在未经净化的婴幼儿奶粉色谱检测实验中,杂质含量高,目标物乳铁蛋白很难清晰地识别。本应用采用纳谱分析SelectCore Heparin肝素亲和SPE柱,可以帮助快速高效地进行前处理,大大提高检测效率。
图1显示,未经净化处理的婴幼儿奶粉受基质效应影响较大,并且目标峰和杂质峰的分离度较差,净化处理的婴幼儿奶粉基线稳定,并且目标物质清晰可见。
实验步骤
1、试剂准备
磷酸氢二钠溶液(0.2 mol/L):称取14.2 g磷酸氢二钠,加水溶解,用磷酸调节pH值至8.00±0.50,加水定容至500 mL。
磷酸氢二钠-氯化钠溶液:称取0.71 g磷酸氢二钠,5.84 g氯化钠,用磷酸调节pH值至8.00±0.50,加水定容至100 mL。
乳铁蛋白标准品:乳铁蛋白母液,浓度10 mg/mL,称取1 g乳铁蛋白加水溶解,定容至100 mL。
2、样品制备
液体试样:准确称取5 g试样于50mL离心管中,加入5 mL磷酸氢二钠溶液,涡旋震荡0.5 min,4 °C下以10000 r/min的转速离心10 min,将上清液转移到另一50 mL离心管中。再加入5 mL磷酸氢二钠溶液重复一次,合并两次上清液备用。
固体试样:准确称取1 g试样于50 mL烧杯中,加入5 mL温热的磷酸氢二钠溶液(温度不超过50 °C),搅拌使样品完全溶解,将样品全部转入50 mL离心管中。再向原烧杯加入5 mL磷酸氢二钠溶液,合并两次液体,涡旋震荡0.5 min,4 °C下以10000 r/min的转速离心10 min,将上清液转移到另一50 mL离心管中。再加入5 mL磷酸氢二钠溶液重复一次,合并两次上清液备用。
3、净化
SPE柱活化:SelectCore Heparin 肝素亲和柱 1mL 加入5 mL磷酸氢二钠溶液活化;
上样:加入步骤2中制备好的上清液;
淋洗:待上清液完全流出后,再用10 mL磷酸氢二钠溶液淋洗,弃去全部淋洗液;
洗脱:用2.5 mL磷酸氢二钠-氯化钠溶液洗脱,收集全部洗脱液,用磷酸氢二钠-氯化钠溶液定容至2.5 mL。将收集溶液过滤膜,供液相色谱分析。
4、液相色谱仪器条件
色谱柱:ChromCore 300 C4-T 5 μm,
4.6mm×250mm
检测波长:280nm
柱温:30 °C
进样体积:20 μL
流速:1.0 mL/min
流动相:A相:0.1%三氟乙酸水溶液;B相:乙腈
洗脱梯度:
实验谱图及加标回收率数据
加标回收率
由以上谱图可以看出,婴幼儿奶粉的加标回收率较好,符合检测要求。
2. 使用轻松,不惧流干:基质的机械强度高、化学稳定性好,即使小柱流干再次润湿也同样保证回收率。
↑试验操作的时候,即使小柱流干也无需担忧↑
订货信息
本应用相关产品
产品 | 描述 | 货号 |
固相 萃取柱 | SelectCore Heparin 肝素亲和柱 1mL; 20/pkg | HEP065-030001-1 |
分析柱 | ChromCore 300 C4-T 5 μm,4.6mm×250mm | A226-050030-04625S |
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