一种新的研究方法的诞生,大多是为了弥补现有技术的不足。反相液相色谱法能解决多种分析应用问题,但对极性和亲水性化合物很少或无法保留保留。如果使用正相液相色谱法,用己脘或环已脘来分析这些物质也存在一些局限性,很多极性和亲水化合物往往很难溶解,从而限制了NPLC的应用范围。在此基础上,诞生了一种新的解决办法—亲水作用液相色谱(HILIC)。在HILIC色谱柱上,物质的洗脱顺序与RPLC恰恰相反,在RPLC柱上很难保留或根本不保留的物质,在通常的实验条件下,它们在HILIC柱上有较强的保留。恒谱生USHA C18-A色谱柱适用于分离强极性和亲水性化合物,含碳量10%,ph值2-8范围内,孔径、粒径、柱长多种规格可选。 HILIC柱的固定相是亲水的,并且通常在一定pH范围内是带电荷的。亲水性越强的化合物,被保留的时间越长。和大多数其他液相色谱技术不同的是:HILIC的部分流动相是作为固定相的一部分来起作用的。色谱柱使用一段时间后会发现一些问题,比如柱效下架、分离效率变差等。当你发现HILIC柱出现分离效率变差、保留时间改变和校准曲线偏离等现象时,很可能色谱柱保留了一些不希望保留的物质,而使柱容量改变了。 如果柱压升高,常常是因为样品基质中的某些组分形成沉淀,堵塞了色谱柱入口的多孔滤片。恒谱生建议使用强缓冲液或盐溶液在低流速下反向冲洗色谱柱来部分恢复柱子的性能。如果是柱效下降,可以考虑是否是死体积太大导致降低柱效。为减小死体积,色谱系统里所有的连接管线应尽可能的短。但是为了将峰加宽减至最小,且不降低柱效,用减小系统中连接各部件的所有管线内径来减小死体积的效果是很有限的,这样柱反压会增大,并且会造成意外管线堵塞等。恒谱生PEEK管线具有优异的耐化学能力和生物可兼容性,PEEK管线能够耐受卤化盐类、强缓冲液、强活性的流动相的侵蚀,适用范围广。 本文简单介绍了一些HILIC的特点,更多色谱资讯可查看恒谱生官网:https://www.hplcs.cn/。
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2022.03.05
可以说,色谱柱是色谱分析过程中最重要的部分,相当于人体的“心脏”。根据自己要分析的样品去选择合适的液相色谱柱,需要考虑不同参数将会造成什么影响,比如粒径、酸碱性、极性和分子量大小等。即使是液相色谱柱也分很多类型,比如正相、反相、C18柱、亲水性色谱柱等等。只有了解影响分析柱性能的因素,才能结合目标分析物的性质、需要达到的分析效果及实验室条件来选择适合的色谱柱。 在设定选择样品分析的HPLC方法时,首先需要根据化合物的分子量大小,极性大小等因素选择合适的分离模式,在适当的分离模式下去选择合适的色谱柱及流动相。在很多色谱分析中涉及的化合物样品绝大部分都可以使用反相分离模式,恒谱生有许多可用于反相分离的液相分析柱,比如USHA C18、 USHA C8、 USHA C4、 USHA苯基柱、USHA氰基柱等。 影响反相键合相色谱柱性能的因素有哪些呢? 一、硅胶纯度 硅胶纯度对峰形有很大液相,硅胶杂质和残留的金属离子会影响样品的峰形,如果硅胶表面的金属含量高会影响碱性化合物的峰形,易发生拖尾。恒谱生USHA C18色谱柱以全覆盖的键合硅胶为填料,具有优异的稳定性、重复性、高选择性和高分离度等特点。 二、颗粒形状及粒径 球形颗粒柱效高、重现性好、柱床结构均匀;不规则的颗粒柱床结构不均匀、流动相线速度不均匀,容易形成谱带展宽;平均颗粒直径,粒径越小,柱效越高,柱压也越高。粒径分布越广则柱效越低,压力越大。恒谱生色谱填料均采用球形形状,列如USHB Sil色谱柱采用高纯度球形硅胶,金属杂质<10ppm,具有柱效高和峰形好等特点,可用于分离极性和碱性的有机化合物。 三、颗粒表面积 相对而言,高表面积对样品具有较强的保留能力,更大的柱容量和分离度。而低表面积能更快达到平衡状态,更适合梯度洗脱程序。 除了以上这些因素,还有诸如键合类型及键合相、碳覆盖率等因素影响。单体键合方式可以提高传质速率,缩短柱平衡时间;聚合体键合方式可以增加色谱柱稳定性,增加载样量。键合相的不同会直接影响化合物的保留行为。而高碳覆盖率可以提高分辨率和重现性,但分析时间长。
参数原理
2022.03.05
色谱工作者都知道固定相的选择对样品的分离起着重要作用,采用的固定相也是不同的,正相色谱采用极性固定相(如聚乙二醇、氨基与腈基键合相),反相色谱一般用非极性固定相(如C18、C8),离子交换色谱中的固定相是各种离子交换剂等。 早期使用最广泛的是10-15μm固定相的填料,到今天HPLC的固定相已经从不规则颗粒发展到球形颗粒。HPLC固定相发展历程: 六十年代,薄壳型填料,分离效率提高; 七十年代,稳定化学键合固定相,高速、高效和更大样品容量,应用范围扩充; 八十年代,生物色谱填料; 九十年代,高通量及手性色谱柱,针对环境、化学、生物医药的专用色谱柱。 HPLC固定相基质应用大约75%都是硅胶,聚合物约占20%。恒谱生有多款液相色谱柱产品是采用硅胶基质,比如USHB C18、USHB Sil、USHA Sil等,其中USHA C18-G是恒谱生新研发有机硅胶混合基质的新一代ods柱,拥有硅胶类C18所特有的优异分离选择性、具有卓越的耐酸碱性、低压、耐久性、良好峰形显示和重现性等优点,对各类化合物都能发挥有效作用。在强酸强碱或者高温环境下,对比一般的c18色谱柱使用寿命达数倍以上,是各类胰岛素物质的首要选择,广泛用于分析各种极性物质和疏水性物质。 HPLC固定相的新进展 HPLC色谱柱拥有众多优势,因此它在生物技术领域的应用前景广阔,涵盖基因组学、蛋白质组学、代谢组学和药物基因组学等专业领域。总之,不论是何种类型的固定相仍在不断的探索完善之中,从发展的趋势看,寻求各种高分子材料作为新型色谱固定相前景光明。
新品
2022.03.05
色谱用户最期望的液相色谱分析:zui高的分辨率、zui大可达到的灵敏度、最快的分析速度。可以说,又快又好,是每个行业都追求的目标。为了这个目标,诞生了超高效液相色谱 (UPLC) 法,与传统的HPLC相比,UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍,它缩短了分析时间,同时减少了溶剂用量降低了分析成本。 除了以上这些,uplc还有哪些优势或者不同呢? 尺寸大小 与HPLC分析柱4.6 mm 内径 X 250 mm 长的尺寸相比,UHPLC 色谱柱通常更短更窄,大概在2.1 mm 内径 X 50 mm 长。色谱柱的长短会影响分离的效果,通常情况下色谱柱长度越长,压力越高,分离效果越好,分析时间越长。粒径越小,压力越高,分离效果越好,越容易堵。色谱柱的长度选择,可根据自身操作需求来决定,恒谱生现有多种类型的色谱柱可供选择,覆盖了最广泛的应用和条件,让您的工作更轻松、更高效。 工作压力 与正常分析范围的高效液相色谱 (5000 -6000 psi) 相比,UPLC 系统能够处理高压 (15,000- 18,000 psi)。UPLC能运用粒径低于2μm的小颗粒达到增加效能的目的,小颗粒的填料需要系统能承受较高的压力,因此uplc的系统是超高压的。这样的超高压情况下,对于色谱配件的要求也是更高的。UPLC需要1.7μm小颗粒填料的色谱柱、低系统体积的输液单元、能够承受高达15000Psi的系统压力等。针对uplc这样的超高压色谱系统,恒谱生精心研发出适用于超高压液相色谱系统,耐压可达15000psi,死体积小、低背压、不易堵、耐腐蚀性好、不漏液的色谱在线过滤器。精心设计的产品细节及构造保证在实验过程中产品不轻易分离、解体。 分析时间 使用UPLC确实能明显缩短分析时间,提高效率,比如某有关物质分析方法,使用HPLC运行一针是75分钟,UPLC可以在10分钟内完成,分析效率提高将近7.5倍。 降低成本 高效液相色谱是一项昂贵的分离技术,不仅仪器本身价格很高,一些日常耗材消耗也非常高昂,比如色谱柱、高纯度级溶剂等等。采用UPLC可节省一定的运营成本,因为与分析型高效液相色谱相比,色谱运行可以在更短的时间内以更低的流速完成。“时间就是金钱”,在这里也是说得通的。 液相色谱法已成为制药、化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。其中,超高效液相色谱法的出现对中药研究领域的发展是一个极大的促进。中药的组分复杂,分离困难等问题都可以通过超高效液相色谱法逐渐解决。在同样条件下,UPLC能分离的色谱峰比HPLC多出一倍还多。在同样条件下,UPLC的分辨率能够认出更多的色谱峰。21世纪是科学的世纪,相信液相色谱法的应用领域会更广阔。
参数原理
2022.03.04
液相色谱系统是一个封闭的系统,从最开始的溶剂瓶一直到末尾的废液瓶,期间是保持完全封闭的,流动相在系统内应该是流动不会发生漏液或者外部气体进入系统内部发生漏气的现象。但是这是理想的液相系统,现实操作中还是会发生一些小问题、小故障从而产生漏液或者漏气的现象。 漏液的原因主要有以下几种情况: (1)接头处漏液 一般是色谱柱接头处漏液,可能是由于接头损坏、松动、接口不匹配等情况而造成漏液。这时只要检查接头是什么问题,就差不多了。接口损坏可以替换新的,松动就拧紧,如果是不匹配的问题,应用色谱柱配套的接头或者选用peek接头,适配性高。恒谱生PEEK螺纹色谱柱堵头接头通用且可重复使用、几乎兼容所有品牌色谱柱,低死体积连接,耐化学性不能与溶剂发生反应。恒谱生色谱柱接头系列有: PEEK 1/16“、1/8“、1/4“ 螺纹连接头,零死体积PEEK内/外螺纹连接两通;不锈钢1/16“、1/8“、1/4“ 螺纹连接头,不锈钢无死体积内/外螺纹连接两通;PEEK / 不锈钢压环。 (2)泵漏液 泵头漏液一般都是由于密封不好引起的,首先要排查单向阀和接头是不是松动了,但是调整时也不能拧太紧,避免相互磨损造成损坏。 (3)进样阀漏液 转子密封圈磨损太厉害或者已经损坏了而造成密封不严。这样的情况只能重新安装或更换进样阀。还有因为废液管产生虹吸或者堵塞,造成废液逆流的情况。此时需要保持废液管高于废液液面,或者更换、疏通废液管,保证废液排放正常。 说完了漏液,接下来就到了漏气部分。漏气是外部的气体进入仪器流路内部形成了气泡。为什么会漏气呢?主要有以下这些原因: (4)吸滤头 溶剂吸滤头在抽取溶剂时,在流路管中有不规则但持续的小气泡产生,如果已经进行了脱气步骤,要注意吸滤头是不是被污染或者有损坏了。溶剂过滤器是实验室中常用的装置,主要应用于流动相过滤。恒谱生溶剂入口过滤器可以防止流动相中的微小颗粒进入HPLC系统。恒谱生不锈钢溶剂过滤头不会将空气引入系统,无气泡进入流动相管路,储液瓶溶剂抽取利用率可达99%以上,大大减少瓶底溶剂因无法净真空吸取而造成的浪费。 设有多阶管路接头,兼容多种内径溶剂流动相管路,不需要更换吸滤头即可匹配不同规格的管线。 (5)透明流路管 指的是在过滤头和输送泵之间的那一段管路。有些工作人员操作失误导致整个管线中全是空气,输送泵明明正常工作了但是流动相瓶里的液体一点也没少。这主要是因为仪器长时间不用,管路中的液体会彻底干掉,充满空气的管路和充满液体的管路不仔细看是分辨不出的。这种情况对于输送泵很危险,会对泵造成不可逆转的损坏。 液相色谱仪广泛应用于各种生物、制药分析、化学领域,对于它的一些故障和问题是操作人员时刻要学习的,了解它才能让仪器的作用颇大程度的发挥,从长远节约成本上看,提前避免故障可以有效保养色谱仪器,更长久的使用。
操作维护
2022.03.04
制药行业一直是高效液相色谱法的重点应用领域,高效液相色谱法被广泛运用于鉴别、杂质检查、含量测定、体内分析等药物分析测试与药物质量分析方法的建立。比如用高效液相色谱法可以测定合成药及其制剂的含量,消除药物中的杂质、制剂中的附加剂及共存药物的干扰。 《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)是药品研制、生产、经营、使用和监督管理等均应遵循的法定依据。所有国家药品标准应当符合中国药典凡例及附录的相关要求。2020版药典对0512高效液相色谱法中的色谱条件参数的可调整项及可调整范围做了详细规定。 固定相 不得改变填充剂的理化性质,如填充剂材质、表面修饰及键合相均需保持一致;从全多孔填料到表面多孔填料的改变,在满足上述条件的前提下是被允许的。允许使用核壳型固定相色谱柱。 填料粒径(dp),柱长(L) 改变色谱柱填充剂粒径和柱长后,L/dp值(或N值)应在原有数值的-25%至+50%范围内,一定范围内,允许调整色谱柱填料的粒径和柱长。 恒谱生USHA、USHB和USHC手性系列液相色谱柱,具有高分离度、高选择性、稳定性和重复性优异等优点,适合各种化合物分离,色谱填料有有1.8、2、3、5、7、9、10μm等粒径可供选择,色谱柱柱长从30mm-250mm不等。恒谱生USHC手性系列液相色谱柱可应用大多数手性化合物的分离,优异的分离度和耐久性,大幅降低分析到大量制备的初期成本。 流速 如果改变色谱柱内径及填充剂粒径,可按下列公式计算流速: F2=F1x[(dc2²xdp1)/( dc1²xdp2)],在此基础上根据实际使用时 系统压力和保留时间调整。其中,等度洗脱zui大可在±50%的范围内调整;梯度洗脱除按上述公式调整外,不得扩大调整范围。一定范围内,允许调整色谱条件中的流速。 进样体积 调整以满足系统适用性要求,如果色谱柱尺寸有改变,按下式计算进样体积: Vinj2=V inj1x(L2xdc2²)/(L1xdc1²),并根据灵敏度的需求进行调整。 梯度洗脱程序(等度洗脱不适用) te2=tcax (F/F2) >[(Lxd2)/(Lxdc1)],保持不同规格色谱柱的洗脱体积倍数相同,从而保证梯度变化相同,并需要考虑不同仪器系统体积的差异。允许根据色谱柱规格进行调整梯度洗脱程序,但要保证不同规格色谱柱的洗脱体积倍数相同,保证梯度变化相同。 流动相比例 最小比例的流动相组分可在相对值±30%或者绝dui值±2%的范围内进行调整(两者之间选择zui大值);最小比例流动相组分的比例需小于(100/n) %,n为流动相中组分的个数。可适当调整流动相组分比例,以保证系统适用性复合要求,并且最终流动相洗脱强度不得弱于原梯度的洗脱强度。一定范围内允许调整流动相比例。 流动相缓冲液盐浓度 可在±10%范围内调整,一定范围内,允许调整缓冲盐浓度。 除此之外,2020版药典还规定:除另有规定外,通常取各品种项下的对照品溶液,连续进样5次,其峰面积测量值(或内标比值或其校正因子)的相对标准偏差应不大于2.0 %。且该要求可视进样溶液的浓度或体积、色谱峰响应和分析方法所能达到的精密水平等,对标准偏差的要求进行放紧或放宽,放宽或收紧的范围以满足品种项下检测需要的精密度要求为准。新增了对定性分析(利用保留时间定性、利用光谱相似度定性、利用质谱检测器提供的质谱信息定性)的详细解释。新增了多维液相(中心切割式二维色谱和全二维色谱)的测定法等等。 2020年版《中国药典》自2020年12月30日起实施,它的颁布与实施将有利于整体提升我国药品标准水平,进一步保障公众用药安全,推动医药产业结构调整,促进我国医药产品走向国际,实现由制药大国向制药强国的跨越。
参数原理
2022.03.04
首先我们要知道UHPLC 是什么,它的全称是超高效液相色谱(Ultra-High Performance Liquid Chromatography),是色谱分离科学中的一个全新类别与新技术。在制造技术、扩散体积和耐受压力方面进行了优化,采用小颗粒的固相,增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量,很大限度的发挥色谱性能。 色谱仪器作为一种精密仪器,一些不正确的操作或者忽视的实验步骤,会导致仪器分析效果的不佳,甚至对仪器造成伤害。其中,最多出现的一些柱压、漂移和峰型异常的问题,比如鬼峰、肩峰、峰型不准等。 故障1:出现肩峰 可能是样品浓度太高,有浓度超载的情况。可以用流动相配样,总的样品体积小于一峰的15%。如果样品溶剂过强则采用较弱的样品溶剂。也可能是出现了色谱柱塌陷的问题,如果出现了柱塌陷可以更换色谱柱或者打开进液端,用和柱填料相同的固定相修补。也可能是由于样品中有一个和它极性非常接近的物质,两者没办反完全分离,所以就出现了肩峰的状况。 故障2:出现鬼峰 对于等度色谱来说,出现鬼峰的原因主要是回收流动相、过载和沉淀、流路产生;对于梯度色谱,主要原因是溶液中有杂质的情况以及样品中含蛋白质。很多情况下鬼峰的出现都是由于杂质颗粒物、蛋白质沉淀物和化学污染物引起的。在市场上有多款产品主要是针对固体颗粒物的拦截,但是对引起鬼峰出现的有机污染物却不能起到拦截效果。恒谱生精心研发出一款鬼峰捕集小柱可以有效吸附去除系统中的极性较弱的杂质,从而防止系统中的杂质峰对目标峰的干扰。其安装在梯度混合器和进样器之间,不仅能够去除流动相中的杂质,还可以有效的去除管路和混合器中的杂质。 故障3:出现峰拖尾 出现峰拖尾的现象情况有很多,比如样品进样量过大,或者是样品浓度太高导致柱超载,这时应该降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相。 也可能是死体积或柱外体积过大,色谱柱柱效下降、柱头塌陷等情况,可以更换合适的色谱柱,或者在色谱柱前加一个保护柱。恒谱生分析/制备保护柱可以起到截留导致色谱柱筛板堵塞、柱头塌陷和柱效下降的化学物质和颗粒物。样品和流动相的过滤可以维护保护柱对化学污染物的吸附容量,能够更长时间的维护柱效。
操作维护
2022.03.03
恒谱生建议各位色谱操作者在进行液相色谱分析前,关注样品过滤的重要性,这是为什么呢?主要是为防止蛋白质等杂质沉积在色谱柱上,上柱前需对生物样品进行去蛋白的预处理。这样可以延长色谱柱寿命并减少维护成本,从而有助于提高实验室通量。 脱蛋白对于分析生物液体(例如血浆,血清,尿液和脑脊髓液)中的抗生素,残留农药含量等也起着非常重要的影响。并且如果不将沉淀的蛋白质从样品中去除,会导致色谱柱性能下降,最终影响色谱分析结果的准确性。 生物样品中去除蛋白质的处理方法有3种: 利用蛋白质脱水沉淀。采用有机溶剂如乙腈、甲醇等,或中性盐如硫酸铵、硫酸钠等使蛋白质脱水而沉淀。采用乙腈时,产生的沉淀易分离。当用1~3倍体积的有机溶剂时,可使90%以上的蛋白质沉淀。将血浆样品和乙腈混合、离心后,约95%的蛋白质会沉淀。非极性蛋白质(例如白蛋白)则保留在液相中。如果使用保护柱除去剩余5%的蛋白质,则可以直接注射上清液。长期使用时,需要将保护柱进行更换或倒置并冲洗掉,以防止蛋白质进入主柱。 恒谱生建议在色谱柱前加保护柱,可以对样品和流动相进行过滤,能够更长时间的维护色谱柱柱效并有效保护色谱柱,延长色谱柱的使用寿命。恒谱生色谱保护柱经设计优化,在各种分离条件下对色谱的影响都极低。其低死体积设计可大幅降低峰扩散和峰拖尾,从而保持分离度和分析效率。耐压上限可达15,000 psi,经济高效地保护了HPLC、UHPLC色谱柱和制备柱产品,发挥良好性能。 我们有多种型号的保护柱,有直连保护柱、旋转式保护柱,有UPLC、分析保护柱和半制备、制备保护柱,它们结合了不锈钢的强度和PEEK 预填柱芯的方便和高效。更好的满足客户的多种需求。 利用蛋白质形成不溶性盐沉淀。常用的为酸性沉淀剂,如三氯醋酸、高氯酸等,或用重金属离子等使蛋白质沉淀。 用三氯乙酸酸化,离心并用氢氧化钠中和可除去99%的蛋白质。也可以使用全氯乙酸。 其他方法。加热使蛋白质沉淀,适用于样品对热稳定者。可将样品置沸水浴中,使蛋白质直接变性生成沉淀。或采用超滤和透析方法,除去体液样品中的蛋白质,在处理过程中样品内蛋白质并未变性,结合的待测成分未能被解脱出来而不能检出,此法可测得血清或血浆中游离的待测成分的浓度。但费时,在分析大量的样品时,受到一定的限制。
参数原理
2022.03.03
什么是固定相?简而言之就是在色谱分离中固定不动、对样品产生保留的一相。固定相的选择对样品的分离起着重要作用,有时甚至是决定性的作用。不同类型的色谱采用不同的固定相,如气-固色谱的固定相为各种具有吸附活性的固体吸附剂;气-液色谱的固定相是载体表面涂渍的固定液,液相色谱中的固定相为各种键合型的硅胶小球,离子交换色谱中的固定相为各种离子交换剂,排阻色谱中的固定相为各种不同类型的凝胶等等。以下,恒谱生将简单带大家了解一下固定相的不同类型以及它们有什么特点。 正相色谱 正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强。 正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团胺基团,如(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如正已烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。恒谱生有多款正相色谱柱,比如Diol、SiL色谱柱等,可以用于分析碱性有机化合物,如维生素、类固醇以及其它许多药物分子等。 反向色谱 反相色谱柱填料极性弱,洗脱顺序由强到弱。 反向色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。 色谱柱是HPLC分离过程中的核心,而反相色谱柱其分析能力强,常作为分析柱的首要选择。恒谱生 C18 色谱柱在选择性,梯度和等度条件上都有出色峰形;更高的分离度、灵敏度和重现性;更宽的 pH 耐受性,适合分析各种类型的化合物。除此之外,恒谱生还有多种不同类型的液相色谱柱可供选择,比如C4、C8,ODS等色谱柱。 离子交换色谱 离子交换色谱法的固定相为离子交换剂,常用的有离子交换树脂和化学键合离子交换剂。经典离子交换色谱法的固定相为离子交换树脂,其缺点是易于膨胀,传质较慢,柱效低。不耐高压。 亲和色谱 亲和色谱也称为亲和层析,是一种利用固定相的结合特性来分离分子的色谱方法。将一对能可逆结合和解离生物分子的一方作为配基(也称为配体),与具有大孔径、亲水性的固相载体相偶联、制成专一的亲和吸附剂,再用此亲和吸附剂填充色谱柱,当含有被分离物质的混合物随着流动相流经色谱柱时,亲和吸附剂上的配基就有选择地吸附能与其结合的物质,而其他的蛋白质及杂质不被吸附,从色谱柱中流出,使用适当的缓冲液使被分离物质与配基解吸附,即可获得纯化的目的产物。它可以用来从细胞提取物中分离纯化核酸、蛋白,还可以从血浆中分离抗体。 总之,不论是何种类型的固定相对于手性异构体的拆分以及蛋白质和多肽大分子的分离仍在不断的探索完善之中,生物科学在进步,相信未来有关色谱固定相的研究会越来越完善与开拓新的方向。恒谱生作为色谱耗材的高科技制造商,也将助推色谱行业发展,为广大的色谱工作者提供高品质的色谱耗材产品。
参数原理
2022.03.03
中国有句古话“民以食为天”,在吃上面,中国人可谓是“登峰造极”。现代快节奏的生活,很多年轻人忙于工作没时间自己做饭,从而促进了速食食品市场的蓬勃发展。有机构数据显示,淘宝、天猫平台2020年方便速食市场总成交额达213亿元,市场规模可观。《2021中国食品消费趋势白皮书》显示,2021年包装食品、自热食品、预制菜肴等品类仍将加速成长,代餐、功能食品等聚焦健康的细分品类将获更多关注,整体消费市场持续革新。 人们的生活水平不断提高,不仅市民对食品安全及营养健康非常关注,国家对营养及食品问题也十分重视。卫生部于2011年11月2日,公布了我国第yi个食品营养标签国家标准——《预包装食品营养标签通则》(GB28050-2011),指导和规范营养标签标示。《预包装食品营养标签通则》包括营养成分表、营养声称和营养成分功能声称。食品安全国家标准《预包装食品营养标签通则》规定,预包装食品营养标签应向消费者提供食品营养信息和特性的说明。 食品上的标签通常包含有关以下营养参数的信息: 维他命 蛋白质 矿物质 碳水化合物 膳食纤维 脂肪类 胆固醇 HPLC在食品标签中的作用 HPLC技术可对复杂食品基质中存在的成分定性定量分析。它是符合营养标签要求的理想选择: 维生素 维生素 (Vitamin) 是人和动物为维持正常的生理功能而必须从食物中获得的一类微量有机物质,在人体生长、代谢、发育过程中发挥着重要的作用。维生素大致可分为两大类:脂溶性和水溶性。C18色谱柱可为多种脂溶性维生素提供通用的分离方法。恒谱生C18色谱柱是制备纯化样品的理想选择,在确保良好峰形的同时,硅胶较高比表面积能够承载更高的样品量,并且有高的保留能力和分离度。C18是在高纯硅胶基质上键合更具通用性的C18官能团的色谱柱,专研的封尾技术使得色谱柱对离子化的化合物几乎无吸附。此外,均一的粒径保证了流动相稳定的流动,并且确保色谱柱有着较低的柱压。 水溶性维生素通常使用离子配对剂对此类极性成分进行分析,以缩短保留时间。 糖类 HPLC适用于乳及乳制品。根据待测糖的种类,通过改变流动相乙腈溶液的浓度,可以扩大适用范围。 蛋白质类 蛋白质的结构单元是氨基酸。可采用反向高效液相色谱柱对常见的氨基酸进行有效的分离分析,与其他的分析氨基酸方法相比,反向高效液相色谱法在检测时间上有所减少。 胆固醇 目前,胆固醇的定量分析方法主要包括:比色法、薄层层析法、气相色谱法、高效液相色谱法及酶法等。其中高效液相色谱法的检测方法为样品经无水乙醇-氧化钾溶液皂化,石油醚和无水乙醚混合溶液提取,甲醇溶解定量后,采用高效液相色谱仪测定,外标法定量。 HPLC作为强大的分离技术,在确定食品营养标签上的营养参数方面起着非常重要的作用。
应用实例
2022.03.01
流动相被称为HPLC系统的生命线,它起着至关重要作用:将样品输送通过分离柱,然后输送至检测器以鉴定分离出的成分。流动相通常很少是单一的溶剂,它是水与有机溶剂相组合制成,比如水与极性溶剂的缓冲液或有机溶剂按所需比例混合组成。常用的两种操作模式是: 等度洗脱—在等度模式下,流动相的组成在整个分析过程中保持不变。即混合物中溶剂的比例是预先确定的,并且在分析过程中只使用这一种流动相溶剂。 梯度洗脱—通过软件以预定模式通过分析运行改变组成,运行结束时溶剂的比例与初始比例不同。 在进行色谱分析时,等度洗脱和梯度洗脱各有优势和劣势。使用不同溶剂混合物的目的是获得所需的流动相极性,以实现样品的完全混溶,并控制样品组分与固定相的相互作用,以在最短的时间内实现分离出的组分峰的所需分离度。 为了达到所需的目标,流动相应具有以下基本功能: 1、样品应完全溶于流动相。任何不溶的情况都会导致流量限制。注入系统之前,务必检查样品在流动相中的溶解度。 2、流动相成分应该是无毒无害的。它们不应对操作员构成健康危害。 3、流动相应对样品成分和固定相呈惰性。任何反应都可能导致形成不溶的悬浮液,从而导致色谱柱堵塞。色谱柱一旦堵塞的话会造成峰宽展,对色谱柱的使用寿命也有影响。 一些肉眼无法看到的化学物质,也可能造成色谱柱的堵塞。因此可以在色谱柱前添加一个保护柱,截留导致色谱柱筛板堵塞、柱头塌陷和柱效下降的化学物质和颗粒物。 恒谱生色谱保护柱的卡套中内含保护柱芯,柱芯内含有填料。这些填料的存在可以拦截样品中的一些强保留、强酸性和强碱性物质,防止它们对色谱柱内填料的污染和损坏。恒谱生保护柱死体积少,在保护色谱柱的同时,对比于其他保护柱,它能够大大减少柱外效应带来的谱带展宽;减少流路扩散,提高色谱柱分析灵敏度和分离度;更低的柱芯成本。因此使用液相色谱保护柱,可以对色谱柱进行保护,是保护色谱柱很好的方式。 4、与检测器兼容性好,流动相在通过检测器时不应给出自己的响应。换句话说,检测器信号应仅反映样品成分的响应。但是,这不适用于对包含洗脱化合物的流动相的整体折射率变化做出响应的整体性质检测器,例如折射率检测器。 5、粘度要低。因为高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质,降低柱效,还会使柱压降增加,使分离时间延长。 HPLC技术在不同领域中具有广阔的应用前景,越来越多的领域应用到各种HPLC技术。色谱操作员应该控制好操作条件(包括流动相的一致性)将确保结果的可重复性。
参数原理
2022.03.01
在上期文章中,我们讨论了HPLC和GC的不同之处—气相色谱(GC)和高效液相色谱(HPLC)有何不同?在这期文章中我们将讨论HPLC和GC之间相同的功能,再一次深入学习他们之间的共通性。 1.基本原理相同 分离混合物的成分,对其进行识别和定量是这两种技术的共同基本目标。相同点就是:它们都是利用物质在流动相和固定相中分配系数不同而分离的。 2.流动相的作用 HPLC和GC仪器使用时都需要用到流动相,流动相起着相同的作用:将需要检测的组分以顺序的方式运输到检测器。虽然它们按照相同的原理运行,但需要注意:HPLC使用液体作为流动相,而GC使用气体作为流动相。想了解其他流动相相关文章,可查看—为什么hplc流动相溶剂要过滤和脱气?hplc级溶剂在hplc分析中的重要性(点击可查看原文) 3.样品分析 GC和HPLC都能够分析液体和溶解的固体混合物。可能有新手不了解,GC如何分析液体的混合物?主要采用液体捕集的方法,用对分析物具有良好溶解性的溶剂对气态样品进行起泡吸收法收集过;分析物对该溶剂的亲和性高于其对气态基质的亲和性。对于易分解、热不稳定或者在气态下易于吸附到金属表面的挥发性分析物,有时采用HPLC的分析效果更好。采用HPLC分析气体样品必须进行样品捕集。分析气体样品必须进行样品捕集。对于气体样品,我们可以使其通过固体载体,然后使用可溶性液体进行洗脱,或者将其通入可捕获分析物的液体。 4.色谱图 GC和HPLC色谱图看起来相似,色谱图解析基本也是一致的。横轴保留时间是特征,一个保留时间对应一个物质。纵轴电信号对应的是浓度。 5.应用软件是通用的 大多数色谱仪器制造商都提供通用的HPLC和GC应用软件,因为峰分析和数据处理是通用的。 6.仪器组成 比如会用到进样器,色谱柱,检测器等相同的仪器配件。如果要分离的成分较多较为繁琐,可采取自动进样器节约时间和人工成本。HPLC和GC虽都要使用到色谱柱,但是色谱柱的类型与填充的填料是不一样的。气相有填充柱、毛细管柱;液相有正相色谱柱、反相色谱柱等。 GC和HPLC都是色谱分析实验室的基础,了解它们之间的差异可以便于我们按照它们的特性来选择使用,了解相似之处可以让我们具体操作时灵活变通,高效完成色谱分析工作。深圳市恒谱生科学仪器有限公司是致力于研发制造高质量色谱耗材的高科技生产厂家,我们的战略合作伙伴客户遍布化工、制药、生物、医疗、食品、材料、环保、农业、检验、科学研究等行业。
参数原理
2022.03.01
气相色谱(gas chromatography 简称GC)是分离和鉴定低分子量气体或挥发性液体的理想技术,它在工业、农业、国防、建设、科学研究中都得到了广泛应用。气相色谱可分为气固色谱和气液色谱。高效液相色谱法的原理与气相色谱法的原理相同。但是气相色谱不适用于不挥发物质和对热不稳定物质,而液相色谱却不受样品的挥发性和热稳定性的限制,有些样品因为难以汽化而不能通过柱子,热不稳定的物质受热会发生分解,也不适用于气相色谱法。这使气相色谱法的使用范围受到了限制。 清楚了解这两种分离技术之间的区别非常重要,以便您可以为所需的分离选择颇佳技术。本文重点介绍了这两种技术之间的主要区别。 流动相 HPLC中使用的流动相是液体,而在气相色谱法中则是气体。由于液体的密度和粘度较高,因此要使用泵来给流动相推动压力通过HPLC色谱柱,因此液相色谱的背压通常很高,比如超高压液相色谱。背压太高会对液相系统造成负担,因此适当的控制在合适的压力程度,有助于我们分析测试的正常运行。恒谱生的液相色谱柱、保护柱、在线过滤器等都能做到低背压,死体积小,避免对分析结果造成影响。 分析物的性质 在HPLC上分析的样品通常不耐热,并且在较高温度下会降解,而在GC中,溶质可承受高达400℃的温度,并且具有挥发性。用于HPLC分析的样品通常是液体或溶解在液体中的固体。除液体和溶解的固体外,GC还可以处理气体。GC样品的分子量较低,而HPLC可用于分析涵盖从高分子量聚合物到大型生物分子的一系列样品的高分子量化合物。 色谱柱大小 与气体相比,液体的密度和粘度更高,因此HPLC色谱柱通常较短且较宽。典型尺寸为10或25厘米,φ为0.46。 但是更大的色谱柱也已用于制备规模的应用,比如φ10、20、30的制备液相色谱柱。 恒谱生有各种直径大小的分析、制备液相色谱柱可供选择,柱管由316L不锈钢制成,不锈钢柱内壁多经过抛光,减小管壁效应,提高柱效的同时还能做到平衡时间短,高流速,低背压,缩短分析时间,节约溶剂,降低成本。 另一方面,由于气体密度较小且粘度较低,因此GC中建议使用更长的内径较窄的色谱柱。毛细管柱的长度可以达到几米。 工作温度 由于化合物的热不稳定特性,HPLC操作通常在环境温度下进行,比如操作时将液相色谱柱放入恒温箱中使用。而气相色谱柱操作的环境温度并不苛刻。 工作压力 由于液体具有较高的密度和粘度,因此对于常见的分析分离,需要在5000 – 6000 psi范围内的较高压力。UHPLC系统能够在15,000 – 18,000 psi的范围内运行。GC色谱柱中的载气要求在150 – 200 psi范围内的较低压力即可。
参数原理
2022.02.28
要回答这个问题,首先来了解一下什么叫流动相。简而言之,流动相就是载体,将物质带到固定相里并通过固定相的流体。流动相可以是缓冲液与有机溶剂结合的水-有机混合物,也可以是有机-有机混合物。 开始使用流动相溶剂进 行色谱分析前,一定要检查溶剂是否完全混溶,这是非常重要的,其次是要关注它们在混合时是否会相互反应,如果发生化学反应,会影响流动相的使用和色谱的正确分析。 有些色谱工作者可能会说,那我采用HPLC级溶剂可以直接使用吗?恒谱生建议,即使是HPLC级溶剂也要在使用前进行过滤!为什么呢?主要是有些悬浮颗粒或杂质是细微米的,人的肉眼是无法观测到的,我们不能判断一个清澈的溶剂就一定“完全干净”。就好比我们使用自来水,也看着很干净是不是?但是其实里面包含很多其它的不溶物质等。如果你在进行色谱分析时不将悬浮颗粒和杂质去除,会影响HPLC系统的性能。不仅如此,因为色谱柱是多孔结构,颗粒物很可能将色谱柱堵塞,背压升高,影响流速甚至损坏泵,因为一时的图方便而造成了色谱柱损坏就得不偿失了。 说完了过滤,现在又来说脱气。我们都知道液相色谱系统里是超高压运作的,若流动相中所含的空气不除去,则流动相通过色谱柱时其中的气泡受到压力而压缩,流出柱子进入检测器时因常压而将气泡释放出来,会造成检测器噪声增大,使基线不稳,最终导致仪器不能正常工作,特别是梯度洗脱时特别明显。 如何很大程度地减少此类情况的发生呢?恒谱生建议您: 流动相使用前一定要用过滤器过滤,这是很重要的!恒谱生溶剂入口过滤头可有效滤除流动相中的固体颗粒杂质;未经过滤的溶剂或溶剂瓶中生长的微生物都会降低溶剂入口过滤头的寿命和泵的性能,因此,需要定期清洗或更换溶剂入口滤头。溶剂入口过滤头由高品质316L不锈钢制成,耐腐蚀,适用于大部分溶剂。滤头顶端阶梯式连接出口可分别于1.5mm,2.2mm,3.5mm内径的管路连接。款式型号多种,可供选择。 使用前新鲜准备流动相。应每次分析前新调配流动相,不要让流动相过夜或者长时间存放。这样很容易滋养微生物等。 在色谱柱前添加使用保护柱进行过滤,避免色谱柱堵塞。恒谱生液相色谱保护柱能将那些强保留的、不可吸附的化合物截留下来。样品和流动相的过滤可以维护保护柱对化学污染物的吸附容量,能够更长时间的维护柱效,保护色谱柱免受污染物的危害,在额定背压值内和在高流速中仍保持稳定、无渗漏。
操作维护
2022.02.28
误区1:HPLC 柱不可以反冲 这是不正确的。通常情况下液相色谱柱所设计的耐压值是远高于极限的操作压力。换柱时反冲可以清洗柱头一些具有强吸附性质的物质,我们冲洗出这些残留物质也是为了防止压力增大。但是如果你购买的色谱柱在柱头使用了大粒度的填料,这时你反冲会冲出这一部分填料。因此你要先检查一下自己使用的液相色谱柱再选择是否反冲。 误区2:所有的C18(L1)色谱柱都是一样的 这是不正确的。在早期的HPLC体系中,C18是独一反向色谱的键合固定相,因此C18就作为了反向色谱柱的标准。但是时代不会一直停滞脚步,人们对于科学的追求与理解愈发深刻,更多的固定相出现了,诞生了许多C18色谱柱。虽然同样是选用硅胶作为基体,但各自都有自己特定的填料键合合成工艺,因此色谱性能也不相同。所以单纯的因为名称都是C18色谱柱,想当然觉得性能都一样是不对的。 误区3:色谱柱里一旦进入空气就会损坏 我们都知道当色谱柱不与色谱仪连接的时候,需确保色谱柱被紧紧地密封。但是在实际应用中,即使色谱柱的端部进入了少量的空气也不是很严重的事情。当色谱柱连接到色谱仪上使用时,在系统初始加压阶段,在很短的时间内空气就会被溶剂挤压排出。所以,不要因为色谱柱进入了少量空气就认为色谱柱已被损坏。 误区4:保护柱是没必要的 这也是误区,其实使用保护柱有很多好处。HPLC的移动相中常使用各种试剂,其中会混有一些不溶解物质或不纯物质。多数不溶物通过使用筛板或膜滤器过滤移动相可以除去,但极细小的粒子还是无法完全过滤。此外在移动相调制之后,还有通过空气、容器、人体等有不溶物、不纯物落入的可能性。这些不溶物、不纯物质会污染柱、或使堵塞、或给分析带来不良影响等。这时通过在色谱柱前安装分析保护柱可以防止其产生,能起保护色谱柱的作用。相较于更换一根昂贵的分析柱,添加或更换保护柱只需要很少的花费。恒谱生液相色谱保护柱几乎无死体积、便于更换,适用于UHPLC系统的高压,将那些强保留的、不可吸附的化合物截留下来。样品和流动相的过滤可以维护保护柱对化学污染物的吸附容量,能够更长时间的维护柱效,延长色谱柱的使用寿命。 误区5:反相色谱柱不可以使用纯水相 这也是不正确的,有些色谱工作者在使用低有机溶剂含量或者纯水作为反相色谱柱的流动相时,发生相塌陷的现象,所以有些人认为反相色谱柱不可以使用纯水相。但事实上市场上销售的反相色谱柱(如极性嵌入和极性封端柱)都是具有水浸润性的,其表面特性是允许使用纯水的,不会导致塌陷或者保留时间移位。 误区6:色谱柱填料粒径越小、压力越高,分离效果越好 色谱柱性能的好坏不能单纯用填料是否是超小的粒径以及超高的柱压来评估。现代对于色谱柱的柱特性研究越来越深入,已经研发了一些能够提高色谱柱柱效的方法。例如,采用新的表面多孔材料的色谱柱,其柱效与sub-2µm UHPLC柱效一样好,与常规的LC填料色谱柱比起来,柱压很低。 误区7:柱压不会影响色谱分离效果 近年来,柱压的问题引起了很多色谱工作者的注意,柱压是色谱的很多参数都是受柱压影响的,包括部分溶质的摩尔体积、停滞体积、柱孔隙度、保留因子、流动相密度、介电常数、固定相结构、pH值和电离常数等。当色谱柱在约2000psi(13.789MPa)压力下运行时,即使保留时间上存在小差异,也并不会引起我们的注意;特别是如果重复性较好及定量不受影响的时候。但是,当柱压接近2000psi(13.789MPa)时,柱压的影响可能就相当明显了。 近几十年来,液相色谱法被广泛应用于生命科学领域,药物分析,食品分析,环境监测等领域,人们对于液相色谱法的不断研究,也诞生出更多的液相色谱应用以及解决方法等,相信未来液相色谱法的应用领域会更加广阔。
操作维护
2022.02.28
大家都知道HPLC色谱柱的寿命是有限的,在使用过程中随着时间的推移,其性能开始下降。你可以通过峰形和峰形之间的分离,柱背压的不规律增加以及重影峰的出现来判断HPLC色谱柱的性能出现了下降。色谱柱是昂贵的色谱耗材,平常使用完毕后需要保养。如果色谱柱真的发生了性能下降,有什么方法可以恢复呢? 首先,如果色谱柱由于过载或使用不兼容的流动相而结垢,是可以恢复的,但已经损坏的色谱柱或已经过使用寿命的色谱柱无法恢复,需要更换。 色谱柱还原程序如下,供大家参考: 反相柱 反相分离是大多数HPLC分离中使用的主要操作模式。填料主要由C18,C4,CN,NH2和苯基固定相组成。建议以水-乙腈-异丙醇-庚烷-异丙醇-乙腈-流动相的顺序用10至20倍体积的溶剂洗脱 正相柱(氨基,二醇,硝基,氨基固定相) 用20倍体积的溶剂冲洗,按照庚烷-异丙醇-乙腈- 水-异丙醇-庚烷的顺序。 GPC / GFC色谱柱 用5倍体 积且PH值为3的0.1%磷酸盐缓冲液冲洗。如果使用了保留力强的蛋白质,则使用从水到乙腈再到水的60分钟梯度液冲洗。 色谱柱在使用前都要对其性能进行考察,使用期间或放置一段时间后也要重新检查,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。柱性能指标包括在一定实验条件下(样品、流动相、流速、温度)下的柱压、理论塔板高度和塔板数、对称因子、容量因子和选择性因子的重复性,或分离度。进行柱效比较时,还要注意柱外效应是否有变化。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外,在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是颇佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。 恒谱生色谱柱柱管由不锈钢制成,不锈钢柱内壁多经过抛光,减小管壁效应,提高柱效,柱中填充键合硅胶或聚合物填料。色谱柱基于高纯硅胶,采用独特键合技术,具有优异的峰形,灵敏性好。基质金属含量低,对所有类型的分析物均表现完好峰形。机械强度高,稳定性好,质控严格,确保色谱柱性能和色谱柱的使用寿命。有多种尺寸规格可供选择以适应色谱工作者及其使用的不同需求。我们有专业的技术工程师团队为您的需求提供解决方案,欢迎前来咨询了解!
操作维护
2022.02.26
高效液相色谱法在临床实验室中对不同体液中生物标志物的分离和定量起了重要作用。HPLC与其他常规检测器(例如UV,荧光和电化学检测器)相比,更趋向于质量敏感检测。填充材料技术的进步,例如亚微米表面多孔二氧化硅颗粒已经被引入了超高压液相色谱中,在不遇到高背压的情况下提高了分离效率。 高效液相色谱仪的系统压力较高,色谱柱是产生系统压力的主要部件,高背压会影响很多方面比如反压太高超过流通池的耐受压力,会导致流通池的损坏。恒谱生液相色谱柱均一的粒径保证了流动相稳定的流动,并且确保色谱柱有着较低的柱压。 恒谱生分析保护柱也具有低背压,不漏液,死体积少等优点,能够减少液相色谱系统内的部分压力。 除此之外,其他先进技术的引用与结合,在不同程度上优化了液相色谱分析工作方法,例如高效的自动进样器,减少检测器的细胞体积以及数据收集和分析的改进等等。很多实验室每天需要生成数百个样本的多个参数的报告,这些方法都能节约工作时间与提升工作效率。 临床实验室通常处理数百种生物流体样本,例如血液,尿液和其他体液。需要有效的提取过程与快速分析相结合,才能快速处理如此繁重的工作,但又不影响分析的质量,患者的治疗方法与报告的准确性有很大关系,因此快又准的报告是重中之重。 本文简要讨论了临床实验室中一些常见的HPLC分析应用。 生物样品需要事先处理和加工,以消除来自其他成分的干扰,尤其是在血液等液体的情况下。采用溶剂萃取,超滤和固相萃取等方式可防止对检测产生干扰并且可防止色谱柱内部堵塞。预防色谱柱堵塞还可以借助一些液相分析耗材配件的帮助,比如在色谱柱前添加预柱(保护柱)起到过滤颗粒物,化学物,杂质等作用。这些污染物会污染色谱柱、堵塞色谱柱,恒谱生建议在色谱柱前安装分析保护柱可以起保护色谱柱、防止堵塞、延长色谱柱的寿命等作用。 除了安装保护柱,还可以安装在线过滤器来防止色谱柱堵塞,恒谱生在线过滤器由洁净的高品质不锈钢部件组成,这些过滤器旨在减少色谱柱入口筛板的污染和堵塞问题。 儿茶酚胺 儿茶酚胺是一种含有儿茶酚和胺基的神经类物质。儿茶酚胺充当神经递质和肾上腺激素。去甲肾上腺素,肾上腺素和多巴胺是可用于诊断是否患有帕金森氏病,高血压和肌营养不良。以前依靠使用电化学或荧光检测法检测尿液或血浆样品中的儿茶酚胺含量,而使用HPLC检测是一种便捷的新分析方法。 维他命 维他命在人体生长、代谢、发育过程中发挥着重要的作用。维他命在体内是微量的,在除去存在于体液(例如血液和脑脊髓液)中的干扰化合物后,HPLC提供了灵敏且可靠的维他命估算技术。虽然这样分析技术的成本十分高昂,但是由于具有超高灵敏度和快速处理繁重工作量的优势,一些大型临床实验室还是会采用这种技术。 糖尿病监测 糖尿病是以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损,或两者兼有引起。HPLC能准确定量地评估糖化血红蛋白被证明是有效控制血糖的监测技术。即使在收集样本两周后,也可以通过HPLC分析血红蛋白HbA1c在专用纸上收集并干燥的血斑。该方法为患者长期血糖控制提供了高灵敏度的检测。
参数原理
2022.02.26
HPLC系统能否有效运行取决于流动相和样品不受化学杂质或固体悬浮液的影响。对于HPLC流动相的处理和使用注意事项讨论主要围绕在流动相的制备和使用中应采取的措施。对于样品过滤的重要性讨论主要围绕在进样时清洁样品的好处。 HPLC色谱柱是HPLC系统中的重要组成部分,使用时需要细心使用,用完后要维护避免下次使用发生问题。经常更换色谱柱是很昂贵的,因此为了节约成本,需要很大程度地延长色谱柱的使用寿命。同时也要细心维护色谱柱,以便每次获得结果保持准确性和一致性。 由于经常使用色谱柱,化学杂质和固体悬浮液颗粒等会逐渐积累,色谱性能在使用过程中开始下降。流动相或样品中存在的大颗粒杂质开始沉积在色谱柱的入口上,从而干扰流动的均匀性。较小的颗粒会导致背压增加,导致阻塞固定相中的流路。 污染物有哪些? 1、反相分离中高度保留的化合物,例如脂肪酸。 2、不可逆地保留的化合物,如残留的蛋白物质,在样品提取时并未完全去除。解决这个问题可以在HPLC分析之前对样品中的蛋白质进行去蛋白化。 3、颗粒杂质,可能是样品未过滤,系统组件(例如泵或进样器中的密封件)的磨损导致产生颗粒杂质。又或者是进样时溶剂中本身还有颗粒物杂质,没有过滤导致颗粒物质进入系统。建议使用溶剂进样口过滤器,过滤掉微小颗粒物质,避免进入到HPLC系统中。 恒谱生2μ,5μ,10μ,20μm液相色谱仪流动相入口溶剂过滤器,保护泵、单向止回阀 、进样器 、色谱柱免受有害颗粒污染物的损坏;吸滤阻力较小,较大的圆柱形筛板表面积,几乎没有背压;吸滤头尺寸较小,可用于多种小瓶口的存储池容器;不会将空气引入系统,无气泡进入流动相管路,储液瓶溶剂抽取利用率可达99%以上,大大减少瓶底溶剂因无法净真空吸取而造成的浪费;设有多阶管路接头,兼容多种内径溶剂流动相管路,不需要更换吸滤头即可匹配不同规格的吸管;产品兼 容性高,适用于各种品牌的HPLC系统。 4、柱内残留缓冲液,干燥后导致结晶沉淀。使用色谱柱后用HPLC级纯水或缓冲溶液洗涤色谱柱可防止此类盐沉淀的形成。 什么是保护柱? 保护柱是安装在进样器和分析柱之间的,截留导致色谱柱筛板堵塞、柱头塌陷和柱效下降的化学物质和颗粒物。化学物质和颗粒物会污染、堵塞色谱柱,给分析带来不良影响等。这时通过在色谱柱前安装分析保护柱可以防止其产生,能起保护色谱柱的作用。保护柱应与分析柱具有相同的填料,以消除分离的复杂性。保护柱的内部ID应与分析柱相当 ,以最小化背压。保护柱需要定期更换,可根据例如背压增加,峰展宽和峰保留时间的变化来决定更换的周期。 恒谱生建议您可以有效地利用、定期更换色谱保护柱,以延长色谱柱的寿命。
参数原理
2022.02.26
HPLC一般指高效液相色谱,是一种多功能的分析方法,可对各种化合物进行分离和定量。它广泛应用于生命科学领域的应用、药物分析、食品分析、环境监测、精细化工产品分析等众多领域。HPLC的技术都具有基本原理,比如样品引入,色谱柱中样品组分的分离以及使用多种检测技术进行检测。想了解制备型HPLC要先对分析型HPLC进行初步研究,两种技术之间的基本区别是操作规模,下面将重点介绍区别: 明确分析的目标 在进行分析之前,你应该对分析目标有清楚的了解。你是希望获得有关样品成分纯度的信息然后进行定性,还是希望能快速分离、纯化产品。在一种情况下,你可以使用分析型HPLC分离。在另一种情况下,你可以使用制备型HPLC。 规模 在分析型中,样品通量很小,通常为微升水平,而在制备型中,进样量很大,是分析型的几百倍上千倍,从而可以产生毫克至克级的纯化合物。为了达到这个效果,制备型选用的是大流速的泵,粗粒径填料,粗管径的色谱柱,以提高色谱柱的载样量。 尺寸 与分析HPLC柱相比,制备型HPLC柱比较大。分析色谱柱通常直径为4.6mm。恒谱生分析HPLC色谱柱基于高纯硅胶,采用独特键合技术,具有优异的峰形,更好的选择、灵敏性和重要性。基质金属含量低,对所有类型的分析物均表现良好峰形。机械强度稳定性好,质控严格,确保优异的色谱柱性能和延长色谱柱寿命。优势在于:平衡时间短;高流速,低背压;使用寿命长;缩短分析时间,节约溶剂;高柱效,分离度佳。 而制备色谱柱的内径通常在50-200mm的范围内。恒谱生C8、C18、C4制备液相色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。柱管用316L不锈钢制成,不锈钢柱内壁多经过抛光,提高柱效,减小管壁效应。广泛应用于医药、环境和食品等多个领域,满足从实验室分析到工业大规模制备的不同需求。 与制备色谱柱相比,分析色谱柱填充的固定相粒径范围在3-5μm之间,而制备色谱柱填充的是大于10μm的较大颗粒。这样的粒径允许更高的塔流速,较长的长度和较宽的色谱柱直径可提供较低的背压。 进样方式 运用分析色谱分析时通常涉及多种的样品进样量,因此自动进样器是首要选择的进样方式。相反,在制备分离中,样品数量很少,甚至可能只有一个样品只是进样量较大,因此可以使用大体积进样环。 探测器选择 由于分析要求,通常只将非破坏性检测器(例如UV,荧光或折射率检测器)用于制备级应用。与分析色谱分离相比制备色谱样品进样量大,因此检测器具有更大的流通池。
操作维护
2022.02.25
对于液相色谱仪这种需要全天运转分析的仪器而言,长时间地运行很容易会产生故障。所以可以提前先采取一些预防性的维护措施,减少仪器出故障的几率,保证系统正常运转。就好比在制药和食品行业中会定期质检把关产品质量,液相色谱系统也需要定期检查。在使用液相色谱仪时,也应该定期检查,排查问题,避免一些故障的发生导致影响分析结果的准确性。 流动相 流动相是HPLC的生命线。我们通常用高纯度等级的溶剂来当流动相,并且使用在线过滤器过滤流动相以除去固体悬 浮液,确保没有固体悬浮颗粒到达色谱柱,并且始终对流动相进行脱气处理。恒谱生液相在线溶剂过滤器安装在液相泵和进样器之间,能够去除溶剂中的颗粒物,避免它们进入进样器,从而防止堵塞。色谱柱入口过滤器直接安装在色谱柱前,用于去除来自进样系统和样品的颗粒。 改变流动相时,打开放气阀将较早的流动相完全从流路中清除掉。关闭阀,让流动相通过进样器并冲洗。然后连接到色谱柱上,用新的新鲜流动相洗涤。用新鲜的流动相替换中间洗涤液。 样品制备 HPLC色谱柱价格昂贵,如果在使用和存放时采取预防措施,可以延长色谱柱的使用寿命。我们需要注意始终避免让色谱柱过载。对于分析柱,样品上样量不得超过500μg。同时避免操作条件突然改变,例如压力,流量等。 保护柱将那些强保留的、不可吸附的化合物截留下来。样品和流动相的过滤可以维护保护柱对化学污染物的吸附容量,能够更长时间的维护柱效。分析保护柱作用为预先拦截将被色谱柱牢固吸附,不能被流动相所洗涤的物质。恒谱生建议您可以有效地利用分析保护柱,以延长色谱柱的寿命。 使用完色谱柱要注意清洗,在储存之前,应清除固体盐沉积物和缓冲液,如果要长期储存,请始终将色谱柱储存在制造商建议的溶剂中并关闭端盖。建议在pH2-8范围内使用色谱柱,因为在此范围外,色谱柱会更快地老化。 泵 在合适的流量和压力限制内操作系统,以防止损坏泵的密封件和O形圈。泵不运转时,切勿在系统中留下腐蚀性溶剂或缓冲剂。恒谱生建议定期更换密封件和O形圈,定期对入口过滤器进行超声处理,以防止任何悬浮颗粒阻塞色谱柱。配有流动相的填料泵,可去除早期分析组分的残留物,使用缓冲溶液作为流动相后,运行足够量的水以除去所有的盐沉积物。 柱箱 柱箱保持恒定的温度,可防止峰的保留时间漂移。设定温度应保持在供应商建议的范围内。保持箱内清洁,并定期检查连接,以确保没有空气流向柱箱内。恒谱生液相色谱柱采用不锈钢制成,柱中填充键合硅胶或聚合物填料。有多种尺寸规格可供选择.以适应色谱工作者及其使用的不同需求。 维护良好的HPLC系统可确保连续操作无故障,从而避免故障,并有助于维持较高的样品分析通量。以上是恒谱生的一些关于HPLC系统的预先维护操作建议,总而言之,定期检查液相色谱仪,定期排查问题是必不可少的,液相色谱设备昂贵,需要用心维护才能长久使用下去!
操作维护
2022.02.25
液相色谱柱是由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。柱管的材质有很多,比如聚合物、玻璃、不锈钢等。但是建议柱管用不锈钢材质,因为不锈钢这种金属耐高压、耐腐蚀且硬度高,相比于玻璃等材质不易摔坏。不过当压力不高于70Kg/cm2时,也可采用厚壁玻璃或石英管。对于液相色谱柱柱管内壁要求有很高的光洁度,不锈钢柱内壁会经过多次抛光,这是为提高柱效,减小管壁效应。恒谱生0.1μm高光洁度色谱柱柱管能够快速分析的同时保持超高的柱效;使用寿命长,不仅能够减少频繁更换色谱柱带来的重新进行方法验证、条件摸索等工作,还大大的降低了使用成本;具备优良的选择性和分离能力。 除了抛光,也有在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料来提高内壁的光洁度,其效果与抛光是相同的。色谱柱两端的柱头内装有筛板,通常是不锈钢和peek材质制作的,根据需求选择与色谱柱匹配的柱筛板,孔径取决于填料粒度,目的是防止填料漏出。 柱内径一般是根据柱长、填料粒径和折合流速来确定,目的是为了避免管壁效应。 液相色谱柱的柱长及内径的选择原则是什么?长度的选择:柱越长,总柱效越高(n值越大),柱越长,分析时间也越长。250—300mm是普遍的柱长,实验室一半以上的工作都是采用此规格柱子,一般用来分离l0到50个组份的中等至复杂混合物;500—600mm,要求较高分辨率的应用,—般用来分离大于50个组份或包含有难分离物质的复杂样品程序升温分析。 内径:柱效率与柱半径平方成反比,内径越小柱效越高,但内径越大,柱容量也增加,允许进样量就越多。当进样量超过柱容量时,则因柱内每块理论板内不能建立真正的平衡,将会导致色谱峰畸变,柱分辨率降低,重现性不好。因此对于复杂样品需要准确分离,必须使用小内径柱子。另一方面若样品中存在具有很不相同浓度组份化合物,为了增加样品容量就必须使用内径大的柱子,目前实验室使用常见的柱子内径一般是4.6mm。 分析大分子量化合物选择大孔径色谱柱;对于高pH值或者碱性化合物需要选择高封端或者特殊封端的色谱柱,以改善峰形,延长色谱柱使用寿命等。恒谱生液相色谱柱内径有2.1、3.0、4.6、10mm可供选择,不锈钢材质不易因为磕碰损坏柱管。 以上就是一些关于液相色谱柱柱长及内径的选择原则,供大家参考。 深圳市恒谱生科学仪器有限公司是致力于研发制造高质量色谱耗材的高科技生产厂家,我们在UHPLC超高压在线过滤器、色谱保护柱、液相色谱柱、色谱填料、鬼峰捕集柱、无气泡高净化能力的溶剂滤头、0.1μ高光内表粗糙度柱管等领域具有多年的生产经验和较强大的制造能力。 恒谱生科学仪器的战略合作伙伴客户遍布化工、制药、生物、医疗、食品、材料、环保、农业、检验、科学研究等行业。我们的产品长期出口到欧洲、美国、日本、俄罗斯、加拿大、澳大利亚、东南亚等对本行业产品有着高质量要求的制药、化工科学发达经济体。我们期待与客户们建立更加紧密的战略合作关系,携手共创美好未来!
操作维护
2022.02.25
选择用作HPLC分析流动相的溶剂是色谱分析过程的关键步骤。到现在为止,没有一种能够满足所有分析需求的通用溶剂,而且根据分析要求所使用的溶剂组合会变得更多。选择合适的溶剂是根据其物理性质以及与样品、色谱柱固定相的相容性。 流动相溶剂选择的一般要求是:溶剂应当是高纯度,溶剂与固定相不互溶,并能保持色谱柱的稳定性,建议使用纯水或者液相色谱专用的溶剂;溶剂的性能与使用的检测器应当匹配;溶剂对样品应有足够的溶解能力,样品要完全溶于流动相。如果有不溶的样品将导致流动相分离或悬浮,会导致后续一系列的操作问题;溶剂应具有低的粘度和适当低的沸点;尽量避免使用具有显著毒性的溶剂。 除此之外本文还讨论了选择合适的流动相溶剂的一些其他重要的考虑因素。 成本 成本是一个重要的考虑因素,因为HPLC需要高纯度等级的溶剂,特别在大型实验室中经常看到数十个HPLC系统全天候运行。这意味着每天会大量消耗高纯度的溶剂,因此成本方面的考虑至关重要。想要既符合实验要求又价格比较实惠的溶剂,很多时候都不能同时满足。如果这个时候溶剂还没有充分使用,造成浪费,就更得不偿失了。 恒谱生2μ,5μ,10μ,20μm入口溶剂过滤器吸滤头,不会将空气引入系统,无气泡进入流动相管路,储液瓶溶剂抽取利用率可达99%以上,大大减少瓶底溶剂因无法净真空吸取而造成的浪费。 吸光度 通常,HPLC中使用的检测器基于样品成分对光的吸收。在选定的波长范围内,流动相成分的固有吸光度不能干扰样品的吸光度。理想情况下,流动相溶剂在目标波长范围下没有吸收光线是好的。 挥发性 流动相溶剂应具有低挥发性。高挥发性溶剂可能导致流动相组成在使用和存储过程中发生变化,这会导致色谱图的重现性很差。 黏度 所选的溶剂应具有低粘度让流过色谱柱的流体不会产生高背压。色谱柱背压形成的原因有很多,样品的易吸附机制也可能会和柱前端的硅胶表面游离的硅醇基发生作用导致色谱柱背压升高。如果有颗粒物堵塞柱头也会导致色谱柱背压升高。为了防止色谱柱背压升高,我们可以选择在液相系统中加入在线过滤器,在线溶剂过滤器安装在液相泵和进样器之间,能够去除溶剂中的颗粒物,避免它们进入进样器,从而防止堵塞。HPLC技术对到达检测器的流动相的组成非常敏感,因此必须通过在线过滤器除去溶剂里的固体悬浮液。脱气也是去除任何少量溶解空气的必要条件,否则会导致流量限制或杂散峰。 恒谱生不锈钢在线过滤器安装在泵的出口和进样阀之间,采用滤杯式结构受液面积大,使用寿命长,既可有效的防止颗粒进入系统,又能保证足够的液流。恒谱生液相超高压在线过滤器色谱耗材配件抗腐蚀性好;清洗或更换简便;不易堵塞,寿命产品;死体积少,不漏液,低背压,有多种规格可供选择。 惰性 所选溶剂应对样品组分,色谱柱填充物和色谱柱材料呈惰性。如果与这些成分中任何一种有反应性都可能导致形成沉淀物,气体或其他反应产物,从而破坏系统性能。溶剂与样品接触后不应形成单独的相。换句话说,应该与溶剂完全混溶。 恒谱生科学仪器有限公司是致力于研发制造高质量色谱耗材配附件的高科技生产厂家,我们在无气泡较高净化能力的溶剂进样过滤器、超高压在线过滤器、较少死体积色谱保护柱与卡套、0.1微米高光洁度色谱柱柱管、鬼峰去除柱、管路接头等领域具有十多年丰富的生产经验和较强大的制造技术能力。
参数原理
2022.02.24
液相色谱仪除了日常维护保养外,使用高纯度溶剂不仅能保护液相系统,也能增加结果的可靠性。HPLC级表示化学试剂的纯度,是可在高效液相色谱中使用的试剂的纯度,制备色谱法、平行分析或梯度分析需要使用到不同的HPLC级试剂。 样品在注入液相系统前,必须选择一种合适的HPLC溶剂。在反相高效液相色谱中,当样品溶剂与流动相的洗脱强度有差异,尤其是前者的洗脱强度较强时,就会产生峰的变形及柱效的降低。解决该问题最有效的方法是使用流动相作为溶剂溶解样品,这样既可以避免样品溶剂和流动相之间任何强度或粘度的不匹配,也可以减少样品分析时基线的漂移。溶剂在流动相中起着重要的作用,并有助于将进样品通过分离柱后输送到检测器。为了满足不同的分析要求,可以购买不同纯度等级的溶剂来使用,HPLC分析需要使用高纯度的溶剂,但是同时也要考虑成本和实用性等方面。 HPLC级溶剂的纯度通常超过99.9%,并且瓶身标签上还会标明其他杂质的含量。但是杂质会导致多余的峰,从而干扰色谱图中的主峰,对我们的分析结果产生干扰。杂质产生的原因有很多,可能溶剂纯度不够,可能是瓶身不干净或者软管不干净,还可能是溶剂吸滤头的过滤杂质效果不好。恒谱生不锈钢流动相进样口过滤器能安全有效地保护泵和止回阀,尺寸小,适用于各种品牌的HPLC系统和多种小瓶口的存储池容器。吸滤阻力较小,几乎没有背压和形成空化,兼容多种流动相管路,无需换吸滤头即可配不同规格的吸管,过滤微粒污染物效果好,无气泡,溶剂利用率高。 在整个紫外线可见波长范围内,没有溶剂是100%透明的,常用的HPLC溶剂在一定波长范围内显示出透明性。大多数应用中会使用紫外线检测器,因此所选的溶剂应该尽可能具有低的紫外线截止波长,让大多数的样品组分在高于截止值的波长处显示出可测量的吸收度。除此之外,溶剂的粘度越高,填充柱中固定相的阻力将导致背压越高,因此所选溶剂也应具有低粘度才是比较理想的。 大多数的溶剂在密封瓶中才能维持它的稳定性,但某些溶剂的保存期限有限。使用时要注意查看使用期,注意在有效期内使用,不要购买过多的溶剂避免用不完产生了浪费行为。 作为建议,所有溶剂在使用前通过进样口过滤器过滤并脱气,这样的预防措施将提高HPLC系统的使用寿命,也有助于增加分析结果的可靠性。
参数原理
2022.02.24
液相色谱仪动辄几十万,是非常昂贵的仪器,不仅是仪器本身昂贵,仪器耗材同样也非常昂贵。当你使用液相色谱仪时,某些关键操作因素没注意,损坏色谱耗材事小,损坏昂贵的色谱仪可得不偿失了。本文一一告诉你哪些关键因素需要特别注意!赶紧记下来! 一、仪器本身 除了仪器本身的质量问题意外,对于仪器本身重要的就是校验工作,应定期对仪器进行一次的内部校验,保证仪器的正常可运行状态。 二、操作人员 作为液相色谱仪的使用操作人员,一定要认真学习阅读液相色谱仪的说明书,掌握基础的使用操作注意事项,了解并定期进行仪器的维护保养,懂得一些基础故障问题的发现与处理技巧。色谱仪是昂贵的仪器,很多时候其实就是操作人员的使用不当造成色谱柱不可逆堵塞损坏、系统压力过大、鬼峰异常等故障。使用仪器时要认真,负责,对于操作步骤按部就班,不要嫌繁琐而少做或漏做,使用完仪器后要清洗溶剂滤头,溶剂瓶等,保持下一次的正常使用。 三、操作使用过程中 流动相不过滤 我们要预先除去流动相的杂质、颗粒物和细菌等,因为这些杂质、颗粒物和细菌都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀。并且未经过滤处理的溶剂和溶剂瓶没有及时更换清洗产生的微生物都会降低溶剂进样口过滤头的寿命,还会影响泵的性能。一般是3个月左右进行更换溶剂滤头,或者当你发现没有溶剂或只有很少量的溶剂从管中滴出时,你的溶剂滤头就需要更换了,因为已经堵塞了。 溶剂滤头主要起过滤杂质,颗粒物,细菌等作用,所以长时间的使用会导致堵塞,并且如果溶剂滤头的进样效率不高,也会造成溶剂的浪费。恒谱生2μ,5μ,10μ,20μm溶剂进样口吸滤头保护泵 、单向止回阀、进样器、色谱柱免受有害颗粒污染物的破坏。吸滤阻力较小,较大的圆柱形筛板表面积,几乎没有背压和形成空。吸滤头尺寸较小,可用于多种小瓶口的存储池容器。它不会将空气引入系统,无气泡进入流动相管路,储液瓶溶剂抽取利用率可达99%以上,大大减少瓶底溶剂因无法净真空吸取而造成的浪费。 泵使用工作时 泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完,否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环,最终产生漏液。泵的工作压力决不要超过规定的压力,否则会使高压密封环变形,也会产生漏液。 使用后没有及时清洗泵 流动相中不可以含有任何具有腐蚀性的物质或者杂质,含有缓冲液的流动相不应保留在泵内,尤其长时间停留在泵里。必须在泵中加入纯水将泵充分清洗后保存好,等下次使用。 流动相 流动相应该先脱气,以免在泵内产生气泡从而影响流量的稳定性,如果有大量气泡,泵就无法正常工作了。如果没有流动相流出,又无压力指示怎么办?可能是泵内有大量气体,这时可打开泄压阀,使泵在较大流量(如5ml/min)下运转,将气泡排尽,也可用一个50ml针筒在泵出口处帮助抽出气体。另一个可能原因是密封环磨损,需更换。 以上,就是一些液相色谱仪操作中需要注意的关键因素。当然,液相色谱仪是一个复杂的分析仪器,由许多配件组成,不仅仅只有以上因素需要注意。但是查看说明书,不断学习掌握更多的使用要点,才是正确使用操作液相色谱仪的途径。而且不仅是操作手段的问题,很多时候我们可以借助一些色谱耗材配件来保护我们的仪器,解决很多故障的产生。比如如何避免产生鬼峰?我们可以使用恒谱生鬼峰捕集柱,将鬼峰捕集柱安装在梯度混合器和自动进样器之间,不仅能够去除流动相中的杂质,还可以有效捕集管路和混合器中的杂质。详情可点击查看液相色谱也会“撞鬼”? 深圳市恒谱生科学仪器有限公司是致力于研发制造高质量色谱耗材的高科技生产厂家,我们在UHPLC超高压在线过滤器、色谱保护柱、液相色谱柱、色谱填料、鬼峰捕集柱、无气泡高净化能力的溶剂滤头、0.1μ高光内表粗糙度柱管等领域具有多年的生产经验和较强大的制造能力。恒谱生主要产品系列有保护柱系列、在线过滤器系列、柱前在线过滤器筛板系列、色谱柱柱管系列、色谱柱头筛板系列、溶剂吸滤头系列、气阻系列等。
操作维护
2022.02.24
大家都知道一根色谱柱是比较昂贵的,作为一个色谱耗材,当然是让色谱柱使用寿命尽量延长以降低成本。而影响色谱柱的使用寿命的因素大多的使用时的操作不当导致损坏色谱柱。想让色谱柱用的久,得“好好用”才行! 使用前,做好这三个阶段的操作注意事项: 一、使用前准备: 因为生物的复杂性,样品纯化程度越高,色谱柱的使用寿命就越长,因此样品的预处理是十分重要的。比如溶剂的选择、样品过滤等。我们可以选择色谱专用的纯水作为溶剂,并且使用溶剂进样口过滤器再过滤一次杂质、颗粒物等,这样能更加“纯净”,对延长色谱柱的使用寿命有很大的帮助作用。 使用色谱柱前还要考虑其他的影响因素,如分析物的某些性质同样能影响色谱柱的使用寿命。强酸、强碱性物质和蛋白质类生物大分子,它们能与固定相填料作用,或生成不可逆吸附层,改变填料表面特征,使色谱柱性能发生变化,最终导致分离失效。 二、使用过程中: 避免机械冲击,如果泵启动太快,流速和柱压的瞬间升高,柱床受到冲击,会造成色谱柱损坏; 利用柱箱保持柱温恒定,高于柱温承受的范围,会增加对流动相中化学物质的吸附,还可能改变峰形,降低柱效,造成不可逆性的损伤。 逐渐改变工作流量和压力,切勿进行突然更改。流速过大,压力升高,会引起色谱填料冲垮、塌陷。 在适宜的pH范围内运行,以硅胶作基质的固定相一般要求pH在2.5~7范围内使用。长期在pH>7或pH 避免进行大体积的进样导致色谱柱超载,不要过度用力拧色谱柱,可能会造成损坏。 三、使用后的清洗与储存: 色谱柱使用后要注意清洗,用较强的流动相冲洗,如果还是无法清洗干净,可以采用更强的洗脱剂清洗。 色谱柱清洗完毕后,不要将色谱柱存储在冰箱或热风烤箱中,这可能导致固定相不可逆转的损坏。使用前后轻拿轻放,注意不要磕碰或者用力撞击导致损坏。 即使在采取了建议的预防措施之后,由于色谱柱的使用寿命有限,其性能也会受到影响。您应该定期注意色谱柱的性能,并采取有效措施观察峰形的下降,保留时间的变化,分离度差或出现不需要的峰。 以上就是如何延长色谱柱使用寿命的一些注意事项,但上述是其中一种会影响色谱柱使用寿命的因素,使用前了解色谱柱,看色谱柱说明书,使用过程中小心操 作,让有经验的人指导使用都可以避免色谱柱损坏。
操作维护
2022.02.21
2020年7月29日,市场监管总局关于发布《小麦粉中三聚硫氰酸三钠盐的测定》、《小麦粉及其面粉处理剂中苯甲羟肟酸的测定》、《小麦粉中曲酸的测定》3项食品补充检验方法的公告。原理如下: 样品用甲醇提取,采用高效液相色谱-二极管阵列检测器测定,外标法定量。试样中检出三聚硫氰酸三钠盐后采用液相色谱-质谱/质谱法进行确证。试样中的苯甲羟肟酸用甲醇提取,采用高效液相色谱测定,外标法定量。试样中检出苯甲羟肟酸后采用液相色谱-质谱/质谱法进行确证。 用纯水提取试样中曲酸,采用配有二极管阵列检测器或紫外检测器的高效液相色谱仪检测,外标法定量。 液相色谱法在食品检测中是非常重要的检验手段,高效液相色谱法(HPLC)具有高压、高效、高灵敏度、分析速度快、载流速度快等特点。高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物,这类物质占有机物总数的80%,用高效液相色谱法进行检测可以做到省时省力,极大的提高效率。 还可以用于检测食品本身组成,特别是营养成分,如糖、有机酸、维生素、蛋白质、氨基酸、脂肪的分析;食品添加剂,如防腐剂、抗氧化剂、合成色素、甜味剂和保鲜化学物质的分析;食品污染物,如农药残留和黄曲霉素等的分析等。 在食品检测过程中,色谱耗材作为日常消耗的配件,选择较好质量的耗材配件,对于色谱仪的日常维护保养和提升检测效率有很大的作用。恒谱生耗材能安全有效地保护色谱仪配件,降低项目延误或紊乱的风险,确保更稳定更客观的分析纯化效果,降低流动相通道配件70%以上的损坏成本。我们在无气泡高净化能力的溶剂滤头、UHPLC超高压在线过滤器、较少死体积色谱保护柱、液相色谱柱、鬼峰捕集柱、0.1μ高光内表粗糙度柱管等领域具有多年的生产经验和较强大的制造能力。 现代生活水平与质量有了很大的提升,人们对于食品安全也十分关注,“民以食为天 ”是中国传承了数千年的文化,运用各种科技手段提高食品检测效率与准确度,完善食品的安全检测体系,加强食品安全检测技术水平是未来需要研究的重要课题与目标。
应用实例
2022.02.21
色谱法是一种分离混合物中各组分的分析技术。色谱柱是色谱中使用的仪器的一部分。使用柱的五种色谱方法是气相色谱(GC),液相色谱(LC),离子交换色谱(IEC),尺寸排阻色谱(SEC)和手性色谱。色谱的基本原理可以应用于所有五种方法,今天我们分享其中两种方法——气相色谱柱和高效液相色谱柱。 气相色谱柱 在气相色谱中,流动相是气体。气相色谱柱的长度通常在1至100米之间。气相色谱法(GC):液相固定相结合或吸附到毛细管柱的表面上,或结合到柱内填充的固体载体上。匹配分析物和固定相的极性两者具有相似的极性,固定相的厚度在0.1到8 µm之间,而厚度越厚,分析物的挥发性就越大。 高效液相色谱柱 高效液相色谱(HPLC)是液相色谱的一种。液相色谱柱共有三种基本类型:液-液,液-固和离子交换。液-液色谱柱不那么受欢迎,因为它们的稳定性有限且不方便。在液-固色谱柱中,固定相为固体,分析物吸收到固定相上,从而分析混合物的成分。通常,HPLC在分析柱之前有一个保护柱,以保护并延长分析柱的使用寿命。保护柱的作用是去除色谱柱上不可逆的颗粒物、污染物和分子等。 最常见的HPLC色谱柱由不锈钢制成,也可以由厚玻璃,聚合物(例如聚醚乙酮),不锈钢和玻璃的组合或不锈钢和聚合物的组合制成。采用不锈钢材质的好处有很多,比如不锈钢相较于玻璃这种材质,更加的耐腐蚀,耐高压,耐磨损,使用寿命更长,这样也能很好的降低使用成本。典型的HPLC分析柱长3至25 cm,直径1至5 mm。与GC色谱柱不同,这些色谱柱通常是直的。填充柱的颗粒的典型直径在3至5 µm之间。当色谱柱内部堆积的颗粒直径减小时,液相色谱柱的效率将会提高。 峰或峰展宽会导致色谱柱效率降低。理想的情况将是尖锐的峰被解决。物质在色谱柱中停留的时间越长,将导致峰变宽。加长色谱柱是改善色谱柱中不同物质分离的一种方法。恒谱生色谱柱高流速,低背压,可累加柱效,高柱效、分离度佳,平衡时间短,缩短分析时间,节约溶剂。恒谱生色谱柱管有多种规格尺寸,比如4.6*50、4.6*100、4.6*150、4.6*250等,0.1μ、0.4μ的光洁度可选。 色谱柱通常需要保持恒温,以保持效率。塔板高度和理论塔板数决定了色谱柱的效率。提高效率将是增加板的数量并减小板的高度。 板数可以通过以下公式确定: ñ=大号/ ħ(1)(1)N=L/H 其中L是列的长度,H是每个板的高度。 深圳市恒谱生科学仪器有限公司是致力于研发制造高质量色谱耗材的高科技生产厂家,我们在无气泡高净化能力的溶剂滤头、UHPLC超高压在线过滤器、较少死体积色谱保护柱、液相色谱柱、鬼峰捕集柱、0.1μ高光内表粗糙度柱管等领域具有多年的生产经验和较强大的制造能力。欢迎前来咨询了解!
操作维护
2022.02.21
色谱法从二十世纪初发明以来,经历了整整一个世纪的发展到今天已经成为最重要的分离分析科学,广泛地应用于许多领域,如石油化工、有机合成、生理生化、医药卫生、环境保护,乃至空间探索等。色谱法是分析化学中应用最广泛发展最迅速的研究领域,新技术新方法层出不穷。可以说,这是一个发展极为迅速以及充满挑战的行业,检测方法、新固定相的研究、专家系统、色谱新方法是讨论最热门的发展方向,色谱行业从业者或刚入门的新手,这些基础知识和行业动向可必须要了解! 色谱分析法:色谱法是一种分离分析方法,它利用样品中各组分与流动相和固定相的作用力不同(吸附、分配、交换等性能上的差异),先将它们分离,后按一定顺序检测各组分及其含量的方法。 液相色谱:是一类分离与分析技术,其特点是以液体作为流动相。恒谱生液相色谱耗材系列就是应用在液相色谱仪中的,仪器想要运转,配件可不能少! 气相色谱:气相色谱可分为气固色谱和气液色谱。气固色谱指流动相是气体,固定相是固体物质的色谱分离方法。恒谱生气相色谱气阻,就是应用在气相色谱仪中的。别看它小小的身材,它的作用可是大大的。恒谱生气相色谱耗材气阻透气性好、耐腐蚀、耐高温、坚固耐用、易清洗、寿命长,用于阻流、限流、恒流,检测时使气体匀速稳定通过气路系统,让气相色谱仪能正常工作,更准确的测量气体。 流动相:色谱过程中携带待测组分向前移动的物质称为流动相。与固定相处于平衡状态、带动样品向前移动的另一相。 固定相:在色谱分离中固定不动、对样品产生保留的一相。 柱色谱或平板色谱中既起分离作用又不移动的那一相。 色谱-质谱连用:将色谱法与质谱法联合使用的分析方法。分为气相色谱-质谱联用(GC-MS)和液相色谱-质谱联用(LC-MS)两种。能将气相或液相色谱的高效分离的特点和质谱的高灵敏度检测的优点结合起来,获得更好的分析效果。已广泛应用于分析组分复杂的样品,如环境样品中的农药残留、汽车尾气等的测定。 色谱-红外光谱连用:GC-FTIR广泛应用于天然产物挥发油分析(药用挥发油分析),例如中草药的挥发。油成分一般都很复杂,常常含有异构体,在对其进行结构鉴别时GC -MS具有一定的局限性,而GC-FTIR可以提供准确的信息。还应用于香精香料分析,石油化工分析、环境污染分析(包括毒物检测、废水分析、空气污染物分析、农药分析)等。另外,燃料分析(煤与石油分馏产物的分析)也广泛使用了GC-FTIR联用技术。 专家系统:是色谱学与信息技术结合的产物,由于应用色谱法进行分析要根据研究内容选择不同的流动相、固定相、预处理方法以及其他条件,因此需要大量的实践经验,色谱专家系统是模拟色谱专家的思维方式为色谱使用者提供帮助的程序,专家系统的知识库中存储了大量色谱专家的实践经验,可以为使用者提供关于色谱柱系统选择、样品处理方式、色谱分离条件选择、定性和定量结果解析等帮助。 制备性色谱:目的是分离混合物,获得一定数量的纯净组分,这包括对有机合成产物的纯化、天然产物的分离纯化以及去离子水的制备等。 分析性色谱:目的是定量或者定性测定混合物中各组分的性质和含量。定性的分析性色谱有薄层色谱、纸色谱等,定量的分析性色谱有气相色谱、高效液相色谱等。色谱法应用于分析领域使得分离和测定的过程合二为一,降低了混合物分析的难度缩短了分析的周期,是比较主流的分析方法。在中华人民共和国药典中,共有超过约600种化学合成药和超过约400种中药的质量控制应用了高效液相色谱的方法。 当然,色谱法也有它的局限性。它在定量分析中需要纯制的标准物质;不能准确地解决物质的化学结构问题。不过色谱技术操作较简单,既可用于实验室的科学研究,又可用于工业化生产。并且它与光电仪器、电子计算机结合,可组成各种各样的高效率、高灵敏度的自动化分离分析装置。这充分显示色谱技术的强大生命力,它是近代生物化学发展的关键技术之一。
参数原理
2022.02.18
近几十年来色谱作为一种强大的分离技术与MS等检测手段的联用得到了极大的发展,色谱法的应用可以根据目的分为制备性色谱和分析性色谱两大类。 制备性色谱的目的是分离混合物,获得一定数量的纯净组分,这包括对有机合成产物的纯化、天然产物的分离纯化以及去离子水的制备等。相对于色谱法出现之前的纯化分离技术如重结晶,色谱法能够在一步操作之内完成对混合物的分离,但是色谱法分离纯化的产量有限,只适合于实验室应用。 分析性色谱的目的是定量或者定性测定混合物中各组分的性质和含量。定性的分析性色谱有薄层色谱、纸色谱等,定量的分析性色谱有气相色谱、高效液相色谱等。色谱法应用于分析领域使得分离和测定的过程合二为一,降低了混合物分析的难度缩短了分析的周期,是比较主流的分析方法。 其中液相色谱的应用领域有: 在生命科学领域的应用 氨基酸、多肽、蛋白质、核碱、核苷、核苷酸、核酸(RNA、DNA)等重要的生命物质,可以采用液相色谱仪纯化和分析测定。 药物分析 合成药物的纯化及质量控制,中草药有效成分的分离制备及纯度测定以及临床医学的药代动力学研究中的分离分析都采用液相色谱仪解决。除聚合物外,约80%的药物都能用液相色谱仪进行分离和纯化。 食品分析 食品本身组成,特别是营养成分,如糖、有机酸、维生素、蛋白质、氨基酸、脂肪的分析。 食品添加剂,如防腐剂、抗氧化剂、合成色素、甜味剂和保鲜化学物质的分析。 食品污染物,如农药残留和黄曲霉素等的分析。 环境监测 用于分子量大,挥发性低、热稳定性差的有机污染物的分离和分析。如多环芳烃、酚类、多氯联苯、邻苯二甲酸酯类、联苯胺类,阴离子和非离子表面活性剂、有机农药等。它已成为环境科学领域中重要的分析手段。 精细化工产品分析 对于一些具有较高分子量和较高沸点的有机化合物,如高碳数脂肪族或芳香族的醇、醛和酮、醚、酸、酯等化工原料,以及各种表面活性剂、药物、农药、染料等化工产品,均可液相色谱仪分析。 液相色谱法的应用十分广泛,一台液相色谱仪的价格少则几万元,多则几十万,这么贵的色谱仪如果不好好保养维护,一旦出现了故障损失是巨大的。色谱耗材作为色谱仪经常使用并且更换的配件,选择一款经久耐用、质量有保障的产品对色谱仪的损害也会大大减低。恒谱生液相色谱耗材产品采用不锈钢和PEEK材质制作,耐高温、耐高压、韧性好、过滤精度高。 恒谱生溶剂吸滤头吸滤阻力小,几乎无背压,尺寸小,适合多种小瓶口的存储池容器,使用时无气泡,溶剂利用率可达99%。 深圳市恒谱生科学仪器有限公司是致力于研发及制造高品质色谱耗材的高科技生产厂家。我们的产品包括:液相色谱柱、色谱填料、超高压在线过滤器、色谱保护柱、空柱管、鬼峰去除柱、溶剂过滤器、管路接头等。我们一直不断地提高公司的研发制备能力、优化管理体系, 以便能更好地解决客户在色谱分析纯化过程中面临的困惑,助力客户不断提高产品竞争力。
应用实例
2022.02.18
对于我们普通人来说,色谱一词是陌生而又神秘的。而对于从事科研实验及检测的科学研究者们来说,它却是常年在实验室里相伴的“好兄弟”。色谱又称色层法或层析法,是一种物理化学分析方法,它利用不同溶质(样品)与固定相和流动相之间的作用力(分配、吸附、离子交换等)的差别,当两相做相对移动时,各溶质在两相间进行多次平衡,使各溶质达到相互分离。 色谱法的分类方法很多,最广义的分类是根据流动相的状态将色谱法分类: 在色谱法中,静止不动的一相(固体或液体)称为固定相(stationary phase),运动的一相(一般是气体或液体)称为流动相(mobile phase)。色谱法的最早应 用是用于分离植物色素,现在的色谱法早已不局限于色素的分离,其方法也早已得到了极大的发展,但其分离的原理仍然是一样的,所以我们仍然叫它色谱分析。色谱仪是进行色谱分析的装置,包括检测装置,记录和数据处理分析,具有灵敏感,自动化程度高的特点,有气相色谱仪、液相色谱仪和凝胶色谱仪等,被广泛应用在化学产品。 以液相色谱仪为例,它是由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。色谱仪里的泵和色谱柱等组件是十分脆弱的,如果使用不当会造成损害与故障。除了正确使用色谱仪之外,选择一款好的保护柱也是必不可少的。保护柱是安装在进样器和分析柱之间,通过流动相和样品溶液。它能预先捕集能被分析柱牢固吸附,不能被流动相所洗涤的物质,保护并延长分析柱使用寿命。 恒谱生分析保护柱不漏液,死体积少,低背压;使用方便,柱芯更换简单快捷;采用316L不锈钢和PEEK材料制作而成,具有耐高温、耐化学药品腐蚀等特点。使用恒谱生保护柱能够保护您的分析柱,延长色谱柱的使用寿命,并且能够防止它们被样品和溶剂残渣污染,也可以防止样品出峰受到干扰。 深圳市恒谱生科学仪器有限公司是致力于研发及制造高品质色谱耗材的高科技生产厂家。我们的产品包括:液相色谱柱、色谱填料、超高压在线过滤器、色谱保护柱、空柱管、鬼峰去除柱、溶剂过滤器、管路接头等。我们一直不断地提高公司的研发制备能力、优化管理体系, 以便能更好地解决客户在色谱分析纯化过程中面临的困惑,助力客户不断提高产品竞争力。
参数原理
2022.02.18