阿魏酸是肉桂酸的衍生物之一，能清除自由基、促进清除自由基的酶的产生、增加谷胱甘肽转硫酶和醌还原酶的活性、并抑制酪氨酸酶活性，调节人体生理机能。阿魏酸具有抗血小板聚集，抑制血小板5-羟色胺释放，抑制血小板血栓素A2(TXA2)的生成，增强前列腺素活性，镇痛，缓解血管痉挛等作用，因此是生产用于治疗心脑血管疾病及白细胞减少等症药品的基本原料，同时在人体中可起到健美和保护皮肤的作用。检测阿魏酸的纯度对于药品原料的把控具有重要意义。阿魏酸（Ferulic Acid）的分离本应用选用ChromCore C18 反相色谱柱，在乙腈/水的酸性条件下对待测物质进行洗脱，实际样品中阿魏酸峰附近无其他未知杂质峰干扰且峰型良好。

色谱柱在色谱仪分析系统中起着分离作用，是色谱分析的核心部件。正确使用和维护色谱柱尤为重要，使用不当就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。以下从七个方面简答介绍液相色谱柱在使用过程中应当着重注意的问题。  一、避免压力和温度的急剧变化    温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，以保持色谱柱内填料的稳定性。    二、避免直接改变溶剂的组成    在需要改变检测样品溶液组成是，应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。且在使用次洗脱能力强的 洗脱液冲洗色谱柱时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50~75ml。    三、注意不是所有色谱柱都能反冲    一般来说色谱柱不能反冲，只有色谱柱使用说明书上标明该柱可反冲才可以反冲除去留在柱头上的杂质。否则，反冲色谱柱的影响是迅速降低柱效。  四、避免流动相使用不当而破坏固定相    选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一段预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶"饱和"，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。    五、禁止样品未经处理直接进入色谱柱    避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。    六、禁止将缓冲溶液长时间存放在色谱柱内    保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。    七、禁止色谱柱未经处理直接封存    色谱柱使用完成之后须使用相宜溶剂进行清洁处理，例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡；当采用盐缓冲溶液作流动相时，使用完后应用无盐流动相冲洗；含卤族 元素（氟、氯、溴）的化合物可能会腐蚀不锈钢管道，不宜长期与之接触；装在液相色谱仪上的色谱柱如不经常使用，应每隔4-5天开机冲洗15分钟。

感冒药泛指用于治疗感冒的各种药，包括中成药，汤剂，西药，冲剂等等，目前大多数感冒药都是复方制剂。常用的组方搭配有：解热镇痛药、鼻黏膜血管收缩药、组胺拮抗剂、中枢兴奋药、抗病毒药。由于感冒发病急促，症状复杂多样，因而至今没有一种药物能解决所有这些问题，因此，治疗感冒药多采用复方制剂。      在药品的质量控制中，明确复方感冒药中有效成分的含量有着重要意义。一般常采用高效液相色谱法进行测定。复方感冒药的测定根据各组分疏水程度的差异，本次选用ChromCore 120 C18反相色谱柱，结合简便的乙腈/水体系，在酸性环境下的梯度洗脱，能够达到良好的峰型和分离效果。

固体颗粒污染，pH超标，强保留物质污染是色谱柱使用过程中最常遇到的影响色谱柱寿命的三大“杀手”。固体颗粒物质固体颗粒物质——空气中的粉尘、流动相中的固体颗粒、样品中的固体颗粒、泵和密封圈的磨损以及管路老化等都是固体颗粒物质的来源，众多来源让人防不胜防，特别是泵和密封圈的磨损更是让人无处可逃，液相厂家也莫可奈何。使用保护柱和在线过滤器是可以防止此等固体颗粒物质的有效途径，能保色谱柱无忧，毕竟保护柱可以反向高流速将固体颗粒物质冲下，而色谱柱不行。单纯的固体颗粒污染采用在线过滤器更好，简单的计算一下成本就明白，一个筛板总比保护柱芯便宜吧。而对于复杂样品和多源头污染，保护柱芯则更能否发挥其优势，大大提高色谱柱的使用寿命。pH超标目前硅胶基质的色谱柱是主流，在市面上买到的98%以上都是硅胶基质的色谱柱，因为硅胶基质的色谱柱柱效高、质量稳定性好，以硅胶基质为主流确实无可厚非。但是，硅胶基质的色谱柱也有其脆弱之处，首先，硅胶在碱性条件下是容易被侵蚀、溶解的，所以pH应在7.0以内使用，此外，C18色谱柱的填料是在硅胶颗粒上键合上了C18长链，C18长链与硅胶颗粒是以Si-O-Si键的形式连接的，Si-O-Si键容易在pH如果只是样品溶液的pH超标，那么用保护柱可以有效的保护色谱柱（保护柱填料和色谱柱填料要相同保护效果最好），毕竟进样的量大多是1～20ul，量很小，损坏填料的物质可以被保护柱提前消耗掉，等样品溶液到达柱子的时候破坏威力已是强弩之末，因此保护柱对此类样品溶液pH超标是能有效延长色谱柱的使用寿命的。但是，如果是流动相的pH超标，就请换pH范围更广的柱子吧，此类流动相pH超标的情况保护柱是没法保护你的柱子的。强保留物质成份复杂的样品比如中药，做中药样品的时候色谱柱使用寿命通常不会太长，缩短使用寿命的最大元凶就要数强保留物质了。每一次做中药样品的客户发回色谱柱维护的时候，通常都会发现柱压高的状况，而且打开柱头几乎都会发现柱前端填料颜色或黑或黄，有时候深挖5mm也仍见颜色异常。对于色谱柱的维护而言5mm的深度已经是非常忌讳的了，需特别经验丰富的人才敢挖这么深，一般不会超过2mm的。强保留物质也是防不胜防，因为这是样品中自带的成份，我们要么就在前处理上加上诸多耗钱耗力的程序，否则你毫无办法，即使再号称超长使用寿命的色谱柱也无法抵挡它的攻势，毕竟强保留物质对所有品牌柱子的污染都是平等的。其实此类杀手是最适合的做法还是使用保护柱，一般的保护柱填料都有10mm长，比深挖5mm的办法来处理色谱柱而言，换个保护柱芯则要简单省力得多。

雌激素类药物的分离雌激素是促进雌性动物第二性征发育及性器官成熟的物质，具有广泛而重要的生理作用，不仅有促进和维持女性生殖器官和第二性征的生理作用，并对内分泌、心血管、代谢系统、骨骼的生长和成熟，皮肤等均有明显的影响。天然雌激素主要是雌二醇、雌酮、雌三醇，目前临床上常用的雌激素类药物多是以雌二醇为母体人工合成的衍生物，如苯甲酸雌二醇、戊酸雌二醇、炔雌醇、炔雌醚、妊马雌酮等。HPLC通常用于检测该类药品的质量以保证患者的用药安全。根据被分析物的疏水性差异，本次选用ChromCore C18反相色谱柱，结合简便的乙腈/水体系梯度洗脱，达到良好的峰型和分离效果。

液相色谱中，方便快捷的分析过程固然重要，但是为了多做样品而忽略了一些必不可少的步骤，往往得不偿失。哪些操作不能做？哪些懒儿不能偷？那些小概率的故障师傅没教怎么办？液相使用过程中有哪四大关键因素要注意？ 警惕三大不良习惯不良习惯1：流动相不过滤尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相最好在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是滤过，可采用滤膜为0.2μm或0.45μm的滤器。同时，泵的入口都应连接砂滤棒（或片）。输液泵的滤器应经常清洗或更换。不良习惯2：使用后没有及时清洗泵流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。如果将含缓冲液的流动相留在泵内，由于蒸发或泄漏，甚至只是由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体，这些晶体将和上述固体微粒一样损坏密封环和柱塞等。因此，必须泵入纯水将泵充分清洗后，再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂（对于反相键合硅胶固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。不良习惯3：流动相走空泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液。  压力的常见问题1.没有流动相流出，又无压力指示怎么办？可能是泵内有大量气体，这时可打开泄压阀，使泵在较大流量（如5ml/min）下运转，将气泡排尽，也可用一个50ml针筒在泵出口处帮助抽出气体。另一个可能原因是密封环磨损，需更换。2.压力和流量不稳了？原因可能是气泡，需要排除；或者是单向阀内有异物，可卸下单向阀，浸入丙酮内超声清洗。有时可能是砂滤棒内有气泡，或被盐的微细晶粒或滋生的微生物部分堵塞，这时，可卸下砂滤棒浸入流动相内超声除气泡，或将砂滤棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）内迅速除去微生物，或将盐溶解，再立即清洗。3.压力为啥过高或过低？可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。压力降低的原因则可能是管路有泄漏。检查堵塞或泄漏时应逐段进行。梯度洗脱的常见问题在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视：梯度洗脱的流动相选择不当要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。忽略的空白梯度洗脱梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。忽略了溶剂混合所带来的粘度变化混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。六通阀的正确使用和维护①样品溶液进样前必须用0.45μm滤膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损。②转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的最大压力；再转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。③为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。通常可用水冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗。色谱柱的使用和维护色谱柱的正确使用和维护十分重要，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。调节流速太快避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓（如前所述）。反冲色谱柱一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。预柱和保护柱选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。

衍生化是一种利用化学变换把化合物转化成类似化学结构的物质。一般来说，一个特定功能的化合物参与衍生反应，溶解度，沸点，熔点，聚集态或化学成分会产生偏离。由此产生的新的化学性质可用于量化或分离。 样品的衍生化的作用主要是把难于分析的物质转化为与其化学结构相似但易于分析的物质，便于量化和分离。当检测物质不容易被检测时，如无紫外吸收等，可以将其进行处理，如加上生色团等，生成可被检测的物质。因而在仪器分析中被广泛应用。气相色谱中应用化学衍生反应是为了增加样品的挥发度或提高检测灵敏度，而高效液相色谱的化学衍生法是指在一定条件下利用某种试剂(通称化学衍生试剂或标记试剂)与样品组份进行化学反应，反应的产物有利于色谱检测或分离。一般化学衍生法主要有以下几个目的：提高样品检测的灵敏度；改善样品混合物的分离度；适合于进一步做结构鉴定，如质谱、红外或核磁共振等。 判断衍生化反应的指标1、反应是否迅速、定量进行，反应重复性好坏，反应条件是否温和，是否容易操作。　2、反应选择性高，最好只于目标化合物反应。　　3、衍生化产物只有一种，反应的副产物和过量的衍生化试剂应不干扰目标化合物的分离和检测。　　4、衍生化试剂通用性好，价廉易得。衍生化方法应用不当的弊端1、柱上衍生化可能损伤色谱柱。2、某些衍生化试剂需氮气吹干。　　3、衍生化不完全，影响灵敏度。　　4、衍生化试剂不当，产物分子量过大。 　GC/MS检测中选用衍生化试剂时，除了和气相色谱法相同的准则外，还应注意衍生物的质谱特性：质量碎片特征性强，分子量适中，适合质量型检测器检测，有利于与基质干扰物的分离。  衍生化分类：衍生化反应从是否形成共价键来说，可分为两种：标记和非标记反应。标记反应是在反应过程中，被分析物与标记试剂之间生成共价键；所有其它类型的反应，如形成离子对、光解、氧化还原、电化学反应等都是非标记反应。另一种区分衍生化反应是从衍生反应的场所来分，有柱前衍生化(pre-columnderivatization)，柱上衍生化(on-columnderivatization)和柱后衍生化(post-columnderivatization)三种。从是否与仪器联机的角度来分有：在线(on-line)、离线(off-1ine)和旁线(at-line)(自动化)三种。目前在HPLC中以离线的柱前衍生法(简称柱前衍生法)与在线的柱后衍生法(简称柱后衍生法)使用居多，旁线衍生化方法是发展方向。　柱前衍生和柱后衍生。柱前衍生是在经过分析柱前使分析物与衍生剂反应，反应产物在分析柱上实现分离，实际分离的是衍生产物，检测的也是衍生产物;柱后衍生是分离物在分析柱中实现分离后，在衍生池内与衍生剂反应，在柱子中分离的是目的物，在检测器处检测的衍生产物。两种衍生方法的优缺点比较柱前衍生法和柱后衍生法各有其优缺点。柱前衍生法的优点是：相对自由地选择反应条件；不存在反应动力学的限制；衍生化的副产物可进行预处理以降低或消除其干扰；容易允许多步反应的进行；有较多的衍生化试剂可选择；不需要复杂的仪器设备。缺点是：形成的副产物可能对色谱分离造成较大困难；在衍生化过程中，容易引入杂质或干扰峰，或使样品损失。柱后衍生法的优点有：（1）形成副产物不重要，反应不需要完全，产物也不需要高的稳定性，只需要有好的重复性即可；（2）被分析物可以在其原有的形式下进行分离，容易选用已有的分析方法。缺点是：（1）对于一定的溶剂和有限的反应时间来说，目前只有有限的反应可供选择；（2）需要额外的设备，反应器可造成峰展宽，降低分辨率。GC/MS中的衍生化在GC/MS方法分析样品时，对羟基、胺基、羧基等官能团进行衍生化有十分重要的作用，主要表现在：　1、改善样品的气相色谱性质。如羟基、羧基等气相色谱特性不好。　　2、改善样品的热稳定性。　　3、改善样品的分子质量。分子量增大，有利于样品与基质的分离。　　4、改善样品的质谱行为。　　5、引入卤素或吸电子基团，是样品可用CI检测，提高灵敏度。　　6、分离手性化合物。GC/MS方法中常用的衍生化方法：硅烷化、酯化、酰化和卤化

苯酚（C6H5OH）是一种具有特殊气味的无色针状晶体，是生产某些树脂、杀菌剂、防腐剂以及药物（如阿司匹林）的重要原料。酚类化合物的毒性以苯酚为最大，对皮肤、粘膜有强烈的腐蚀作用，可抑制中枢神经或损害肝、肾功能，且对环境有严重危害，对水体和大气可造成污染。通常含酚废水中又以苯酚和甲酚的含量最高，因此目前环境监测常以苯酚和甲酚等挥发性酚作为污染指标，因此严格监测环境中该类物质的浓度有着重要意义。水污染U.S. EPA Method 604规范了检测环境中十种常用的苯酚类化合物的方法本应用中，选用了ChromCore 120 C18反相色谱柱，结合简便的乙腈/水系统在酸性条件下进行梯度洗脱，在该色谱条件下，各组分均有良好的分离度和峰型，可用于这类化合物的分析检验。。苯酚类化合物的分离

一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。流动相的选择选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。③必须与检测器匹配。使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。④粘度要低(应高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。最好选择沸点在100℃以下的流动相。⑤对样品的溶解度要适宜。如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。⑥样品易于回收。应选用挥发性溶剂。秘诀1由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。秘诀2三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。秘诀3粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。流动相的pH值采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液；分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺(如，三乙胺)又称为减尾剂或除尾剂。(三乙胺triethylamine 氨分子中的氢原子被3个乙基取代的产物。分子式(CH3CH2)3N。易挥发的无色液体，有氨的气味。熔点-114.7℃，沸点89.3℃，相对密度0.7275(20/4℃)。溶于水和乙醇、乙醚等有机溶剂。三乙胺有碱性，与无机酸能生成易溶于水的盐类。可由N，N-二乙基乙酰氨与氢化铝锂反应制取，也可用乙醇胺进行气相烷基化反应合成。用于制橡胶硫化促进剂、润湿剂和杀菌剂等，也可用作溶剂和用于合成四级铵化合物。)缓冲液pH值的选择在选择缓冲液pH值之前，应先了解被分析物的Pka，高于或低于Pka两个pH值单位的，有助于获得好的、尖锐的峰，从pH公式：pH=Pka+log([A-]/[A])得知，溶液pH值高于或低于Pka两个单位，化合物中99%以一种形式存在，而一种形式存在的化合物才能获得好的尖锐的峰。例如苯甲酸的Pka等于4.2，理论上由pH公式得知，当溶液pH值等于2.2时，99%的苯甲酸以中性化合物存在，pH值等于6.2时99%的苯甲酸以离子形式存在，所以当缓冲液pH值等于2.2时，中性化合物以羧酸形式保留于反相柱。当化合物只有氨基时，缓冲体系的选择十分简单，大多数氨基化合物在pH值小于9时都被质子化，所以所有pH值在7或更低的溶液均适合应用，你也许会问水的pH值大约是7，为什么还用缓冲盐，因为缓冲盐有助于增加方法的可靠性，以及色谱峰的尖锐性，pH值的降低有助于氨基化合物保留的减弱，减小化合物与硅胶表面硅羟基的作用，而使峰更尖锐，任何缓冲液均可应用于氨基化合物的分析，但我们认为pH值等于3的磷酸钾盐最适合用于氨基化合物的分析。在上面两个例子中，pH=3的磷酸钾盐都能获得良好的应用，在一般情况下，它是含羧基和氨基化合物分析中最好的缓冲液，并且我们认为在氨基化合物分析中钾盐比钠盐更好。流动相的脱气HPLC所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响柱的分离效率，影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。(噪声增大，基线不稳，突然跳动)。此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相(如，烷基胺)反应。溶解气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。溶解氧能与某些溶剂(如，甲醇、四氢呋喃)形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收(特别是在260nm以下)，并导致检测灵敏度的轻微降低，但更重要的是，会在梯度淋洗时造成基线漂移或形成鬼峰(假峰)。在荧光检测中，溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。在某些情况下，荧光响应可降低达95%。在电化学检测中(特别是还原电化学法)，氧的影响更大。除去流动相中的溶解氧将大大提高UV检测器的性能，也将改善在一些荧光检测应用中的灵敏度。常用的脱气方法有：加热煮沸、抽真空、超声、吹氦等。对混合溶剂，若采用抽气或煮沸法，则需要考虑低沸点溶剂挥发造成的组成变化。超声脱气比较好，10~20分钟的超声处理对许多有机溶剂或有机溶剂/水混合液的脱气是足够了(一般500mL溶液需超声20~30min方可)，此法不影响溶剂组成。超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不要高出水面太多。离线(系统外)脱气法不能维持溶剂的脱气状态，在你停止脱气后，气体立即开始回到溶剂中。在1~4小时内，溶剂又将被环境气体所饱和。在线(系统内)脱气法无此缺点。最常用的在线脱气法为鼓泡，即在色谱操作前和进行时，将惰性气体喷入溶剂中。严格来说，此方法不能将溶剂脱气，它只是用一种低溶解度的惰性气体(通常是氦)将空气替换出来。此外还有在线脱气机。一般说来有机溶剂中的气体易脱除，而水溶液中的气体较顽固。在溶液中吹氦是相当有效的脱气方法，这种连续脱气法在电化学检测时经常使用。但氦气昂贵，难于普及。流动相的滤过所有溶剂使用前都必须经0.45μm(或0.22μm)滤过，以除去杂质微粒，色谱纯试剂也不例外(除非在标签上标明“已滤过”)。用滤膜过滤时，特别要注意分清有机相(脂溶性)滤膜和水相(水溶性)滤膜。有机相滤膜一般用于过滤有机溶剂，过滤水溶液时流速低或滤不动。水相滤膜只能用于过滤水溶液，严禁用于有机溶剂，否则滤膜会被溶解!溶有滤膜的溶剂不得用于HPLC。对于混合流动相，可在混合前分别滤过，如需混合后滤过，首选有机相滤膜。现在已有混合型滤膜出售。流动相的贮存流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。这种被污染的溶剂如用于HPLC系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用，不要贮存。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在3天内使用，用前应重新滤过。容器应定期清洗，特别是盛水、缓冲液和混合溶液的瓶子，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子无此现象。卤代有机溶剂应特别注意的问题卤代溶剂可能含有微量的酸性杂质，能与HPLC系统中的不锈钢反应。卤代溶剂与水的混合物比较容易分解，不能存放太久。卤代溶剂(如，CCl4、CHCl3等)与各种醚类(如，乙醚、二异丙醚、四氢呋喃等)混合后，可能会反应生成一些对不锈钢有较大腐蚀性的产物，这种混合流动相应尽量不采用，或新鲜配制。此外，卤代溶剂(如，CH2Cl2)与一些反应性有机溶剂(如，乙腈)混合静置时，还会产生结晶。总之，卤代溶剂最好新鲜配制使用。如果是和干燥的饱和烷烃混合，则不会产生类似问题。

辅酶Q10，别名泛醌，是一种存在于自然界的脂溶性醌类化合物，其结构与维生素K、维生素E与质体醌相似。在人类身体细胞内参与能量制造及活化，是预防动脉硬化形成最有效的抗氧化成份，泛醌分子中含有一个由多个异戊二烯单位组成的、与对苯醌母核相连的侧链，该侧链的长度根据泛醌的来源而有不同，一般含有n=6–10个异戊二烯单位。对于哺乳动物，n=10，因此又称辅酶Q10。    提示：由于辅酶Q10在光照下，酸性，碱性，高温，氧化性的环境中都不稳定，因此无论是在储存或是在检验辅酶Q10的过程中都需要格外注意。辅酶Q10的检测  采用中国药典2015中对该药品异构体的测试条件，本次选用的ChromCore Silica色谱柱对该项目进行测试，各项指标均符合药典规定。

乳铁蛋白（Lactoferrin）是乳清蛋白的主要成分之一，广泛分布在人和哺乳动物的乳汁中，是母乳中的核心免疫蛋白，能够帮助婴幼儿提高免疫力，促进婴幼儿的生长发育。因此，添加乳铁蛋白的婴幼儿奶粉越来越受到消费者的青睐，食品安全国家标准-食品营养强化剂-乳铁蛋白（GB1903.17—2016）也将乳铁蛋白列为营养强化剂之中。 在未经净化的婴幼儿奶粉色谱检测实验中，杂质含量高，目标物乳铁蛋白很难清晰地识别。本应用采用纳谱分析SelectCore Heparin肝素亲和SPE柱，可以帮助快速高效地进行前处理，大大提高检测效率。图1显示，未经净化处理的婴幼儿奶粉受基质效应影响较大，并且目标峰和杂质峰的分离度较差，净化处理的婴幼儿奶粉基线稳定，并且目标物质清晰可见。乳铁蛋白的检测适用范围 食品安全国家标准-食品营养强化剂-乳铁蛋白（GB1903.17—2016）为参考，经过肝素亲和SPE柱净化，使用紫外高效液相色谱法测定婴幼儿配方奶粉、婴幼儿配方米粉、调制奶粉、发酵乳等食品中乳铁蛋白含量。实验步骤1、试剂准备磷酸氢二钠溶液（0.2 mol/L）：称取14.2 g磷酸氢二钠，加水溶解，用磷酸调节pH值至8.00±0.50，加水定容至500 mL。磷酸氢二钠-氯化钠溶液：称取0.71 g磷酸氢二钠，5.84 g氯化钠，用磷酸调节pH值至8.00±0.50，加水定容至100 mL。乳铁蛋白标准品：乳铁蛋白母液，浓度10 mg/mL，称取1 g乳铁蛋白加水溶解，定容至100 mL。2、样品制备液体试样：准确称取5 g试样于50mL离心管中，加入5 mL磷酸氢二钠溶液，涡旋震荡0.5 min，4 °C下以10000 r/min的转速离心10 min，将上清液转移到另一50 mL离心管中。再加入5 mL磷酸氢二钠溶液重复一次，合并两次上清液备用。固体试样：准确称取1 g试样于50 mL烧杯中，加入5 mL温热的磷酸氢二钠溶液（温度不超过50 °C），搅拌使样品完全溶解，将样品全部转入50 mL离心管中。再向原烧杯加入5 mL磷酸氢二钠溶液，合并两次液体，涡旋震荡0.5 min，4 °C下以10000 r/min的转速离心10 min，将上清液转移到另一50 mL离心管中。再加入5 mL磷酸氢二钠溶液重复一次，合并两次上清液备用。3、净化SPE柱活化：SelectCore Heparin 肝素亲和柱 1mL 加入5 mL磷酸氢二钠溶液活化；上样：加入步骤2中制备好的上清液；淋洗：待上清液完全流出后，再用10 mL磷酸氢二钠溶液淋洗，弃去全部淋洗液；洗脱：用2.5 mL磷酸氢二钠-氯化钠溶液洗脱，收集全部洗脱液，用磷酸氢二钠-氯化钠溶液定容至2.5 mL。将收集溶液过滤膜，供液相色谱分析。4、液相色谱仪器条件色谱柱：ChromCore 300 C4-T 5 μm，4.6mm×250mm检测波长：280nm柱温：30 °C进样体积：20 μL流速：1.0 mL/min流动相：A相：0.1%三氟乙酸水溶液；B相：乙腈洗脱梯度：实验谱图及加标回收率数据加标回收率 由以上谱图可以看出，婴幼儿奶粉的加标回收率较好，符合检测要求。实验心得1. 回收率好，且速度快：相比市面上常见的琼脂糖基质的肝素亲和小柱，纳谱分析采用单分散聚丙烯酸酯基质开发的肝素亲和小柱滴速更快，相同装量下滴速可以快1~2倍，加快了前处理的时间；2. 使用轻松，不惧流干：基质的机械强度高、化学稳定性好，即使小柱流干再次润湿也同样保证回收率。↑试验操作的时候，即使小柱流干也无需担忧↑订货信息本应用相关产品 产品描述货号 固相萃取柱SelectCore Heparin 肝素亲和柱 1mL; 20/pkgHEP065-030001-1分析柱ChromCore 300 C4-T 5 μm，4.6mm×250mmA226-050030-04625S

气相色谱柱是气相色谱仪的核心部件之一。在气相色谱分析时，色谱柱的选择至关重要，需要考虑待测组分的性质、实验条件（如柱温、柱压的高低）等等。    在我们查阅资料的时候，经常看到将气相色谱分为气固色谱和气液色谱，将气相色谱柱分为毛细管色谱柱和填充色谱柱，它们是根据什么条件划分的呢？它们之间有何区别？经常提到的毛细管色谱柱和填充色谱柱，在分析工作中应该如何选择呢？　气固色谱和气液色谱的分类是根据色谱柱中固定相的物理状态进行区分的，气固色谱中采用固体吸附剂作为固定相，其分离主要是基于吸附机理；而气液色谱中则采用液体作为固定相，其分离主要基于分配机理。      在工作中有分析人员将气固色谱等同于填充柱色谱，气液色谱等同于毛细管色谱，这是极为错误的理解。      事实上，气固色谱既可以是填充柱色谱也可以是毛细管色谱，气液色谱亦是如此。填充气固色谱柱其固定相为颗粒状的固体吸附剂，而填充的气液色谱柱其固定相为涂敷在惰性固体颗粒（载体或称担体）上的固定液液膜。毛细管气固色谱柱一般专指多孔层开管柱（PLOT），其内壁上仅涂渍有一层多孔性吸附剂微粒。其它各类毛细管色谱柱均属于气液色谱。　　多数教材和专著在关于气相色谱柱的分类上，都只是简单的根据色谱柱内径的大小和长度，将柱子分为填充气相色谱柱和毛细管气相色谱柱，并指出前者的内径在2～4mm，长度为1～10m；后者内径在0.2～0.5mm，长度一般在25～100m。但这种分类实际上是不严谨的，只是一种表象上的区分。　　严格意义上，与填充气相色谱柱相对应的应是开管气相色谱柱。这两者之间的区别在于色谱柱中固定相的装载方式不同，填充色谱柱中，固定相为柱内装载的颗粒状吸附剂（气固色谱）或涂敷在惰性固体颗粒上的固定液（气液色谱）；而开管气相色谱柱中固定相则是涂敷或化学交联于毛细管的内壁上，所以开管柱也习惯上被称为毛细管色谱柱，但毛细管色谱柱并不总是开管柱。      事实上，毛细管色谱柱也有填充柱和开管柱之分。其中填充毛细管柱是后来才发展起来的，它是将某些多孔性固体颗粒装入厚壁玻管中，然后加热拉制成毛细管，一般内径为0.25～0.5mm。　　鉴于填充柱和毛细管柱的这些区别，它们在分析应用中的适用范围也有很大区别，在何时何种情况下使用填充色谱柱，何时何种情况下使用毛细管色谱柱，对于分析工作者来说，肯定是需要认真考虑的问题。相对于填充柱来说，毛细管柱一般具有更高的分离效能，这是因为：　　①毛细管柱内径较小，一般为0.1～0.7mm，内壁固定液膜极薄，中心是空的，故阻力很小，而且涡流扩散项不存在，谱带展宽变小。由于毛细管柱的阻力很小，其长度可为填充柱的几十倍，其总柱效比填充柱高得多。一般来说，一根30m长的毛细管柱很容易达到100000的总理论塔板数，而一根3m长的填充柱却最多只有4500的总柱效。　　②毛细管柱的分析速度约为填充柱的数十倍。由于液膜极薄，分配比k很小，相比大，组分在固定相中的传质速度极快，因此有利于提高柱效和分析速度。它可在1小时内分离出包含一百多种化合物的汽油成分；可在几分钟内分离十几种化合物。所以毛细管色谱柱对于复杂的样品分离更为有利，如农产品中的农药多残留同时检测、环境样品的有机物污染检测、化妆品中香精检测等。　　当然，毛细管柱也有其局限性。因其内径小，柱容量小，且对进样技术的要求更高，载气流速的控制要求更为精确。进样量越小，意味着对检测器的灵敏度要求就更高。所以考虑到分析工作中成本和经济效益，在进行简单的永久气体分析和低分子量有机化合物分析时，建议采用填充气相色谱柱。

柱压问题在我们所熟悉的基本色谱分离方程式中，分离度R和柱效（N）、选择因子（a）以及容量因子k'相关，和柱压无关。 但柱压（P）仍是HPLC方法中的最重要参数之一，因为柱压反映了色谱柱的内部状况。——色谱分离基本方程 现今能承受400 bar压力的HPLC泵很常见，色谱柱如在远低于上限的压力下正常运行，不需要我们重点关注；当柱压升高接近上限或者柱压有异常升高，往往意味着色谱柱出状况了，需及时进行维护和补救，严重时色谱柱就已报废了。本节将详细考察柱压问题并提出可行的解决方案。 柱压方程不难看出，对填充色谱柱，柱压与黏度 (η)、柱长 (L)和流速 (F)成正比，与填料粒径（d p）以及柱管半径（r）的平方成反比。K0是比渗透性系数，对填充床，其值约为0.001。（通过此公式可近似计算出给定色谱条件下的理论柱压。只有当新柱实际测得的柱压和理论柱压相差很大，才能说柱压存在问题。）黏度 (η)取决于流动相溶剂的选择，为降低柱压，反相色谱中倾向于选择低黏度的乙腈，而不是高黏度的异丙醇。当然选择时还需考虑溶剂强度、极性、分析物的溶解度以及和分析物兼容性等。柱长（L）增加可以提高分离度（R），流速（F）提高能加快分离，但都会导致柱压上升，选择确定这些运行参数时，需综合平衡和折中。填料粒径对柱压影响极大，dp降低一倍，柱压将增加4倍。UHPLC中采用的sub-2 μm填料，柱压超过普通HPLC泵的400Bar上限很多。提高柱温可降低黏度η，相应降低柱压。在梯度洗脱时，黏度随流动相组成的变化而改变，柱压也会处在不断变化中。对水/甲醇流动相体系，在55：45时，黏度和柱压有个极大值。内径的影响同样很大，根据线流速相同柱压相同的原则，4.6mm内径的色谱柱流速为1ml/min，约相当于在2.1mm内径色谱柱上的0.2ml/min流速，在10mm半制备色谱柱上的5ml/min，计算公式为v＝1.0ml/min x（内径r/4.6）2。所以在换不同内径色谱柱时，请及时调整流速，以免因高柱压损伤色谱系统。Tips柱压下降的原因一般是仪器系统的连接有泄漏，柱压不稳定一般认为是流路中有气泡或空穴，和色谱柱相关的柱压问题是一般都是柱压上升。色谱柱构造图1 Compress型不锈钢色谱柱的基本构造  图2 Modular Column基本构造通过观察色谱柱基本构造，不难想象，和柱压相关最大的是进口端筛板（inlet frit）以及其后面1-2cm长度的柱头填料。筛板上有比填料粒径小的小孔，筛板上的小孔或柱头填料的间隙被部分堵塞，是柱压上升的主要原因。有以下几类情况可能导致这种情况：1填料破碎和使用后有填料粉末生成填料破碎一般在装柱过程中发生，装柱压力过大或所选硅胶机械强度过低所至，设定柱压出厂标准可解决。而流动相中高pH值缓冲盐使硅胶溶解并重新形成填料粉末，则会堵塞出口端筛板。这种情况下反冲不起作用，只有更换后筛板，不过打开承压的后筛板，对柱床会有不好影响。2颗粒物堵塞引起柱压上升和对策可能堵塞进口端筛板（前筛板）和柱头填料间隙的颗粒物来源有：样品（制样时灰尘和滤纸等带入）；进样阀密封圈磨损；流动相（溶剂本身含有和配制过程进入）；液相仪器中泵阀密封圈的磨损；缓冲盐析出（一般在梯度运行和进样时盐的溶剂环境改变导致）；水和缓冲盐流动相内生长的细菌，也是颗粒物来源的一种，可堵塞筛板和填料间隙。应避免将这类流动相在室温下久放，可放入冰箱存放。对此，我们能做的预防措施和解决办法有：1) 预防措施过滤：样品（甚至标准品）和流动相过滤，既预防了筛板、柱头和毛细管堵塞，又能减少进样阀、活塞杆和截止阀等仪器关键部件的磨损。普通用0.45um孔径滤膜过滤样品和流动相，对使用2um以下填料的超高压柱的，可用0.20um滤膜。滤膜材质有再生纤维素、聚四氟乙烯、尼龙、硝酸纤维和醋酸纤维等，须根据和样品溶剂及分析物的适应性慎重选择。使用在线过滤器：在线过滤器内装有可更换的滤片，滤片孔径一般有2um和0.5um两种。安装位置有两个可选择：在进样器和色谱柱之间时，对样品和流动相中的颗粒物都有效；在泵和进样器之间，则只对流动相有过滤作用。使用保护柱：保护柱是缩小版的色谱柱，内含带填料的可更换的柱芯，安装在进样阀和色谱柱之间，用于防止色谱柱的化学污染为主，也有过滤颗粒物的作用。2) 故障排除反冲色谱柱：不连接检测器，直接将堵在前筛板上的颗粒物冲出排到废液瓶中。开始时反冲压力可低于正常使用压力，待颗粒物有冲出后，逐步提高冲洗压力。有时颗粒物已非常牢固嵌入到筛板内部，反冲不一定凑效，早反冲、勤反冲相对效果更好。有的厂商为避免堵塞，使用了较大孔径（2-5um）的前筛板，这种情况反冲会将填料冲出。换筛板：一般不建议这样做，因为换筛板会带走粘在筛板上的部分填料，使柱床的均一性受影响，导致柱效下降。不过如果反冲不能解决问题，也只能不得已而为之，要不然就要把色谱柱报废了。如果系统中不接色谱柱，柱压仍然高，说明泵出口到色谱柱之间的其它部位，包括进样器、在线过滤器和保护柱等有堵塞，可逐一排查。为了减少死体积，毛细管都做得尽可能的细，也可能被堵。3化学污染物引起柱压上升和对策来源同样是样品、流动相和系统，不过来源于样品的污染最普遍，特别是对复杂基体样品未经前处理或前处理不够的时候。化学污染物主要有：分子量很大的化合物、盐类、脂质、蜡类、油脂、腐殖酸、蛋白质等其它生物来源的物质。像盐类这样的保留能力极小的污染物会在死体积处很快从柱中洗脱出去，检测器一般对此类物质响应不大，有时表现为干扰峰、基线波动、斑点甚至负峰。保留能力中等的污染物，会被慢慢洗出色谱柱，表现为宽峰、基线馒头形波动和基线缓慢漂移。对强保留的污染物，一般流动相强度不足以将其从柱中洗出，会逐步在柱头累积。有时，累积在柱头的污染物可作为新固定相对分析物起作用，引起保留时间改变、峰拖尾和峰分叉等。污染物在柱头累积到一定程度，如果不采取措施，会堵塞填料间隙，引起柱压上升。最好的办法是选用合适的溶剂冲洗溶解这些物质，同时又不对填料本身有损害。如聚合物柱中累积的蛋白类污染物可用pH13-14的强碱溶液洗掉，但这种方法不适合硅胶基质色谱柱。1） 预防措施1. 制样时采用SPE固相萃取等方法，预先将色谱柱杀手类的污染物质清除掉；2. 连接保护柱:保护柱是分析柱的延伸，在填料类型和粒径上应于分析柱一致，才能最大限度起保护作用，又不影响色谱性能。一个设计和装填良好的保护柱，还可增加分析柱的分离效率。如果因某种原因需在保护柱中用不同的填料，也应选择比其所保护的分析柱保留能力弱的固定相，这时的保护柱完全用于截住强保留物质，类似于SPE小柱的功效。当保护柱柱芯保护功能用尽时，也不能说不可再清洗后复用，但价格低不值得去花这个时间。3. 经常对分析柱进行冲洗维护：流动相中不含缓冲盐:分析完成后，用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向冲洗色谱柱45min  流动相中含有缓冲盐:分析完成后，先用甲醇（或乙腈）：水＝10：90反向冲洗45min，然后再用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向冲洗色谱柱45min；（注意：甲醇（或乙腈）：水＝10：90容易长菌，使用时间不可超过3天）；2） 故障排除已经累积很多污染物，用甲醇或乙腈简单冲洗不奏效，推荐使用下面方法清洗反相柱100％甲醇---100％乙晴---75％乙晴/25％异丙醇---100％异丙醇---100％二氯甲烷---100％正己烷用每种溶剂冲洗至少10个柱体积，对于250mm×4.6mm的分析柱，合适的冲洗流速是1～2ml/min。最后用10柱体积的异丙醇过渡，然后回到原来的流动相体系。对受蛋白类污染的硅胶基质反相柱，纯有机溶剂如乙腈或甲醇不能溶解多肽和蛋白质。由有机溶剂、缓冲液和酸,有时还加上离子对试剂等组成的配方清洗效果极佳，譬如用三氟乙酸水溶液和三氟乙酸/丙醇溶液对柱子重复进行梯度洗来再生；Bhadwaj和Day试验了在250mm×46mm的柱子中注入100μL的三氟乙醇，再生效果良好。清洗硅胶、CN和Diol等正相柱建议方法：先用20柱体积50：50正己烷/氯仿冲洗，然后用甲醇、二氯甲烷或者100%醋酸乙酯冲洗。对油脂类物质，可用异丙醇清洗。

论坛简介由苏州工业园区医药分离纯化产业联盟协会主办的“制药分离纯化技术学术论坛”已成功举办五届，邀请来自国内外报告嘉宾200+位，累计吸引国内外从事分离纯化行业的专家和技术人员近2500+位，对国内医药行业的发展起到了很好的推动作用，已成为国内最专业、规模最大和反响最热烈的分离纯化行业专题论坛之一。目前我国的生物医药正处于高速发展及变革阶段，受益于医药创新政策不断催化，一致性评价快速推进、药审改革不断提速、医药内生需求逐步释放、医保政策逐步完善和科创版推出，给医药行业带来了巨大的发展机遇与颠覆性挑战。为进一步满足医药行业对宏观政策的解读，把握行业发展趋势和机会，解决行业发展的难点、热点问题，以及对整个医药上下游产业链相关技术协同发展的需求，我们在此诚挚邀请来自政府职能部门、中检院、国内外研发机构、制药企业和CRO/CMO/CDMO的专家学者和高校师生参加2019制药工艺（苏州）高峰论坛暨第六届制药分离纯化技术学术论坛，共同探讨行业发展的共性问题和解决方案，共享发展经验，共同促进中国医药产业的发展和进步！ 组织机构（拟）主办单位：苏州工业园区医药分离纯化产业联盟协会   药融圈协办单位：承办单位：苏州纳微科技股份有限公司支持单位：上海市生物工程协会

今天（2019.8.16）泰州市食品药品检验所联合泰州市药学会共同举办全市药品生产企业检验人员培训班。纳谱分析客户支持经理朱旭东应邀，在会上做技术交流。泰州市药品生产检验人员培训班背景介绍：为进一步帮助企业了解最新检测技术，提升药品产品质量， 提高检验人员的分析水平，泰州市食品药品检验所联合泰州市药学会共同举办全市药品生产企业检验人员培训班。纳谱分析客户支持经理朱旭东《基于单分散技术的色谱分析材料及应用》本次培训会的主要内容 ：溶出度与释放度的原理及应用 遗传毒性杂质的分析及应用 良好的称量管理规范介绍 药包材 可浸出物的研究分析 液相色谱最新技术介绍pH 测量的准确性介绍会场剪影

色谱柱“早衰”——寿命太太太太短我们都知道，液相色谱柱是耗材，一般一根色谱柱能使用500–1000针进样或者更多，色谱柱的成本只占总分析成本的几个百分点（其它分析成本还有：仪器折旧、溶剂采购和处置成本、制样成本以及人工成本）。除了简单冲洗外，任何其它修复一根已不能用柱子的努力，通常都不合算的。然而，一根新柱子，使用50针进样寿命毕竟还是太短了，值得花点时间解决这个问题。比如我们下面这个例子：”采用某B型硅胶 C8 柱在40 °C下进行梯度分离，从甲醇/水到THF/水变化，流动相中含0.05% 三氟乙酸，并使用了保护柱。分析物是聚合物提取物中的hindered胺，溶于甲苯而在甲醇中沉淀，进样前所有样品都经过过滤。待测物没有UV吸收，使用了氮化学发光检测器，流动相不能含氮，所以不能用乙腈。进样约50针后，胺的色谱峰消失了，峰消失的速度某种程度上取决于样品基体中所含聚合物的类型, 酸性聚合物最糟糕。连续试了4-5根色谱柱，都发生了同样情况。使用者认为是聚合物随时间的推移在色谱柱上积聚并不可逆地将胺粘在色谱柱内。用THF或二氯甲烷冲洗柱子，或者更换保护柱都不解决问题。他推测用强酸冲洗柱子会有用，但又担心这样对柱子带来永久性的损害。"常规上，普通的反相色谱清洗步骤是：先用50ml流动相中的水相连续冲洗，然后用100% 乙腈冲洗；如果不奏效，则再用二氯甲烷冲洗，对清除疏水污染物有用。用二氯甲烷冲洗后，在使用水性流动相前，必须再用乙腈冲洗确保去除残留的二氯甲烷。（如果你知道用某种特定的溶剂能溶解样品组分，去试试也无妨，只要记住清洗溶剂序列中，当次用的溶剂必须能完全溶解在前一次用的清洗溶剂中。 ）一般硅胶基质色谱柱pH耐受范围是 2–8，但短时间冲洗，流动相pH可大大超过这个范围。Dolan（John Dolan, LCGC专栏编辑）曾故意用10ml近饱和NaOH溶液冲洗，试着去破坏一根色谱柱，但发现并没有对色谱柱造成多大伤害。用低pH或高pH值清洗剂冲洗色谱柱往往能去除一些在色谱柱强保留的污染物。Dolan推荐的清洗离子对试剂的配方：100 mL浓度为200 mM磷酸盐缓冲液（pH 6）, 与甲醇 50:50混合。使用这种混合物特别有效果，不过使用时须注意缓冲盐析出，清洗之前和清洗之后，需用不含缓冲盐的50:50甲醇/水过渡。考虑到酸性聚合物吸附在色谱柱上的情况和离子对试剂类似，本案例，Dolan建议先试着用几种不同溶剂冲洗。据Dolan的几十年色谱经验，仅用溶剂冲洗是不会伤害到色谱柱的。选择最可能溶解这种聚合物的溶剂，然后试着用强酸碱流动相冲洗，如 0.2%三氟乙酸或者0.1M的NaOH。还不行，再考虑上面建议的冲洗离子对试剂污染的方法。好的是，柱子已经损坏了，可以试验各种不同清洗方法而不用担心进一步伤害柱子，只要注意清洗时不能连接流通池。本案例中，用户通过试验找到了恢复色谱柱性能的洗柱方法，先用了二氯甲烷和0.2%三氟乙酸的混合物冲洗色谱柱，去除了部分污染物，大约恢复了一半的胺色谱峰信号。然后用0.2%三氟乙酸和甲苯溶剂冲洗，100%的胺色谱峰得到了恢复。根本的解决方案，在方法中把用0.2%三氟乙酸/甲苯清洗色谱柱结合进去，每批进样结束后都进行一次这样的洗柱。结论：反相色谱保留机制中，除了疏水作用外，还存在多种其它作用，而残留硅醇基的作用对反相色谱的选择性中扮演重要角色，很多在硅胶基质反相色谱柱上能很好分离的应用，在聚合物基质色谱柱就很困难或根本分不开。 本文编译自《LCGC》杂志John Dolan的专栏文章编译：姚立新  纳谱分析技术（苏州）有限公司 总经理曾任国内知名色谱耗材公司的联合创始人及副总经理，成功开发过多系列的色谱耗材产品并实现其规模化生产和销售。拥有7项已授权的中国国家发明专利，发表论文20余篇。熟知国内色谱耗材市场行情和发展趋势，在该领域有十多年的市场营销管理经验。

在液相色谱中，峰形对称性的优劣对峰面积和分离度有很大的影响，从而影响分析结果的准确性。能够引起峰形异常的因素很多：柱外死体积引起峰形异常有个特点——对先出的峰影响大，对后出峰影响小；柱头塌陷、柱头和筛板污染会引起所有的峰形都异常；硅醇基次级保留只引起部分峰拖尾；相塌陷除了引起保留下降外，也会造成峰拖尾。实际上，色谱实践中大部分的峰形问题都不是色谱柱的问题，仪器参数设定、色谱条件和方法正确与否对峰形有很大影响。01峰后拖图1: 常见的3种拖尾情况次级保留引起的峰拖尾：反相色谱中，通常非极性和弱极性的化合物能获得良好的峰形，而带有－COOH、－NH2、－NHR、－NR2等极性基团的化合物则比较容易产生拖尾，原因是硅胶表面残留硅羟基对极性和碱性样品分子产生次级保留效应。反相填料表面有残余的硅羟基，具有一定的酸性，其pKa约为4.5～4.7。根据电离规律，流动相的pH－pKa>2即pH>6.7时，99％以上的硅羟基应该是呈离子状态的，即Si-O-，而pKa－pH>2即pH上图是填料表面的示意图，完全硅羟化的硅胶表面硅羟基浓度为8μmol/m2，由于空间位阻的作用，通常与C18硅烷基发生反应的仅达2～3.5μmol/m2，需要再用小分子的硅烷跟硅羟基反应，如图中的三甲基氯硅烷，使硅羟基中的氢变成了三甲基硅烷的一个惰性基团。三甲基硅烷还是比氢原子大得多，还是不能将所有的残余硅羟基的活性封闭掉。相同的样品在不同品牌的柱子上产生拖尾的严重性不同，从填料合成的角度而言就是键合密度是否高、封尾是否彻底，高密键合和彻底的封尾能显著减少这种机会，获得良好的峰形。解决方案先检查样品是否过载，由于样品过载引起的峰形后拖不能通过改变色谱条件消除。如果发现过载，需降低进样量（包括进样体积或浓度），进样量越小，峰形越好。       例如头孢尼西钠的测定：              2. 调节流动相pH             将流动相的pH调至比弱酸pKa小2以上，比弱碱pKa大2以上，可有效抑制易离子化待测物的电离，从而取得良好峰形。              例如二甲基苯氧乙酸的测定：碱性化合物中，甲胺的pKa为10.64，那么在pH12.64，大于pKa2以上时，甲胺完全以分子状态形式存在，不会引起拖尾。3.增加缓冲盐或增大缓冲盐的浓度流动相中加入缓冲盐，增强了流动相的离子强度，在－NH3＋等极性基团和硅羟基Si－O－之间存在着许多离子的干扰，减少了样品分子与硅羟基之间相互接触的机会，有助于削弱极性基团与硅羟基之间的相互作用，改善峰形。这种适合于碱性较弱（如氨基的N原子与强吸电子基相连），或碱性很强。但在刚性结构中，比较难以接近被C18长链和封尾试剂覆盖的硅羟基。例如高乌甲素的测定：4）加入三乙胺、四丁基硫酸氢铵或辛烷磺酸钠等拖尾的产生是因为－NH2、－NHR、－NR2与硅羟基发生静电作用引起的，那么阻碍它们之间静电作用的途径，应该有两种，一种是占据硅羟基这个作用位点，另一种是占据－NH2、－NHR、－NR2这个作用位点。在流动相中加入三乙胺，能显著的改善峰形，消除拖尾，其作用是屏蔽硅羟基。三乙胺的pKa为11.09，在pH加入三乙胺改善峰形的时候，有两点需要注意：1）三乙胺的碱性很强，加入三乙胺后流动相的pH可能超出色谱柱的使用范围，对色谱柱造成损伤。pH的改变也会导致出峰时间的显著变化，可能引起的其它问题，建议流动相中加入三乙胺后回调至未加入前的pH值。通常即使pH回调过后，由于三乙胺成为了固定相的一部分，保留时间也有较大变化；2）三乙胺在210nm处有比较强的吸收，如果液相方法中检测波长在210nm以下测定时需要谨慎使用。四烷基季铵盐（如四丁基硫酸氢铵、四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵等）在水中电离后，也形成了类似N＋H(CH2CH3)3的结构N＋(CH2CH2CH2CH3)4 ，这种结构也能有效的与Si-O-产生较强的静电作用，阻止氨基与硅羟基的接触，改善峰形。而且它还有一个不同于三乙胺的显著特点是，它在低波长范围的吸收比三乙胺弱。流动相中加入辛烷磺酸钠等烷基磺酸盐离子对试剂也能很好的改善峰形，其作用机理与三乙胺和四丁基硫酸氢铵颇为不同，是通过与样品分子的作用来阻止样品分子与硅羟基的作用来改善峰形。02峰前拖峰前拖发生的概率比较小，下面是三种前拖峰的表现形式：解决办法造成前拖峰的原因有多种，我们可依次逐一排查：样品是否过载降低进样浓度，看峰形是否有所改善。一般认为峰高在100mAU左右比较合适，不至于因过载影响峰形。检查是否是用流动相溶解样品溶解样品的溶剂（如纯甲醇）洗脱能力比流动相强会发生峰前拖。具体机理是：正常的峰形应该是样品在色谱柱上均匀的前移的情况下得到的，浓度分布在整个通过色谱柱柱床的过程中任何时候都呈正态分布。样品溶液进样后到达色谱柱时间很短，应还未被流动相充分稀释，洗脱能力更强的样品溶剂的局部存在，将使部分样品被洗脱的速度加快，导致峰前拖。增加流动相中缓冲盐的浓度增加缓冲盐浓度可以增大流动相中的离子强度，减少因静电的作用（有可能存在于样品分子之间、也有可能存在于样品分子与填料表面之间）引起的前拖。例如：注射用苦参碱的测定流动相中加入适量的四氢呋喃往流动相中加入少量的四氢呋喃有时可以改善峰形、增大分离度，很多色谱工作者都知道和使用，但其机理似乎少人提及。通常所加入的量在5％以内即可，需要的时候可以加入更大的量。升高柱温的温度升温有助于增加流动相传质速率，减少因静电作用引起的前拖，但温度不宜太高，温度太高容易损伤色谱柱，特别是含有离子对试剂的时候，最好不要超过40度。03其它峰形问题裂峰柱头污染和柱头塌陷都会造成裂峰，最常见的原因是筛板上颗粒物堵塞样品进入色谱柱不均一，只需反冲色谱柱将颗粒物除掉就可解决。

自2005年亨氏辣椒酱被检出含有“苏丹红一号”以来，多家餐饮、食品公司相继“涉红”，苏丹红事件席卷中国。苏丹红是一种化学染色剂，并非食品添加剂。该物质具有偶氮结构，这种化学结构决定了它具有致癌性，对人体的肝肾器官具有明显的毒性作用。因其鲜红的色泽，很多不法商家利用这一特性将其添加到辣椒粉、辣椒酱、辣椒油等辣椒制品中以牟取更高的利润。目前，国标GB/T19681-2005 食品中苏丹红染料的检测方法，使用的前处理柱是中性氧化铝固相萃取柱，存在着活度不易控制、回收率不稳定、净化后油脂较多等问题，严重干扰了苏丹红的检测，因此，寻找一种简便高效的检测食品中苏丹红的方法迫在眉睫。纳谱分析特别开发了苏丹红专用固相萃取小柱，可以快速、高效的提取、检测四种苏丹红，方法具有灵敏度高、重现性好、试剂用量少、油脂去除率高等优点。本实验针对三种不同来源（辣椒粉、辣椒酱、辣椒油）的苏丹红进行提取和检测。适用范围 参照国标GB/T19681-2005 食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法，适用于食品中苏丹红染料的检测。净化步骤1、待净化液的制备：    参照国标GB/T19681-2005中样品处理方法，得到待净化液，辣椒油等含油量较高的样品，需先称取2g无水硫酸钠于10 mL离心管中，再加入样品，提取后取上清液上样。2、SPE柱操作流程：（1）活化：SelectCore SDR苏丹红专用柱，规格500mg/6mL，依次使用5 mL二氯甲烷、5 mL正己烷活化SPE柱（2）上样：将待净化液上到SPE柱上（3）淋洗：使用5 mL正己烷淋洗SPE柱，弃去全部淋洗液（4）洗脱：先使用5 mL二氯甲烷洗脱，待5 mL二氯甲烷快要流干时，再加入2 mL二氯甲烷，并收集全部洗脱液，备用（5）将洗脱液在40 °C下氮吹至干，用1 mL乙腈复溶，超声2 min，涡旋10 s，过0.45 μm的有机滤膜，供液相色谱检测液相色谱条件色谱柱：ChromCore C18，4.6 ×150mm，3 μm，120?（厂商：纳谱分析）流动相：A：水；流动相B：乙腈梯度洗脱步骤如下表所示：柱温：30 ℃进样量：20 μL检测波长：500 nm实验谱图和加标回收率数据01苏丹红混标图谱02辣椒粉实验谱图辣椒粉加标回收率数据03辣椒酱实验谱图辣椒酱加标回收率数据04辣椒油实验谱图辣椒油加标回收率数据左为辣椒油提取液经过SelectCore SDR苏丹红专用柱净化后样品颜色右为中性氧化铝SPE柱净化后的颜色由上图可以看出，按照GB/T19681-2005中使用的是中性氧化铝SPE柱（右），经过净化后样品颜色较深，并且能看到明显的油脂。而采用专用柱——SelectCore SDR苏丹红专用柱（左）净化后，样品颜色澄清透明，没有明显的油脂。苏丹红专用柱结论SelectCore SDR苏丹红专用柱可以快速、高效的检测辣椒粉、辣椒酱、辣椒油等辣椒制品中的四种苏丹红，方法具有灵敏度高、重现性好、试剂用量少、油脂去除率高等优点。订货信息本应用相关产品 产品描述货号 苏丹红专用柱SelectCore SDR 500mg/6mL; 30/pkgSDR100-060500-1分析柱ChromCore 120 C18 3μm，4.6 ×150mmA001-030012-04615S

气相色谱仪作为一种分析检测仪器，因具有分离效能高、准确度高、进样量少和多组分同时测定等优点，被广泛地应用于各种领域。但由于检测员素质、样品性质以及仪器本身等方面的原因，常常出现各种问题，严重影响正常的生产，甚至造成巨大经济损失。本文简单介绍气相色谱仪的几种常见故障及排除方法，以期与从事气相色谱仪维修和使用的同行交流探讨。壹 基线不稳，基线噪音过大 原因分析及解决办法：载气纯度不够，根据检测需要更换纯度较高的载气。 脱氧管，脱水管等载气过滤装置失效，可以查看过滤装置内的颜色变化情况等判断是否需要更换，如失效，应及时更换，防止造成整个检测系统污染。管路有漏气处，打开载气，使用检漏液对管路各连接点进行检漏，发现漏气处，重新连接。进样口、色谱柱或检测器有污染，判断污染出在何处，逐一进行排查。首先，拆下色谱柱连接检测器端，若基线仍不正常，刚说明检测器受污染，需要清洗检测器或用高温老化检测器数小时；每次关机后应使用夹子夹住尾气排放软管，防止空气回流进入检测器造成污染。若基线正常，检测器未受污染，则打开进样口，用溶剂清洗汽化室、分流平板，更换衬管内玻璃毛或更换新衬管；若基线仍不正常，拆下色谱柱连接检测器端，与进样口端正常连接，通载气，用色谱柱使用温度范围内较高温度老化数小时或用溶剂冲洗色谱柱或更换新色谱柱静电干扰或仪器电子控制元件问题，检查仪器是否良好接地，检查线路板及各电子部件是否松动，若问题仍旧，拆下通过流量控制阀后管线，用气体流量计测量实际流量是否稳定并且与设定值是否相符，若波动或相差较大，则需要更换气体流量控制阀。检测器老化。检测器使用时间过久，已达到使用年限，或是日常不正确的操作，致检测器受损严重，则需要更换部件或是更换检测器。柒自动进样器常扎弯进样针或进样针推杆 原因分析及解决办法：进样隔垫上的螺母拧得过紧，隔垫在高温时膨胀更紧，使得进样针难以扎进弄弯针头，拧隔垫螺母不应拧得过紧，随着进样口温度升高，进样隔垫膨胀自然会密封良好，既防止了针头扎弯，又能增加隔垫使用次数。进样针安装不正确造成进样口扎在其它部位，按要求正确安装进样针。进样针管内被污染，由于污染物造成推杆活动阻塞弄弯推杆，进样针使用一段时间后，特别是在重新开机前，应取下进样针，用手推进样针杆，感觉是否顺畅，若有阻塞感，应吸入溶剂反复推拉清洗，若污染物仍不能清除，可将推杆拉出，同针管一起放入溶剂中超声清洗。进样样品粘稠度过大，造成针杆难以推进。可以重新对样品净化处理或稀释进样样品或选用缓慢进样模式，若问题不能解决，则需要选用专用进样针或其它进样方式。叁 谱图中峰形重叠原因分析及解决办法：检测器长时间闲置，特别是在气候阴湿季节，造成点火困难，可以开机设置高温老化检测器数小时后点火。氢气或空气纯度不够或含水量过大。检查气体输出压力是否正常，若输出压力不够，则需要检查管路是否漏气，对于使用氢气发生器，则需要更换电解液。同时检查分子筛、干燥管等净化装备是否变色失效，若失效需要立即更换。点火线圈密封圈老化造成密封不严，更换密封圈。点火线圈故障不能打火，由于线圈使用过久，上面产生锈斑或污染物，可以用软布醮无水乙醇擦拭干净，晾干后安装。电子流量控制阀（EPC）不能正常控制气体流量。将气体流量计连接到电子流量控制阀的后端检测流量输出情况，若输出偏大或偏小但稳定，则可以通过流量计设置需要使用参数，若输出流量不稳定，则需要更换流量控制阀。有时也出现在用电脑联机操作时点不着火，可以尝试在仪器操作面板上按键点火，往往点火成功。肆 进样后不出峰 原因分析及解决办法：进样针堵塞，样品没有注入汽化室。取下进样针，手动吸取样品并推出，观察能否正常吸入排出。若堵塞可选择溶剂超声清洗，若超声清洗仍不能吸取，则需要更换进样针。样口或色谱柱受污染造成样品严重吸附。可以选择溶剂冲洗汽化室，超声清洗分流平板，分流/不分流进样时清洗或更换衬管，更换衬管内玻璃毛，截断一段连接进样口端色谱柱并重新安装老化，或选择其它类型色谱柱等方法排除问题。分流/不分流进样时衬管内玻璃毛过多，堵塞了样品进入色谱柱。安装玻璃毛应取少量并安放在进样针插入衬管针尖以下的位置。进样口漏气或色谱柱连接二端处严重漏气。检查进样口密封垫是否老化失效并及时更换，重新正确连接色谱柱，注意不要将螺母拧得过紧导致密封垫破碎。色谱柱被堵塞。拆下色谱柱连接检测器端，插入溶剂或水等液体中，观察是否有连续气泡产生。若没有气泡或很少量气泡缓慢吹出，则色谱柱被堵塞，可以尝试反接色谱柱，用大流量载气通入色谱柱并逐段截断或更换色谱柱。进样口汽化室温度太低，样品没有被汽化。根据样品性质升高进样口温度，使其能在较短时间完全汽化。检测器端故障。记录器或信号放大器连接线断开，检查线路连接。对于需要点火检测器，则可能火焰熄灭，需要重新点火，熄火原因则可根据问题三排查。伍 样品峰出现拖尾峰 原因分析及解决办法：进样口或色谱柱污染。由于有污染物质存在，吸附样品或随样品一起出峰造成拖尾现象，可以按照问题四中清除污染物的方法来处理。未吹扫或吹扫时间设置过大。样品在汽化室迅速汽化后没有迅速进入色谱柱或吹扫至尾气，则会造成进样延迟，导致样品峰出现拖尾现象，因此要设置合适的吹扫时间防止拖尾，通常时间应设在0.5至1.0分钟之间。进样量过大，分流比太小。由于进样量大，分流比小，需要进入色谱柱部分汽化样品不能迅速进入，造成样品溢出而出现峰拖尾现象。分析样品时通常由大至小设分流比，减少进样量，既能防止样品污染仪器，又能防止出现拖尾现象。陆样品峰呈现圆顶原因分析及解决办法有：超出检测器的线性范围。减小进样体积或增加分流比。2.色谱柱选择不当。由于色谱柱固定相对样品的吸脱能力太弱造成样品各组分未分离或固定相对样品吸脱能力太强导致样品延迟出峰，使峰呈现圆顶现象。根据样品中各组分的化学性质选择合适色谱柱才能得到好的分离效果，并有美观的峰形。柱箱温度过低或过高。柱温过低使得样品组分吸脱延迟导致峰形圆顶，柱温过高则有可能使样品物质发生分解改变。所以只有设置合适的柱温，才能保证峰形尖锐，分离度好，出峰时间短。柒谱图中峰形重叠原因分析及解决办法：载气流速过快或柱箱温度过高。样品中各组分在色谱柱中尚未完全分离就已进入检测器。适当降低流速或降低柱箱温度，但要防止出现圆顶峰。色谱柱极性与样品中组分极性不相容、色谱柱过短或色谱柱严重流失或污染，柱效较低。较低的柱效难以将样品中各组分分离，需要了解样品的组分性质，选择合适的具有较高柱效的色谱柱。进样量过大。较大的进样量往往遭成色谱柱过载，从而导致样品中各组分难以完全分离。适当减少进样量，既能提高柱效，增加谱图的分离度，又能得到尖锐峰形，更能防止仪器被污染。

头孢地嗪钠为半合成第三代头孢霉素，对革兰阳性菌、阴性菌均有抗菌活性，对β内酰胺酶稳定，对头孢菌素酶和青霉素酶极稳定。头孢占据市场上抗生素较大的份额、产量大需求多，感染较轻一般选用口服，感染较重会选择静脉滴注。而此类抗生素较易引发过敏反应，除去一部分过敏体质的患者，药品的质量问题也是造成过敏的主要原因之一。药物因自身降解形成高分子聚合物被引入人体后，与体内大分子载体如蛋白质、多肽及多糖等发生不可逆结合，引起抗原-抗体反应，引起一系列过敏反应症状，从而致敏。中国药典2015版中，头孢地嗪钠有关物质II检测项目就是对于其聚合物含量的检测，旨在通过该项检测进而减小因聚合物超标而引起的一系列药物不良反应，严格控制药品的质量，该分析方法主要依据分子排阻色谱法（SEC）进行测定。结构式

实验室数据完整性已成FDA检查制药企业的一把利器，其中一条关于随意手动积分或者无书面程序规定手动积分，说明了FDA本身并不是不认可手动积分，而是要求有操作规程规定什么情况可以手动积分，如何积分，并且应保存并记录积分参数。CFDA紧跟FDA的步伐，在2016年度多次飞检中，开具多条数据完整性方面的缺陷，收回多张GMP证书。关于手动积分并没有开具缺陷，制药企业应防患于未然，提前把手动积分管理好。手动积分的定义关于手动积分，并没有指南给出明确的定义。笔者只查到有两篇生物样本分析的方法验证指南规定了再积分(Reintegration)的注意事项。　　FDA的2001年定稿指南 Bioanalytical Method Validation，及相应的2013年草案指南也有类似的要求。 生物样本分析的方法验证2013草案指南，第III.C节“样本数据再积分”规定：SOP应该确定再积分的标准，和怎样进行再积分;应清楚描述、并记录再积分的理由;应报告原始和再积分数据。第VII.D节还规定：再积分数据应有管理人员授权再积分。　　EMA的2011年指南 Guideline on bioanalytical method validation，第5.5节规定：应该有SOP描述色谱的积分和再积分。应在分析报告中讨论偏离这个SOP的任何偏差。应该记录色谱积分、再积分的积分参数、初始积分数据、最终积分数据，并在要求时立即可得。手动积分的适用情况1)低分离度或低响应;2)流动相不稳定，基线紊乱，保留时间变化小;3)运行过程中，出现异常峰;4)软件积分的局限性，如由于软件参数阈值的设置导致峰未积分，峰起点和终点间出现肩峰和异常的基线漂移，软件错误(峰未积分和错误识别峰);5)由于样品母体的干扰导致的复杂色谱图：裂峰、目标杂质的同时洗脱/肩峰、基线噪音、负峰、基线上升或下降(由于某些梯度程序)、峰的严重拖尾、烃类的存在导致自动积分不正确。手动积分的权限及操作操作员在数据系统自动积分不正确时，领取手动积分处理报告表并填写，手动积分申请被QC经理批准后由QC经理或QC组长(若有)或其指定人员(一般是指经验丰富的资深QC)方可进行手动积分。手动积分注意事项1)手动积分不能试图通过以下动作来使数据符合标准要求：减少峰(减少峰面积);增加峰(增加峰面积);改变峰高;2)同一次检验的所有标准品、工作对照品、样品等必须使用同一方法进行手动积分。3)手动积分结束后，应打印自动积分图谱和手动积分图谱附于手动积分申请表之后，提交QC经理审核;QC经理应复核完整的数据找出根因，基于根因制定相应的CAPA措施来避免类似事件。4)自动积分的图谱不得删除或被覆盖，应与手动积分图谱保存于计算机中;打印的自动积分图谱和手动积分图谱应标识清楚签名，随同手动积分申请表附于检验原始记录后面一起交质量管理部经理、QP审核无问题后归档。色谱软件选型、权限设置和结果显示满足合规要求的色谱软件(例如Waters和Angilent的软件)，能够分别设置不同权限，例如普通化验员不具备进行手动积分的权限，需要主管进行操作，有些软件则不具备这些功能;即使是同一个品牌的软件，也有不同版本;即使软件有这个功能，企业也不一定启用。有两个信息是否显示，对色谱数据透明度非常重要：方法名称和数据版本。如果企业不使用手动积分(重画基线)，而采用修改参数的方式，则每修改一次，是不同的方法(规范的管理程序会要求更改方法名称保存，否则就只能到审计追踪才能查出来这个方法已经被修改了)，而打印的色谱图可以选择是否显示方法; 每处理一次数据，会形成一个数据版本，同样的，打印的色谱图可以选择是否显示数据版本。一个完全透明的结果显示，会在打印的色谱图上显示“方法名称+数据版本”(同时要求修改参数则改变方法名称，不需要QA或检查员仔细检查审计追踪才能发现修改痕迹)。

色素食用色素的前处理和分离食品的色彩是食品感观品质的一个重要因素。人们在制作食品时常会使用一种食品添加剂－食用色素。目前使用的食用色素有天然食用色素和合成食用色素两大类。合成食用色素即人工合成的色素，其优点不少，如色泽鲜艳，着色力强，但它对人体也造成一定的危害，如具有一定的毒性、致泻性、致突性（基因突变）和致癌性。鉴于合成食用色素的不安全性，国家加强了对这类合成色素的监管，制订了食品合成着色剂的测定标准（GB5009.35-2016）。其中的前处理方法采用的是聚酰胺吸附法测定，但是该方法有一定的局限性，实验中对填料的含水量、操作温度和滴定速度都有一定的要求，且由于该填料对色素的吸附力不稳定而导致回收率数据不稳定。而本实验采用的弱阴离子混合模式，针对人工合成色素中含有苯磺酸和苯甲酸结构的离子基团可以更好的结合，保证分析的稳定性，并且由于采用单分散聚乙烯吡咯烷酮基质，活化淋洗洗脱步相比其他竞争对手产品可以更快的处理，保证回收率的基础上达到更好的净化能力，适用于多个复杂基质样品的检测。1.样品制备1.取8种色素样品各20mg，分别溶于10%的乙醇水溶液中，根据HPLC的出峰峰高调整相应浓度，配置成50ppm浓度的混标溶液，待用。2.取果冻基质4g于离心管内，加入10mL的提取液（乙醇：氨水：水=7:2:1），震荡混匀1min，在4000转的条件下离心5min.提取上清液，重复三次，收集上清液备用。3.取八宝粥基质4g于离心管内，加入10mL的提取液（140mL的乙醇：乙腈（2:1），再加60mL水和2mL氨水），震荡混匀1min，在4000转的条件下离心5min.提取上清液，重复三次，收集上清液备用。4.各取两种基质的上清液2mL于两个10mL容量瓶中，用超纯水定容至10mL，加入200uL的50ppm的混标溶液，用柠檬酸溶液调节至pH=6（±0.1），作为上样液备用。2.实验方法前处理实验准备SelectCore WAX柱(150mg/6mL)1. 上样液：准备备用液。  2. 活化：依次用6mL 甲醇、6ml10%甲酸水溶液活化;(视频如下图，图左为SelectCore WAX  SPE柱，图右为Brand W  WAX SPE柱）3. 上样：上样液注入SPE小柱中，弃去流穿液;(视频如下图，左为SelectCore WAX  SPE柱，右为Brand W WAX SPE柱）↑左为果冻基质上样，右为八宝粥基质上样↑4. 淋洗：移取6mL的甲醇溶液注入SPE小柱中，弃去淋洗液;5. 洗脱：移取6mL的5%氨水甲醇液注入SPE小柱中，收集洗脱液;(视频如下图，左为SelectCore WAX  SPE柱，右为Brand W WAX SPE柱）↑色素回收实验中的色素洗脱环节↑6. 收集：氮气吹干,用10%乙醇水溶液定容至和上样时一样的体积，过0.45umPTFE滤膜，上HPLC检测。 HPLC设定方法流动相A：乙腈       流动相B:0.02m乙酸铵水溶液色谱柱：ChromCore C18 4.6×250 5μm（厂商：纳谱分析）波长：254 nm进样量：5uL柱温箱：35℃梯度设置:3.结果图1 混标图2 果冻基质图3 添加水平为2.5mg/kg的果冻中人工合成色素检测图谱回收率数据：图4 八宝粥基质图5 添加水平为2.5mg/kg的八宝粥中人工合成色素检测图谱回收率数据：4. 结论据实验结果显示，纳谱分析的SelectCore WAX对八种人工色素具有很好的保留效果，并对两种基质中杂质和化合物的净化也有一定优势，且在样品前处理过程中发现，相较于Brand W的WAX柱，纳谱分析的SelectCore WAX在流速上占有明显的优势---快且均匀，根据数据显示回收率也符合要求，综上所述，该款固相萃取柱适用于食品中合成着色剂检测的前处理分析。订货信息本应用相关产品产品描述货号 固相萃取柱SelectCore WAX 150mg/6mL;30/pkgWAX060-060150-1分析柱ChromCore  C18 5μm，4.6 ×250mmA001-050018-04625S

人参皂苷是人参的主要成分，都具有相似的基本结构：含有由30个碳原子排列成四个环的甾烷类固醇核。他们依糖苷基架构的不同而被分为两组：达玛烷型和齐墩果烷型。其中，达玛烷类型包括两类：人参二醇型（A型），人参三醇型（B型）。人参皂苷Rg1、人参皂苷Re属于人参三醇型；人参皂苷Rb1属于人参二醇型。不同种类的人参皂苷有着不同的功效，如人参皂苷Rg1、Re可快速缓解疲劳、改善学习记忆、延缓衰老，具有兴奋中枢神经作用、抑制血小板凝集作用。人参皂苷Rb1则具有影响动物睾丸的潜力，亦会影响小鼠的胚胎发育，具有增强胆碱系统的功能，增加乙酰胆碱的合成和释放以及改善记忆力作用。12人参中人参皂苷的分离（中国药典2015）人参类草本植物中各类人参皂苷含量各有差异，因此明确各人参皂苷组分的含量对于中药材质量的控制有着重要意义。结论本应用依照药典方法，选用ChromCore C18反相色谱柱对人参中有效成份人参皂苷进行分离，使人参皂苷Rg1和人参皂苷Re之间拥有良好的峰型及分离度（分离度大于2.0），符合药典规定。——纳谱分析关注我们，更多干货分享我们坚持以质量、创新和服务为广大色谱工作者提供优质的色谱分离产品和技术支持。产品应用涉及小分子药物及多糖分析、生物分离、DNA/RNA核酸分离、手性拆分和样品前处理等。纳谱分析技术（苏州）有限公司

自2011年3月15日“瘦肉精”事件曝光后，政府加紧对瘦肉精这种非法添加物的管控。瘦肉精是一类药物的统称，因其食用后可导致急性中毒、代谢紊乱等症状，中国农业部已禁止瘦肉精在饲料和畜牧生产中使用。但是，一些不法商家铤而走险，违法添加瘦肉精，使得消费者深受其害，寻找一种快速高效检测瘦肉精的方法成为目前亟待解决的问题。应用分享猪肉中四种β受体激动剂的提取与检测 适用范围参考农业部1025号公告-18-2008 动物源性食品中β-受体激动剂残留检测液相色谱-串联质谱法，本方法适用于猪肉、猪肝、牛肉等动物源性食品中沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗、氯丙那林等β-受体激动剂的检测。实验步骤1、样品酶解和提取：2 g样品加入8 mL乙酸铵缓冲液，充分混匀后加入50 μL β-盐酸葡萄糖醛苷酸酶-芳基硫酸酯酶，超声15 min，37 ℃酶解16 h，酶解后放置至室温，涡旋混匀，10000 rpm离心10 min，转移上清液于另一50 mL离心管内，加入0.1 mol/L高氯酸溶液5 mL，涡旋混匀，用高氯酸调节pH至1.0±0.2，10000 rpm离心10 min，将上清液转移于另一50 mL离心管内，用10 mol/L NaOH溶液调节pH至9.5±0.2，加入乙酸乙酯15 mL，涡旋混匀，并振荡10 min，5000 rpm离心5 min，取出上层有机相至另一50 mL离心管内，下层水相中再加入10 mL叔丁基甲醚，涡旋混匀，并振荡10 min，5000 rpm离心5 min，合并有机相，50 ℃氮气吹干，用2%甲酸水溶液5 mL溶解，备用。2、净化处理：SPE柱活化：SelectCore MCX，60mg/3mL小柱依次用甲醇、水、2%甲酸水溶液各3 mL进行活化；上样：取全部备用液过柱子；淋洗：依次用2%甲酸水溶液、甲醇各3 mL进行淋洗，再减压抽干；洗脱：使用2.5 mL 3%氨水甲醇溶液洗脱，洗脱液在50 ℃下用氮气吹干，甲醇-0.1%甲酸水溶液复溶后离心取上清液上机。3、液相色谱条件色谱柱：ChromCore  C18，2.1 ×100mm，3 μm流动相：A：0.1%甲酸水；流动相B：乙腈，梯度洗脱步骤如下表所示：柱温：30℃进样量：2μL4、质谱条件离子源：电喷雾离子源（Electrospray ionization，ESI）正离子扫描监测方式：多反应监测（Multiple Reaction Monitoring，MRM）电喷雾电压：4000V干燥气：N2 （11L/min，300℃）雾化气压力：45psi实验谱图及加标回收率结果图1：10ng/mL 4种β-受体激动剂标准溶液的多重反应监测（MRM）色谱图图2：空白样品里的4种β-受体激动剂的多重反应监测（MRM）色谱图图3：添加量为1.0 μg/kg的4种β-受体激动剂的多重反应监测（MRM）色谱图样品加标回收率实验结果（添加水平为1.0 μg/kg）客户评价 该应用采用的SelectCore MCX固相萃取柱应用广泛，来自客户的好评不断！客户A某食药监用户你们的MCX柱子我用了，挺不错的，尤其流速确实很快，之前我做鸡蛋用Waters的小柱必须要先除酯才能过柱，而且流速很慢的，现在用你们的柱子不用除酯直接过柱，流速比预想的快很多，而且回收率也挺好。订货信息本应用相关产品产品描述货号 固相萃取柱SelectCore MCX 60mg/3mL;50/pkgMCX060-030060-1分析柱ChromCore  C18 3μm，2.1 ×100mmA001-030018-02110S

目前纳谱的色谱柱种类越来越多，合作伙伴也越来越多，所以对纳谱的产品和技术的咨询也日益增多，今天小编将一些大家经常咨询的问题和解答提供如下，便于大家的理解和更好地在以后的工作中使用。Q1:填料中孔径的概念？A1：我们通常所说的孔径实际上是个统计的、平均的概念，即平均孔径，它是指累积孔径分布曲线50%处的平均孔径，或是与孔径分布曲线的最高频度相对应的平均孔径。通过测试纳微UnSil5-1000与进口同类型的色谱填料的孔径分布，得出孔径分布曲线（图3），可以看出UnSil的孔径分布较窄，而进口填料的孔径分布较宽，因而UnSil的硅胶填料孔径的控制更加精准。以下是纳微科技不同孔径的微球在扫描电镜下的图片（图4）。纳微可以定制最大4000?孔径的微球。Q2:为什么要做封端处理？A2:一般常见的硅胶填料（没有经过封端处理），pH耐受性都在2-8之间，在碱性环境下，硅胶的Si-O-Si-O结构会被破坏而溶解。即使在pH5-7的环境中，硅胶表面的Si-OH也会电离。使得碱性化合物产生拖尾，严重影响分离效果。封端处理以后可以减少待测组分与硅胶表面残留的酸性硅羟基反应，改善和保持较好的峰形，这对于碱性化合物的分离尤其重要。而不同的封端技术也会直接影响色谱柱的效能。纳微科技的硅胶填料经过特殊封端处理技术后(如UniSil Ultra系列产品），使得填料的pH耐受性有所提高（pH 2-10）,并且覆盖硅胶金属杂质还可以减少碱性化合物的拖尾，增强峰型对称性。通过在同等条件下，对UniSil Ultra与同类型的进口硅胶填料进行碱（pH10.0）冲洗，可以看出UniSil Ultra比同类型的进口D硅胶填料可以耐受更多次数和更长时间的强碱清洗（图5），从而证明UnSil Ultra的的耐碱性更强，使用寿命更长。碱洗条件：MeOH/TEA (pH=10.0)=40:60冲洗体积：60CV柱效测试：流动相：ACN/H2O=60:40柱温：35℃样品：甲苯Q3:C18柱选用的基本原则？A3:(1)选用经封端处理的色谱柱，可以防止碱性化合物的拖尾现象。(2)选用含碳量高的柱子，可以增加保留值。（还要综合考虑孔道结构和空间）(3)选用小颗粒的填料，可以提高分离度。（还要综合考虑压力和设备投入）(4)分子量大的组分选用大孔径填料的柱子。(5)纳微可以根据不同的样品条件提供不同规格的C18填料，例如常规的UniSil®C18, 耐碱性较强的UniSil® C18 Ultra,以及适用于100%水溶液的UniSil® C18 Polar等。Q4:测定多肽，一般采用什么柱子？流动相是乙腈和水，还有微量的TFA。特别是像类似三肽的短肽，应该怎么选择柱子？A4: 多肽一般还是可以用C18的，根据分子量不同可以选择150?、300?的孔径，有些小肽用100?也可以。在C18上保留太强时，C8，苯基，C4，C3也都可以用于多肽的分离。三肽也可以尝试100? C18，不过小肽往往极性偏大，普通C18上可能没有保留，这时需要使用亲水型C18或Hilic模式。以下是为大家推荐的纳谱ChromCore的色谱分析柱产品：（1）分子量较大的多肽（2000D以上）可以优先考虑纳谱ChromCore C18，ChromCore 300 C18。（2）小肽可以用ChromCore 120 C18，如果无保留，选择亲水型C18或Hilic模式。(3) C8系列有ChromCore 120 C8、ChromCore C8、ChromCore 300 C8、ChromCore AQ C8（亲水型)。(4) 苯基系列有ChromCore Phenyl、ChromCore PFP、ChromCore Biphenyl。(5) C4系列有ChromCore C4、ChromCore 300 C4、ChromCore 300 C4-T。(6) 亲水型C18可选ChromCore AR C18、ChromCore AQ C18、ChromCore Polar C18。(7) Hilic模式可选ChromCore HILIC-Amide、ChromCore HILIC-Imidazole、ChromCore Diol、ChromCore CN等。Q5:我之前有了解到贵公司也有手性色谱柱，之前买过国外品牌的手性柱，其手性柱价格相比普通反相色谱柱，要高出很多倍，不知道是本身柱子装填技术的难度大还是其他什么原因？它的主要技术关键在什么方面？A5：这个问题我们请纳微科技专门负责手性产品的朱总解答（1）手性柱使用的填料介质是大孔多孔介质，生产工艺复杂；（2）在介质上涂敷或键合的手性位点官能团生产工艺复杂；（3）官能团与介质基球涂敷或键合工艺难度大，且工艺复杂；（4）装柱工艺及成本也较高。这些都导致了手性色谱柱比普通反相柱价格高出很多。纳微科技手性填料包括OD、OJ、OZ、AS、AJ 5个型号的产品，手性色谱柱从填料的生产（包括直链淀粉产品研发）到装柱一系列过程都是自己完成，所以和国外相比，性价比更高，另纳微还可以提供手性拆分纯化服务。Q6:色谱柱的技术都有哪些？国内外的色谱柱都有何差别？A6:色谱柱技术包括填料技术和装柱技术，填料是色谱柱的心脏，填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术也没有想象中的这么简单，不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度，装柱工艺都有所不同，要装出紧密、稳定、均一的柱床，需要经验积累。纳微有专门提供装柱培训的课程。有兴趣的朋友可以联系我们。很多人都认为国内和国外的色谱柱差距很大：原因在于国内的的公司都不会自己开发填料，一般都会买国外现成的填料装柱，填料质量控制权不在自己手里。另外，对色谱柱性能很关键的基础材料——裸硅胶，国产的还不过关，在纯度、粒径和孔径的均一性方面和国外产品相比，差距很大。    纳谱分析的填料供应商纳微科技经过长达十余年的潜心研发，目前已拥有单分散硅胶色谱填料的精准制备技术、表面功能化技术和规模化生产能力，打破了填料长期依赖进口的局面。从基球的大规模生产-表面键合和封端-装柱全程在公司内部完成。可以保障整个生产工艺过程可控和可溯源。

引言现代高效液相色谱分析中，色谱柱的选择直接影响了分离效果的好坏，选择合适的色谱柱可以缩短方法开发所需的时间，并且使方法更具稳定性。但是现在市场上色谱柱种类繁多，选择色谱柱时哪些参数是我们必须考虑的呢？色谱柱参数一、物理性质柱管规格：即柱长和内径，如最常见的250*4.6mm。一般柱长在2—250mm，柱越长，分离度越高，但柱压更高，分离所需时间更长;但分离度与理论塔板数的平方根成正比，所以一昧增加柱长并不是最有效的分离手段，且要考虑实际柱压的影响。一般情况下，150mm、5um的填料可以提供足够的塔板数。粒径：粒径能够影响色谱分离度。粒径越小，分离越快，柱效越高，但柱压力越高，柱容易被污染，导致柱寿命降低。常见分析柱通常使用5um填料，复杂的多组分样品分离一般使用3.5um粒径，更大内径的制备色谱柱通常使用更大的粒径。如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%;然而，3.5um的色谱柱的背压却是5um的2倍，因此如何选择填料粒径需要根据现实情况而定。图1：相同倍数下1.7-10um填料（来源:纳微单分散微球）    3.孔径，60A，120A，300A等。孔径小，则含孔率高，比表面积大，载碳量高;色谱柱填料孔径大小需和分子大小相匹配，保证分子自由进出填料孔并与孔内表面的键合相进行分离分配，通常要求孔径直径是分子直径的3倍以上，一般小分子使用80—120A，大分子使用300A。图2：孔径电镜图（来源：纳微单分散微球）    4. 填料颗粒形状，一般有球形和不规则形，当使用黏度较大的流动相时，球形颗粒可以降低柱压，延长色谱柱寿命。一般HPLC色谱柱均为球形填料，在中低压制备领域仍在采用大量的无定性填料。     5.比表面积，指的是每克填料的表面积，如180m2/g—350m2/g，与粒度和含孔率有关;比表面积大，会增加样品与键合相之间的反应，增加保留和分离度;比表面积小则可以缩短分析时间和平衡时间，并不是比表面积大或者小就更好，需要选择合适的比表面积。二、化学性质硅胶基质：最通用的基质，强度大，化学修饰容易，但使用的pH值范围有限(一般为2—8，特殊修饰的可以达到1—12)。聚合物基质：多为聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂，化学稳定，应用pH范围宽，具有更强的疏水性，对蛋白质等样品分离效果较好;但强度较小，有机溶剂可能导致聚合物溶胀而受损，批次重复性较差，商品化色谱柱不多，一般价格较贵。载碳量：基质表面键合相的比例，载碳量高，则保留增加，适合分析非极性化合物。键合相：键合试剂不同，对化合物的选择性不同，一般长链的烷基键合相(C18 C8)比短链的(C4 C3)稳定;非极性的键合相比极性的键合相(-NH2)稳定。封端：用短链将裸露的硅羟基键合后封闭起来，以减少残留的硅醇基，减轻待测组分与酸性硅羟基反应而引起的色谱峰拖尾现象。尤其对于极性样品而言，未封端处理的色谱柱分离效果较差。正相&反相色谱：目前市场上主要以反相色谱为主，约占80%的比例。 在了解了色谱柱的基本知识后，色谱柱的选择也就迎刃而解了。柱长及内径的选择　　长度的选择：柱越长，总柱效越高(n值越大)，柱越长，分析时间也越长。250—300mm是最普遍的柱长，实验室一半以上的工作都是采用此规格柱子，一般用来分离l0到50个组份的中等至复杂混合物;500—600mm，要求较高分辨率的应用，—般用来分离大于50个组份或包含有难分离物质的复杂样品程序升温分析。　　内径：柱效率与柱半径平方成反比，内径越小柱效越高，但内径越大，柱容量也增加，允许进样量就越多。当进样量超过柱容量时，则因柱内每块理论板内不能建立真正的平衡，将会导致色谱蜂畸变，柱分辨率降低，重现性不好。因此对于复杂样品需要精确分离，必须使用小内径柱子。另一方面若样品中存在具有很不相同浓度组份化合物，为了增加样品容量就必须使用内径大的柱子，目前实验室使用最常见的柱子内径一般是4.6mm。一般选择原则分析大分子量化合物选择大孔径色谱柱 ;对于高pH值或者碱性化合物需要选择高封端或者特殊封端的色谱柱，以改善峰形，延长色谱柱使用寿命等。　    现在商品化的液相色谱柱琳琅满目，根据色谱柱的参数可以给我们提供一个初步的选择，但由于各个仪器厂商的填料技术和键合技术都有差异，即使都是C18柱，同一品牌不同系列都有不同的功能，有能耐受低pH值的、有耐高温的、有适合碱性样品的等等。所以在选择色谱柱前要好好研究色谱柱参数，仔细阅读色谱柱说明书，才能找到合适的色谱柱和适宜的分离方法。关注我们，更多干货分享我们坚持以质量、创新和服务为广大色谱工作者提供优质的色谱分离产品和技术支持。产品应用涉及小分子药物及多糖分析、生物分离、DNA/RNA核酸分离、手性拆分和样品前处理等。纳谱分析技术（苏州）有限公司

热点事件紧急下架！法国核桃油品牌“拉杜蓝乔”7月15日，一份网传文件显示，法国核桃油品牌“拉杜蓝乔（La Tourangelle）”的国内进口商对所有批次产品检测，发现均存在“邻苯二甲酸酯类物质”残留，要求各渠道代理商从15日起紧急下架所有产品。内容显示：因 LA TOURANGELLE产品在抽查中发现部分产品含有“邻苯二甲酸酯类物质”成分残留，不符合原卫生部办公厅文件《卫办监督函(2011)551号》的要求。该品牌在国内尤其是电商平台十分火爆，虽然价格不菲（一瓶近百，价格是其他普通国内品牌核桃油的好几倍），但仍然受到母婴群体的大力热捧，是名副其实的“网红”核桃油。其中，京东一家全球购店铺售卖的该品牌500ML食用核桃油已累计获得1.6万条评价。评论区也显示核桃油购买者以母婴群体为主，购买者会在婴儿辅食中添加。事件争议报复还是良心发现？代理商为何自爆？有意思的是：此次事件为中国总代理千麦实业（上海）有限公司主动批露，称近期对其所有批次核桃油产品进行全面检测后，发现均存在该物质残留问题。而生产商 LA TOURANGELLE SAS发文，强调该程度的残留是无害的，本着对消费者负责的态度谨慎起见，公司决定即日起暂停销售所有LA TOURANGELLE产品。文件要求各渠道代理商请紧急安排下架事宜，统计批次数量等候进一步召回安排。该通报称，7月15日紧急提醒各渠道商暂停销售，只是一个风险警示，并非全面召回，待得到全面检测报告后将第一时间通报情况，并对特定批次发布召回方案。网上不少言论称，是因为这家经销商的代理资格马上就要到期了，他们出于报复的心态自爆产品有问题。不管是出于利益纠葛还是别的原因，塑化剂超标是事实，商家的行为侵害消费者的权益。塑化剂影响超标了吗？邻苯二甲酸酯类物质是什么？首先，超标了吗？是的。不管是在中国还是品牌所在地法国，都是不合规定的。据原卫生部办公厅发布的《卫办监督函(2011)551号》文件中提及，严禁在食品、食品添加剂中人为添加“邻苯二甲酸酯类物质”，不得接触油脂类食品和婴幼儿食品。由于担心邻苯二甲酸酯带来的潜在不良影响，欧洲也已经禁止某些邻苯二甲酸酯用于化妆品和婴儿玩具。什么是邻苯二甲酸酯？邻苯二甲酸酯，又称酞酸酯，是邻苯二甲酸形成的酯的统称，主要用于聚氯乙烯材料，令聚氯乙烯由硬塑胶变为有弹性的塑胶，起到增塑剂的作用，也就是俗称的“塑化剂”。它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品（如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液）等数百种产品中。在本次事件中，商家不存在任何动机往油脂中添加塑化剂，因此食用油脂中发现塑化剂微量存在，不是蓄意添加，而是因为在生产、物流、包装等环节中接触到一些塑料制品，瓶子用的塑料垫圈都可能造成迁移。塑化剂有脂溶、醇溶的特性，对食用油脂来说，确实应该在工艺流程和包装材料上“无塑化”，彻底和塑化剂划清界限。邻苯二甲酸酯对人体有哪些影响？研究表明，邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用，可干扰内分泌，是造成男子生殖问题的“罪魁祸首”。目前已在实验动物中证实其能导致发育缺陷或生殖系统危害，可干扰啮齿类动物的生殖功能，目前还没有太多扎实的流行病学研究证实塑化剂对成年人严重健康风险，但已发现塑化剂可能造成成年男性精子质量的降低。研究还发现孕妇产前塑化剂暴露，可能导致男性婴儿的生殖系统畸形，包括阴茎短小、睾丸发育不全。通常认为，儿童，尤其是尚在母亲体内的男性胎儿可能会较一般人更易受塑化剂伤害，当塑化剂经由母体血液进入胎儿体内的时候，可能会干扰、抑制男性生殖系统的发育。同时，美国国家毒理学计划（NTP）在第12版致癌物报告中指出，邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯也叫DEHP合理地被认为是一种人类致癌物质。而婴幼儿和胎儿阶段是生长发育重要的窗口期，这个时候如果接触到这些化学物质，可能造成儿童智力和认知水平下降，会对健康造成长期持久影响。专家建议，尽管目前尚缺乏塑化剂对人类生殖功能产生损害的直接证据，但对于孕妇、婴幼儿而言，要尽量减少塑化剂暴露，对于婴幼儿食品，塑化剂应该作为必检项目。此外，在化妆品中，指甲油的邻苯二甲酸酯含量最高，很多化妆品的芳香成分也含有该物质，化妆品中的这种物质会通过女性的呼吸系统和皮肤进入体内，如果过多使用，会增加女性患乳腺癌的几率，还会危害到她们未来生育的男婴的生殖系统。已经购买使用了怎么办？根据欧洲食品安全局的风险评估，增塑剂DEHP的每日耐受摄入量TDI为0.05mg/kg体重。按照代理商提供的检测报告含量，8kg体重的婴儿每天摄入250ml的核桃油才达到耐受量，因此各位家长无需过度的自责恐慌。1.停止使用。2.如果是在拉杜蓝乔天猫旗舰店购买的，可以联系客服，把订单号、产品批号发给他们，等待具体召回的信息虽然超标不会致命，但我们也绝不容忍！那么，邻苯二甲酸酯如何检测？检测手段高效液相色谱法：邻苯二甲酸酯的分离U.S. EPA  606规范了该类物质的测试方法，可选用ChromCore 120 C18色谱柱，结合简便的乙腈/水系统进行梯度洗脱，在该色谱条件下，各组分均有良好的分离度和峰型，可用于这类化合物的分析检验。希望相关部门加强监测力度，共同打造健康的食品安全环境。纳谱分析同样致力于食品安全、环保、医药研发领域，为广大色谱工作者提供优质的气液相色谱分离产品和技术支持！关注我们，更多干货分享我们坚持以质量、创新和服务为广大色谱工作者提供优质的色谱分离产品和技术支持。产品应用涉及小分子药物及多糖分析、生物分离、DNA/RNA核酸分离、手性拆分和样品前处理等。纳谱分析技术（苏州）有限公司

气相色谱法中，为了扩大气相色谱法的适用范围，提高检测灵敏度，有些样品在注入色谱柱前需要作适当的前处理。常用的样品前处理技术有顶空法、衍生化法、裂解法、吸附管法等，今天和大家简要介绍应用较多的顶空法和衍生化法。1.顶空分析法    对于有些固体或液体样品中的挥发性成分，可采用顶空技术进行试样的前处理。这种方法是将固体或液体样品定量加入到一定容积的容器中，容器口用硅橡胶等材料的塞子密封，恒温保持一定的时间，使试样中的挥发性组分挥发到容器上部的气相（顶空）中，并使组分在气相与液相（或固相）中的分配达到平衡，然后用注射器抽取容器上部的气体进行分析。由于挥发性组分在气相中的浓度与其在液相中的含量成比例，所以可以在相同的实验条件下，通过比较试样与已知标准品的色谱峰面积，进行定量分析。   目前，顶空分析的装置已做成精巧的气相色谱仪专用附件，供用户选购。一般实验室采用血清瓶等容器作试样瓶，用水浴箱作恒温装置，用注射器作进样器，也可进行简易的顶空分析，但准确性和重复性有时不够好。  由于固体试样和成分复杂的液体试样是不能直接在气相色谱上进样的，采用顶空法技术作这些试样的前处理，可以避免采用其他复杂费事的试样前处理手段，并提高检出灵敏度。而且，由于注入气相色谱仪的气体比较“清洁”，色谱分离容易，色谱柱的寿命也能得到延长气相色谱的顶空分析技术应用较多。例如，测定污水中的挥发性有害成分；测定生物材料（体液等）中挥发性有机组分；测定咖啡、茶或其他饮料中的挥发性香味成分等。2.样品的衍生化法         有许多化合物由于其挥发性差、极性太强或色谱峰拖尾严重，用气相色谱法分析有困难。通常可采用将试样进行衍生化处理，以实现以下目的：增加试样的挥发性。减小化合物（酸、酚和醇）的极性。增加试样的热稳定性。引入对某种选择性检测器（例如ECD）有特别敏感响应的基团（例如CF3)。将试样从水相中有效地提取出来（例如酚胺的酰化反应）。通常，试样的衍生化处理是通过化学反应将一些极性化合物（例如含NH，OH，SH基团的化合物）的活性氢原子进行取代。根据所用的试剂和发生的反应，衍生化方法可分为五类，即酰化、烷基化、硅烷化、缩合和酯化。关注我们 更多干货分享液相色谱·气相色谱·样品前处理

一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。流动相的选择选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。③必须与检测器匹配。使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。④粘度要低(应高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。最好选择沸点在100℃以下的流动相。⑤对样品的溶解度要适宜。如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。⑥样品易于回收。应选用挥发性溶剂。秘诀1由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。秘诀2三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。秘诀3粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。流动相的pH值采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液；分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺(如，三乙胺)又称为减尾剂或除尾剂。(三乙胺triethylamine 氨分子中的氢原子被3个乙基取代的产物。分子式(CH3CH2)3N。易挥发的无色液体，有氨的气味。熔点-114.7℃，沸点89.3℃，相对密度0.7275(20/4℃)。溶于水和乙醇、乙醚等有机溶剂。三乙胺有碱性，与无机酸能生成易溶于水的盐类。可由N，N-二乙基乙酰氨与氢化铝锂反应制取，也可用乙醇胺进行气相烷基化反应合成。用于制橡胶硫化促进剂、润湿剂和杀菌剂等，也可用作溶剂和用于合成四级铵化合物。)缓冲液pH值的选择在选择缓冲液pH值之前，应先了解被分析物的Pka，高于或低于Pka两个pH值单位的，有助于获得好的、尖锐的峰，从pH公式：pH=Pka+log([A-]/[A])得知，溶液pH值高于或低于Pka两个单位，化合物中99%以一种形式存在，而一种形式存在的化合物才能获得好的尖锐的峰。例如苯甲酸的Pka等于4.2，理论上由pH公式得知，当溶液pH值等于2.2时，99%的苯甲酸以中性化合物存在，pH值等于6.2时99%的苯甲酸以离子形式存在，所以当缓冲液pH值等于2.2时，中性化合物以羧酸形式保留于反相柱。当化合物只有氨基时，缓冲体系的选择十分简单，大多数氨基化合物在pH值小于9时都被质子化，所以所有pH值在7或更低的溶液均适合应用，你也许会问水的pH值大约是7，为什么还用缓冲盐，因为缓冲盐有助于增加方法的可靠性，以及色谱峰的尖锐性，pH值的降低有助于氨基化合物保留的减弱，减小化合物与硅胶表面硅羟基的作用，而使峰更尖锐，任何缓冲液均可应用于氨基化合物的分析，但我们认为pH值等于3的磷酸钾盐最适合用于氨基化合物的分析。在上面两个例子中，pH=3的磷酸钾盐都能获得良好的应用，在一般情况下，它是含羧基和氨基化合物分析中最好的缓冲液，并且我们认为在氨基化合物分析中钾盐比钠盐更好。流动相的脱气HPLC所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响柱的分离效率，影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。(噪声增大，基线不稳，突然跳动)。此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相(如，烷基胺)反应。溶解气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。溶解氧能与某些溶剂(如，甲醇、四氢呋喃)形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收(特别是在260nm以下)，并导致检测灵敏度的轻微降低，但更重要的是，会在梯度淋洗时造成基线漂移或形成鬼峰(假峰)。在荧光检测中，溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。在某些情况下，荧光响应可降低达95%。在电化学检测中(特别是还原电化学法)，氧的影响更大。除去流动相中的溶解氧将大大提高UV检测器的性能，也将改善在一些荧光检测应用中的灵敏度。常用的脱气方法有：加热煮沸、抽真空、超声、吹氦等。对混合溶剂，若采用抽气或煮沸法，则需要考虑低沸点溶剂挥发造成的组成变化。超声脱气比较好，10~20分钟的超声处理对许多有机溶剂或有机溶剂/水混合液的脱气是足够了(一般500mL溶液需超声20~30min方可)，此法不影响溶剂组成。超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不要高出水面太多。离线(系统外)脱气法不能维持溶剂的脱气状态，在你停止脱气后，气体立即开始回到溶剂中。在1~4小时内，溶剂又将被环境气体所饱和。在线(系统内)脱气法无此缺点。最常用的在线脱气法为鼓泡，即在色谱操作前和进行时，将惰性气体喷入溶剂中。严格来说，此方法不能将溶剂脱气，它只是用一种低溶解度的惰性气体(通常是氦)将空气替换出来。此外还有在线脱气机。一般说来有机溶剂中的气体易脱除，而水溶液中的气体较顽固。在溶液中吹氦是相当有效的脱气方法，这种连续脱气法在电化学检测时经常使用。但氦气昂贵，难于普及。流动相的滤过所有溶剂使用前都必须经0.45μm(或0.22μm)滤过，以除去杂质微粒，色谱纯试剂也不例外(除非在标签上标明“已滤过”)。用滤膜过滤时，特别要注意分清有机相(脂溶性)滤膜和水相(水溶性)滤膜。有机相滤膜一般用于过滤有机溶剂，过滤水溶液时流速低或滤不动。水相滤膜只能用于过滤水溶液，严禁用于有机溶剂，否则滤膜会被溶解!溶有滤膜的溶剂不得用于HPLC。对于混合流动相，可在混合前分别滤过，如需混合后滤过，首选有机相滤膜。现在已有混合型滤膜出售。流动相的贮存流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。这种被污染的溶剂如用于HPLC系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用，不要贮存。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在3天内使用，用前应重新滤过。容器应定期清洗，特别是盛水、缓冲液和混合溶液的瓶子，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子无此现象。卤代有机溶剂应特别注意的问题卤代溶剂可能含有微量的酸性杂质，能与HPLC系统中的不锈钢反应。卤代溶剂与水的混合物比较容易分解，不能存放太久。卤代溶剂(如，CCl4、CHCl3等)与各种醚类(如，乙醚、二异丙醚、四氢呋喃等)混合后，可能会反应生成一些对不锈钢有较大腐蚀性的产物，这种混合流动相应尽量不采用，或新鲜配制。此外，卤代溶剂(如，CH2Cl2)与一些反应性有机溶剂(如，乙腈)混合静置时，还会产生结晶。总之，卤代溶剂最好新鲜配制使用。如果是和干燥的饱和烷烃混合，则不会产生类似问题。

醛酮类化合物的检测醛酮类化合物是城市大气中主要的污染物之一，具有慢性毒性，对人体产生重大危害。例如甲醛被广泛应用于化工、木材加工、纺织及消毒防腐等领域，但因其对皮肤粘膜的刺激作用危害较大，所以在木材、纺织领域的应用已被严格限制或是被其他的化合物取代，因此检测醛酮类化合物在大气、室内，车内以及其他场所的含量是十分重要的。在常温常压下，低级醛为液体，高级醛为固体，只有甲醛是气体。醛的化学性质非常活泼，能与亚硫酸氢钠、氢、氨等起加成反应，并易被弱氧化剂氧化成相应的羧酸。U.S. EPA Method 554规范了环境中醛酮类化合物的检测方法。醛酮类化合物一般采用液相色谱法检测，但因这类物质较为活泼，因此在检测前需先对这些化合物进行衍生化（DNPH）处理，生成稳定的腙类化合物，再对其进行分析。结论本次应用选用了ChromCore C18反相色谱柱，根据各组分疏水性的差异，结合简便的甲醇/水系统进行梯度洗脱，在该色谱条件下具有良好的峰型，可用于醛酮类化合物的检验。——纳谱分析关注我们，更多干货分享我们坚持以质量、创新和服务为广大色谱工作者提供优质的色谱分离产品和技术支持。产品应用涉及小分子药物及多糖分析、生物分离、DNA/RNA核酸分离、手性拆分和样品前处理等。纳谱分析技术（苏州）有限公司