婴儿奶粉中乳铁蛋白的提取与检测（SelectCore Heparin肝素亲和柱）

在未经净化的婴幼儿奶粉色谱检测实验中，杂质含量高，目标物乳铁蛋白很难清晰地识别。本应用采用纳谱分析SelectCore Heparin肝素亲和SPE柱，可以帮助快速高效地进行前处理，大大提高检测效率。

1、试剂准备

磷酸氢二钠溶液（0.2 mol/L）：称取14.2 g磷酸氢二钠，加水溶解，用磷酸调节pH值至8.00±0.50，加水定容至500 mL。

磷酸氢二钠-氯化钠溶液：称取0.71 g磷酸氢二钠，5.84 g氯化钠，用磷酸调节pH值至8.00±0.50，加水定容至100 mL。

乳铁蛋白标准品：乳铁蛋白母液，浓度10 mg/mL，称取1 g乳铁蛋白加水溶解，定容至100 mL。

2、样品制备

液体试样：准确称取5 g试样于50mL离心管中，加入5 mL磷酸氢二钠溶液，涡旋震荡0.5 min，4 °C下以10000 r/min的转速离心10 min，将上清液转移到另一50 mL离心管中。再加入5 mL磷酸氢二钠溶液重复一次，合并两次上清液备用。

固体试样：准确称取1 g试样于50 mL烧杯中，加入5 mL温热的磷酸氢二钠溶液（温度不超过50 °C），搅拌使样品完全溶解，将样品全部转入50 mL离心管中。再向原烧杯加入5 mL磷酸氢二钠溶液，合并两次液体，涡旋震荡0.5 min，4 °C下以10000 r/min的转速离心10 min，将上清液转移到另一50 mL离心管中。再加入5 mL磷酸氢二钠溶液重复一次，合并两次上清液备用。

3、净化

SPE柱活化：SelectCore Heparin 肝素亲和柱 1mL 加入5 mL磷酸氢二钠溶液活化；

上样：加入步骤2中制备好的上清液；

淋洗：待上清液完全流出后，再用10 mL磷酸氢二钠溶液淋洗，弃去全部淋洗液；

洗脱：用2.5 mL磷酸氢二钠-氯化钠溶液洗脱，收集全部洗脱液，用磷酸氢二钠-氯化钠溶液定容至2.5 mL。将收集溶液过滤膜，供液相色谱分析。

4、液相色谱仪器条件

色谱柱：ChromCore 300 C4-T 5 μm，

4.6mm×250mm

检测波长：280nm

柱温：30 °C

进样体积：20 μL

流速：1.0 mL/min

流动相：A相：0.1%三氟乙酸水溶液；B相：乙腈

洗脱梯度：

加标回收率 

由以上谱图可以看出，婴幼儿奶粉的加标回收率较好，符合检测要求。

2. 使用轻松，不惧流干：基质的机械强度高、化学稳定性好，即使小柱流干再次润湿也同样保证回收率。

↑试验操作的时候，即使小柱流干也无需担忧↑