人间充质干细胞成骨分化试剂盒

人间充质干细胞成骨分化试剂盒

产品基本信息

产品简介

人间充质干细胞成骨分化试剂盒是埃泽思生物（Applied Cell^TM）自主研发的一款用于人间充质干细胞诱导成骨分化的产品，可用于骨髓、脐带、脂肪等组织来源的间充质干细胞的诱导成骨分化。

产品特性

l 诱导分化程序简单便捷。

l 诱导成骨细胞效率高。

产品内容

1. 相关材料

• Xeno-Free人间充质干细胞培养基（Applied Cell^®:AC-1001003）

• 人间充质干细胞成骨分化试剂盒（Applied Cell^®:AC-1001027）

• 成骨检测染液（Applied Cell^®:AC-1001021）

• Xeno-Free细胞消化液（Applied Cell^®:AC-1001024/1001025）

• 磷酸盐缓冲液(1×PBS) （Applied Cell^®: Cat.AC-1001037） 

2. 实验准备

人间充质干细胞成骨分化培养基配制：

2.1 2-8℃解冻人间充质干细胞成骨分化添加剂，轻晃摇匀；

2.2 随后将添加剂依次加入到人间充质干细胞成骨分化基础培养基中（添加剂10mL与90mL基础培养基彻底混合）混匀，即为人间充质干细胞成骨分化培养基。人间充质干细胞成骨分化培养基可在2-8℃稳定储存2-3周。

注意：人间充质干细胞成骨分化添加剂只能在2-8℃解冻，待添加剂加入到培养基以后，请用培养基润洗添加剂试管1-2次，因添加剂量较少可防止添加剂粘附在试管壁上造成损失。

3.实验操作

3.1诱导成骨（以6孔板为例）

3.1.1 使用细胞细胞包被液包被细胞培养板，将传代或复苏冻存的人间充质干细胞接种到6孔板上，密度为2×10⁵ -3×10⁵ cells/cm²或2×10⁵ -3×10⁵ cells/孔，置于37℃，5% CO₂培养箱中培养，当细胞汇合度达到80%-90%时，小心的将孔内人间充质干细胞培养基吸掉，向6孔板中加入2 mL人间充质干细胞成骨分化培养基,以此记为第0天；

注意：成骨分化容易使细胞卷起，，成骨分化时应使用包被液包被细胞培养板。

3.1.2 每隔1-2天更换新鲜的人间充质干细胞成骨分化培养基；

注意：为防止成骨细胞脱落，建议成骨过程中出现大量钙结节之后，换液形式变为每天一次半量换液。

3.1.3 诱导14-21天期间，视细胞的形态变化及生长情况（如图1所示），可用成骨检测染液（Applied Cell:AC-1001021）进行染色。

人间充质干细胞在诱导成骨分化2天(A)、6天（B）、14天(C)的细胞照片，可以观察到成片的钙结节（100×）

3.2 成骨检测染液染色

3.2.1 诱导成骨分化结束后，吸掉6孔板中的成骨分化培养基，用PBS冲洗1-2次。每孔加入1 mL细胞固定液，固定10~30 min；

3.2.2 吸掉细胞固定液，PBS冲洗2次。每孔加入2 mL成骨检测染液，染色3-5 min；

3.2.3 吸掉成骨检测染液，用PBS冲洗2-3次；

3.2.4 将培养板置于显微镜下观察成骨染色效果（如图2所示）。

人间充质干细胞在诱导成骨后成骨检测染液染色前（D）和染色后(E)的照片（200×）