快速过滤超大量质粒提取试剂盒

快速过滤超大量质粒提取试剂盒说明书

上海远慕生物专业供应美国Omega系列产品，包含有：质粒中量提取试剂盒，质粒高纯（高性能）小量提取试剂盒，无内毒素小量质粒提取试剂盒 I/II，M-13单链DNA小提/大提/96孔板提取试剂盒，磁珠质粒超大量提取试剂盒，磁珠质粒超大量提取试剂盒，琼脂糖凝胶回收试剂盒，胶回收/PCR纯化试剂盒，聚丙烯酰胺凝胶RNA纯化试剂盒，专业经营ELISA试剂盒，标准品对照品，动物血清血浆，培养基，抗体，化学试剂，生化试剂，溶液 ，染色液 ，缓冲剂，通用试剂，蛋白质，细胞株，生物分子，实验耗材，其他实验试剂等，品种齐全，有进口品牌及国产品牌，欢迎来电订购！

名称：快速过滤超大量质粒提取试剂盒

品牌：Omega

供应商：上海远慕

英文名/型号：Fastfilter Plasmid Mega Kit(2)

英文名/型号：Fastfilter Plasmid Mega Kit(5)

英文名/型号：Fastfilter Plasmid Mega Kit(20)

用途：从200-500ml菌中提取2.5mg质粒

快速过滤超大量质粒提取试剂盒特性与优点：

安全－无酚氯仿等危险的有机物抽提

可靠－操作简单，每次都能获得理想的效果

快速－可在40分钟内完成一次抽提工作

方便－去除SDS沉淀勿需离心步骤

快速过滤超大量质粒提取试剂盒操作步骤：

第一次使用前请先在漂洗液W2瓶中加入与W2相同体积的无水乙醇!将RNaseA全部加入溶液Ⅰ中，混匀，每次使用后置于2－8℃保存。将溶液Ⅲ放在冰上预冷。 

1．取100-200毫升过夜培养的菌液，6000g，离心5-10分钟，弃上清，收集菌体，尽可能的倒干上清。 处理超过50毫升菌液可以离心弃上清后，在同一个50ml管内加入更多的菌液，重复步骤1，直到收集到足够的菌体。 

2．用5ml溶液Ⅰ重悬菌体沉淀，移液器吹打或者涡旋振荡至彻底悬浮。 如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。 

3．加5ml的溶液Ⅱ，温和地上下翻转4－7次使菌体充分裂解，室温放置4分钟。 温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA剪切断裂！所用时不应超过5分钟！以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠，如果菌体少，很快清亮粘稠后就可以做下一步，不是一定要准确的5分钟。如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。

4.加7ml溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转4-7次，充分混匀此时会出现白色絮状沉淀。冰上静置10钟，4℃，至少5000g离心10分钟(加大离心力可相应缩短离心时间)，小心取上清，避免吸取到漂浮白色沉淀。加入溶液Ⅲ后应该立即混匀，以免产生SDS的局部沉淀，如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。 

5.可选步骤：4℃，5000g再次离心10分钟，小心取上清。 

6.将上一步所得上清液加入吸附柱AC中（吸附柱放入收集管中），静置2分钟，5000g离心3分钟（为了保护膜最好慢启动），倒掉收集管中的废液。如果上清体积超过20ml,可以分多次过柱。

7．加入10ml漂洗液W1，5000g离心3分钟，弃掉废液。 

8．加入12ml漂洗液W2（请先检查是否已加入无水乙醇!），5000g离心3分钟（为了保护膜最好慢启动），弃掉废液。

9．重复操作步骤8一次。 

10．将吸附柱AC放回空收集管中，最高速（最好大于8，000g）离心5-10分钟以干燥膜基质残留乙 醇，用枪头吸除内圈压环和柱壁之间可能残留的乙醇，室温或者烘箱晾干几分钟。 该步骤为彻底去除吸附柱中残留乙醇，残留乙醇抑制下游反应并且严重降低洗脱效率，降低质粒产量。如果洗脱产量低，则必须加做步骤11。

11．可选步骤：选择以下两种方法干燥柱子： ａ.取下柱子放置于真空容器中，密封真空容器，提供真空15分钟；ｂ．将柱子放置于65℃真空干燥箱或烘箱中，放置10-15分钟。 

12.取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加1.5ml洗脱缓冲液EB（洗脱 缓冲液事先在65-70℃水浴中预热），室温放置2分钟，5000g离心3分钟。如果需要较多量质粒，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心2分钟。 洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要质粒浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于1ml，体积过小降低质粒洗脱效率，减少质粒产量。

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