Cellink BIO X6 3D生物打印机

在基于挤压的3D生物打印中，使用胶原蛋白等软材料，这是一个复杂的挑战，因为它们在挤压后无法保持缺失的形状。一种解决方案是悬浮水凝胶（新鲜），这是一种生物制造方法，提供临时支持，防止生物打印过程中结构的坍塌或变形。生命支持™，一种常用的凝胶式新鲜生物打印蛋白基支持浴， 提供了一个额外的优势，即它可以很容易地实现 打印后移除。本研究旨在进行优化 几种流行的生物酸盐的新鲜生物打印 里亚尔斯使用生命支持浴缸提供BIO X用户 已有既定的印刷协议。显示 新鲜生物打印的多功能性，我们选择了三个 具有不同凝胶机械的软生物材料 镍钛合金（热自组装，照片和离子）。 所有的生物材料都进行了流变学表征， 优化的打印和，最后，生物打印与 细胞

摘要 标准化细胞移植物、人工器官替代物和生化产品的组织和生物制造需要可控且可重复的离体组织生长培养物，以准确模拟体内环境。生物反应器可以创建这些生理相关环境，并且可以针对特定微生物（例如细胞类型或细菌）进行定制，以优化3D微生物和组织培养。但直到现在，寻找一种时间和成本效益高的生物反应器生产方案仍然是一个挑战。本技术说明提出了使用由 Volumetric和BIO X6™ 提供支持的Lumen X+™设计和制造生物反应器的工作流程解决方案。首先，本技术说明详细介绍了如何在数字光处理 (DLP) Lumen X+ 生物打印机上制造封闭式生物反应器。该技术说明还演示了BIO X6如何在生物反应器内创建精确的共细胞和多细胞培养物以完成工作流程。

协议目标 该协议的目的是提供使用 INKREDIBLE、INKREDIBLE+、BIO X 或 BIO X6 的 GelXA LAMININK 生物墨水进行生物打印的说明，有无细胞。 GelXA LAMININK 系列包括GelXA LAMININK 111 、GelXA LAMININK 121 、GelXA LAMININK 411 、GelXA LAMININK 521 和 GelXA LAMININK+。 本文件涵盖了与细胞的预打印混合、3D 生物打印和离子交联或通过光固化的后打印过程。 该方案针对 GelXA LAMININK 进行了优化，其中 LAP 0.25% 未稀释以及 10+1 细胞悬液稀释。 改变LAP 或 bioink 的浓度与细胞悬浮液的比例会改变光交联时间。 参考光交联优化协议来调整和确定这些数 字。 该协议通过使用 BIO X 和 BIO X6 的温控打印头进行了优化。

生产由生物相容性材料制成的生物活性凝胶基 3D 支架具有明确的内部结构，包括双重（中孔和大孔）和高度互连的孔隙率。

基于细胞的体外预测模型可能支持国际上开发新疫苗和其他治疗肺相关疾病（如 COVID-19、慢性阻塞性肺病或特发性肺纤维化）的努力。将3D生物制造与气液界面培养相结合，可以对组织模型进行工程改造，从而在体外重现健康和患病状态下呼吸道的典型特征。这些模型不仅提供了深入了解病毒与靶位点宿主细胞相互作用的潜在机制的机会，而且还有助于减少未来研究中使用的动物数 量，从而支持 3Rs（替换、减少和细化）原则。在这项研究中，我们描述了 3D 生物制造气道上皮模型的生成及其生理相关性的评估。该模型的特点是血管紧张素转换酶 2 (ACE2) 的表达，ACE2 是冠状病毒内化所需的一种蛋白质。 ACE2蛋白定位于顶膜表明上皮细胞是极化的，粘蛋白5AC蛋白的存在表明该模型可以产生气道表面液体，这是气道上皮细胞的一种生理功能。因此，这些生物工程组织模型可用于开发不同的疗法和疫苗。

近期，美国卡耐基梅隆大学（CMU）的研究人员找到了解决方案。他们开发了一种叫做Freeform Reversible Embedding of Suspended Hydrogels（FRESH）技术，以胶原蛋白为生物墨水，3D生物打印了人类心脏的功能性部件（血管、瓣膜和心室搏动），并实现了前所未有的分辨率和保真度。相关研究结果发表在《Science》杂志上。

说明 肝组织模型试剂盒提供了用于包封肝细胞和/或星状细胞的最佳生物墨水，然后进一步利用所提供的抗体通过免疫荧光或免疫组织化学进行功能分析。 包包含： ?GelXA LAMININK 111 Bioink-3 mL ?Ⅰ型胶原抗体*-100µL ?ABCC2抗体*-100µL ?CYP3A43抗体*-100µL *宿主：兔，已验证物种反应性：人

协议目标 该协议的目的是提供使用 INKREDIBLE 、INKREDIBLE+ 或 BIO X 的 CELLINK® LAMININK 系列进行生物打印的说明，并涵盖从预打印与细胞混合、3D 生物打印和离子交联的打印后过程的步骤。 CELLINK® LAMININK 系列包括 CELLINK® LAMININK111 、 CELLINK® LAMININK 121 、 CELLINK® LAMININK 411 、 CELLINK® LAMININK 521 和 CELLINK® LAMININK+。 该方案针对 CELLINK® LAMININK 进行了优化，未稀释以及使用 10+1 细胞悬液稀释。 更改协议中的参数可能会更改所需的交联时间。 该协议使用BIO X 的气动打印头进行了优化。

将人脐静脉内皮细胞（HUVECs）和人真皮成纤维细胞（HDFs）共培养和诱导多能干细胞（iPSCs）单培养 分别包埋于选定的生物材料中7d。利用免疫荧光成像将这些三维培养系统的细胞标记与二维培养进行了比较，并证明了使用细胞相关材料的重要性。HUVEC与HDF共培养的时间是获得复杂结构的重要因素。在3D中延长培养时间导致观察到促血管生成结构，这一现象只在3D中观察到。与2D相比，iPSCs在3D培养时形成团簇，细胞组装重塑，形成环形结构，并表达多能性标记OCT4和NANOG。iPSCs可以在3D培养中保持其多能性，这使得科学家可以设计更先进的实验，在这种实验中，干细胞可以在3D嵌入后进行分化。