人间充质干细胞成脂分化试剂盒

人间充质干细胞成脂分化试剂盒

产品基本信息

产品简介

人间充质干细胞成脂分化试剂盒是埃泽思生物（Applied Cell^®）自主研发的一款用于人间充质干细胞分化成脂的试剂盒，可用于骨髓、脐带、脂肪等组织来源的间充质干细胞的成脂分化。本产品仅限于科学研究，不能用于临床诊断、治疗，以及其他用途。

产品内容

产品特性

l 诱导分化程序简单便捷。

l 诱导成脂细胞效率高。

操作方法

1. 相关材料

• Xeno-Free人间充质干细胞培养基（Applied Cell^®:AC-1001003）

• 人间充质干细胞成脂分化试剂盒（Applied Cell^®:AC-1001029）

• 成脂检测染液（Applied Cell^®:AC-1001022）

• Xeno-Free细胞消化液（Applied Cell^®:AC-1001024/1001025）

•磷酸盐缓冲液(1×PBS) （Applied Cell^®: Cat.AC-1001037） 

2.实验准备

人间充质干细胞成脂分化培养基的配制

2.1在2-8℃解冻人间充质干细胞成脂分化添加剂，轻晃摇匀；

2.2 随后将添加剂加入到人间充质干细胞成脂分化基础培养基中（10ml 添加剂与90mL基础培养基彻底混合）混匀，即为人间充质干细胞成脂分化培养基。人间充质干细胞成脂分化培养基可在2-8℃稳定储放2周。

注意：人间充质干细胞脂肪维持添加剂只能在2-8℃解冻，待添加剂加入到培养基以后，请用培养基润洗添加剂瓶1-2次，因添加剂量较少可防止添加剂粘附在试管壁上造成损失。

3. 实验操作

诱导成脂（以6孔板为例）

3.1 将传代或复苏冻存的人间充质干细胞接种到6孔板上，密度为2×10⁵ -3×10⁵ cells/cm²或2×10⁵ -3×10⁵ cells/孔，置于37℃，5% CO₂培养箱中培养；

3.2 当人间充质干细胞融合度达到80-90%时，开始诱导脂肪前体细胞分化。吸掉 Xeno-Free人间充质干细胞培养基，每孔加1ml预热PBS清洗一次，吸掉PBS，加入2 ml人间充质干细胞成脂分化培养基，以此记为第0天；

注意：人间充质干细胞成脂分化培养基使用前需预热至37℃。

3.3 每1-2天更换人间充质干细胞成脂分化培养基；

3.4 第5-6天可以看到少量脂滴；

3.5 第9-14天待脂肪滴颗粒成熟即可进行拍照，染色。（根据情况诱导时间可适当延长）

注意：1.培养基每1-2天换液。由于随着脂肪细胞的成熟，pH的降低会观察到培养基变黄。pH从7降到6.5，细胞增殖会变慢。pH在6.5到6时，细胞活力会降低。所以诱导后期，需要每天换液。

2.换液时尽量不使培养基变干，培养基变干会降低细胞层对培养皿表面的粘附。

3.细胞分化效果和供体有关。供体的年龄是一个因素。有研究发现与年长者相比，年轻供体来源的细胞的分化能力更强。

      1天            5天             13天

4. 成脂检测染液染色

4.1每6ml成脂染液加入4ml蒸馏水制成染色工作液，混匀室温放置5-10分钟。加入蒸馏水后，染液会有片状结晶析出，可用直接使用或滤网过滤除掉结晶。

4.2脂肪诱导分化结束后，吸掉原有培养基，用1×PBS冲洗1-2次。每孔加入适量细胞固定液， 固定20 min。

4.3吸掉细胞固定液，用1×PBS冲洗2次。，加入适量染色工作液，使染液完全覆盖脂肪滴，室温染色15min。

4.4吸掉染色工作液，用1×PBS冲洗2-3次。

4.5将培养板置于显微镜下观察脂滴染色效果，拍照。

注意：染色后显微镜观察，及时拍照。如果时间过长，脂肪滴会发生破裂。

间充质干细胞在成脂后染色前（D）和染色后（E）的照片（400×）