大鼠心肌细胞培养基
产品名称 | Applied Cell®大鼠心肌细胞培养基 |
货 号 | AC-1001036 |
规 格 | 500 ml |
保存条件 | 2℃ to 8℃ |
使用范围 | 大鼠原代心肌细胞培养 |
保质期 | 12个月 |
产品基本信息
产品简介
大鼠心肌细胞培养基是埃泽思生物科技有限公司(Applied Cell®)开发的一款用于新生大鼠原代心肌细胞分离和培养。在培养过程中,可维持心肌细胞高纯度、高活性培养。
产品内容
试剂 | 规格 | 数量 | 保存 | 运输 |
大鼠心肌细胞培养基 | 500 ml | 1瓶 | 2-8℃ | 冰袋 |
相关产品
大鼠原代心肌细胞分离试剂盒(Applied Cell®: Cat. no.AC-1002017)
用途:
配合大鼠原代心肌细胞分离试剂盒使用,用于大鼠原代心肌细胞分离培养
实验准备
A. 使用75%酒精擦拭试验台;
B. 准备酒精灯、酒精棉及用于盛放实验处理后大鼠的垃圾袋;
C. 剪刀、镊子、微型镊子等解剖用具需提前进行灭菌处理;
D. 吸取适量Wash Buffer至培养皿中并放置于冰上(细胞房内操作)。
注意:细胞房和超净工作台需提前进行紫外灭菌处理;培养皿大小的选择取决于实
验时所取心脏的数目,Wash Buffer一直放于冰上保持低温。
E. Rat Cell Dissociation Solution在4℃融化,分装,放-20℃长期保存,不要反复冻存。
F. 培养板用Ready-to-use GelⅠ提前60min包被。(6孔板:1ml/孔;10cm dish:7ml/孔)
操作方法
1. 取心脏
A. 左手捏住大鼠背部皮肤,使用酒精棉(75%酒精)擦拭小鼠胸腹,用解剖剪在小鼠剑突处正中线偏左向上剪开,略压胸骨,使心脏自然跳出,用弯镊子勾住心脏根部,取出心脏,置于盛有预冷Wash buffer的培养皿中。
B. 在解剖镜下使用微型镊子和解剖剪剪去心房。
2. 组织清洗:经酒精擦拭后,将培养皿移入细胞房超净工作台,用预冷的Wash buffer清洗3次,去除血污后,将心脏剪成约1mm3的组织块,再清洗2次。
3. 预消化
加入1-3ml Rat Cell Dissociation Solution ,37℃水浴中摇动,消化1min后弃上清。
4. 消化
A.在50ml离心管中加入5ml Rat Cell Dissociation Solution,37℃水浴中摇动消化7min后将上清液加入预冷的5ml Rat Cardiomyocytes Culture Medium中,混合均匀并置于冰上,保持低温。
注意:每次Rat Cell Dissociation Solution使用的量可根据组织块的多少进行调整。
B. 重复4.A的步骤直至组织完全消化。
注意:吸取上清时尽量避免吸出沉淀。
C.将收集的上清在室温下1260rpm,离心5min,轻轻吸除上清,用Rat Cardiomyocytes Culture Medium重悬细胞。
5. 差速贴壁:
细胞通过70um/100μm滤网过滤,并通过以下方式进行差速贴壁,
A、直接接种到培养板中;
B、接种到使用Ready-to-use GelⅠ包被培养板上;
A、B选择一种方法进行差速贴壁即可,放入细胞培养箱(37℃,5%CO2)中孵育60min-90min,进行差速贴壁;
此时,使用Ready-to-use GelⅡ 包被培养板,以备后续细胞铺板使用。
注意:孵育时间根据不同品牌培养板贴壁能力不同,贴壁时间可以做出适当调整。因为不同品牌培养板贴壁能力不同,B选项进行包被,可以提高细胞贴壁比例。
6. 细胞铺板:
取出差速贴壁培养皿,将上清细胞悬液移入15ml离心管中,1260rpm,离心5min,轻轻吸除上清,用已经预先加热至37℃的1-2ml Rat Cardiomyocytes Culture Medium重悬细胞。利用血细胞计数板进行细胞计数,用台盼蓝检测细胞存活率。根据所计的细胞数使用Rat Cardiomyocytes Culture Medium进行稀释调整细胞浓度,将细胞移至预先使用Ready-to-use GelⅡ包被好的培养皿/板中。
7. 观察
将培养板放入细胞培养箱中培养24h后观察细胞状态,若细胞状态佳且浓度合适,则可进行后续实验
细胞形态图
![大鼠心肌细胞荧光染色图 200×B.jpg 大鼠心肌细胞荧光染色图 200×B.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/201909/uepic/c66d0927-1c45-402b-8388-6d2b8f707bd9.jpg)
大鼠心肌细胞荧光染色图 200×