磁珠无内毒素超大量提取试剂盒

磁珠无内毒素超大量提取试剂盒由上海远慕生物专业供应，本司为美国Omega品牌代理商，其他系列有：琼脂糖凝胶回收试剂盒，聚丙烯酰胺凝胶RNA纯化试剂盒，96孔板PCR产物纯化试剂盒，DNA探针纯化试剂盒，RNA探针纯化试剂盒，微量DNA纯化试剂盒，微量RNA纯化试剂盒，玻璃奶琼脂糖凝胶回收试剂盒，离心型染料去除试剂盒，其他系列等，本司专业经营ELISA试剂盒，培养基，抗体，化学试剂，生化试剂，环保试剂，通用试剂，有机试剂，无机试剂，动物血清血浆，标准品对照品，质粒载体，染色液，溶液，缓冲液，实验耗材，生物分子，微生物，细胞株，蛋白质，其他实验试剂等，品种齐全，有进口品牌及国产品牌供您选择，了解更多产品详情请来电联系我司销售人员！

名称：磁珠无内毒素超大量提取试剂盒

品牌：Omega

供应商：上海远慕

英文名/型号：Mag-Bind Endo-free Plasmid Mega Kit(2)

英文名/型号：Mag-Bind Endo-free Plasmid Mega Kit(5)

英文名/型号：Mag-Bind Endo-free Plasmid Mega Kit(20)

用途：从1-2l培养过夜的菌液中提取2-5mg无内毒素质粒

磁珠无内毒素超大量提取试剂盒使用范围与技术指标：

    1.适用于从菌液中提取各类高、中、低拷贝量的质粒。

    2.本试剂盒可纯化长度达15kb的质粒。

    3.过夜培养的菌液（一般OD600>1.5），高拷贝量质粒提取能力每毫升菌液可达4-6μg，如pUC18等；中低拷贝量质粒每毫升菌液1-3μg，如pET系列载体。

转染细胞常常需要大量的高纯度且超螺旋比例高的质粒。质粒大量提取最大的难度一般是无法去除内毒素的污染，内毒素污染很大程度上影响下游的转染操作。磁珠无内毒素试剂盒结合传统的SDS裂解法以及最新的磁珠纯化方式以及omega公司独有的无内毒素试剂，可以将无内毒素的含量降低到最低。

磁珠无内毒素超大量提取试剂盒操作流程：

1.取过夜培养菌<140 ml菌液，装入合适的离心瓶中，12,000 x g离心3 min沉淀菌体，完全弃除上清。

2.加入5 ml 溶液P1，充分混悬震荡菌体沉淀，使其完全分散开，至无絮块存在。细菌悬液移入50 ml离心管中。如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。  

3.加入5 ml 溶液P2，轻轻颠倒离心管6~8次，室温放置5 min，使细菌完全裂解，溶液透明。温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA剪切断裂！所用时不应超过5分钟！以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠，如果菌体少，很快清亮粘稠后就可以做下一步，不是一定要准确的5分钟。如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。 

4.加5 ml溶液N3，立即颠倒翻转离心管6~8次，充分混匀，可见白色絮状物产生。上述混合物于13,000 x g离心10 min，小心吸出上清，移入新的50 ml离心管中。  

5.精确加入上清1/9体积的沉淀液A（约1.7 ml），颠倒离心管，充分混匀。 沉淀液A非常粘稠，吸取的时候应该缓慢，精确吸取所需量。

6.13,000 x g离心10 min，小心弃去上清，倒置吸水纸上轻轻沥干残余液体，加入900μl灭菌水充分吹打底部和侧壁溶解回收质粒DNA，回收的质粒DNA全部转入一个1.5 ml 离心管。  质粒DNA由于纯度非常高，几百微克质粒常常附着在管底和管壁无法看见，即使看不见，也需要充分吹打涮洗离心后理论上的沉淀所在侧管壁和管底。  

7.精确加入沉淀液B 100μl，颠倒离心管，充分混匀。沉淀液B非常粘稠，吸取的时候应该缓慢，精确吸取所需量。

储存事项：

1.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 

2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

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