β-1,3 葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
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溶液的配制:
1. 试剂一:临用前取 1 支加 1 mL 蒸馏水溶解,用不完的试剂 2-8℃保存 4 周;
2. 标准品:10 mg 无水葡萄糖,临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解,配制成 10 mg/mL 葡萄糖溶液备用,2-8℃保存 2 周。
产品说明:
β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中,催化 β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下,可诱导细胞大量合成 β-1,3-GA,因此 β-1,3-GA 活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。
β-1,3-GA 水解昆布多糖,内切 β-1,3-葡萄糖苷键,产生还原末端,通过测定还原糖生成速率,来计算其酶活性。
![image 2022060712035709087](https://www.shlmai.net/upload/ueditor/image/20220607/2022060712035709087.png)
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。12000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2.细菌或细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 200w,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);12000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm,分光光度计蒸馏水调零。
2. 标准品的准备:将标准品用蒸馏水稀释至 1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/mL。
3. 标准品稀释表
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4. 样本测定,(在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂)
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三、β-1,3-GA 活性计算
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特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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