伊红美蓝培养基(EMB)的使用方法与应用！

              伊红美蓝培养基(EMB)的使用方法与应用！

一、背景

伊红美蓝培养基(EMB)用于分离革兰氏阴性肠道菌特别是大肠菌群和粪大肠菌群(GB/T4789.38-2008，GB15979-2002，SN0169-92，化妆品卫生规范2007版和GB5750.12-2006)。

二、原理

当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。

在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。

常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。

三、使用方法

1、制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。

2、用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1：10稀释。

3、取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。

4、将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18～24小时。培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。

5、将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。

四、应用

用于鸡大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及初步应用研究：

从某大型养鸡场采集粪便样品，分离、纯化、鉴定多株大肠杆菌，利用分离纯化的大肠杆菌为宿主菌，从粪便中分离对应噬菌体，并对其中一株噬菌体进行生物学特性的测定。

用筛选到噬菌体的所有大肠杆菌菌株，通过饮水、腹腔注射等不同途径对鸡进行攻毒，建立和优化鸡大肠杆菌病动物模型。利用相应噬菌体通过口服、腹腔注射等不同方式对鸡大肠杆菌病进行治疗性试验，验证治疗效果，为鸡大肠杆菌噬菌体的临床应用提供依据。大肠杆菌的分离鉴定。

从某大型养鸡场采集粪便样品，放入生理盐水中搅拌，上清经平板划线法依次在麦康凯琼脂培养基、伊红美蓝培养基上进行分区划线，并将得到的单个菌落在伊红美蓝培养基上进行纯化。

然后，将纯化后的大肠杆菌经革兰氏染色、微量生化反应进一步鉴定。共从粪便中分离纯化20株大肠杆菌，所有菌株在麦康凯琼脂培养基呈红色或粉红色，在伊红美蓝培养基上呈暗紫色且带有绿色金属光泽；经革兰氏染色，光学显微镜下拍照观察，菌体呈红色、短杆状；采用细菌微量生化反应管对各菌株进行生化鉴定，显示各菌株为大肠杆菌。噬菌体的分离鉴定。

以分离的20株大肠杆菌为宿主菌，采用双层琼脂平板法从粪便中分离噬菌体，结合液体增殖法将噬菌体进行纯化；采用点滴法对所分离噬菌体进行宿主交叉感染试验；将富集的Bp5、Bp6噬菌体用2%磷钨酸进行负染，利用透射电镜观察噬菌体的形态。

北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！