枸杞子,为茄科植物枸杞的成熟果实。枸杞子具有多种保健功效,是卫生部批准的药食两用食物。适量食用有益健康,配合菊杞茶有清肝明目的效果。其质量标准在历版中国药典中以测定枸杞多糖和甜菜碱成分。甜菜碱的学名为三甲基甘氨酸,具有强烈的吸湿性能,此外还可以抗肿瘤、降血压、抗消化性溃疡及胃肠功能障碍,并且可以治疗肝脏疾病。
甜菜碱结构式
由于甜菜碱极性大,反相C18分析柱不能对其有较好的保留效果,因此2015版中国药典一直以薄层扫描测定为主,直到2020版中国药典才开始采用HILIC体系的氨基柱进行分析。本实验采用纳谱分析SelectCore Alumina B固相萃取柱(2000mg /12mL)对枸杞子进行前处理,并用纳谱分析ChromCore NH2 5μm,4.6×250 mm色谱柱进行分析,甜菜碱保留效果好,峰形良好,干扰杂质少,能有效保证实验顺利进行。
适用范围
本方法(参考中国药典2020版方法),适用于枸杞子中甜菜碱含量的测定。
实验步骤
1· 试剂
无水乙醇、超纯水
2· 对照品配制
称取8 mg甜菜碱对照品置于50 mL容量瓶中,用水定容至刻度线,即浓度为160 μg /mL。
3· 提取
称取1 g枸杞子样品(精确到0.01 g)于50 mL离心管中,加入50 mL甲醇溶液,涡旋震荡1 min,超声20 min, 4000 r/min离心3 min后,取上清液待净化。
4· 净化
SPE柱:SelectCore Alumina B固相萃取柱(2000mg/12mL)
活化:用10mL无水乙醇活化;
上样:加入2 mL上清液,弃去;
洗脱:用30 mL无水乙醇溶液进行洗脱,收集洗脱液,水浴蒸至近干,用超纯水溶液复溶并定容至2 mL后过0.22μm MCE针式滤器,上机检测。
5· 液相色谱仪器条件
Column: ChromCore NH2, 5 μm
Dimension: 4.6 × 250 mm
Mobile Phase: 85/15 v/v 乙腈/水
Flow Rate: 1.0 mL/min
Temperature: 30 ℃
Injection: 10 μL
Detection: UV 195 nm
6 · 检测谱图
图1:甜菜碱标准品色谱图
图2:枸杞子提取原液色谱图
图3:枸杞子提取液过固相萃取柱色谱图
图4:枸杞子提取液加标(100%水平加标)过固相萃取柱色谱图
7 · 样品加标回收率
样品名称 | 加标回收率% |
甜菜碱 | 96.35% |
8 · 实验结论
由结果得出,选择纳谱分析SelectCore Alumina B固相萃取柱(2000mg/12mL),枸杞子中甜菜碱的回收率大于90%,并且可以有效去除杂质干扰,使得样品图谱更加干净。选择ChromCore NH2 5μm,4.6×250 mm色谱柱,乙腈/水=85/15做流动相,甜菜碱对照品和实际样品中甜菜碱的理论塔板数分别为8769和10135,均超过药典规定的3000,符合检测标准。
应用相关产品信息,欢迎选购:
产品描述 | 货号 |
SelectCore Alumina B 2000mg/12mL; 20/pkg | ALB060-122000-1 |
NanoChrom Filter MCE, 13mm×0.22μm; 100/pkg | F-1322MCE |
ChromCore NH2 5μm, 4.6×250mm | A008-050012-04625S |
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