目前纳谱的色谱柱种类越来越多,合作伙伴也越来越多,所以对纳谱的产品和技术的咨询也日益增多,今天小编将一些大家经常咨询的问题和解答提供如下,便于大家的理解和更好地在以后的工作中使用。
Q1:填料中孔径的概念?
A1:我们通常所说的孔径实际上是个统计的、平均的概念,即平均孔径,它是指累积孔径分布曲线50%处的平均孔径,或是与孔径分布曲线的最高频度相对应的平均孔径。通过测试纳微UnSil5-1000与进口同类型的色谱填料的孔径分布,得出孔径分布曲线(图3),可以看出UnSil的孔径分布较窄,而进口填料的孔径分布较宽,因而UnSil的硅胶填料孔径的控制更加精准。
以下是纳微科技不同孔径的微球在扫描电镜下的图片(图4)。纳微可以定制最大4000?孔径的微球。
Q2:为什么要做封端处理?
A2:一般常见的硅胶填料(没有经过封端处理),pH耐受性都在2-8之间,在碱性环境下,硅胶的Si-O-Si-O结构会被破坏而溶解。即使在pH5-7的环境中,硅胶表面的Si-OH也会电离。使得碱性化合物产生拖尾,严重影响分离效果。封端处理以后可以减少待测组分与硅胶表面残留的酸性硅羟基反应,改善和保持较好的峰形,这对于碱性化合物的分离尤其重要。而不同的封端技术也会直接影响色谱柱的效能。纳微科技的硅胶填料经过特殊封端处理技术后(如UniSil Ultra系列产品),使得填料的pH耐受性有所提高(pH 2-10),并且覆盖硅胶金属杂质还可以减少碱性化合物的拖尾,增强峰型对称性。
通过在同等条件下,对UniSil Ultra与同类型的进口硅胶填料进行碱(pH10.0)冲洗,可以看出UniSil Ultra比同类型的进口D硅胶填料可以耐受更多次数和更长时间的强碱清洗(图5),从而证明UnSil Ultra的的耐碱性更强,使用寿命更长。
碱洗条件:MeOH/TEA (pH=10.0)=40:60
冲洗体积:60CV
柱效测试:流动相:ACN/H2O=60:40
柱温:35℃
样品:甲苯
Q3:C18柱选用的基本原则?
A3:(1)选用经封端处理的色谱柱,可以防止碱性化合物的拖尾现象。
(2)选用含碳量高的柱子,可以增加保留值。(还要综合考虑孔道结构和空间)
(3)选用小颗粒的填料,可以提高分离度。(还要综合考虑压力和设备投入)
(4)分子量大的组分选用大孔径填料的柱子。
(5)纳微可以根据不同的样品条件提供不同规格的C18填料,例如常规的UniSil®C18, 耐碱性较强的UniSil® C18 Ultra,以及适用于100%水溶液的UniSil® C18 Polar等。
Q4:测定多肽,一般采用什么柱子?流动相是乙腈和水,还有微量的TFA。特别是像类似三肽的短肽,应该怎么选择柱子?
A4: 多肽一般还是可以用C18的,根据分子量不同可以选择150?、300?的孔径,有些小肽用100?也可以。在C18上保留太强时,C8,苯基,C4,C3也都可以用于多肽的分离。三肽也可以尝试100? C18,不过小肽往往极性偏大,普通C18上可能没有保留,这时需要使用亲水型C18或Hilic模式。
以下是为大家推荐的纳谱ChromCore的色谱分析柱产品:
(1)分子量较大的多肽(2000D以上)可以优先考虑纳谱ChromCore C18,ChromCore 300 C18。
(2)小肽可以用ChromCore 120 C18,如果无保留,选择亲水型C18或Hilic模式。
(3) C8系列有ChromCore 120 C8、ChromCore C8、ChromCore 300 C8、ChromCore AQ C8(亲水型)。
(4) 苯基系列有ChromCore Phenyl、ChromCore PFP、ChromCore Biphenyl。
(5) C4系列有ChromCore C4、ChromCore 300 C4、ChromCore 300 C4-T。
(6) 亲水型C18可选ChromCore AR C18、ChromCore AQ C18、ChromCore Polar C18。
(7) Hilic模式可选ChromCore HILIC-Amide、ChromCore HILIC-Imidazole、ChromCore Diol、ChromCore CN等。
Q5:我之前有了解到贵公司也有手性色谱柱,之前买过国外品牌的手性柱,其手性柱价格相比普通反相色谱柱,要高出很多倍,不知道是本身柱子装填技术的难度大还是其他什么原因?它的主要技术关键在什么方面?
A5:这个问题我们请纳微科技专门负责手性产品的朱总解答
(1)手性柱使用的填料介质是大孔多孔介质,生产工艺复杂;(2)在介质上涂敷或键合的手性位点官能团生产工艺复杂;(3)官能团与介质基球涂敷或键合工艺难度大,且工艺复杂;(4)装柱工艺及成本也较高。这些都导致了手性色谱柱比普通反相柱价格高出很多。纳微科技手性填料包括OD、OJ、OZ、AS、AJ 5个型号的产品,手性色谱柱从填料的生产(包括直链淀粉产品研发)到装柱一系列过程都是自己完成,所以和国外相比,性价比更高,另纳微还可以提供手性拆分纯化服务。
Q6:色谱柱的技术都有哪些?国内外的色谱柱都有何差别?
A6:色谱柱技术包括填料技术和装柱技术,填料是色谱柱的心脏,填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术也没有想象中的这么简单,不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度,装柱工艺都有所不同,要装出紧密、稳定、均一的柱床,需要经验积累。纳微有专门提供装柱培训的课程。有兴趣的朋友可以联系我们。
很多人都认为国内和国外的色谱柱差距很大:原因在于国内的的公司都不会自己开发填料,一般都会买国外现成的填料装柱,填料质量控制权不在自己手里。另外,对色谱柱性能很关键的基础材料——裸硅胶,国产的还不过关,在纯度、粒径和孔径的均一性方面和国外产品相比,差距很大。
纳谱分析的填料供应商纳微科技经过长达十余年的潜心研发,目前已拥有单分散硅胶色谱填料的精准制备技术、表面功能化技术和规模化生产能力,打破了填料长期依赖进口的局面。从基球的大规模生产-表面键合和封端-装柱全程在公司内部完成。可以保障整个生产工艺过程可控和可溯源。
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