750.12-2006)。二、原理当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。三、使用方法1、制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。2、用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1：10稀释。3、取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。4、将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18～24小时。培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。5、将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。四、应用用于鸡大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及初步应用研究：从某大型养鸡场采集粪便样品，分离、纯化、鉴定多株大肠杆菌，利用分离纯化的大肠杆菌为宿主菌，从粪便中分离对应噬菌体，并对其中一株噬菌体进行生物学特性的测定。用筛选到噬菌体的所有大肠杆菌菌株，通过饮水、腹腔注射等不同途径对鸡进行攻毒，建立和优化鸡大肠杆菌病动物模型。利用相应噬菌体通过口服、腹腔注射等不同方式对鸡大肠杆菌病进行治疗性试验，验证治疗效果，为鸡大肠杆菌噬菌体的临床应用提供依据。大肠杆菌的分离鉴定。从某大型养鸡场采集粪便样品，放入生理盐水中搅拌，上清经平板划线法依次在麦康凯琼脂培养基、伊红美蓝培养基上进行分区划线，并将得到的单个菌落在伊红美蓝培养基上进行纯化。然后，将纯化后的大肠杆菌经革兰氏染色、微量生化反应进一步鉴定。共从粪便中分离纯化20株大肠杆菌，所有菌株在麦康凯琼脂培养基呈红色或粉红色，在伊红美蓝培养基上呈暗紫色且带有绿色金属光泽；经革兰氏染色，光学显微镜下拍照观察，菌体呈红色、短杆状；采用细菌微量生化反应管对各菌株进行生化鉴定，显示各菌株为大肠杆菌。噬菌体的分离鉴定。以分离的20株大肠杆菌为宿主菌，采用双层琼脂平板法从粪便中分离噬菌体，结合液体增殖法将噬菌体进行纯化；采用点滴法对所分离噬菌体进行宿主交叉感染试验；将富集的Bp5、Bp6噬菌体用2%磷钨酸进行负染，利用透射电镜观察噬菌体的形态。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  实验室耗材的管理要求与使用方法！一、明确管理职责实验室应明确实验室的安全负责人、检验耗材的管理部门。管理部门应制定相应的采购、保管、使用的程序和相应的考核制度。耗材使用部门应明确本部门的安全责任人和耗材管理人员。 二、检验耗材的分类检验耗材包括试剂类耗材和非试剂类耗材。试剂类耗材包括：化学试剂、基准试剂、标准物质、实验室用水、微生物培养基、试剂盒、相关试剂配制的溶液或固体混合物等。非试剂类耗材包括：玻璃器皿、实验用气体、仪器专用耗材、滤纸、橡胶制品等。检验耗材中具有爆炸、易燃、毒害、感染、腐蚀、放射性等危险特性，在运输、储存、使用和处置中，容易造成人身伤亡、财产损坏或环境污染而需要特别防护的物品和易制du化学品成为“危险品”。危险品目录根据GB6944《危险品货物分类和品名编号》、《剧du化学品目录》和《易制du化学品的分类和品种目录》确定。 三、管理要求 1、制定采购计划实验室应当制定采购计划并按计划进行采购，而一些实验室，没有采购计划，对供应品采购比较随意，一方面增加了验收的工作量，另一方面为检测工作质量造成了不稳定的因素。采购计划应信息全面充分，应明确耗材的品名、规格、级别、数量、采购时效，有保质期的必须填写保质期限，是否需要证书等证明文件，涉及危险品的应有实验室安全负责人会签等。 2、实施采购建立健全供应商档案，对同一类供应品的供应商至少应保持3名以上，对供应商的资质、信誉度以及经营的品种进行调查评价，在供应品的采购上做到既要经济，更要保证质量，一定要把供应品的质量放在diyi位；根据采购情况，定期对供应商进行评价并记录，通过长期的合作筛选出合格的供应商。采购计划实施时，向合格供应商询价，一般要求向2家以上的合格供应商询价。确定供应商后，签订采购合同。 3、耗材验收耗材验收上即要做到全面，也要有的放矢，切合实际的对可能影响检测质量的环节去检查，排除影响检测工作的因素。这也是实验室的经验和教训的积累。管理部门负责耗材的规格、级别、数量、保质期、质量证明文件的验收。使用部门负责耗材质量的验收，对关键性耗材的验收时应制定相应的文件来指导验收工作。如刻度吸管、量筒、容量瓶等计量类玻璃器具在实验室消耗较大，我们实际工作中不可能对每一只玻璃器具都进行检定，但应至少保留一套已检定的器具用于对采购的计量类玻璃仪器进行比对验收，以确定采购的玻璃仪器准确度在可控范围之内；用于痕量元素检测用的盐酸、硝酸、硫酸，应通过仪器检查其是否有背景干扰；色谱使用的有机溶剂应通过仪器检查被测目标峰处是否有干扰；微生物培养基可以通过阴性或阳性对照试验来验收；实验室用水可以根据国家标准GB6682-2008《分析实验室用水规格和试验方法》对相应等级要求指标进行检验验收。采购验收工作中容易出现的误区，有的实验室供应品验收流于形式，而有的实验室对某一个品牌一次验收合格了就认为今后采购就不用再验收了；有的实验室认为，是大厂生产的知名试剂就没问题，就适用于所有的检测工作。其实再好的产品都有一个合格率和质量指标的波动范围，而我们过分相信企业的产品质量为而疏于验收，这是对检测工作极不负责任的行为，会为我们的检测工作带来一定的风险。因此，未经验收或验收不合格的耗材不得入库，验收合格的耗材方可入耗材库，建立库存台账。 4、耗材领用耗材领用时，由管理部门和使用部门做好耗材交接，并做好出库记录。剧dupin严格执行按需领用，计量记录，剩余退回的原则。瓶装耗材在使用场所保留一定的库存，使用部门在领用新耗材时将旧瓶（空瓶）退库。退库的空瓶由实验室委托有资质的单位进行处理。 四、耗材库管理耗材库应有详实的入库记录、库存记录、出库记录和退库记录，做到账实相符。编制库存耗材的电子文档，实时更新，供使用和管理人员查阅。根据耗材的特性分类存放：剧dupin实行双人双锁，单独存放；氧化性物质与还原性物质隔离存放；有机类与无机类分区域摆放；固体在上，液体在下等。根据耗材的储存要求，配置安全设施，做好耗材库环境监控，填写监控记录，确保环境满足要求。加强危险品管理，剧dupin实行双人双锁，计量领用、剩余退回。严禁明火和其他非耗材物品进入库房。 五、耗材使用管理耗材使用时，应注意保护耗材的标签标识，防止标签的污染损坏。需要特殊要求保存的应满足保存要求，做好相关记录；注意耗材的有效使用期，应在有效期内使用耗材，超过有效期的耗材一般作为检验废弃物处理，防止误用。取用试剂后，应及时有效封闭瓶口，防止试剂污染失效或外溢污染环境或产生安全事故。瓶装试剂耗材用完后应将空瓶退回耗材库，不得随意处置或丢弃空试剂瓶。配置的试剂溶液应符合规定要求，及时书写并加贴标签。应用合适的容器存放试剂，不得用容量瓶、刻度试管等长期储存配置溶液。实验用气瓶使用时应进行必要的固定，防止摔倒，造成事故；更换气瓶时，应注意阀门连接处检漏等。 六、检验耗材检查考核实验室应对耗材的管理工作进行必要的检查和考核。对耗材保存使用过程中容易产生的问题的关键点加以明确的要求和控制，定期进行监督检查和考核。培养良好规范的耗材使用习惯，引导检验耗材管理工作有序合理的开展，保证实验安全和检验数据准确。 北京百欧博伟生物技术有限公司（biobw）是北京的一家专业于生物技术的研究与广泛运用及推广的高科技公司，位于北京企业林立的丰台区造甲街，生物技术推广及运用早于2011年开始，成立公司于2013年一月。本公司主要提供色谱耗材、色谱仪器、固相萃取装置、化学试剂、样品瓶、氘灯、标准品、微生物技术、菌种保藏服务以及ATCC产品代理等产品及服务。中国微生物菌种查询网

                      小鼠肝星状细胞的背景与应用！一、背景小鼠肝星状细胞占肝脏固有细胞总数的15%，占非实质细胞的30%左右。HSC存在于Disse腔中，呈梭形或多边形，胞浆内有多个富含维生素A的脂滴，其细长的突起向外延伸环绕在血窦内皮细胞外面，是体内储存视黄醛衍生物的首要部位。在正常肝脏中，星状细胞处于静止状态，不表达α平滑肌肌动蛋白（α-SMA），增殖活性低，合成胶原能力低，其主要功能是贮存视黄醛类。肝星状细胞是ECM的主要来源，HSC激活并转化为肌成纤维细胞样细胞(MFC)，各种致纤维化因素均把HSC作为最终靶细胞。肝星状细胞激活并转化为肌成纤维细胞样细胞(MFC)，各种致纤维化因素均把HSC作为最终靶细胞，正常情况下肝星状细胞处于静止状态。当肝脏受到炎症或机械刺激等损伤时，肝星状细胞被激活，其表型由静止型转变为激活型。激活的肝星状细胞一方面通过增生和分泌细胞外基质参与肝纤维化的形成和肝内结构的重建，另一方面通过细胞收缩使肝窦内压升高。正常情况下肝星状细胞处于静止状态。当肝脏受到炎症或机械刺激等损伤时，肝星状细胞被激活，其表型由静止型转变为激活型。肝星状细胞位于肝窦周Disse腔内，约占肝脏所有细胞的13%。在规HE染色的肝组织切片中，不能显示星状细胞，但可用免疫组织化学将其定位，并可将其分离进行体外细胞培养。正常情况下肝星状细胞呈静止状态，它在肝脏中的生理功能主要有参与维生素A的代谢，储存脂肪的功能，肝星状细胞的胞浆中含有类视黄醇物质的脂滴，是维生素A的主要储存处，肝星状细胞还有调节血管和肝窦血流的作用。二、应用用于小鼠肝星状细胞旁分泌机制在急性肝损伤再生修复中的作用研究：首先明确了活化的HSCs在急性肝损伤再生修复中的作用；接着建立了小鼠肝星状细胞分离纯化和体外培养模型，并观察不同活化阶段HSCs的生物学特性；zuihou探明活化的HSCs旁分泌途径是否参与急性肝损伤再生修复的过程并阐述相关作用机制。小鼠肝星状细胞活化不良对急性肝损伤再生修复的影响目的明确活化的小鼠肝星状细胞(mouse hepatic stellate cells,m-HSCs)在急性肝损伤时是否具有促进肝细胞有丝分裂和/或肝脏干细胞增殖的作用。方法在对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的化学性急性肝损伤小鼠模型基础上，通过连续腹腔注射胶毒霉素(gliotoxin,1mg/kg体重)消除肝内活化的星状细胞，建立肝星状细胞活化不良(loss of function)模型。通过细胞毒性实验，观察gliotoxin对肝细胞和Kupffer细胞的影响。并利用该模型，从小鼠血清转氨酶浓度、生存分析、肝细胞坏死及凋亡程度、CD45阳性淋巴细胞浸润程度、肝细胞和卵圆细胞增殖能力等方面评估活化的HSCs在肝急性损伤再生修复中的作用。结果胶毒霉素的肝细胞毒性实验显示，胶毒霉素(3mg/kg体重)单次腹腔注射后，与对照组相比,在血清转氨酶ALT、AST的浓度、肝损伤组织学评分、肝细胞增殖能力方面均无明显差异(P>0.05)。m-HSCs活化不良模型中发现,Gliotoxin组活化的HSCs(a-SMA+-HSCs)数目为(13.13±2.92)/FOV,较对照组(130.12±20.44)/FOV下降90%,存在显著统计学差异(P碳颗粒吞噬实验显示，两组小鼠肝内碳颗粒阳性Kupffer细胞的数目无明显差异(P>0.05)。Gliotoxin组与对照组相比,血清转氨酶ALT、AST的浓度分别升高73%(P北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

              有机污染土壤的微生物修复技术研究进展！百欧博伟生物：随着人口的增长及经济的快速发展，工业“三废”的排放不断增加，土壤有机污染不断加剧，对人体的健康和生态环境的安全构成了极大的威胁。目前针对典型的有机污染物，主要采用具有费用低、无二次污染、易操作等优点的生物修复法，包括堆肥、生物反应器等，且这些修复技术的主体均是微生物，由于微生物对环境具有较强的适应性、变异性，在生存过程中分化出多种多样的代谢类型，并能较强地适应生存环境。目前随着遗传、基因组、蛋白质组学和代谢组学技术的研究发展，大大丰富了关于生理学、生态学、生物化学和微生物代谢途径调控机制各个方面的知识。所以未来我们可以通过实验研究优势降解菌的降解能力及对污染物的适应机理，通过宏基因测序研究土壤微生物群落构成以及群落功能和代谢通路，提高菌种对石油烃、多环芳烃和卤代烃的降解效率。为自然环境条件下复合有机污染物的降解提供数据支持与理论依据。一、引言土壤是人类赖以生存的基本自然资源，是植物生长繁殖的基础，土壤环境状态与人类社会的生存与繁衍息息相关。土壤污染是指人类活动所产生的污染物质通过多种途径进入土壤，其数量和速度超过了土壤的环境容量和自净能力，污染物质的积累逐渐占据优势，导致土壤自然功能的失调，土壤质量下降，影响作物的生长发育，最终危害人体健康的现象。土壤复合污染是指两种及以上的性质不同的污染物在土壤环境中发生联合作用，且每种污染物浓度均超过土壤浓度标准，导致土壤质量和功能明显下降的现象。按照污染物性质，土壤复合污染分为有机复合污染、无机复合污染和无机–有机复合污染。根据土壤中污染物来源，土壤复合污染分为同源复合污染和异源复合污染。与水土污染相比，土壤污染具有隐蔽性与滞后性，因此被称为“看不见的污染”。土壤具有污染物的源与汇功能，包含大气污染和水污染在内的所有污染的90%最终都要进入土壤，因此，土壤污染是生态恶化的一个缩影。同时，污染土壤中的污染物在一定的环境下可通过雨水冲刷进入地表水或地下水，污染水环境；或通过植物生长进入食物链，危害生物甚至人类的安全。二、土壤污染治理现状及主要存在的问题1、土壤污染现状随着人口的增长及经济的快速发展，工业“三废”(废气、废水和废渣)的排放不断增加，同时受到长期不合理污灌的影响，以及现代农业生产过程中过量使用化肥、农药、农膜等化学物质的污染，造成各种新、老污染物在土壤环境中长期叠加和累积，其多以复合污染的状态存在，使土壤的污染源呈多样化的特点，我国面临的土壤复合污染问题越来越突出。2014年环境保护部和国土资源部联合发布的《全国土壤污染状况调查公报》中指出，全国土壤环境状况总体不容乐观，耕地土壤环境质量堪忧，全国土壤中污染物总超标率为16.1%，其中耕地土壤点位超标率为19.4% 。土壤污染危害巨大，土壤污染一方面影响农产品的质量，加剧了我国人多地少的矛盾；另一方面，土壤污染直接导致农产品中污染物残留量超标、农产品质量下降，影响农产品出口贸易，甚至污染物通过食物链富集危害人体健康和生态安全。土壤污染问题己成为制约可持续发展、关系国计民生的重大环境问题之一。目前，常见的土壤复合污染形式有重金属复合污染、有机污染物复合污染、重金属–有机污染物复合污染；其中，土壤有机复合污染主要与有机农药的生产、使用和工业“三废”的排放有关，较为常见的污染物为有机氯农药(OCPs)、多环芳烃(PAHs)、多氯联苯(PCBs)以及石油烃(TPHs)等。据统计，我国目前至少有3600万公顷土壤受到农药、石油烃和多环芳烃等有机化合物的污染。与重金属复合污染相比，土壤有机复合污染更广泛、更复杂，其结果也更难以预测。目前，土壤有机复合污染己从局部扩展到区域，从城市延伸到郊区、乡村，形成点源与面源污染共存，生活污染、农业污染和工业污染叠加，各种新旧污染与二次污染相互复合或混合的态势。2、主要污染物的危害石油烃(TPH)由复杂的非水性和疏水性混合物组成，如正构烷烃，香烃等，这些化学物通过食物链运输积累，表现长期的毒性，对整个地球大环境都有或多或少的影响。多环芳烃(PAHs)是一种广泛分布于空气、土壤和水体中的持久性有机污染物，有致畸、致癌、致突变性，且多环芳烃的生物富集率高，生物可利用性低，对人体的健康和生态环境的安全构成了极大的威胁，土壤环境中备受关注的持久性有机污染物，被列为优先控制的有毒有机污染物。卤代烃(VCHs)物质对人体都有急性或慢性、直接或间接的致病作用，有的积累在人体组织内部，会改变细胞DNA结构，使人体组织产生致癌变、致畸变和突变。3、有机污染修复技术针对有机污染土壤已发展了的一系列修复技术，欧洲国家与美国先后对污染土壤进行修复和治理，我国起步相对较晚，但到目前为止，也形成了一系列的污染土壤修复技术，并应用于实践中。常用的降解方法包括物理修复法、化学降解法、生物修复法和化学–生物联合修复法等。物理修复法是指利用物理手段对有机污染土壤进行治理修复，主要有热脱附、气相抽提、电动修复以及超临界流体技术等修复技术；化学修复方法是利用化学作用将土壤中的污染物分解成无毒小分子，从而达到土壤修复的目的，一般适用于高浓度污染场地的处理，主要的修复技术包括土壤淋洗技术、化学氧化、等离子体降解和光催化降解等；生物修复主要利用生物的生命代谢活动分解土壤中的污染物，常见的污染土壤生物修复技术包括植物修复、动物修复以及微生物修复。其中生物修复法因具有费用低、无二次污染、易操作等优点一直被认为是降解有机污染物的优先方法。4、生物修复技术生物修复污染土壤主要是利用植物和微生物对有毒有害物质的吸收和降解作用。生物修复技术是将土壤环境中的危害性污染物降解成二氧化碳和水或其他无公害物质的工程技术。其中植物修复是指通过利用植物忍耐或超量吸收积累某种或某些化学元素的特性，或利用植物及其根际微生物通过吸收、降解、过滤和固定等过程将污染物降解转化为无毒物质达到净化环境污染的技术。但早期的生物修复主要是指微生物修复，也是研究得最早、最深入、应用最广泛的一种生物修复方法。5、微生物修复技术微生物修复主要指采取一定的措施以促进微生物对土壤中有毒有害物质的降解、转化和去除，包括强化土著微生物降解(生物刺激)和投加外源高效降解微生物(生物强化)两种方式。现已衍生出现场处理、就地处理、堆肥、生物反应器等一系列生物修复技术。这些修复技术的主体均是微生物，应用这些技术处理有机污染物污染土壤己有广泛研究。研究表明，微生物降解是去除有机污染物的主要途径之一，其他生物修复技术也都离不开微生物的作用。由于微生物对环境具有较强的适应性、变异性，在生存过程中分化出多种多样的代谢类型，并能较强地适应生存环境。在有机污染物污染土壤中，经过自然驯化，逐渐形成多种能降解有机污染物的微生物品种或品系，微生物种类、被降解的对象不同，对环境中有机污染物的降解途径可能也不一样。三、展望目前随着遗传、基因组、蛋白质组学和代谢组学技术的研究发展和该技术在有机污染物生物修复领域中的应用，大大丰富了关于生理学、生态学、生物化学和微生物代谢途径调控机制各个方面的知识。尤其是根据16S rRNA和18S rRNA基因可以预测一个特定环境中微生物种群的进化特征。本项目通过实验研究优势降解菌的降解能力及对污染物的适应机理，提高菌种对石油烃、多环芳烃和卤代烃的降解效率，明确环境因子对有机污染土壤微生物生物学特性的影响。同时，通过宏基因测序研究土壤微生物群落构成以及群落功能和代谢通路。为自然环境条件下复合有机污染物的降解提供数据支持与理论依据。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                显微标本制作技术的实验原理与方法！一、实验原理 显微标本的制作技术是组织学，胚胎学，生理学及细胞学等学科研究观察细胞、组织的生理、病理形态变化的一种主要方法。大多数的生物材料，在自然状态下是不适合显微观察的，也无法看到其内部结构。因为材料较厚，光线不易透过，以致不易看清其结构，另外细胞内的各个结构，由于其折射率相差很小，即使光线可透过，也难以辩明。但在经过固定，脱水，透明，包埋等手续后就可把材料切成较薄的片子，再用不同的染色方法就可以显示不同细胞组织的形态及其中某些化学成份含量的变化，就可以在显微镜下清楚的看到其中不同的区域组分状态，切片也便于保存，所以是教学和科研中常用的方法。二、实验方法生物显微制片有许多不同的方法，一般可分为非切片法与切片法两大类：非切片法有涂片、铺片、压片、磨片、整装片等。切片法又包括石蜡切片法、火棉胶切片法、冰冻切片法等。显微制片技术虽是生物学中很基本的操作技术，但由于生物材料的个体差异，化学试剂 的多样性，因此操作技术相当细致而复杂，方法也很多，每一步骤的失误都可导致整体的失败，因此需要耐心细致，不断总结经验，才能得到较好的结果。1、即不用切片机，不经切片手续而制成切片的方法，根据材料性质的不同，有不同的处理方法，该类方法操作简单快捷，其中铺片法，封藏法可使原有组织结构不被破坏，涂片法，压片法弥补了用包埋，切片法所不可能观察清楚的不足，因此是显微标本制备的中常用的手段。⑴涂片法主要用于血液、精液、尿液、痰液、微生物等不能切片成薄片的液态颗粒性材料，可在载玻片上涂成单层细胞，再经固定，脱水，染色等手段制成永久标本。⑵铺片法主要用于动、植物组织的表皮层观察，可活体取待观察动、植物组织，用尖镊子撕去一层表皮，迅速平铺在载玻片上。 如: 洋葱表皮细胞的铺片制备。⑶压片法一些较幼嫩，柔软的材料可将其置载玻片上，用小解剖刀将其分散，加染料一滴，再盖上盖玻片，用拇指垂直用力挤压，使组织散成一薄片，再进行观察，如植物根尖观察染色体，花粉粒观察发育阶段等。⑷离析法该方法是利用化学试剂 使组织的细胞间质溶解，使细胞能分散成单个个体。经染色，脱水，透明即可观察其个体形态，适用于肌肉，叶片，茎等部位。⑸磨片(Ground section)用于很坚硬的组织，如骨和牙。2、切片法切片法是必须依靠手或切片机将组织切成薄片来进行观察的方法，为了能清晰地观察到动、植物的组织结构及细胞形态，必须先经过一系列步骤将组织内渗入某些支持物质，使组织变硬以利于切成薄片，根据所用支持剂的种类不同，可分为徒手切片法，石蜡切片法，火棉胶切法，冰冻切片法等类型，切成薄片后还需要去蜡，染色，脱水，透明等步骤，将其制成永久标本。下边以石蜡切片为例，介绍显微标本的制备方法。⑴取材根据不同的实验目的，选择相应的材料，材料要求新鲜、准确、完整，材料要避免挤压、挫伤、干枯。所采集材料应立即放入固定剂，并编号，注明采集时间、地点、名称、组织部位，所取组织块要大小适当，即要能说明问题，又要考虑固定剂的穿透能力。一般组织学取材稍大，细胞学取材稍小，植物组织取材稍小，动物组织取材要稍大。①动物的麻醉和杀死从活的动物体上采取材料不象采集植物材料那么容易，因为在不施加麻醉的情况下，有的动物会收缩(如蚯蚓、水蛭)，有的会骚动(如蛙、鼠)，使我们无法下手。但制片所需的材料又要求越新鲜越好，尤其是细胞学方面的研究对材料的新鲜程度要求更严。因此，要割取生活着的动物组织，在一般情况下，就要对动物施行麻醉，然后再割取材料加以固定。但是，所用的麻醉药品，必须以不影响细胞结构为原则。若是一般的组织学制片，要求不太严格的话则可将动物先杀死然后速取其组织进行固定。蛙、蟾蜍、鼠等较小的动物，可用断头法杀死，即用普通剪刀剪断颈部。较大的动物，如大竺鼠、免、猫等可用木槌猛击头后部，使其昏倒，或用50m1的注射器从耳静脉向心脏注入空气，使动物发生急性空气栓塞痉挛而死。上述动物若需麻醉后取材，则可用脱脂棉球蘸氯仿或乙醚、置于动物的鼻尖部，令其吸入麻醉。大动物(狗、猴等)应用氨基甲酸乙酯作静脉注射麻醉．剂量一般为每kg动物体重用1 g。麻醉后的动物也需放血后进行取材固定。昆虫等小动物可投入充满氯仿或乙醚蒸气的大口瓶中，令其麻醉。若要杀死，可将其投入含氰化钾的毒瓶中。②动物组织块的切割割取动物组织块时，需注意以下几点：第一，要考虑所取的材料应包括各脏器的重要结构或全部结构，如消化管就应包括粘膜、粘膜下层、肌层和外膜四层结构。若所取的器官太大，不易全部制片时，则可切取能代表该器官的部分材料，如狗的肾脏，可切取包括皮质、髓质和肾盂的一部分为材料。第二，应注意切割方向．如在管状器官(肠等)取材时，一般是取其横切面制片，但要观察小肠的环行皱壁时，就应取其纵切面制片。第三，组织块必须切得小而薄。细胞学制片的组织块不能超过2mm，一般组织块的大小以0.5*0.5*0.2cm为宜，柔软组织不易切小,可先取稍大的组织块固定2 - 3h。等组织稍硬后再切成薄的小块继续固定。⑵固定割取组织块后，应立即进行固定。固定是制片极为关键的一个步骤，制片质量的优劣。除与材料的新鲜程度有关外，还取决于最初的固定是否适当和完全。①固定的意义新鲜的组织被割取后,由于细胞内酶的作用和细菌的繁殖，可引起组织的自溶和腐败。因此，割取组织块后，应立即采用一 种方法．将组织尽可能保持原有的形态结构，且有利于保存和适于制片的操作，这一步骤称为固定。固定的目的和作用在于：a.防止组织自溶和腐败；b.使细胞内的蛋白质、糖、脂肪等各种成分沉淀保存下来从而保存细胞的各种组成成分使其保持与生活时相近似的形态和结构；c.因沉淀及凝固的关系，使细胞内不同的成分产生不同的折光率，造成光学上的差别使原来在生活情况下看不清楚的结构变得清晰易见，且有的固定剂还有助染作用(如醋酸、苦味酸)，从而使细胞各部易于染色；d.固定剂还兼有硬化作用，使柔软组织硬化而不易变形，有利于操作。②固定的方法固定有物理方法和化学方法两种。物理方法固定有干燥、高热和低温骡冷等。例如，血液涂片就是干燥固定；细菌涂片可用加热法固定；许多组织化学反应的制片是以低温骡冷固定作冰冻切片的。化学方法固定就是用化学试剂配制成固定液使之固定。③固定液的选择固定液的种类很多。可分为两大类：简单固定液和混合固定液。简单固定液又称单纯固定液，就是用一种化学试剂作为固定液，如乙醇、甲醛溶液、冰醋酸等,它们只是对细胞的某种成分固定得较好；不能将细胞所有的成分都保存下来。如升汞固定蛋白质、冰醋酸固定核蛋白、无水乙醇可固定糖原等，单纯固定液是有局限性的。混合固定液就是用几种化学药品，按一定的比例混合配制而成的，由于各种药品的优缺点互相弥补，因此可产生较好的效果。④常用的固定液福尔马林—醋酸—酒精混合固定液（FAA液）是植物制片技术中较为良好的固定液和保存液。除单细胞和丝状藻类外，均可用此液固定．也通用于昆虫和甲壳类的固定。FAA液配方：福尔马林 5m1冰醋酸 5m150％或70％酒精 90m1Bouin氏液是常用的良好固定液，广泛应用于一般动物组织、昆虫组织、无脊椎动物的卵和幼虫，以及胚胎学材料的固定。也适用于裸子植物的雌配子体和被子植物的胚囊的固定。Bouin氏液配方：苦味酸饱和水溶液 75份福尔马林 25份冰醋酸 5份此液穿透迅速而均匀，使组织收缩少，不使组织变硬变脆，着色良好。一般动物组织固定12—24h，小块组织数小时即可。固定后直接入70％酒精中洗去黄色，但留一点黄色对染色并无妨碍。植物材料的固定时间为12—48h。⑤固定的注意事项(1)固定的材料越新鲜越好。因此，采集或割取后须立即投入预先准备好的固定液中进行固定，切勿耽误。(2)材料大小以直径不超过5mm为宜，材料与固定液的比例为 1:20。(3)根据材料的性质和制片的目的选择固定液。(4)所固定的植物材料，若表面有毛茸或其它不易穿透的物质，则可用含有酒精的固定液固定。(5)含有气泡的材料投入团定液后，材料不会下沉，故须将气泡抽出使材料下沉。最简易的抽气方法是将材料和固定液一并例入10ml的注射器中，抽动几次。也小用抽气装置进行抽气。(6)固定时，要防止材料变形。(7)外有被膜，而内部站构又极易松散的器官，应将整个器官投入固定液2—2h后，再将其修成小块材料继续则定。(8)含行粘液、污物或血液的材料需用生理盐水洗净后．再行固定。(9)材料投入固定液后．须经常摇晃。(10) 容器外需贴标签。⑶脱水脱水是用一种即能与水又能与透明液混合的液体来逐渐置换样品中游离的水。现采用的脱水剂一般是丙酮或乙醇来进行梯度脱水，脱水的时间，可根据组织的类型，大小而定。脱水的过程：一般是30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→80%→90%脱水应逐步而不应跨越太大进行，否则将引起组织强烈的收缩或变形，在经无水乙醇处理时，应保证试剂的纯度。⑷透明透明是用一种即能与乙醇又能与包埋介质互溶的液体来置换样品中的乙醇，从而为最终的包埋创造一个有利的条件。 现采用的透明剂一般是二甲苯，甲苯，氯仿等。其过程为： 1/3二甲苯+2/3乙醇混合液→1/2二甲苯+1/2乙醇混合液→2/3二甲苯+1/3乙醇混合液→二甲苯→二甲苯二甲苯是使用最广泛的一种透明剂，它具有渗透力强，溶解石蜡量大，又易挥发的优点，其缺点是易使组织收缩，变硬，变脆，因此透明时间应根据组织块大小及质地酌情而定。⑸渗蜡将完成透明步骤的组织块浸入透明剂与石蜡混合液中，不断提高石蜡的比例，直至用石蜡完全置换了组织块中的透明剂，便于今后的包理与切片。 石蜡有液态与固态二种，渗蜡要在恒定温箱（60°c）中进行，以保证石蜡处于液态中。⑹包埋样品经石蜡渗透后，其内部间隙已完全被石蜡占据，此时还需要用同种硬度的石蜡包埋成蜡块以利于后边的切片，包埋可用相同的器具，也可折叠一牛皮纸盒。将液态石蜡缓缓倒入纸盒中，再用镊子轻轻将浸好蜡的组织块夹入纸盒，摆好位置，待石蜡冷却成固态即包埋完毕。至此，一块组织已完成前处理过程，可以切片，前边的步骤看来既无高深的理论，又无复杂的技术，一切看似简单，但一步做不到都会造成整个制片的前功尽弃。我们可以看到：①水和酒精可以相溶。②酒精和二甲苯相溶。③二甲苯和石蜡可以相溶。因为以上相邻步骤所使用的液体均可以互溶，所以保证每一步骤液体能置换完全。水和二甲苯不能相溶，乙醇和石蜡不能相溶，所以如果有一个步骤的处理不彻底，残留的液体带到下一个步骤将不能互溶，最终带到渗蜡步骤中，成为细小的空洞，以至不能成为质地致密的石蜡块，也就切不成良好的切片。⑺切片修块： 切片前需修整蜡块，即将包埋好的一大块蜡块切开，使每一小块都含有一块组织，从切面看组织周围的石蜡相等。固着：将修好的蜡块粘在大小适宜的样品台上，以便于固定在切片机上。切片：一手持毛笔，一手转动切片机，切片的蜡片连成一长条蜡带。切下的蜡带放在一干净黑纸上。贴片：用小刀根据需要切成数段，分别用粘片剂贴在干净载玻片上。在恒温展片台上展平，烘干。⑻染料、染色液染料必须具备两个条件：①要具有颜色②和被染物体之间具有亲和力。如果只有颜色而与被染物体之间无亲和力，那只能是颜料或合色物质，而不是染料。染料的颜色和亲和力都是由分子结构决定的，即由产生颜色的发色团和与组织产生亲和力的助色团所决定。发色团：能使染料分子产生颜色的原子团称为发色团，也就是能吸收一定波长的光线并因之而呈现颜色的化学结构。助色团：能使染料对织物纤维或组织成分产生亲和力的原子团称为助色团，也就是使化合物具有成盐性质的原子团。⑼染色剂的分类①根据来源分(l)天然染色剂此类染色剂是从动、植物体中提取的，为天然产物，产量少。目前常用的有苏木精、洋红、地衣红和靛蓝等。其中最常用的为苏木精和洋红。(2)合成染色剂全是由芳香环或具有芳香性的杂环化合物所构成。最早是由煤焦油蒸馏产物合成而得的，所以又称为煤焦油染料。除上述两类外，在生物 染色中还使用一些无机化合物，如硝酸银、氯化金、锇酸等。②根据用途分(l)细胞核染色剂用于细胞核的染色剂有天然染色剂的苏木精、洋红以及合成染色剂中的番红、结品紫、硫堇、甲苯胺蓝、甲基绿、美蓝、孔雀绿和焦油紫等。(2)细胞质染色剂用于细胞质的染色剂有合成染色剂中的曙红、亮绿、橘黄G、酸性品红、苦味酸和水溶性苯胺蓝等。（3）脂质染色剂用于显示脂质的染色剂有合成染色剂中的苏丹III、苏丹Iv、硫酸尼罗蓝及油红等。⑽根据染色剂的化学性质分碱性染色剂、酸性染色剂和中性染色剂。碱性、酸性和中性染色剂都是由一种酸和一种碱所构成的盐类。碱性染色剂和酸性染色剂的主要区别，就在于染色剂的主要有色部分是阳离子还是阴离子。若染色剂电离后，其分子的主要部分成阳离子为碱性染色剂．若电离后，其分子的主要部分为阴离子即为酸性染色剂。⑾染色原理有关染色的理论至今是一个并末完全清楚的很复杂的问题。目前一般还是从物理和化学的作用来解释各种组织或细胞的染色现象。①染色的物理作用此理论认为组织细胞的染色是以物理作用为基础的，主要是依靠下列三种物理作用的一种或全部，使染色剂进入组织或细胞内。(1)毛细管作用及渗透作用 但染色剂与组织细胞没有牢固的结合(2)吸收作用 又称溶解学说。这种学说认为组织细胞所以能被染色，主要是吸收作用所致。组织吸收染色剂，作牢固的结合。组织的着色与溶液的颜色相同，但不一定和干燥染色剂的颜色相同。例如，品红溶液为红色，所染组织也为红色，而干燥的品红则为绿色。苏丹类染色剂使脂质着色，是一种溶解现象。因为苏丹类染色剂在脂质中的溶解度大于在酒精等溶剂中的溶解度。当苏丹类的酒精溶液与组织细胞中的脂质接触时染色剂就从酒精中溶解到脂质中，从而使其着色。(3)吸附作用 吸附作用是固体物质的特性，即较大的物体能从周围溶液(染液)中吸附一些小颗粒(化合物或离子)到自身的特性。细胞中各种蛋白质或胶体有不同的吸附面，因此能选择性地吸收不同的离子，即某种蛋白质对某种染色剂有吸附作用,而对别种染色剂无吸附作用，这就可以解释鉴别染色现象。②染色的化学作用化学作用的主要理论根据 是染色剂的性质可分为酸性、碱性和中性染色剂，而动、植物的细胞内—般也可区分为酸性(阴离子)和碱性(阳离子)部分。当碱性染色剂溶液中的有色部分成为阳离子时，就能与细胞的阴离子(酸件部分)较牢固地结合，当酸性染色剂溶液中的有色部分成为阴离子时，就能与细胞内的阳离子(碱性部分)较牢固地结合。例如，细胞核，尤其是核内的染色质，主要由核酸组成，是酸性的组成成分．故和碱性染色剂(苏木精)的亲和力很强，易于着色。细胞质含碱性物质，故和酸性染色剂(曙红)的亲和力很大，易于着色。所以，在苏木精—曙红(H．E．)染色中，细胞核被碱性染色剂苏木精所染，细胞质被酸性染色剂曙红所染。这也就是细胞核是嗜碱性的，细胞质是嗜酸性的。除染色质外，粘液和软骨的基质等都是嗜碱性的，细胞质内含的某些颗粒也为嗜酸性。须注意的是嗜碱性和嗜酸性是相对而不是绝对的，若细胞在碱性染色剂溶液中停留过久，则细胞质也可染上碱性染色剂的颜色。某些细胞(如血细胞）具有特殊性质，能和中性染色剂发生亲和力而结合。由此可见，细胞各成分的染色强弱是与细胞成分及染色剂的性质有密切关系：两者之间的亲和力强，染色就深；亲和力弱或无，染色也就浅或无。但是，染色的实际情况是极为复杂的，组织细胞的染色作用，还随所用溶液的pH值而变动。⑿染色剂和染色液的配制Deiafield氏苏木精Deiafield氏苏木精配方苏木精 4g无水酒精 25m l10％铵明矾(硫酸铝铵)水溶液 400m1配制时先将苏木精溶于无水酒精，待先全溶解后加入10％铵明矾水溶液，充分搅动混合后，注入细口瓶内，瓶口用纱布封住。然后将瓶置于温暖有光处3—4天后过滤，滤后再加入100 m1甘油和100ml甲醇，混合均匀后，瓶口仍用纱布封口，再置于光线充足处1—2月使之成熟。待颜色变成紫褐色时即为成熟。成熟后过滤，塞紧瓶口置于阴凉处贮存， 可长期保存，多年不坏。此液着色力较强，染数分钟即可。也可用染液l份加蒸馏 水3—5份稀释后使用，染色时间需延长一至数小时。此液染细胞核及嗜碱颗粒效果良好。染植物细胞的纤维壁比用其它任何染液着色更好。⒀染色切片可用不同方法，使其干燥，然后进行染色。因为每一张载片上粘贴的是蜡带，因此必须先用二甲苯去除石蜡再用酒精去除二甲苯，再进入水中，才能染色，染色的方法很多，要根据每张标本要求显示的目的选择不同的染剂，最常用的是苏木精，伊红染色（简称 H·E 染色）。苏木精使细胞核显深紫色，伊红使细胞质显粉红色，以此显示清晰的细胞形态和核的大小，位置，染色后再根据制片的基本原理，使带水的载片经历脱水→透明步骤zuihou用树胶封片。 其步骤如下：二甲苯→二甲苯→1/2二甲苯+1/2乙醇混合液→100%乙醇→95%乙醇→85%乙醇→70%乙醇→50%乙醇→30%乙醇→苏木精染液→0.01%盐酸→0.01%氢氧化钠→蒸馏 水→30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→85%乙醇→伊红染液→95%乙醇→100%乙醇→100%乙醇→1/2二甲苯+1/2乙醇混合液→二甲苯→二甲苯→封片⒁镜检、贴标签、干燥、记录。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

           研究发现：微生物竟然能影响数据中心的稳定！百欧博伟生物：对于数据中心来说，最担心的突发故障除了火灾之外，大概就只剩下断网和断电了。因此，所有机房在建设之初，必然需要搭建完善的备用电源系统以支持IT设备的稳定运行。柴油发电机则是其中很重要的一环。但近日却有观点认为，柴油发电机的可靠性却有可能受到微生物的污染而降低。听起来是不是很匪夷所思？据悉，能够有如此“神通”的微生物是一种可以在柴油燃料中的微小水滴内生长，俗称为“柴油虫”的细菌（也许是真菌）。由于柴油发电机的作用主要是灾备，基本上一年zui多也就启动一两次（实际上，从安全角度出发，运营者也不希望柴发频繁启动）。因此给了这种“柴油虫”以充分的时间生长，而这对于燃料系统和发电机本身却构成了眼中威胁，甚至有可能影响到数据中心对应急电源的获取。一、生物燃料的额外风险柴油做为燃料，在储存的过程当中难免由于冷凝或者雨水渗透等原因，从空气中吸附水分。自从采用添加脂肪酸甲酯（FAME）和降低硫含量的生物燃料以来，燃油的质量和预期寿命都有所降低。脂肪酸甲酯（FAME）具有吸湿性，因此燃料中的水进入悬浮状态会增加污染的风险。微生物从生物柴油中的水中提取氧气，并从燃料中的碳氢化合物中获取食物，从而创造出一个它们能够繁衍生息的生态系统。随着微生物的生长，它们会堵塞过滤器，污染设备，促进腐蚀，并导致柴油发电机发生故障。如果是汽车或者是工厂当中的柴油机，需要定期补充燃料倒也作罢！但是对于数据中心的柴油发电机，启动次数有限，因此更容易受到微生物污染。生物柴油的吸湿性意味着水分子和微生物在燃油中的悬浮时间更长，这会进一步加剧喷油器损坏和传统滤清器堵塞。“柴油虫”一词是指多种类型的生物，它们的生存根据温度和湿度等因素而有所不同。“柴油虫”包括细菌、霉菌和酵母菌，它们都可以结合形成更厚的生物膜。最主要的有机体是真菌，它具有丝状（长链）真菌结构，是其他微生物的粘附材料，使其附着在燃料上，从而导致生物质的形成。二、如何防止柴油发电机发生故障因此，如果生物柴油供应中的微生物污染成为一种风险，那么需要采取什么措施？不幸的是，应对与柴油机故障相关的风险通常只是从发电机设备制造商那里得到的维修指导。柴油发电机设备所面临的风险在航空和海运等行业得到了广泛的认同，但数据中心运营商这样的风险意识却不高，他们往往依赖燃油维护承包商提供的燃油养护服务。这些承包商定期进行测试，并向操作人员提供报告，以验证燃料质量。英国标准协会在2016年以更新版本代替BS5410-3：1976，以涵盖关键备用发电机故障的风险。标准指出：“应急发电机的燃料应该每六个月进行质量和适用性测试，如果添加燃油养护剂，则六个月应进行一次测试。如果没有，则应每三个月对燃料进行一次测试。”但是这些只是指导原则，而不是法规要求。在许多国家没有这样的指导原则，可能根本没有进行微生物污染测试。即使数据中心具有燃油管理计划，通常是每六周启动柴油发电机几分钟。而长期间隔以及燃料在短期内没有充分混合这一事实意味着柴油发电设施管理人员需要根据上述指南审查测试。如果将样品带离现场进行测试，在理想情况下需要快速进行，因为这些样品在运输过程中保存时微生物群落可能会发生变化，这意味着测试结果可能无法体现储罐或柴油发电机中的微生物生长情况。《燃料和燃料系统中微生物污染的标准指南》（ASTM D6469-14）第8.5节规定：“微生物试验用样品应保存在低温环境中，以便运输至实验室。试验应该在取样后4小时至24小时内进行。在更高温度或更长时间内储存的样品可能存在微生物污染，而这并不代表燃料系统的实际状况。”总的来说，在现场进行测试以完全避免这些问题更为合理。这可以通过使用免疫分析抗体检测试剂盒来实现。免疫测定法长期用于医疗行业以准确检测特定分子，通常使用与特定抗原结合的抗体来检测其存在，并响应于这种结合而产生可测量的信号，这一信号可用于评估燃料污染水平。微生物污染水平与样品中微生物的生长活性相关，并且对于已知的样品大小、测量燃料中微生物生长时产生的抗原量。这表明微生物在燃料中是否快速生长，并提供污染物水平的快速指示。免疫分析抗体检测可以很容易地由数据中心的维护团队成员在现场进行，特别是在持续蔓延疫情导致封锁的工作条件下。这些工具可以快速得到测试结果，而且不需要对复杂的测试仪器或其他高科技设备进行投资。实际上，考虑到劳动力和其他成本，这些套件是成本zuidi的选择之一。它们不需要特殊的处理或储存，也没有超出通常燃料处理程序的繁重处理要求。测试工作方式的本质意味着交叉污染的风险最小，其结果是准确和完全可靠的。三、总结从石油柴油转向生物柴油是一个很好的选择，但如果燃料储存时间较长，则需要格外小心。经常处于休眠状态的应急发电机会受到微生物污染的威胁。不幸的是，当前的测试或维护活动可能无法确保设备在关键时刻的可靠性。此外，将燃料样品运输到实验室增加了测试结果准确性的不确定性。而现场测试是一种快速、可靠、直接和低成本的方法，可以让数据中心保持正常运行。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    微生物在食品检测中的具体作用！食品因富含有微生物可依赖生长的营养成分，因此会不同程度的受微生物污染。如何控制好微生物对食品的污染，已成为人们关注的话题。下面就食品加工中如何控制好微生物污染提出几种方法：对食品加工来讲，通过控制病原体所需的营养成分来控制病原体难以达到目的，因为除特别情形之外，大多数食品为病原体生长提供了充足的营养。食品加工可以通过分别控制食品中水分活度和pH值，或通过特定的包装技术调节气体来控制病原体的生长。一、控制pH每种微生物生长都有zuidi、zuijia、zuigaopH值，酵母菌和霉菌可在低pH下生长，当pH值为4.6或以下时可抑制致病菌生长和产生毒素。但有些病原体，特别是艾希氏大肠杆菌0157:H7，虽然在酸性条件下生长被抑制，仍可存活较长时间。pH 是一种抑制病菌生长的方法，而不能破坏现存的致病菌。但是，在低pH值保持时间较长时，很多微生物将被破坏。pH 4.6是酸性食品和低酸食品的分界线。有些食品开始是低酸食品，加工后成为酸性食品。天然酸性食品是那些自然含酸的食品，大部分水果属天然酸性的食品。但有些热带水果如菠萝，根据生长条件pH可能大于4.6。低酸食品包括含蛋白质食品、各种蔬菜、淀粉质食品及其它多种食品。酸化是直接向低酸食品加酸的过程。目标通常为 pH 4.6或更低。这些食品称为酸化食品，要符合相应的法规如FDA 21CFR PART 114。有些情况食品虽然经过加酸，但最终pH仍高于4.6，这就需要其他方法来加以控制，如冷藏。发酵是使用某些无害微生物来促进食品化学变化的过程。这些微生物作用的结果是产生酸或乙醇。细菌一般产生醋酸或乳酸，酵母菌一般产生乙醇。通过发酵产生酸或乙醇有两个目的。一是赋予食品特定的品质以产生预期的味道或均匀结构。酸奶就是通过发酵加工具有独特的香味和结构。另一个目的是食品防腐，如腌渍产品，但这类发酵食品的pH一般达不到4.6或以下，所以在冷藏温度下贮存才是安全的。 1、酸化酸化是直接向低酸食品加酸的过程向产品中加酸有几种不同方法：一种方法称为直接酸化，即在生产低酸食品过程中，在单个制成品容器中加入预先确定数量的酸。用此方法，重要的是加工者控制酸与食品比例，酸化蔬菜最常用的方法。另一种方法是批酸化，顾名思义，酸和食品大批混合后让其平衡，然后包装酸化食品。添加的酸有很多种，主要有醋酸、乳酸和柠檬酸，根据预期成品的特性而选用。除用酸酸化食品外，可用天然酸性食品如蕃茄作为添加配料，来酸化低酸食品。使用蕃茄的产品包括装有整形芹菜、洋葱或辣椒意大利面条酱。罐装蕃茄通常pH为约4.2，而其它蔬菜为低酸性。如制成食品的pH不同于酸性原料的pH，则认为该食品是酸化的，并适用于法规。例如，蕃茄原料pH是4.2，如制成品pH是4.5则食品已经酸化了，因为蕃茄中的部分酸被用来酸化蔬菜。或者，如制成品pH仍为4.2，则用来酸化蔬菜的蕃茄中的酸量没有明显变化，在这种情况下该产品不适用于酸化食品法规，并且认为不是配制成的酸性食物。这样的食品包括有芥末、蕃茄酱、沙拉调料和其它调味品，都是货架稳定的食品。酸化食品加工者需科学地设定加工过程以保证最终pH肯定低于4.6。加工者需对每批制成品测试平衡后的pH ，因为所有配料达到自然pH平衡，这对较大颗粒食品可能需长达10天的时间。需经几天达到平衡pH的产品在这段时间里可能需要冷藏，以防止肉毒梭菌或其它病原体的生长。为加速测试过程，可将产品混成均匀糊状。均质含油的食品时，均质前应将油除去。另一种方法是在产品加油前测试pH，因为油不影响最终pH。按配方配制的酸化食品和酸性食品的，必须进行充分地热处理以灭活腐败微生物和病原体的繁殖体。其原因有两个，一是防止腐败导致经济损失，另外是腐败生物的繁殖可使pH升高，危及产品的安全。 2、测量pH值如加工者要进行酸化处理，必须有某种测量pH的方法加工者多数选用pH计，但也可使用指示溶液、试纸或进行滴定，确保最终pH低于4.0。3、发酵葡萄酒和啤酒，是用酵母菌使产品发酵产生乙醇，乙醇使产品防腐在酸泡菜、发酵香肠、奶酪、甜酸泡菜、橄榄和酪乳的生产中，发酵时细菌产生了乳酸。霉菌也用于某些食品的发酵，主要是为了味道和其它特性，如酱油。发酵一方面需要促进好的微生物生长，同时一方面阻止会引起腐败的不良微生物生长。通常的做法是向食品中加盐或发酵剂，或在某些情形中将其轻微地酸化。发酵剂可以是酵母菌或细菌。在很多发酵产品中，一个普遍现象就是没有消除产酸细菌的加工过程。所以大部分发酵产品必须保持冷藏，以保证发酵细菌不会使产品腐败。二、控制水分活度1、常见食品的水分活度如同pH，每种微生物体有其生长的zuidi、zuijia、zuigao水分活度。酵母菌和霉菌可在低水分下生长，但是0.85是病原体生长的安全界限。0.85是根据金黄色葡萄球菌产生毒素的zuidi水分活度得来的。常见食品的水分活度。水分活度分类控制要求：0.85以上水份较大的食品要求冷藏或其他措施控制病原体生长；0.6—0.85中等水份食品不需要冷藏控制病原体，由于因酵母和霉菌引起的腐败而限制货架期；0.6以下低水份食品有较长货架期，也不需要冷藏，这些食品称为低水分食品。大部分生肉、水果和蔬菜属于水份较高的食品（水分活度高于0.85 ）。值得注意的是面包，多数人认为它是干燥，货架稳定的产品。实际上，它有相当高的水分活度，它只是因pH、水分活度的多重屏障，而使之安全，并且霉菌比病原体更容易生长，换言之，它变危险之前就长霉变绿了。有些独特风味的产品如酱油外表像是高水分产品，但因盐、糖或其它成分结合了水分，它们的水分活度很低，其水分活度在0.80左右。因果酱和果冻的水分活度可满足酵母菌和霉菌生长，它们需在将包装前轻微加热将酵母菌霉菌杀灭以防止腐败。2、控制水分活度降低食品中水分有两种传统方法，即干燥和加盐或糖结合水分子。干燥是食品防腐最古老的方法之一。除防腐之外，干燥产生了食品的自身特性，如同发酵。世界上很多地方还在用开放式空气干燥，一般而言有四种基本干燥方法：热空气干燥，用于固体食品如蔬菜、水果和鱼；喷雾干燥，用于流体和半流体如牛奶；真空干燥，用于流体如果汁；冷冻干燥，用于多种产品。另一种降低食品水分活度的方法是加盐或糖。这种类型食品的例子有酱油、果酱和腌鱼，这不需要非常特殊的设备。对流体或半流体产品，如酱油或果酱，用配方加工控制。对固体食品如鱼或熏火腿，可用盐干燥，即放入盐溶液或浸入盐水中。控制水分活度分两步。diyi，科学地设定可保证水分活度为0.85或更低的干燥、盐渍或加工配方，然后严格地执行。第二，可取制成品样品测试其水分活度。三、控制包装包装不同于其它控制方法，虽然包装有时用于控制微生物生长，但对腐败生物体的控制是有限的，不能作为可控制致病菌生长的单一方法，但通过改变包装有助于产品安全性。从食品安全角度看，包装有两个功能：可防止食品污染，也可增加食品控制的有效性。 1、包装类型很多产品是真空包装。真空包装是在将封口前用机械抽出包装中空气。产品放在低透氧性袋中，再放在真空机内用机械抽出袋中空气然后进行热封口。薄膜紧贴在产品上。袋中不残留空气或气体。充气包装产品可包装于充气包装中。充气包装包括一次充气和封口处理。所充的气体有三种，可单独或混合使用，包括氮气、二氧化碳和氧气。这些气体都有各自不同功能：氮气取代氧气，因而减弱了需氧腐败生物的生长；二氧化碳能使很多微生物致死，破坏腐败生物以延长货架期；氧气是需氧腐败生物体生命线。但含有一定氧气可增加抑制肉毒梭菌的安全性，通常为浓度约2%至4％的氧。然而，包装中存在的氧可使腐败微生物生长，并消耗氧气以至降低至2 ％安全浓度之下，这样产品的保质期受到限制。 2、控制气体包装控制气体包装是一个动态过程，包装中使用氧清除剂，在整个货架期内保持包装中的气体。吸收氧气有利于较长货架期产品，因为大部分包装对氧气都有某种程度的通透性。不同的包装膜具有不同的透氧性。这些包装用于货架期较长产品的贮存。这类包装用于蔬菜如生菜。当植物体呼吸时，它们吸入氧气排出二氧化碳。如果薄膜限制了现有氧气的含量，则可降低呼吸的速度并延长货架期。减氧包装——所有这些不同包装形式归为一类称为减氧包装。使用减氧包装可防止腐败生物的生长，因而延长产品的货架期。同时还对产品品质有其它益处，如减轻酸败和褪色。使用这种包装应注意，货架期较长的产品为病原体生长和产生毒素提供了更多的时间。氧浓度低时，比需氧腐败生物而言，更有利于有利于厌氧和兼性厌氧病原体的生长。因此，有可能在腐败前就已产生毒素。3、肉毒梭菌的控制肉毒梭菌的控制重点要关注的是肉毒梭菌，除非有其它对肉毒梭菌的控制措施，否则不能使用这些包装技术。这些控制措施包括：水分活度低于0.93并且充分冷藏以控制其它病原体；pH低于4.6；盐分高于10％，数量较多的竞争微生物；在最终容器中热处理；在冷冻条件下贮存和销售。每种控制措施自身都能有效地控制肉毒梭菌生长。真空包装生肉和禽肉，如同发酵奶酪，是利用竞争微生物抑制肉毒梭菌产生毒素的例子。像发酵产品如奶酪，发酵剂增殖产酸可防止肉毒梭菌生长。零售和家庭冰箱的温度常常不能控制在能充分阻止肉毒梭菌生长的温度。单独通过真空包装、部分蒸煮、冷藏保存不能作为weiyi的屏障。因此为了产品的安全，在加工、贮存和销售过程中必须严格控制冷藏。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     基因工程菌的发酵控制技术！中国微生物菌种查询网：近年来，基因工程已开始由实验室走向工业生产，一些珍稀药物如胰岛素、干扰素、人生长激素等已先后面市，但从许多研究中发现，基因重组菌的培养与发酵有其自身的特点。从培养工程的角度应考虑诸如营养源浓度的控制（碳源、氮源等）、最适生长条件的控制等因素；从生物学上应考虑诸如质粒稳定性的控制、质粒拷贝数的控制、转录效率和翻译效率的提高及代谢产物向菌体外的分泌等主要因素。 一、营养源浓度的控制 由于大多数基因重组菌不能把所需的基因产物分泌到胞外，而只能靠破碎细胞后提取，因此要获得基因产物，首先必须得到大量菌体。为此基因重组菌的发酵一般采用高浓度菌体培养的方法，如大肠杆菌培养时zuigao可达 125g 干菌体 /L 发酵液，酿酒酵母可达 145g 干菌体 /L 发酵液。但要得到高浓度菌体，必须要提供高浓度的营养物质，而营养源浓度过高，渗透压也就高，反过来又会抑制重组菌的生长。此外，许多基因重组菌常是维生素或氨基酸的营养缺陷型菌株，为维持菌体生长，也必须添加必需量的生长因子营养物。常采用在调节 pH 的同时补加氨基酸混合液和葡萄糖的方法。使整个培养期间，葡萄糖和氨基酸的浓度几乎保持恒定，菌体持续以zuigao生长速度生长，得到高浓度菌体。 二、质粒的不稳定性及其控制 在重组菌工业化生产过程中，质粒的不稳定性是一个极为重要而独特的问题。带有质粒的细胞生长较慢，生长速率与所带质粒的大小成反比。此外，高水平克隆基因产物的生成也会导致生长缓慢或生长异常（表达越高，生长越慢）。由于质粒的不稳定性，在繁殖传代过程中还会有一部分细胞部分甚至完全丢失质粒，导致所需产物的产量下降。 质粒不稳定包括分离性不稳定和结构性不稳定两种类型。前者是细胞分裂过程中质粒没有分配到子细胞中而导致整个质粒的丢失；后者是由于重组质粒 DNA 发生缺失、插入或重排而引起的质粒结构变化。 为了在工业化生产时使质粒的丢失降低到zuidi程度，除了构建合适的重组菌外，还应对重组菌进行一系列发酵试验，选择zuijia的发酵条件。 使质粒稳定的主要措施：首先是组建合适载体和选择适当宿主，关于这两项措施应在构建携带质粒工程菌时即应加以考虑。在发酵过程中可以： 1、施加选择压力 利用某些生长条件，只让那些具有一定遗传特性的细胞才能够生长。在重组菌发酵时，常采取这种方法来消除重组质粒的不稳定性，以提高菌体纯度和发酵生产率。 ⑴抗生素添加法 因重组菌中常含有抗药性基因，因此可添加相应的抗生素来限制非重组菌的生长。但由于抗生素的存在往往在一定程度上会影响目的产物的合成，增加产物提取的难度，而且对一些易被酶水解失活的抗生素来说，添加抗生素所造成的选择压力只能维持一定的时间。如带 Ap r 基因的克隆株在 Ap 浓度为 50 、 200 、 1000μg/mL 的培养基中培养 16 小时后，含有重组质粒的细胞数占总细胞数的比例分别为 40% 、 60%  ，再加上发酵过程中受成本的限制，所以大规模生产时此法并不可取。 ⑵抗生素依赖型变异法 通过诱变使受体细胞成为某抗生素的依赖型突变株，即只有在该抗生素存在时受体细胞才能生长，而重组质粒上含有该抗生素的非依赖基因，将重组质粒导入后，克隆菌能在不含抗生素的培养基中生长。此方法可节约大量抗生素，但克隆菌易发生回复突变。 ⑶营养缺陷型法 受体细胞是营养缺陷型的，不能在选择性培养基上生长，而质粒中含有此基因，克隆后克隆株能在选择性培养基上生长。如构建带色氨酸操纵子的重组质粒 pBR322-trp ，在质粒上插入 serB 基因，而受体细胞是 serB 缺陷型的，因此只有重组菌才能在不含 Ser 的培养基上生长。 2、控制基因过量表达 由于外源基因表达水平越高，重组菌往往越不稳定。因此一般采用两阶段培养法，即在发酵前期控制外源基因不过量表达，使重组质粒稳定地遗传，到后期，通过提高质粒的拷贝数或转录翻译效率，使外源基因高效表达。 ⑴可诱导启动子 在构建表达质粒时，可以使用可诱导的操纵子，如 lac 、 trp 等。在用含有这些启动子的克隆菌进行发酵生产时，可以选择培养条件使启动子受阻遏（抑制）至一定时期，在此期间质粒稳定地遗传，然后通过去阻遏（诱导），使质粒高效表达，例如利用 3-β- 吲哚乙酸可以使 trp 启动子去阻遏。 ⑵温度敏感型质粒 某些质粒在温度较低时，质粒拷贝数少，温度升高后，大量扩增，这种质粒称“脱缰质粒”（ runaway plasmid ），如 pKN402 和 pKN410 在 30℃ 时拷贝数为 20~50 个 / 大肠杆菌细胞，而 35℃ 时大量复制。若将 β- 内酰胺酶基因接在此质粒中，经热诱导后， β- 内酰胺酶活力可增强 400 倍。 3、控制培养条件 ⑴培养基组成 不同的培养基能影响微生物的代谢活动，也能影响质粒的稳定性。有人认为质粒在丰富培养基中比在zuidi限量培养基中更加不稳定。 ⑵培养温度 含有重组质粒的克隆菌的比生长速率往往比受体菌要小，同样质粒导入受体菌后会使受体菌的生长温度改变。通常而言，低温有利于重组质粒稳定地遗传。 ⑶菌体比生长速率 调整重组菌及受体菌的比生长速率可以提高重组质粒的稳定性，但要做到这一点非常困难，因为大多数环境条件可同时提高或降低这两种菌的比生长速率。在某些情况下，可以利用分解代谢物效应控制菌的比生长速率，来提高重组质粒的稳定性。如在重组质粒中克隆入抗高浓度抑制的某个基因，这样在进行高浓度底物培养时，受体菌被抑制，比生长速率下降，而重组菌仍能正常生长。 综上所述，选定一个合适的受体菌十分重要。基因工程操作中常用的受体菌是大肠杆菌，它zuida的缺点是代谢产物很难分泌出胞外，让枯草芽孢杆菌把代谢产物分泌出来是可能的，但由于产芽孢，难于培养到高浓度，而不产芽孢的变易株往往很难培养，因此应该适当考虑用其他微生物作受体。 为了高效率地生产代谢产物，还应考虑每个细胞的质粒数、质粒的稳定性及转录和翻译的效率等。质粒越多，产量越高，但增殖速度越慢，而且质粒越易脱落，脱落的速度越快；表达水平越高，重组质粒越不稳定。因此在实际生产中可考虑用两阶段培养方式，diyi阶段主要考虑增殖，第二阶段主要考虑目的基因的表达。也可通过改变温度、用双罐连续培养等方式，或用添加或去除药剂的方法来提高基因产物的产量。 三、工程菌外逸的控制 由构建的工程菌所携带的转入基因对于环境的长期安全性仍具有风险性，目前有关法规都明确规定工程菌不能扩散到自然环境中，因此应采取以下措施以防菌体外逸。 1、排气控制 排出的气中含有大量气溶胶，在剧烈起泡的培养物中，培养液呈泡沫状，它们从排气口向外排出，重组菌也容易随之外漏。 2、控制办法 在通用通气型培养罐上安装排气鼓泡器，气体通过排气管到鼓泡瓶，再通过膜滤器，瓶中可加入杀菌剂（如 2N NaOH ），或用电热器将排气加热至 200℃ ，杀灭工程菌。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得zuiyou质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

      猪角化细胞生长因子(KGF)ELISA KIT使用说明书！一、实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪角化细胞生长因子(KGF)水平。用纯化的猪角化细胞生长因子(KGF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入角化细胞生长因子(KGF)，再与HRP标记的角化细胞生长因子(KGF)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的角化细胞生长因子(KGF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中猪角化细胞生长因子(KGF)浓度。二、试剂盒组成三、操作步骤1、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。2、标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第diyi、第二孔中分别加标准品100μl，然后在diyi、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从diyi孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4、配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6、温育：操作同3。7、洗涤：操作同5。8、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。9、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。中国微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！

              LBA4404农杆菌感受态细胞的操作与应用！一、背景LBA4404农杆菌感受态细胞为Ach5型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型Ti质粒pAL4404，此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pAL4404质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pAL4404型Ti质粒含有筛选标签：strep，赋予LBA4404菌株链霉素抗性，适用于菸草、番茄、烟草等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率可达104cfu/μg。二、操作说明1、取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。2、每100μl感受态加1μg(体积不大于10μl)质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、28℃水浴5分钟、冰浴5分钟。3、加入700μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。4、6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50μg/ml kan时，28℃培养48h即可；平板中同时加入50μg/ml kan，20μg/ml rif时，需28℃培养60h；如果使用的平板含有50μg/ml rif则需要28℃培养72-90h)。三、应用用于HAL1基因转化烟草提高烟草耐盐性的研究：利用基因工程手段培育能在盐碱地上种植的植物，是利用盐碱地的一条经济而有效的途径。HAL1基因是酿酒酵母中的重要耐盐因子，其表达参与调节细胞内离子浓度。尽管HAL1基因本身不是转运蛋白，但在盐胁迫下能与ENA1基因协同作用促进Na+外排，与其它转运系统协同作用增加K+的吸收，保持细胞内低的Na+/K+比，以减轻Na+毒害，因而在植物耐盐基因工程上具有很大的潜力。首先将耐盐基因HAL1导入根癌农杆菌菌株LBA4404和C58C1中，然后用农杆菌介导的叶盘法将HAL1基因转入模式植物烟草，探索农杆菌介导的遗传转化条件及其影响因素，并对转基因烟草的耐盐性进行评价。主要研究结果如下：1、将含有目的基因的质粒ProkⅡ导入根癌农杆菌LBA4404和C58C1中。两个菌株均以70mmo/LCaCl2为转化溶液，OD600为0.5～0.6的YEB培养基制备的感受态细胞zuijia。LBA4404感受态细胞和10ng质粒DNA于0℃共放置30min，液氮速冻5min,37℃热激5min时转化率zuigao,达1.4×105转化子/μgDNA。C58C1感受态细胞和20ng质粒DNA于0℃共放置10min，液氮速冻1min,37℃热激1min转化率zuigao，达1.33×105转化子/μgDNA。2、以烟草为实验材料,建立了较为理想的再生体系。秦选1号以MS+6-BA 2.0mg/L+NAA0.4mg/L,秦烟95以MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L作为遗传转化时愈伤组织诱导及芽分化培养基。经Kan梯度筛选试验,以20mg/L和30mg/LKan分别作为秦选1号和秦烟95抗性芽的筛选浓度。以20mg/LKan作为两者转化植株生根时的筛选浓度。3、优化了HAL1基因转化烟草遗传体系。取40～60d叶龄的秦选1号再生苗叶圆片不进行预培养,用携带目的基因的LBA4404农杆菌菌液稀释100×,浸泡1min来进行转化。外植体与农杆菌共培养2d后用灭菌蒸馏水充分冲洗，然后于2%的NaClO中浸泡15min,用灭菌蒸馏水冲洗4～5次,置800mg/L Cb+0.1%的甘露醇中浸泡约12h来进行除菌。采用早期筛选和后期筛选获得了Kan抗性植株。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  微生物在自然界物质循环中的作用！百欧博伟生物：自然界的物质循环主要可归纳为两个方面：一是无机物的有机质化，即生物合成作用；另一个是有机物的无机质化，即矿化作用或分解作用。这两个过程又对立、又统一，构成了自然界的物质循环。在物质循环过程中，以高等绿色植物为主的生产者，在无机物的有机质化过程中起着主要的作用；以异养型微生物为主的分解者，在有机质的矿化过程中起着主要作用。如果没有微生物的作用，自然界各类元素及物质，就不可能周而复始地循环利用，自然界的生态平衡就不可能保持，人类社会也将不可能生存发展。一、微生物在碳素循环中的作用    碳素是构成各种生物体最基本的元素，没有碳就没有生命，碳素循环包括 CO2 的固定和 CO2 的再生。绿色植物和微生物通过光合作用固定自然界中的 CO2 合成有机碳化物，进而转化为各种有机物；植物和微生物进行呼吸作用获得能量，同时释放出 CO2 。动物以植物和微生物为食物，并在呼吸作用中释放出 CO2 。当动、植物和微生物尸体等有机碳化物被微生物分解时，又产生大量 CO2 。另有一小部分有机物由于地质学的原因保留下来，形成了石油、天然气、煤炭、等宝贵的化石燃料，贮藏在地层中。当被开发利用后，经过燃烧，又复形成 CO2 而回归到大气中。    微生物参与了固定 CO2 合成有机物的过程，但数量和规模远远不及绿色植物。而在分解作用中，则以微生物为首要。据统计地球上有 90 ％的 CO2 是靠微生物的分解作用而形成的。经光合作用固定的 CO2 ，大部分以纤维素、半纤维素、淀粉、木质素等形成存在，不能直接被微生物利用。对于这些复杂的有机物，微生物首先分泌脑外酶将其降解成简单的有机物再吸收利用。由于微生物种类及所处条件不一，进入体内的分解转化过程也各不相同。在有氧条件下，通过好氧和兼性厌氧微生物分解，被彻底氧化为 CO2 ；在无氧条件下，通过厌氧和兼性厌氧微生物的作用产生有机酸、CH4、H2 和 CO2 等。二、微生物在氮素循环中的作用    氮素是核酸及蛋白质的主要成分，是构成生物体的必需元素。虽然大气体积中约有 78 ％是分子态氮，但所有植物、动物和大多数微生物都不能直接利用。初级生产者植物需要的铵盐、硝酸盐等无机氮化物，在自然界中为数不多，是初级生产者最主要的生长限制因子。只有将分子态氮进行转化和循环，才能满足植物体对氮素营养的需要。因此氮素物质的相互转化和不断地循环，在自然界十分重要。1、自然界中的氮素循环    氮素循环包括许多转化作用，包括空气中的氮气被微生物及微生物与植物的共生体固定成氨态氮，并转化成有机氮化物；存在于植物和微生物体内的氮化物被动物食用，并在动物体内被转变为动物蛋白质；当动植物和微生物的尸体及其排泄物等有机氮化物被各种微生物分解时，又以氨的形式释放出来；氨在有氧的条件下，通过硝化作用氧化成硝酸，生成的铵盐和硝酸盐可被植物和微生物吸收利用；在无氧条件下，硝酸盐可被还原成为分子态氮返回大气中，这样氮素循环完成。氮素循环包括微生物的固氮作用、氨化作用、硝化作用、反硝化作用以及植物和微生物的同化作用。2、微生物在氮素循环的作用⑴固氮作用    分子态氮被还原成氨或其他氮化物的过程称为固氮作用。自然界氮的固定有两种方式，一是非生物固氮，即通过雷电、火山爆发和电离辐射等因氮，此外还包括人类发明的以铁作催化剂，在高温 ( 500 ℃ ) 、高压 (30.3975MPa) 下的化学固氮，非生物固氮形成的氮化物很少。二是生物固氮，即通过微生物的作用固氮，大气中 90 ％以上的分子态氮，只能由微生物的话性而固定成氮化物。能够固氮的微生物，均为原核生物，主要包括细菌、放线菌和蓝细菌。在固氮生物中，贡献最大的是与豆科植物疫面而瘤菌属，其次是与非豆科植物共生的放线菌弗兰克氏菌属，再次是各种蓝组菌，zuihou是一些自生固氮菌。化学固氮曾为农业生产仔万于巨大的贡献，但是，它的生产需要高温条件和高压设备，材料和能源消耗过大，因此产品价格高且不断上涨。对自然界氮素循环中的因氮作用具有决定意义的是生物固氮作用。⑵氨化作用    微生物分解含氮有机物产生氨的过程称为氨化作用。含氮有机物的种类很多，主要是蛋白质尿素、尿酸和壳多糖等。    氨化作用在农业生产上十分重要，施入土壤中的各种动植物残体和有机肥料，包括绿肥、堆肥和厩肥等都富含含氮有机物，它们须通过各类微生物的作用，尤其须先通过氨化作用才能成为植物能吸收和利用的氮素养料。⑶硝化作用    微生物将氨氧化成硝酸盐的过程称为硝化作用。硝化作用分两个阶段进六，diyi个阶段是氨被氧化为亚硝酸盐，靠亚硝化细菌完成，主要有亚硝化单胞菌属、亚硝化叶菌属等的一些种类。第二阶段是亚硝酸盐被氧化为硝酸盐，靠硝化细菌完成，主要有硝化杆菌属、硝化刺菌属和硝化球菌属的一些种类。硝化作用在自然界氮素循环中是不可缺少的一环，但对农业生产并无多大利益。⑷同化作用    铵盐和硝酸盐是植物和微生物良好的无机氮类营养物质，它们可被植物和微生物吸收利用，合成氨基酸、蛋白质、核酸和其他含氮有机物。⑸反硝化作用    微生物还原硝酸盐，释放出分子态氮和一氧化二氮的过程称为反硝化作用。反硝化作用一般只在厌氧条件下进行。    反硝化作用是造成土壤氮素损失的重要原因之一。在农业上常采用中耕松土的办法，以抑制反硝化作用。但从整个氮素循环来说，反硝化作用还是有利的，否则自然界氮素循环将会中断，硝酸盐将会在水体中大量积累，对人类的健康和水生生物的生存造成很大的威胁。三、微生物在硫素循环中的作用    硫是生命物质所必需的元素，它是一些必需氨基酸和某些维生素、辅酶等的成分，其需要量大约是氮素的 l/10 。1、自然界中的硫素循环    自然界中的硫和硫化氢经微生物氧化形成 SO4- ； SO4- 被植物和微生物同化还原成有机硫化物，组成其自身；动物食用植物、微生物，将其转变成动物有机硫化物；当动植物和微生物尸体的有机硫化物，主要是含硫蛋白质，被微生物分解时，以 H2S 和 S 的形式返回自然界。另外，SO4- 在缺氧环境中可被微生物还原成 H2S 。概括地讲。硫素循环可划分为脱硫作用、同化作用、硫化作用和反硫化作用。2、微生物在硫素循环中的作用    微生物参与了硫素循环的各个过程，并在其中起很重要的作用。⑴脱硫作用    动植物和微生物尸体中的含硫有机物被微生物降解成 H2S 的过程称为脱硫作用。⑵硫化作用    即硫的氧化作用，是指硫化氢、元素硫或硫化亚铁等在微生物的作用下被氧化生成硫酸的过程。自然界能氧化无机硫化物的微生物主要是硫细菌。⑶同化作用    由植物和微生物引起。可把硫酸盐转变成还原态的硫化物，然后再固定到蛋白质等成分中。⑷反硫化作用    硫酸盐在厌氧条件下被微生物还原成 H2S 的过程称为反硫化作用。    微生物不仅在自然界的硫素循环中发挥了巨大的作用，而且还硫矿的形成，地下金属管道、舰船、建筑物基础的腐蚀，铜、铀等金属的细菌沥滤以及农业生产耸彭有着密切的关系。在农业生产上，由微生物硫化作用所形成的硫酸，不仅可作为植物的硫素营养源，而且还有助于土壤中矿质元素的溶解，对农业生产有促进作用。在通气不良的土壤中所进行的反硫化作用，会使土壤中 H2S 含量提高，对植物根部有毒害作用。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

             大肠菌群快检纸片法在现场中的分析及应用！1、目的 了解大肠菌群快检纸片法在现场中的应用情况。2、方法 根据快检纸片说明要求对待检样品进行测试分析。3、结果菌量的多少对结果判定有一定的影响，粘贴法和涂抹擦拭法对结果无明显的影响。4、结论 只有掌握了实验各环节的诸多因素，才能综合判定出所测结果。 大肠菌群主要来源于人与动物的肠道，是食品及水受污染的主要细菌卫生学指标。目前在检测方法上大多数的待检样品依然采用传统的发酵法，由于该法可适用于各类样品的检测，操作较为繁琐复杂，且时间长，耗费大。而大肠菌群快速检测纸片法（以下简称快检法）除了具有与发酵法相同的特异性及敏感性外，还具有经济、简便、快速等特点。已在各地推广并使用，签于快检法采样的局限性，近年来我们仅对本市、区的餐（饮）具消毒质量进行了监督检测，在全程检测中我们对结果的判断和可能出现的疑问以及与试验操作方法的吻合性进行了对比后发现了一些问题，有了一些思索，结合现场应用实践和基层提出的问题，我们提出以下想法仅供同行借鉴。 一、快检法在颜色判定上存在的问题 从原理上说，大肠菌群的细菌都是发酵乳糖的，快检法是将一定量的乳糖、指示剂（溴甲酚紫和TTC）以及营养成分等吸附于一定面积的无菌滤纸上，当细菌生长繁殖时，发酵乳糖产酸使pH值降低，溴甲酚紫指示剂由蓝色变黄色，此时产酸后的检样在纸片上呈现出黄色反应，同时含有的脱氢酶在适宜的pH范围内，可将相应的作用物脱氢，脱下的 氢还原TTC形成红色的不溶性三苯甲替。即又可在产酸后的黄色背景前提下显示出红色斑点（或红晕）。这一特点是快检法的典型特性。许多同行也以此特性作为阳性结果的weiyi判断依据。但在实际检测中由于检样的不同以及许多不固定因素，在颜色的梯度上会出现一些难以判断的不定结果，我们具体归纳以下几点。 1、不发酵乳糖细菌对颜色的反应  由于肠杆菌科有许多不发酵乳糖的其他细菌，此时如果无菌滤纸上吸附有一定面积养分并稍具备适宜细菌生长繁殖要求的营养成分，这类不发酵乳糖的菌就会在该纸片上以菌落生长形式呈现出红色斑点特征。由于此类菌不发酵乳糖，周围也就不会变黄色反应。又因为大肠菌群都是一类发酵乳糖的细菌。所以此时应考虑为大肠菌群以外的肠道菌，而不能误认为大肠菌群的细菌而定假阳性。由于大肠菌群的限定，该结果应列为阴性结果的范畴。 2、菌量的多少对颜色的反应  在进行任何细菌检验时，菌量的多少一直都是个焦点问题，不可忽视。我们认为在快检法中，菌量多少与结果密切相关。当目的菌多时，大量的乳糖分解后使纸片产酸变黄色，同时使得酶的活性受到抑制，无法还原TTC，而不能形成红色斑点或红晕，此时的结果是纸片变黄。同样如菌量适中时，乳糖分解产酸整个纸片变黄色后，酶活性经过氧化还原反应后又形成红色斑点，此时纸片上在黄色背景下显示出的红色斑点（或红晕）即为典型的阳性结果。当菌量较少时，纸片上的每个菌落可形成一个红色小斑点，而且周围变黄色，显示出色彩鲜明的典型阳性结果。但如果所试样品纸片变黄色而无红色斑点（或红晕）时，应考虑是否菌量多而抑制了斑点的形成，严格地说这种结果也应直接判为阳性。必要时可以补加发酵法做证实试验，以避免误判。 3、培养时间对颜色的反应  国家标准规定，采样后的快检纸片，应放置(37±1)℃培养16～18h后观察结果。如培养时间过长，生化反应不同的细菌因分解蛋白胨产碱，可使纸片由黄色变为灰褐色（V-P阳性菌），影响结果判定。我们在工作中将检样纸片在限定时间内进行观察后继续放置至24h观察，未发现有明显的变化。因此在结果判定上培养时间虽不是juedui而言，但为了控制V-P阳性菌的结果，时间最好限定在同一个范围内。以避免误判。有人建议新鲜食品或未经加工处理的食品(36±1)℃培养18～20h，冷冻、干燥或含有防腐剂的食品应培养20～24h为宜。但在高温季节应将采样后放置时间和路径的时间计算在内。以减少误差。 4、操作方法对颜色的反应  大肠菌群纸片法现场快速检测时，方法虽简单，但对基层的同行来说存在一些误区，我们在现场对食（饮）具用纸片粘贴和涂抹擦拭后进行培养，以区别因工作人员的操作不一造成的误判，进行比较后发现，只要是阳性的检样，无论是两种方法中的哪种，均可出现同一种阳性结果。所不同的是阳性的程度差异而已。在定性上无明显区别。 二、保存条件对快检纸片的影响 为了避免操作中造成的误差，在实际工作中应对结果的判定和理解以及纸片保存等各方面进行全面掌握，由于纸片受贮存环境和外界因素影响可引起变质，正确的保存方法对确保其质量至关重要。zuihao将快检纸片放置在温度 三、结果判定及分析 综合以上检测我们认为任何一种试验都有它的综合因素，我们只有考虑了众多因素并控制了该因素后，才有可能完成它，因此我们对快检法的应用和结果判定上归纳总结以下几点提供于基层参考应用。 1、阳性结果 ⑴纸片上呈现红色斑点（或红晕），而且其周围均变为黄色，此结果为典型的阳性结果。⑵纸片中某些部分变黄色，有或无红色斑点（或红晕）时，此结果也应判为阳性。 2、阴性结果  ⑴纸片整个保持原蓝紫色或蓝紫色加深，此结果应判为典型的阴性结果。⑵纸片保持蓝紫色，但其中出现红色斑点或红晕，而周围不变黄色，此结果也应判为阴性（此结果最易误判为阳性）。 3、可疑待证实后出具的结果  ⑴纸片在限定培养温度及时间内全变黄色（该界线要与采样后立即变黄色者区分），此结果也应判为可疑阳性。应按发酵法做证实试验，以避免误判。⑵纸片采样后立即变黄色者，说明检样呈酸性状态，不易用该纸片法进行监测。此情况易误判为阳性。可改用传统的发酵法完成。 4、其他不定因素的结果分析  现场中采用平行样检验主要是为了预防试验中结果的准确性和漏检、漏判等试验误差。有时在结果判断时也可出现平行样纸片不相同的反应，大多数情况下结果还是相互吻合的，只是反应量多少而异，因为该检测标准不是一个估计值的标准，而是不可检出的指标，所以只要某一方阳性应倾向于该方或进一步发酵法完成。 另外操作时也要注意水分的控制，水分过多致使菌细胞悬浮似液体培养状态，此时菌落的形成也不易完成。操作时应以整个纸片湿润而又不滴水为宜，不可放在水中长时浸泡。 大肠菌群主要来源于人畜粪便，通过此项检测可以间接的说明样品是否被粪便污染，因此将它作为细菌卫生学常用的重要指标。目前大肠菌群检测在各类食品及卫生细菌学检验中均被列为必检项目，快检法在卫生细菌学检测中也被广泛应用，作为食（饮）具卫生消毒效果大肠菌群检测的法定方法之一，并列入了国家标准GB14934-94。1998年又将快检纸片法纳入公共场所卫生监测规范。为了促进我国大肠菌群检测纸片质量的标准化，许多学者对此进行过质量标准研究。对纸片快速检测法予以充分研究。综合我们对试验原理分析和结果判定，我们认为，一种好的试验方法，只有共同完善，取之长处，才有发挥前景，在此我们将粗浅的认识和微薄感想提供于同行，希望能得到认可，不足之处愿与共勉。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

               检验技术：实验原始记录如何保持“原始”？一、重视原始记录中的签名原始记录一般有检测人员、校核人员签名。签名意味着签名人已对该原始记录进行了必要的校对或审核，是对原始记录进行的zuihou把关，以便及早发现检测人员检测的失误。对原始记录中的任何疑点，都应在输入检验报告之前给予解决，必要时进行复测，以确保数据准确无误。二、选择适合的检测方法CNAS要求实验室应使用适合的方法和程序进行所有检测。实验室面对的是产品，不同的产品执行的标准不同，使用的检测方法也不同。对于执行标准明确的产品，直接选取标准中的检测方法即可。实际工作中，我们会遇到大量的非标产品，尤其是委托检验时，需要与客户沟通，采用满足客户需求并适用于所进行的检测的方法。当客户未指定所用方法时，实验室应从国际、区域或国家、行业标准中发布的，或由知名的技术组织或有关科学书籍和期刊公布的，或由设备制造商指定的方法中选择合适的检测方法。实验室制定的或采用的检测方法如能满足预期用途并经过确认也可使用。对于这样的沟通一定要有记录备查，客户的要求与送检样品的任何差异，应在检测开始之前得到解决，并且应得到实验室和客户双方的接受。如果客户的要求，实验室的能力和资源无法满足，则应对客户说明。   三、规范记录样品信息接收样品后，不要急于检测，要先检查样品状态是否存在影响正常检测的缺陷。对于一些封装的样品，无法直接观察到缺陷的，打开封装发现有缺陷时，也应立即终止检验，对样品进行妥善处理并及时与客户沟通。即便无缺陷，也应在原始记录中对样品状态进行适当描述。四、有足够的信息量CNAS要求观察结果、数据和计算应在产生的当时予以记录，并要求每项检测的记录应包含充分的信息，以便在可能时识别不确定度的影响因素，并确保该检测在尽可能接近原条件的情况下能够重复。检测人员每个实测原始数据都写上，不得只写诸如平均值等最终结果。文字要填写具体内容，不得只写符合/不符合或合格/不合格。对原始记录不得随意涂改，如确系需要修改的，应先用横线将错误横向划去（被划改的内容仍应清晰可见），再把正确值填写在其旁边。对记录的所有改动都应在划改处有修改人的签名或印章。五、正确进行数据处理一般情况下，产品标准对检测数据应保留的小数位数或有效数字都有明确的规定，在检测时应严格按照标准要求读取数据，在原始记录中也应按标准要求进行记录。 检测后需要进行计算的数据，若产品标准有相关规定，应按照产品标准要求进行计算；若产品标准中无相关规定，则应按照GB8170《数值修约规则》的要求进行计算。结果判定是用检验所得的测定值或其计算值与标准规定的极限值进行比较。对检验结果的判定，若产品标准有相关规定，应按照产品标准要求进行判定；若标准中无明确规定的，可按照GB1250《极限数值的表示方法和判定方法》进行判定。 六、不要忽视计量证书一般标准对检测设备都有具体精度要求，选择检测设备一定要满足标准要求，并严格按操作规程使用仪器设备。在原始记录中不但应注明所使用仪器设备的名称，还应填写仪器设备的weiyi性编号，以免相同设备发生混淆。CANS要求设备在投入使用前应进行校准或核查，还要求设备在使用前应进行核查和/或校准。期间核查是在两次校准或检定之间的时间内，使用适当的校核方法，以相适应的核查标准进行检查，以确保在用设备在使用期间一直维持良好状态，并获得zuijia测量能力，证明检测结果的置信度，增强实验室对在用检测设备保持良好状态的自信心。七、对分包方数据的控制分包是指实验室在某些情况下，委托其他的实验室为其提供检测数据的业务活动。实验室应就分包方的工作对客户负责，由客户或法定管理机构指定的分包方除外。对由分包方完成的检测，应在原始记录中予以说明，并将分包方提供的数据与原始记录一同存档，并在出具检验报告中证明。八、检测人员应具有资格CNAS CL01：2018要求：实验室管理者应确保所有操作专门设备、从事检测、评价结果、签署检测报告的人员的能力。对从事特定工作的人员，应按要求根据相应的教育、培训、经验和/或可证明的技能进行资格确认。实验室首先应根据自身从事检测工作的性质，制定不同人员的能力需求，然后按照能力需求对每个从事检测的人员从接受教育程度、经过的培训、实际工作经历和可证明其技能方面进行资格确认，确认符合条件的人员，发给其相应岗位的资格证书。只有具有资格证书的人员才能从事资格证书范围内的检验工作，包括原始记录的编制。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                血液基因组DNA提取试剂盒的应用！一、背景血液基因组DNA提取试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取全血基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为新型材料，能够高效、专一吸附DNA，可zuida限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。二、使用方法1、样本处理（1.5 ml EP管中处理）抗凝全血：吸取200~500μl抗凝全血加入到800 ul红细胞裂解液中上下颠倒混合均匀，13000rpm离心30s，去上清，留细胞沉淀，用50μl水重悬细胞沉淀。淋巴细胞分离液分离出的白细胞：直接吸取50μl白细胞。有核红细胞抗凝全血（禽血）：吸取5μl抗凝全血加入到50μl无菌水中，漩涡震荡混合均匀。2、向上述准备好的样品溶液中加入100μl gDNA LB1和20μl蛋白酶K漩涡混合均匀10s，56℃水浴锅中消化5min。3、加入700μl gDNA BB2漩涡震荡混合均匀1min，13000rpm离心3min。4、将上清液倒入到吸附柱中，13000rpm离心1min。5、倒掉废液。向吸附柱中加入500μl Washing Buffer，13000rpm离心15s。重复此步骤一次。6、将吸附柱重新放回离心机，13000rpm空离心2min，将残留的乙醇彻底甩干。7、将吸附柱芯放入到1.5ml收集管中，向吸附柱芯中加入60~150μl DNA Elution Buffer（DNA Elution Buffer预热到65℃将提高洗脱产量），室温放置1min，13,000rpm离心1min，洗脱液即为基因组DNA，冷冻保存。三、应用用于非小细胞肺癌患者血液循环DNA含量及完整性的研究：肿瘤患者血液中的游离DNA(cell free DNA,cfDNA)包括循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)，主要来源于细胞的凋亡和坏死。血液循环中的癌细胞和远处转移的癌细胞同样释放cfDNA,可以通过检测cfDNA含量来估算肿瘤负荷、评价治疗效果。DNA的完整性(Integrity)有别于非肿瘤人群是肿瘤患者cfDNA的另一个显著特征。目前定量常用PCR方法，diyi步需要提取血液循环DNA，这是一个极容易产生误差的步骤。即便不考虑操作者的因素，提取方法和试剂的不同就会造成巨大误差。目的研究一种方法，不经过DNA提取步骤,直接对血液中的循环DNA进行定量，可以去除DNA提取试剂盒和操作人员差异造成的DNA提取误差。方法通过提取和免提取cfDNA直接定量的两种方法来对比检测cfDNA，比较两者的扩增效率,精密度及准确度。结果通过特殊的技术工艺处理，可以直接用血清进行定量PCR，不影响PCR反应,扩增效率与提纯DNA一致，可精确检测出低至ng水平的血清游离DNA，检测范围1-10000ng/ml，本方法具有较高的准确度及精密度。相比先用试剂盒提取cfDNA，在定量结果的稳定性、重复性等方面都有显著改善。非小细胞肺癌患者cfdna含量及完整性的研究背景近年来，血液循环dna(cfdna)作为一种潜在的肿瘤标志物已经受到越来越多人的关注，因为它的检测创伤很小而且方便，所以比较容易被人们接受。cfdna的水平在健康人和良性疾病病人中较低，但是在非小细胞肺癌患者的血液中有非常明显的增加。癌症病人的循环肿瘤dna的完整性也是其重要特征之一。因此联合cfdna的含量和完整性可能是诊断癌症的一个很好的指标。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  微生物发酵工程——发酵与提纯！发酵工程（ fermentation engineering ）就是利用微生物的特定性状和功能，通过现代化工程技术和设备来生产有用物质或将微生物直接用于工业化生产获得目的产物的技术体系。包括发酵和提纯两个工序。 一、发酵 将微生物接种到合适的培养基中，通过控制其生长和代谢环境，来使微生物发挥起独特功能的过程。其主要内容包括菌种的选育，种子的扩大培养，培养基的配制与灭菌，接种及发酵控制等。 从不同的角度可将发酵分成不同的类型。根据是否需要氧气可分为厌氧发酵（静置发酵）和好氧发酵（通气发酵）；根据发酵培养基的性质可分为固态发酵和液态发酵；根据发酵方式的不同可分为分批发酵、补料分批发酵及连续发酵等。 1、厌氧发酵 适用于厌氧或兼性厌氧微生物的发酵，如丙酮丁醇发酵、酵母菌的酒精发酵、乳酸发酵等。产生丙酮、丁醇的梭状芽孢杆菌（ Clostridium ）是一种专性厌氧微生物，它的菌体发酵和发酵应在无氧条件下进行。酵母菌是一类兼性厌氧微生物，根据其生理特点，在种子制备时应在搅拌通风的条件下进行以促使其生长繁殖，而酒精发酵则在缺氧条件下进行。乳酸菌大多属耐气性厌氧菌，它们的生长和代谢产物合成与氧的有无关系不大，但为了防止杂菌污染，还是以缺氧环境中发酵为宜。 2、好氧发酵 适用于好氧微生物的发酵，如链霉素、谷氨酸、柠檬酸等的发酵。生产链霉素的是一类放线菌，生产柠檬酸的是一类霉菌，都是好氧性微生物，在厌氧条件下很难生长和代谢。虽然生产谷氨酸的棒杆菌也可在厌氧下发酵，但因谷氨酸是由 TCA 循环中的 a - 酮戊二酸为前体合成的，因此必需在有氧条件下才能生成。 3、固态发酵 指发酵培养基的状态是固体。如大曲酒发酵及红曲发酵等。大曲酒发酵一般在窖池中进行，发酵原料经蒸煮后放入窖池，接种酒曲后覆膜发酵，起初由霉菌进行糖化，氧气用净后由酵母菌进行酒精发酵。红曲需要在有氧条件下发酵，一般在曲盘上进行。为了使红曲霉在固体培养基中生长良好，发酵过程中要经常洒水及翻曲。 4、液态发酵 指发酵培养基的状态为液体。绝大多数纯种发酵都为液态发酵，如青霉素发酵。 早期的青霉素发酵在液体浅盘上进行，由于该法存在产量低、易污染且劳动强度大等缺点，现已被深层液体通风发酵法取代。 深层液体通风发酵在密闭通风发酵罐中进行，将种子接入灭菌的发酵培养基中，然后在适宜的温度、溶氧下发酵，发酵罐中有蛇管或夹套可以控温，溶解氧的浓度可以通过调节搅拌机转速或通入的无菌空气的风量来控制。 5、分批发酵 指在发酵过程中，除了不断进行通气（好氧发酵）和为调节发酵液的 pH 而加入酸碱溶液外，与外界没有其它物料交换的一种发酵方式。培养基的量一次性加入，产品一次性收获，是目前广泛采用的一种发酵方式。其优点是：①对温度的要求低，工艺操作简单；②比较容易解决杂菌污染和菌种退化等问题；③对营养物的利用效率较高，产物浓度也比连续发酵要高。缺点是：①人力、物力、动力消耗较大；②生产周期较长，由于分批发酵时菌体有一定的生长规律，都要经历延滞期、对数生长期、稳定期和衰亡期，而且每批发酵都要经菌种扩大发酵、设备冲洗、灭菌等阶段；③生产效率低，生产上常以体积生产率（以每小时每升发酵物中代谢产物的 g 数来表示）来计算效率，在分批发酵过程中，必须计算全过程的生产率，即时间不仅包括发酵时间，而且也包括放料、洗罐、加料、灭菌等时间。 6、连续发酵 指连续不断地向反应器（发酵罐）中流加新鲜发酵液，同时又连续不断地排出发酵液，从而使 pH 、养分、溶解氧等保持恒定，使微生物的生长和代谢活动保持旺盛稳定状态的一种发酵方式。连续发酵可分为单罐连续发酵和多罐串联连续发酵等方式。在单罐连续发酵中，由于发酵液在不断搅拌，一部分刚流入的发酵基将随发酵液一起流出。其优点是：①设备的体积可以减小；②操作时间短，总的操作管理方便，便于自动化控制；③产物稳定，人力物力节省，生产费用低。缺点是：①对设备的合理性和加料设备的精确性要求甚高；②营养成分的利用较分批发酵差，产物浓度比分批发酵低；③杂菌污染的机会较多，菌种易因变异而发生退化。 7、补料分批发酵 补料分批发酵是指在微生物分批发酵过程中，以某种方式向发酵系统中补加一定物料，但并不连续地向外放出发酵液的发酵技术，是介于分批发酵和连续发酵之间的一种发酵技术。 假设物料流入发酵罐的速率为 F in ，流出发酵罐的速率为 F ex ，则分批发酵时 F in ＝ F ex ＝ 0 ；连续发酵时 F in ＝ F ex 1 0 ；而补料分批发酵时 F in 与 F ex 不恒定，是可变的，有时为 0 ，有时不为 0 。通常 F ex ＝ 0 的单纯补料工艺是增体积操作，不断分次加入发酵基质或连续流加发酵基质，至发酵罐的体积不再适宜补料为止。所以发酵时间只是有限地延长。另一种 F ex 1 0 ，即定期从发酵罐中排出一定量的发酵液以便能进一步补加物料的补料分批发酵，称为重复循环工艺。该法具有如下优点：①可以解除底物的抑制、产物的反馈抑制和分解代谢物阻遏作用。当代谢产物收率或其生产速率明显地受某种底物组分浓度影响（如用醋酸、甲醇、苯酚等作为发酵基组分而存在底物浓度的抑制）时，采用补料分批技术比分批发酵有利；②可以减少菌体生长量，提高有用产物的转化率；③菌种的变异及杂菌污染问题易控制；④便于自动化控制。二、提纯  将所需要的产物从发酵液中分离出来的过程，也称后处理。主要包括细胞破碎，分离，醪液输送，过滤除杂，离子交换电渗析，逆渗透，超滤，凝胶过滤（层析），沉淀分离，溶媒萃取，蒸发，结晶，蒸馏，干燥包装等过程和单元操作。 1、发酵液的固液分离 不管所需要的发酵产物是胞外代谢产物，还是胞内物质，甚至是菌体本身，首先都要进行固液分离，从发酵液中将细胞或其他固形物分开。其方法主要有预处理、过滤、离心和沉降。 预处理是通过改变发酵液的物理性质，增大固体颗粒粒度，尤其是降低粘度来絮凝蛋白质，去除高价无机离子及发酵液中的其它杂质的过程。如加入草酸盐去除 Ca 离子，加入三聚磷酸钠去除镁离子，加入黄血盐（形成沉淀）去除铁离子，加热或调节发酵液 pH 去除蛋白质等。凝聚和絮凝能有效聚集细胞、菌体和蛋白质等胶体粒子。凝聚是在加入某些无机盐作用下，由于双电层排斥电位降低，使胶体形成不稳定状态的过程。絮凝是指在某些高分子絮凝剂存在时，基于架桥作用使粒子形成较大的絮凝团的过程。 过滤是通过滤膜去除固体颗粒的过程。离心是在离心力的作用下，将悬浮液中的固相与液相加以分离的技术，多用于颗粒较细的悬浮液和乳浊液的分离。沉降常被用于初步分离和浓缩固体。这种方法简单低廉，但分离能力有限。发酵液中细胞所含水分可分为自由水、絮凝水、毛细水和胞内水等四种。一般沉降法去除自由水分，离心及过滤去除絮凝水分，毛细水分用高速离心机去除，而胞内水分只能藉助干燥去除。 为了保证离心和过滤的顺利进行，应严格控制发酵周期。周期太长，则菌体自溶，使发酵液粘稠，分离困难，有时甚至使发酵产物变性及破坏，因此对发酵液进行预处理是必要的。 2、有效成分的提取 （ 1 ）细胞破碎 要提取细胞内的酶、多糖和核酸等，必须首先破碎细胞。目前的基因工程产物，大都积累在细胞内，要获得这些产物，也必须先把细胞破碎。细胞破碎的方法很多，按是否存在外加作用力分为机械法和非机械法。机械法中的高压匀浆法在生产上应用较多，非机械方法如酶解法、化学渗透压法目前尚处在工业应用开发阶段．而其他非机械方法仅在实验室使用，工业应用仍受许多因素限制。 （ 2 ）浓缩和沉淀 浓缩是将低浓度溶液除去一定量溶剂（包括水）变为高浓度溶液的过程，常见的有蒸发浓缩、冷冻浓缩和吸收浓缩等三种。浓缩常是发酵液提纯前的预处理过程。沉淀是工业发酵中最常用和最简单的一种提取方法。利用某些发酵制品能和一些酸、碱或盐类形成不溶性物质从发酵滤液或浓缩液中沉淀下来或结晶析出的一类提炼方法。同类分子或离子以有规律形式析出的过程称为结晶，而无规则紊乱的形式析出的过程称为沉淀。目前该法广泛应用于氨基酸、酶制剂及抗生素的提取。 （ 3 ）离子交换及吸附 许多生物物质是两性物质，如四环类抗生素、氨基酸、蛋白质、多糖、核苷酸等。随着溶液 pH 值的不同，可以以阳离子、阴离子和偶极离子三种形式存在。这些分子能依靠静电力可逆地结合在离子交换树脂上。离子交换树脂是具有酸性或碱性功能的高分子化合物，因而能交换阴、阳离子。而大多数有活性的发酵产物都具有酸性或碱性功能团，在溶液中能与离子状态存在，并能与树脂的活性功能团交换。离子交换法广泛用于抗生素、氨基酸、有机酸、磷脂、长链脂肪酸以及核苷酸等极性带电小分子的分离提取，尤其在抗生素和氨基酸的生产中应用最广泛。近来离子交换也逐渐应用于蛋白质、核酸等大分子的分离提取，但所用分离介质大多是多糖类，主要应用的是层析原理，与离子交换有所不同。 在发酵工业中吸附主要用于酶、蛋白质、核苷酸、抗生素、氨基酸等产物的分离、空气的净化和除菌、脱色、去除热源等杂质。因此吸附可有两个目的，其一是将发酵产品吸附并浓缩于吸附剂上，其二是用吸附剂去除发酵液中的杂质或有害物质。 （ 4 ）蒸馏 是分离液体混合物的一种有效方法，是基于发酵产物的沸点不同，将所需物质从液体混合物中分离出来的过程。它与蒸发不同，蒸发是去除低沸点物质和部分水蒸汽，使代谢产物保留浓缩的过程；而蒸馏要得到的恰恰是低沸点物质如酒精、白酒、丙酮、丁醇等。 （ 5 ）萃取 将某种特定溶剂，加到发酵液混合物中，根据发酵液组分在水相和有机相中的溶解度不同，将所需物质分离出来的过程。此法常用于抗生素的分离工作中。如将抗生素发酵液与某一有机溶剂混合，并调节至适当的 pH ，大部分抗生素即溶于有机相中。有机相分离出来后，再调节 pH ，可使抗生素转至水相中，如此反复可得到较纯的抗生素。红曲发酵液中红色素的提取也可用此法。萃取法具有传质速度快、生产周期短、便于连续操作、可自动控制、分离效率高、生产能力大等优点，所以应用相当普遍。 近年来，由于技术的发展，萃取不一定在水相与有机相之间进行，发展出了双水相萃取法、反胶束萃取法和超临界流体萃取法等新技术。 （ 6 ）层析 当发酵液浓缩物随流动相流经装有固定相的层析柱时，混合物中各物质因分子大小不同而被分离的技术，是 1960 年代才发展起来的快速、简便而高效的分离技术，应用非常广泛，如可用于脱盐、去除热源物质、浓缩高分子溶液、测定相对分子量、纯化抗生素等领域。其原理是基于被分离物质分子大小的不同，大分子物质不易进入凝胶颗粒（固定相）的微孔，因此向下流动的速度快；小分子物质除了可在凝胶颗粒间扩散外，还可进入凝胶的微孔中，因此向下流动的速度慢。 近年已发展出了气相色谱、中压液相色谱、高效液相色谱等新方法来分离样品。（ 7 ）膜分离 依靠特定的膜允许物质透过或被截留的过程。膜分离近似于筛分过程，依据滤膜孔径的大小而达到分离的目的。按分离粒子或分子大小的不同，分为透析、电渗析、微滤、超滤、反渗透和纳米过滤等六种过程。 3、发酵产品的后加工 （ 1 ）结晶 是制备纯物质的一种有效方法。结晶过程因具有高度选择性，只有同类分子或离子才能形成结晶，所以析出的晶体很纯。在发酵工业中，结晶广泛用于抗生素、氨基酸、有机酸、糖、核苷酸、维生素、辅酶等小分子的生产。近来多糖、蛋白质、酶和核酸等生物大分子的结晶也日益受到重视。生物小分子由于其结构比较简单，分离至一定纯度后，绝大部分都能定向聚合成分子型或离子型晶体。至于生物大分子，由于分子量大，结构复杂，不易定向聚集，因而结晶非常困难。 （ 2 ）干燥 生物产品含水易引起水解变性，影响质量，所以必须进行干燥处理。工业上干燥设备很多，但因生物制品大多为热敏性物质，易变性失活，所以用于生化产品的干燥必须快速高效，加热温度不能过高，产品与干燥介质的接触时间不能太长，而且为防止杂质混入和保持洁净干燥，干燥过程必须在密闭条件下进行。 发酵工业中，常用的干燥工艺有沸腾干燥、冷冻干燥、喷雾干燥、真空干燥及气流干燥。干燥工艺和设备的选择要与需要干燥的物料特点相匹配，一般来说，低温干燥的设备和运行费用要远远高于中温和较高温的干燥工艺。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得zuiyou质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  破伤风梭菌培养基基础的背景与应用！一、背景破伤风梭菌培养基基础是zhuangong破伤风梭菌生长的基础培养基，主要用于破伤风梭菌培养及伤风梭菌产毒。破伤风梭菌毒素是破伤风杆菌产生的一种神经蛋白质毒素，通过抑制抑制性神经递质的释放，引起超反射反应和横纹肌痉挛。典型症状是在肌紧张性收缩(肌强直、发硬)的基础上，阵发性强烈痉挛，通常zuixian受影响的肌群是咀嚼肌，随后顺序为面部表情肌、颈、背、腹、四肢肌，zuihou为膈肌。相应出现的征象为：张口困难(牙关紧闭)、蹙眉、口角下缩、咧嘴“苦笑”、颈部强直、头后仰；当背、腹肌同时收缩，因背部肌群较为有力．躯干因而扭曲成弓、结合颈、四肢的屈膝、弯肘、半握拳等痉挛姿态，形成“角弓反张”或“侧弓反张”；膈肌受影响后，发作时面唇青紫，通气困难，可出现呼吸暂停。破伤风杆菌是引导起破伤风的病原菌，大量存在于人和动物肠道中，由粪便污染土壤，经伤口感染引起疾病。该菌株在普通琼脂平板上培养24～48小时后，可形成直径1mm以上不规则的菌落，中心紧密，周边疏松，似羽毛状菌落，易在培养基表面迁徙扩散。在血液琼脂平板上有明显溶血环，在疱肉培养基中培养，肉汤浑浊，肉渣部分被消化，微变黑，产生气体，生成甲基硫醇(有腐败臭味)及硫化氢。一般不发酵糖类，能液化明胶，产生硫化氢，形成吲哚，不能还原硝酸盐为亚硝酸盐。该菌株在生物技术领域具有一定的应用，然而在常用的培养基中破伤风梭菌增殖速度较慢，同时易发生染菌现象。二、应用用于提高破伤风类毒素免疫原性的初步研究：破伤风梭菌产生的破伤风毒素，经0.4%甲醛灭活后,失去毒性而仍保留抗原性称之为破伤风类毒素。类毒素精制后,可作为疫苗对人和动物进行免疫接种。但机体感染后不能获得终身免疫力，且此免疫程序较长。为了减轻接种的副反应，提高免疫效果，减少注射次数，提高接种覆盖率，采用原核细胞表达具有高免疫原性的重组C蛋白，用于生产疫苗及免疫接种，以避免出现副作用；另外，用双功能交联剂戊二醛聚合破伤风毒素，使毒素分子之间进行交联，从而产生分子量较大的，表面决定簇多的聚合类毒素。该类毒素作为免疫的抗原，可以诱发较高的抗体水平，加强免疫记忆，延长保护机体免受破伤风的侵害的时间。1、利用PCR技术从破伤风梭菌基因组DNA中扩增出1356 bp的破伤风毒素C基因，将该基因片段插入到表达载体pET32a(+)中，转化宿主菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达，观察各种条件下对重组菌蛋白表达的影响。对重组后蛋白用Ni-NAT亲和层析的技术纯化C融合蛋白，然后进行小鼠免疫实验并测定效价。研究显示：经SDS-PAGE分析,重组破伤风毒素C蛋白(rTTC)的表达量占可溶性蛋白的28.19%,纯化后得到蛋白纯度为96.92%。免疫印迹证实该重组蛋白是破伤风毒素C蛋白抗原，对小鼠免疫,三免后14 d rTTC组小鼠抗体效价仍能达到1∶16 000。所获得的重组蛋白具有良好的免疫原性。2、经过厌氧培养的破伤风梭菌，产毒后进行脱毒、精制，在产毒期间进行毒力鉴定、解毒和毒性逆转实验。再由戊二醛聚合破伤风类毒素，经不同的聚合条件的优化，进行分子量和Lf的测定，然后免疫小鼠和兔子，并测定其免疫效价。培养的毒素可以作为制备类毒素使用，脱毒精制后的类毒素,经毒力鉴定试验、解毒试验和毒性逆转试验检测后均合格。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   微生物检测如何做到快速又高效！百欧博伟生物：食品是人类赖以生存和发展的物质基础，近几年来，安全问题越来越受到人们的重视，微生物对食品的污染问题也相应的受到人们的关注。微生物在生产、运输、销售等各个环节都有可能污染食品，一旦污染，便会大量繁殖，导致食品腐败变质，引起食源性污染和食物中毒。而现在环境污染和生态破坏日益加剧，可导致人类感染和中毒的致病菌种类也越来越多。为了防止此类中毒事件的发生，采取适当有效的食品微生物检测方法，是避免和预防微生物食源性污染的重要手段。而传统的检测方法实验繁杂、耗时较长、工作繁重。因此，人们开始研究食品微生物检验的新途径，寻找微生物检测的新载体。当前在食品安全检测过程中，食品安全检测技术的应用范围越来越广。例如，微生物检测技术自身就具有高效和准确的特点，通过对微生物检测技术的合理利用，可以在极短时间内确定食品中所含有的微生物成分及含量，进而准确体现食品安全可食用的程度。食品中的微生物对存在的环境条件比较严格，所以要确保食品微生物检测工作的正常进行，就必须克服不利条件，比如物理、化学等影响因素，有效的提升质量控制工作顺利程度，避免待检测微生物发生性状的改变，展现微生物检测工作的正确作用，食品微生物检测的质量控制的提高可以有效保障检测成果的科学性、准确性，对食品的安全生产提供技术监督功能。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 菌种活化的操作方法！百欧博伟生物一、低温保存管中之一般菌种临时存放及活化A、低温保存管之临时存放及解冻中之一般菌种临时存放及活化1、低温保存管（cryo tube）应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。2、准备 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以 37℃水浴取代，应避免水中微生物污染），其中事先安放小试管架（可放置 cryo tube 之大小），液面不可高达管塞。3、将 cryo tube 从低温保存条件中取出，置于 37℃浴槽之小试管架上。4、不断轻微摇动 cryo tube，液面不可高至管塞，直至结冰完全溶解（约需 2 分钟）。B、菌株活化：在无菌操作下 1、用无菌微量吸管，从已溶解之cryo tube 吸取 1-2滴之菌液，滴入固态指定培养基(培养基编号及温度示于菌株订购单)某一边缘附近，以划线法接种于培养基。2、将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。C、划线法1、手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约5公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之前约10公分，等待约10秒钟，将接种环前端轻触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖1/3培养基为止（I区）。 2、灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自I区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II区）。3、重复2的动作完成III 区与IV 区。4、灼烧接种环，将接种环归位。D、图示（1）金属接种环（2）平板划线法二、冷冻干燥管之开管说明下列步骤请在无菌环境下操作：1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加热外管之jianduan。2、滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再以硬棒敲破jianduan。3、取出隔热纤维纸和内管，以灭菌过的镊子取出内管之棉塞。4、( a ) 适用于细菌  用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。( b ) 适用于霉菌、酵母菌  用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解后，以无菌吸管吸取并滴入约含有5ml无菌水之试管内，轻微震荡使其均匀后，静置30至60分钟。5、取0.1-0.2 ml之菌体悬浮液于指定的平板培养基上，做划线分离培养或做成一系列之稀释，用无菌L型玻棒均匀涂抹，以检验菌种之纯度及活化情形，而剩余的菌体则全部移入指定的液体培养基内，并依指定的温度培养之。6、某些菌种经过冷冻干燥保存后，迟滞期 ( lag period ) 较长，必须等培养二倍时间后才能长出，且再经过一、二次继代培养 (Subculture) 后才能正常生长。经过以上的努力后仍培养失败，才视为不能活化。7、若菌种未能活化，或活化之菌落有疑问时，请于收到菌种之一个月内，以问题菌株反应单传真至本中心，即进行处理。8、未开封之冷冻干燥管，请冷藏于4℃冰箱，切勿冷冻保存。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    内皮细胞培养基的背景与应用！一、背景内皮细胞培养基是专门为正常人类微血管内皮细胞体外培养设计的最适于其生长的完全培养基。是经灭菌的液体培养基，包含必需和非必需氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质和低浓度胎牛血清(5%)。该培养基缓冲体系为重碳酸盐，在含5%CO2的细胞培养箱中平衡后pH值为7.4。该培养基的配方能够选择性的促进正常人类微血管内皮细胞体外培养中的增殖和生长，并为其达到最理想营养平衡状态。内皮细胞是一薄层的上皮细胞，由一层扁平细胞所组成，呈多边形，细胞的边缘呈锯齿状，相互嵌合。内皮细胞也称血管内皮细胞，通常指衬于心、血管和淋巴管内表面的单层扁平上皮，它形成血管的内壁。它们具有吞噬异物、细菌、坏死和衰老的组织，还参与机体免疫活动功能。血管内皮细胞（EC）位于血浆与血管组织之间，它不仅能完成血浆和组织液的代谢交换，并且能合成和分泌多种生物活性物质，以保证血管正常的收缩和舒张，起到维持血管张力，调节血压以及凝血与抗凝平衡等特殊功能，进而保持血液的正常流动和血管的长期通畅。抗凝血材料表面内皮细胞化，可以减少血栓的形成和血小板激活。完整内皮细胞化是zuihao的抗凝血，表面血管内皮组织是天然的抗凝血组织。内皮细胞膜上有天然的抗凝血成分，比如肝素，前列腺素（PGI），一氧化氮等，内皮细胞能够合成和分泌多种内皮衍生舒张因子。二、应用用于角膜内皮细胞体外培养模型的建立：通过对四个部分结果的综合分析得出角膜内皮细胞的体外培养模型。1、剥离带后弹力层的兔角膜内皮片，用双酶消化法（胰蛋白酶和胶原酶）及组织片法对角膜内皮细胞进行分离培养，倒置显微镜下观察角膜内皮细胞生长情况，经观察分析得出的细胞数量多、污染少的较好分离方法，为后续阶段采用。2、选取F99培养基、DMEM/F12培养基、KSFM培养基三种培养基分别对兔角膜内皮细胞进行原代及传代培养，倒置显微镜下观察角膜内皮细胞生长情况。经分析讨论得出细胞增殖快、细胞形态好的培养基，后续阶段沿用。3、采用消化法、与3T3细胞共培养法、细胞克隆培养法对兔角膜内皮细胞进行培养，倒置显微镜下观察角膜内皮细胞生长情况，得出细胞传代快、传代较久的培养方法。4、对人、猪、小鼠、兔角膜内皮细胞进行体外培养，并进行细胞形态学观察及免疫荧光鉴定，选出细胞形态维持好、传代时间长的一种角膜内皮细胞。三、结果1、经双酶消化法培养20天后，兔角膜内皮细胞呈多边形或多角星形，细胞形成单层，未见长梭形的兔角膜基质细胞。组织片法培养2周后可见及部分呈长梭型放射状生长的兔角膜基质细胞生长其中。2、F99培养基中培养的原代兔角膜内皮细胞在第25天融合成单层，细胞呈多角形、细胞数量多，在三种培养基中细胞形态最规则，细胞数目最多，融合时间最快。第2次传代的第4天，F99培养基培养的兔角膜内皮细胞数最多，且形态规则。3、消化法中经消化后细胞贴附快，细胞形态好，消化传代后，细胞培养4-5天即形成新的单层细胞，在传至第10代后仍维持较好的生长态势。而兔角膜内皮细胞与3T3细胞共培养后，第5天可见明显的兔角膜内皮细胞团，细胞呈密集的“鹅卵石”样形态。培养至第14天细胞团内细胞数明显减少，剩余的细胞呈细胞核体积增大、颜色加深的衰老迹象。克隆培养法中角膜内皮细胞在培养7天后形成克隆球，扩大培养2代后细胞体积变大，增殖缓慢。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  手性色谱柱知识介绍！百欧博伟生物手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到zuijia分离效果。在手性拆分中，温度的影响是很显著的。低温增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。因此确定手性分析方法过程中要考虑柱温的影响，确定zuiyou柱温。迄今为止，尚没有一种类似十八烷基键合硅胶（ODS）柱的普遍适用的手性柱。不同化学性质的异构体不得不采用不同类型的手性柱，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。根据手性固定相和溶剂的相互作用机制，Irving Wainershouci提出了手性色谱柱的分类体系：diyi类：通过氢键、π-π作用、偶级-偶级作用形成复合物。第2类：既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。这类手性色谱柱中最典型的是由Armstrong教授开发的环糊精型手性柱，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚（苯基甲基甲基丙烯酸酯）形成的手性色谱柱也属于此类。第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发的手性分离技术，也称为手性配位交换色谱（CLEC）。第5类：蛋白质型手性色谱柱。手性分离是基于疏水相互作用和极性相互作用实现。但由于市场上可选择的手性色谱柱越来越多，此分类系统有时很难将一些手性柱归纳进去。因此参考Irving Wainer的分类方法，根据固定相的化学结构，将手性色谱柱分为以下几种：刷（Brush）型或称为Prikle型纤维素（Cellulose）型环糊精（Cyclodextrin）型大环抗生素（Macrocyclic antibiotics）型蛋白质（Protein）型配位交换（|Ligand exchange）型冠醚（Crown ethers）型    刷型： 刷型手性色谱柱的出现和发展源于Bill Prikle及其同事的卓越工作。六十年代，Bill Prikle将手性核磁共振中的成果运用到手性HPLC固定相研究中，通过不断实践，发明了应用范围较广、柱效很好的手性色谱柱。刷型手性色谱柱是根据三点识别模式设计的，属于Irving Wainer分类中的第一种类型。刷型手性固定相分为π电子接受型和π电子提供型两类。最常见的π电子接受型固定相是由（R）-N-3，5-二硝基苯甲酰苯基甘氨酸键合到γ-氨丙基硅胶上的制成。此类刷型手性色谱柱可以分离许多可提供π电子的芳香族化合物，或用氯化萘酚等对化合物进行衍生化后进行手性分离。π电子供给型固定相常见的是共价结合到硅胶上的萘基氨基酸衍生物，这种固定相要求被分析物具有π电子接受基团，例如二硝基苯甲酰基。醇类、羧酸类、胺类等，可以用氯化二硝基苯甲酰、异腈酸盐、或二硝基苯胺等进行衍生化后，用π电子供给型固定相达到手性分离。刷型固定相的优势在于其易于合成。合成方法在Bill Prikle的著作中有详细的说明。另外，刷型固定相具有高的容量因子，因此具有高的选择因子。它的不利之处在于它仅对芳香族化合物有效，有时不得不进行衍生化反应。但值得一提的是，这种衍生化反应是非手性衍生反应，所以不存在手性衍生的问题。刷型手性色谱使用的流动相基本是极性弱的有机溶剂，这对于制备色谱来讲未必是缺点。近来，刷型固定相出现了π电子供给和接受基因的混合固定相。如：WHELK-O和BLAMO，及α-BURKE-Ⅱ固定相。α-BURKE-Ⅱ相十分适用于β-阻断剂的手性分离。典型的流动相为二氯甲烷-乙醇-甲醇混合物，比例为85：10：5。加入10mM醋酸铵可以调整保留时间。SS BLAMO Ⅱ，同时具有π电子供体区和受体区，形成手性裂缝，因此对于某些分子具有很高选择性。纤维素型：纤维素型手性色谱柱的分离作用包括相互吸引的作用及形成包埋复合物。它们属于Wainer分类中的第2种类型。市售的手性色谱柱为微晶三醋酸基、三安息香酸基、三苯基氨基酸盐纤维素固定相。很多化合物可通过此类型的色谱柱得到分离。这种类型的手性色谱柱种类也很齐全。流动相使用低极性溶剂，典型的流动相为乙醇-己烷混合物。但特别要注意由于氯可以使纤维素从硅胶上脱落，因此要确保流动相中无含氯溶剂。这种类型的手性色谱柱主要的制造商之一是日本的Daicel公司，他们生产的纤维素酯和氨基甲酸纤维素柱可以分离多种生物碱和药物。特别值得一提的是OD柱。在某手性化合物异构体的分离中，分离度超过了25，这意味着载样量可以很高，对于制备十分有利。纤维素固定相的每个单元都为螺旋型，而且这种螺旋结构还存在极性作用、π-π作用及形成包埋复合物等手性分离因素。淀粉代替纤维素制成的此类手性柱显示了和纤维素柱不同的选择性，但是稳定性较差。因为淀粉是水溶性的，因此流动相中必须绝对无水才能保证柱子寿命。目前此类型的柱子能分离80%左右可能面临到的所有手性化合物。此类柱子通常用于正相系统，用正己烷-乙醇，正己烷-异丙醇混合溶剂为流动相。OD柱也可用于反相的情况，但流动相必须含有高浓度的高氯酸盐缓冲液，以防止固定相溶解。即使这样，使用较长时间以后色谱柱也难免要受到损害，但是在某些情况下使用反相系统分离效果要优于使用正相系统。    环糊精型：环糊精是通过Bacillus Macerans 淀粉酶或环糊精糖基转移酶水解淀粉得到的环型低聚糖。通过控制环糊精转移酶的水解反应条件可得到不同尺寸的环糊精。市售的环糊精主要是α、β、γ三种类型，分别含6、7、8个吡喃葡萄糖单元。环糊精分子成锥筒型，构成一个洞穴，洞穴的孔径由构成环糊精的吡喃葡萄糖的数目决定。环糊精类型及洞穴的孔径等见下表：    环糊精 糖元数目 洞穴孔径 可进入洞穴的分子类型 手性中心数目α 6 4.5-6.0 5-6元环的芳香族化合物 30β 7 6.0-8.0 联苯或萘 35γ 8 8.0-10.0 取代芘和类固醇 40    2，3位仲羟基分布在环糊精洞口，6位伯羟基在环糊精分子的外部，这意味着洞穴内部是相对疏水的区域。用环糊精手性固定相产生手性识别要求被拆分物的疏水部分能嵌入环糊精洞穴中，形成可逆的、稳定性不同的包合物，环糊精洞口的羟基和被拆分物的极性基团相互作用。由于形成包合物速度较慢，因此可能导致色谱峰峰形较差，同样也影响了其在制备色谱中的应用。环糊精固定相的选择性取决分析物的分子大小；α-环糊精只能允许单苯基或萘基进入，β-环糊精允许萘基及多取代的苯基进入，γ-环糊精仅用于大分子萜类。β-环糊精手性固定相应用范围最广。Ibuprofen通过β-环糊精色谱柱得到分离，说明了pH值对氢键的影响。当流动相的pH=7时，观察不到拆分的迹象。pH=4时，可达到好的分离效果。通常分离氨基酸时，常采用低的pH值，以抑制酸性基团的离子化，同时也增强氨基的质子化。磷酸三乙胺盐、乙酸三乙胺盐证明对β-环糊精色谱柱来说是很好的缓冲液。通常缓冲液是0.1%三乙胺溶液，用磷酸或醋酸调节到合适的pH值。高的流速会降低形成复合物的能力，低流速分离效果较好，0.5-1ml/min的流速最好。另外，增加缓冲液的浓度可以克服流速的影响，因为它可以增加环糊精洞穴和流动相的吸引力。常用缓冲液及其使用浓度如下表所示：缓冲液 浓度 目的    TEAA（乙酸三乙胺盐） 0.01-2% NH4NO3 10-500mM (用于减小包埋)柠檬酸盐 10-200mM (特别适合于酸性化合物)醋酸铵 10-200mM pH值选择见下表:醇和胺 pH4(加强NH的离子化) 酸 pH7优化手性分离条件要考虑的方面有：pH值对分离度的影响；流速对分离度的影响；柱温、有机相比例、缓冲盐浓度对分离度的影响。环糊精的修饰：zuijin，对环糊精的修饰使环糊精型手性色谱柱可以分离更多的化合物，并可用于气相手性色谱分离。衍生化是通过将不同的基因键合到环糊精洞穴表面的羟基上。衍生化反应包括乙基化、S-羟基丙基化、生成S或R-萘基乙基氨基甲酸盐、3，5二甲基苯基氨基甲酸盐和环状对甲苯酰酯。这些新型的环糊精固定相有许多优点，它们可以分离更多化合物，价格上也有竞争力，由于改进了手性识别能力使其更适用于制备色谱。    配位交换型：手性配位交换色谱（Chiral Ligand Exchange Chromatography，CLEC）由Davankov发明，是通过形成光学活性的金属络合物而达到手性分离，属于Irving Wainer分类中的第4类手性固定相，主要用于分离氨基酸类。由于此类固定相是由手性氨基酸—铜离子络合物键合到硅胶或聚合物上形成，因此流动相中必须含有铜离子以保证手性固定相上的铜离子不至流失。其它的过渡金属元素也已用于手性配位交换色谱，但铜离子应用zuiguang。形成络合物的过程十分缓慢，因此有时需提高柱温，最佳温度约50℃。手性配位交换色谱仅对α- 氨基酸和其类似物有效。β- 氨基酸很难用手性配位交换色谱得以分离。手性配位交换色谱可用于制备，由于流动相中存在铜离子，虽然铜离子能用离子交换柱除去，但增加了样品处理的困难。    大环抗生素型：大环抗生素型手性色谱柱是最近发展起来的，通过将大环抗生素键合到硅胶上制成的新型手性色谱柱。大环抗生素型手性色谱柱的出现归功于Dan Armstrong的贡献。此类色谱柱常用的大环抗生素主要由三种：利福霉素（Rifamycin），万古霉素（Vancomycin），替考拉宁（Ticoplanin）。利福霉素作为手性添加剂在毛细管电泳分离手性化合物方面得到了成功运用。万古霉素和替考拉宁分子结构中存在“杯”状结构区和糖“平面” 结构区。此类色谱柱性质稳定，可用于多种分离模式。手性分离基于氢键、π-π作用、形成包合物、离子作用和肽键等。替考拉宁分子量为1885，结构中存在20个手性中心，3个糖基和4个环。酸性基团在多肽“杯”/ “裂层”的一端，碱性基团在它的另一端。酸性基团和碱性基团提供了离子作用点。糖基在三个平面上，可折叠起来将化合物分子包埋在多肽“杯”中。万古霉素分子量为1449，结构中存在18个手性中心，3个环。万古霉素具有“篮状”结构，它的附近还有一个可弯曲的糖平面，可将分析物分子包埋在“篮子”中。羧基和仲氨基分布在“篮子”的边缘，参与和分析物分子产生离子作用。万古霉素手性色谱柱可用于反相模式、正相模式和极性模式。万古霉素手性色谱柱可以分离胺类、中性酰胺、脂类。但对于酸性化合物选择性较低。在反相模式中，有机相常用四氢呋喃、乙腈和甲醇。水相常用三乙胺-乙酸缓冲液。色谱柱适用的pH范围为4-7。通常优化碱性化合物手性分离条件时，选择pH=7 为起点比较好。另外四氢呋喃、乙腈有最好的选择性。有时采用纯的甲醇和乙醇作流动相也可达到好的分离效果。万古霉素手性色谱柱也可用正相模式，采用正己烷/乙醇为流动相。万古霉素手性色谱柱载样量可以很大，非常适用于制备色谱。    蛋白质型：蛋白质型手性色谱柱属于第5种类型。分离依赖于疏水相互作用和极性相互作用。已经有多种蛋白质用于此类手性色谱柱。目前使用较多的是α-酸性糖蛋白（α-Acid Glycoprotein，AGP），人血清白蛋白（Human Serum Albumin，HSA），牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin，BSA）和卵类粘蛋白（Ovomucoid，OV）。α-酸性糖蛋白分子由181个氨基酸残基和40个唾液酸（sialic acid） 残基构成。α-酸性糖蛋白分子偏酸性，等电点为2.7。含有两个二硫键，性质很稳定。α-酸性糖蛋白分子可以共价键合到硅胶上，制成手性色谱柱，可以分离许多化合物。α-酸性糖蛋白手性色谱柱使用的流动相通常为pH 4-7的磷酸盐缓冲液和很小比例的有机相。有机相首选异丙醇，如达不到分离要求，可以尝试乙腈，乙醇，甲醇或四氢呋喃。有机相的改变导致蛋白结构发生暂时的改变。色谱柱的负载量至关重要，典型的负载量为0.02mg/ml的浓度样品，进样20μl。pH 的改变对手性选择性起关键作用，尤其是胺类化合物。pH降低导致蛋白质负电荷的降低，引起胺类化合物保留时间减小，然而这意味着可以减小有机相比例，使选择性增加，峰形改善。通过调节有机相比例仍无法达到分离效果时，有时需用电荷调节剂。但这可能引起蛋白结构的永久改变，这些电荷调节剂包括丁酸、辛酸、癸酸和二甲基辛胺。有时也用到1，2 亚乙基二醇，1，2丁醇和氯化钠。温度对分离也有影响，温度增加保留时间，减小分离因子。人血清白蛋白（HSA）分子量为69,000，等电点为4.8。蛋白中认为存在两个药物结合位点：华法令-氮杂普鲁帕宗（warfarin-azapropazone） 和苯基二氮杂-吲哚（benzodiazapine-indole）结合位点。流动相中加入辛酸，采用人血清白蛋白手性色谱柱可以有效分离benzodiazapine。Warfarin 和oxazepam也用人血清白蛋白手性色谱柱得到了分离，流动相组成为：100mM磷酸缓冲液pH7：乙腈：异丙醇 = 84：10：6。牛血清白蛋白（BSA）为球型蛋白，分子量为66,000，等电点为4.7。此蛋白为一个单氨基酸链，通过17个二硫键形成9个双环。许多化合物通过牛血清白蛋白手性色谱柱得到分离。牛血清白蛋白不如α-酸性糖蛋白稳定，一些有机溶剂（如乙腈、甲醇）可使蛋白变性，因此使用起来要特别注意。卵类粘蛋白由蛋清中提取，分子量为55,000。它可分离大量的胺类和酸类化合物。蛋白手性色谱柱的载样量均较小。影响了蛋白手性色谱柱在制备色谱中的应用。蛋白手性色谱柱在所有手性色谱柱中是应用zuiguang的色谱柱，但并不是效果zuihao的色谱柱。    冠醚型：   冠醚类固定相用于分离一级胺，一级胺必须质子化方能达到分离。因此必须使用酸性流动相，如高氯酸。最常用的是冠醚类固定相是18-冠-6，已有商品化产品，由Daicel公司制造。无论（+）或（-）型均可达到有效分离，并可通过变化（+）（-）类型而改变分析物出峰顺序。冠醚作为添加剂也用于核磁共振和电泳，但由于其毒性较大，有致癌性，使其应用受到限制。北京百欧博伟生物技术有限公司（biobw）是北京的一家专业于生物技术的研究与广泛运用及推广的高科技公司，位于北京企业林立的丰台区造甲街，生物技术推广及运用早于2011年开始，成立公司于2013年一月。本公司主要提供色谱耗材、色谱仪器、固相萃取装置、化学试剂、样品瓶、氘灯、标准品、微生物技术、菌种保藏服务以及ATCC产品代理等产品及服务。中国微生物菌种查询网

          实验用水：12种非饮用水水质检测标准汇总！1、污水检测     污水通常指受一定污染的、来自生活和生产的废弃水。污水主要有生活污水，工业废水和初期雨水。污水的主要污染物有病原体污染物，耗氧污染物，植物营养物，有毒污染物等.主要检测标准的依据是：污水综合排放标准GB 8978-1996。2、地下水检测     是贮存于包气带以下地层空隙，包括岩石孔隙、裂隙和溶洞之中的水。地下水是水资源的重要组成部分,由于水量稳定,水质好，是农业灌溉、工矿和城市的重要水源之一。但在一定条件下，地下水的变化也会引起沼泽化、盐渍化、滑坡、地面沉降等不利自然现象。3、地表水检测     是指存在于地壳表面，暴露于大气的水，是河流、冰川、湖泊、沼泽四种水体的总称，亦称“陆地水”。它是人类生活用水的重要来源之一，也是各国水资源的主要组成部分。地表水环境质量标准(GB3838-2002)。4、渔业水检测     渔业水水质检测标准主要是依据渔业水质标准(GB11607-1989)。5、农田灌溉水检测     农田灌溉水质标准(按照灌溉水的用途，农业灌溉水水质要求分二类：一类是指工业废水或城市污水作为农业用水的主要水源，并长期利用的灌区。灌溉量：水田800方/亩年，旱田300方/亩年。二类是指工业废水或城市污水作为农业用水的补充水源，而实行清污混灌沦灌的灌区。其用量不超过一类的一半。GB5084-2005代替GB5084-92国家环境保护局2005-07-21批准2006-11-01实施。6、实验用水检测     实验用水检测标准的依据是：GB/T6682-2008。7、海水检测     海水是流动性用之不竭的。海水是名符其实的液体矿藏，平均每立方公里的海水中有3570万吨的矿物质，目前世界上已知的100多种元素中，80%可以在海水中找到。海水还是陆地上淡水的来源和气候的调节器，世界海洋每年蒸发的淡水有450万立方公里，其中90%通过降雨返回海洋，10%变为雨雪落在大地上，然后顺河流又返回海洋。海水淡化技术正在发展成为产业。     有人预料，随着生态环境的恶化，人类解决水荒的zuihou途径很可能是对海水的淡化。海水检测标准主要是：GB17378.4-2007。8、游泳池用水检测     游泳池用水水质检测标准依据是：CJ224-2007。9、中水检测     中水是指污水经适当处理后，达到一定的水质指标，满足某种使用要求，可以进行有益使用的水。和海水淡化、跨流域调水相比，再生水具有明显的优势。从经济的角度看，再生水的成本zuidi，从环保的角度看，污水再生利用有助于改善生态环境，实现水生态的良性循环。主要检测标准依据：城市杂用水水质标准GB/T18920-2002，景观环境用水的再生水水质检测标准依据GB/T18921-2002。10、生态景观用水检测     生态景观用水意思就是用于生态景观并符合生态景观用水的水。生态景观用水一般要求清澈、无臭味、无污染。生态景观用水可以是来自大自然的符合生态景观用水的水资源，也可以是通过现代科技及设施处理的符合生态景观用水的水资源，还可以是应用于现代景观中的通过现代生物技术等使保持生态标准的水资源。水质检测标准依据：GB/T 18921-2002。11、锅炉水检测     锅炉水质检测主要标准依据是：工业锅炉水质GB 1579-2006。12、工业用水检测     工业用水指工业生产中直接和间接使用的水量，利用其水量、水质和水温3个方面。主要用途是：     ①原料用水，直接作为原料或作为原料一部分而使用的水;     ②产品处理用水;③锅炉用水;④冷却用水等。     其中冷却用水在工业用水中一般占60～70%左右。工业用水量虽较大，但实际消耗量并不多，一般耗水量约为其总用水量的0.5～10%，即有90%以上的水量使用后经适当处理仍可以重复利用。     水质检测标准依据：GB/T19923-2005。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！