粪便RNA提取试剂盒说明书

上海远慕生物详细为您提供粪便RNA提取试剂盒说明书，注意事项，操作步骤，保存条件，用途等资讯，本司作为美国Omega品牌代理商，携手Omega共同推出更有质量保证的相关试剂，Omega旗下产品包含有：96孔板HP总RNA提取试剂盒，96孔板石蜡包埋组织RNA提取试剂盒，磁珠植物RNA提取试剂盒，磁珠组织RNA提取试剂盒，RNA保护液，SQ DNA RNA 蛋白质共提取试剂盒，RNA室温保护液，Taq DNA Polymerase，琼脂糖凝胶回收试剂盒，其他系列等，欢迎来电了解更多有关Omega产品详情！

名称：粪便RNA提取试剂盒

品牌：Omega

供应商：上海远慕

货号/型号：R6828-00/Stool RNA Kit(5)

货号/型号：R6828-01/Stool RNA Kit(50)

货号/型号：R6828-02/Stool RNA Kit(200)

用途：从05g粪便样品中提取高质量的RNA

储存、运输和有效期：常温运输，室温（15-25℃）保存，有效期为12个月，消化液请于-20℃存放，避免反复冻融，裂解液Ⅰ请于4℃存放。

粪便RNA提取试剂盒说明书操作步骤：

请自行准备：无水乙醇、PBS、1.5mL离心管。

取出析出液和洗涤液，按以下操作：

a) 析出液：4.5mL加入25.5mL无水乙醇；9mL加入51mL无水乙醇。

b) 洗涤液：9mL加入21mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇。

c) 配制好的析出液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。

取200mg的粪便于试管中(若粪便样本为液态，取200μL于试管中)，加入2mL PBS充分振荡混匀，300g离心5分钟，收集上清；取收集的上清液1mL于1.5mL离心管中，12000 rpm离心5分钟，弃上清后沉淀用1mL PBS重悬，振荡混匀后，12000 rpm离心5分钟，收集沉淀。

加入200μL裂解液Ⅰ，悬浮沉淀，37℃放置30分钟。

加入200 μL 裂解液Ⅱ，20μL消化液，充分振荡混匀，56℃水浴10 分钟。

加入600μL析出液，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。

将吸附柱放入收集管内，取上述溶液600μL转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。

将剩余400μL液体转入上述吸附柱内，重复操作步骤7。

将吸附柱放回收集管内，加500μL洗涤液至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。

将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。

取出吸附柱，放入新的1.5 mL 离心管内，加入30-100 μL洗脱液，静置3分钟，12,000 rpm 4℃ 离心2分钟，收集RNA溶液。提取的RNA-70℃保存，或直接用于下一步实验。

粪便RNA提取试剂盒注意事项： 

1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 

2.开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。  

3.结合液CB 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 

4.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA， 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。 

5.PCR可能被过量的DNA（一般大于1μg）抑制，使用最小用量的洗脱DNA（适当稀释）反而可以得到更好的扩增。一般加入的洗脱DNA体积不要超过总PCR反应体积的10％。我们建议在PCR反应体系中加入终浓度0.1 μg/μl的BSA（牛血清白蛋白）有助于得到最佳扩增效果。

注：采用了最新的离子膜技术并反复优化了裂解液和洗脱液配方，提取得到的RNA纯度更高，最大限度地去除了蛋白、色素、脂类、杂质污染，可以直接应用于Northern 杂交、RT-PCR、Real Time RT-PCR、 cDNA 文库构建、体外翻译等各种常规分子生物学实验。

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