胎牛血清的知识概述及应用！

                      胎牛血清的知识概述及应用！

一、背景

胎牛血清是一种性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体，胎牛血清应取自剖腹产的胎牛，胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。

血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。

胎牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。

1、提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。

2、提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。

3、有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。

4、是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

5、起酸碱度缓冲液作用。

6、提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

二、应用

用于不同浓度胎牛血清对大鼠髓核间充质干细胞生物学特性影响研究：

研究大鼠髓核间充质干细胞（NPMSC）体外培养的最佳血清浓度并探讨椎间盘退变的机制。

方法：用胶原酶、胰酶序贯消化法从SD大鼠腰部和尾部的椎间盘组织中提取NPMSC，并进行体外培养，将其传代。

（1）利用流式细胞仪对第3代传代的NPMSC细胞表型CD29、CD34、CD24、CD90、CD105进行鉴定；

（2）利用普通PCR鉴定体外培养的NPMSC细胞基因Sox2、Nanog的表达；

（3）在37℃、21%O2、5%CO2的细胞培养箱中用成骨、成软骨、成脂培养液诱导培养第3代传代NPMSC，24周以后，用染色剂对其进行染色，观察其成脂、成骨、成软骨能力。

（4）在37℃、21%O2、5%CO2的细胞培养箱中用不同浓度（0%、5%、10%、20%、30%）的DMEM-F12血清培养液培养第3代传代的NPMSC，72小时以后，利用CCK-8法检测细胞的增殖，并采用RT-PCR检测细胞蛋白多糖、Ⅱ型胶原、SOX9的mRNA表达，借助流式细胞仪对细胞进行细胞凋亡的检测。

结果：

（1）大鼠NPMSC的成骨、成软骨能力强，成脂能力较差，且其细胞表面高度表达CD29、CD90、CD105，低度表达CD24、CD34，细胞基因Sox2、Nanog高度表达。

（2）随着培养液血清浓度增加，OD值增大，NPMSC的凋亡率降低，细胞蛋白多糖、Ⅱ型胶原、SOX9基因的mRNA表达增加。

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