无内毒素小量质粒提取试剂盒I/II

上海远慕生物是美国Omega品牌代理商，代理出售旗下全系列提取试剂盒及耗材，配件，溶液。产品包含：无内毒素小量质粒提取试剂盒I/II，无内毒素中/大量提取试剂盒，无内毒素小量质粒提取试剂盒 I/II，BAC/PAC 大型质粒小提/大提试剂盒，M-13单链DNA提取试剂盒，磁珠质粒大量提取试剂盒，96孔磁珠无内毒素大量提取试剂盒，聚丙烯酰胺凝胶回收纯化试剂盒，超薄柱型PCR产物纯化试剂盒，水样DNA提取试剂盒，动物组织直接PCR试剂盒，1.2ml带盖固定圆底收集板，磁珠分离架，96孔不透气封口膜，Dnase试剂盒，其他系列等，欢迎来电了解更多提取试剂盒详情。

名称：无内毒素小量质粒提取试剂盒I/II

品牌：Omega

供应商：上海远慕

货号/型号：

用途：从培养过夜的菌液中提取30ug/70ug无内毒素质粒DNA

无内毒素小量质粒提取试剂盒特性与优点：

安全－无酚氯仿等有机物抽提

可靠－操作简单，每次都能获得理想的效果

无内毒素－内毒素含量低于0.1EU/μg

无内毒素小量质粒提取试剂盒I/II操作方法：

1.取过夜培养的菌液1.8 ml加入到2ml EP管中，13,000rpm室温离心1min后收集细菌沉淀。倒掉上清液，再次加入菌液1.8 ml，离心后去除上清液。  

2.每管加入150 μl Buffer A，用吸头吹打菌体至无可见细菌团块，以确保沉淀完全散开。 

3.每管加入200 μl Buffer B，轻轻颠倒离心管4-6次，室温放置5min，使细菌完全裂解，溶液应变的透明。切勿剧烈振荡，否则会导致基因组DNA断裂，从而导致所得质粒被基因组DNA污染。  注意：加入Buffer B后，务必室温放置5分钟，以使RNase A充分发挥作用。  

4.每管加入350 μl Buffer C，随即颠倒离心管4-6次混匀(切勿剧烈振荡)，可见白色絮状物产生，静置30s。  

5.手腕用力上下振荡4-6次，使白色絮状物振散，然后置于离心机上13,000rpm室温离心5min。  

6.将上一步骤离心后的上清倒入或吸入到质粒纯化柱内，13,000rpm离心30s，倒弃收集管内液体。(切勿吸入白色沉淀，否则会堵塞离心柱)。 

7.向吸附柱内加入500 μl内毒素去除液，13,000rpm离心30秒，倒弃收集管内液体。  

8.在质粒纯化柱内加入500 μl Washing Buffer(务必确认已加入无水乙醇)，13,000rpm室温离心30s，洗去杂质，倒弃收集管内液体。 

9.重复步骤8一次。  

10.将吸附柱重新放入套管中，13,000rpm室温离心2min。 

11.将质粒纯化柱置于新的1.5ml离心管上，静置2min，使痕量乙醇完全挥发，加入40-100 μl Elution Buffer至管内柱面上，放置1min。Elution Buffer使用前最好50°C水浴预热。 

12.13,000rpm室温离心2min，所得液体即为高纯度质粒。

无内毒素小量质粒提取试剂盒认知：

内毒素(Endotoxin)是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖，它能引起哺乳动物发热，甚至会导致动物休克。常规的质粒纯化试剂盒由于无法去除内毒素的污染，从而大大降低了质粒转染的效率。

Omega公司采用独特的内毒素吸附缓冲液(ETR Solution)，能有效去除质粒中的内毒素污染，纯化的质粒中内毒素含量小于0.1EU/μg，可大大提高转染实验效率和动物注射效果。从培养过夜的菌液中收集细菌后，采用经典的碱裂解法裂解细菌，离心去除染色体DNA和蛋白质，得到含有质粒和内毒素的上清液，加入ETR Solution吸附内毒素,得到不含内毒素的上清液，调节结合条件并转移至硅胶柱，离心吸附质粒DNA，经两种溶液洗涤去除残余蛋白质和各种杂质，最后用Endotoxin-free Elution Buffer洗脱出质粒DNA。

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