Q1. 怎么改变流动相比例来延长保留时间?问题描述：做的黄酮苷，用甲醇:乙腈:四氢呋喃:醋酸(1:1:19.4:78.6)溶液做流动相，现在分离效果不理想，想延长保留时间看看怎么样，也就是增大流动相的极性，给点建议，谢谢！PS：用的C18柱。解答：用液相色谱，C18柱分离黄酮苷，不是太清楚为什么要选用甲醇+乙腈+四氢呋喃+醋酸这样一种很复杂的流动相体系，难道体积分数78.6%的醋酸是直接用的冰醋酸？这是一种很不可思议的流动相配比。建议直接使用甲醇-水，或是乙腈-水作为流动相，水相中可以适当加点甲酸或是乙酸来得到最佳分离效果。Q2. 保留时间为什么总在变？问题描述：苯甲酸的测定中流动相走了很久，进样以后，保留时间还是变，难道这个项目的柱子这么难平衡么？解答：保留时间一直在变，说明系统没有平衡好，可以从多个方面去排查原因。a.流动相可能是最主要的原因，流动相平衡时间是否充足，管路有没有气泡，流动相中有机相是否蒸发，比例阀工作是否正常？b.泵有可能存在问题，输液是否正常，压力是否稳定，泵密封垫是否完好，是否有漏点？c.色谱柱也需要排查，是否恒温，是否有漏液？Q3. 液相色谱中影响峰扩散的有哪些因素？问题描述：液相色谱中影响峰扩散的有哪些因素？与气相色谱相比，有哪些不同之处？解答：气相色谱与液相色谱在速率理论方程上的差异主要是由于气体与液体的性质差异造成的。液体的黏度比气体大约100倍，表面张力大约10000倍，密度大约1000倍；气体还具有高压缩性系数。溶质在液体中的扩散系数要远远小于在气体中，液相在传质过程中对理论塔板高度的影响尤其的大。与气相色谱速率理论方程不同的是，液相色谱增加了固定相孔结构内滞留流动相传质项。因此我们可以得知主要有以下几个方面会影响色谱峰扩张：1.涡流扩散涡流扩散是由于柱填料粒径大小不同及填充不均匀等因素造成的流动相在色谱柱内迁移过程中发生的涡流运动。2.分子扩散分子是由于进样后，溶质分子在柱内纵轴上存在浓度梯度，引起浓差扩散而使谱带展宽。由于液体流动相的传质速度较慢，分子扩散项B/u可以忽略不计。3.传质阻力溶质分子与固定相、流动相分子间存在相互作用，扩散、分配、转移的过程并不是瞬间达到平衡，实际传质速度是有限的，总是存在超前与滞后现象。这使色谱柱总是在非平衡状态下工作，从而产生峰展宽。4.流速一般难以观察到最低H对应的最佳流速，因为流速降低，H总是降低。当u>uopt时，H随着u升高而升高，传质引起的色谱峰扩张也会更明显。5.固定相颗粒大小涡流扩散项A和流动相传质阻力项Cm均与柱填料粒径dp的平方成正比，所以固定相粒径与色谱峰扩张有很大的关系。6.柱温色谱柱温直接影响到分子在固定相和流动相中的扩散系数DS和Dm，从而影响分子扩散和传质的速率。柱温升高，DS和Dm升高，分子扩散导致柱效降低；而传质改善又导致柱效升高；因此柱温对色谱峰扩张的影响是矛盾的。Q4. 液相色谱使用缓冲盐的注意事项解答：1.避免使用盐酸盐，盐酸盐对钢质有腐蚀作用。2.缓冲液最好要现配现用，往往缓冲液是良好的菌类培养液，隔天或放置长时间实验时会有很多怪现象发生。3.实验后不可用有机溶剂直接过度，有机溶剂会促使盐类析出，造成液路或色谱柱堵塞，可用95：5的水甲醇冲洗。4.使用缓冲液要及时掌握pH范围，做到胸中有数。5.清洗液路和柱子时，有温控可加热到30℃易于冲洗。6.长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出，若有白色盐类析出，可考虑一定周期用10%硝酸冲洗一下液路(拆下柱子，走30mL，再用5倍水冲洗)可以避免液路的堵塞。7.选择缓冲液要用可靠的试剂，避免不纯的盐类造成不必要的麻烦。如果流动相中有机溶剂的比例很高是不能用来冲洗缓冲盐的，是洗不出来的。通常C18柱先用5%~10%的甲醇冲洗，是可以把缓冲盐冲洗出来的，然后用纯的有机溶剂来保护柱子。最好的方法是使用与流动相相同浓度不含盐的流动相进行清洗。但就是速度慢一些。用水是为了快速替换，一般在15分钟以内最好，且用0.8的流速较好。如果用纯水冲，容易造成键合的碳链的流失，最好用5%~10%甲醇水溶液冲。可以用纯水代替流动相中的缓冲液，有机相不变。这样冲洗柱子比较稳妥。Q5. 影响出峰时间的因素有哪些？问题描述：pH值不同出峰时间不同，具体原理是什么？除了pH值会影响，还有其他因素吗？解答：流动相的pH值主要是影响到分配系数而出峰时间的不同。影响出峰时间的因素有很多，从分配系数、容量因子等各个方面考虑，与目标化合物在固定相和流动相中的分配性质有关，还与流速，压力，柱温等液相色谱仪参数有关，具体涉及下面几种因素的影响：1.目标化合物本身，具体包括分子量、结构、化合物类型、极性等；2.流动相，具体包括流动相构成、配比、流动相各组分极性，洗脱方式，流速等；3.固定相，具体包括固定相种类，结构，色谱柱长度等；4.分配系数与容量因子，具体包括化合物在流动相与固定相之间的分配情况，柱温等。Q6. 有没有方法将保留时间提前？问题描述：我现在用液相色谱做含量测定时，保留时间太长，20分钟左右才出峰，有没什么方法提前，原理是什么？解答：可以从通过改变目标组分容量因子k的方式，以及缩短柱长增加柱温等方式，具体可以采取以下方法：1.调整流动相，具体包括流动相构成、配比、流动相各组分极性，洗脱方式，提高流速等；2.调整固定相，具体包括固定相种类，结构，缩短色谱柱长度等；3.增加柱温，降低流动相传质阻力等。Q7. 流动相使用前为什么要脱气？解答：首先我们了解一下不脱气可能造成的影响：1.气泡会增加基线的噪音，造成灵敏度下降，甚至无法分析（噪声增大，基线不稳，突然跳动）。2.溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化，柱中固定相（如烷基胺）发生反应，降解而改变柱的分离性能。3.溶解氧能与某些溶剂（如甲醇、四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收（特别是在260nm以下），并导致检测灵敏度的轻微降低，会在梯度淋洗时造成基线漂移或形成鬼峰（假峰）。4.若用FLD（荧光检测器），溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。在某些情况下，荧光响应可降低达95%。脱气的作用：除去其中溶解的气体（如O2），以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡。排出气泡能减少泵工作的伤害，提高UV检测器的性能高，改善灵敏度。脱气的方式：加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染，同时需要考虑低沸点溶剂挥发造成的组成变化。1.抽真空脱气法：易抽走有机相。2.超声脱气法：流动相放在超声波容器中（一般500mL溶液需超20~30min），此法不影响溶剂组成。超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不要高出水面太多。3.氦气脱气法：在色谱操作前和进行时，将惰性气体喷入溶剂中。严格来说，此方法不能将溶剂脱气，它只是用一种低溶解度的惰性气体（通常是氦）将空气替换出来。主要利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好，但成本高。4.在线真空脱气法：利用在线脱气机在线脱气，智能控制，无需额外操作，成本低，脱气效果明显优于以上几种方法，并适用于多元溶剂体系。Q8. 怎样提高高效液相色谱法的柱效？解答：1.要想提高液相色谱法的柱效，应当用小而均匀的固定相颗粒填充均匀，以减小涡流扩散和流动相传质阻力，这是最佳的提升柱效的方法。2.改进固定相的结构，可以减小滞留流动相传质阻力以及固定相传质阻力。3.选用低粘度的流动相(如甲醇、乙腈等)，也有利于减小传质阻力，提高柱效。4.合适的柱温，也会影响到柱效。5.降低流速、增加柱长也可以提高柱效。Q9. 用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移,有时发生快速变化,原因何在?如何解决?解答：关于漂移问题1.温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定2.流动相发生変化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3.柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题1.流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定2.泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。3.流动相不合适,解決办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合Q10. 为何会基线漂移？怎么解决？解答：原因1.柱温波动。(即使是很小的温度变化都会引起基线波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。)2.流动相不均匀。(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。)3.流通池被污染或有气体4.检测器出口阻塞。(高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线)5.流动相配比不当或流速变化6.柱平衡慢,特別是流动相发生变化时7.流动相污染、变质或由低品质溶剂配成8.样品中有强保留的物质(高K值)以头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。9.使用循环溶剂,不提倡。未调整检测器。10.检测器没有设定在最大吸收波长处。解决方法1.控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器。2.使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气,使用中使用在线脱气或氦气脱气。3.用甲醇或其他强极性溶剂中洗流通池。如有需要,可以用1N的的酸,(不要用盐酸）。4.取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。5.更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。6.用中等强度的溶剂进行冲洗。更改流动相时,在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。使用离子对试剂、缓冲盐更应注意平衡柱。7.检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。8.改变分析条件。使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。9.重新设定基线。使用新的流动相。10.将波长调整至最大吸收波长处。重选检测波长。Q11. HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法解答：1.样品量不足,解决方法为増加样品量。2.样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子。3.样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检器4.检测器衰减太多。调整衰减即可。5.检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数。6.检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。7.检池中有气泡。解决办法为排气。Q12. 如何进行色谱柱的维护？解答：1.建议检测前样品和流动相进行过滤。2.建议每天做完样品后及时进行清洗。3.常规检测：测试完后直接把色谱柱反向连接采用90%有机相冲洗45min，最后保存在纯甲醇或纯乙腈中。4.使用缓冲盐条件：a.等度条件：使用缓冲盐之前和之后都用过渡流动相以1mL/min流速冲洗45minb.梯度条件：使用缓冲盐之前与初始流动相组成相同的过渡流动相以1mL/min流速冲洗45min。注意：过渡流动相是指有机相和水相比例与分析流动相相同比例，只是不含有缓冲盐。c.缓冲盐冲洗干净后，采用90%有机相反向冲洗60min，最后保存在纯有机溶剂中。注意：如果使用缓冲液不能存留色谱柱中过夜。Q13. 规则的基线噪音是如何产生的解答：原因1.在流动相、检测器或泵中有空气(尖锐峰)。2.漏液。3.流动相混合不完全。4.温度影响(柱温过高,检测器未加热)。5.在同一条线上有其他电子设备(偶然噪声）6.泵振动解决方法1.流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。2.检查管路接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换泵密封。3.用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂。4.减少差异或加上热交换器。5.断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正。采用精密级稳压电源。6.在系统中加入脉冲阻尼器。Q14. 不规则的基线噪音是如何产生的解答：原因1.漏液。2.流动相污染、变质或由低质溶剂配成。3.流动相各溶剂不相溶4.检测器/记录仪电子元件的问题5.系统内有气泡6.检测器内有气泡7.流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音。8.检测器灯能量不足9.色谱柱填料流失或阻塞10.流动相混合不均匀或混合器工作不正常解决方法1.检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换密封。检查流通池是否漏液。2.检査流动相的组成。3.选择互溶的流动相4.断开检测器和记录仪的电源,检查并更正。5.用强极性溶液清洗系统6.清洗检测器,在检测器后面安装背景压力调节器7.用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池8.更换灯9.更换色谱柱维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,建议不使用泵的混合装置Q15. 氨基柱在进酸性样品时，很伤柱子，如使用一段时间后，柱效降低，峰形改变，如何恢复？解答：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱(冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨)，之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。Q16. 做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？解答：1.泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理。2.比例阀失效，更换比例阀即可。3.泵密封垫损坏，更换密封垫即可。4.溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法。5.系统检漏，找出漏点，密封即可。6.梯度洗脱，这时压力波动是正常的。Q17. HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？解答：柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因：1.拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查。2.把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查。3.将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查。只用于使用过的柱子。4.更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题。Q18. 流动相出现气泡的原因有哪些？解答：1.流动相溶液中往往因溶解有氧气或空气而形成气泡。2.液路阻力比较大，吸液时出现了真空气泡。3.系统开始工作时未能将流路中的空气排除干净。4.在注入样品时混入了空气。

   摘要在采用高效液相色谱进行分析方法开发时，色谱柱的选择直接影响了分离效果的好坏，选择合适的色谱柱可以缩短方法开发所需的时间，并且使方法更具稳定性。但是现在市场上色谱柱种类繁多，不同类型的色谱柱分离对象不同，因此，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。本文结合以往经验及对色谱柱的一些认识进行了简要的汇总，从分离模式选择、样品信息、色谱柱参数三个方面进行简述，以期为方法开发时色谱柱的选择提供思路。纳谱分析液相色谱柱种类繁多，在选择合适的色谱柱之前，首先必须选择HPLC的分离模式，根据使用的固定相和流动相的组合不同，可以得到下列各种各样的分离模式。了解样品了解待检样品的结构、分子量、溶解性、离子化、极性、pH值等物理化学性质，再参照下图选择适合的分离模式和合适的液相色谱柱固定相：色谱柱参数色谱柱性能影响因素中包括硅胶纯度、色谱柱尺寸、颗粒形状、粒径、表面积、孔径，化学性质包括键合类型、碳覆盖率、封端，下面依次介绍各参数对色谱柱性能的影响。硅胶纯度硅胶纯度对强极性化合物的分离最为重要，残留金属离子浓度、硅胶的杂质会影响化合物的峰形，硅胶表面的金属含量高会影响碱性化合物的峰形，易发生拖尾。纳谱分析采用的纳微科技UniSil硅胶，是利用高纯的有机硅烷试剂作为原材料生产制得，其金属含量都在10ppm以下，纯度高于国外高纯度色谱硅胶。 色谱柱尺寸增加色谱柱长度，可以在一定程度上提高柱效，但也会升高压力和导致峰展宽；含量测定、溶出检测等对于分离的要求较低，可选用较短的色谱柱，减少运行时间。内径大，提高载样量，但也会增加横向扩散，同样会导致峰展宽。内径小的色谱柱灵敏度较高，峰型更窄，但是载样量较小。如果载样量满足要求，需要更高更尖锐的峰提高灵敏度，可以选择更小内径，但压力较大，对系统要求较高。短柱（15-100mm）运行时间短、柱压低；长柱（150-250mm）分辨率高、运行时间长；小内径（≤2.1mm）检测器灵敏度高；大内径（3-21.2mm）载样量高、耐污染、寿命长。颗粒形状粒径球形颗粒柱效高、重现性好、柱床结构均匀，不规则形柱床结构不均匀、流动相线速度不均匀，容易谱带展宽；当使用粘度较大流动相时，球形颗粒可降低柱压，延长色谱柱寿命。纳谱分析采用的纳微UniSil硅胶微球在电子显微镜下呈现严格的单分散球形，而某国际品牌呈现不均一球形，表面缺陷清晰可见。粒径粒径指柱填料颗粒直径的大小，实际上色谱柱上所标的粒径是一个平均值，通常1.5-10μm。粒径小的色谱柱分离度较好，但色谱柱压力更大，如果5μm粒径的色谱柱分离度稍有不足，则同型号3μm色谱柱的分离度一般会提供令人满意的选择性。目前纳谱分析主要可供选择的填料粒径如下：1.8μm为快速液相色谱柱，匹配UPLC3.0μm用于一般普通快速分析，常用于分离复杂的多组分样品5.0μm用于常规分析平均粒径越小，颗粒分布度越小，色谱柱柱效越高，但耐污染性能下降，反压亦越高。UniSil硅胶微球的粒径分布要远远好于国外知名品牌，拥有极窄的粒径分布。表面积表面积是指颗粒外表面与内部孔面积的总和，以m2/g表示，高表面积对于多组分样品的分离具有较强的保留能力、柱容量和分离度；表面积低的柱填料能迅速达到平衡状态，对于梯度洗脱尤为重要。孔径孔径是指填料颗粒的孔或腔的平均尺寸，范围是120～300Å，多孔色谱填料与目标物的作用绝大部分（＞95%）是发生在填料颗粒的内部，即孔内的，所以孔对于色谱填料也是最重要的参数之一，一款填料孔径大小(Pore Size)和孔径分布(Pore Size Distribution)，在绝大多数的色谱分离纯化中，起到关键性作用。大孔径的填料颗粒可以延长大分子溶质在填料表面的滞留时间，达到充分分离，改善峰形，所以大孔径填料适合分离大分子化合物或者水动力体积较大的分子；较小孔径提供较高的表面积，可用于较大的载荷量，并保留小的有机化合物，可用于小分子有机物到聚合物的分离。 样品分子直径小于平均孔径才能进入微粒内部，所选色谱柱孔径至少是样品流体学直径的4倍，一般根据样品的分子量选择适合的孔径。分子量＜2000， 选择孔径80～180Å分子量＞2000，选择孔径300Å，300Å全多孔色谱柱可用于分离蛋白质和多肽。不同的载碳量载碳量越高，固定相传质效应增加，高载碳量，有利于不易保留化合物的分离，水解稳定性好，重现性好；低载碳量，有利于分析有一定保留的化合物，降低溶剂损耗、减少运行时间。一般C18载碳量为10～14%，ChromCore 120 C18载碳量高达18%。可以通过增加碳键的长度或键合密度来增加载碳量，载碳量增加了有利于不易保留化合物的分离。试用：纳谱分析提供色谱柱和固相萃取柱免费试用。您可扫描以下二维码进行试用申请。

冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordyceps sinensis（BerK.）Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体。夏初子座出土、 孢子未发散时挖取，晒至六七成干，除去似纤维状的附着物及杂质，晒干或低温干燥。主治补肾益肺，止血化痰。用于肾虚精亏，阳痿遗精，腰膝酸痛，久咳虚喘，劳嗽咯血。检测方法腺苷是一种核苷类物质，是虫草素的直接前体。腺苷分子式为C10H13N5O4，分子量为267，熔点为234-235摄氏度，易溶于水。腺苷是冬虫夏草重要成分之一，也是冬虫夏草的指标性物质之一。《中国药典》2020年版中就有明确规定，冬虫夏草作为药物，其腺苷含量不得低于0.01%。腺苷本身具有多种生物活性，是一种遍布人体细胞的内源性核苷，可直接进入心肌经磷酸化生成腺苷酸，参与心肌能量代谢，同时还参与扩张冠脉血管，增加血流量。腺苷对心血管系统和肌体的许多其它系统及组织均有生理作用。本次参考《中国药典》2020年版，采用高效液相色谱法(HPLC)，选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对冬虫夏草中腺苷成份进行分离和检测，色谱检测条件及谱图如下：实验结论本次参考《中国药典》2020年版，选用ChromCore C18反相色谱柱对冬虫夏草中的腺苷成份进行分离，使主峰拥有良好的峰型及分离度，周围无干扰杂峰，符合药典规定，为该药物的质量保证提供检测依据。详细产品信息，欢迎试用产品描述货号ChromCore C18 5μm, 4.6×250mmA001-050018-04625S试用方法：扫描以下二维码进行试用申请。

对于每一个身经百柱的实验人员来说，液相色谱图是他们打开未知物质世界的大门钥匙，科研中的很多问题都能从色谱图中得到很好的反映，有些问题可以通过改变设备参数得到解决，而有些问题则必须通过修改操作程序来解决，毕竟，正确选择色谱柱和流动相才是得到好的色谱图的关键。在此根据大家实践中可能会经常遇到的一些图谱问题进行了整理汇总，大家一起来看一下吧。1、拖尾峰1、筛板阻塞：柱子两头的过滤筛板如果堵塞，样品就会在筛板部分受阻而形成时间延迟，使得样品在柱后流出时峰型形成拖尾。需要通过反冲色谱柱，或者更换筛板。2、色谱柱塌陷：是指色谱柱由于其它原因引起了柱效率丧失，不能对物质形成保留，使得物质不在固定相上保留而随流动相流出，但是又还有一点柱效，因此形成拖尾。需要重新填充色谱柱或者更换色谱柱。3、有污染：即样品不在同一起跑线起跑，从后面开始跑得到达终点稍晚，表现出拖尾。更换色谱柱或者采用有机溶剂梯度洗脱1h以上，以冲洗柱子。4、流动相PH值选择错误：如某PH下有的样品存在分子型和离子型的动态平衡，离子型的陆续向分子型转化就会表现出拖尾。调节PH值可抑制分子解离，改善拖尾，对于碱性化合物，相对较低的PH值更有利于得到对称峰。2、前沿峰1、样品过载：被保留的样品在正常出峰时间前陆续出来，形成前沿峰。降低样品含量。2、样品溶剂选择不恰当：当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰，例如，在反相色谱中用乙腈做样品溶剂，而流动相的洗脱力较弱时会出现前沿峰。选择流动相或者接近流动相的比例作为样品溶剂。3、色谱柱损坏：色谱柱柱效损失，不能对物质形成保留。更换色谱柱。4、在大峰前有小峰出现，假象前沿峰，即大峰前包埋了没有分开的小峰。调整流动相洗脱梯度。3、倒峰1、样品折射率小：示差折光检测器测的信号是折射率，出现倒峰的原因是组分的折射率小于流动相。2、密度的原因：密度不一样，出来的峰正倒不一样。3、进样所致：进样时，样品对原有流动相产生瞬间阻断，然后瞬间涌流，所以产生先倒后高的“溶剂峰”。4、基本不可避免：试着使用与流动相相同的溶剂作为溶样溶剂，另外进样之前注意平衡跟冲洗参比池。倒峰基本上不能避免，但是这样操作会小些。4、包裹1、色谱柱问题：色谱柱流失，柱子被污染。2、样品溶解度差：温度可能会影响到溶解度。3、流动相不均匀：一般是流动相没配好，管路流动相不均匀，也会导致上述现象。5、基线漂移1、柱温波动：即使是很小的温度变化都会引起基线的波动，通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。使用柱温箱，控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器。2、流动相不均匀：流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。使用HPLC级的溶剂，流动相在使用前进行脱气处理。3、流通池被污染或有气体：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。4、流动相配比不当或流速变化：更改配比或流速，为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。5、样品中有强保留的物质：以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。6、出现宽峰1、色谱柱污染或失效，造成塔板数降低：更换同样类型的色谱柱，如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。2、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大：更换内径较小的短管路。3、检测器对反应时间或池体积响应过大：减少响应时间或使用更小的流通池。7、基线噪音1、在流动相、检测器或泵中有空气(尖锐峰)：流动相脱气，冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。2、漏液：检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。3、流动相混合不完全：用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂。4、温度影响(柱温过高，检测器未加热)：使用柱温箱，减少温度差异或加上热交换器。5、在同一条线上有其他电子设备(偶然噪声)：断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。采用精密级稳压电源。8、分离度不够1、流动相梯度洗脱设置不合理：优化梯度洗脱程序。2、流动相污染或变质(引起保留时间变化)：重新配置流动相。3、保护柱或分析柱阻塞：去掉保护柱进行分析，如果必要则更换保护柱；如果分析柱阻塞，可进行反冲；如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序；如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。文章内容来源网络，转载仅为分享知识，如有侵权请联系删除。

腊八粥，又称“七宝五味粥”、“佛粥”、“大家饭”等，是一种由多样食材熬制而成的粥。“喝腊八粥”是腊八节的习俗，腊八粥的传统食材包括大米、小米、玉米、薏米、红枣、莲子、花生、桂圆和各种豆类（如红豆、绿豆、黄豆、黑豆、芸豆等）。薏苡仁，中药名，为禾本科植物薏米Coix lacryma-jobi L.var.ma-yuen(Roman.) Stapf的干燥成熟种仁。秋季果实成熟时采割植株，晒干，打下果实，再晒干，除去外壳、黄褐色种皮和杂质，收集种仁。中医认为薏米具有健脾、补肺、清热、渗湿的功能，经常食用对慢性肠炎、消化不良等症也有良效。富含膳食纤维的薏米有预防高血脂、高血压、中风及心血管疾病的功效。检测方法甘油三油酸酯，分子式：C57H104O6，不溶于水，微溶于乙醇，溶于氯仿、乙醚、四氯化碳。在《中国药典》中，明确要求薏苡仁药材按干燥品计算，含甘油三油酸酯不得少于0.5%。本次参考中国药典，采用高效液相色谱(HPLC)检测，选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对薏苡仁中甘油三油酸酯进行分离和检测，色谱检测条件及谱图如下：Column:            ChromCore C18, 5 μmDimension:       4.6×250 mmMobile Phase:   65/35 v/v 乙腈/二氯甲烷Flow Rate:        1.0 mL/minTemperature:    30 ℃Injection:          10 μLDetection:         蒸发光Sample:            薏苡仁Peak:                1. 甘油三油酸酯实验结论采用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对薏苡仁中甘油三油酸酯进行分离和检测，主峰峰形良好，周围无干扰杂峰，该方法操作简单，灵敏度高，重复性好，符合药典要求，可用于薏苡仁中甘油三油酸酯的分离和测定，为该药物的质量保证提供检测依据。详细产品信息，欢迎试用产品描述货号ChromCore C18 5μm, 4.6×250mmA001-050018-04625S试用方法：扫描以下二维码进行试用申请。

在操作高效液相色谱时，你有没有为老是出现气泡而崩溃？有没有为超声波震荡了一个小时，流动相还出现气泡，而晕倒？有没有为天气晴好的时候没出现气泡，阴天、下雨天，同一瓶，出现了气泡，而对自己的工作失去信心？在操作高效液相色谱时，流动相出现气泡，那整个工作就变得非常困难。超声波震荡了一个小时的流动相，为什么天气晴好的时候没出现气泡，阴天、下雨天就会出现；是因为阴天、下雨天空气气压下降，引起溶在流动相中的空气过饱和（晴天时气压高还没饱和），当高压泵抽取流动相时，空气析出，产生了气泡。超声波震荡了一个小时的流动相，为什么里面还有空气呢？这是由于在常压下震荡，驱赶空气效果不行。如果把装流动相的瓶子进行抽真空，同时进行超声波震荡，效果会怎么样呢？效果非常好，只要1min，流动相中的空气差不多没了；经过这样驱逐空气的流动相，阴天、下雨天使用也不会出现气泡了；而且省时，不用动不动半小时、一小时超声波震荡；并且效果非常好。由于气泡的存在，会造成色谱图上出现尖锐的噪声峰，严重时会造成分析灵敏度下降；气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定，使基线起伏。气泡产生原因及解决办法1. 故障原因：溶剂混合时，由于两种液体热力学体积的变化，会产生气泡；混合时放热或者吸热易产生气泡，比如：甲醇和水混合属于放热，乙腈和水混合属于吸热。通常用量筒混合后明显看到体积的增减，而且有许多小气泡产生，挂在瓶壁上，或者晃一下可以看到许多小气泡存在液体中。  故障排除：对溶剂过滤，超声脱气（常用），尤其是乙腈和水混合后，超声脱气时间要长一些，也可以通过其他方法脱气，例如安装在线脱气机，充氮脱气等。处理好的液体在使用过程中应该保持室内温度恒定。2. 故障原因：溶剂滤头污染，导致泵在吸液过程中吸力不均匀而强制吸液从而产生微小的真空气泡。此时会观察到进液管壁上分布许多很小的气泡，有的在动有的停留在管壁上，或者感觉流速比设定值小，压力也不稳。 故障排除：先观察现象确认，再排除。用5%—10%的稀硝酸浸泡过夜（怕超声的滤头）或者超声处理数小时（可以超声的滤头），然后用纯水浸泡过夜或者超声处理，注意换水多处理几次，洗掉酸的残留，最后用有机相甲醇浸泡处理或者超声即可。若上述处理未果，需更换新的溶剂滤头。3. 故障原因：流动相放好后，没有排气，就开始运行泵，易产生气泡。 故障排除：放好流动相后，打开旁通阀，用注射器慢慢吸液，观察进液管无气泡后再吸10ml将流路中的空气驱赶干净，旋紧旁通阀后再运行泵，或者是打开旁通阀大流速排液，观察进液管无气泡后，再排气2min将流路中的空气驱赶干净，旋紧旁通阀后再运行泵。4. 故障原因：单向阀或者泵头内部污染。（泵的压力波动一般在100psi以上就要考虑了）泵头是压力变化最剧烈的地方，也是最易产生气泡的地方，泵头靠负压而吸液，而负压必然使流动相中的小气泡长大，当泵腔变正压时，已长大的气泡未必能全部变小流入后续液路，则泵腔内将积存气泡，从而影响吸液精度。 故障排除：小心拆下泵头，用甲醇超声清洗单向阀以及内部密封圈和泵头整体，用棉花沾甲醇擦拭柱塞杆。必要时更换单向阀，密封圈，柱塞杆等。5. 故障原因：进样时带入气泡，吸样时带到进样针中气泡  故障排除：在进样前，注意排出进样针里的空气，将进样针头垂直向上，用手指垫上滤纸摁住针头处，往上推，气泡很容易就上去了，排出即可。6. 故障原因：色谱柱进气泡  故障排除：用纯甲醇低流速（0.2-0.3ml/min）长时间冲洗反相色谱柱，随后可逐步加大流速，最大加到1ml/min，直至色谱柱压力稳定。或者更换色谱柱。 7. 故障原因：流通池是易积存气泡的地方，其对基线影响较大，流动相流入色谱柱后，压力越来越小，微小气泡将逐渐长大，而流通池截面积相对较大，则气泡在池内易长大，在无外压的情况下，很难缩小到管路内径以下流出流通池，从而存在了池内，导致基线很乱。 故障排除：在废液出口处加反压调节器（压力一般在150psi左右），为流通池提供一个背压；其次是用手指堵废液管出液端，眼看泵柱压上升（约2-3s），松开，且同时看检测器显示屏上吸光度值的变化。如果池内有气泡，则手指堵废液管，吸光度值将剧烈变化，当手松开后吸光度值再次大步上升，证明池内有气泡但没有排掉，当手指堵住和松开废液管时，吸光度值基本不变时，证明排气泡成功，再观察基线将稳定（此过程需要重复10-20次）。 以上为等度系统气泡的故障排除，望各位同行和工作者多多指教，商榷。给予纠正，有不妥之处，及时沟通。

板蓝根颗粒板蓝根颗粒主要成分为板蓝根，辅料为蔗糖，糊精。板蓝根又名靛青根、蓝靛根、大青根，是一种中药材。中国各地均产，分为北板蓝根和南板蓝根，北板蓝根来源为十字花科植物菘蓝和草大青的根；南板蓝根为爵床科植物马蓝的根茎及根。具有清热解毒，凉血利咽。用于肺胃热盛所致的咽喉肿痛、口咽干燥、腮部肿胀；主治急性扁桃体炎、腮腺炎见上述证候者。检测方法板蓝根中尿苷、鸟苷、（R，S）-告依春、腺苷的含量，是2020版《中国药典》中板蓝根颗粒的重要控制指标之一。本次参考中国药典2020年版，采用高效液相色谱(HPLC)检测，选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对板蓝根颗粒中有效成分的含量进行分离和检测，色谱检测条件及谱图如下：Column:           ChromCore  C18, 5 μmDimension:      4.6 × 250 mmMobile phase:  A）甲醇                           B）水Gradient:           t (min)          A                B                           0                  3                97                           3                  3                97                          20                10              90                          40                70              30                          50                70              30                          51                 3               97              Flow rate:         0.8 mL/minTemperature:   30 ℃Injection:          5 μLDetection:        UV 254 nmSamples:          板蓝根颗粒Peaks:              1. 尿苷                          2. 鸟苷                          3. (R,S)-告依春                          4. 腺苷结论选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对板蓝根颗粒中有效成分的含量进行分离和检测，各有效成分峰形良好，该方法操作简单，灵敏度高，重复性好，符合药典要求，可用于板蓝根颗粒中有效成分的分离和测定，为该药物的质量保证提供检测依据。详细产品信息，欢迎选购：产品描述货号ChromCore C18 5μm, 4.6×250mmA001-050018-04625S

Part 01载气的选择气相色谱可选择的“流动相”(载气)的范围较窄，满足需要的载气主要有氢气、氦气、氮气以及氩气。其中氢气是最好的载气，使用氢气作为载气的时候，分离的效率是最高的，大概是使用氦气的分离效率的2倍，是使用氮气的分离效率的四倍。这一点非常重要，如在使用气相手性分析色谱柱对异构体进行拆分的时候，虽然三种载气通过调整最佳线速度得到近乎相同的塔板高度以及柱效，但实际情况下，我们会发现氮气的色谱峰宽最大，氦气下的峰宽其次，氢气下的峰宽最小，表观柱效最高，分离情况最为让人满意。Part 02GC–MS色谱柱分析灵敏度和检测极限是信噪比（S / N）的函数，噪声的降低会提高灵敏度。所有GC色谱柱都会流失，而极性固定相和较厚的膜更容易流失，固定相聚合物的这种正常降解会导致基线噪声增加。当存在过量的氧气且温度更高时，降解会加速；因此，随着温度升高到色谱柱的上限，基线升高了。用于气相色谱-质谱（GC-MS）的指定色谱柱（MS柱）经过精心设计，可在高温下减少流失和高惰性，从而最终提高信噪比。许多检测器对泄漏产物的污染很敏感，并且在使用低排放柱时需要较少的维护。对于GC-MS应用，低流失固定相减少了色谱柱对背景噪声的影响，从而提高了质谱纯度和更准确的库识别。Part 03超高惰性色谱柱近年来，制造商开发了使GC色谱柱失活的新方法，即超高惰性色谱柱（UI柱），由于它们具有低流失和低硅烷醇活性，因此提高了灵敏度。分析碱或极性化合物或某些特定应用（例如农药，食品，环境或药物分析）时，降低硅烷醇活性尤其重要，所有这些都需要不断降低的检测限。色谱柱中的活性硅烷醇会与碱或极性化合物发生相互作用，并导致峰拖尾，这会影响灵敏度（通过降低峰高（相对于基线噪声）），并使积分（并因此定量）更具挑战性且重现性较低。只有在具有惰性流动路径的系统（即进样口衬管和填料，色谱柱，离子源等）的情况下，才能充分实现高度失活色谱柱的优势。如果在进样口出现峰拖尾，则仅在色谱柱中低硅烷醇活度带来的任何优势都将得到缓解。大多数制造商提供高度惰性的易损件，包括衬管和填料进样口。Part 04气相色谱柱固定相的选择如果对选择何种固定相拿不定主意，那就先从BP-1或BP-5开始选择。柱流失较低的色谱柱通常为化学惰性且使用温度极限较高。若能够满足分离度和分析时间的要求，则选择极性最小的固定相。非极性固定相的使用寿命优于极性固定相。所选固定相的极性与溶质的极性相同，这种选择方法很有用，但是使用这种方法不能总是选择出最合适的固定相。如果分离效果较差的溶质分子具有不同的偶极子或氢键强度，可以改变固定相偶极子的数量(未必更多)或氢键作用的大小。但是，固定相改变后其它分析物可能会被同时洗脱出来，因此新的固定相可能无法提供整体上较好的分离效果。如果可能，避免使用与选择性检测器连接时能产生较大响应信号的固定相。例如含氰丙基的固定相（BP-624、BP-1701、BP-1301等）与NPDs检测器连接时，基线(由于柱流失)会不成比例的大幅上升。100%甲基（BP-1）或5%苯基（BP-5）、50%苯基（BP-50+MS）、6%氰丙基苯基（BP-624）、14%氰丙基苯基（BP-1701）以及WAX系列PEG固定相（BP-INOWAX）基本涵盖了色谱柱的选择范围。PLOT色谱柱用于分析高于柱温的气态样品。Part 05分流进样比例不分流进样用于低浓度样品，以提供最佳灵敏度。与分流进样相比，样品从进样口的蒸汽传输要慢得多，从而导致谱带展宽；因此，必须使用较低的初始柱箱温度将样品蒸气截留在色谱柱的顶部。如果可以牺牲一些灵敏度，最好采用小比例的分流进样，主要有以下几方面的好处：更好的峰形：更快地迁移出衬管，这会将分析物以较窄的谱带引入色谱柱。无需低温冷却：分析物以较窄的谱带引入；因此，无需降低柱箱温度即可将其聚焦在色谱柱的顶部。较短的运行时间：可以在较高的柱箱初始温度下开始分析，从而减少了运行时间和柱箱再平衡时间。使用等温方法：不需要较低的初始烘箱温度，可以使用从较高温度开始的等温方法。这些方法对于包含更高沸点成分的样品特别有用。1:10的分配比例有利于平衡灵敏度和分流进样的好处。Part 06载气节流模式可在分流进样期间使用载气节流模式，在样品进样后的指定时间更改分流比，从而减少载气消耗。例如，如果在进样后1分钟将分流流速从150 mL / min降低到25 mL / min（在使用节气阀之前确保所有样品和溶剂蒸气已转移到色谱柱上），分流可以在整个分析过程中保持速率不变，直到下一次分析为止。在这些条件下，每次分析可节省79％的气体：分析时间：20分钟；分流比：100：1; 省气模式：1分钟后分流比为15；柱温：100°C; 色谱柱：30 m×0.25 mm×0.25 µm。Part 07点火氢焰气相色谱仪开机时需要点火，有时因各种原因致使熄火后，也需要点火。然而，我们经常会遇到点火不着的情况 ，下面介绍两种点火技巧，供同行们相试。加大氢气流量法先加大氢气流量，点着火后，再缓慢调回工作状况，此法通用。减少尾吹气流量法先减少尾吹气流量，点着火后，再调回工作状况，此法适用于用氢气作载气，用空气作助燃气和尾吹气情况。毛细管柱设置尾吹气，能快速将样品组分吹送入检测敏感区，消除检测器死体积的柱外效应，从而消除柱后死体积对分离测定的影响，达到改善柱效和色谱图峰形的效果。Part 08进样技术在定量分析中，应注意进样量读数准确。在气相色谱分析中，一般是采用注射器或六通阀门进样，在考虑进样技术的时候，主要是以注射器进样为对象。进样量进样量与气化温度、柱容量和仪器的线性响应范围等因素有关，也即进样量应控制在能瞬间气化。达到规定分离要求和线性响应的允许范围之内 ，填充柱冲洗法的瞬间进样量：液体样品或固体样品溶液一般为0.01～10微升，气体样品一般为0.1～10毫升，在定量分析中，应注意进样量读数准确。（1)排除注射器里所有的空气用微量注射器抽取液体样品时，只要重复地把液体抽入注射器又迅速把其排回样品瓶，就可做到这一点。还有一种更好的方法，可以排除注射器里所有的空气，那就是用计划注射量的约2倍的样品置换注射器3～5次。每次取到样品后，垂直拿起注射器，针尖朝上，任何留在注射器里的空气都应当跑到针管顶部，推进注射器塞子，空气就会被排掉。（2)保证进样量的准确用经置换过的注射器取约计划进样量2倍左右的样品，垂直拿起注射器，针尖朝上，让针穿过一层纱布，这样可用纱布吸收从针尖排出的液体，推进注射器塞子。直到读出所需要的数值。用纱布擦干针尖 ，至此准确的液体体积已经测得，需要再抽若干空气到注射器里，如果不慎推动柱塞，空气可以保护液体使之不被排走。进样方法双手拿注射器，用一只手(通常是左手)把针插入垫片，洼射大体积样品(即气体样品)或输入压力极高时，要防止从气相色谱仪来的压力把柱塞弹出(用右手的大拇指)让针尖穿过垫片尽可能深的进入进样口，压下柱塞停留1～ 2秒钟，然后尽可能快而稳地抽出针尖（继续压住柱塞)。进样时间进样时间长短对柱效率影响很大，若进样时间过长，会使色谱区域加宽而降低柱效率 。因此，对于冲洗法色谱而言，进样时间越短越好，一般必须小于1秒钟。Part 09气化温度的设置气化温度的高低对组分的分离和峰形有很大影响。温度过低，产生前沿峰；温度过高，峰前沿直立或出现分解产物的色谱峰。气化温度选择一般根据样品组成、样品量和使用色谱柱类型以及柱温来选择，如柱上进样，由于柱头插入气化室，温度过高超过色谱柱的最高限值，往往会使柱头前沿部分固定相的剥落或分解，造成基线不稳和出现“鬼”峰。Part 10遇到问题，先想到检漏遇到保留时间，重复性，灵敏度相关的问题，先想到检漏1）载气检漏，在更换载气时进行检漏操作，载气泄露会导致上述最常见问题出现，甚至会对气相色谱仪的硬件造成损害(流量控制）；2）进样口是容易泄露的区域，因此进样口的检漏非常有必要。如何避免进样口泄露：及时更换隔垫和衬管的橡胶密封圈；定期检查接柱子的石墨密封垫；对进样口进行憋压测试和流量测试。

色谱柱是液相色谱仪的最核心部件，价格相对昂贵，请牢记它是高档仪器中的高档部件，给它以足够的尊重和关怀。如避免强烈的碰撞和震动，不要让柱床变干，避免在严寒环境受冻等。在内容正式开始之前，我们先了解一下液相色谱柱的基本结构，色谱柱由接头、螺帽、柱管、填料、垫圈及过滤片等组成。色谱柱安装、启用和维护1、柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配色谱柱是消耗品，不是仪器原配的情况很多。如果接头和柱头深度不匹配将会产生漏液或者死体积过大的现象。接头比柱头深度长，不易拧紧而漏液；接头比柱头深度短，柱头内留有空隙而产生死体积，使谱带展宽和峰拖尾。2、溶剂的匹配转换色谱柱内保存溶剂和仪器系统内存留溶剂，如果和流动相不匹配，使用前需进行转换。特别是流动相含缓冲盐时，如保存溶剂是纯有机相或有机相比例高，直接将新柱接入使用，会导致缓冲盐在柱内结晶析出，最严重会将新柱永久不可逆地损坏。正相柱保存溶剂一般为正己烷，如果要转换成HILIC柱模式使用，由于正己烷和甲醇乙腈的互溶性不好，转换中间需用二氯甲烷或乙酸乙酯过渡。3、正确使用缓冲盐缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂，因此缓冲盐使用不当会使其析出，堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙，使填料板结，柱压上升；同时阻碍了基质上键合的碳链自由舒展，使色谱柱的保留能力下降，柱效降低。缓冲盐析出后，去除非常困难，因此，正确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要。正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出，因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话：使用前要过滤，使用后要冲洗。具体方法如下：1、等度条件：使用缓冲盐前和使用后需用过渡流动相以1.0mL/min流速冲洗10个柱体积；使用后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相以0.2mL/min流速冲洗色谱柱过夜。2、梯度条件：用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前，用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1.0mL/min流速冲洗10个柱体积。含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓，以避免梯度过程中缓冲盐析出。注意：过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同，区别只是过渡流动相不含缓冲盐。3、缓冲盐析出的补救方法：1）方案1：用甲醇/水=20/80以1.0mL/min流速35摄氏度条件下反向冲洗色谱柱120min；2）方案2：用甲醇/水=20/80以0.2mL/min流速反向冲洗色谱柱过夜。4、新柱使用前的平衡和老化厂家出厂检验时一般都已进行过平衡，但色谱柱到最终用户时间不一，用户正式测定前最好对色谱柱再次平衡。最好的平衡兼老化一起进行的方法是运行几次完整的分析程序（包括进样），直到观察到峰形、保留时间和峰面积稳定为止。所谓“老化”是借用了气相的术语，目的是达到分析物在色谱柱以及整个液相系统流路中的吸附饱和。对某些特定的待测物，如分子量大于1000的，因扩散速度慢，老化时间相应要长，可采取大浓度进样或在同一个洗脱周期内连续进样多针的方式加快老化。5、pH使用范围一般认为硅胶基质柱子的pH使用范围是2-8，这是很粗略的。硅胶类型、使用温度、硅胶表面所键合的固定相类型以及缓冲盐的不同，对此均有影响。硅胶比孔容小、键合密度大的填料pH耐受范围要大一些，有些选用高品质硅胶，加上高密度键合和双封尾，或特殊工艺使pH耐受范围最大提高到10。磷酸盐缓冲盐渗透力强，有加快硅胶溶解的副作用，它的存在会降低pH使用范围。有机杂化硅胶以及硅胶表面涂覆杂化层的硅胶填料，有机质的存在使pH使用范围能到12以上。拿到柱子第一时间阅读说明书，确认色谱柱内的封存液，有条件可以依照COA报告做柱效测试。6、色谱柱保存短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流动相（不含缓冲盐）保存为佳，以尽量减少下次使用的平衡时间。一般只建议在长期保存反相柱的时候用纯甲醇或乙腈，一方面纯有机相保存有最大限度减少键合相水解的作用，但纯甲醇（乙腈）又会将已水解而暂时吸附在柱内的键合相洗脱出去，使固定相流失进程加快，寿命缩短。纯有机相保存还有易挥发使柱床变干的缺点，使用80%左右有机相保存也属好的选择，且足以避免长菌。强烈建议在柱身上贴标签标明保存溶剂。离子交换柱和水性SEC柱等适合保存在水溶液中的色谱柱，可加0.05%叠氮化钠溶液防止长菌。正相柱，无论是短期还是长期，都推荐保存在所用流动相中。色谱柱柱压柱压反映了色谱柱的内部状况，所以是 HPLC方法中的最重要参数之一，当柱压升高接近上限或者柱压有异常升高，往往意味着色谱柱出状况了，需及时进行维护和补救，严重时色谱柱就已报废了。下面是色谱柱柱压方程。对填充色谱柱，柱压与黏度 (η)、柱长 (L)和流速 (F)成正比，与填料粒径（d p）以及柱管半径（r）的平方成反比。K0是比渗透性系数，对填充床，其值约为0.001。通过此公式可近似计算出给定色谱条件下的理论柱压。只有当新柱实际测得的柱压和理论柱压相差很大，才能说柱压存在问题。黏度 (η)取决于流动相溶剂的选择，为降低柱压，反相色谱中倾向于选择低黏度的乙腈，而不是高黏度的异丙醇。当然选择时还需考虑溶剂强度、极性、分析物的溶解度以及和分析物兼容性等。柱长（L）增加可以提高分离度（R），流速（F）提高能加快分离，但都会导致柱压上升，选择确定这些运行参数时，需综合平衡和折中。填料粒径对柱压影响极大，d p降低一倍，柱压将增加4倍。UHPLC中采用的sub-2 μm填料，柱压超过普通HPLC泵的400Bar上限很多。提高柱温因可降低黏度η，相应降低柱压。在梯度洗脱时，黏度随流动相组成的变化而改变，柱压也会处在不断变化中。对水/甲醇流动相体系，在55：45时，黏度和柱压有个极大值。内径的影响同样很大，根据线流速相同柱压相同的原则，4.6mm内径的色谱柱流速为1mL/min，约相当于在2.1mm内径色谱柱上的0.2mL/min流速，在10mm半制备色谱柱上的5mL/min，计算公式为v＝1.0mL/min x（内径r/4.6）2。所以在换不同内径色谱柱时，请及时调整流速，以免因高柱压损伤色谱系统。柱压下降是仪器系统的连接有泄漏，柱压不稳定一般认为是流路中有气泡或空穴，和色谱柱相关的柱压问题是柱压上升。柱压波动的原因及解决办法和柱压波动相关最大的是进口端筛板（inlet frit）以及其后面1-2cm长度的柱头填料。筛板上有比填料粒径小的小孔，筛板上的小孔或柱头填料的间隙被部分堵塞，是柱压上升的主要原因。有以下几类情况：1、填料破碎和使用后有填料粉末生成填料破碎一般在装柱过程中发生，装柱压力过大或所选硅胶机械强度过低所至，设定柱压出厂标准可解决；流动相中高pH值缓冲盐使硅胶溶解并重新形成填料粉末，堵塞出口端筛板，这种情况下反冲不起作用，只有更换后筛板，不过打开承压的后筛板，对柱床会有不好影响。2、颗粒物堵塞引起柱压上升和对策可能堵塞进口端筛板（前筛板）和柱头填料间隙的颗粒物来源有：样品（制样时灰尘和滤纸等带入）、进样阀密封圈磨损、流动相（溶剂本身含有和配制过程进入）、液相仪器中泵阀密封圈的磨损、缓冲盐析出（一般在梯度运行和进样时盐的溶剂环境改变导致）。水和缓冲盐流动相内生长的细菌，也是颗粒物来源的一种，可堵塞筛板和填料间隙。应避免将这类流动相在室温下久放，可放入冰箱存放。（1）预防措施样品（甚至标准品）和流动相过滤，既预防了筛板、柱头和毛细管堵塞，又能减少进样阀、活塞杆和截止阀等仪器关键部件的磨损。普通用0.45μm孔径滤膜过滤样品和流动相，对使用2μm以下填料的超高压柱的，可用0.20μm滤膜。滤膜材质有再生纤维素、聚四氟乙烯、尼龙、硝酸纤维和醋酸纤维等，须根据和样品溶剂及分析物的适应性慎重选择。使用保护柱或在线过滤器，具体安装位置见下图：在线过滤器内装有可更换的滤片，滤片孔径一般有2μm和0.5μm两种。安装位置有两个可选择，在进样器和色谱柱之间时，对样品和流动相中的颗粒物都有效；在泵和进样器之间，则只对流动相有过滤作用。保护柱是缩小版的色谱柱，内含带填料的可更换的柱芯，安装在进样阀和色谱柱之间，用于防止色谱柱的化学污染为主，也有过滤颗粒物的作用。（2）故障排除反冲色谱柱：不连接检测器，直接将堵在前筛板上的颗粒物冲出排到废液瓶中。开始时反冲压力可低于正常使用压力，待颗粒物有冲出后，逐步提高冲洗压力。有时颗粒物已非常牢固嵌入到筛板内部，反冲不一定凑效，早反冲、勤反冲相对效果更好。有的厂商为避免堵塞，使用了较大孔径（2-5μm）的前筛板，这种情况反冲会将填料冲出。换筛板：一般不建议这样做，因为换筛板会带走粘在筛板上的部分填料，使柱床的均一性受影响，导致柱效下降。不过如果反冲不能解决问题，也只能不得已而为之，要不然就要把色谱柱报废了。如果系统中不接色谱柱，柱压仍然高，说明泵出口到色谱柱之间的其它部位，包括进样器、在线过滤器和保护柱等有堵塞，可逐一排查。为了减少死体积，毛细管都做得尽可能的细，也可能被堵。3、化学污染物引起柱压上升和对策来源同样是样品、流动相和系统，不过来源于样品的污染最普遍，特别是对复杂基体样品未经前处理或前处理不够的时候。化学污染物主要有：分子量很大的化合物、盐类、脂质、蜡类、油脂、腐殖酸、蛋白质等其它生物来源的物质。像盐类这样的保留能力极小的污染物会在死体积处很快从柱中洗脱出去，检测器一般对此类物质响应不大，有时表现为干扰峰、基线波动、斑点甚至负峰。保留能力中等的污染物，会被慢慢洗出色谱柱，表现为宽峰、基线馒头形波动和基线缓慢漂移。对强保留的污染物，一般流动相强度不足以将其从柱中洗出，会逐步在柱头累积。有时，累积在柱头的污染物可作为新固定相对分析物起作用，引起保留时间改变、峰拖尾和峰分叉等。污染物在柱头累积到一定程度，如果不采取措施，会堵塞填料间隙，引起柱压上升。最好的办法是选用合适的溶剂冲洗溶解这些物质，同时又不对填料本身有损害。如聚合物柱中累积的蛋白类污染物可用pH13-14的强碱溶液洗掉，但这种方法不适合硅胶基质色谱柱。（1）预防措施：a．制样时采用SPE固相萃取等方法，预先将色谱柱杀手类的污染物质清除掉；b．连接保护柱。保护柱是分析柱的延伸，在填料类型和粒径上应与分析柱一致，才能最大限度起保护作用，又不影响色谱性能。一个设计和装填良好的保护柱，还可增加分析柱的分离效率。如果因某种原因需在保护柱中用不同的填料，也应选择比其所保护的分析柱保留能力弱的固定相，这时的保护柱完全用于截住强保留物质，类似于SPE小柱的功效。当保护柱柱芯保护功能用尽时，也不能说不可再清洗后复用，但价格低不值得去花这个时间。c．经常对分析柱进行冲洗维护。（2）故障排除：已经累积很多污染物，用甲醇或乙腈简单冲洗不奏效，推荐使用下面方法清洗反相柱100％甲醇---100％乙晴---75％乙晴/25％异丙醇---100％异丙醇---100％二氯甲烷---100％正己烷用每种溶剂冲洗至少10个柱体积，对于250mm×4.6mm的分析柱，合适的冲洗流速是1～2mL/min。最后用10柱体积的异丙醇过渡，然后回到原来的流动相体系。对受蛋白类污染的硅胶基质反相柱，纯有机溶剂如乙腈或甲醇不能溶解多肽和蛋白质。由有机溶剂、缓冲液和酸,有时还加上离子对试剂等组成的配方清洗效果极佳，譬如用三氟乙酸水溶液和三氟乙酸/丙醇溶液对柱子重复进行梯度洗来再生；Bhadwaj和Day试验了在250mm×4.6mm的柱子中注入100μL的三氟乙醇，再生效果良好。清洗硅胶、CN和Diol等正相柱建议方法：先用20柱体积50：50正己烷/氯仿冲洗，然后用甲醇、二氯甲烷或者100%醋酸乙酯冲洗。对油脂类物质，可用异丙醇清洗。

醋五味子本品为木兰科植物五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实。习称“北五味子”。秋季果实成熟时采摘，晒干或蒸后晒干，除去果梗及杂质。在《神农本草经》中该药被列为上品，其皮肉甘酸，核辛苦，全果都有咸味，五味皆有，故名五味子。主治收敛固涩，益气生津，补肾宁心。用于久嗽虚喘，梦遗滑精，遗尿尿频，久泻不止，自汗，盗汗，津伤口渴，短气脉虚，内热消渴，心悸失眠。检测方法五味子醇甲由五味子果仁中提取出的一类木脂素类。其结构可以五味子丙素为代表。在不同的产物中，苯环上的亚甲二氧基可由两个甲氧基所代替，八元环的脂架部分也可以具有一个或多个羟基(或其酯基)。对迁延性和慢性病毒性肝炎血清谷丙转氨酶(SGPT)升高患者有较好的疗效。本次参考中国药典2020年版，采用高效液相色谱(HPLC)检测，选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对五味子中五味子醇甲的含量进行分离和检测，色谱检测条件及谱图如下：Column:               ChromCore C18, 5 μmDimension:           4.6×250 mmMobile Phase :     65/35 v/v 甲醇/水Flow Rate:            1.0 mL/minTemperature:       30 ℃Injection:             10 μLDetection:            UV 250 nmSample:               五味子Peak:                   1. 五味子醇甲结论采用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对五味子中五味子醇甲的含量进行分离和检测，主峰峰形良好，周围无干扰杂峰，该方法操作简单，灵敏度高，重复性好，符合药典要求，可用于五味子中五味子醇甲的分离和测定，为该药物的质量保证提供检测依据。应用相关产品，欢迎选购产品描述货号ChromCore  C18 5μm, 4.6×250mmA001-050018-04625S

HPLC色谱保养技巧仪器：高效液相色谱HPLC组件：流动相溶剂瓶→高压泵→进样器→色谱柱→检测器→废液保养：具体如下：01流动相溶剂瓶溶剂瓶是流动相的起点，通常是盛放水相溶液或是有机相溶液。1、水相溶液，对于水相溶液来说，首要的问题是防止污染。对于溶剂瓶我们要做的非常重要的工作就是勤换流动相，常换常新。2、有机相溶液，对于有机相溶液，可以不用担心细菌繁殖的问题。但是有机相容易发生聚合，特别是乙腈在适宜的光照条件下极易发生聚合，瓶子里就会出现一些絮状的聚合沉淀物。为了防止聚合过程的发生，装乙腈时要用棕色的溶剂瓶，避免阳光直射，更换乙腈时应当弃去瓶底剩余的溶液。3、清洗过滤，溶剂瓶里的过滤头，其作用是为了防止溶液瓶中的颗粒杂质进入到仪器的流路系统中，它的材质通常分为玻璃烧结石英和不锈钢，如果不慎堵塞会造成流动相吸液不畅，因此必须进行清洗，玻璃材质的通常是用稀硝酸泡，而不锈钢材质的可以直接进行超声清洗。02高压泵泵是液相色谱的核心，泵将流动相从溶剂瓶输送到液相流路系统中，并要在高压下保持流量和压力的稳定。状态正常的高压泵是液相色谱准确分析的基础，所以平日一定要重视对泵的维护。1、泵压力波动，很多情况下，泵的问题反映在压力上，压力波动又是常见的一类问题。通常我们可以通过重新清洗流路和再次脱气流动相加以解决。2、过滤白头保养，在泵的维护里还有一项常做的工作就是更换清洗阀上的过滤白头，通常判断的标准是纯水以5mL/min流速清洗的时候，如果压力超过1MPa则考虑更换。03进样器进样器分手动和自动两大类，虽然两者工作模式不同，但使用的要点是基本一致的。1、防止交叉污染，自动进样器常见的问题是交叉污染，交叉污染产生的原因很直接，样品残留在进样针内外表面，并随下一次进样进入色谱系统。要解决交叉污染，主要靠清洗。2、精细操作，手动进样器的操作要点大致相同，应使用液相色谱LC专用进样针，进样时插针应插到底，不使用时将针头留在进样器内，使用前后都要及时清洗。04色谱柱1.所使用的流动相均应为HPLC级或相当于该级别的，在配置过程中所有非HPLC级的试剂或溶液均经0.22um薄膜过滤，而且流动相使用前都经过超声仪超声脱气后才使用。2.所使用的水必须是经过蒸馏纯化后再经过0.22um水膜过滤后使用，所有试液均现用现配。并且在进样的样品都必须经过0.22um薄膜针筒过滤后进样。3.所使用到的最大流速为1.0mL/min，所以流速提升过程应是梯度提升，不存在流速的突升突降。4.仪器检测完，需要用流动相梯度洗脱色谱柱1小时以上。之前有出过详细的攻略，请点击下方查看：色谱柱宝典上色谱柱宝典下05检测器1、光源部分检测器中非常重要的部件是光源，光源对发射能量有要求，一旦能量衰减到一定程度，就会出现基线噪声变大，灵敏度降低等一系列影响使用的问题，因此光源是一个消耗品。通常紫外灯的寿命是2000h，当到达这个时限的时候，我们就要特别关注灯的能量状况，可以通过仪器维护软件中自带的“灯能量测试”功能来判断，测试的结果会分别评估低、中、高三个波长段的能量，一旦某个波长段的测试结果显示失败，就表示需要更换灯。2、检测池检测器中另一个重要部件是检测池，也叫流通池。通常大家关心的一个问题是检测池被堵掉，因为检测池通常不是很耐压，所以一旦被堵就很可能造成损坏。事实上检测池通常不太容易被堵，原因是几乎所有的颗粒杂质都会被色谱柱拦下了，所以堵塞检测器的东西基本都不是来自样品的，很可能是后来“产生”的，比如含盐流动相残留在检测池中导致盐析出。04废液液相色谱仪LC的废液大部分含有有机溶剂，会对人体产生一定的危害，对环境也会产生污染，严禁随意倾倒，应及时处理。目前，国内大部分实验室是将废液送到专门的废液处理站集中进行无害化处理。总之，对分析仪器来说，避免故障的最主要的做法是正确的操作和调节，切忌盲目操作，对核心部位如离子室、微电流放大器等减少震动和碰撞，保证绝缘，并减少各种系统误差要注意以上要点，但，还要注意日常的仪器保养，色谱柱子的维护，仪器室保持清洁，这样才能使液相色谱处于最佳工作状态，在分析中发挥其重要的作用。

板蓝根颗粒板蓝根颗粒主要成分为板蓝根，辅料为蔗糖，糊精。板蓝根又名靛青根、蓝靛根、大青根，是一种中药材。中国各地均产，分为北板蓝根和南板蓝根，北板蓝根来源为十字花科植物菘蓝和草大青的根；南板蓝根为爵床科植物马蓝的根茎及根。具有清热解毒，凉血利咽。用于肺胃热盛所致的咽喉肿痛、口咽干燥、腮部肿胀；主治急性扁桃体炎、腮腺炎见上述证候者。检测方法板蓝根中尿苷、鸟苷、（R，S）-告依春、腺苷的含量，是2020版《中国药典》中板蓝根颗粒的重要控制指标之一。本次参考中国药典2020年版，采用高效液相色谱(HPLC)检测，选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对板蓝根颗粒中有效成分的含量进行分离和检测，色谱检测条件及谱图如下：Column:           ChromCore  C18, 5 μmDimension:      4.6 × 250 mmMobile phase:  A）甲醇                           B）水Gradient:           t (min)          A                B                           0                  3                97                           3                  3                97                          20                10              90                          40                70              30                          50                70              30                          51                 3               97              Flow rate:         0.8 mL/minTemperature:   30 ℃Injection:          5 μLDetection:        UV 254 nmSamples:          板蓝根颗粒Peaks:              1. 尿苷                          2. 鸟苷                          3. (R,S)-告依春                          4. 腺苷结论选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对板蓝根颗粒中有效成分的含量进行分离和检测，各有效成分峰形良好，该方法操作简单，灵敏度高，重复性好，符合药典要求，可用于板蓝根颗粒中有效成分的分离和测定，为该药物的质量保证提供检测依据。详细产品信息，欢迎选购：产品描述货号ChromCore C18 5μm, 4.6×250mmA001-050018-04625S

极性溶剂极性溶剂是指含有羟基或羰基等极性基团的溶剂，即溶剂分子为极性分子的溶剂，由于其分子内正负电荷重心不重合而导致分子产生极性。用于表征分子极性大小的物理量为偶极矩或介电常数，介电常数大表示其极性大。化学共价键分为极性键与非极性键。非极性键就是共用电子对没有偏移，出现在单质中比如O2；极性键就是共用电子对有偏移比如HCl。而当偏移的非常厉害之后，看上去一边完全失电子另一边得到了电子，就会变成离子键了，如NaCl 。化合物的极性决定于分子中所含的官能团及分子结构。各类化合物的极性按下列次序增加：—CH3，—CH2—，—CH=，—C三，—O—R，—S—R，—NO2，—N（R）2，—OCOR，—CHO，—COR，—NH2， —OH，—COOH，—SO3H强极性溶剂甲醇〉乙醇〉异丙醇中等极性溶剂乙腈〉乙酸乙酯〉氯仿〉二氯甲烷〉乙醚〉甲苯非极性溶剂环己烷，石油醚，己烷，戊烷单一溶剂的极性大小顺序石油醚（小）→环己烷→四氯化碳→三氯乙烯→苯→甲苯→二氯甲烷→氯仿→乙醚→乙酸乙酯→乙酸甲酯→丙酮→正丙醇→甲醇→吡啶→乙酸（大）混合溶剂的极性顺序苯∶ 氯仿（1+1）→ 环己烷∶乙酸乙酯（8+2 ）→氯仿∶丙酮（95+5 ）→苯∶丙酮（9+1 ）→苯∶乙酸乙酯（ 8+2）→氯仿∶乙醚（ 9+1）→苯∶甲醇（ 95+5） →苯∶乙醚（ 6+4）→环己烷∶乙酸乙酯（ 1+1 ）→氯仿∶乙醚（ 8+2）→氯仿∶甲醇（ 99+1）→苯∶甲醇（ 9+1）→氯仿∶丙酮（ 85+15 ）→苯∶乙醚（ 4+6）→苯∶乙酸乙酯（ 1+1）→氯仿∶甲醇（ 95+5 ）→氯仿∶丙酮（ 7+3）→苯∶乙酸乙酯（ 3+7）→苯∶乙醚（ 1+9）→乙醚∶甲醇（ 99+1 ）→乙酸乙酯∶甲醇（ 99+1 ）→苯∶丙酮（ 1+1 ）→氯仿∶甲醇（ 9+1）说明一下: 苯∶甲醇（ 95+5 ）的意思是95 体积的苯混合5 体积的甲醇配成混合溶剂常用混合溶剂乙酸乙酯/ 己烷：常用浓度0~30%。但有时较难在旋转蒸发仪上完全除去溶剂。乙醚/ 戊烷体系：浓度为0~40%的比较常用。在旋转蒸发器上非常容易除去。乙醇/ 己烷或戊烷：对强极性化合物5~30%比较合适。二氯甲烷/ 己烷或戊烷：5~30%，当其他混合溶剂失败时可以考虑使用。官能团极性大小比较烷烃（ —CH3，—CH2—）＜烯烃（ —CH=CH —）＜醚类（ —O—CH3，—O—CH2—）＜硝基化合物(—NO2) ＜二甲胺（ CH3—N—CH3）＜脂类（ —COOR ）＜酮类（ —CO—）＜醛类（—CHO）＜硫醇（—SH）＜胺类（—NH2）＜酰胺（—NHCO—CH3）＜醇类（—OH）＜酚类（＜ Ar—OH）＜羧酸类（ —COOH ）常用流动相极性石油醚＜汽油＜庚烷＜ 己烷＜二硫化碳＜二甲苯＜甲苯＜氯丙烷＜苯＜溴乙烷＜溴化苯＜二氯乙烷(DCM) ＜三氯甲烷＜异丙醚＜硝基甲烷＜乙酸丁酯＜乙醚＜ 乙酸乙酯＜正戊烷＜正丁醇＜苯酚＜甲乙醇＜叔丁醇＜四氢呋喃＜二氧六环＜丙酮＜ 乙醇＜乙腈＜甲醇＜氮氮二甲基甲酰胺(DMF) ＜水实验室常用溶剂极性指数表*15℃下cP**25℃下cP缺失值表示没有检测数据本图表由Honeywell Burdick & Jackson提供 ， www.honeywell.com/contactbandj有机溶剂的极性，关系到其物理化学性质、如介电常数、偶极矩或折射率。这种表示方法把所有的溶剂看作是连续作用的介质，而不是看作由各个分子组成的非连续统一体，并且未考虑到溶剂和溶质之间的特殊的相互作用。

近日，国家药监局 国家卫生健康委发布关于2020年版《中华人民共和国药典》的公告(2020年 第78号)：根据《中华人民共和国药品管理法》，2020年版《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)经第十一届药典委员会执行委员会全体会议审议通过，现予发布，自2020年12月30日起实施。其中在四部2341农药残留量测定法中新增第五法 药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法。2020版中国药典2341农药残留量测定法第一法  有机氯类农药残留量测定法（色谱法）第二法  有机磷类农药残留量测定法（色谱法）第三法  拟除虫菊酯类农药残留量测定法（色谱法）第四法  农药多残留量测定法（质谱法）第五法  药材及饮片（植物类）中禁用农药多残留测定法             GCMSMS             LCMSMS2020版中国药典2341第五法选择合适的前处理方法和实验耗材快速样品处理法（QuEChERS）固相萃取方法（SPE）纳谱分析提供中药农残包免费试用申请试用方式：1、您可点击以下试用申请链接直接在线申请试用http://nanochrom.mikecrm.com/xexvAk2、识别以下二维码直接在线申请试用

白芷本品为伞形科植物白芷Angelica dahurica （Fisch，ex Hoffm.）Benth.et Hook.f.或杭白芷Angelica dahurica（Fisch. ex Hoffm.）Benth.et Hook.f.var.formosana（Boiss.）Shan et Yuan的干燥根。夏、秋间叶黄时采挖，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥。主治解表散寒，祛风止痛，宣通鼻窍，燥湿止带，消肿排脓。用于感冒头痛，眉棱骨痛，鼻塞流涕，鼻鼽，鼻渊，牙痛，带下，疮疡肿痛。白芷对痤疮、黑头、粉刺都有一定的疗效，在美白祛斑，改善微循环，延缓皮肤衰老方面都有独特的疗效，白芷常常被用来制成面膜用于美容。检测方法欧前胡素，别名前胡内酯,白芷乙素，分子式：C16H14O4，具有抗菌、平喘及抗过敏等作用。极性小，不溶于水，易溶于极性小的有机溶剂。本次参考中国药典2020年版，采用高效液相色谱法(HPLC)，选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对白芷中欧前胡素进行分离和检测。色谱检测条件及谱图如下：Column:            ChromCore C18, 5 μmDimension:       4.6×250 mmMobile phase :  55/45 v/v 甲醇/水Flow rate:         1.0 mL/minTemperature:    30 ℃Injection:          5 μLDetection:         UV 300 nmSample:            白芷Peaks:              1. 欧前胡素结论采用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对白芷中欧前胡素进行检测，欧前胡素主峰具有良好的峰形，周围无干扰杂质，该方法操作简单，灵敏度高，重复性好，符合药典要求，可用于白芷中欧前胡素的分离和测定，为该药物的质量保证提供检测依据。应用相关产品，欢迎选购产品描述货号ChromCore C18 5μm, 4.6×250mmA001-050018-04625S延伸阅读-白芷中药小故事传说南方一富商的掌上明珠年方二八，患痛经症，每逢行经即腹部剧痛。虽遍访当地名医，疗效甚微，痼疾缠绵，形体日衰，容颜憔悴精神萎靡。急得富翁食不甘味，夜不成寝。为了治好千金之疾，富翁携爱女日夜兼程向京都寻找名医。赶至汴梁，适逢女儿经期，腹痛顿作，呼天唤地。正巧，一采药的老翁路过闻之，经仔细询问病情后，从药篓里取出白芷一束相赠，嘱咐以沸水洗净，水煎饮用。富翁半信半疑，但眼看女儿疼痛难忍，无药可施，只好一试。不料，一煎服而痛缓，二煎服而痛止，又服数煎后，次月行经，安然无恙。富翁喜出望外，四处寻觅采药老翁以重金酬谢。从此，白芷一药，在百姓中广为流传，后有人先把白芷用沸水泡洗四五遍，晾干后研末，炼蜜为丸，丸如弹子大。即为“都梁丸”，因其在京都汴梁觅得，故取都梁丸为名。

一年一度万众期待的双十一又来临了！！！纳谱分析双十一不熬夜，不拼网速！少了各种套路，多了一份真诚只有你“想”不到的优惠没有你“享”不到的实惠废话不多说直接往下看纳谱分析为感谢新老客户对公司的支持，特举办年底促销活动，折扣优惠，更有限时买赠活动~快来咨询了解吧。活动时间：2020.11.11-2020.12.31 01 | 新客专享~买一赠一！参与产品：色谱柱/生物柱/手性柱/固相萃取柱活动期间新客户首次下单，可享受买一送一活动。（送同款/等价值款产品，仅限新客户首单使用哦~）02 | 折上买赠！优惠多多！参与产品：色谱柱/生物柱/手性柱买五赠一 ：购买5支色谱柱，赠送1支色谱柱（赠送产品为订单中单价最低款）买二赠一 ：购买2支色谱柱，赠送保护柱套装1套（保护柱套装：直连式保护柱卡套1个+柱芯1个）买一赠一 ：购买1支色谱柱，赠送实验室通用耗材一盒（样品瓶或针式过滤头1盒）活动说明：活动期间，纳谱分析提供色谱柱免费试用。您可咨询热线电话：4008083822，或可在微信公众号（微信公众号名称：纳谱分析）首页，直接在线申请试用。或可点此链接申请试用：http://nanochrom.mikecrm.com/frCfujJ本活动仅限终端客户参加，特殊折扣及经销商不参与。本活动最终解释权归纳谱分析技术（苏州）有限公司所有。四大产品系列1chromcore系列hplc色谱柱（小分子分离）2biocore系列生物分离柱（蛋白分离）3unichiral系列手性色谱柱（手性拆分）4selectcore系列spe固相萃取柱（样品前处理）

蜂蜜是蜜蜂从开花植物的花中采得的花蜜在蜂巢中经过充分酿造而成的天然甜物质。气味清香浓郁，味道纯真甜美。蜜蜂从植物的花中采取含水量约为75%的花蜜或分泌物，存入自己第二个胃中，在蜜蜂体内多种转化的作用下，再由工蜂将转化后花蜜或分泌物存贮到巢洞中，用蜂蜡密封。经过15天左右反复酝酿，将各种维生素、矿物质和氨基酸丰富到一定的数值，同时把花蜜中的多糖转变成人体可直接吸收的单糖葡萄糖、果糖。而水分含量少于23%的花蜜或分泌物就是蜂蜜。蜂蜜是糖的过饱和溶液，低温时会产生结晶，生成结晶的是葡萄糖，不产生结晶的部分主要是果糖。检测方法目前市场上存在严重的蜂蜜掺假现象，对蜂蜜产业的健康发展和消费者的权益造成严重影响。本次参考中国药典2020年版二部标准，采用高效液相色谱法(HPLC)，选用纳谱分析ChromCore NH2色谱柱对蜂蜜进行检测，色谱检测条件及谱图如下：结论采用纳谱分析ChromCore  NH2色谱柱对蜂蜜进行检测，各峰峰形良好且具有良好的分离度，该方法操作简单，灵敏度高，重复性好，符合药典要求，可用于蜂蜜的测定，为打击蜂蜜掺假行为，净化蜂蜜市场提供检测依据。

空白试验的定义GB5009.1-2003 第三章 第3.7条 空白试验：除不加试样外，采用完全相同的分析步骤、试剂和用量（滴定法中标准滴定液的用量除外），进行平行操作所得的结果。用于扣除试样中试剂本底和计算方法的检出限。空白做不好会怎样？空白试验测得的结果称为空白试验值。在进行样品分析时所得的值减去空白试验值得到的才是最终分析结果。空白试验是实验室质量控制的重要环节，其准确性对提高检测结果的准确度至关重要。空白试验值反应了测试仪器的噪声、试剂中的杂质、环境及操作过程中的沾污等因素对样品测定产生的综合影响，直接关系到测定的最终结果的准确性。空白试验值低，数据离散程度小，分析结果的精度随之提高，它表明分析方法和分析操作者的测试水平较高。当空白试验值偏高时，应全面检查试验用水、试剂、量器和容器的沾污情况、测量仪器的性能及试验环境的状态等，以便尽可能地降低空白试验值。做酸碱滴定时为什么要做空白试验？因为用作稀释液的空白溶液有一定的酸碱度，会影响滴定结果，所以要做空白试验，来扣除空白的干扰。比如空白溶液为酸性，这时候用碱滴定此溶液，得到的结果会偏高，要扣除空白溶液的酸度，得到的酸度才正确。实例分析石墨炉测铅时,空白(4硝酸+1高氯酸GR)值总是较高,与灰化法的结果不大一致（样品为植物样）。为什么？1. 所用的水为用石英亚沸水蒸馏器蒸馏得到的，先打一下空白，一般不会超过0.0015，然后采用的为硝酸（工艺超纯）和高氯酸（优极纯）消化，最后溶解用的1摩尔每升的盐酸或硝酸（结果差不多，只是盐酸稳定性要好一点），定容体积为50mL的话空白值一般为0.03左右。不过铅比较难做，基体干扰很大。2. 空白问题来自多方面，上面说的水与试剂外，你用的氩气是高纯的吗？也可用高纯氮气，但要注意分子带背景3. 可能来自由你所用的硝酸和高氯酸不纯所致。你可以先测空管，然后测你所用的水，再测含酸的水空白看看就知道了4.有可能是试液的酸度过大会影响测定，特别是使用高氯酸，影响更大，酸度大对石墨炉损害也比较大。对于石墨炉测定铅，湿法消化最好使用微波消化，使用硝酸和双氧水，这样空白中酸度比较容易控制，空白也比较低。5.  a.实际Pb含量有出入，厂家就没有测准；    b.你的仪器可能没有调制最佳。         空白色谱柱出峰，求解释？高效液相色谱，色谱柱是C18（15cm*5μm），流动相为10%乙腈和90%三氟乙酸水，走空白色谱柱时在整个保留时间的中间位置出现较大的色谱峰，走了好几针空白，每针的响应都不同，有的很高，有的又很低，但杂峰一直存在，不像是色谱柱里有杂质，用流动相冲洗后依然出现此问题，什么原因？  1、确定检测波长，如果是末端吸收，排除三氟乙酸的干扰。2、使用100%乙腈作为流动相，乙腈作为样品进样，如果为基线，则说明色谱柱及系统完好。3、然后再换流动相为10%乙腈和90%三氟乙酸水，样品为乙腈，如果有上述“中间位置出现较大的色谱峰”，那说明八成问题在三氟乙酸上，或者稀释三氟乙酸的水上。4、如果上述2、3都有“中间位置出现较大的色谱峰”，检查检测器及进样器。5、这些还不能解决，请联系工程师空白乙腈出峰，什么原因？岛津高效液相色谱仪，进空白乙腈，在样品峰位子出现倒峰，进双蒸水在样品峰出现正峰，进样品时有杂峰干扰，我已经排除了水和乙腈的问题，不知道是不是进样池或者检测器污染了，已经整了10多天，还是没效果，请指教原因和解决办法。液相中出现倒峰，主要原因是样品吸收比流动相吸收小，所以排除影响，不仅要考虑进样系统污染和检测池污染，还要考虑流动相和色谱柱的影响。换一根柱子试试，考察系统的情况，如果照旧，就排除色谱柱的影响，然后更换流动相试试，再以后清洗进样系统和检测池等等。或将色谱柱从系统中断开，直接用乙腈或水做流动相清洗检测器就可以知道是否是检测器受污染，如果基线正常，再检查你的进样系统，样品，前处理是否有问题，如果都没问题，就去检查色谱柱吧。测PEG400环氧乙烷，用纯水做空白，有环氧乙烷峰。直接放空瓶测，还有环氧乙烷峰。然后不扎针直接空走，基线正常。不扎针空走正常说明之前的环氧乙烷峰是来自源于污染，很有可能这个污染来源于自动进样器。1. 先考虑是否是环境导致的污染，一般情况下环境中不会有环氧乙烷这个物质，除非使用其作为溶剂导致环境中有污染，既而污染空白试剂水和瓶子。2. 考虑自动进样针上有环氧乙烷残留，然后稍微低温四十度烘一烘，环氧乙烷沸点低，如果真有残留可以使其挥发掉。气相色谱空白分析中存在较大干扰峰，可能的来源有哪些？1. 实验室空气。实验室往往是一个空气污染严重的场所，空气中混杂有多种有机物，可能在高灵敏分析时带来干扰。2. 水，某些水的来源中含有氯，或者存储不当。会引入干扰。3. 顶空瓶，尤其是顶空瓶垫。我们经常使用的顶空瓶垫是硅橡胶材质的，如果存放条件不良，可能会吸附目标组分。4. 顶空进样器的污染。5. 气相色谱的污染，不过来自色谱的污染，一般与色谱分流比无关。原子荧光空白偏高和哪些因素有关系？1.测定介质的选择及浓度的影响选择HNO3、HCl、HClO4、H3PO4和H2SO4等进行了实验，结果表明:以HClO4和H3PO4作介质响应值较低，汞在H2SO4溶液中能得到较大灵敏度，但空白值也高。汞在HNO3和HCl溶液中的荧光强度差别不大。在5%一25%的硝酸和5%一20%的盐酸中荧光强度基本稳定。2.酸的影响作为原子荧光的载流和标准试剂的基体，酸对原子荧光的影响十分的突出。一般在原子荧光中使用的酸主要有两种-盐酸和硝酸。我们习惯上使用盐酸。如果购买市场上质量差的酸，对空白的影响要大得多。3.还原剂的影响作为原子荧光的还原剂，一般使用最多的是硼氢化钾或硼氢化钠，在原子荧光法中，还原剂对样品以及空白值的影响主要体现在它的用量。硼氢化钾浓度不宜超过3．0%。实验表明，当硼氢化钠浓度为1%时，灵敏度和稳定性好，并且有效消除干扰。4.灯电流的影响一般来说灯电流与负高压对原子荧光的影响是同方向的。提高灯电流，空白值就相应的提高。空白值太大的话，可以适当的降低电流值，使仪器的灵敏度降低，减少标准空白的背景值，使所测的数据准确、可靠，但是如果电流过小，灵敏度也将变小，对所测样品的影响就会增加，所以选择合适的灯电流，保证一定的空白值与灵敏度才是关键。5.载气的影响实验表明，当氩气流速较低时，测定的灵敏较高．但结果的变动性加大，实际测定取氩气流速200ml／min，此时测定的灵敏度较高，相对标准偏差可以接受。水质分析中氨氮的测定空白值很高的原因？实验中纳氏试剂和酒石酸钾钠对空白值的高低影响很大，可能原因如下：1.测定使用的蒸馏水被污染，含有影响实验结果的杂质，比如蒸馏水含氨。2.试管、移液管等仪器没有清洗彻底，这些因素对实验结果也有较大的影响。3.实验所用的无氨水质量不佳，含氨量比较高，导致实验得到的空白值偏高，这是最主要的原因。4.在配制酒石酸钾钠和钠氏试剂时出现较大偏差，导致实验所用的试剂纯度（酒石酸钾钠、钠氏试剂）不佳，从而导致实验得到的空白值偏高。总氮空白值偏高，什么原因？1、试剂的配制碱性过硫酸钾的配制过程十分重要，掌握不好，会影响消解效果，对测定结果产生一定的影响。配制该溶液时，可分别称取过硫酸钾和氢氧化钠，两者分开配制，再混合定容，或者先配制氢氧化钠溶液，待其温度降到室温后再加入过硫酸钾溶解。若二者在一只烧杯中溶于水，应缓慢加水，同时搅拌，防止氢氧化钠放热使溶液温度过高引起局部过硫酸钾失效。2、玻璃器皿的洗涤所使用的玻璃器皿应先用（1+9）盐酸浸泡后，再用无氨水冲洗数次才能使用，否则，也会造成空白值偏高或平行性较差的情况。3、比色时的注意事项该项目的测定涉及两个波长（220nm和275nm），建议在测定完一组样品的同一波长后，再调整到另一波长，统一测定，不要测完一个样品的两个吸光度后再换另一个样品，这样反复调整波长会引起一定的测量误差。4、试剂的选择碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法测定总氮的过程中，过硫酸钾是至关重要的试剂。首先，试剂的纯度关系到空白值的高低、测定结果的准确度。一般普通分析纯过硫酸钾的总氮含量最高不超过0.005%，但由于试剂质量存在差异，有些厂家、批次的试剂含氮量常常达不到这个要求，致使空白值偏高。因此，有条件的话建议使用优级纯试剂，尽量降低试剂中的含氮量，从而降低实验空白值。5、实验用水及试剂的质量检验若实验的空白值不够理想，则需要对实验用水及试剂进行检验，以选择出含氮量最低的水和试剂，获得理想的空白值。粗蛋白测定空白偏高的影响因素？可以从以下方面考虑：1.配溶液的水换没换；2.看看消化炉的回收率；3.看看蒸馏仪的回收率；4.盐酸在不在保质期内；5.配溶液的硫酸是不是有问题；6.检查催化剂，是不是含有硝酸钾。小结空白试验是实验室质量控制的重要环节，其准确性对提高检测结果的准确度至关重要。以分光光度法空白为例 ，要用相应的实验用纯水或有机溶剂作参比，不能用空白实验溶液做参比，以免人为减小空白值，从而掩盖空白实验值的变异 。值得注意的是，通过计量认证的实验室，由于检测仪器和玻璃量器定期检定 ，以及采取了全面的质量管理措施，因此，若测定的空白实验值太大，一般是化学药品纯度不够，配制的试液变质或被污染等原因 。应重新配制试液 ，返工重测该批样品 ，直至空白实验值合格。

背景人参皂苷作为人参药材中的重要活性成分，高效快速的提取和测定方法必不可少。中国药典（2015版、2020版）中的液相色谱测定方法所需时间均为100 min，加之药典方法对人参样品进行提取的过程中需要放置过夜，才能进行液相色谱分析，这极大地影响了检测效率。本文建立了人参药材中人参皂苷测定的快速液相方法，采用色谱柱ChromCore 300 C18（3 μm，3.0×100 mm），分析时间仅需20 min即可，加快了人参皂苷分析速度，并且该方法色谱图峰型好、分离度高；在对人参样品进行处理时采用固相萃取方法，处理时间不到2 h，可进一步加快实验进程。适用范围本方法适用于人参药材中人参皂苷的提取和含量的快速测定。实验步骤1、药典提取方法对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1对照品，加甲醇制成每l mL各含0.2 mg的混合溶液，摇匀，即得。供试品溶液的制备：供试品称取样品1 g，精密称定，置索氏抽提器中，加三氯甲烷加热回流3 h，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入100 mL锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇50 mL，密塞，放置过夜，超声处理（功率250 W，频率50 kHz）30 min，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25 mL，置于蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2、药典液相方法色谱仪器条件Column：        ChromCore 300 C18，5 μmDimension：    4.6×250 mmMobile Phase：A）水                         B）乙腈Gradient：         t(min)     A      B                          0            81     19                          35          81     19                          55          71     29                          70          71     29                          100        60     40Flow rate：        1.3 mL/minTemperature：   30 °CInjection：         10 μLDetection：        UV 203 nm3、固相萃取方法（1）前处理步骤：称取样品1 g于50 mL离心管中，加入50 mL甲醇，超声提取20 min，过滤，精密量取续滤液25 mL置于蒸发皿中水浴蒸干，残渣加10 mL水溶解混匀备用。（2）净化步骤：活化：SelectCore HR-C18 500mg/6mL固相萃取柱，依次使用5.0 mL甲醇、5.0 mL水活化；上样：将提取步骤中制备好的溶液全部转移至固相萃取柱上，弃去流出液；淋洗：依次使用10.0 mL水、10.0 mL的40%甲醇淋洗，弃去淋洗液；洗脱：用4 mL 80%甲醇溶液洗脱，收集全部洗脱液，并用80%甲醇定容至5.0 mL，混匀；洗脱液过0.45 μm微孔有机滤膜过滤，取续滤液作为固相萃取方法供试品使用高效液相色谱仪进行测定。4、快速液相方法色谱仪器条件Column：        ChromCore 300 C18，3 μmDimension：    3.0×100 mmMobile Phase：A）水                         B）乙腈Gradient：       t(min)  A        B                         0        81      19                         7        81      19                         20      60      40Flow rate：      0.8 mL/minTemperature：30 °CInjection：       2 μLDetection：      UV 203 nm5、实验谱图图1：药典液相方法与快速液相方法对照品、供试品对比色谱图图2：药典液相方法与快速液相方法对照品、固相萃取供试品对比色谱图6、加标回收率数据人参药材固相萃取处理结合快速液相分析的加标回收率化合物Rg1ReRb1加标回收率（1：1添加）94.89%91.52%95.35%实 验 结 论按照药典提取方法对人参药材样品进行处理后，采用药典液相方法在进行液相色谱分析时，结合药典液相方法和实验谱图1可以看出，流动相流速在较快的情况下（流速：1.3 mL/min），分析所需时长为100 min；而采用快速液相方法色谱方法，色谱柱选择ChromCore 300 C18（3 μm，3.0×100 mm），流动相流速为0.8 mL/min时，所需时间仅为20 min，3种人参皂苷和其他皂苷成分就已全部出峰，色谱分析时间缩短了4/5、流动相体积减少了7/8，柱压大约为26 Mpa，可满足常规液相色谱仪器耐压要求。经过我们改进的固相萃取方法对人参药材样品进行前处理后，固相萃取处理时间不超过2 h，有机溶剂也由毒性较大的三氯甲烷和正丁醇改为甲醇。由实验谱图2可以看出，经固相萃取处理后的人参药材样品结合快速液相方法进行分析时也可以保证目标物的分离度和峰型，并且3种人参皂苷的加标回收率均大于90%，符合检测要求。2020中国药典方法固相萃取结合快速液相方法三氯甲烷回流脱脂3小时甲醇50 mL超声提取20 min水饱和正丁醇提取50 mL放置过夜前处理时间9小时前处理时间2小时分析时间100 min分析时间20 min流动相体积130 mL流动相体积16 mL详细产品信息，欢迎选购：产品描述货号SelectCore HR-C18 500mg/6mL; 30/pkgC18HR-060500-1ChromCore 300 C18 3μm, 3.0×100mm（快速方法）A001-030030-03010SChromCore 300 C18 5μm, 4.6×250mm（国标方法）A001-050030-04625S

独活，中药名。古时认为独活一茎直上，不为风摇，故名独活。为伞形科植物重齿毛当归Angelica pubescens Maxim.f. biserrata Shan et Yuan的干燥根。春初苗刚发芽或秋末茎叶枯萎时采挖，除去须根和泥沙，烘至半干，堆置2～3天，发软后再烘至全干。《神农本草经》经文：独活，味苦，平。主风寒所击；金疮止痛；贲豚；农痫痓；女子疝瘕。久服轻身耐老。一名羌活，一名本羌青，一名护羌使者。生川谷。古书《文系》记：唐代刘师贞的哥哥得了风湿病，梦有一神告之日，用胡王使者浸酒服，能治愈。师贞到处打听询问，无人知胡王使者。后又梦亡母说胡王使者就是羌活，于是用之，果然病愈。 中药故事检测方法蛇床子素，有解痉、降血压、抗心律失常、增强免疫功能及广谱抗菌作用，燥湿，祛风，杀虫。是2020版《中国药典》中独活含量的控制指标之一。本次参考中国药典2020年版，采用高效液相色谱(HPLC)，选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对独活中的蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯的含量进行分离和检测。色谱检测条件及谱图如下：结论采用纳谱分析ChromCore C18色谱柱，蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯具有良好峰形和分离度，塔板数也达到要求，结果准确可靠，符合药典要求，可用于独活中的蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯的分离和测定，为该药物的质量保证提供检测依据。应用相关产品，欢迎选购产品描述货号ChromCore C18 5μm, 4.6×250mmA001-050018-04625S

LC的保养小技巧LC组成部分：流动相溶剂瓶→高压泵→进样器→色谱柱→检测器→废液，我们按照此顺序来一一说明如何做保养？一、流动相溶剂瓶的保养溶剂瓶是流动相的起点，通常是盛放水相溶液或是有机相溶液。1、水相溶液，对于水相溶液来说，首要的问题是防止污染。对于溶剂瓶我们要做的非常重要的工作就是勤换流动相，常换常新。2、有机相溶液，对于有机相溶液，可以不用担心细菌繁殖的问题。但是有机相容易发生聚合，特别是乙腈在适宜的光照条件下极易发生聚合，瓶子里就会出现一些絮状的聚合沉淀物。为了防止聚合过程的发生，装乙腈时要用棕色的溶剂瓶，避免阳光直射，更换乙腈时应当弃去瓶底剩余的溶液。3、清洗过滤，溶剂瓶里的过滤头，其作用是为了防止溶液瓶中的颗粒杂质进入到仪器的流路系统中，它的材质通常分为玻璃烧结石英和不锈钢，如果不慎堵塞会造成流动相吸液不畅，因此必须进行清洗，玻璃材质的通常是用稀硝酸泡，而不锈钢材质的可以直接进行超声清洗。二、高压泵的保养泵是液相色谱的核心，泵将流动相从溶剂瓶输送到液相流路系统中，并要在高压下保持流量和压力的稳定。状态正常的高压泵是液相色谱准确分析的基础，所以平日一定要重视对泵的维护。1、泵压力波动，很多情况下，泵的问题反映在压力上，压力波动又是常见的一类问题。通常我们可以通过重新清洗流路和再次脱气流动相加以解决。2、过滤白头保养，在泵的维护里还有一项常做的工作就是更换清洗阀上的过滤白头，通常判断的标准是纯水以5mL/min流速清洗的时候，如果压力超过1MPa则考虑更换。三、进样器的保养进样器分手动和自动两大类，虽然两者工作模式不同，但使用的要点是基本一致的。1、防止交叉污染，自动进样器常见的问题是交叉污染，交叉污染产生的原因很直接，样品残留在进样针内外表面，并随下一次进样进入色谱系统。要解决交叉污染，主要靠清洗。2、精细操作，手动进样器的操作要点大致相同，应使用液相色谱LC专用进样针，进样时插针应插到底，不使用时将针头留在进样器内，使用前后都要及时清洗。四、色谱柱的保养色谱柱是化合物分离的关键。保养良好的色谱柱具有很高的塔板数，且仪器基线平稳。1、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓（如前所述）。2、应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。3、色谱柱反冲，纳谱分析小分子分离液相色谱柱ChromCore系列和EcoPak系列色谱柱可以反冲；纳谱分析手性色谱柱UniChiral系列色谱柱可以反冲，反冲可以除去留在柱头的杂质。但是纳谱分析生物大分子液相色谱柱BioCore系列色谱柱不要反冲，否则反冲会迅速降低柱效。4、选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。5、避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。6、经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50~75ml。下面列举一些色谱柱的清洗溶剂及顺序，作为参考：硅胶柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇依次冲洗，然后再以相反顺序依次冲洗，所有溶剂都必须严格脱水。甲醇能洗去残留的强极性杂质，已烷使硅胶表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次冲洗，再以相反顺序依次冲洗。如果下一步分析用的流动相不含缓冲液，那么可以省略最后用水冲洗这一步。一氯甲烷能洗去残留的非极性杂质，在甲醇（乙腈）冲洗时重复注射100~200μl四氢呋喃数次有助于除去强疏水性杂质。四氢呋喃与乙腈或甲醇的混合溶液能除去类脂。有时也注射二甲亚砜数次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脱能除去蛋白质污染。阳离子交换柱可用稀酸缓冲液冲洗，阴离子交换柱可用稀碱缓冲液冲洗，除去交换性能强的盐，然后用水、甲醇、二氯甲烷（除去吸附在固定相表面的有机物）、甲醇、水依次冲洗。7、保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。禁止将缓冲溶液留在柱内静置过晚上或更长时间。8、色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗；另一种可能是大分子进入柱内，使柱头被污染；如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。在后两种情况发生时，小心拧开柱接头，用洁净小钢将柱头填料取出1~2mm高度（注意把被污染填料取净）再把柱内填料整平。然后用适当溶剂湿润的固定相（与柱内相同）填满色谱柱，压平，再拧紧柱接头。这样处理后柱效能得到改善，但是很难恢复到新柱的水平。柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前装一根与分析柱相同固定相的短柱（5~30mm），可以起到保护、延长柱寿命的作用。采用保护柱会损失一定的柱效，这是值得的。通常以硅胶为基质的色谱柱，只能在pH2~9范围内使用。柱子使用一段时间后，可能有一些吸附作用强的物质保留于柱顶，特别是一些有色物质更易看清被吸着在柱顶的填料上。新的色谱柱在使用一段时间后柱顶填料可能塌陷，使柱效下降，这时也可补加填料使柱效恢复。每次工作完后，用洗脱能力强的洗脱液冲洗，例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。当采用盐缓冲溶液作流动相时，使用完后应用无盐流动相冲洗。含卤族元素（氟、氯、溴）的化合物可能会腐蚀不锈钢管道，不宜长期与之接触。装在HPLC仪上柱子如不经常使用，应每隔4~5天开机冲洗15分钟。五、检测器的保养1、光源部分检测器中非常重要的部件是光源，光源对发射能量有要求，一旦能量衰减到一定程度，就会出现基线噪声变大，灵敏度降低等一系列影响使用的问题，因此光源是一个消耗品。通常紫外灯的寿命是2000h，当到达这个时限的时候，我们就要特别关注灯的能量状况，可以通过仪器维护软件中自带的“灯能量测试”功能来判断，测试的结果会分别评估低、中、高三个波长段的能量，一旦某个波长段的测试结果显示失败，就表示需要更换灯。2、检测池检测器中另一个重要部件是检测池，也叫流通池。通常大家关心的一个问题是检测池被堵掉，因为检测池通常不是很耐压，所以一旦被堵就很可能造成损坏。事实上检测池通常不太容易被堵，原因是几乎所有的颗粒杂质都会被色谱柱拦下了，所以堵塞检测器的东西基本都不是来自样品的，很可能是后来“产生”的，比如含盐流动相残留在检测池中导致盐析出。六、废液的处置液相色谱仪LC的废液大部分含有有机溶剂，会对人体产生一定的危害，对环境也会产生污染，严禁随意倾倒，应及时处理。目前，国内大部分实验室是将废液送到专门的废液处理站集中进行无害化处理。

液相色谱在制药、食品安全和环境检测等领域具有至关重要的作用。而液相色谱的核心元素“色谱柱”技术则是一门基于材料科学、化学合成以及色谱分离的综合学科。目前全球液相色谱柱每年约有300-400万根的需求量，约100亿人民币，而中国约占其中的10%（2018年中国色谱柱销售量约为32万根，销售额10亿元人民币）。目前中国色谱柱市场主要被国外厂家垄断，国产色谱柱的市场占有率仅为20%左右；其中90%以上国产色谱柱所需的色谱填料或生产色谱填料的微球原料也依赖于进口，尤其是生物制药研发和生产质检不可或缺的生物色谱柱完全依赖进口。因此，液相色谱柱的国产化，特别是国际水平的国产化势在必行，这将对中国色谱行业的发展以及生物制药行业的发展具有积极的促进作用。成立于2018年的纳谱分析技术（苏州）有限公司（以下简称“纳谱“），两年多来见证了诸如中美贸易战、新冠疫情等风波。如今，这家专注于液相色谱耗材产品的公司状况如何？中美贸易战对其影响到底有多大？未来纳谱将如何发展？带着这些问题，仪器信息网编辑采访了纳谱董事长刘晓东博士、总经理姚立新先生，请他们为我们讲讲纳谱的故事。纳谱分析技术（苏州）有限公司董事长  刘晓东纳谱分析技术（苏州）有限公司总经理  姚立新“纳谱”的由来谈到纳谱，首先要讲讲苏州纳微科技股份有限公司（以下简称“纳微“）。众所周知，液相色谱柱的品质取决于微球原料、填料设计、表面键合以及装柱等方面，其中微球原料是决定色谱柱性能的关键因素之一。纳微经过十几年的努力，研发出单分散（均粒）硅胶和聚合物微球并实现产业化。与传统方法制成的多分散微球相比，单分散微球不仅对微球粒径和孔道结构有着精准控制，而且具有更高的机械强度和更好的化学稳定性。而在此微球基础上研发和生产的色谱填料和色谱柱与传统产品相比具有显著优势。从纳微到纳谱，不仅是产品上下游的承接和创新，承载更是国产色谱柱走向世界的美好愿景。也因此，纳谱吸引并聚集了行业内专业人才。故事中的两位主人公也是怀揣着这样的愿望来到纳谱的。刘晓东博士是在十多年前的美国PITTCON展会上第一次听说纳微。那个时候，纳微的微球材料就给他留下了深刻印象。后因业务合作关系有幸与纳微创始人江必旺博士结识，并对色谱技术、色谱行业发展，以及中国色谱行业所面临的挑战和机遇进行了多次深入的探讨。最后，两人决定在苏州工业园区合作创立一家世界水平的色谱柱公司。彼时，刘晓东已是一家世界500强科学仪器公司的全球研发总监，也是资深色谱柱技术专家，收入丰厚、工作环境优越、并深受同事同行们的敬重。不过，为提高中国色谱技术和产业化水平尽一份微薄之力，经过深思熟虑，他谢绝了公司各方的竭力挽留，放弃了美国的优越条件，毅然回国创业。另一边，姚立新也在经历着他并不平凡的事业之路。2003年，毕业于北京大学化学系的姚立新离开了工作十几年的国企，投身到色谱分离材料及耗材的事业中开始创业。经过十几年的苦心经营，姚立新已对色谱耗材市场非常熟悉，公司在国产色谱耗材领域也逐渐崭露头角。2018年，正值公司处于高速发展之时，作为联合创始人及副总经理的姚立新却又做出了惊人的举动，他辞去公司职务，转而开始了又一次的创业之路——加盟纳谱分析技术（苏州）有限公司（以下简称“纳谱”）。至此，纳谱将行业内顶级技术专家和市场营销专家纳入麾下！公司之所以取名“纳谱”，其实是有两层含义。姚立新介绍，“纳”来自纳微，其原因：一是纳谱是纳微的控股子公司，二是生产纳谱色谱填料的微球原料是由纳微研发并产业化的单分散微球材料。“谱“则是色谱的意思。在姚立新看来，纳谱未来不仅仅是一家具有国际先进水平的液相色谱柱公司，还将成为从技术到产品的引领者。 创新：“95%”和“5%”的艺术经营好一家公司，好的产品是基础。“研发出的产品要对客户有用，那么首先就要知道客户的痛点，客户解决不了的问题是什么，否则目标设错了很多事情都是无用功。”刘晓东介绍，产品能够有针对性的设计出来，除了客户需求的外因，研发者还要有深厚的创新能力和核心技术的积累。此外，还要将客户的预期价格和实际成本相结合，再经过相关应用考察以及一次又一次的重复性验证，最终才能研发出合适的好产品。“工欲善其事必先利其器，有些事是急不得的，多花时间在研发过程中，就会避免很多售后麻烦。”刘晓东认为，对于客户而言，目前95%的色谱分离问题都可以用已有的产品解决，而剩余的5%则还没有好的解决方法。对于95%的那部分，色谱柱厂家需要做的是如何在解决问题的前提下降本增效，生产出同等质量下性价比更高的产品。在这方面，纳谱已经做到，“我们的产品对标同类进口产品，性能已经极具竞争力，但价格更有优势。” 针对客户剩余的5%还没有解决方案的问题，如某些生物大分子色谱分离中的挑战，纳谱通过与如恒瑞和复宏汉霖等生物制药业标杆企业的合作，深入了解用户的痛点，并用相关样品和应用进行研发，最终实现高质量、有针对性定制化的色谱柱产品，满足用户的需求。每一家企业都会遇到“瓶颈”，而达到“瓶颈”时企业的高度在很大程度上取决于企业的创新能力。因此，具有持续的创新能力是一个企业不断发展的原动力。刘晓东说，要实现国际水平的高端国产化必须要坚持研发投入、脚踏实地地技术积累，而简单、初级地进行模仿则永远不能达到目标。在一些人眼中，中国企业缺乏自主创新能力，不尊重知识产权。要改变这一认知，就必须用事实来证明中国色谱分离核心技术已达到国际先进水平，在产品性能上可与任何一个国际知名品牌媲美。而做到这些的先决条件就是创新、创新、再创新！据了解，目前液相色谱耗材柱市场上的产品主要有小分子分离色谱柱、生物大分子分离色谱柱、手性色谱柱及样品前处理小柱四大类产品线。在不到两年的时间内，纳谱已经建立完善以ChromCore（色谱芯）为代表的小分子分离色谱柱和以SelectCore（选择芯）为代表的样品前处理产品系列SPE柱和QuEChERS产品的生产线，且产品品类较全。目前，纳谱不断加大生物大分子色谱柱的研发力度，已开发针对单克隆抗体及其相关物质的BioCore（生物芯）产品系列，包括体积排阻系列（SEC）、离子交换（IEX）系列和疏水保留系列（HIC）、反相（RP）和Protein A亲和色谱柱。这些产品已在用户端全部经过验证并实现商品化。此外，手性分离领域也在慢慢布局，已推出以UniChiral为代表的涂覆型手性色谱柱。今年，纳谱也将陆续推出一系列色谱柱新品。产业化：“产品“和”样品“的区别在刘晓东看来，中国色谱柱产业化的一个短板是色谱技术水平。虽然近年来中国发表的学术论文数在世界上名列前列，但大多集中在色谱分离应用领域，而色谱柱的核心技术，例如色谱基球材料或新型分离介质方面的研究则较薄弱，能够产业化的色谱柱技术更是凤毛麟角，研发成果与市场需求脱节的现象十分显著。与此同时，以商务销售为主导的运营模式使色谱柱生产厂家在新产品研发和技术人员培养方面投入匮乏，导致企业发展动力不足，陷入缺乏核心竞争力的尴尬局面。色谱柱的生产是一个技术要求高而复杂的化学和物理过程，涉及到原料的选用、化学键合工艺、装柱方法和质量检验，任何一个环节的偏差都会影响产品的质量。刘晓东介绍，国外知名的色谱柱生产厂家十分重视质量管理体系，不止在生产端，在研发新产品的过程中也非常注重产品的质量设计和生产中的可操作性，以最大限度地保证产品达到设计质量和批次间一致性的要求。因此，一款新产品从研发到目标样品到中试再到量产是一个近乎严苛的、反复优化和验证的过程。而国内的许多色谱柱生产厂家经常把研发样品当作产品，把用户当作“小白鼠”，导致由于产品质量不稳定浪费用户的宝贵时间，影响国产品牌的信誉。据介绍，在这方面，纳谱不但建立了产业化的核心技术平台，还实施国际先进的质量管理体系，力求研发并推出质量高、一致性佳的“产品“。知势而为  打造“全国产化” 色谱柱虽然，当前国内大部分用户普遍更认可进口品牌的色谱柱产品。但姚立新对纳谱的发展信心仍是很足。他认为，一方面，与其他国内的色谱柱厂商相比，纳谱受益于母公司纳微科技的雄厚技术基础，是唯一能真正做到从原料（基球）到技术（键合工艺、装柱）到成品全部自主研发生产实现真正意义上的“全国产化”的色谱柱生产公司。也由于有这个色谱材料创新研发技术平台可以依托，纳谱短期内做到了产品线的丰富，推出了市场上已有的大部分色谱柱品种，也确保今后能快速响应市场和特定客户的需要及时推出新产品和定制产品。这样纳谱的发展就不会受到国外原材料和技术封锁等的限制，有机会顶破天花板最终达到一个很高的发展高度。另外一方面，国内生产和本土化服务相对于进口品牌的优势也是姚立新对纳谱首先能在国内市场取得突破的信心来源。据了解，纳谱给色谱柱用户提供的支持服务力度是非常大的，纳谱产品市场定价不但低于进口品牌，性价比高，而且货期更短，响应更快，服务更周全。比如非常规色谱柱品类，进口品牌从国外调货，货期可长达2个月，而纳谱绝大部分可以做到几天或一周内到货。有很多分析任务较急的客户，即便原先对国产色谱柱成见比较深的，也会因此开始尝试使用纳谱的色谱柱，并在体验了纳谱产品和服务后，有很大机会转变成纳谱的忠实用户。姚立新介绍，为了更好地服务客户，纳谱公司的职能部门从用户角度考虑，推出了一系列方便色谱用户的举措，如免费试用，免费做样和色谱方法开发， 7天无理由退换货等。此外，为了成为客户最可信赖的色谱分离合作伙伴，纳谱近期还陆续聘请了一些全国不同色谱应用领域的大咖作为纳谱技术顾问，纳谱的专家顾问团人数规模今后几年将发展到能覆盖到色谱技术的几乎所有下游应用领域。此外，姚立新也介绍，主打产品全国产化，也与近两年的中美贸易战有一定的关系。随着贸易战持续，如果有一天供应链受到影响，可能会导致进口色谱柱不能及时供应，就会影响色谱分析涉及的制药、食品和环保等关系国计民生的重要行业。而全部国产化的色谱柱则完全没有这方面的顾虑，即便局势发展到国际关系紧张甚至脱钩的严重程度，也可以保障国内各行业色谱分析的正常运转。事实上，中美贸易战对于国产色谱柱厂商来说是一个机遇。姚立新告诉笔者，中美贸易战后，色谱柱和色谱填料行业的关税比之前提升了，或许以后还会更高。随着关税的提高，一些用户也开始考虑国产替代进口。不过，虽然现在国内色谱柱品质与进口品牌相差无几，但受到使用习惯的影响，在国内市场达到很高的国产品牌替换程度还需要时间。“色谱柱及色谱填料的国产化是中国好几代色谱人的追求和梦想，纳谱目前最重要的是把产品的质量和客户服务做好，有了好产品和一流技术支持和周全服务，才会慢慢转变人们对国产产品质量、品牌的偏见”。后记色谱柱及填料技术的自主、可控不但是几代色谱人的梦想，在中美贸易战持续的现状下其重要性也愈加凸显。用国产的填料做出国产色谱柱，并且成为国际知名的色谱柱公司，这不但是纳谱人努力实现的目标，也是我们国产色谱柱厂商的愿望。据了解，纳谱产品自2018年底开始进入市场，目前进展非常快速，才短短一年多，纳谱的市场营销和技术服务网络已经遍及全国大部分省市，而产品已为近千家色谱用户提供服务，其中不乏诸多下游行业巨头和有影响力的用户。尽管疫情肆虐，纳谱预期今年仍能完成疫情前定的色谱柱销售任务，朝着三年内成为国内市场液相色谱柱销量第一的阶段目标迈出了坚实的一步。此外，纳谱还开拓了海外市场，目前产品已经出口印度等国家或地区。或许不久的将来，在中国乃至全世界实验室里的色谱柱中，我们将看到更多中国制造！ 关于纳谱分析技术（苏州）有限公司纳谱分析技术（苏州）有限公司专注于实验室用液相色谱柱研发、生产和推广的技术创新型企业，旨在打造一个世界领先、自主创新的色谱柱公司，实现国际水平的产业化。目前已研发出涵盖小分子、生物大分子和手性分离以及样品前处理四大产品系列，超过1000多种品规的色谱柱及样品前处理柱产品推入市场。应用于（生物）制药、食品安全、环境监测、科研等领域的色谱分析检测，并实现从基球原料、表面化学修饰、装柱生产以及应用技术支持等全过程国产化。 人物介绍刘晓东，纳谱分析技术（苏州）有限公司创始人/首席科学家/董事长。美国爱荷华州立大学化学博士。曾任世界500强科学仪器公司色谱耗材全球研发总监，具有丰富的研发管理、研发创新和战略规划经验，以及广阔的国际视野；资深色谱分离技术专家，擅长色谱填料化学设计、表面改性、装填和应用开发；拥有30余项发明专利（16项美国专利授权），撰写50余篇技术论文和3篇专业书籍章节，并在国际大型色谱会议上作邀请报告50余次。2018年回国创立纳谱分析技术（苏州）有限公司，致力于液相色谱柱的创新以及国际水平的产业化。姚立新，纳谱分析技术（苏州）有限公司总经理。毕业于北京大学化学系。曾任国内知名色谱耗材公司的联合创始人及副总经理，成功开发多系列色谱耗材产品并实现其规模化生产和销售；拥有7项已授权的中国国家发明专利，发表论文20余篇；熟知国内色谱耗材市场行情和发展趋势，在该领域有十多年的市场营销管理经验。 

文章来源：引自纳谱分析第一届征文活动获奖作品 作者：西南药业股份有限公司 李老师背景β-内酰胺类抗生素作为临床中最重要的一类抗菌药物，聚合物类杂质是引发β-内酰胺类抗生素过敏反应的重要过敏性杂质，我司产品目前对β-内酰胺类抗生素聚合物检测均采用中国药典Sephadex G-10的方法，该法分离机理为：由于 Sephadex G-10 的排阻分子量仅为 700d，因此，除部分寡聚物外，内酰胺类抗生素中的高分子杂质在色谱过程中均不保留，即所有的高分子杂质表现为单一的色谱峰。在特定条件下，内酰胺类抗生素由于分子间的氢键、静电相互作用，可以形成缔合物，导致其表观分子量增大，此时在 Sephadex G-10 凝胶色谱系统中和高分子杂质具有相似的色谱行为。利用此原理，在 Sephadex G-10 凝胶色谱系统中，以药物自身为对照品，测定其在特定条件下缔合时的峰响应; 再改变色谱条件，测定样品中高分子杂质和药物分离后的峰响应; 按外标法计算，即得药品中的高分子杂质相当于药品本身的相对含量。我司在多批样品的测定实践中，遇到了很多问题，比较头疼的是系统适用性经常达不到要求，导致偏差产生，而经根本原因分析为方法本身问题，因此，选用专属性更好，灵敏度更高的方法具有非常大的现实意义。SEC方法体积排阻色谱(SEC)是用来测定大分子和聚合物类分子量分布的重要方法。它是一种不通过分析物与固定相之间吸附作用或分配作用的色谱方法。其原理是根据填料孔隙而分离样品分子，样品大分子不能进入或只能进入部分孔隙，而较小分子则能进入大多数或全部孔隙。在SEC中，大分子先从柱中洗脱，较小分子后洗脱，而能够进入所有孔隙的最小分子最后从柱中洗脱出来。 纳谱分析BioCore  SEC是纳谱分析推出的全新高性能体积排阻色谱柱系列。该产品采用自主创新技术开发的高性能体积排阻分离介质，以孔道结构经过特殊设计的单分散多孔硅胶为基质，在硅胶表面键合中性亲水层以将分析物与固定相之间的相互作用降到最低，广泛地应用于生物制药、医疗、科研等领域。 本次选用纳谱分析BioCore SEC-150色谱柱对青霉素V钾聚合物的含量进行分离和检测。色谱检测条件及谱图如下：Column:          BioCore SEC-150 5μmDimension:      7.8×300mmMobile phase: 150 mM 磷酸盐缓冲液（pH6.8）/乙腈 =95/5Flow rate:       0.6 mL/minTemperature:   25 ℃Injection:        10 μLDetection:       268 nmSample:          青霉素V钾，流动相配制，浓度为5 mg /mLPeaks:因无聚合物对照品，根据分子筛分离原理，主峰前色谱峰均认定为不同聚合度的聚合物。结论此次首次采用纳谱分析开发的SEC色谱柱，流动相在色谱柱说明书推荐流动相基础上，加入5%乙腈，即得到较好的分离效果，理论板数由G-10柱的几百提高到现在的两万多，主峰与相邻峰分离度达到1.7，达到基线分离，各聚合物峰峰形较好，且彼此分开，与传统G-10相比，具有无可比拟的优越专属性。应用相关产品信息，欢迎选购：产品描述货号BioCore SEC-150 5μm, 7.8×300mmB213-050015-07830S 

导读长期以来，各个领域的检测人员针对检出限概念、估算方法及在各个不同领域的应用都进行了大量的探讨。在实际应用中，仪器检出限、方法检出限及样品检出限及测定下限的概念经常混乱，本文主要讨论如何区分仪器检出限、方法检出限、样品检出限及测定下限。  一概述检出限是分析测试的重要指标，对于仪器性能的评价和方法的建立都是重要的基本参数之一。在日常检测过程中，检出限为具体量度指标，特别是在痕量分析中，痕量分析误差与样品含量相对于检出限的倍数相关联。检出限的确定对于分析方法的选择具有重要意义。对检出限的忽视有可能导致检测结果的不确定度增大。长期以来，各个领域的检测人员针对检出限概念、估算方法及在各个不同领域的应用都进行了大量的探讨。像分析仪器在测定过程中存在与噪音相区别的小信号检出问题，同时也存在着分析方法能可靠测定物质最低含量的界限问题，这两个概念有着本质的不同。在实际应用中，仪器检出限、方法检出限及样品检出限及测定下限的概念经常混乱。在检验检疫行业中，进出口产品的种类繁多，涉及的领域也是多种多样，对检测人员的要求高，为保障进出口产品质量把关服务的有效进行，合理的使用仪器分析，科学有效的评估仪器分析，都要求在仪器的检出限等各项指标上有个清晰完整的认识。为理清在检出限概念和层次上的认识，本文将对检出限的概念、分类和影响因素进行详尽的探讨。 二检出限的概念1947年，德国人Hkaiser首次提出了有关分析方法检出限的概念，并提出检出限和分析方法的精密度、准确度一样，也是评价一个分析方法测试性能的重要指标。国际纯粹与应用化学联合会( IU-PAC) 于1975年正式推行使用检出限的概念及相应估算方法，于1998年又发表了《分析术语纲要》对检出限检出，检出限的定义为：某特定方法在给定的置信度内可从样品中检出待测物质的最小浓度或量，公式表示为： 欧盟《执行关于分析方法运行和结果解释的欧盟委员会指令》(2002/657/EC)的最新检测限的概念CCα 和CCβ检测限( >>α) 是指大于等于此浓度限，将以α误差概率得出阳性结论。检测能力(CCβ) 是指样品中物质以β误差概率能被检测、鉴别和/或定量的最小含量。对于未建立容许限的物质，检测能力是以1-β可信度能被检测出来的最低浓度。如果容许限已经建立，检测能力就是以1-β可信度能被检测到的容许限浓度。三检出限的不同分类1、美国国家标准局的分类 　　(1)仪器检出限: 即相对于背景，仪器检测的可靠最小信号。通常用信噪比(S/N) 表示，当 (S/N)≥3时，定义为仪器检出限。　　(2)方法检出限: 即某方法可检测的最小浓度。通常用外推法可以求得。即在低浓度范围内选三个浓度(C1、C2、C3) ，对每一浓度水平分别重复测定，求出各浓度水平的标准偏差 S1、S2、S3，用线性回归法做出拟合曲线，延长该线与纵坐标相交于S0(浓度为零时空白样品的标准偏差)。3S0则定义为方法检出限。　　(3)样品检出限: 指相对于空白可检测的样品的最小含量。它定义为三倍空白标准偏差，即3σ空白( 或3S空白)。2、国内检出限分类   　国内有研究人员刘菁和冉敬等也把检出限分类为仪器检出限、方法检出限和样品检出限。田强兵将检出限分为了仪器检出限、方法检出限和仪器的测定下限和方法的测定下限。四检出限的介绍及影响因素1、仪器的检出限   　仪器检出限是指在规定的仪器条件下，当仪器处于稳定状态时，仪器本身存在着的噪音引起测量读数的漂移和波动。仪器检出限的水平可对同类仪器之间的信噪比、检测灵敏度、信号与噪音相区别的界限及分析方法进行测量所能达到的最低限度等方面提供依据。仪器的检出限的物理含义为:在一定的置信范围内能与仪器噪音相区别的最小检测信号对应的待测物质的量。通过配制一定浓度的稀溶液12份进行测量，可用下式计算: 2、方法的检出限   　方法的检出限是指一个给定的分析方法在特定条件下能以合理的置信水平检出被测物的最小浓度，它是表征分析方法的最主要的参数之一。分析方法随机误差的大小不但与仪器噪声有关，而且决定了方法全过程所带来的误差总和，与样品性质、预处理过程都有关系。为了能反映分析方法在整个分析处理过程的误差，可采用已知结果的标准物质或样品按照分析步骤进行测量，通过分析12份已知结果的实际样品来计算方法的检出限，计算公式如下:3、样品的检出限　　即，单个样品的检出限，指相对于空白可检测的样品的最小含量。故只有当空白含量为零时，样品检出限才等于方法检出限。一方面空白含量往往不为零，由于空白含量及其波动的存在，尽管方法检出限通过外推法可能求得很低的浓度( 或含量)，实际上样品检出限可能要比方法检出限大得多; 另一方面分析方法检出限采用的是一系列标准物质，基体各不相同，因此只能是一类型样品的平均检出限，并非严格适用于单个样品。对于单个样品确定检出限，必须固定样品基体，即样品检出限的确定应使用样品本身，采取标准加入法作出和方法检出限类似的曲线，使用外推法进行计算。　　正因为如此，在实际使用中，样品检出限要比方法检出限要有意义得多。当被测样品种类变化或测定所用试剂和环境变化时，即使使用同一分析方法，样品检出限可能相差很大。在痕量分析时，测量结果的可靠性在很大程度上取决于空白值的大小及空白值的波动情况。设 Wt代表被测样品的总值，Wb代表空白值，则被测组分的含量( Wt-Wb)与检测可靠性的关系如表1所示( 表中”σ空白”为测定分析空白时的标准偏差)。4、空白对检出限的影响　 在分析化学中，空白值可分为试剂空白、接近空白与真实空白。真实空白是完全不含待测物质，其它组分与待测样品完全相同的一种分析样品，且按照待测样品的全部分析程序，测定空白试样。但在实际分析中，许多分析工作者使用试剂空白或接近空白，试剂空白:按照真实空白的加入顺序和操作方法混合本实验所需的全部试剂。接近空白: 在试剂空白中加入检出限2倍或3倍的待测物质。由此可见，真实空白的基体较复杂，所以它的值高于试剂空白和接近空白。在分析中应尽量使用真实空白，它更体现了体系的特征。5、仪器的测定下限和方法的测定下限检出限只能粗略的表征体系性能，仅是一种定性的判断依据，通常不能用于真实分析。测定下限则是痕量或微量分析定量测定的特征指标。仪器的测定下限表示仪器进行定量分析时所能达到的最低界限，是指在高置信度下测定物质的最低浓度或量，其计算公式同式(2)只是一般取K=6即DD= 6S0C√X。在高置信度下，用特定分析方法能够准确定量测定的待测物质最小浓度或量，称为该分析方法的测定下限。其计算公式同式(3) ，计算时一般Ki=10即CD= 10SiC√X结语当以检出限作为分析方法和分析仪器比较标准时，应约定统一的检出限计算方法（测定下限反映出分析方法能准确地定量测定低浓度水平待测物质的极限值），随着实验测试技术的不断进步，痕量分析逐步成为实验室最主要的工作。针对痕量分析方法以及一些基本应用理论的研究也愈发重要。因此，为适应检验测试工作实际需要，应当对检出限的计算方法进行优化统一，从而不断促进实验测试技术的发展。

背景免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）是具有抗体活性的动物蛋白，可分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五类。人体血清中免疫球蛋白的主要成分是IgG，它在人体内具有重要的免疫和生理调节功能，是人体内免疫系统中最为关键的组成物质之一。乳制品里面IgG含量测定一直是个难题，我们通过我们独家的ProteinG亲和固相萃取柱，把IgG选择性富集后测定，比2003国标方法要更加准确，结果更容易重现，希望可以助力乳制品企业准确测定免疫球蛋白含量目前，添加IgG的乳制品备受消费者的追捧，因乳制品成份较为复杂，若直接提取后使用液相色谱法进行测定，IgG受杂蛋白干扰较大，无法进行准确地定量和定性。参照GB/T 5009.194-2003，纳谱分析开发的整体解决方案，包括样品的前处理、样品的固相萃取净化、液相检测方法，使IgG实验操作简便高效、检测结果准确可靠。适用范围参照GB/T 5009.194-2003 保健食品中免疫球蛋白IgG的测定，创新地引入了固相萃取方法，优化了液相色谱方法。本方法适用于乳制品中免疫球蛋白IgG含量的测定。实验步骤01试剂的准备0.05 mol/L pH6.5的PBS缓冲溶液：使用Na2HPO4和NaH2PO4进行配置；冰乙酸溶液：准确吸取3 mL冰乙酸定容至1 L水中，再使用低浓度的NaOH溶液调节pH至3.0。02样品的制备巴氏杀毒奶：准确称取试样2.0 g（精确至0.001 g），用0.05 mol/L pH6.5的PBS缓冲溶液稀释至25 mL，摇匀，通过0.45 μm微孔滤膜后备用。乳粉：准确称取试样0.1 g（精确至0.001 g），用0.05 mol/L pH6.5的PBS缓冲溶液稀释至25 mL，摇匀，通过0.45 μm微孔滤膜后备用。03固相萃取方法活化：SelectCore Protein G亲和柱，依次使用5.0 mL水、10.0 mL 0.05 mol/L pH6.5的PBS缓冲溶液活化；上样：取步骤2中制备好的巴氏杀毒奶溶液10 mL或乳粉5.0 mL上样至固相萃取柱上，弃去流出液；淋洗：使用5.0 mL 0.05 mol/L pH6.5的磷酸盐缓冲溶液淋洗，弃去淋洗液；洗脱：用4 mL 冰乙酸溶液洗脱，收集全部洗脱液，并用冰乙酸溶液定容至5.0 mL，混匀；洗脱液直接使用高效液相色谱仪进行测定。04液相色谱仪器条件Column：         BioCore SEC-300，5 μmDimension：     7.8×300 mmMobile Phase：150 mmol/L氯化钠溶于20 mmol/L PBS缓冲溶液中（pH7.0）Flow rate：       0.5 mL/minTemperature：  30 °CInjection：       10 μLDetection：      UV 214 nm05实验谱图图1：200 μg/mL免疫球蛋白IgG标准品色谱图图2：色谱柱残留色谱图图3：巴氏杀毒奶样品色谱图图4：巴氏杀毒奶样品加标（加标量：0.025 mg/g）色谱图图5：乳粉样品色谱图图6：乳粉样品加标（加标量：25 mg/g）色谱图图7：巴氏杀毒奶样品未净化、净化处理对比色谱图图8：乳粉样品经SelectCore Protein G亲和柱及其他厂家Protein G亲和柱净化对比色谱图06加标回收率样品加标量加标回收率巴氏杀毒奶0.025 mg/g105.39%乳粉25 mg/g106.44%实验结论本文参照国标方法，选择亲和固相萃取净化结合高效体积排阻色谱法，有如下优势：01亲和固相萃取过程中可去除掉杂蛋白干扰，使得IgG的检测不受影响，从图7可以看出，未经净化处理的巴氏杀毒奶样品色谱图目标物附近基线波动很大，受基质干扰较强，目标物峰型较差，无法进行积分操作；从图8可以看出，相同的样品经其他厂家的Protein G亲和柱处理后，峰型虽然比未处理前有所改善，但是目标物周围的杂蛋白依旧存在干扰积分的现象。而经纳谱分析的SelectCore Protein G亲和柱净化处理后的样品目标物不受干扰，可准确进行积分操作；02亲和固相萃取方法可选择性富集IgG，保证了巴氏杀毒奶这种IgG含量较低的乳制品也能准确定量，并且回收率良好；03参考国标方法，对液相色谱分析条件也进行了优化，对于IgG这类的生物大分子，如果采用常规的反相色谱柱无法进行分析，因此选择了更加适合本项目的高效体积排阻SEC分析柱，实验过程中同时也验证了此款分析柱的残留性，在较高浓度的IgG标准品分析结束后，立即测试色谱柱中IgG的残留量，由图2的色谱图可以得知，几乎没有任何残留，保证了样品分析结果的真实可靠。详细产品信息，欢迎选购：产品描述货号SelectCore Protein G亲和柱 1mL; 10/pkgPTG065-030001-1BioCore SEC-300 5μm, 7.8×300mmB213-050030-07830S

丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根茎，是临床常用药味之一，治疗多种疾病：冠心病、脑血管疾病、妇科疾病、外科疾病等。选丹参的时候，注意选表面呈暗棕红色或棕红色，粗糙，具有纵皱纹，皮部棕红色，木部灰黄色或紫褐色，导管束黄白色，呈放射状排列的比较好，外表黄白的最好不要选。丹参的中药故事丹参根部呈紫红色，民间有将其称作“丹心”的，这与流传的一个感人故事有关。相传很久以前，东海岸边的一个渔村里住着一个叫“阿明”的青年。阿明从小丧父，与母亲相依为命，因自幼在风浪中长大，练就了一身好水性，人称“小蛟龙”。有一年，阿明的母亲患了妇科病，经常崩漏下血，请了很多大夫，都未治愈，阿明甚是一筹莫展。正当此时，有人说东海中有个无名岛，岛上生长着一种草,花紫蓝色、根呈红色的药草，以这种药草的根煎汤内服，就能治愈其母亲的病。阿明听后，喜出望外，便决定去无名岛采药。村里的人听说后，都为阿明捏着一把汗，因为去无名岛的海路不但暗礁林立，而且水流湍急，欲上岛者十有九死，犹过“鬼门关”。但病不宜迟，阿明救母心切，毅然决定出海上岛采药。第二天，阿明就驾船出海了。他凭着高超的驾船技术和水性，绕过了一个个暗礁，冲过了一个个激流险滩，终于闯过“鬼门关”顺利登上了无名岛。上岸后，他四处寻找那种开着紫蓝色花、根是红色的药草。每找到一棵，便赶快挖出其根，不一会儿就挖了一大捆。返回渔村后，阿明每日按时侍奉母亲服药，母亲的病很快就痊愈了。村里人对阿明冒死采药为母治病的事，非常敬佩。都说这种药草凝结了阿明的一片丹心，便给这种根红的药草取名“丹心”。后来在流传过程中，取其谐音就变成“丹参”了。检测方法丹参其有效化学成分主要为脂溶性丹参酮类和水溶性酚酸类。其脂溶性化学成分主要包括丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA 和丹参酮ⅡB、隐丹参酮、羟基丹参酮及异丹参酮Ⅰ、异丹参酮Ⅱ等, 均具有保护心肌缺血缺氧、抑制血小板聚集的功能, 还具有明显的抗肿瘤作用；其水溶性成份主要为丹酚酸A、B、C、D、E、F、G、原儿茶醛、原儿茶酸等丹酚酸类化合物, 具有抗血栓、改善血液循环、抗氧化损伤等作用。本次参考中国药典，采用高效液相色谱法(HPLC)，选用纳谱分析ChromCore AQ C18色谱柱对丹参提取物中丹参酮ⅡA的含量进行分离和检测；选用纳谱分析ChromCore AR C18色谱柱对丹参提取物中丹酚酸B的含量进行分离和检测。色谱检测条件及谱图如下：丹参提取物-丹参酮ⅡA的分离丹参提取物-丹酚酸B的分离结论选用纳谱分析ChromCore AQ C18色谱柱对丹参提取物中丹参酮ⅡA的含量进行分离和检测，丹参酮ⅡA具有良好的峰形，主峰附近没有杂峰；选用纳谱分析ChromCore AR C18色谱柱对丹参提取物中丹酚酸B的含量进行分离和检测，丹酚酸B主峰与前面杂质峰分离良好，峰形良好，符合药典要求，可用于丹参提取物中丹酚酸B和丹参酮ⅡA的分离和测定，为该药物的质量保证提供检测依据。

人参（Panax ginseng C. A. Mey）为五加科植物人参的干燥的根和根茎，具有“百草之王”的美誉，具有补益脾肺、生津养血、安神益智等多种功效。现代药物学研究已证明人参皂苷是人参中的主要有效成分，因此历年中国药典都是采用测定人参药材中人参皂苷的含量来控制人参药材的品质，但是药典中给出的测定方法样品前处理过程花费时间较长，需进行放置过夜处理，并且只测定3种人参皂苷的含量，缺乏全面性。本文优化了人参样品的前处理方法，样品经过固相萃取后可测定7种人参皂苷的含量（人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2和Rd），前处理时间从之前的近8 h缩短到目前的1.5 h，并且也不需要用到三氯甲烷脱脂，减少有毒溶剂的使用。同时还优化了液相色谱分析方法，分析时间缩短了20min。人参样品经纳谱分析人参皂苷专用萃取柱SelectCore HR-C18处理后，目标峰不受杂质干扰，回收率良好，搭配使用纳谱分析ChromCore 300 C18色谱柱，色谱图峰型好、分离度高。图1  7种人参皂苷结构式图缩略语Af: arabinofuranose; Ap: arabinopyranose; G: glucopyranose; R: rhamnopyranose适用范围参考中国药典2020版中人参的含量测定方法，优化了样品前处理方法及液相色谱方法。本方法适用于人参药材中人参皂苷含量的测定。实验步骤1、2020版药典提取方法称取样品1 g，精密称定，置索氏抽提器中，加三氯甲烷加热回流3 h，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入100 mL锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇50 mL，密塞，放置过夜，超声处理（功率250 W，频率50 kHz）30 min，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25 mL，置于蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2、固相萃取方法提取步骤：称取样品1 g于50 mL离心管中，加入50 mL甲醇，超声提取20 min，过滤，精密量取续滤液25mL置于蒸发皿中水浴蒸干，残渣加10 mL水溶解混匀备用。净化步骤：活化：SelectCore HR-C18 500mg/6mL固相萃取柱，依次使用5.0 mL甲醇、5.0 mL水活化；上样：将提取步骤中制备好的溶液全部转移至固相萃取柱上，弃去流出液；淋洗：依次使用10.0 mL水、10.0 mL的40%甲醇淋洗，弃去淋洗液；洗脱：用4 mL 80%甲醇溶液洗脱，收集全部洗脱液，并用80%甲醇定容至5.0 mL，混匀；洗脱液过0.45 μm微孔有机滤膜过滤，取续滤液使用高效液相色谱仪进行测定。3、药典方法液相色谱仪器条件Column：          ChromCore 300 C18，5 μmDimension：      4.6×250 mmMobile Phase：A）水                          B）乙腈Gradient：         t(min)    A       B                          0           81      19                          35         81      19                          55         71      29                          70         71      29                          100       60      40Flow rate：        1.3 mL/minTemperature：   30 °CInjection：         10 μLDetection：        UV 203 nm4、实验谱图图2：7种人参皂苷标准品色谱图（Rg1和Re的分离度2.61）图3：人参样品固相萃取方法色谱图图4：人参样品药典方法色谱图5、固相萃取方法回收率提取步骤：称取样品0.5 g于50 mL离心管中，精密加入人参皂苷对照品溶液一定体积，使得Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2和Rd加入量分别是1.01mg、0.65mg、0.18mg、0.83mg、0.37mg、0.35mg和0.14mg，加入50 mL甲醇，超声提取20 min，过滤，精密量取续滤液25mL置于蒸发皿中水浴蒸干，残渣加10 mL水溶解混匀备用。净化方法同固相萃取方法中净化步骤。加标回收率人参皂苷Rg1ReRfRb1RcRb2Rd加标回收率（%）93.5294.3695.0695.7796.1292.8893.43由上述加标回收率表格也可看出，7种人参皂苷加标回收率均大于90%，符合检测要求。6、梯度优化后的色谱图对比原梯度时间需要100min以上，我们选择了乙腈和0.1%磷酸作为流动相，并对梯度进行了一些微调，时间缩短到70min内。Column：         ChromCore 300 C18，5 μmDimension：     4.6×250 mmMobile Phase：A）0.1%磷酸水溶液                         B）乙腈Gradient：        t(min)    A        B                         0           81       19                         25         78       22                         70         64       36Flow rate：       1.3 mL/minTemperature：  30 °CInjection：        10 μLDetection：       UV 203 nm图5：优化后的液相色谱方法测定的人参皂苷混标、人参样品固相萃取方法、人参样品药典方法处理对比色谱图 （Rg1和Re的分离度1.96）实验结论人参样品经过SelectCore HR-C18固相萃取前处理，不仅简化了三氯甲烷等有毒溶剂的使用，同时前处理时间也缩短到1.5 h，节约了前处理操作时间，而且净化后的样品图谱基线稳定，谱图更加干净，目标物受干扰少，7种人参皂苷成分与干扰峰都可以达到基线分离，加标回收率也均大于90%，符合检测要求。我们也尝试了图5使用的优化后的液相色谱方法，选择纳谱分析ChromCore 300 C18色谱柱进行液相色谱分析，分析时间缩短到70 min时也可保证7种人参皂苷目标成分的分离度良好。

提出问题灵敏度可以反映一台仪器对待测组分响应值的大小，与信噪比或检测限结合可评价一台仪器的综合性能指标。在相同检测限下，仪器的灵敏度越高，仪器性能越好。那么如何提高灵敏度呢？分析问题灵敏度：单位物质量通过检测器时，产生的电信号大小称为检测器对该物质的灵敏度。以响应信号(R)为纵坐标，进样量(Q)为横坐标作图，可得到通过原点的直线，该直线的斜率就是检测器的灵敏度，以S表示：S＝△R/△Q解决问题01样品浓缩样品浓度低于仪器检测限时，采用浓缩方法往往是提高分析灵敏度的有效途径。比如分析水和食品中的残留农药时，其浓度常常是ppb（1e-9g/ml）到ppt（1e-12g/ml）级，即使采用不分流进样注射5μL样品。单一组分的绝对进样量也难达到1e-12g。一般GC检测器是达不到这一检测限的。所以必须对样品进行浓缩。常用的方法有：（1）液-液萃取之后挥发溶剂，然后再定容；（2）用固相萃取（SPE）进行浓缩。这两种方法均可使样品浓缩几个数量级，因而广泛应用于实际分析中。但这种浓缩方法的明显缺点是费时、费溶剂、有可能损失样品、以及污染环境。近几年迅速发展起来的超临界流体苯取（SFE）和固相微萃取（SPME）技术越来越多地应用于色谱分析中。尤其后者被认为是无溶剂萃取方法，它可与GC直接联用。实现自动分析。采用聚硅氧烷涂渍的萃取探头，用于GC/MS分析。可检侧到水中1～20pg多环芳烃。这是一种很有用的样品制备方法，目前已有几种极性和非极性探头涂层。02使用选择性高灵敏度检侧器这也是色谱工作者提高分析灵敏度的常用方法。如分析含卤素化合物时采用ECD，分析含氮和含磷化合物时采用NPD，分析含硫和含磷化合物时用FPD等。还可用MSD较高灵敏度的通用型检侧器。常用气相色谱检测器的灵敏度如下所示：FID=氢火焰检测器；ECD＝电子捕获检测器；TCD＝热导检测器；FTIR=傅里叶变换红外(虚线即采用冷阱技术)；PID=光离子化检测器;NPD/P=氮磷(磷型)检测器；NPD/N=氮磷(氮型)检测器；ELCD(电导检测器)/Cl=氯型检测器；ELCD/S=硫型检测器；ELCD/N=氮型检测器；FPD/S=火焰光度(硫型)检测器；FPD/P＝火焰光度(磷型)检测器；AID=氩离子检测器；MS/SCAN=质谱(扫描)；MS/SIM＝质谱(选择离子监控)；MS/MS＝二维质谱。03降低仪器系统噪声仪器系统噪声通常来自两个方面。一是仪器本身。如检测器噪声、电路噪声、色谱住固定相流失等；二是样品基质。如食品萃取物中含有很多杂质。前者可以通过采用选择性检渊器和低流失色谱柱来实现抑制。后者则需要对样品进行纯化。如采用SPE技术。但这同样有费时和样品损失的问题。另外，还可以采用顶空进样来消除样品基质的干扰，但这些方法只能很有限地提高灵敏度。04改进进样方式 不分流进样、冷柱头上进样和程序升温进样技术，它们都可在一定程度上提高分析灵敏度，同时简化样品处理步骤，近年发展起来的大体积进样（LVI）技术更是一种有效提高灵敏度的方法采用比常规GC大几十到几百倍的进样量（5～500μL）就可提高灵敏度一到两个数量级。目前，很多商品仪器提供这种功能。实现大体积进样的方式：  涉及到毛细管GC时，人们都会强调柱容量问题。进样量大时很容易造成超载，从而减低分离度、使峰形畸变，影响柱性能。但是对于浓度很低的样品，超载问题只与溶剂有关。所以，只要有效地消除溶剂，不让过多的样品进入色谱柱，就可以加大进样量，以提高灵敏度。这就是所谓LVI技术。有些仪器可配置专门设计的LVI进样口，而另一些则是基于已有的进样口设计，附加一些配件来实现LVI。无论何种配置，其原理都是相同的，一是基于冷柱上进样，.二是基于FTV技术。  05从操作方面提高灵敏度优化H2和Air的比例：使样品充分离子化；空气流量小于200mL／min时，流量大小对灵敏度有一定影响，一般大于250mL／min条件下，空气流量对检测器灵敏度有很大的影响。优化尾吹气流量(25~35mL/min)，减少组分的柱后扩散效应，在改善分辨率的同时，使峰变窄变高，也相当于改善了灵敏度；保持进样口，FID 喷嘴和气路的清洁：定期更换进样垫、衬管和石英棉；用高纯度的气(载气、H2、Air和尾吹气)，也能使噪音变小，灵敏度也就增加了；用Low Bleeding的毛细柱：能使噪音变小，灵敏度也就相应增加了。降低初始温度：分析物或是溶剂和分析物在柱子的小面积上凝结，使峰变窄变高；建议初始温度最好设在比最快出峰分析物的沸点低摄氏50度左右。选择合适的内衰减比例：放大器输入电阻的大小决定放大器的电流放大倍数，影响FID灵敏度，输入电阻大，灵敏度高，但噪声会增大，在调节放大器输入电阻大小时，要兼顾仪器的信噪比。放大器的输出电路衰减值，有1／10、1／25、l／S0，各生产厂家不同，内衰减比例也不同，改变或调节内衰减，也可改变FID灵敏度。如瓦里安公司的FID的灵敏度，可设定为9、10、11、12。数字愈大代表灵敏度愈佳，数值差1代表信号以10倍增减。当然，前提是要保证放大器基线稳定。改变样品本身：大部分时候，样品本身没法改变，但是，可以使用不同的溶剂以增加其效果，例如，溶剂的沸点与初始温度的差别愈大愈好，例如，柱温初始温度是摄氏30度时，样品使用的溶剂是乙酸乙酯（沸点摄氏77.1度）会比使用二氯甲烷溶剂好（沸点摄氏39度）。06如何提高GC/MS的灵敏度：GC/MS联用仪，即气相色谱质谱联用仪，为现在最常用的化学分析仪器。在药物，食品，环境领域中被广泛应用，是水中挥发物质、半挥发物质，食品中农残，香精香料等测试的主要工具。无论在定性还是定量上均有强大功能。从第一台商业GC/MS问世以来，GC/MS的功能不断扩展，加之计算机的发展使其软件支持也十分完善。但是在日常应用中，我们发现GC/MS的功能并未被完全发挥，或者说大家使用GC/MS来进行化学分析，但得到的结果并不是真正好的结果。一般文献上的方法都只会提供主要参数，如升温程序，离子源的温度等，其实在GC/MS的仪器设置中还有一些是比较重要，而且这些参数的设置应该随测试的不同而不同。本文以如何提高GC/MS的灵敏度来讨论仪器设置的重要性（仪器以安捷伦GC/MS7890/5973为例）。如何新建仪器方法，许多仪器操作人员喜欢在已有方法的基础上手动选择需要修改的参数，这样做往往会遗漏一些重要的参数设置。所以建议从仪器预设的缺省方法开始编辑完整方法，如Agilent菜单中就有Edit enter method的选项。1、首先的仪器参数为进样量，一般的GC/MS方法都会是1ul，如果方法要求检测限低，按照溶剂膨胀率也可以提高进样量，但需要注意膨胀体积应小于衬管体积。2、对于微量或痕量分析，我们会选择不分流进样，脉冲不分流进样的方式可以提供更窄的峰宽，可以最大限度的提高灵敏度。3、升温程序我们需要注意的是溶剂聚焦的应用，设置低的柱箱初温可以很好的起到溶剂聚焦，以减少峰宽的作用。4、质谱参数的设定，EM电压一般设定为Autotune的电压，适当提高可以提高化合物的质谱响应。如果进行的定量分析，单纯Scan的灵敏度较低，但是单纯的SIM可能丢失很多有用的信息，比如测试复杂基质可以通过Scan的数据了解基质的组成等。现在大多仪器都可以进行Scan和SIM的同时分析，在Scan和SIM的同时分析中特别应注意的是检测器时间的分配，以Agilent的仪器举例，参数sample rate应设置为1（单纯Scan设为2）可以保证有比较好的时间分配，即能保证质谱数据的采集（峰的点数），也能保证灵敏度。SIM参数设置中，Dwell time会是比较重要的，一般需要保证每秒的扫描数大于2（峰宽为6秒，保证12个点）。5、离子源的温度对物质的灵敏度也有较大的影响，一般离子源温度会设为230℃，但最新的离子源可以設到300℃，对化合物的灵敏度是一个很大的提高。

结论分析工作者在药物的有关物质高效液相色谱法的方法开发和检查，应对检验过程中出现的杂质峰予以重视，以免出现误判。结果易被误认为是有关物质的峰包括溶剂峰、有机酸盐峰、无机酸盐峰和辅料峰，本次将举例说明并对这些峰的形成原因进行简单分析。根据药品注册的国际技术要求中杂质的含义，杂质分为有机杂质、无机杂质和残留溶剂。有关物质是杂质的一种，主要是指有机杂质，它可能是原料药合成过程中带入的原料药前体、中间体、试剂、分解物、副产物、聚合体、异构体以及不同晶型、旋光异构的物质，也可能是制剂过程或是在贮藏、运输、使用过程中产生的降解物。有关物质的检查方法很多，主要有薄层色谱法、高效液相色谱法（HPLC法）、气相色谱法和紫外分光光度法等。其中，HPLC法由于分离效果好、专属性强、灵敏度高，在有关物质检查中最为常用。在采用HPLC法对药物进行有关物质分析时，一般要求考察最大杂质峰面积或各杂质峰面积的和，将其与对照溶液的主峰面积（主成分自身对照品法）或总峰面积（面积归一化法）比较，规定应不超过某一特定的数值。但在实际检验过程中，排除配样引进或者是柱子没冲干净这些因素外，色谱图上仍然会出现保留时间较弱的峰，易被误认为是杂质峰，从而造成结果的误判。笔者结合日常检验工作和相关文献，选取了几个具有代表性的品种，将这些易被误认为是杂质峰的峰归纳为溶剂峰、有机酸盐峰、无机酸盐峰和辅料峰，并对这些峰的形成原因进行分析，以期对药物的有关物质HPLC方法的研究和常规检查提供参考。1. 溶剂峰在HPLC法中，由于溶解对照品或供试品的溶剂和流动相在某一波长的吸光值不一样，因此产生了吸光值的变化，表现为出现溶剂峰。溶剂峰可能是正常形状的峰，也可能是倒峰，还有可能是一组奇形怪状的峰。减小该类溶剂峰最有效的方法是使用流动相作为溶剂溶解样品，这样既可以避免样品溶剂和流动相之间任何强度或黏度的不匹配，也可以减少样品分析时基线的漂移。此外，值得注意的是，在进行有关物质分析时，要等基线平稳后，再进空白溶剂。一般进样2次，计算供试品溶液的杂质峰时，溶剂峰位置的峰是不参与计算的。2. 有机酸盐峰《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》）2020年版（二部）采用HPLC法对苯磺酸氨氯地平的有关物质Ⅱ进行控制。以甲醇-乙腈-0.7%三乙胺溶液（取三乙胺7.0 mL，加水至1000 mL，用磷酸调节pH值至3.0±0.1）（35:15:50）为流动相，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，检测波长为237nm。标准规定：氨氯地平杂质I峰的峰面积乘以2与其他各杂质峰面积的和应不得大于对照溶液主峰面积的（0.3%）。实际检测时，氨氯地平的出峰时间为17.5min，但是在溶剂峰出峰的位置有响应较高的峰（保留时间3.0min），色谱图见下图。若将该峰判定为杂质峰，则会出现有关物质超标的情况。将苯磺酸配制成一定浓度进样后最终确定该峰为苯磺酸的峰。也有研究采用液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用对苯磺酸的出峰予以确证。苯磺酸为一元有机酸，其pKa为0.7，在通常的流动相pH范围内，苯磺酸氨氯地平主要解离为氨氯地平阳离子（被质子化）和苯磺酸阴离子（C6H5SO3-），因此，苯磺酸氨氯地平会出现两个峰，一个是苯磺酸（保留时间较短），一个是氨氯地平。同时，研究表明，采用反相HPLC法同时测定复方感冒药中的多种成分时，对马来酸氯苯那敏色谱峰的识别易出现判断错误，将马来酸的峰误认为是马来酸氯苯那敏。马来酸为二元有机酸，其pKa分别为2.00和6.26，在通常的流动相pH范围内，马来酸氯苯那敏主要解离为氯苯那敏阳离子（被质子化）和马来酸阴离子（HOOCCH=CHCOO-），因此，马来酸氯苯那敏也会出现两个峰。在色谱系统开发过程中，一般会调节流动相pH，与目标化合物pKa相差2个单位以上，使药物全部解离或结合，这样才能准确定量。对于带有机酸根的化合物的液相检测，比如马来酸氯苯那敏、富马酸喹硫平、苯磺酸氨氯地平，在选择的流动相pH条件下，若目标化合物以离子型存在，则马来酸、苯磺酸和富马酸等有机酸也会以盐的形式存在，这些有机酸因含有共轭结构均有紫外吸收，从而在液相条件下也会出现一个色谱峰。因此，做此类物质的有关物质和含量测定时就应注意，不应将有机酸的峰误认为是杂质峰，或者是将有机酸的峰误认为是目标化合物的峰，造成结果的误判。3.无机酸盐峰《中国药品标准》采用HPLC法检测盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液的有关物质。以硫酸铜D-苯丙氨酸溶液（取D-苯丙氨酸1.32g与硫酸铜1g，加水1000mL溶解后，用氢氧化钠试液调节pH值至3.5）-甲醇（82:18）为流动相，检测波长为293nm。标准规定，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积。实际分析时，在3.3min出现一个很大的峰，色谱图见下图 。经过分析，认为与盐酸稀释后进样的峰位相同，因而在计算有关物质时不应将该峰误认为是杂质峰。笔者在参与针对新版药典用的氢溴酸右美沙芬化学对照品的标化工作中，参照《中国药典》 中氢溴酸右美沙芬胶囊含量测定的方法，对氢溴酸右美沙芬进行有关物质检查，流动相为乙腈－磷酸盐缓冲液（取磷酸和三乙胺各5mL，加水至1000mL）（28:72），检测波长220nm，实际检测时发现在2.5min出了一个很大的色谱峰。为了验证该峰，用溴水稀释后直接进样分析，结果在同样位置出峰。见下图。因此，在结果判定时，应注意不要误将该峰归纳入杂质峰。类似于含有有机酸的药物，含有无机酸的药物在通常的流动相pH条件下也均会发生解离，以盐形式存在的化合物进入液相系统后会以游离碱的形式存在，盐酸和氢溴酸是强酸，也在流动相里解离形成氯离子和溴离子。在对不同水中氯离子含量的比对分析中，用1cm的石英比色皿，取一定浓度的氯化钠标准溶液作为待测液，采用紫外-可见分光光度计，扫描范围280~350nm，确定了氯离子在波长为308.7nm左右处有最大吸收。研究也验证了溴离子在200~220nm波长范围内有较强的紫外吸收。分析原因，可能是氯离子和溴离子有8电子的稳定结构而导致紫外吸收，具体原因还有待进一步分析。4.辅料峰药用辅料是指在药品制剂中经过合理的安全评价的不包括有效成分或前体的组分。例如，在配制注射剂时，可以根据药物的性质加入适宜的辅料，如渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、组溶剂、抑菌剂和抗氧剂等，注射剂中所用到的辅料应在标签及说明书中说明。对于在HPLC法中会出峰的辅料，在对药物进行有关物质检测时，应扣除辅料峰的影响。《中国药典》收载了利巴韦林原料及利巴韦林注射液，标准规定利巴韦林原料及其注射液中单个杂质的峰面积应不得大于对照溶液主峰面积的0.25倍（0.25%），各杂质峰面积的和应不得大于对照溶液的主峰面积（1.0%）。研究发现，采用《中国药典》的方法检查利巴韦林注射液的有关物质时，对于加有氯化钠的利巴韦林注射液而言，氯化钠会在利巴韦林的杂质峰处同样出现吸收峰。文献报道，氯离子在200~220nm范围内有较弱的紫外吸收，而且氯离子在磺酸型阳离子交换柱上存在离子排斥，故氯化钠在色谱柱上基本不保留，对有关物质检查干扰很大，故在有关物质检测时应排除氯化钠峰的影响，或者建议企业在利巴韦林注射液的处方中标注氯化钠的量或不加氯化钠以利于检测。 同时，在对硝酸甘油片有关物质研究中，建立了液质联用法确证了色谱图中保留时间2.8min前的色谱峰为聚维酮K29/32的辅料峰，解决了硝酸甘油片质量标准中有关物质辅料峰的判定和扣除问题。在扣除辅料峰后，3批硝酸甘油片样品的有关物质结果均符合规定，为《中国药典》中硝酸甘油片质量标准修订提供了参考。 此外，《中国药典》收载的阿奇霉素分散片的有关物质检验明确规定了计算时予以扣除相对保留时间0.12之前的色谱峰为辅料峰，必要时应取辅料进行对照。研究表明，罗红霉素分散片中的辅料糖精钠的保留时间受仪器、色谱柱、流动相配比影响不大，在一定的流速范围内只根据保留时间就能很好地对其进行定性，在做有关物质检查时可以直接将其扣除。国家药典委员会药典业化函8号文对杂质峰的问题作了如下规定：“杂质峰不包括溶剂峰和确认的辅料峰，药品说明书应列出制剂中所用辅料名称”。按照理解，已被确认的辅料峰在有关物质判定时不被认为是杂质峰，可以将其扣除。但将其扣除前必须对其进行研究，以确认其确实为某种辅料峰，而非辅料中的杂质峰，如无法确认是何种辅料则无法扣除。笔者建议，在制剂的有关物质方法开发中，也可以避开辅料存在的吸收波长，同时选取主成分和各杂质的特征波长，使辅料无吸收或有较低吸收，以消除或降低辅料峰的干扰；或者更改提取溶剂，利用药用辅料和主药的溶解性差异，在充分了解辅料和主药理化性质的情况下更换提取溶剂，将辅料峰降至最低干扰，以便可以忽略不计。5. 结语药物中有关物质的研究是药物研发和质量控制的一个重要方面，贯穿于药品研究、生产和储存的整个过程。这就要求分析工作者对检验过程中出现的杂质峰予以重视，以免出现错误的结果。只有这样，才能真正使HPLC法测定有关物质的检验数据准确、可靠。

枸杞子，为茄科植物枸杞的成熟果实。枸杞子具有多种保健功效，是卫生部批准的药食两用食物。适量食用有益健康，配合菊杞茶有清肝明目的效果。其质量标准在历版中国药典中以测定枸杞多糖和甜菜碱成分。甜菜碱的学名为三甲基甘氨酸，具有强烈的吸湿性能，此外还可以抗肿瘤、降血压、抗消化性溃疡及胃肠功能障碍，并且可以治疗肝脏疾病。甜菜碱结构式由于甜菜碱极性大，反相C18分析柱不能对其有较好的保留效果，因此2015版中国药典一直以薄层扫描测定为主，直到2020版中国药典才开始采用HILIC体系的氨基柱进行分析。本实验采用纳谱分析SelectCore Alumina B固相萃取柱（2000mg /12mL）对枸杞子进行前处理，并用纳谱分析ChromCore  NH2 5μm，4.6×250 mm色谱柱进行分析，甜菜碱保留效果好，峰形良好，干扰杂质少，能有效保证实验顺利进行。适用范围 本方法（参考中国药典2020版方法），适用于枸杞子中甜菜碱含量的测定。实验步骤1· 试剂无水乙醇、超纯水2· 对照品配制称取8 mg甜菜碱对照品置于50 mL容量瓶中，用水定容至刻度线，即浓度为160 μg /mL。3· 提取称取1 g枸杞子样品（精确到0.01 g）于50 mL离心管中，加入50 mL甲醇溶液，涡旋震荡1 min，超声20 min， 4000 r/min离心3 min后，取上清液待净化。4· 净化SPE柱：SelectCore Alumina B固相萃取柱（2000mg/12mL）活化：用10mL无水乙醇活化；上样：加入2 mL上清液，弃去；洗脱：用30 mL无水乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，水浴蒸至近干，用超纯水溶液复溶并定容至2 mL后过0.22μm MCE针式滤器，上机检测。5· 液相色谱仪器条件Column:            ChromCore NH2, 5 μmDimension:       4.6 × 250 mmMobile Phase:  85/15 v/v 乙腈/水Flow Rate:        1.0 mL/minTemperature:    30 ℃Injection:          10 μLDetection:         UV 195 nm6 · 检测谱图图1：甜菜碱标准品色谱图图2：枸杞子提取原液色谱图图3：枸杞子提取液过固相萃取柱色谱图图4：枸杞子提取液加标（100%水平加标）过固相萃取柱色谱图7 · 样品加标回收率样品名称加标回收率%甜菜碱96.35%8 · 实验结论由结果得出，选择纳谱分析SelectCore Alumina B固相萃取柱（2000mg/12mL），枸杞子中甜菜碱的回收率大于90%，并且可以有效去除杂质干扰，使得样品图谱更加干净。选择ChromCore NH2 5μm，4.6×250 mm色谱柱，乙腈/水=85/15做流动相，甜菜碱对照品和实际样品中甜菜碱的理论塔板数分别为8769和10135，均超过药典规定的3000，符合检测标准。应用相关产品信息，欢迎选购：产品描述货号SelectCore Alumina B 2000mg/12mL; 20/pkgALB060-122000-1NanoChrom Filter MCE, 13mm×0.22μm; 100/pkgF-1322MCEChromCore NH2 5μm, 4.6×250mmA008-050012-04625S