又快又稳！ SelectCore WAX固相萃取法回收八种色素

鉴于合成食用色素的不安全性，国家加强了对这类合成色素的监管，制订了食品合成着色剂的测定标准（GB5009.35-2016）。其中的前处理方法采用的是聚酰胺吸附法测定，但是该方法有一定的局限性，实验中对填料的含水量、操作温度和滴定速度都有一定的要求，且由于该填料对色素的吸附力不稳定而导致回收率数据不稳定。而本实验采用的弱阴离子混合模式，针对人工合成色素中含有苯磺酸和苯甲酸结构的离子基团可以更好的结合，保证分析的稳定性，并且由于采用单分散聚乙烯吡咯烷酮基质，活化淋洗洗脱步相比其他竞争对手产品可以更快的处理，保证回收率的基础上达到更好的净化能力，适用于多个复杂基质样品的检测。

1.取8种色素样品各20mg，分别溶于10%的乙醇水溶液中，根据HPLC的出峰峰高调整相应浓度，配置成50ppm浓度的混标溶液，待用。

2.取果冻基质4g于离心管内，加入10mL的提取液（乙醇：氨水：水=7:2:1），震荡混匀1min，在4000转的条件下离心5min.提取上清液，重复三次，收集上清液备用。

3.取八宝粥基质4g于离心管内，加入10mL的提取液（140mL的乙醇：乙腈（2:1），再加60mL水和2mL氨水），震荡混匀1min，在4000转的条件下离心5min.提取上清液，重复三次，收集上清液备用。

4.各取两种基质的上清液2mL于两个10mL容量瓶中，用超纯水定容至10mL，加入200uL的50ppm的混标溶液，用柠檬酸溶液调节至pH=6（±0.1），作为上样液备用。

前处理实验

准备SelectCore WAX柱(150mg/6mL)

1. 上样液：准备备用液。  

2. 活化：依次用6mL 甲醇、6ml10%甲酸水溶液活化;(视频如下图，图左为SelectCore WAX  SPE柱，图右为Brand W  WAX SPE柱）

3. 上样：上样液注入SPE小柱中，弃去流穿液;

(视频如下图，左为SelectCore WAX  SPE柱，右为Brand W WAX SPE柱）

↑左为果冻基质上样，右为八宝粥基质上样↑

4. 淋洗：移取6mL的甲醇溶液注入SPE小柱中，弃去淋洗液;

5. 洗脱：移取6mL的5%氨水甲醇液注入SPE小柱中，收集洗脱液;

(视频如下图，左为SelectCore WAX  SPE柱，右为Brand W WAX SPE柱）

↑色素回收实验中的色素洗脱环节↑

6. 收集：氮气吹干,用10%乙醇水溶液定容至和上样时一样的体积，过0.45umPTFE滤膜，上HPLC检测。

 HPLC设定方法

流动相A：乙腈       流动相B:0.02m乙酸铵水溶液

色谱柱：ChromCore C18 4.6×250 5μm（厂商：纳谱分析）

波长：254 nm

进样量：5uL

柱温箱：35℃

梯度设置:

图1 混标

图2 果冻基质

图3 添加水平为2.5mg/kg的果冻中人工合成色素检测图谱

回收率数据：

图4 八宝粥基质

图5 添加水平为2.5mg/kg的八宝粥中人工合成色素检测图谱

回收率数据：