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公司动态

人宫颈癌细胞收到后的处理方法与培养步骤!

             人宫颈癌细胞收到后的处理方法与培养步骤!一、细胞简介平台编号:bio-106126规格:1*10 6拉丁属名:CASKI(人宫颈癌细胞)细胞名称:人宫颈癌细胞细胞用途:仅供科研使用。 注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用。二、细胞特性1)来源:宫颈癌2)形态:上皮细胞样,贴壁生长3)含量:>1x106 个/mL4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装三、细胞的运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式(1)干冰运输,收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。(3)收到细胞后请拍照,3天内如果发现污染,请及时拍照与我们联系。          四、细胞接收后的处理方法1)收到细胞后,请检查发货培养瓶的状况,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。2)在显微镜下确认细胞生长状态时,最好在低倍镜(4或5X物镜)下进行,能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下,同时给刚收到的细胞拍照,(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3)观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4)贴壁细胞:在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象,如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长,可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中(或新的培养瓶中)。5)悬浮细胞:T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。6)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1:2传代。五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备:1)准备RPMI-1640培养基;优质胎牛血清,10%;双抗1%。2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。2、细胞处理:1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入250px皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。4、收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中,建议冻存一支备用,后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。下面T25瓶为例;1、细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3、将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。六、注意事项1、收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100*,200*各一张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响,故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态,故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明,期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

参数原理

2021.11.30

布氏乳杆菌的形态特征与主要价值!

                   布氏乳杆菌的形态特征与主要价值!布氏乳杆菌是Lactobacillus属的微生物,原产地为中国。革兰氏阳性细菌,杆状,兼性厌氧,不形成芽孢;接触酶阴性,不运动,不产生硫化氢,pH4.5 生长,产DL型乳酸,同型发酵,生长温度20-55℃,最适生长温度48℃。可利用葡萄糖、阿拉伯糖、核糖、半乳糖和蜜二糖;微弱利用麦芽糖和木糖;不能利用纤维二糖、果糖、葡萄糖酸钙、乳糖、甘露糖、甘露醇、松三糖、棉籽糖、鼠。一、菌种简介平台编号:bio-67118规格:冻干物拉丁属名:Lactobacillus buchneri中文名称:布氏乳杆菌拉丁名称:Lactobacillus buchneri来源历史:←陈玺介收藏时间:1995/4/25资源归类编码:15131319101模式菌株:非模式菌株主要用途:研究;生产具体用途:乳酸发酵。四川泡菜块茎类蔬菜发酵复合菌剂。生物危害程度:四类培养基编号:CM0006培养基名称:MRS培养基培养基成分:酪蛋白胨 10.0g,牛肉膏 10.0g,酵母粉 5.0g,葡萄糖 5.0g,乙酸钠 5.0g,柠檬酸二铵 2.0g,Tween 80 1.0g,K2HPO4 2.0g,MgSO4.7H2O 0.2g,MnSO4.H2O 0.05g,CaCO3 20.0g,琼脂 15.0g,蒸馏水 1.0L,pH6.8。*培养CICC 10774时pH需调至5.0.培养温度:30℃需氧类型:好氧保存方法:真空冷冻干燥法用途:研究;生产;乳酸发酵。乳酸发酵。四川泡菜块茎类蔬菜发酵复合菌剂。注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用。二、形态特征革兰氏阳性细菌,杆状,兼性厌氧,不形成芽孢;接触酶阴性,不运动,不产生硫化氢,pH4.5 生长,产DL型乳酸,同型发酵,生长温度20-55℃,最适生长温度48℃。可利用葡萄糖、阿拉伯糖、核糖、半乳糖和蜜二糖;微弱利用麦芽糖和木糖;不能利用纤维二糖、果糖、葡萄糖酸钙、乳糖、甘露糖、甘露醇、松三糖、棉籽糖、鼠。三、主要价值主要用途为研究;生产;其他,具体用途为用于发酵生产乳酸。四、培养条件1、培养基编号:CM00062、培养基成分:酪蛋白胨 10.0g,牛肉膏 10.0g,酵母粉 5.0g,葡萄糖 5.0g,乙酸钠 5.0g,柠檬酸二铵 2.0g,Tween 80 1.0g,K2HPO4 2.0g,MgSO4.7H2O 0.2g,MnSO4.H2O 0.05g,CaCO3 20.0g,琼脂 15.0g,蒸馏水 1.0L,pH6.8。3、需氧类型:好氧4、培养温度:30℃五、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。六、注意事项1、菌种常规培养时间:细菌 1-2 天,酵母 3 天,霉菌 5-7 天,大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接,不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养,如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失,我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作,带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。

参数原理

2021.11.30

人表皮角质形成细胞的功能与分离及相关研究!

            人表皮角质形成细胞的功能与分离及相关研究!一、背景及概述角质形成细胞系一种能合成角质蛋白的上皮细胞。此类细胞为表皮的主体,由表皮深层始逐渐增殖、分化,并不断向表层移行,其间可分成几个层次,表皮最深层为基底层,向上依次为棘层、颗粒层、透明层、角质层,角质蛋白亦依生长层次逐渐合成。在成为角化的角质细胞中,细胞核与细胞器完全消失,细胞亦失去生理功能,而脱落。未脱落部分对机体尚有保护作用,故不必在洗擦身体时用力搓擦,使其过早脱失。人表皮角质形成细胞分离自皮肤组织;表皮位于动物皮肤的外层,由胚胎时期外胚层形成,具有抗摩擦和抗损伤的作用。人表皮角质形成细胞是一种能合成角质蛋白的上皮细胞,此类细胞为表皮的主体,由表皮深层始逐渐增殖、分化,并在成为角化的角质细胞中,细胞核与细胞器完全消失,细胞亦失去生理功能而脱落。未脱落部分对机体尚有保护作用,故不必在洗擦身体时用力搓擦,使其过早脱失。人表皮角质形成细胞主要分布于表皮基底层,在上皮程序性死亡后,细胞产生角化并移向表皮。体外培养的人表皮角化细胞容易导致终末分化,不能充分增殖。角质形成细胞最终产生角质蛋白,在其向角质细胞演变过程中,一般可以分为四层,即基底层、棘层、颗粒层以及角质层。有人把前三层或前二层称为生发层或马尔匹基层。此外,在某些部位,特别在掌跖部位,角质层下方还可见到透明层。二、功能人表皮角质形成细胞在创伤愈合中起至关重要的作用,尤其是严重烧伤患者表皮角质形成细胞的匮乏与患者病程长短、并发症的发生及后期瘢痕的形成均有密切关系,因此应用组织工程技术在体外进行表皮角质形成细胞的分离、培养与保存并应用于临床始终都是烧伤工作者的一个研究热点。三、分离一种体外分离培养人的表皮角质形成细胞的新方法,该方法简便、快速,适合各种皮肤组织如带毛发的头皮、带脂肪的组织等直接分离。这种分离方法与传统的分离方法相比,得到的细胞生长状态及形成单克隆的能力都接近或优于传统方法。具体步骤为:①组织预处理:用镊子将组织置于70%乙醇中30s,清洗表面血等杂物,然后放入含青链霉素(100kU/L青霉素+100mg/L链霉素)的磷酸盐缓冲液(PBS)里浸泡2次,每次3min以达到消毒的目的;②酶消化:先用手术刀将组织完全切碎成匀浆,切碎后将组织转入含酶消化液的50mL离心管中[1g组织用20mL酶消化液(2.5g/LⅠ型胶原酶和2.5g/L解离酶)],混匀。37℃水浴80r/min震荡消化60min。然后加入0.25%的胰蛋白酶到含组织的50mL离心管中(1g组织加入5mL,使其终浓度为0.05%)继续消化30min,最后再加10g/L的DNA酶到含组织的50mL离心管中(1g组织加入100μL)消化5min;③收集细胞:组织消化好后加相同体积的含有10%胎牛血清的DMEM培养基中和消化液,反复吸打,用100μm细胞过滤器过滤,1000r/min离心5min,弃上清,细胞沉淀用含10%胎牛血清的DMEM培养基重悬;④细胞培养:用含10mmol/LRock蛋白激酶抑制剂和10%胎牛血清的DMEM培养基重悬细胞,接种到事先用包被基质处理过的细胞培养瓶(每T75细胞培养瓶细胞数大约在300万~500万)中,培养3d,之后换成CnT07培养基,每2天换液1次。显微镜下观察细胞,待细胞长满时进行传代或后续研究。表皮角质形成细胞按照每T75细胞培养瓶接种细胞数在120万~150万进行传代。分离的表皮角质形成细胞数量较多,贴壁较快且聚团生长,分离3d后许多表皮角质形成细胞团呈克隆样生长,呈典型“铺路石”状,最后连接成片。四、相关研究有研究考察P物质受体(Neurokinin1R,NK1R)在正常人表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞中的表达调控特征。方法是培养人表皮角质形成细胞株HaCaT细胞和真皮成纤维细胞,应用免疫组织化学法检测NK1R在两种细胞中的表达;采用RTPCR方法检测NK1R在两种细胞mRNA水平的表达特征,并采用流式细胞术定量检测在不同刺激因素及药物作用下两种细胞中NK1R的表达调控情况。结果NK1R在HaCaT细胞及真皮成纤维细胞中均有表达,阳性部位位于细胞膜及细胞质。NK1RmRNA在HaCaT细胞上的表达水平要高于在真皮成纤维细胞上的表达。P物质和IFNγ可以上调NK1R在两种细胞上的表达,而LPS抑制了NK1R的表达;抗组胺药盐酸西替利嗪和P物质受体特异性拮抗剂SpantideI可以降低两种细胞上NK1R的表达。因此皮肤角质形成细胞和真皮成纤维细胞在细胞、蛋白及mRNA水平均有NK1R的表达,而且这种表达可被过敏炎症因子调控,提示角质形成细胞和真皮成纤维细胞参与了皮肤免疫调控,神经肽P物质可能在皮肤过敏性炎症中起重要作用。此外,还有研究探讨annexinⅡ在正常人表皮角质形成细胞NHEK)分化中的表达.方法:①体外培养NHEK,采用无血清无钙离子的角质形成细胞生长培养基(KGM),通过改变培养基中的钙离子浓度来调节NHEK的增殖和分化,采用免疫细胞化学(ICC)技术分别检测annexinⅡ在增殖和分化NHEK中的表达。②采用免疫组织化学(IHC)技术检测成人及新生儿表皮NHEK中annexinⅡ蛋白的表达。结果:①低钙(0.07mmolL)培养条件下,annexinⅡ呈弱阳性表达,且主要分布于核周。高钙(1.5mmolL)条件下培养24h后,annexinⅡ仍呈弱阳性表达,但表达的部位出现明显变化,主要分布于细胞间;48h后,annexinⅡ于胞质及胞膜均呈强阳性表达。②人正常皮肤切片的IHC结果显示:annexinⅡ主要分布于基底上层的分化NHEK中.结论:annexinⅡ可能参与人表皮NHEK分化的调控。欢迎访问微生物菌种查询网,本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司,单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务!与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!

应用实例

2021.11.29

地球上的生命或来自外星球上的微生物!

               地球上的生命或来自外星球上的微生物!百欧博伟生物:有关于地球生命的来源,不断都是一个未解之谜,固然达尔文以为,地球上早期的生命,是来自于深海的热泉口之中,但是,构成生命的有机物又从何而来呢?地球上的生命,难道真的只是一连串的化学反响吗?依据报道,前段时间,来自美国佛罗里达理工大学的科学家们,结合欧洲的科学家团队,停止了一项有趣的研讨,这项研讨以为,地球生命是来自于太空之中,以为在宇宙之中,生命的种子无处不在,真的如此吗?谁为地球送来了生命?在研讨地球上生命来源的过程中,不断都有一种观念以为,是陨石、彗星等之类的小天体,为地球送来了生命,这一次,科学家们也是认同这个观念,以为在地球演化早期,不时遭遇小天体撞击的过程中,让来自于宇宙之中的微生物,落在了地球之上。我们都晓得,现代科学研讨以为,宇宙大约降生于138亿年之前,宇宙降生几亿年后,恒星就曾经呈现了,开展到今天,太阳至少是宇宙中的第三代恒星,不可思议,早在太阳系呈现之前,事实上宇宙中可能就有生命,或者是文化存在了。研讨者以为,宇宙中的早期生命,会随同着小天体的撞击,然后从一个星球上,传播到另一个星球之上,逐步由点到面停止扩散,从而在漫长的时间推移后,最终让生命的种子遍及整个宇宙。所以,地球上的早期生命可能也是由此降生的,这也能够解释,为何早期地球上没有氧气,生命依然能够存在,这是由于这些生命种子在宇宙中四处游荡的过程中,自身就是生活在极端恶劣的环境之中。之后,当它们落在了不同的星球上,会依据星球上的气候环境变化,从而进化成不同的生命体,这似乎也意味着,假如一切的宇宙生命,都是来自于宇宙中的早期微生物,那么,生命方式也将是单一的,都会是碳基生物。同时,也有研讨者以为,假如地球并不是太阳系中的第一颗生命星球,那么,可能真的犹如科学家们猜测的那样,地球生命来源于火星。火星陨石为地球送来了生命的种子?上世纪80年代,科学家们在南极,发现了一颗来自于火星的陨石,这颗火星陨石是火星演化早期,遭到一场猛烈地撞击,之后以碎片的方式进入太空,然后遭到地球引力的影响,最终落在了地球之上。令人不可思议的是,在这块火星陨石之上,科学家们居然发现了古老的微生物化石,固然不断到今天,依然有很多不同的观念,比如说有观念以为,这块火星陨石中的微生物化石,可能是它落在地球上之后,被地球生命污染了招致的。不过,也有观念以为,它可能是来自于火星,这可能是人类接触到的第一个火星生命。现代科学研讨以为,火星的宜居期,要比地球呈现的早很多,至少40亿年前,火星上就曾经是比地球还要圆满的宜居环境了。这也意味着,早在地球生命降生之前,可能火星上就有生命存在了,并且从太阳系演化的角度来看,火星很可能是太阳系中第一颗生命星球,之后,随同着火星遭到撞击,搭乘着火星陨石,火星上早期的微生物,也随之来到地球。这些微生物也是地球上生命的种子,充任着上文中我们提到过的“宇宙生命种子”的角色,当然,也有一种可能性是,我们不断在寻觅的火星生命,可能也是由来自地球的生命种子演化而来的。包括此前,也有一些研讨者以为,月球和地球之间的间隔这么近,很可能在撞击的过程中,地球陨石也会携带着微生物落在月球之上,在月球极地地域,可能也有相关的生命记载存在,包括太阳系中的其它星球上,可能都是如此。从这个角度动身,我们似乎能够揣测出:假如生命的种子恰恰落在了一颗和地球环境差不多的星球上,那么,可能也会犹如地球生命普通,阅历了一番演化后,最终成为了一颗具有聪慧生物的星球。只不过,我们不断在寻觅的外星生命和外星文化,它们终究在哪里呢?为何生命遍及宇宙,却从未有人和我们沟通呢?对此,你怎样看?地球上还有很多未解之谜,只要在强大的科学技术的帮助下才能解开,比如上面这个,现在也不可能给出明确的答案,但我信任随着科学技术的发展,咱们也许能解开这个谜团,也能了解地球上其他一些不知道的隐秘。

操作维护

2021.11.29

蜡样状芽孢杆菌的检测方法与注意事项!

                 蜡样状芽孢杆菌的检测方法与注意事项!蜡样芽孢杆菌(学名:Bacillus cereus),又称仙人掌杆菌,是一种革兰氏阳性菌,β溶血性的杆状细菌。经常在土壤和食物中被发现,有些菌株会引起食物中毒,例如"炒饭综合症"(Fried Rice Syndrome);另外一些菌株则对其他动物有益。蜡样芽孢杆菌是兼性厌氧性。与其他芽孢杆菌相同,它会产生防御性的内芽孢。它的致病因子包括施普善(cereolysin)和磷脂酶C(Phospholipase C)。一、菌种简介平台编号:bio-61125提供形式:冻干物拉丁属名:Bacillus cereus中文名称:蜡样状芽孢杆菌属名:Bacillus种名加词:cereus来源历史:←天津市工业微生物研究所菌种中心(1.15512)收藏时间:2008.11.6资源归类编码:15131311101模式菌株:非模式菌株主要用途:研究;生产具体用途:细菌肥料(解磷)。特征特性:G+,菌体杆状,常呈长链状,菌体两端略方形,芽孢椭圆形,中生或近中生。肉汤琼脂平板菌落为白色至淡黄色,较大、扁平、散布。    生物危害程度:四类致病对象:无培养基:蛋白胨 5.0g,牛肉浸取物 3.0g,NaCl 5.0g,琼脂 15.0g,蒸馏水 1.0L,pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O,则有利于产生芽孢。培养温度:30℃资源保藏类型:培养物保存方法:真空冷冻干燥法实物状态:有实物共享方式:公益性共享;资源纯交易性共享;合作研究共享;资源交换性共享。用途:研究;生产;细菌肥料(解磷)。注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用。二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。三、培养条件1、培养基编号:CM00022、培养基成分:蛋白胨 5.0g,牛肉浸取物 3.0g,NaCl 5.0g,琼脂 15.0g,蒸馏水 1.0L,pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入 5mg MnSO4·H2O,则有利于产生芽孢。3、需氧类型:好氧4、培养温度:30℃四、蜡样芽孢杆菌的检测方法国内外对于蜡样芽抱杆菌的检测方法有常规的检测方法;基于PCR技术、酶反应、免疫学技术的快速检测方法。常规检测方法是将分离培养后的可疑菌落做生化试验、溶血试验、协同溶血试验、动物试验、典型运动等鉴定,被确定为蜡样芽孢杆菌后进一步进行血清分型。常规检验步骤为:样品→增菌→分离培养(并作菌数测定)、分离纯化→革兰染色镜检/生化及菌落观察/生化反应试验→肠毒素检查。 五、注意事项1、菌种常规培养时间:细菌 1-2 天,酵母 3 天,霉菌 5-7 天,大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接,不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养,如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失,我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作,带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。六、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒,将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热;立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位,使管壁破裂;再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养:用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀,并取 100μL 转接到固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。3、注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态,延迟期较长,需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏(特殊除外)。6、冻干管打开后需一次用完,不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行,用完冻干管应灭菌处理后丢弃。

参数原理

2021.11.29

小鼠胚胎干细胞D3的一般培养方法!

                 小鼠胚胎干细胞D3的一般培养方法!细胞简介平台编号:bio-54191提供形式:复苏状态 拉丁属名:D3细胞名称:D3;小鼠胚胎干细胞D3中文名称:小鼠胚胎干细胞D3描述:小鼠全能性胚胎干细胞,每支细胞量1×106动物种别:小鼠,129/Sv+c/+p品系 组织来源:小鼠囊胚内细胞团形态:球形克隆培养基和添加剂:mES完全培养液配方(600 ml): DMEM (Invitrogen 12430) 497 ml ES级FBS (biochrom S4115) 90 ml Glutamax (Invitrogen 35050) 6 ml NEAA (Invitrogen 11140) 6 ml LIF (Millipore ESG1107) 60 μl(终浓度为1000U/ml) β-Mer (Invitrogen 21985) 1.5 ml 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度。供应限制:仅供研究之用。REFERENCE:Doetschman TC, et al. The in vitro development of blastocyst-derived embryonic stem cell lines: formation of visceral yolk sac, blood islands and myocardium. J. Embryol. Exp. Morphol. 87: 27-45, 1985. PubMed: 3897439 Williams RL, et al. Myeloid leukaemia inhibitory factor maintains the developmental potential of embryonic stem cells. Nature 336: 684-687, 1988. PubMed: 3143916 Gossler A, et al. Transgenesis by means of blastocyst-derived embryonic stem cell lines. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 9065-9069, 1986. PubMed: 3024164 Doetschman T, et al. Targeted mutation of the Hprt gene in mouse embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 8583-8587, 1988. PubMed: 3186749 Chambon P, et al. Genetically engineered mice containing alterations in the genes encoding retinoic acid receptor proteins. US Patent 6,486,381 dated Nov 26 2002注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用细胞的运输保存采用干冰保存运输。收到细胞时,若干冰已经完全融化,请立即将细胞复苏培养;若尚留有干冰,请立即将细胞放入液氮中保存待用,请按指定条件贮存细胞,切不可将细胞置于高温环境。小鼠胚胎干细胞D3的一般培养方法1、组织块培养法A)按照前述方法取材,将组织剪成或切成1mm3大小的小块,并加入少许培养基使组织湿润。B)将小块均匀涂布于瓶壁,每小块间距0.2 cm~12.5px,一般在25mL培养瓶(底面积为437.5px2)可接种20~30小块为宜,小块放置后,轻轻翻转培养瓶,使瓶底朝上,然后于瓶内加入适量培养基盖好瓶塞,将瓶倾斜放置在37℃温箱内。C)培养2~4小时,待小块贴附后,将培养瓶缓慢翻转平放,静置培养,动作要轻,严禁摇动和来回振荡,以防D3小鼠胚胎干细胞由于冲动而使小块漂起而造成培养失败,若组织块 不易贴壁可预先在瓶壁涂一薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。开始培养时培养基不宜多,以保持组织块湿润即可,培养24小时后再补液,培养初期移动和观察时要轻 拿轻放,开始几天尽量不去搬动,以利贴壁和生长,培养3~5天时可换液,一方面补充营养,一方面去除代谢产物和漂浮小块所产生的毒性作用。2、消化培养法该方法是采用前述的消化分散法,将妨碍细胞生长的细胞间质(包括基质、纤维等)去除,使细胞分散形成细胞悬液,然后分瓶培养。3、悬浮细胞培养法对于悬浮生长的细胞,如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化,可采用低速离心分离,直接培养,或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!

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2021.11.26

尖孢镰刀菌安瓿瓶冻干管打管说明!

                 尖孢镰刀菌安瓿瓶冻干管打管说明!尖孢镰刀菌是一类既可侵染植物又可在土壤内生存的兼性寄生真菌。和其它植物病原菌一样,存在着种下分化,可侵染许多植物寄主,具有多种专化型。 菌株简介平台编号:bio-19558规格:冻干物拉丁属名:Fusarium oxysporum中文名称:尖孢镰刀菌 拉丁属名:Fusarium 种名加词:oxysporum Schltdl. 其它中心编号: 收藏时间*:2007-7-15 来源历史:中国林科院热带林业研究所转 原产国:中国 资源归类编码:15151916102 模式菌株:非模式菌株 主要用途:研究;教学 特征特性:在PSA培养基上气生菌丝绒状,白色、粉白色至淡青莲色,基物表面青莲色,基物无色。有些菌株长蓝绿色菌丝团,菌丝成束生紧贴管壁。小型分生孢子数量多,卵圆形、肾形,假头状着生于产孢细胞上,5.0~12.6×2.5~4.0?m;大型分生孢子镰刀形,稍弯,向两端较均匀的逐渐变尖,基部常有一显著的突起称为足胞,1~7隔膜,多数3隔膜。1~2隔膜的大小10.0~34.0×2.5~4.0?m;3~4隔膜的大小23.0~56.6×3.0~5.0?m;5~7隔膜的大小31.0~60.0×3 生物危害程度:四类 致病对象:无 分离基物:喜树 采集地区:福建邵武 采集具体地点:山林 培养基信息:培养基编号:14 培养基名称:PDA 培养温度:28 资源保护类型:培养物 保藏方法:定期移植法 共享方式:资源交换性共享 提供形式:斜面培养物 实物状态:有实物注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用知识概述尖孢镰刀菌(F.oxysporum)是一种世界性分布的土传病原真菌,寄主范围广泛,可引起瓜类、茄科、香蕉、棉、豆科及花卉等100多种植物枯萎病的发生。尖孢镰刀菌属半知菌类(Imperfecti fungi)、从梗孢目(Moniliales)、瘤座孢科(Tuberculariaceae)、镰刀菌属(Fusarium)。在PDA平板上培养,菌落突起絮状,菌丝白色质密。菌落粉白色,浅粉色至肉色,略带有紫色,由于大量孢子生成而呈粉质。菌落高3~5mm,小型分生孢子着生于单生瓶梗上,常在瓶梗顶端聚成球团,单胞,卵形;大型分生孢子镰刀形,少许弯曲,多数为3隔。厚垣孢子尖生或顶生,球形。尖镰孢枯萎病病菌在自然条件下或人工培养条件下可产生小型分生孢子、大型分生孢子和厚垣孢子三种类型,小型分生孢子无色,单胞,卵圆形、肾脏形等,长假头状着生,大小5~12um×2~3.5um。大型分生孢子无色,多胞,镰刀形,略弯曲,两端细胞稍尖,大小19.6~39.4um×3.5~5.0um。厚垣孢子淡黄色,近球形,表面光滑,壁厚,间生或顶生,单生或串生,对不良环境抵抗力强。安瓿瓶冻干管打管说明一、打管说明1、安瓿瓶开封:用浸过75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、菌株恢复培养:用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基,滴入安瓿管内,轻轻振荡,使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液,移植于1-2支建议的培养基试管中,并在建议的条件下培养。3、注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在6-10℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,需要连续两次继代培养才能正常生长。4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。二、特别注意事项1、微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方,室温放置时问过长会导致菌种衰退;2、菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染:3、斜面菌种保藏时间通常为1-2个月,应根据菌种状况及时转接;冻干菌种保藏时间通常为5~10年;4、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时与微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。

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2021.11.26

肝星状细胞的使用方法与注意事项!

                  肝星状细胞的使用方法与注意事项!一、细胞简介平台编号:bio-106322规格:5*10 5细胞名称:肝星状细胞注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用二、细胞详述肝星状细胞位于Disse间隙内,紧贴着肝窦内皮细胞和肝实质细胞。其形态不规则,胞体呈圆形或不规则形,常伸出数个星状胞突包绕着肝血窦。正常情况下肝星状细胞表现为富含维生素A脂滴的静止型,其功能主要有:代谢和贮存维生素A、储存脂肪、合成和分泌胶原及糖蛋白、蛋白多糖等基质成分、合成基质金属蛋白酶及其组织抑制剂、表达细胞因子及受体、参与肝窦血流调节。肝星状细胞是细胞外基质的主要来源,正常情况下肝星状细胞处于静止状态。当肝脏受到炎症或机械刺激等损伤时,肝星状细胞被激活,其表型由静止型转变为激活型,肝星状细胞激活并转化为肌成纤维细胞样细胞,各种致纤维化因素均把HSC作为最终靶细胞。激活的肝星状细胞一方面通过增生和分泌细胞外基质参与肝纤维化的形成和肝内结构的重建,另一方面通过细胞收缩使肝窦内压升高。三、细胞特性1)细胞来源于人正常肝脏组织。2)细胞鉴定:CD95L免疫荧光染色为阳性(静止状态);结蛋白(Desmin)或者平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式:长梭状,星状细胞,贴壁培养。四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核六、注意事项1、收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100*,200*各一张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响,故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态,故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明,期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 微生物菌种查询网自设细胞系板块,是细胞株提供中心,专业提供代次低、周期短、活性好的细胞株。与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!

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2021.11.26

巴氏生孢八叠球菌的特点与培养及保藏方法!

             巴氏生孢八叠球菌的特点与培养及保藏方法!一、菌株简介平台编号:bio-01936提供形式:冻干物拉丁属名:Sporosarcina pasteurii中文译名:巴氏生孢八叠球菌拉丁学名:Sporosarcina pasteurii原始编号:DSM 33菌株来源:←DSMZ保藏人:周宇光直接来源国家:德国保藏时间:6/18/2004其他保藏编号:=ATCC 11859 =CCM 2056 =NCIB 8841 =NCTC 4822生物危害:四类模式菌株:模式菌株菌株用途:模式菌株;Produces urease培养温度:30℃培养基:0907    分离源:土壤用途:模式菌株;产生脲酶应用领域:产酶微生物/产淀粉酶菌株;极端微生物/耐碱菌注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用存储条件:液氮超低温冻结法;-80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法二、菌株特点1、该菌为需氧芽孢杆菌,细菌繁殖体G兰氏染色阴性呈紫色,细菌芽胞孔雀绿着色。其细菌繁殖体对培养基要求低,在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨琼脂上生长良好,表面粗糙呈米黄色。2、适生长繁殖湿度为56-65℃,培养24h即可形成菌落,37℃下24h看不到菌落。3、本生物指示剂载体为高级滤纸片,染菌量为5×105-5×106cfu/片或1×106cfu/片,封装在小纸袋内,热死亡时间为121℃,3.9 min阳性,19 min阴性;D10值1.3-1.9 min,符合美国药典第十一版规定标准。4、该菌无毒,热抗稳定,在冰箱内4℃下保存一年抗力无明显下降,在常温(20℃左右)可保存1个月。三、培养条件1、营养肉汁琼脂:牛肉膏3.0g,蛋白胨10.0g,NaCl 5.0g,琼脂15.0g,蒸馏水1.0L,pH7.0。[注]培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O,则有利于产生芽孢。pH7.0。121℃,15min。2、需氧类型:好氧3、培养温度:55℃四、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。五、注意事项1、菌种常规培养时间:细菌1-2天,酵母3天,霉菌5-7天,大型真菌7-10天。2、试管斜面种请尽快转接,不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养,如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失,我司不负责任。4、使用者应保证菌种的安全储存和操作,带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。

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2021.11.25

紫色杆菌的使用范围与培养方法!

                 紫色杆菌的使用范围与培养方法!紫色杆菌是Janthinobacterium属的微生物,原产地为中国。菌株为呈球杆状,革兰氏染色为阴性,繁殖方式为裂殖。菌落为圆形,凸起,菌落为紫色,表面湿润光滑,边缘整齐。营养类型为异养,好氧,不需光照。主要用途为分类;研究;教学。菌种的培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 微生物菌种的培养1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。微生物菌种查询网,本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司,单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务!与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!

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2021.11.25

硝酸盐胨水培养基的实验方法与应用!

               硝酸盐胨水培养基的实验方法与应用!一、背景硝酸盐胨水培养基用于鉴别绿脓杆菌分解硝酸盐产气试验(GB15979-2002,《中华人民共和国药典》2005年版,化妆品卫生规范微生物检验方法2007版)。原理:蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源、维生素和生长因子;某些细菌可将硝酸盐还原为亚硝酸盐,并将亚硝酸盐分解产生氮气。配方(每升):蛋白胨10g酵母膏粉3g硝酸钾2g亚硝酸钠0.5g,最终pH7.2±0.2。二、使用方法1、称取硝酸盐蛋白胨水培养基(硝酸盐胨水培养基)15.5g,加入蒸馏水或去离子水1L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装于带有小倒管的试管中,115℃高压灭菌20min。2、取待检菌的新鲜纯培养物,接种于硝酸盐胨水培养基中,置36±1℃培养1—4d。3、在培养基的小倒管内有气泡产生者,为阳性反应;无气泡产生者为阴性反应。三、实验方法1、培养基阳性组:取稀释后的各试验菌悬液1ml分别加于预先制备的试管培养基中,每种细菌接种两支试管。同时分别取1ml菌悬液加于无菌空平皿中,用于计数,每种细菌做两个平板。2、培养基阴性组:即空白对照,即不添加菌液。3、接种量计数:步骤1中的平皿中,细菌倾注胰酪大豆胨琼脂培养基,霉菌和白色念珠菌倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基。同时每种培养基做1个空白。4、培养条件:无菌检查:20~25℃培养14天或直至出现浑浊(不超过14天)MPN计数:30~35℃培养箱中培养3天控制菌检查:30~35℃培养箱中培养18~24小时四、应用用于贫营养好氧反硝化菌群GNY净化微污染水源水试验研究:针对微污染水源水的氮源污染问题,深入研究了贫营养好氧反硝化细菌的脱氮特性,在课题组前期分离的23株贫营养好氧反硝化细菌中筛选并组合得到了高效好氧反硝化功能菌群,讨论了优势生态菌群的最佳投菌量和对微污染水源水的脱氮效能的影响。结果:(1)从水库沉积物中筛选到一株好氧反硝化细菌Acinetobacter sp.Sxf14,对该菌株脱氮特性进行研究,并将其接种到C/N(总有机碳与总氮的比值)为1.2的微污染水库源水中,以探究其对实际源水总氮的去除效果.结果显示:Sxf14能以硝酸盐和亚硝酸盐为唯一氮源进行好氧反硝化.反应48 h后,NO3--N和NO2--N的去除率分别达74.84±0.86%和40.52±1.49%,TN去除率最高达到65.07±1.56%和41.33±0.98%;72 h内,微污染水库源水的TN浓度由2.46±0.02 mg/L降到1.68±0.01 mg/L,去除率达到31.7±0.14%。因此,该菌株具有反硝化能力,能承受较低的碳氮比,降低微污染源水中的氮素,本研究可为微污染水体的菌剂修复技术提供科学依据。(2)采用菌源组合构建出优势贫营养好氧反硝化功能菌群GNY(G107+N299+81Y),研究不同碳氮比对组合菌群脱氮性能的影响,结果表明:随着碳氮比值的增大,好氧反硝化菌的反应速率逐渐增强,功能菌群能够适应贫营养环境,当C/N为3,硝氮去除率达到57.18%,总氮去除率达到43.52%,且能维持较长时间的好氧反硝化活性。(3)将生态菌群GNY分别接入水库纯源水和灭菌后的水库源水小试中,NO3--N最高去除率达到35.9%,TN最高去除率达到46.78%;在纯源水培养基中,NO3--N最高去除率达到27.97%,TN最高去除率达到43.58%,投菌组比对照组的硝氮去除率高15.26%,,总氮去除率高17.38%;说明该生物菌群可以适应源水贫营养环境,并能够有效地降低微污染水体中的氮素。欢迎访问微生物菌种查询网,本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司,单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务!与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!

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2021.11.25

短刺小克银汉霉的实验内容与使用方法!

                短刺小克银汉霉的实验内容与使用方法!短刺小克银汉霉,属霜霉目,白锈科,拉丁名为Cunninghamella blakesleeana。短刺小克银汉霉,细胞圆球状,在直角两个平面交替分裂形成四联状,一般细胞成对生,单生者罕见,不成链状排列。革兰氏阳性,不运动,兼性厌氧。在MRS培养基上菌落小,呈白色。沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。接触酶阴性,不产细胞色素。功用:产酸,调节胃肠道菌群,维持肠道微生态平衡。在动物体内对病原微生物有颉颃作用,可竞争性地抑制病原微生物,增强动物机体的免疫功能,产生有益的代谢产物,激活酸性蛋白酶的活性,参与机体的新陈代谢,防止有害物质产生。一、菌种简介平台编号:bio-11010规格:冻干物拉丁属名:Cunninghamella blakesleana中文译名:短刺小克银汉霉拉丁学名:Cunninghamella blakesleana原始编号:大连M135菌株来源:←东北科学研究所大连分所直接来源国家:中国保藏时间:11/12/1953其他保藏编号 生物危害:四类模式菌株:非模式菌株菌株用途:研究培养温度:25-28℃培养基:0014    提供形式:冻干物注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用储存条件:冻干菌种和试管斜面请置于 6-10℃冷藏。二、培养条件PDA 培养基马铃薯浸取液 1.0 L 葡萄糖 20.0g 琼脂 15.0g PH 7.0[注]马铃薯浸取液配制方法:马铃薯洗净去皮,取 200 克切成小块 , 加水 1000 毫升煮沸 30分钟后滤去马铃薯块,将滤液补足 1000ml。 三、菌种的使用与注意1、使用方法:直接加入配合饲料中或先按一定倍数稀释后,再加入饲料中混匀。也可预先活化后再发酵饲料或直接供动物饮用。具体用量参考产品使用说明。2、注意事项:储存时,提高水分含量则菌群活力明显下降。高温制粒时,必须对产品进行包被处理。不饱和脂肪酸对乳酸片球菌具有颉颃作用,配合日粮中添加乳酸片球菌,应尽量避免与添加的油脂直接接触。饲料中的钙也会明显影响乳酸片球菌的活性。四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌五、注意事项1、菌种常规培养时间:细菌 1-2 天,酵母 3 天,霉菌 5-7 天,大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前,建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态,延迟期较长,如在说明建议的培养时间还未长起来,请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间,直至菌种培养完成,有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长,一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养,如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失,我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时,在操作过程中应严格控制厌氧条件:制作培养基时,应使用厌氧螺口试管,并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气,使用者应保证菌种的安全存储和操作,带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org)。六、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂(应避免过多水蒸气影响菌种的复苏),用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml(建议勿超过 0.5ml)适宜的液体培养基(不添加琼脂),滴入管内,轻轻振荡,待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状,在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中(不超过 2 支,中国微生物菌种查询网提供的培养基配方中有琼脂,请务必做成试管斜面配方中没有琼脂试管中液体培养基不超过 5ml),并在建议的条件下静止培养。3、冻干管打开后需一次用完,不能留存。另外,安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂,里面菌体为少数,复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上,否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行,用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时,请务必记录好菌种的编号和制备批号,否则不予售后。

参数原理

2021.11.24

胶质芽孢杆菌有哪些作用与功效?

                  胶质芽孢杆菌有哪些作用与功效?胶质芽孢杆菌又称硅酸盐细菌,其重要特性是能够分解出长石、云母等矿物中的钾、硅,也能分解出磷灰石中的磷,以及分泌植物生长刺激素及多种酶,以增强作物对一些病害的抵抗力。一、菌种简介平台编号:bio-51767规格:冻干物拉丁属名:Bacillus mucilaginosus Krassilnikov中文学名:胶质芽孢杆菌 拉丁学名:Bacillus mucilaginosus Krassilnikov 界:细菌界 用途:生物肥料其它编号:AS1.232培养基编号:3培养温度:30℃培养时间:24-48 小时用途:细菌肥料注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用二、培养基Azotobacter Medium (固氮菌培养基)KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8g CaSO4.2H2O 0.1gMannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract (微量)Na2MoO4.2H2O Trace (微量) MgSO4.7H2O 0.2gDistilled water (蒸馏水) 1000ml Yeast eaxtract(酵母膏) 0.5gAdjust (调) pH to 7.2三、杆菌作用这类细菌是用作生物肥料的最好菌种,以促进土壤无效磷钾的转化,增加土壤磷钾的供给,提高作物产量,其胶质芽孢杆菌解磷、解钾、解硅的强度超强。胶质芽孢杆菌能够产生碳酸酐酶,对二氧化碳的固定具有一定的作用。  四、杆菌功效1、分解出长石、云母等矿物中的钾、硅,也能分解出磷灰石中的磷,具有溶磷、释钾和固氮功能,同时能在生长繁殖过程中产生有机酸、氨基酸、多糖、激素等有利于植物吸收和利用的物质。2、本品在土壤中繁殖后,分泌植物生长刺激素及多种酶,以增强作物对一些病害的抵抗力;也抑制其他病原菌的生长。3、菌体内的钾在菌体死亡后,游离出来,又可被植物吸收利用。作为微生物肥料中的一种重要功能菌,可提高土壤速效钾、磷含量,提高作物产量和品质等多种效果。五、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请放-20°C 保存。 六、注意事项1)冻干首次活化,干粉要全部用完,不能预留,参照“开管说明”,用无菌吸管吸取 0.3ml-0.5的培养液(即以上建议的培养基配方,不加琼脂)或者无菌水,滴入冻干管中,轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液,接种在培养基上(建议不超过 2 支斜面或者平板,如接种液体培养基则试管中液体不超过 5ML 为宜); 经过冷冻干燥保藏,菌种处于休眠状态,复苏培养时可能会延迟生长,这时需较长的培养时间; 若您收到的是已复苏的培养物(非冻干菌),则可以直接用于您的实验,或根据需要转接培养;如有不明白之处,请务必先咨询我单位技术人员,避免不必要的损失;2)微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方,室温放置时间过长会导致菌种衰退;3)菌种操作应在无菌条件下进行;转种完毕,应经灭菌再做丢弃处理;4)应根据菌种状况及时转接,冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年;5)菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和微生物菌种查询网联系。6)如若有菌种复苏不活或者污染等情况,请在收到菌钟后 2 个月内联系,逾期不予受理;7)打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。8)安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍,并保持在火焰旁操作。

操作维护

2021.11.24

脱氮付球菌的培养与传代方法及使用范围!

            脱氮付球菌的培养与传代方法及使用范围!一、菌种简介平台编号:bio-52960拉丁属名:Paracoccus denitrificans菌株名称:脱氮付球菌其它编号:ATCC19367培养基编号:2培养温度:30℃培养时间:18-24 小时用途:研究使用范围:仅供科研使用注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用保藏条件:斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。请勿长期置于室温二、培养基*营养琼脂培养基(NA)*胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB)*LB 培养基(以上培养基三选一即可)三、培养方法培养基 乳酸菌培养基 Ⅱ:Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐温) 80 1g K2HPO4 2g Na-acetate (醋酸钠) 5g Diamine citrate (柠檬酸二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled water (蒸馏水) 1000m pH 6.5-6.8。121℃,15min。四、传代方法 ①冻干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂轮在冻干管壁划两圈,掰断,用200μL无菌水或培养基充分溶解,平板涂布,活化培养。 ②斜面:试管口用75%酒精擦拭后,火焰灼烧,后用无菌接种铲切块,挑取接入平板或斜面,培养。五、保藏方法1、低温存法:①简单保存法,将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4℃冰箱保存,保存时间不超过1~2个月,若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡,以隔绝外界空气和水汽,保持时间可达3~4个月;②液氮超低温保存法,将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中,密封于安瓿管内,然后控制冷却速度,使安瓿管温度逐步下降至 -35℃时,即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物,都可用此法长期保存。2、脱水存法:①沙土保存法,能产孢子的细菌、放线菌及霉菌可采用此法保存,即将沙和土以3:2比例混合,经稀酸处理洗净过筛,装入小试管内,装置高度为1cm;灭菌2~3次,烘干后即可将在斜面培养基上生长良好的孢子,用无菌蒸馏水2~2.5ml制成孢子悬液,吸取少许加入沙土管中,经真空抽干,外观呈松散状态,于4℃冰箱保存,保存期可达5~7年。② 冷冻干燥法,将孢子悬浮液与保护剂(一般用脱脂牛奶或血清)相混合,放在安瓿管内于-20~-30℃的乙醇浴中速冻。然后,在低温下用真空泵抽干,并用五氧化二磷或干冰使水汽结冻,熔封安瓿管,于低温下保存。保存期可达5~10年之久。③ 石蜡油封存法,在斜面菌种培养物上,倒上灭菌后的石蜡油,高出斜面1cm,于4℃冰箱或低温干燥处保存,此法不适用于能利用石蜡油作碳源的微生物,保存期为一年以上。六、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,酿酒酵母菌组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 七、注意事项1)冻干首次活化,干粉要全部用完,不能预留,参照“开管说明”,用无菌吸管吸取 0.3ml适宜的培养液(即以上建议的培养基配方,不加琼脂)或者无菌水,滴入冻干管中,轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液,接种在培养基上(建议不超过 2 支平板或者斜面,或接种液体培养基,则试管液体不超过 5ml 为宜);2)经过冷冻干燥保藏,菌种处于休眠状态,复苏培养时可能会延迟生长,这时需较长的培养时间;若您收到的是已复苏的培养物(非冻干菌),则可以直接用于您的实验,或根据需要转接培养如有不明白之处,请务必先咨询我单位技术人员,避免不必要的损失;3)微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方,室温放置时间过长会导致菌种衰退;4)菌种操作应在无菌条件下进行;转种完毕,应经灭菌再做丢弃处理;5)应根据菌种状况及时转接,冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年;6)菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和微生物菌种查询网联系。7)如若有菌种复苏不活或者污染等情况,请在收到菌钟后 2 个月内联系,逾期不予受理;8)打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。9)安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍,并保持在火焰旁操作。

参数原理

2021.11.24

微生物培养基使用中常出现的问题及解答!

              微生物培养基使用中常出现的问题及解答!百欧博伟生物:工作中发现,有部分检验员对培养基的使用存在障碍,借此机会和大家分享讨论一下大家常见的对培养基存在的一些疑问。一、培养基煮沸溶解后再高压灭菌,还是直接高压灭菌存在疑惑。拿麦康凯琼脂举个例子,溶解后灭菌,平板上没有不溶的结晶紫,没有紫色的斑点;相对比未溶解灭菌的,平板上有结晶紫和紫色的斑点。所以正确的做法是先煮沸溶解后再高压灭菌。二、培养基PH值为什么不在标准范围内?其实出现这个情况的问题有很多种,大致我分为这么6大点:1、质量不好(生产厂家出厂时pH就不正确);2、灭菌问题(高压灭菌温度过高或灭菌时间过长,导致葡萄糖类焦化从而pH降低);3、保存时间(超过保质期或结块);4、水质出现问题(可以用去离子水、纯化水、蒸馏水不能用矿泉水、自来水);5、保存温度(保存温度过高);6、光线直射总结本人认为以上6点都可能导致培养基pH出现偏差,如果出现此类问题,建议逐一排查,直到问题解决。三、培养基高压灭菌时为什么会焦化?不少检验人员在实验时,发现经过灭菌的培养基有焦化现象,我认为引起此现象的主要原因有以下4点:1、可能你灭菌的时候温度超过了121℃(正常115-116℃20min即可);2、灭菌时间过长;3、培养基在容器中装的太多(不要超过容器容量的80%);4、灭完菌的培养基在高温环境中保存的时间过长,这些都会导致培养基发生焦化现象。四、培养基PH怎么测定?通常分两种情况:1、对于无需高压灭菌的培养基,先煮沸溶解后再冷却至25℃时,测定其pH值(固体培养基至少测2个点,取其平均值);2、对于需要高压灭菌的培养基,高压灭菌后,冷却至25℃测其pH(固体培养基至少测2个点,取其平均值)。五、含琼脂培养基在倒平板为什么有时候不凝固或凝固不好?针对以上情况,我做了分析:1、针对需要高压灭菌的培养基,倒平板时候要先摇匀(因为琼脂分子量比较大,在冷却过程中容易沉淀到底部,导致琼脂分散不均匀);2、针对无需高压灭菌的培养基,一次煮沸溶解后不能直接倒平板,应重复煮沸溶解3-5次(因为一次不能确保琼脂完全溶解)。六、为什么同一品牌的不同批号,粉末颜色有差别?分析可能有3个原因:1、此培养基成分含有染料或指示剂;2、不同批次粉末培养基含水量不同,一般要求≤6%,含水量越高,颜色越深;3、加工时球磨时间越长颜色越深。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!

参数原理

2021.11.23

人角膜上皮细胞的相关研究与主要功能!

                 人角膜上皮细胞的相关研究与主要功能!一、产品概述平台编号:bio-73591产品规格:5×10^5cells/T25细胞培养瓶英文名称:Human Eyes;Normal Corneal Epithelial Cells细胞名称:人角膜上皮细胞组织来源:眼角膜组织培养条件:原代细胞取组织现分注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用二、细胞简介人角膜上皮细胞分离自眼角膜组织;角膜位于眼球前壁的一层透明膜,约占纤维膜的前1/6,从后面看角膜呈正圆形,从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同,中央部最薄。角膜有十分敏感的神经末梢,如有外物接触角膜,眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明,角膜并没有血管,透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层,由前向后依次为:上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。其主要功能如下:①角膜是唯一的无血管的组织,具有透明的特性和合成许多蛋白的功能,分三层细胞层,外层即是上皮细胞;②角膜上皮细胞能参与先天性免疫,能感应病原体存在并发出信号从而激活角膜防御系统;③角膜上皮细胞能高效表达醛脱氢酶。角膜上皮细胞的体外培养对研究角膜的生理学、病理学、免疫学以及分子生物学都是极为重要的手段,常用于研究细胞代谢产物、病毒感染、各种生长因子和药物对细胞生长的影响。本公司生产的角膜上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法,并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10^5cells/瓶;细胞经PCK免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。三、培养基信息M199、FBS、上皮细胞生长添加剂、Hydrocortisone、Insulin、Transferrin、Epinephrine、Penicillin、Streptomycin等。我们推荐使用Procell人角膜上皮细胞专用完全培养基作为体外培养人角膜上皮细胞的培养基。四、相关研究上皮细胞覆盖于身体表面并衬贴于体内空腔器官腔面的细胞。其排列有明显极性,一面朝向身体表面或腔面,称游离面;一面向着深部的结缔组织,称基底面。上皮细胞具有强大的角生和更新能力。上皮组织具有保护、吸收、分泌和排泄等作用。当上皮细胞受损时,则影响机体的防御功能。人角膜上皮细胞分离自眼角膜组织;角膜系眼球外膜呈半球形向前突出的部分。占外膜的1/6,横为椭圆形,约11.5~12mm,垂直径约10.5~11mm,厚约1mm,中央部稍薄约0.8mm;前面曲率半径均值为7.8mm,后面为6.8mm。角膜由致密结缔组织组成,可分为5层,即上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层及内皮细胞层。五、细胞功能人角膜上皮细胞其主要功能如下:①角膜是唯一的无血管的组织,具有透明的特性和合成许多蛋白的功能,分三层细胞层,外层即是上皮细胞;②人角膜上皮细胞能参与先天性免疫,能感应病原体存在并发出信号从而激活角膜防御系统;③人角膜上皮细胞能高效表达醛脱氢酶。人角膜上皮细胞的体外培养对研究角膜的生理学、病理学、免疫学以及分子生物学都是极为重要的手段,常用于研究细胞代谢产物、病毒感染、各种生长因子和药物对细胞生长的影响。微生物菌种查询网自设细胞系板块,是细胞株提供中心,专业提供代次低、周期短、活性好的细胞株。与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!

应用实例

2021.11.23

鼠伤寒沙门氏菌单层冻干管打管说明书!

               鼠伤寒沙门氏菌单层冻干管打管说明书!鼠伤寒沙门氏菌,Salmonella typhimurium.是引起急性胃肠炎的主要病原菌之一。也是微生物遗传学发展的一种非常重要的细菌。一、菌种简介平台编号:bio-00012规格:冻干粉拉丁属名:Salmonella typhimurium中文名:鼠伤寒沙门氏菌 外文名:Salmonella typhimurium. 它是:引起急性胃肠炎的主要病原菌之一 也是:微生物遗传学发展的一种的细菌用途:卫矛醇发酵管的质控用菌株保存条件:常温,避光批号:50115-13主要用途:研究注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用二、菌种概述鼠伤寒沙门氏菌,是一群非适应性或泛嗜性的沙门氏菌,具有广泛的宿主,是世界各国分离率最高的菌型之一。该菌能引起各种家禽和哺乳动物的传染病,也可引起人类感染,具有重要的公共卫生意义。三、菌种属性属于沙门氏菌B群。O抗原有1,4,5,12,H抗原单相为1,双相为1,2。它是引起食物中毒而发生炎症的有名的细菌,但通过P22噬菌体转导、溶原化变换以及组氨酸操纵子等性状出现的调节机制的分析,也成为了促进微生物遗传学发展的一种重要的细菌。四、分布与传播本菌广泛分布自然界,存在于家禽、家畜、鼠类等多种动物的肠道。该菌在外界环境中抵抗力较强,常温下可迅速繁殖、耐低温、干燥、不耐热,55℃、1小时,60℃、25分钟即可灭活;对酸敏感,pH五、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请放-20°C 保存。 六、注意事项1)冻干首次活化,干粉要全部用完,不能预留,用 0.1-0.2ml 的培养液或无菌水溶解,接种在 2 个斜面上,因冻干粉处于休眠状态,请勿接种多支斜面或平板,以避免因接种量不足而导致复苏不成功;如有不明白之处,请务必先咨询我单位技术人员,避免不必要的损失;2)微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方,室温放置时间过长会导致菌种衰退;3)菌种操作应在无菌条件下进行;转种完毕,应经灭菌再做丢弃处理;4)应根据菌种状况及时转接,冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年;5)菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和微生物菌种查询网联系。七、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封:用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部,在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖,注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞,用 75%酒精棉消毒瓶口部分,使用无菌吸管注入0.2ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。2、注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的,,开启后必须一次使用完,不能留菌粉下次使用;另外,安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂,里面菌体为少数,复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上,否则可能造成复苏不成功;3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态,有时延滞期较长,如在说明书建议的培养时间还未长起来,请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间,直至菌种培养完成;有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长,一般来说,菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏(特殊除外)。冻干管打开后需一次用完,不能留存。5、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。

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2021.11.23

动物肝星状细胞分离培养试剂盒的应用!

               动物肝星状细胞分离培养试剂盒的应用!一、背景动物肝星状细胞分离培养试剂盒适合于培养肝星状细胞。试剂盒包含:(1)肝星状细胞组织解离液(2)肝星状细胞组织处理缓冲液(3)肝星状细胞成纤维抑制剂(4)肝星状细胞组织洗液(5)肝星状细胞生长因子及血清(6)肝星状细胞基础培养基(7)肝星状细胞组织预备液。肝星形细胞分离自肝脏组织;肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官,并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用;肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里最大的器官,位于机体中的腹部位置,在右侧横隔膜之下,位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方,胃的上方。肝脏是机体消化系统中最大的消化腺,为一红棕色的V字形器官。肝星形细胞分布于肝脏的间隙内,是合成、分泌细胞外基质的主要来源,在肝纤维化的发生中处于最重要地位。肝星形细胞是肝脏特有的间充质细胞,约占肝脏细胞总数的8%-13%。作为肝脏合成细胞外基质的主要细胞群,肝星形细胞不仅能分泌蛋白多糖、糖蛋白等细胞外基质成分,合成一定量的胶原酶以维持正常的基底膜结构,还能通过其突起的收缩参与肝窦的微循环调节。此外,肝星形细胞能通过合成肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子、表皮生长因子等促进肝细胞增殖和肝再生。二、应用用于醛固酮经非基因组途径激活氧化应激通路调控大鼠肝星状细胞收缩迁移的机制研究:研究醛固酮经小窝所介导的非基因组通路,调控HSC内氧化应激水平,激活RhoA/Rock等相关信号通路的机制,深入探讨醛固酮经cav-1相关的非基因组通路调控HSC活化、收缩、迁移的机制,为阐明醛固酮在门脉高压形成过程中的调控机制提供新线索,为探寻门脉高压及肝纤维化的防治靶点提供新的思路。研究方法:1、分离培养原代大鼠肝星状细胞:原位灌注结合离体灌注、密度梯度离心结合差速贴壁法分离并培养原代大鼠肝星状细胞,以肝星状细胞标记蛋白a-SMA免疫荧光染色鉴定细胞纯度,选择体外培养第2-5代大鼠肝星状细胞进行相关体外细胞试验。2、小窝蛋白提取实验:以10cm细胞培养皿培养原代大鼠肝星状细胞,待培养皿内细胞融合度达80%时,进行12小时饥饿处理,并给予相关药物干预,处理完成后裂解细胞并匀浆,蔗糖密度梯度离心分离蛋白并以冷丙酮沉淀纯化,蛋白免疫印迹实验检测目的蛋白含量变化。3、胆固醇耗竭与重装填实验:向贴壁生长且状态良好的原代大鼠肝星状细胞培养皿中加入终浓度为5nM的MCD溶液,于37℃恒温细胞培养箱孵育30min后,以温PBS缓冲液轻轻冲洗细胞,即可去除细胞内胆固醇;以5m1浓度为50nM的MCD溶液溶解lmg胆固醇,取该溶液加入胆固醇耗竭处理后的细胞培养基内,使MCD终浓度为5nM,细胞置于37℃恒温细胞培养箱孵育30min,即完成胆固醇重装过程。4、Transwell细胞迁移实验:将制备好的原代大鼠肝星状细胞悬液计数后加入Transwell上室内,于上、下室中分别加入无血清培基和含20%胎牛血清的完全培养基,施加相应药物干预后将细胞置于孵箱内培养适当时间,孵育完成后,弃培基,以PBS清洗细胞并以甲醇固定细胞,随后进行结晶紫染色并于显微镜下计数迁移细胞数目。

参数原理

2021.11.22

人毛囊干细胞的特点与应用及注意事项!

               人毛囊干细胞的特点与应用及注意事项!人毛囊干细胞是指在人的毛囊外根鞘隆突部中发现一种多能性细胞,属于成体干细胞,成体干细胞是具有增殖和分化潜能的细胞,具有自我更新复制的能力,能够产生高度分化的功能细胞和APSC多能细胞。它是一类存在于组织中的原始细胞,具有多能性和自我更新能力,能够产生至少一种以上其它高度分化细胞。一、细胞简介拉丁属名:人毛囊干细胞规格:5*10 5细胞名称:人毛囊干细胞位置:人的毛囊外根 特点:慢周期性、未分化性 分化潜能:诱导分化为神经元细胞注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用二、细胞详述毛囊干细胞是在人的毛囊外根鞘隆突部中的一种。毛囊干细胞属于成体干细胞,具有,在体内处于静止状态,在体内培养活内环境作用下表现出惊人的增殖能力。研究发现,毛囊干细胞具有多向分化潜能,它可以分化成表皮、毛囊、皮脂腺,参与皮肤创伤愈合的过程。三、细胞特点人毛囊干细胞具有其它成体干细胞的共性,即慢周期性、未分化性、自我更新和体外增殖能力强等特点。另外,当相邻部位受到损伤后,毛囊干细胞可从原定位的隆突部中迁出并参与损伤部位修复。四、细胞特性1) 组织来源于正常皮肤组织。2) 细胞鉴定:角蛋白(CK-19)免疫荧光染色为阳性。3) 经鉴定细胞纯度高于90%。4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5) 细胞生长方式:铺路石状细胞,不规则细胞,贴壁培养。五、细胞的潜在应用目前,虽然毛囊干细胞的相关研究还处于实验室阶段,但现有的研究成果预示其将具有广泛的应用前景。1)创伤修复与上皮再生中的应用。2)用于治愈神经损伤。3)可以作为药物治疗或基因治疗的靶点。4)用于研究皮肤细胞癌变机理和新药物的筛选。六、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1) 1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2) T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。七、产品使用1) 本产品仅能用于科研2) 本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3) 本产品未通过用于活体诊断的审核八、注意事项1、收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100*,200*各一张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响,故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态,故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明,期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

应用实例

2021.11.22

细菌培养的条件与注意点及具体操作步骤!

                细菌培养的条件与注意点及具体操作步骤!细菌培养是一种用人工方法使细菌生长繁殖的技术。细菌在自然界中分布极广,数量大,种类多,它可以造福人类,也可以成为致病的原因。大多数细菌可用人工方法培养,即将其接种于培养基上,使其生长繁殖。培养出来的细菌用于研究、鉴定和应用。细菌培养是一个复杂的技术。一、培养条件编辑培养时应根据细菌种类和目的等选择培养方法、培养基,制定培养条件(温度、pH值、时间,对氧的需求与否等)。一般操作步骤为先将标本接种于固体培养基上,做分离培养。再进一步对所得单个菌落进行形态、生化及血清学反应鉴定。培养基常用牛肉汤、蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、血液等和某些细菌所需的特殊物质配制成液体、半固体、固体等。一般细菌可在有氧条件下,37℃中放18~24小时生长。厌氧菌则需在无氧环境中放2~3天后生长。个别细菌如结核菌要培养1个月之久。二、注意点由于细菌无处不在,因此从制备培养基时开始,整个培养过程必须按无菌操作要求进行,否则外界细菌污染标本,会导致错误结果;而培养的致病菌一旦污染环境,就会引起交叉感染。以疾病诊断为目的进行的培养,要选择合适的标本(血、尿、便、脓液、分泌物等),并应结合临床情况解释所得结果。三、具体培养步骤以光合细菌培养方法为例。光合细菌培养的方法,按次序分为容器、工具的消毒,培养基的制备,接种和培养管理四个步骤。(一)容器、工具的消毒。(二)培养基的制备1、培养用水如果培养的光合细菌是淡水种,菌种培养可用蒸馏水,生产培养可用消毒的自来水(或井水)配制。如果培养的光合细菌是海水种,则用天然海水配制培养基,注意在海水中加入磷元素时,不能用磷酸氢二钾,应用磷酸二氢钾,不然会产生大量沉淀。2、灭菌和消毒菌种培养用的培养基应连同培养容器用高压蒸气灭菌锅灭菌。小型生产性培养可把配好的培养液用普通铝锅或大型三角烧瓶煮沸消毒。大型生产性培养则把经沉淀砂滤后的水用漂白粉(或漂白液)消毒后使用。3、培养基配制根据所培养种类的营养需要选择合适的培养基配方。按培养基配方把所需物质称量,逐一溶解,混合,配成培养基。也可先配成母液,使用时按比例加入一定的量即可。(三)接种培养基配好后,应立即进行接种。光合细菌生产性培养的按种量比较高,一般为20%~50%,即菌种母液量和新配培养液虽之比为1∶4~1∶1,不应低于20%,尤其是微气培养,接种量更应高些,否则光合细菌在培养液中很难占绝对优势,影响培养的最终产量和质量。(四)培养管理光合细菌的培养过程中,管理工作包括日常管理操作和测试,生长情况的观察、检查以及出现问题的分析处理等三个方面。4、日常管理和测试(1)搅拌和充气:光合细菌培养过程中必须充气或搅拌,作用是帮助沉淀的光合细菌上浮获得光照,保持菌细胞的良好生长。小型厌气培养常用人工摇动培养容器的方法使菌细胞上浮,每天至少摇动三次,定时进行。大型厌气培养则用机械搅拌器或使用小水泵使水缓慢循环运转,保持菌体悬浮。微气培养是通过充气帮助菌体上浮,因为培养液中溶解氧含量增加,光合细菌繁殖受到抑制,产量下降,所以必须严格控制充气量。一般采用定时断续充气,充气量控制在1~1.5升/(升·h)之间,溶解氧量保持在1×10-6以下。(2)调节光照度:培养光合细菌需要连续进行照明。在日常管理工作中,应根据需要经常调整光照度。白天可利用太阳光培养,晚上则需要人工光源照明,或完全利用人工光源培养。人工光源一般使用碘钨灯或白炽灯泡。不同的培养方式所要求的光照强度有所不同。一般培养光照强度应控制在2000~5000lx之间。如果光合细菌生长繁殖快,细胞密度高,则光照强度应提高到5000~10000lx。光照强度可通过调整培养容器与光源的距离或使用可控电源箱调节。(3)调节温度:光合细菌对温度的适应范围很广,一船在23~39℃的范围内均能正常生长繁殖,可不必调整温度。在常温下培养也可通过调整,将温度控制在光合细菌生长繁殖最适宜的范围内,使光合细菌更好地生长。(4)酸碱度的测定和调整:在培养光合细菌的过程中,必须注意酸碱度的变化。由于光合细菌的大量繁殖,菌液的pH值上升,这意味着光合细菌正处于指数生长期。但当pH值超过最适范围甚至生长的适应范围时,光合细菌的生长达到顶点,随后生长下降。如果能及时调整菌液的酸碱度,使pH值保持在最适范围,则光合细菌能继续生长繁殖。为了延长光合细菌的指数生长期,提高培养基的利用率和单位水体的产量,测定和调整PH值是非常重要的。一船采用加酸的办法来降低菌液的酸碱度,醋酸、乳酸和盐酸部可使用,最常用的是醋酸。在日常的管理工作中,必须每天或隔天测定菌液的pH值,当pH值上升超出最适范围,即加酸调整。如果在培养过程中不测定、调整酸碱度,当光合细菌的生长达到一定密度后pH值也上升到9以上,细菌生长受阻,此时应采收或再扩大培养。在培养过程中不调整PH值,获得的最终产量低。5、培养成败的标准编辑生长情况的观察和检查光合细菌生长情况的好坏是培养成败的标准。在培养过程中,可以通过观察菌液的颜色及其变化来了解光合细菌生长繁殖的大体情况,菌液的颜色是否正常,接种后颜色是否由浅变深,均反映光合细菌是否正常生长繁殖以及繁殖速度的快慢。必要时可通过显微镜检查,了解情况。6、问题的分析和处理编辑通过日常管理、检测、检查,了解光合细菌的生长情况,就可以结合当时环境条件的变化进行分析,找出影响光合细菌生长繁殖的原因,采取相应的措施。影响光合细菌生长的原因很多,内因是菌种是否优良,外因是光照、温度、营养、敌害和厌气程度等。温度、光照和pH值都能影响着光合细菌的生长,而且温度、光照和pH值之间是互相制约的,温度与光照的强弱是对立统一的,所以光合细菌生长的最适条件应是互应的,即温度高,光照应弱;温度低,光照应强。如果是温度高,光照强,pH值就会迅速升高,培养基产生沉淀,抑制光台细菌的生长;如果温度低,光照弱,光合细菌得不到最佳能源,生长速度也慢。经试验得出光合细菌生长的最适条件是:①温度15~20℃时,光照30000~50000lx,培养基pH值为7.0;②温度25~30℃时,光照为3000~5000lx,培养基的pH值为7.0。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!

参数原理

2021.11.22

全球生物科技发展态势及对我国的启示!

                   全球生物科技发展态势及对我国的启示!                                百欧博伟生物 全球生物科技发展呈现以下五点趋势:生物多样性保护形势严峻;生物资源挖掘利用更加深入;新兴技术与工具的快速发展推动生物科学与技术向纵深发展;人类修饰生命创造生命的能力不断提升促进工程生物学应用的不断扩展;全球科技交叉融合日益凸显。当前,全球新一轮科技革命和产业革命加速发展,新技术的发展正在改变科学发现的方式,促进生物科学领域产生更多重要突破。自1953年DNA双螺旋结构的解析以来,生物技术发展迅猛,从“人造生命”、基因组编辑研究不断取得突破性进展,再到脑-机接口、神经芯片等交叉融合应用的出现,多年来生物技术一直占据着年度科技突破主流。随着全球生物科技的飞速发展和应用拓展,多学科交叉融合共生,相互促进,推动前沿技术颠覆性创新和新一代科技革命。生物产业逐渐表现出与信息产业深度融合、交替轮动的发展势头,展现出推动产业革命和结构调整的潜力,有望从根本上解决当前人类共同面对的人口、粮食、资源、环境、能源等重大问题,是促进经济社会可持续发展的有效途径。各国在生物科技领域的竞争也日益加剧。本文梳理了美国、加拿大、欧盟、英国等国家和地区发布的生物经济战略、实施路线图和相关的项目部署;介绍了全球生物科技领域的重要进展;并针对研发现状和生物技术与其他技术之间交叉融合的大趋势,对我国相关领域发展提出4点建议。一、国际重大战略规划和政策措施1、强化顶层设计,展望生物经济可持续发展2019年,世界主要经济体加强生物科技领域战略布局,展望下一代生物经济发展前景并提出国家级规划与路线图(表1)。美国将生物经济确定为政府联邦机构重点研发的关键领域之一;加拿大发布首个国家生物经济战略,以促进加拿大生物质和残余物的最大价值化利用,同时减少碳足迹,实现有效管理自然资源的目标;欧盟提出在2030年将生物基产品或可再生原料的份额增加到化学工业的有机化学品原材料和原料总量的25%;英国、意大利、奥地利也都发布国家生物经济战略,面向下一代生物经济提出战略部署和规划要点。此外,针对发展生物科学应对粮食安全、能源清洁增长和健康老龄化挑战的路线图——《英国生物科学前瞻》,英国发布生物科学领域《2019年交付计划》,详细阐述将要采取的行动,以支持交付目标的实现;日本提出到2030年建成世界最先进的生物经济社会;韩国旨在通过产业政策的根本性创新和率先投资,推动韩国生物健康产业迅速发展并进入全球领先地位。                       2、加强项目部署,推动前沿颠覆性技术变革按照国家生物经济发展规划要点,各国在合成生物制造、基因编辑、生物医药等前沿交叉融合性生物科技方面加强项目部署和配套举措,积极驱动科技产业颠覆性变革(表2)。同时,各国在生物传感器、生物成像技术,以及生物大数据基础设施建设方面也部署了多个项目,推动生物科技在应对医药、材料、能源、环境和气候变化等挑战方面发挥积极作用。          二、近期生物科技领域五大研究趋势1、生物物种数量下降明显,生物多样性保护形势严峻                       英国肯特大学研究人员在《自然-通讯》发表的评论性文章指出,必须把生物多样性摆在气候变化政策的核心位置。目前,生物多样性正受到前所未有的威胁。2019年5月,联合国发布的《生物多样性和生态系统服务全球评估报告》显示,近百万种物种可能在几十年内灭绝。在过去30年间,人们对自然资源的需求提高了一倍,尽管自然保护政策取得了一定进展,但生物多样性、生态系统功能迅速减弱意味着全球自然保护、自然可持续利用和发展的任务十分艰巨。2019年8月,世界自然基金会发布题为《树冠之下》的报告对全球森林生物多样性现状进行了分析。结果表明,1970—2014年间,455个受监测的森林特异性物种的群体数量平均减少了一半以上;其中生物种群下降的现象在哺乳动物、爬行动物以及两栖动物中表现一致。2019年10月,英国生态学与水文学研究中心、野生生物组织、政府机构和研究所等超过70个机构联合发布《自然状况报告2019》,基于对大量数据的分析表明,自1970年以来英国物种的平均数量和分布呈下降趋势,15%的物种面临灭绝威胁,2%的物种已经永久灭绝,不同物种之间的地理分布平均缩小5%。中国科学家在生物多样性研究领域取得了显著成果。中国科学院植物研究所首次揭示了不同功能型土壤真菌驱动亚热带森林群落多样性的作用模式,成功破译了亚热带森林生物多样性维持“密码”,有助于保育和修复我国各类退化亚热带森林生态系统。南京大学与中国科学院联合团队在“天河二号”超级计算机支持下,将化石记录重现为生物演化历史,绘制出古生代海洋生物多样性曲线,对认识当今地球生物多样性面临的挑战具有重要启示意义。2、生物资源挖掘利用更加深入,为解决全球性问题提供有效路径随着全球人口数量增加,耕地面积减少,对光合作用机制的深入解析,提高植物光合效率成为进一步增加粮食单产的有效手段。中国科学院植物研究所揭示了硅藻利用其独特结构高效捕获、利用光能的机制。延续前期研究工作,这是对硅藻首个光合膜蛋白结构的解析,为研究硅藻的光能捕获、利用和光保护机制提供了重要的结构基础。英国谢菲尔德大学解析菠菜中光合作用关键元件——细胞色素b6 f复合物的3.6分辨率低温电子显微镜结构,为理解该复合物如何在光合作用中发挥催化和调节作用提供了结构依据。基因组技术发展加快了性状鉴定和良种选育,从而提高了作物的环境适应能力和生产力。日本埼玉大学发现对β-三酮类除草剂广谱抗性的水稻基因,有助于培育抗除草剂作物,便于农田杂草控制。清华大学与中国科学院遗传与发育生物学研究所合作解析了植物抗病小体的结构与功能,为更好利用抗病蛋白提供了新的可能。中国科学院遗传与发育生物学研究所利用两个基因编辑器定向进化水稻OsACC基因并获得除草剂抗性突变,为快速获得有益农艺性状提供了可能。                           此外,研究人员在利用生物资源缓解能源、环境问题方面也取得了多项成果。韩国高级科学技术研究所的研究人员利用新型工程微生物实现了脂肪酸的高效生产,使其更适合于大规模使用,以期改变目前生物燃料的应用现状。美国蒙大拿州立大学等美国机构与英国朴茨茅斯大学合作设计出一种具有分解木质素活性的酶,有助于利用木质素制造日用品,减少对石油的依赖。美国麻省理工学院研究人员一直致力于微生物治理方面的研究,2019年已获得对环境中镉或锶的吸收能力增强的酿酒酵母工程菌。近期该团队又获得新的进展,新的工程酵母菌不仅能吸收环境中的重金属,还能将沉淀的金属硫化物纳米粒子进行金属再萃取,在废水废气处理及环境保护方面显示出巨大的应用前景。3、生物成像技术朝着更清晰、更精确、实时、活体方向发展生物学的发展和新学科分支的形成离不开研究方法和工具的创新,生物成像技术作为一种重要的技术手段在生命科学和生物医学领域发挥着不可或缺的作用。美国霍华德休斯医学研究所等机构合作完成果蝇完整大脑成像,实现了纳米级的清晰度,有助于科学家跟踪神经元之间的联系,为解析大脑的决策机制奠定了重要基础。该团队还将超分辨率的光学显微镜技术和电子显微镜技术相结合,开发了称为cryo-SR/EM的新技术,以3D形式呈现出清晰、精准的细胞内部详细视图。美国加州理工学院开发了一套全新的超声成像系统,实现在活体动物观测基因表达。该系统的后续应用与开发,将为研究和探索活体动物的基因表达和调控提供更好的方式。基因组被转录、复制以及修复的过程中都涉及到DNA的旋转。哈佛大学开发了新的单分子成像追踪技术——基于可折叠DNA转子的成像追踪技术(Origami Rotor-based Imaging and Tracking,ORBIT),可用于在极高时空分辨率和高通量情况下追踪DNA分子旋转,为DNA旋转测量和酶动力学等研究提供了有力的新工具。美国霍华德休斯医学研究所等机构开发了一种非传统成像方法——DNA显微镜,这是一种将基因型与表型联系起来的细胞可视化新方法,未来或有助于鉴定出最适合靶向特定癌细胞的免疫细胞,加快免疫疗法的发展速度。4、基因组的合成和改造能力进一步增强,促进工程生物学应用扩展合成基因组的设计和创建为理解生物学及其工程化提供了强大的工具。美国生物科技公司研究人员将生命“字母表”的数量增加了一倍,首次合成出包含8个碱基的DNA。该研究系统性证明合成碱基与天然碱基可彼此识别结合,并形成稳定的双螺旋结构,这对于寻找其他生命形式非常重要。英国医学研究理事会分子生物学实验室在全基因组水平对一株大肠杆菌进行重新编码,并人工合成整套新的遗传密码以取代其天然基因组,为重编码多种非标准氨基酸奠定了基础。由于此类人工合成大肠杆菌基因组与野生型差异较大,未来有可能用于依赖于细菌合成的药物生产。同时,该研究团队还开展相关研究,为精确、快速、大规模(兆碱基)创建合成基因组工程操作提供关键的技术支持。美国莱斯大学等多机构利用协同组装实现合成电路的复杂信号处理,极大地扩展了工程生物对化学、物理和环境变化的程序化反应。美国麻省理工学院和哈佛大学合作将CRISPR-Cas9和逆转录酶整合在一起,开发出一种新型基因编辑工具,达到更精确、更高效和高度通用的效果。中国科学院神经科学研究所等多个机构合作开发了基于新型脱靶检测技术GOTI(Genome-wide Off-target analysis by Two-cell embryo Injection)的基因编辑工具安全性评估的新工具,有望成为新的行业检测标准。瑞士苏黎世联邦理工学院将两个基于CRISPR-Cas9的核心处理器整合到人体细胞中,创建了一个生物双核处理器,意味着向创建功能强大的生物计算机迈进了一步。5、新技术不断突破推动生物科学进入“计算设计”时代借助信息技术的理论与方法,生物科学获取内在创新动力,取得了从蛋白质、基因组和生物体设计到生物制造过程设计多项创新成果。美国华盛顿大学在利用计算机程序从头设计蛋白质的研究领域处于全球领先地位,利用蛋白质结构预测的Rosetta算法平台,从头设计了抗癌蛋白药物、根据环境变形的蛋白和具有生物活性的蛋白开关等一系列产物。利用上述蛋白开关即插即用特性,加州大学旧金山分校等多个机构合作开发生物反馈网络,实现对内源性信号通路和合成基因电路的反馈控制。哈佛大学和哈佛医学院合作创建了除定向进化和理性设计以外的第三种蛋白质设计方法——利用深度学习直接从氨基酸序列中预测天然蛋白和从头设计蛋白质功能;与现有方法相比,可将成本降低两个数量级。瑞士苏黎世联邦理工学院首次在计算机算法的帮助下构建了一个简化的人工细菌基因组,有助于构建更适合的工程菌用于生产治疗药物和其他化学品。美国佛蒙特大学等多个机构合作,利用超级计算机设计开发全球首个青蛙细胞制造的“活体机器人”,证实了计算机设计生物体的可行性。美国伊利诺伊大学开发了结合人工智能设计、构建、测试和学习,实现番茄红素生物制造过程的全自动化机器人平台。此类全自动的算法驱动生物制造平台将有望引领未来智能制造的发展。三、启示与建议国务院印发《“十三五”战略性新兴产业发展规划》,明确提出加快生物产业创新发展步伐,培育生物经济新动力。从国际重大战略规划和政策措施来看,生物经济是各国对于未来经济发展比较认可的模式,美、欧、日、韩等国家和地区都从国家战略的层面积极谋划布局,不断探索适合本国的最佳路径。同时,布局前沿颠覆性技术,增强颠覆性创新仍然是各国积极抢占的战略制高点。从生物科技领域的研发态势来看,新兴技术与工具的快速发展推动生物科学与技术纵深发展:借助超高分辨率显微镜等新工具,使人类在认识生命过程中能够更快速地接近真相;借助计算机辅助设计等新技术,基因组合成和改造能力不断提高,人类在修饰生命和创造生命的过程中达到了事半功倍的效果。无论是生命科学的研究工具开发,还是学科本身的发展和研究方面,学科之间、科学与技术之间、不同技术之间的交叉融合趋势日益凸显。我国应面向世界科技发展前沿,紧抓融合发展的窗口期,以国家战略需求为导向,以国家重大项目为牵引,着眼理论、技术、人才、应用和市场等多个维度,系统布局、重点规划,全面提升我国的新兴交叉融合领域的竞争力。1、促进重点领域创新发展,制定国家生物经济发展战略借鉴各国的生物经济发展战略,我国需加强国家生物经济战略布局,制定适合国情的中长期发展规划,采取切实可行的政策措施。鼓励引导全社会的资源和科研力量,稳定支持工程生物学相关学科基础研究以及与重点领域的跨学科研究,发展生物医药、生物制造、生物农业、生物能源、生物环保等重要应用领域,加大面向创新企业的公共和社会投资,培育发展生物服务新兴业态,形成若干生物经济发展高地,促进经济社会可持续发展。2、调整和优化学科布局,培养学科交叉融合创新人才为契合国家重大战略需求和经济社会发展需求,需要重新优化和调整学科布局,在保持传统优势学科发展基础上,重点建设合成生物学、生物工程学、计算生物学、类脑智能科学、生物影像学和生物医学信息学等前沿新兴技术学科门类,整合建立学科群与交叉学科中心,促进多学科关联交叉融合,拓宽大学、研究机构和创新型企业的交流合作。面向世界科技前沿,构建多学科融合创新的综合性研究机构与育人平台,加快培育由学科专业单一型向多学科融合型转变的创新人才,带动学科竞争力和我国科技水平的整体提升。3、瞄准和支持核心技术研发,培育前沿颠覆性创新能力经过近年发展,我国更多领域科技创新态势已由跟跑为主转向并跑和领跑。中国在生物技术领域的合成生物学、基因编辑等方面研究都取得了全球瞩目的创新成果,逐渐培育出领跑世界的技术与产业。虽然,与先进国家相比,我国在创新能力,基础设施等若干方面仍存在一定差距,但在脑-机接口、类脑智能、智能穿戴、DNA存储、生物计算/细胞计算、计算机辅助设计(例如蛋白设计、药物设计)等前沿交叉的技术创新领域差距尚未拉开,部分领域正处于竞跑状态,未来宜以问题为导向,紧紧围绕攀登战略制高点、强化关键环节的任务部署,,加快生物大数据、人工智能等新型数字基础设施建设,促进关键核心技术自主研发突破,建立产业孵化空间和加速器,加速关键应用技术转移转化,推动产业创新发展。4、制定和完善产业扶持政策,加强应用市场引导与监督生物技术发展日新月异,创新成果不断。在管理方式方面,需要改变以往的分割化模式,促进资源整合和产学研用一体化,全面营造有利于新兴产业蓬勃发展的市场环境。生物技术产业近年蓬勃发展,正进入历史机遇转折点。学科之间、技术之间交叉融合创新必将孕育出新的产业和应用市场,创造新的经济增长点。因此对于新兴技术和产业,需要降低准入门槛,例如取消最低注册资本的规定,鼓励民营资本进入,积极培育由高端产业引领,具有国际竞争力的产业集群;营造宽松的市场氛围,简化审批手续,便利新技术和新产品进入市场;同时,结合实际情况,动态灵活地加强对市场主体的服务和监管。

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2021.11.18

人胚胎成纤维细胞的培养步骤与使用方法!

              人胚胎成纤维细胞的培养步骤与使用方法!一、基本信息平台编号:bio-83942产品规格:T25瓶/1x 10^6 cells拉丁属名:M-22细胞名称:M-22(人胚胎成纤维细胞)种属:人 年龄(性别):胚胎 组织来源:胚胎,皮肤,肌肉 生长特性:贴壁 细胞形态:成纤维细胞样 生长培养基:MEM +10% FBS +1% P/S 推荐换液频率:2~3次/周培养条件:气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用二、细胞简介胚胎成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞分化而来。该细胞不仅能提供多能性干细胞生长的物质,也能分泌维持干细胞多能性的关键生长因子。作为饲养层细胞,必须通过丝裂霉素C或辐射阻止该细胞的增殖。经处理的细胞也能用于产生有用的培养基,用于自由饲养的多能性干细胞的培养。三、M-22(人胚胎成纤维细胞)的培养步骤1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,进行离心收集,1000RPM条件下离心8-10分钟,去除上清,按冻存数量加入血清及DMSO,冻存比例为90%FBS+10%DMSO。PS:若客户收到2ml小管细胞,收到细胞后,用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内,严格无菌操作;将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿,加入5ml左右完全培养基混匀,放入培养箱过夜培养后查看细胞密度:若密度未超过80%,换液继续培养,视情况传代或者冻存。若密度超过80%,可直接进行传代(方法同上)。对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3、轻轻吹打细胞,完全脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。4、按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法二:可选择半数换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1) 1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2) T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。五、产品的使用1)本产品仅能用于科研2) 本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核六、注意事项1、收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100*,200*各一张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响,故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态,故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明,期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。5、客户在细胞培养过程中,有任何技术问题应及时和微生物菌种查询网联系,我们随时给予解答。

参数原理

2021.11.18

胎牛血清的知识概述及应用!

                      胎牛血清的知识概述及应用!一、背景胎牛血清是一种性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体,胎牛血清应取自剖腹产的胎牛,胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。胎牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。1、提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。2、提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。3、有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。4、是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。5、起酸碱度缓冲液作用。6、提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。二、应用用于不同浓度胎牛血清对大鼠髓核间充质干细胞生物学特性影响研究:研究大鼠髓核间充质干细胞(NPMSC)体外培养的最佳血清浓度并探讨椎间盘退变的机制。方法:用胶原酶、胰酶序贯消化法从SD大鼠腰部和尾部的椎间盘组织中提取NPMSC,并进行体外培养,将其传代。(1)利用流式细胞仪对第3代传代的NPMSC细胞表型CD29、CD34、CD24、CD90、CD105进行鉴定;(2)利用普通PCR鉴定体外培养的NPMSC细胞基因Sox2、Nanog的表达;(3)在37℃、21%O2、5%CO2的细胞培养箱中用成骨、成软骨、成脂培养液诱导培养第3代传代NPMSC,24周以后,用染色剂对其进行染色,观察其成脂、成骨、成软骨能力。(4)在37℃、21%O2、5%CO2的细胞培养箱中用不同浓度(0%、5%、10%、20%、30%)的DMEM-F12血清培养液培养第3代传代的NPMSC,72小时以后,利用CCK-8法检测细胞的增殖,并采用RT-PCR检测细胞蛋白多糖、Ⅱ型胶原、SOX9的mRNA表达,借助流式细胞仪对细胞进行细胞凋亡的检测。结果:(1)大鼠NPMSC的成骨、成软骨能力强,成脂能力较差,且其细胞表面高度表达CD29、CD90、CD105,低度表达CD24、CD34,细胞基因Sox2、Nanog高度表达。(2)随着培养液血清浓度增加,OD值增大,NPMSC的凋亡率降低,细胞蛋白多糖、Ⅱ型胶原、SOX9基因的mRNA表达增加。欢迎访问微生物菌种查询网,本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司,单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务!与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!

应用实例

2021.11.18

微生物实验室的管理制度!百欧博伟生物

                微生物实验室的管理制度!百欧博伟生物百欧博伟生物:微生物实验室管理制度一个良好的实验室必须有一套完善的管理制度,如果管理紊乱,将严重影响分析数据的质量。一、实验室管理制度 1、实验室应制定仪器配备管理、使用制度,药品管理、使用制度,玻璃器皿管理、使用制度,并根据安全制度和环境条件的要求,本室工作人员应严格掌握,认真执行。2、进入实验室必须穿工作服,进入无菌室换无菌衣、帽、鞋,戴好口罩,非实验室人员不得进入实验室,严格执行安全操作规程。3、实验室内物品摆放整齐,试剂定期检查并有明晰标签,仪器定期检查、保养、检修, 严禁在冰箱内存放和加工私人食品。4、各种器材应建立请领消耗记录,贵重仪器有使用记录,破损遗失应填写报告;药品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让,更不得私自拿出。5、禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗,实验室内不得带入私人物品,离开实验室前认真检查水电,对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。6、负责人严格执行本制度,出现问题立即报告,造成病原扩散等责任事故者,应视情节直至追究法律责任。二、仪器配备、管理使用制度1、食品微生物实验室应具备下列仪器:培养箱、高压锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、离心机、超净台、振荡器、普通天平、千分之一天平、烤箱、冷冻干燥设备、匀质器、恒温水浴箱、菌落计数器、生化培养箱,电位 pH计、高速离心机。2、实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求,保证准确可靠,凡计量器具须经计量部门检定合格方能使用。3、实验室仪器安放合理,贵重仪器有专人保管,建立仪器档案,并备有操作方法,保养、维修、说明书及使用登记本,做到经常维护、保养和检查,精密仪器不得随意移动,若有损坏需要修理时,不得私自拆动、应写出报告、通知管理人员,由经理同意填报修理申请、送仪器维修部门。4、各种仪器(冰箱、温箱除外),使用完毕后要立即切断电源,旋钮复原归位,待仔细检查后,方可离去。5、一切仪器设备未经设备管理人员同意,不得外借,使用后按登记本的内容进行登记。6、仪器设备应保持清洁,一般应有仪器套罩。7、使用仪器时,应严格按操作规程进行,对违反操作规程的因管理不善致使仪器械损坏,要追究当事者责任。三、药品管理、使用制度1、依据本室检测任务,制定各种药品试剂采购计划,写清品名、单位、数量、纯度、包装规格,出厂日期等,领回后建立账目,专人管理,每半年做出消耗表,并清点剩余药品。2、药品试剂陈列整齐,放置有序、避光、防潮、通风干燥,瓶签完整,剧毒药品加锁存放、易燃、挥发、腐蚀品种单独贮存。3、领用药品试剂,需填写请领单、由使用人和室负责人签字,任何人无权私自出借或馈送药品试剂,本单位科、室间或外单位互借时需经科室负责人签字。4、称取药品试剂应按操作规范进行,用后盖好,必要时可封口或黑纸包裹,不使用过期或变质药品。四、玻璃器皿管理、使用制度1、根据测试项目的要求,申报玻璃仪器的采购计划、详细注明规格、产地、数量、要求,硬质中性玻璃仪器应经计量验证合格。2、大型器皿建立账目,每年清查一次,一般低值易耗器皿损坏后随时填写损耗登记清单。3、玻璃器皿使用前应除去污垢,并用清洁液或2%稀盐酸溶液浸泡24 h后,用清水冲洗干净备用。4、器皿使用后随时清洗,染菌后应严格高压灭菌,不得乱弃乱扔。五、安全制度1、进入实验室工作衣、帽、鞋必须穿戴整齐。2、在进行高压、干燥、消毒等工作时,工作人员不得擅自离现场,认真观察温度、时间,蒸馏易挥发、易燃液体时,不准直接加热,应置水浴锅上进行,试验过程中如产生毒气时应在避毒柜内操作。3、严禁用口直接吸取药品和菌液,按无菌操作进行,如发生菌液、病原体溅出容器外时,应立即用有效消毒剂进行彻底消毒,安全处理后方可离开现场。4、工作完毕,两手用清水肥皂洗净,必要时可用新洁尔灭、过氧乙酸泡手,然后用水冲洗,工作服应经常清洗,保持整洁,必要时高压消毒。5、实验完毕,即时清理现场和实验用具,对染菌带毒物品,进行消毒灭菌处理。6、每日下班,尤其节假日前后认真检查水、电和正在使用的仪器设备,关好门窗,方可离去。六、环境条件要求1、实验室内要经常保持清洁卫生,每天上下班应进行清扫整理,桌柜等表面应每天用消毒液擦拭,保持无尘,杜绝污染。2、实验室应井然有序,不得存放实验室外及个人物品、仪器等,实验室用品要摆放合理,并有固定位置。3、随时保持实验室卫生,不得乱扔纸屑等杂物,测试用过的废弃物要倒在固定的箱筒内,并及时处理。4、实验室应具有优良的采光条件和照明设备。5、实验室工作台面应保持水平和无渗漏,墙壁和地面应当光滑和容易清洗。6、实验室布局要合理,一般实验室应有准备间和无菌室,无菌室应有良好的通风条件,如安装空调设备及过滤设备,无菌室内空气测试应基本达到无菌。7、严禁利用实验室作会议室及其他文娱活动和学习场所。

操作维护

2021.11.17

水产食品检验的基本要求和检验方法!

                水产食品检验的基本要求和检验方法!1、范围本标准规定了水产食品检验的基本要求和检验方法。本标准适用于即食动物性水产干制品,即食藻类食品和腌、醉制生食动物性水产品及其糜制品和熟制品的检测。2、规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款,凡是注明日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本,凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB/T 4789.1  食品卫生微生物学检验  总则GB/T 4789.2  食品卫生微生物学检验  菌落总数测定GB/T 4789.3  食品卫生微生物学检验  大肠菌群测定GB/T 4789.4  食品卫生微生物学检验  沙门氏菌检验GB/T 4789.5  食品卫生微生物学检验  志贺氏菌检验GB/T 4789.7  食品卫生微生物学检验  副溶血性弧菌检验GB/T 4789.10 食品卫生微生物学检验  金黄色葡萄球菌检验GB/T 4789.15 食品卫生微生物学检验  霉菌和酵母菌计数3、设备和材料3.1 现场采样用品3.1.1 采样箱、篮。3.1.2 灭菌塑料袋。3.1.3 袋盖搪瓷盘。3.1.4 灭菌带塞广口瓶。3.1.5 灭菌刀、镊子、剪子。3.1.6 灭菌棉签。3.1.7 带绳编号牌。3.2 实验室检验用品见 GB/T 4789.2、GB/T 4789.3、GB/T 4789.4、GB/T 4789.5、GB/T 4789.7、GB/T 4789.10、GB/T 4789.15。4、培养基和试剂见 GB/T 4789.2、GB/T 4789.3、GB/T 4789.4、GB/T 4789.5、GB/T 4789.7、GB/T 4789.10、GB/T 4789.15。5、操作步骤5.1 样品的采取和送检现场采取水产食品样品时,应按检验目的和水产品的种类确定采样量。除个别大型鱼类和海兽只能割取其局部作为样品外,一般都采完整的个体,待检验时再按要求在一定部位采样。在以判断质量鲜度为目的时,鱼类和体形较大的贝甲类虽然应以一个个体为一件样品,单独采取一个检样,但当对一批水产品作质量判断时,仍需采取多个个体多做检样以反映全面质量。而一般小型鱼类和对虾、小蟹,因个体过小在检验时只能混合采取检样,在采样时须采数量更多的个体,鱼糜制品(如灌肠、鱼丸等)和熟制品采取250g,放灭菌容器内。水产食品含水量较多,体内酶活力也较旺盛,易于变质。因此在采好样品后应在最短时间内送检,在送检过程中应加冰保养。5.2 检样处理5.2.1 鱼类,采取样品的部位为背肌。先用流水将鱼体体表冲洗干净,去鳞,再用75%酒精棉球擦净鱼背,待干后用灭菌刀在鱼背部沿脊椎切开5cm,再切开两端使两块背肌分别向两侧翻开,然后用无菌剪子剪取肉25g,放入灭菌乳钵内,用灭菌剪子剪碎,加灭菌海砂或玻璃砂研磨(有条件情况下可用均质器),检样磨碎后加入225ml灭菌生理盐水。混匀成稀释液。注:剪取肉样时,勿触破及沾上鱼皮,鱼糜制品和熟制品应放乳钵中捣碎后,再加生理盐水混匀成稀释液。5.2.2 蟹类:采取检样的部位为胸部肌肉。将蟹体在流水下冲洗净,剥去壳盖和腹脐,再去除腮条,复置于流水下冲净,用75%酒精棉球擦拭前后外壁,置于灭菌搪瓷盘上待干,然后用灭菌剪子剪开成左右两片,再用双手将一片蟹体的胸部肌肉挤出,,称取25g置于灭菌乳钵内,一下操作同鱼类检样处理。5.3 检验方法——菌落总数测定:按GB/T 4789.2执行;——大肠菌群测定:按GB/T 4789.3执行;——沙门氏菌检验:按GB/T 4789.4执行;——志贺氏菌检验:按GB/T 4789.4执行;——副溶血性弧菌检验:按GB/T 4789.7执行;——金黄色葡萄球菌检验:按GB/T 4789.10执行;——霉菌和酵母菌计数:按GB/T 4789.15执行。注:水产食品兼受海洋细菌和陆上细菌的污染,检验时细菌培养温度应为30℃,以上检样的方法和检验部位均以检验水产食品肌肉内细菌含量从而判断其鲜度质量为目的,如须检索水产食品是否带染某种致病菌时,其检样部位应采胃肠消化道和腮等呼吸器官,鱼类捡取肠管和腮;虾类检取头胸节内的内脏和腹节外沿处的肠管;蟹类检取胃和腮条;贝类中的螺类检取腹足以下的部分;贝类中的双壳类检取覆盖在斧足肌肉外层的内脏和瓣腮。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!

操作维护

2021.11.17

人肝癌细胞阿霉素耐药株培养步骤与注意事项!

          人肝癌细胞阿霉素耐药株培养步骤与注意事项!一、细胞简介平台编号:bio-115104规格:冻干粉拉丁属名:HEPG2/ADR细胞名称:人肝癌细胞阿霉素耐药株配套培养基:内细胞培养基:(ECM, Cat. No. 1001)产品使用说明:仅供科研研究使用产地:美国缩写:HBVSMC规格:5 x 10^5 cellsial用途:科研运输:干冰保存:液氮推荐培养基:平滑肌细胞培养基注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用二、细胞概述细胞提取于人淋巴结组织,原代冻存。每管含有细胞数>5×10 5cells/ml,此细胞通过vWF/Factor VIII 和CD31 (P-CAM)免疫荧光染色验证,经测试不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。细胞可以达到15倍增。三、培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备:1)准备基础培养基( GIBCO,,添加NaHCO3 1.5g/L,丙酮酸钠 0.11g/L);优质胎牛血清,10%。2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。3)冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。2、细胞处理:1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。四、细胞注意事项1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。2、先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时(4h左右),稳定细胞状态,切忌在温箱内静置过夜。3、静置后镜检,拍照,记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。4、悬浮细胞:将细胞瓶内液体都转移至无菌离心管内,1000 转/分钟离心5min,培养基上清可备用,管底细胞沉淀用培养基重悬。镜检时若细胞密度超过80%,可将细胞悬液分至2个细胞瓶内培养;若密度未超过80%,细胞悬液移至原瓶继续培养,待达到80%时再正常传代。备注:聚团生长慢,有密度依赖,必须使用T25培养瓶竖立培养,3天一次半量换液一次,1-2周传代一次。5、贴壁细胞:若细胞密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,收集细胞瓶内的培养基,留8ml继续培养至80%左右再传代,瓶盖可稍微拧松。备注:细胞贴壁慢,传代后细胞放2天不动。6、细胞瓶内的培养基含血清和双抗,可收集后4℃保存备用,可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基,一半用客户自备的培养基,使细胞逐渐适应培养条件,以免因不适应而造成生长状态不佳。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!

参数原理

2021.11.17

人主动脉内皮细胞的运输和保存及使用方法!

            人主动脉内皮细胞的运输和保存及使用方法!一、细胞简介平台编号:bio-106129规格:5*10e5拉丁属名:人主动脉内皮细胞(永生化)包装规格:1ml 冻存细胞悬液或 T-25 培养瓶细胞名称:人主动脉内皮细胞(永生化)注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用二、细胞详述主动脉内皮细胞(aortic endothelial cells)组成了主动脉内壁,并持续受到血流剪切应力的影响。内皮细胞在切应力的作用下,分泌不同的内皮因子并进而影响血管收缩和生长。主动脉内皮细胞也调节细胞黏附分子的表达来控制和精确调节炎症反应和组织纤维化。体外培养的原代主动脉内皮细胞可有效地帮助研究者研究内皮功能失调的机理,动脉粥样化等疾病的发病机理以及发展新的治疗方法。该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。三、细胞特性1) 组织来源于人的正常主动脉组织。2) 细胞鉴定:血小板-内皮细胞粘附分子(PECAM-1/CD31)或血管假性血友病因子(vWF)免疫荧光染色为阳性。3) 经鉴定细胞纯度高于90%。4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5) 细胞生长方式:上皮样,多角形细胞,贴壁培养。四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1) 1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2) T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。五、产品使用1) 本产品仅能用于科研2) 本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3) 本产品未通过用于活体诊断的审核六、注意事项1、收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100*,200*各一张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响,故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态,故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明,期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。微生物菌种查询网自设细胞系板块,是细胞株提供中心,专业提供代次低、周期短、活性好的细胞株。与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!

参数原理

2021.11.16

玉米黑粉菌的危害程度与防治方法!

                  玉米黑粉菌的危害程度与防治方法!玉米黑粉菌(CornSmut)又名玉蜀黍黑粉菌、玉米黑霉。病原菌为真菌,是由玉米黑粉菌(ustilagomaydis)所引起的一种局部侵染性病害。孢子堆的小大、形状不定,多呈瘤状,长或直径3-15cm,初期外面有一层白色膜,往往由寄生组织形成,有时还带黄绿色或紫红色彩,后渐变灰白至灰色,破裂后散出大量黑色粉末,即冬孢子。一、形态特征孢子堆的大小、形状不定,多呈瘤状,长或直径3~15厘米,初期外面有一层白色膜,往往由寄生组织形成,有时还带黄绿色或紫红色彩,后渐变灰白色至灰色,破裂后散出大量黑色粉末,即冬孢子。孢子球形或椭圆形,稀不规则,有钝刺,直径一般8~12毫米。玉米黑粉菌虽属局部侵染性病害,但在玉米的整个生育期间皆可发生。一般苗期发病较少,抽穗后发病迅速增多。植株地上部幼嫩的茎、叶、雄花序、果穗乃至气生根均可受害,受害组织因受病原菌的刺激而肿大成瘤,病瘤未成熟时,外披白色或淡红色、具光泽的薄膜,后转呈灰白色或灰黑色,病瘤成熟时外膜破裂,散出黑粉,此即为病原菌的厚垣孢子(冬孢子),此为本病症状的最大特点。病瘤大小差异悬殊,通常在叶片和叶鞘上的病瘤似豆粒,不产生或很少产生黑粉;茎节、果穗上的病瘤似鸡蛋或拳头。同一植株上常多处生瘤,或同一部位多个病瘤聚集成堆。雄穗的小花染病长出囊状或角状小瘤,常数个聚成一堆;雌穗受害多见于上半部个别小花染病生瘤,其余仍能正常结籽;也有整个雌穗受侵染而不结实的。茎上的病瘤多生于茎节的腋芽;叶上的病瘤多生于叶片中肋两侧,细如豆粒,密集成串。病株茎杆多扭曲、矮小,早发病的植株果穗少而小,甚至不结穗。本病能侵染植株任何幼嫩部位而形成肿瘤并散出黑粉,这与玉米丝黑穗病仅侵染雌、雄穗并产生杂乱的黑色丝状物症状明显有别。二、分布范围分布于中国河北、山西、黑龙江、辽宁、吉林、内蒙古、安徽、江苏、浙江、江西、福建、河南、广东、宁夏等地区。三、症状特点黑粉菌从幼苗到成株各个器官都能感病,凡具有分生能力的任何地上部幼嫩组织,如气生根、叶片、茎秆、雄穗、雌穗等都可以被侵染发病,形成大小形状不同的瘤状物。瘤状物是因病菌代谢产物的刺激而肿大形成的菌瘿,它外面包有由寄主表皮组织所形成的薄膜,初为白色或浅紫色,逐渐变成灰色,后期变黑灰色。菌瘿成熟后,外膜破裂散出大量黑粉(即冬孢子)。四、危害程度近两年因天气干旱,雨热反常,玉米黑粉菌的发生具有明显上升趋势,常年发生率在5%-10%,对于我国的玉米生产区,尤其对陕西、华北、东北地区玉米生产造成了极大的损失。据不完全统计,2000年全国玉米发病面积在180万hm2,绝收的不低于3万hm2。一般病田病株率达20%-30%,平均减产10%-30%,有的地块发病率高达85%,如何控制防治玉米黑粉病是一个极具现实意义的问题。五、发病规律玉米黑粉菌的病原菌为真菌(担孢子菌),病瘤内的黑粉是病菌的冬孢子。冬孢子在土壤中、地表、病残体上、土杂粪肥中越冬。越冬的冬孢子成为第二年发病的初侵染病原,冬孢子在适宜的条件下,萌发产生担孢子和次生担孢子,随风雨、气流传播到玉米的叶片、节、腋节、雄雌穗等幼嫩分生组织,在组织内生长蔓延,并产生一种类似生长素的物质,刺激寄主局部组织的细胞旺盛分裂,逐渐肿大形成病瘤。病瘤成熟破裂,又散出黑粉(冬孢子)进行再次侵染。冬孢子没休眠期,在玉米生育期内可进行多次再侵染,在玉米抽穗开花期蔓延较快,形成发病高峰期,直到玉米老熟后停止侵染。六、环境条件玉米黑粉菌病菌寄主范围主要是田间土壤、地表、病残株上以及土杂粪肥中。发病的环境条件雨水多和湿度过大有利于发病;低温、干旱、少雨的地方,土壤中的冬孢子存活率高,存活时间长,发病重,因为微雨、夜露就可以满足黑粉病孢子的萌发和侵染需要。玉米在全生育期都可以染黑粉病,尤其以抽雄期前后,天气干旱,植物抗病力强,易感黑粉病。前期干旱,后期多雨,或旱湿交替出现,延长染病期,易发病。过度密植或灌溉的间隔时间长,造成水分时缺时足,以及偏施过量氮肥,都会削弱植株抗病力而使病害发生较重。螟害、冰雹、暴风雨以及人工去雄作业等造成伤口,也利于病害发生。七、经济价值此菌分布极广泛,是玉米的主要的病害之一。幼嫩时可以食用,也有生食,有甜味,炒食另有风味。经常食用可预防和治疗肝脏系统和胃肠道溃疡,并能助消化和通便。在培养液中含有谷氨酸、赖氨酸、丙氨酸、精氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、组氨酸等16种氨基酸。此菌可加工药用,将新鲜的孢子堆摘下或将老熟后的收集(孢子粉)炼蜜丸,备用。其性寒、味甘,利肝脏益肝胃和解毒作用。又治神经衰弱,小儿疳积。该菌还产生黑粉菌酸,作香料工业中合成麝香类的原料。其菌液对小白鼠肉瘤有抑制作用。另生产一种异生长素,吲哚乙酸,能刺激高等植物生长。八、药物价值药名:玉米黑粉菌来源:为菌类植物药黑粉菌科玉米黑粉菌的全草。功效:益气养阴,补气安神,补中解毒。主治:用于血虚、或津液不足,口干舌燥,或热病气阴两伤,烦倦口渴者。用于心神不安、失眠多梦者。用于脾胃虚弱、倦怠食少、脘腹作痛或食物、药物中毒者。性味归经:甘,寒。入心、肝、胃、大肠四经。用法用量:内服:煎汤,6-9克。别名:玉米黑霉、棒子包(辽宁)、稔头(《植物名实图考》)动植物资源分布:中国大部分地区均有分布。拉丁名:原植物玉米黑粉菌Ustilagomaydis(DC.)Corola.考证:始载于《新华本草纲要》。中药化学成分:全草含谷氨酸、精氨酸、赖氨酸、丙氨酸、蚓哚乙酸、黑松菌酸。九、综合防治防治此菌病采用控制减少菌源、选用抗病良种为主,化学防治为辅的综合防治措施。减少菌源彻底清除田间的病残株,带出田外深埋,以减少菌源,防止再侵染;实行秋翻地、深翻土地,把散落在地表上的菌源,深埋地下,减少初侵染源;施用腐熟厩肥或不施;轮作、倒茬,重病地段实行三年以上轮作,可与大豆等其它作物倒茬种植。选用抗病品种利用抗黑粉病自交系材料,配制杂交种用于生产。综3487系、803系、5005系等易感黑粉病,农大108、户单2000、农大81、郑958等品种较抗黑粉病。化学防治在玉米出苗前对地表喷施杀菌作用的除莠剂;可用15%粉锈宁拌种,用药量为种子量的0.4%;在玉米快抽穗时,用1%的波尔多液喷雾,有一定保护作用;在玉米抽穗前10天左右用50%福美双可湿性粉剂500-800倍喷雾,可以减轻黑粉病的再侵染。加强栽培管理,合理密植避免偏施氮肥,灌溉要及时,特别在抽雄前后易感病阶段必须保证水分供应足,以及彻底防治玉米螟等均可减轻发病。运用农业措施和药剂处理种子、土壤等,这只是停留在防治的水平上,不能从根本上解决菌源的危害,而利用玉米种质资源的遗传抗性,配制培育抗病品种,推广抗病良种,才是彻底解决黑粉病的根本途径。十、研究实验德国科学家Voll的研究组利用气体交换/荧光成像同步测量技术,研究了玉米黑粉菌感染后玉米叶片的光合性能和碳代谢。结果发现,玉米黑粉菌感染病变部位的二氧化碳响应曲线、二氧化碳补偿点和酶活性在各个发展阶段均表现出C3光合作用,C4代谢在感染的组织被抑制。他们将玉米黑粉菌株SG200的细胞悬浮培养液注射入7日苗龄的玉米幼苗茎干。用同体积的水注入对照植物,然后分别测量叶绿素含量、碳水化合物、氨基酸、酶活性和光合作用等参数。通过利用德国WALZ公司的高精度4通道光合仪GFS-3000与调制叶绿素荧光成像系统IMAGING-PAM(MINI-探头)的连用,同步测量了气体交换和叶绿素荧光成像。玉米黑粉菌感染株仍有绿色区域,通过分析表明仍有较多的叶绿素存在。通过气体交换测量,发现感染叶片的最大同化速率显著降低,同时CO2补偿点显著增高,而此时模拟侵染的叶片CO2补偿点却降低。叶瘿内的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性也降低,同时,叶片病变部位NADP-苹果酸酶(C4循环的关键酶)的最大活性也减少了6倍多。从叶瘿内C4循环的相关酶活性降低开始,发现叶瘿内C4中心的代谢产物和丙氨酸含量均低于模拟感染的叶片。光合速率的降低伴随着二氧化碳气孔导度的下降。另外在萎黄色病瘿间的绿色区域,气体交换很难测量这些区域,而利用叶绿素荧光成像技术则十分简单,侵染叶片的病瘿和未受影响区域能够直观的从其吸光度上区分出来。与模拟侵染叶片相比,在感染4天时叶瘿Fv/Fm就已经显著下降,病瘿间的未受影响区域与对照差异较小。与健康叶片比,叶瘿处非光化学淬灭、PSII复合体中过剩光能的调节性能量耗散均较低。这个影响伴随着非调节性能量耗散的增加和电子传递速率的降低。所有这些影响在感染6天时比感染4天时明显,表明叶瘿部位尽管光化学活性受到抑制,却仍然保持了光合活性。

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2021.11.16

人脂肪细胞的研究进展与主要功能!

                    人脂肪细胞的研究进展与主要功能!一、基本信息产品规格:5×10^5cells/T25细胞培养瓶英文名称:Human Fat: Normal Adipose Cells细胞名称:人脂肪细胞组织来源:脂肪组织培养条件:原代细胞取组织现分注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用二、细胞简介人脂肪细胞分离自脂肪组织;脂肪组织主要由大量群集的脂肪细胞构成,聚集成团的脂肪细胞由薄层疏松结缔组织分隔成小叶;贮存的脂肪,在需要时可迅速分解成甘油和脂肪酸,经血液输送到各组织以供利用。它们影响胰岛素敏感性、血压水平、内皮功能、纤溶活动及炎症反应,参与多种重要病理生理过程;脂肪组织已由过去单纯作为能量储存的器官而成为一个极其重要的内分泌系统。脂肪细胞分为白色脂肪细胞和褐色(棕色)脂肪细胞,常呈白色,在婴幼儿期大量增殖,到青春期数量达到巅峰,此后数量一般不再增加。细胞内含有大量富含脂肪的小泡,称为脂质泡,富含光面内质网。此外,还有一种褐色脂肪细胞,在动物体内主要存在于肩胛骨间、颈背部、腋窝、纵隔及肾脏周围,含有高度团缩的褐色脂肪,作用是将脂质分解产热,调节体内脂质比例。本公司生产的脂肪细胞采用胰蛋白酶消化法制备而来,细胞总量约为5×10^5cells/瓶;细胞经油红O染色鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。三、培养基信息DMEM[H]、FBS、Penicillin、Streptomycin等我们推荐使用Procell人脂肪细胞专用完全培养基(产品货号:CM-H112)作为体外培养人脂肪细胞的培养基。四、细胞功能人脂肪细胞是贮存脂肪的“脂库”,机体根据对热量的需求,向脂库贮存或动用脂肪。用同位素研究脂肪代谢的资料表明,人脂肪细胞内的脂肪即使在热量平衡情况下,也不断进行代谢更新。人脂肪细胞贮存的脂肪主要是甘油三酯,是由不同来源的脂肪酸与葡萄糖在人脂肪细胞内代谢的中间产物α-磷酸甘油,在酶催化下合成的,合成后很快并入中心脂滴贮存。有资料表明,线粒体及内质网为Chemicalbook甘油三酯的合成池,中心脂滴为贮存池。贮存的脂肪动用时,活化的激素敏感脂肪酶(甘油三酯脂肪酶)将甘油三酯水解成脂肪酸和甘油,释放入血循环。人脂肪细胞的脂肪代谢,受激素和神经的调节和控制。胰岛素有促进生脂、抑制脂解的作用。儿茶酚胺、生长激素、甲状腺素、促肾上腺皮质激素和高血糖素为脂解激素。激素通过人脂肪细胞第二信使,激活甘油三酯脂肪酶,促进甘油三酯水解。五、相关研究有研究探讨噻唑烷二酮类药物吡格列酮对人脂肪细胞中脂联素及其受体mRNA表达的影响。方法是取外科手术患者腹网膜脂肪组织,进行人前体脂肪细胞的原代培养并诱导其分化。适时用不同浓度的吡格列酮进行药物干预,取分化第10d的脂肪细胞用于实验,分设对照组和药物干预组,提取RNA后以RT-PCR方法检测脂联素及其受体的mRNA的表达,比较其差异。结果吡格列酮药物干预组人脂肪细胞中脂联素及其受体的mRNA的表达量高于不加药物的对照组。因此噻唑烷二酮类药物吡格列酮能增加人脂肪细胞中脂联素及其受体的mRNA的表达。此外,还有研究探讨胰岛素的长期作用对人脂肪细胞脂代谢的影响。方法是检测不同Chemicalbook浓度胰岛素作用24h后脂肪细胞甘油释放率的基础值和刺激值,并使用RT-PCR检测脂肪分解的关键酶激素敏感性脂酶(HSL)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果胰岛素的长期作用可增加脂肪细胞的甘油释放率,并呈剂量效应和时间效应,100、500、1000nmol/L的胰岛素可使甘油释放率的基础值和刺激值分别增加17%~147%和28%~241%(P北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!

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2021.11.16

肠膜明串珠菌的培养方法与注意事项!

                肠膜明串珠菌的培养方法与注意事项!肠膜明串珠菌是乳酸菌中的明串珠菌属的重要菌种。肠膜明串珠菌革兰染色阳性。一般存在于植物体表,常用于发酵乳制品、青贮、泡菜和果酒中。肠膜明串珠菌包括有肠膜明串珠菌乳脂亚种和葡萄糖亚种,尤以肠膜明串珠菌的乳脂亚种最为常见,他可发酵柠檬酸而产生特征风味物质,又称风味菌、香气菌和产香菌。一、菌种简介规格:冻干物拉丁属名:Leuconostoc mesenteroides菌株名称:肠膜明串珠菌其它编号:CICC 21861培养基编号:58培养温度:37培养时间:48 小时用途:用于发酵制乳制品,生产青贮饲料,制作泡菜分离源:泡猪耳朵培养基信息培养基编号:58名称:MRS培养基 备注:酷蛋白胨 10.0克 牛肉浸取物 10.0克 酵母提取液 5.0克 葡萄糖 5.0克 乙酸钠 5.0克 柠檬酸二胺 2.0克 吐温80 1.0克 磷酸氢二钾 2.0克 七水硫酸镁 0.2克 七水硫酸锰 0.05克 碳酸钙 20.0克 琼脂 20.0克 蒸馏水 1.0升 pH6.8用途:用于发酵制乳制品,生产青贮饲料,制作泡菜注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用二、培养基MRS 培养基酪蛋白胨 10 克 牛肉浸取物 10 克酵母提取液 5.0 克 葡萄糖 20 克乙酸钠 5.0 克 柠檬酸二胺 2.0 克吐温 80 1.0 克 磷酸氢二钾 2.0 克七水硫酸镁 0.2 克 七水硫酸锰 0.05 克碳酸钙 20.0 克 琼脂 20.0 克蒸馏水 1.0 升 PH 6.8如果要配制液体培养基,则不用加入碳酸钙和琼脂三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请在-20°C 保存。 四、注意事项1)冻干首次活化,干粉要全部用完,不能预留,用无菌吸管吸取 0.3ml 培养液(即以上建议的培养基配方,不加琼脂)或者无菌水,滴入冻干管中,轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液,接种在培养基上(建议不超过 2 支平板或斜面);若接种液体培养基,则试管斜面以不超过 5ml 为宜。2)经过冷冻干燥保藏,菌种处于休眠状态,复苏培养时可能会延迟生长,这时需较长的培养时间; 若您收到的是已复苏的培养物(非冻干菌),则可以直接用于您的实验,或根据需要转接培养如有不明白之处,请务必先咨询我单位技术人员,避免不必要的损失;3)微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方,室温放置时间过长会导致菌种衰退;4)菌种操作应在无菌条件下进行;转种完毕,应经灭菌再做丢弃处理;5)应根据菌种状况及时转接,冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年;6)菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和微生物菌种查询网联系。7)如若有菌种复苏不活或者污染等情况,请在收到菌钟后 2 个月内联系,逾期不予受理;8)打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。9)安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍,并保持在火焰旁操作。

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