人间充质干细胞成骨分化试剂盒
产品基本信息
产品名称 | Applied Cell®人间充质干细胞成骨分化试剂盒 |
货 号 | AC-1001027 |
规 格 | 1kit |
保存条件 | 基础培养基2-8℃,添加剂-20--80℃保存; 混合后2-8℃保存,2-3周内使用完毕 |
使用范围 | 人间充质干细胞诱导分化成骨 |
保质期 | 1年 |
产品简介
人间充质干细胞成骨分化试剂盒是埃泽思生物(Applied CellTM)自主研发的一款用于人间充质干细胞诱导成骨分化的产品,可用于骨髓、脐带、脂肪等组织来源的间充质干细胞的诱导成骨分化。
产品特性
l 诱导分化程序简单便捷。
l 诱导成骨细胞效率高。
产品内容
试剂 | 规格 | 数量 | 运输 |
人间充质干细胞成骨分化基础培养基 | 90mL | 1 瓶 | 冰袋 |
人间充质干细胞成骨分化添加剂 Osteogenic Differentiation Supplement | 10mL | 1瓶 | 干冰 |
1. 相关材料
• Xeno-Free人间充质干细胞培养基(Applied Cell®:AC-1001003)
• 人间充质干细胞成骨分化试剂盒(Applied Cell®:AC-1001027)
• 成骨检测染液(Applied Cell®:AC-1001021)
• Xeno-Free细胞消化液(Applied Cell®:AC-1001024/1001025)
• 磷酸盐缓冲液(1×PBS) (Applied Cell®: Cat.AC-1001037)
2. 实验准备
人间充质干细胞成骨分化培养基配制:
2.1 2-8℃解冻人间充质干细胞成骨分化添加剂,轻晃摇匀;
2.2 随后将添加剂依次加入到人间充质干细胞成骨分化基础培养基中(添加剂10mL与90mL基础培养基彻底混合)混匀,即为人间充质干细胞成骨分化培养基。人间充质干细胞成骨分化培养基可在2-8℃稳定储存2-3周。
注意:人间充质干细胞成骨分化添加剂只能在2-8℃解冻,待添加剂加入到培养基以后,请用培养基润洗添加剂试管1-2次,因添加剂量较少可防止添加剂粘附在试管壁上造成损失。
3.实验操作
3.1诱导成骨(以6孔板为例)
3.1.1 使用细胞细胞包被液包被细胞培养板,将传代或复苏冻存的人间充质干细胞接种到6孔板上,密度为2×105 -3×105 cells/cm2或2×105 -3×105 cells/孔,置于37℃,5% CO2培养箱中培养,当细胞汇合度达到80%-90%时,小心的将孔内人间充质干细胞培养基吸掉,向6孔板中加入2 mL人间充质干细胞成骨分化培养基,以此记为第0天;
注意:成骨分化容易使细胞卷起,,成骨分化时应使用包被液包被细胞培养板。
3.1.2 每隔1-2天更换新鲜的人间充质干细胞成骨分化培养基;
注意:为防止成骨细胞脱落,建议成骨过程中出现大量钙结节之后,换液形式变为每天一次半量换液。
3.1.3 诱导14-21天期间,视细胞的形态变化及生长情况(如图1所示),可用成骨检测染液(Applied Cell:AC-1001021)进行染色。
![人间充质干细胞在诱导成骨分化2天(A)、6天(B)、14天(C)的细胞照片,可以观察到成片的钙结节(100×).jpg 人间充质干细胞在诱导成骨分化2天(A)、6天(B)、14天(C)的细胞照片,可以观察到成片的钙结节(100×).jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/201909/uepic/e0f6aadd-d275-4b5c-8546-d99c2b7ae4a6.jpg)
人间充质干细胞在诱导成骨分化2天(A)、6天(B)、14天(C)的细胞照片,可以观察到成片的钙结节(100×)
3.2 成骨检测染液染色
3.2.1 诱导成骨分化结束后,吸掉6孔板中的成骨分化培养基,用PBS冲洗1-2次。每孔加入1 mL细胞固定液,固定10~30 min;
3.2.2 吸掉细胞固定液,PBS冲洗2次。每孔加入2 mL成骨检测染液,染色3-5 min;
3.2.3 吸掉成骨检测染液,用PBS冲洗2-3次;
3.2.4 将培养板置于显微镜下观察成骨染色效果(如图2所示)。
![人间充质干细胞在诱导成骨后成骨检测染液染色前(D)和染色后(E)的照片(200×).jpg 人间充质干细胞在诱导成骨后成骨检测染液染色前(D)和染色后(E)的照片(200×).jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/201909/uepic/b33fa1b5-0823-40b1-82a2-02834435a754.jpg)
人间充质干细胞在诱导成骨后成骨检测染液染色前(D)和染色后(E)的照片(200×)