人间充质干细胞成软骨分化试剂盒

人间充质干细胞成软骨分化试剂盒

产品基本信息

产品简介

人间充质干细胞成软骨分化试剂盒是埃泽思生物（Applied Cell^®）自主研发的一款用于人类间充质干细胞分化成软骨产品，可用于骨髓、脐带、脂肪等组织来源的间充质干细胞的诱导成软骨分化。

产品特性

l 诱导分化程序简单便捷。

l 诱导成软骨细胞效率高。

产品内容

操作方法

1. 相关材料

• Xeno-Free人间充质干细胞培养基（Applied Cell^®:AC-1001003）

• 人间充质干细胞成软骨分化试剂盒（Applied Cell^®:AC-1001028）

• 成软骨检测染液（Applied Cell^®:AC-1001023）

• Xeno-Free细胞消化液（Applied Cell^®:AC-1001024/1001025）

• 磷酸盐缓冲液(1×PBS) （Applied Cell^®: Cat.AC-1001037）

2. 实验准备

人间充质干细胞成软骨分化培养基的配制：

2.1 在2-8℃解冻人间充质干细胞成软骨分化添加剂，轻晃摇匀；

2.2 将添加剂加入到人间充质干细胞成软骨分化基础培养基中（添加剂10mL与90mL基础培养基彻底混合）混匀，即为人类间充质干细胞成软骨分化培养基。人间充质干细胞成软骨分化培养基可在2-8℃稳定储存2-3周。

注意：人间充质干细胞成软骨分化添加剂只能在2-8℃解冻，待添加剂加入到培养基以后，请用培养基润洗添加剂试管1-2次，因添加剂量较少可防止添加剂粘附在试管壁上造成损失。

3. 实验操作

3.1诱导成软骨球

3.1.1 诱导成软骨分化实验之前，用Xeno-Free细胞消化液消化后计数；

3.1.2 分配0.5 mL细胞悬液（2-3×10⁵个细胞）到15mL或50mL离心管中，300×g，离心5min；

3.1.3 吸掉上清，用2-5mL人间充质干细胞成软骨分化培养基重悬沉淀。

3.1.4 离心后拧松离心管盖便于气体交换，置于37℃，5%CO₂培养箱中培养，第2天，细胞团应在离心管底部呈球形的团状；

注意：离心后不需要吸掉上清液，且不要随意晃动离心管。

3.1.5 自接种时间开始计算，每天更换人间充质干细胞成软骨分化培养基；

注意：每次换液时，轻轻的摇动离心管或轻弹离心管底部确保细胞球没有粘附到管壁上。第4-5天即会看到非常明显软骨球。

3.1.6 15-21天，软骨球停止生长，收获软骨球：吸掉人间充质干细胞成软骨分化培养基，用PBS洗1次。

3.2 成软骨检测染液染色

3.2.1 清洗：软骨球用PBS清洗2次；

3.2.2 固定：加2mL细胞固定液，固定30min，水洗2次；

3.2.3 染色：成软骨检测染液（Applied Cell:AC-1001023）染色5min；

3.2.4 洗涤：dH2O洗去多余的染料，软骨球呈深蓝色。

切片染色：

3.2.1、复水：将诱导分化的软骨球切片浸泡在100% (vol/vol) 乙醇中2 × 5 min， 95% (vol/vol) 乙醇中 1 × 2min，70% (vol/vol)乙醇中1 × 2 min；

3.2.2、用流动的水冲洗30s；

3.2.3、成软骨染料染色5min；

3.2.4、用dH₂O洗去多余的染料；

3.2.5、脱水：浸泡在95% (vol/vol) 乙醇中2×5min，在100% (vol/vol) 乙醇中2×5min;

3.2.6、用二甲苯清洗3 × 2 min；

3.2.7、用中性树胶封片，用显微镜观察并拍照。

4.诱导成软骨效果图