警察的发现导致头发中替扎尼定的LC-MS / MS新方法

法国警察在自行车队的房间中发现了替扎尼定（Tizanidine），导致开发新的LC-MS / MS方法，用于测定头发样品。

警察发现替扎尼定

替扎尼定是肌肉松弛剂，禁止在运动中使用。然而，在法国的三周骑自行车比赛中，法国警察的特殊公共卫生部门发现了一个国际骑自行车团队的一名医生的房间里的替扎尼定药盒。

替扎尼定是一种具有肌肉松弛剂活性的α-2肾上腺素能受体激素，用于治疗多发性硬化症、脊髓损伤或脑损伤患者的肌肉痉挛。其他应用包括疼痛管理和阿片类药物和酒精戒断治疗。该药物仅在法国根据指定的临时使用授权计划提供，该计划在没有其他合适治疗的情况下允许指定患者使用某些医疗产品（可能是开发性或非标签使用）。因此，在法国，替扎尼丁不能从大街上的药剂师那里买到。尽管世界反兴奋剂机构（WADA）并未禁止使用这种肌肉松弛剂，但这种肌肉松弛剂对运动员的康复、缓解痉挛和治疗运动损伤可能很有帮助。它也可以与其他药物联合使用。

在队医室发现替扎尼丁后，警方联系了Légale医疗研究所（法国斯特拉斯堡）的反兴奋剂分析员，要求分析从自行车队成员处获得的头发是否含有替扎尼丁。文献中没有关于头发中替扎尼丁的测定方法报道，因此分析员团队开发并验证了一种新的LC-MS/MS方法，并通过LC-HRMS进行确认。

开发专用的LC-MS/MS方法

一位法医病理学家从七名骑自行车的人身上采集了头发样本，将头发剪得尽可能靠近头皮。样本长度范围为2-12 cm（通常为2-3 cm），保存至分析，确保从根部到尖端的方向保持不变，这是分段时间分析的一个重要步骤（尽管由于样本限制，此处未进行此操作）。样品在环境温度下由快递员送到实验室进行测试。所有头发样本均为黑色至深棕色。实验室工作人员的空白头发样本用于比对。

首先，用二氯甲烷清洗完整的头发，然后用剪刀剪成<1 mm的区段。将剪下的头发（20mg）在1mL pH 9.5硼酸盐缓冲液（40°C）中培养过夜，然后冷却并与5mL乙醚/二氯甲烷/己烷/异戊醇（50/30/20/0.5，V/V）混合。离心后，将获得的上清液干燥，然后溶于30 μL的5 mM甲酸铵缓冲液，用于分析。

使用XEVO TQS微型三重四极质谱仪配备Waters Acquity HSS C18柱（150×2.1mm×1.8μm，在50°C下保持） ，用于分析。使用甲酸缓冲液（pH 3；流动相A）和0.1%甲酸的乙腈溶液（流动相B）进行梯度洗脱。以地西泮-d5为内标，以正模式电离。

LC-MS/MS方法验证良好，线性范围为1至100 pg/mg。使用加标空白头发样本检查精确度，精确度低于15%，可接受。LOD为0.4 pg/mg，在头发中掺杂剂的预期范围内。头发没有出现任何干扰分析物或内标物的峰，基质效应较低。

七名自行车运动员中有三名对替扎尼丁呈阳性反应，但水平较低（1.1至11.1 pg/ng），结果通过作者的标准验证性LC-HRMS方法得到证实。筛查和确认是法医毒理学和兴奋剂控制的一种可靠和成熟的方法。

首次测定头发中的替扎尼丁

反兴奋剂科学家首次成功测定了头发样本中的替扎尼丁。头发测试似乎适合于确认是否接触替扎尼丁。在测试头发中的药物时，解释结果非常重要。不幸的是，缺乏将替扎尼丁加入头发的文献数据或警方关于运动员给药的信息，这意味着无法确定运动员可能给药的剂量、频率或持续时间。未来的研究需要将给药方案与头发浓度联系起来，分段头发分析有助于区分一次性和长期使用。

原文载于Separation LC Mass Spectrometry11 November 2021

相关文献

Kintz P, Gheddar L, Raul J-S. Liquid chromatography–tandem mass spectrometry and confirmation by liquid chromatography–high-resolution mass spectrometry hair tests to evidence use of tizanidine by racing cyclists. Drug Test Anal. 2021. doi:10.1002/dta.3164

Tizanidine. British National Formulary, National Institute for Clinical Excellence (https://bnf.nice.org.uk/drug/tizanidine.html; accessed 9 November 2021).

Kintz P, Ameline A, Gheddar L, Raul J-S. Testing for GW501516 (cardarine) in human hair using LC/MS–MS and confirmation by LC/HRMS. Drug Test Anal. 2020. https://doi.org/10.1002/dta.2802

（符斌 供稿）