蜡样状芽孢杆菌的检测方法与注意事项！

                 蜡样状芽孢杆菌的检测方法与注意事项！

蜡样芽孢杆菌（学名：Bacillus cereus），又称仙人掌杆菌，是一种革兰氏阳性菌，β溶血性的杆状细菌。经常在土壤和食物中被发现，有些菌株会引起食物中毒，例如"炒饭综合症"（Fried Rice Syndrome）；另外一些菌株则对其他动物有益。蜡样芽孢杆菌是兼性厌氧性。与其他芽孢杆菌相同，它会产生防御性的内芽孢。它的致病因子包括施普善（cereolysin）和磷脂酶C（Phospholipase C）。

一、菌种简介

平台编号：bio-61125

提供形式：冻干物

拉丁属名：Bacillus cereus

中文名称：蜡样状芽孢杆菌

属名：Bacillus

种名加词：cereus

来源历史：←天津市工业微生物研究所菌种中心（1.15512）

收藏时间：2008.11.6

资源归类编码：15131311101

模式菌株：非模式菌株

主要用途：研究；生产

具体用途：细菌肥料（解磷）。

特征特性：G+，菌体杆状，常呈长链状，菌体两端略方形，芽孢椭圆形，中生或近中生。肉汤琼脂平板菌落为白色至淡黄色，较大、扁平、散布。    

生物危害程度：四类

致病对象：无

培养基：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。

培养温度：30℃

资源保藏类型：培养物

保存方法：真空冷冻干燥法

实物状态：有实物

共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享。

用途：研究；生产；细菌肥料（解磷）。

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。

二、储存条件

冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。

三、培养条件

1、培养基编号：CM0002

2、培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入 5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。

3、需氧类型：好氧

4、培养温度：30℃

四、蜡样芽孢杆菌的检测方法

国内外对于蜡样芽抱杆菌的检测方法有常规的检测方法；基于PCR技术、酶反应、免疫学技术的快速检测方法。

常规检测方法是将分离培养后的可疑菌落做生化试验、溶血试验、协同溶血试验、动物试验、典型运动等鉴定，被确定为蜡样芽孢杆菌后进一步进行血清分型。常规检验步骤为：样品→增菌→分离培养（并作菌数测定）、分离纯化→革兰染色镜检/生化及菌落观察/生化反应试验→肠毒素检查。 

五、注意事项

1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。

2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。

3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。

4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。

5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。

六、冻干管打管说明书

1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。

2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，并取 100μL 转接到固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。

3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。

4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。

5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。

6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。

7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。