His标签纯化树脂（Ni-NTA Resin）

Ni-NTA纯化树脂,Ni-NTA Resin,是用于纯化6xHis标签重组蛋白的一种纯化介质，它是由4%交联的Sepharose耦连了一种四齿螯合剂NTA而得. Ni-NTA树脂用于在非变性或变性条件下纯化任何表达系统表达的6xHis标签重组蛋白。NTA，含有四个螯合区，较一般的三齿螯合剂能更好的结合Ni2+。6xHis可与Ni2+螯合，从而使His标签蛋白结合在Ni-NTA纯化介质上，未结合的蛋白被洗涤下去，结合在介质上的蛋白经过一定浓度的咪唑或低PH缓冲液被温和的洗脱下来，从而得到高纯度的目的蛋白。

组分

50％的悬浮液（20％乙醇），已螯合Ni2+。

主要特征

该纯化介质与His标签蛋白具有极高的亲和力，可达5~20 mg/ml。

可在非变性和变性条件下纯化任何表达系统所得的His标签蛋白。

纯化程序简单，所得的蛋白纯度可高达95％。

Ni-NTA Resin可再生4-6次，重复使用。

应用

His标签蛋白的纯化。

蛋白结构与功能研究。

蛋白-蛋白以及蛋白-DNA之间相互作用的研究。

配体-受体之间相互作用的研究。

储存

4°C保存，切勿冻存。

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

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应用实例3：采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2，结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性，而60℃条件下1min内酶活完全释放，恢复100%活性