大鼠心肌细胞培养基

大鼠心肌细胞培养基

产品基本信息

产品简介

大鼠心肌细胞培养基是埃泽思生物科技有限公司（Applied Cell^®）开发的一款用于新生大鼠原代心肌细胞分离和培养。在培养过程中，可维持心肌细胞高纯度、高活性培养。

产品内容

相关产品

大鼠原代心肌细胞分离试剂盒（Applied Cell^®: Cat. no.AC-1002017） 

用途：

配合大鼠原代心肌细胞分离试剂盒使用，用于大鼠原代心肌细胞分离培养

实验准备

A. 使用75%酒精擦拭试验台；

B. 准备酒精灯、酒精棉及用于盛放实验处理后大鼠的垃圾袋；

C. 剪刀、镊子、微型镊子等解剖用具需提前进行灭菌处理；

D. 吸取适量Wash Buffer至培养皿中并放置于冰上（细胞房内操作）。

注意：细胞房和超净工作台需提前进行紫外灭菌处理；培养皿大小的选择取决于实

验时所取心脏的数目，Wash Buffer一直放于冰上保持低温。

E. Rat Cell Dissociation Solution在4℃融化，分装，放-20℃长期保存，不要反复冻存。

F. 培养板用Ready-to-use GelⅠ提前60min包被。（6孔板：1ml/孔；10cm dish:7ml/孔）

操作方法

1. 取心脏

A. 左手捏住大鼠背部皮肤，使用酒精棉（75%酒精）擦拭小鼠胸腹，用解剖剪在小鼠剑突处正中线偏左向上剪开，略压胸骨，使心脏自然跳出，用弯镊子勾住心脏根部，取出心脏，置于盛有预冷Wash buffer的培养皿中。

B. 在解剖镜下使用微型镊子和解剖剪剪去心房。

2. 组织清洗：经酒精擦拭后，将培养皿移入细胞房超净工作台，用预冷的Wash buffer清洗3次，去除血污后，将心脏剪成约1mm³的组织块，再清洗2次。

3. 预消化

加入1-3ml Rat Cell Dissociation Solution ，37℃水浴中摇动，消化1min后弃上清。

4. 消化

A.在50ml离心管中加入5ml Rat Cell Dissociation Solution，37℃水浴中摇动消化7min后将上清液加入预冷的5ml Rat Cardiomyocytes Culture Medium中，混合均匀并置于冰上，保持低温。

注意：每次Rat Cell Dissociation Solution使用的量可根据组织块的多少进行调整。

B. 重复4.A的步骤直至组织完全消化。

注意：吸取上清时尽量避免吸出沉淀。

C.将收集的上清在室温下1260rpm，离心5min，轻轻吸除上清，用Rat Cardiomyocytes Culture Medium重悬细胞。

5. 差速贴壁：

细胞通过70um/100μm滤网过滤，并通过以下方式进行差速贴壁，

A、直接接种到培养板中；

B、接种到使用Ready-to-use GelⅠ包被培养板上；

A、B选择一种方法进行差速贴壁即可，放入细胞培养箱（37℃，5%CO₂）中孵育60min-90min，进行差速贴壁；

此时，使用Ready-to-use GelⅡ 包被培养板，以备后续细胞铺板使用。

注意：孵育时间根据不同品牌培养板贴壁能力不同，贴壁时间可以做出适当调整。因为不同品牌培养板贴壁能力不同，B选项进行包被，可以提高细胞贴壁比例。

6. 细胞铺板：

取出差速贴壁培养皿，将上清细胞悬液移入15ml离心管中，1260rpm，离心5min，轻轻吸除上清，用已经预先加热至37℃的1-2ml Rat Cardiomyocytes Culture Medium重悬细胞。利用血细胞计数板进行细胞计数，用台盼蓝检测细胞存活率。根据所计的细胞数使用Rat Cardiomyocytes Culture Medium进行稀释调整细胞浓度，将细胞移至预先使用Ready-to-use GelⅡ包被好的培养皿/板中。

7. 观察

将培养板放入细胞培养箱中培养24h后观察细胞状态，若细胞状态佳且浓度合适，则可进行后续实验

细胞形态图

                大鼠心肌细胞荧光染色图 200×