辟谣！一些关于HPLC和UHPLC 色谱柱的误区

  误区1：HPLC 柱不可以反冲

  这是不正确的。通常情况下液相色谱柱所设计的耐压值是远高于极限的操作压力。换柱时反冲可以清洗柱头一些具有强吸附性质的物质，我们冲洗出这些残留物质也是为了防止压力增大。但是如果你购买的色谱柱在柱头使用了大粒度的填料，这时你反冲会冲出这一部分填料。因此你要先检查一下自己使用的液相色谱柱再选择是否反冲。

  误区2：所有的C18（L1）色谱柱都是一样的

  这是不正确的。在早期的HPLC体系中，C18是独一反向色谱的键合固定相，因此C18就作为了反向色谱柱的标准。但是时代不会一直停滞脚步，人们对于科学的追求与理解愈发深刻，更多的固定相出现了，诞生了许多C18色谱柱。虽然同样是选用硅胶作为基体，但各自都有自己特定的填料键合合成工艺，因此色谱性能也不相同。所以单纯的因为名称都是C18色谱柱，想当然觉得性能都一样是不对的。

  误区3：色谱柱里一旦进入空气就会损坏

  我们都知道当色谱柱不与色谱仪连接的时候，需确保色谱柱被紧紧地密封。但是在实际应用中，即使色谱柱的端部进入了少量的空气也不是很严重的事情。当色谱柱连接到色谱仪上使用时，在系统初始加压阶段，在很短的时间内空气就会被溶剂挤压排出。所以，不要因为色谱柱进入了少量空气就认为色谱柱已被损坏。

  误区4：保护柱是没必要的

  这也是误区，其实使用保护柱有很多好处。HPLC的移动相中常使用各种试剂，其中会混有一些不溶解物质或不纯物质。多数不溶物通过使用筛板或膜滤器过滤移动相可以除去，但极细小的粒子还是无法完全过滤。此外在移动相调制之后，还有通过空气、容器、人体等有不溶物、不纯物落入的可能性。这些不溶物、不纯物质会污染柱、或使堵塞、或给分析带来不良影响等。这时通过在色谱柱前安装分析保护柱可以防止其产生，能起保护色谱柱的作用。相较于更换一根昂贵的分析柱，添加或更换保护柱只需要很少的花费。恒谱生液相色谱保护柱几乎无死体积、便于更换，适用于UHPLC系统的高压，将那些强保留的、不可吸附的化合物截留下来。样品和流动相的过滤可以维护保护柱对化学污染物的吸附容量，能够更长时间的维护柱效，延长色谱柱的使用寿命。

  误区5：反相色谱柱不可以使用纯水相

  这也是不正确的，有些色谱工作者在使用低有机溶剂含量或者纯水作为反相色谱柱的流动相时，发生相塌陷的现象，所以有些人认为反相色谱柱不可以使用纯水相。但事实上市场上销售的反相色谱柱（如极性嵌入和极性封端柱）都是具有水浸润性的，其表面特性是允许使用纯水的，不会导致塌陷或者保留时间移位。

   误区6：色谱柱填料粒径越小、压力越高，分离效果越好

  色谱柱性能的好坏不能单纯用填料是否是超小的粒径以及超高的柱压来评估。现代对于色谱柱的柱特性研究越来越深入，已经研发了一些能够提高色谱柱柱效的方法。例如，采用新的表面多孔材料的色谱柱，其柱效与sub-2µm UHPLC柱效一样好，与常规的LC填料色谱柱比起来，柱压很低。

  误区7：柱压不会影响色谱分离效果

  近年来，柱压的问题引起了很多色谱工作者的注意，柱压是色谱的很多参数都是受柱压影响的，包括部分溶质的摩尔体积、停滞体积、柱孔隙度、保留因子、流动相密度、介电常数、固定相结构、pH值和电离常数等。当色谱柱在约2000psi（13.789MPa）压力下运行时，即使保留时间上存在小差异，也并不会引起我们的注意；特别是如果重复性较好及定量不受影响的时候。但是，当柱压接近2000psi（13.789MPa）时，柱压的影响可能就相当明显了。

 近几十年来，液相色谱法被广泛应用于生命科学领域，药物分析，食品分析，环境监测等领域，人们对于液相色谱法的不断研究，也诞生出更多的液相色谱应用以及解决方法等，相信未来液相色谱法的应用领域会更加广阔。